CN111808278B - 支化抗菌聚氨基酸及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种支化抗菌聚氨基酸，所述支化抗菌聚氨基酸为：星型支化聚合物、刷状支化聚合物，由内核与支链组成；所述内核为含有4～15个氨基的支化聚合物，所述支链通过肽键与内核偶联；所述支链为亲水型聚合物嵌段，所述亲水型聚合物嵌段的聚合度为5～20，且所述纯亲水型聚合物嵌段的单体不包括疏水型单体。该支化抗菌聚氨基酸具有很好的抗菌活性的同时，不易发生溶血，具有很好的生物安全性。

Description

支化抗菌聚氨基酸及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于医药领域，特别涉及一种支化抗菌聚氨基酸及其制备方法与应 用。
背景技术
抗生素的出现堪称是人类医药历史上最伟大的发现之一。自被发现以来， 就拯救了无数人的生命。然而，近年来抗生素的滥用导致了大量耐药甚至致命 的病原体产生，如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和对抗生素耐药的铜绿假单胞菌。 目前这些对抗生素有具有超强耐药性的“超级细菌”已在全球范围内广泛传播。 面临这个巨大健康危机，抗菌肽(如：防御素、人源抗菌肽LL-37和蛙皮素等) 为杀死这些耐药病原体带来了希望。抗菌肽又称抗微生物肽或者宿主防御肽， 是一种存在于生物体内，具有抗菌活性的一类多肽物质。与传统抗生素相比， 抗菌肽的抗菌谱广，能有效杀死多种耐药菌，并且其杀菌速率快，不易产生耐 药，无致畸作用，也不易产生蓄积中毒。由于它们是通过破坏细菌细胞膜，这 种完全不同于传统抗生素的机制杀菌的，因此细菌对现有抗生素所产生的耐药 机制对其没有阻断作用。
抗菌肽杀灭细菌的方式普遍依赖于其与细菌细胞膜的相互作用，也就是抗 菌肽的带正电荷残基与带负电荷的细菌细胞膜静电相互作用。带正电荷的抗菌 肽与细菌细胞膜通过静电相互作用结合后，能够诱导细菌细胞膜产生孔洞，进 而导致细菌内容物流出，最终杀死细菌，如图1所示。哺乳动物细胞膜和细菌 细胞膜的组成是不同的。哺乳动物细胞膜外层脂质仅由呈电中性的两性磷脂组 成，所以不带电；细菌的磷脂双层膜皆含大量带负电荷的磷脂，而且其细胞外 壁上含有大量带负电荷的脂多糖或磷壁酸，所以细菌表面呈负电性。因此，在 体内抗菌的过程中，抗菌肽能够在基本不影响正常的哺乳动物细胞生存状态的
目前市场上常见的抗菌肽由于抗菌活性较低，毒性大、溶血严重，体内半 衰期短、酶解稳定性差，成本高，产量低等问题使其应用受到极大的限制。由 于哺乳动物的细胞是电中性的，增加链段疏水嵌段比例在促进抗菌肽或聚合物 穿过细菌细胞膜的同时，也会提高抗菌肽或聚合物结合电中性的哺乳动物细胞 的可能性，导致其选择性降低，毒副作用增加，主要表现为溶血。因此，疏水 嵌段比例过大的抗菌肽或聚合物往往因为溶血副作用过大，限制了它们的临床 应用。相比之下，控制抗菌肽或聚合物的疏水嵌段比例在一定范围内，适当地 增加其正电荷数目和密度，是同时提高抗菌肽或聚合物活性、选择性和减小溶血副作用的有效途径。另外，在生理条件下，由于生物体血液和组织中盐离子 的存在会造成电荷屏蔽效应，削弱抗菌肽或聚合物与细菌细胞膜之间的相互吸 引，导致抗菌活性的降低甚至丧失。因此，高电荷密度的抗菌肽或聚合物在与 盐离子竞争吸附细菌细胞膜时具有更大的优势，其耐盐能力更好。然而，传统 线形抗菌肽受限于其结构，其电荷密度难以随着电荷数目增加而显著提高，成 为阻碍抗菌肽或聚合物开发的一大难题。
发明内容
基于此，本发明的目的在于提供一种支化抗菌聚氨基酸，该抗菌聚氨基酸 具有高电荷密度、抗菌活性好、毒性低、稳定性好，且在体内不发生溶血、安 全性高的特点。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
一种支化抗菌聚氨基酸，所述支化抗菌聚氨基酸为：星型支化聚合物或刷 状支化聚合物，由内核与支链组成；
所述内核为含有4～15个氨基的支化聚合物，所述支链通过肽键与内核偶联； 所述支链为纯亲水型聚合物嵌段，所述纯亲水型聚合物嵌段的聚合度为5～20， 且所述纯亲水型聚合物嵌段的单体不包括疏水型单体。
本发明还提供上述支化抗菌聚氨基酸的制备方法，包括：
一种支化抗菌聚氨基酸的制备方法，包括以下步骤：
取含有8～15个氨基的支化聚合物，通过所述支化聚合物上的氨基引发末端 氨基被保护的纯亲水型聚合物的单体发生开环聚合反应；
调节所述支化聚合物与所述末端氨基被保护的纯亲水型聚合物的单体的投 料比，使亲水型聚合物的聚合度为5～20，最后脱去末端氨基的保护基团；即得 以支化聚合物嵌段为内核、亲水型聚合物为支链的支化抗菌聚氨基酸。
一种支化抗菌聚氨基酸的制备方法，包括以下步骤：
(1)将支化聚合物修饰在树脂上，所述支化聚合物上含有4～8个氨基；
(2)以所述支化聚合物为内核，采用Nα-芴甲氧羰基-Nε-叔丁氧羰基-赖氨 酸作为反应物，以DMF为溶剂，1-羟基苯并三唑和N，N'-二异丙基碳二亚胺为 缩合剂进行耦联反应；
所述Nα-芴甲氧羰基-Nε-叔丁氧羰基-赖氨酸的α-氨基用Fmoc保护且ε-氨基 用Boc保护；
(3)用含哌啶的DMF溶液脱去Fmoc保护基；
(4)重复步骤(2)和步骤(3)，以形成所述支化抗菌聚氨基酸的纯亲水 型聚合物嵌段支链，控制所述支链的聚合度为5～10；
(5)用TFA/DCM混合溶液把多肽从树脂上切下并脱去Boc保护基，纯化 后，即得支化抗菌聚氨基酸。
本发明还提供了上述支化抗菌聚氨基酸在制备抗菌聚合物、抗菌药物、抗 菌洗涤剂、抗菌涂层中的应用。
基于上述技术方案，本发明具有以下有益效果：
本发明通过发明人大量创造性劳动，设计得到支化抗菌聚氨基酸，以支化 聚合物为内核、纯亲水型聚合物嵌段为支链，并通过控制支链的数目和聚合度， 得到一系列具有高电荷密度的支化抗菌聚氨基酸，该支化抗菌聚氨基酸的表面 静电势和zeta电位等电荷性质明显大于线形对照，有利于促进抗菌聚氨基酸与 带负电的细菌细胞质膜结合，从而提高其抗菌活性。其中，支化抗菌聚氨基酸 的支链为纯亲水型的聚合物嵌段，其中合成该嵌段的氨基酸单体不包含疏水型 单体，通过控制支链单体的纯亲水特性，并结合纯亲水型聚合物嵌段支链的数 目和聚合度在合理范围，使得本发明所述的支化抗菌聚氨基酸在获得很好抗菌 活性的同时，避免了其毒性作用，不易发生溶血，其生物安全性高。
附图说明
图1为抗菌聚氨基酸的作用机制示意图；
图2为实施例1合成的星形PLL的1H NMR表征结果和GPC表征结果；
图3为实施例3中分子动力学模拟的P1(A)、P2(B)、P5(C)和线形PLL (D)的表面静电势示意图；
图4为实施例3中星形PLL的zeta电位测试结果；
图5为星形PLL的杀菌动力学曲线；
图6为皮肤感染模型的建立与星形PLL的治疗结果。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将参照实施例对本发明进行更全面的描述，以 下给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现， 并不限于本文所描述的实施例。提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内 容的理解更加透彻全面。应理解，下列实施例中未注明具体条件的实验方法， 通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York： Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所 建议的条件。实施例中所用到的各种常用试剂，均为市售产品。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术 领域的技术人员通常理解的含义相同。在本发明的说明书中所使用的术语只是 为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本发明提供了一种支化抗菌聚氨基酸，由内核与支链组成；该支化抗菌聚 氨基酸是星型支化聚合物或树枝状支化聚合物。相对于常规线型抗菌聚氨基酸， 本发明的支化抗菌聚氨基酸具有高电荷密度、抗菌活性好，且不易溶血的特点。 其中，所述内核为含有4～15个氨基的支化聚合物，所述支链通过肽键与内核偶 联；所述支链为纯亲水型聚合物嵌段，所述纯亲水型聚合物嵌段的聚合度为 5～20，且所述纯亲水型聚合物嵌段的单体不包括疏水型单体。
可选地，所述支化抗菌聚氨基酸的内核选自：超支化聚乙烯亚胺(PEI)、 树枝状聚赖氨酸；和/或所述支化抗菌聚氨基酸的支链亲水型聚合物嵌段选自： 聚赖氨酸。
具体地，在其中一些实施例中，内核为含有8～15个氨基的超支化聚乙烯亚 胺，所述亲水型聚合物嵌段为聚合度为5～20的聚赖氨酸。例如内核可以为含有 8个氨基的超支化聚乙烯亚胺或含有15个氨基的超支化聚乙烯亚胺，亲水型聚 合物嵌段的聚合度可以为5、10、15或20。
在其他实施例中，所述抗菌聚氨基酸的内核还可以为含有4～8个氨基的树 枝状聚赖氨酸，并以聚合度为5～10的聚赖氨酸亲水型聚合物嵌段为支链。例如， 所述抗菌氨基酸的内核可以为含有4个氨基的树枝状聚赖氨酸或可以为含有8 个氨基的树枝状聚赖氨酸。
优选地，支化抗菌聚氨基酸的表面静电势为正值，Zeta电位大于5mV。
本发明还提供了支化抗菌聚氨基酸的制备方法，包括液相合成法(氨基酸 N-羧基-环内酸酐(NCA)开环聚合法)、固相合成法。通过液相合成法(氨基 酸N-羧基-环内酸酐开环聚合法)合成的支化抗菌聚氨基酸，具有操作简单、产 率高、生产成本低、无消旋现象、容易获得高分子聚氨基酸等诸多优点，但所 合成的聚合物分子量分布相对较宽。通过固相合成法能够精确控制多肽的序列 和分子量，但合成时间长、成本高、直接合成的序列较短。因此，虽然两种方 法合成的抗菌聚氨基酸，均具备可以避免毒性作用、不易发生溶血、生物安全 性高的特点，但是其在具体结构特点和生产成本上存在差异，可以根据应用需 求及具体情况选择合适的合成方法合成支化抗菌聚氨基酸。
在其中一些实施例中，所述液相合成法包括以下步骤：取含有8～15个氨基 的支化聚合物，通过所述支化聚合物上的氨基引发末端氨基被保护的纯亲水型 聚合物的单体发生开环聚合反应；
调节所述支化聚合物与所述末端氨基被保护的纯亲水型聚合物的单体的投 料比，使亲水型聚合物的聚合度为5～20，最后脱去末端氨基的保护基团；即得 以支化聚合物嵌段为内核、亲水型聚合物为支链的支化抗菌聚氨基酸。在其中 一些实施方式中，亲水型聚合物的聚合度可以为5、10、15或20。
优选地，所述末端氨基被保护的纯亲水型聚合物的单体为ε-苄氧羰基-赖氨 酸-N-羧基-环内酸酐；所述含有8～15个氨基的支化聚合物内核为超支化聚乙烯 亚胺。
具体地，所述支化抗菌聚氨基酸的制备步骤如下：
(1)超支化聚乙烯亚胺溶解后得引发剂溶液，引发赖氨酸-N-羧基-环内酸 酐的开环聚合，所述赖氨酸-N-羧基-环内酸酐上含有苄氧羰基侧链保护基；
(2)用脱保护剂脱去步骤(1)中制备得到的聚乙烯亚胺接枝聚苄氧羰基- 赖氨酸星形嵌段共聚物中的苄氧羰基侧链保护基，纯化后，得到目标产物聚乙 烯亚胺接枝聚赖氨酸星形嵌段共聚物，即支化抗菌聚氨基酸。
在其中一些实施例中，所述固相合成法包括以下步骤：
(1)将支化聚合物修饰在树脂上，所述支化聚合物上含有4～8个氨基；
(2)以所述支化聚合物为内核，采用Nα-芴甲氧羰基-Nε-叔丁氧羰基-赖氨 酸作为反应物，以二甲基甲酰胺(DMF)为溶剂，1-羟基苯并三唑(HOBt)和 N，N'-二异丙基碳二亚胺(DIC)为缩合剂进行耦联反应；
所述Nα-芴甲氧羰基-Nε-叔丁氧羰基-赖氨酸的α-氨基用芴甲氧羰基(Fmoc) 保护且ε-氨基用叔丁氧羰基(Boc)保护；
(3)用含哌啶的DMF溶液脱去Fmoc保护基；
(4)重复步骤(2)和步骤(3)，以形成所述支化抗菌聚氨基酸的纯亲水 型聚合物嵌段支链，控制所述支链的聚合度为5～10；
(5)用TFA/DCM混合溶液把多肽从树脂上切下并脱去Boc保护基，纯化 后，即得支化抗菌聚氨基酸。
优选地，所述支化聚合物为树枝状聚赖氨酸。
优选地，上述将支化聚合物修饰在树脂上，包括以下步骤：
用含哌啶的DMF溶液脱去Rink Amide-MBHA Resin树脂的Fmoc保护基团， 加入N，N'-双芴甲氧羰基-赖氨酸，以DMF为溶剂，1-羟基苯并三唑(和N， N'-二异丙基碳二亚胺为缩合剂进行偶联反应，再用含DMF溶液脱去Fmoc保护 基；重复偶联反应和脱去Fmoc保护基2～3次，即得含有4～8个氨基的树枝状聚 赖氨酸。
在其中一些实施方式中，重复如上所述的偶联反应和脱去Fmoc保护基2次， 得含有4个氨基的树枝状聚赖氨酸。或是重复如上所述的偶联反应和脱去Fmoc 保护基3次，得含有8个氨基的树枝状聚赖氨酸。
如上所述的支化抗菌聚氨基酸在制备抗菌聚合物、抗菌药物、抗菌洗涤剂， 抗菌涂料中的应用，该支化抗菌聚氨基酸具有高电荷密度、抗菌活性好，且不 易溶血的特点，克服了现有的线形抗菌聚氨基酸的抗菌活性较低，毒性大、溶 血严重，成本高，产量低等问题。
本发明中以上所述的聚赖氨酸，用于作为支化聚合物的内核或支链时，均 可以是聚L-赖氨酸或聚D-赖氨酸。在以下具体的实施例中，以聚L-赖氨酸(PLL) 为例，对本发明进行更全面的说明。
实施例1星形PLL抗菌聚氨基酸(PEI-g-PLL)的液相合成法(氨基酸N-羧基 -环内酸酐的开环聚合法)
1、星形聚L-赖氨酸(PLL)的合成
(1)氨基酸N-羧基-环内酸酐(NCA)的合成
称取适量ε-苄氧羰基-L-赖氨酸、活性炭和三光气(BTC)加入无水乙酸乙酯 (EA)中加热回流，抽滤，获得含有NCA粗产物的滤液，反应路线如下：
Figure GDA0002101574000000081
把滤液冷冻到-18℃以下，分别用4℃的饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶 液洗涤，以除去体系中残留的盐酸和三光气。最后，产品在乙酸乙酯-石油醚混 合溶剂中经过结晶和重结晶过程，获得高纯度的NCA。
(2)星形PLL的合成与表征
把超支化聚乙烯亚胺(PEI)溶解于DMSO中配得引发剂溶液，把引发剂加 入溶解了ε-苄氧羰基-L-赖氨酸-N-羧基-环内酸酐(ZLL-NCA)的无水DMSO- 二氯甲烷混合溶液中，引发ZLL-NCA的开环聚合，获得聚乙烯亚胺接枝聚苄氧 羰基L-赖氨酸星形嵌段共聚物(PEI-g-PZLL)。然后以三氟乙酸(TFA)为溶剂， HBr为脱保护剂，脱去赖氨酸的苄氧羰基侧链保护基，透析，冷冻干燥，得到 目标产物聚乙烯亚胺接枝聚L-赖氨酸星形嵌段共聚物(PEI-g-PLL)，合成路线 如下：
Figure GDA0002101574000000082
星形PLL通过(1)选用具有不同氨基数目的PEI为内核，控制星形结构的 支链数目；(2)通过控制PEI与ZLL-NCA的投料比，改变星形结构的支链长度 (或聚合度)。本实施例采用的PEI为：分别具有8和15个氨基的PEI8(分子 量为0.8kDa的PEI)和PEI15(分子量为1.8kDa的PEI)作为内核，支链α-PLL 的聚合度设计为5、10、15、20，一共合成8种星形PLL(PEI-g-PLL)结构， 分别是PEI8-g-PLL5(P1)、PEI8-g-PLL10(P2)、PEI8-g-PLL15(P3)、PEI8-g-PLL20 (P4)、PEI15-g-PLL5(P5)、PEI15-g-PLL10(P6)、PEI15-g-PLL15(P7)、PEI15-g-PLL20 (P8)。其中下标8和15分别代表星形PLL的支链的数目，5、10、15和20分 别代表一条PLL支链的聚合度。如表1所示。
表1不同支链数目和支链聚合度的星形PLL
编号 星形PLL 支链数目 支链PLL长度/聚合度
P1 PEI<sub>8</sub>-g-PLL<sub>5</sub> 8 5
P2 PEI<sub>8</sub>-g-PLL<sub>10</sub> 8 10
P3 PEI<sub>8</sub>-g-PLL<sub>15</sub> 8 15
P4 PEI<sub>8</sub>-g-PLL<sub>20</sub> 8 20
P5 PEI<sub>15</sub>-g-PLL<sub>5</sub> 15 5
P6 PEI<sub>15</sub>-g-PLL<sub>10</sub> 15 10
P7 PEI<sub>15</sub>-g-PLL<sub>15</sub> 15 15
P8 PEI<sub>15</sub>-g-PLL<sub>20</sub> 15 20
其中，对P1、P2、P3和P4。产物经1H NMR表征，结果如图2中A所示，和 GPC表征，结果如图2中B所示，聚合度和分子量结果如表2所示，符合预期，证实目标产 物合成成功且所设计的合成方法可行。
表2星形PLL的结构与分子量
Figure GDA0002101574000000091
实施例2星形PLL抗菌聚氨基酸的固相合成法
1、星形PLL的合成
(1)树枝状PLL内核的合成
用含20％哌啶的DMF溶液脱去Rink Amide-MBHA Resin树脂的Fmoc保护 基团，加入N，N'-双芴甲氧羰基-L-赖氨酸(Fmoc-Lys(Fmoc)-OH)，以DMF为 溶剂，1-羟基苯并三唑(HOBt)和N，N'-二异丙基碳二亚胺(DIC)为缩合剂 进行偶联反应，再用含20％哌啶的DMF溶液脱去Fmoc保护基，得到一代树枝 状聚L-赖氨酸。接着通过重复的耦联和脱保护过程，得到分别具有4个氨基的 二代树枝状PLL和具有8个氨基的三代树枝状聚PLL作为星形PLL的内核，合 成路线如下：
Figure GDA0002101574000000101
(2)星形PLL的合成与表征
星形PLL的支链采用α-氨基用Fmoc保护和ε-氨基用Boc保护的Nα-芴甲氧 羰基-Nε-叔丁氧羰基-L-赖氨酸(Fmoc-L-Lys(Boc)-OH)作为反应物，以DMF为 溶剂，HOBt和DIC为缩合剂进行耦联反应，用含20％哌啶的DMF溶液脱去Fmoc 保护基，再重复耦联和脱保护过程，用体积比为1:1的TFA/DCM混合溶液把多 肽从树脂上切下并脱去Boc保护基。最后通过制备HPLC纯化，冷冻干燥，得 到支链数目和长度(或聚合度)不同的一系列星形PLL，合成路线如下：
Figure GDA0002101574000000111
本部分合成的星形PLL，通过(1)选用具有不同氨基数目的树枝状PLL为 内核，控制星形结构的支链数目；(2)通过控制重复耦联的氨基酸数量改变星 形结构的支链长度(或聚合度)。本实施例以支链数目为4和8的树枝状PLL作 为内核，星形支链PLL的聚合度设计为5和10，一共合成4种星形PLL结构。 编号为P9～P11，其MALDI-TOF表征，结果如表3所示。
表3不同支链数目和支链聚合度的星形PLL
Figure GDA0002101574000000112
实施例3星形PLL抗菌聚氨基酸(PEI-g-PLL)的电荷性质研究
(1)表面静电势表征
空间某点的静电势是指从无穷远处移动单位正电荷至该点时所需做的功， 换句话说，静电势实质上是静电相互作用力存在的根源之一。由于分子之间容 易以静电势互补方式接触，因此分子表面静电势正值区域倾向于接触负值区域， 而且当正负静电势的数值越大时，这种趋势越强。星形抗菌聚氨基酸的表面静 电势大小是其电荷数目和密度共同影响的结果。本实施例选择具有代表性的三 种星形PLL(P1、P2、P5)和与P2具有相同赖氨酸单元数目的线形PLL作为 研究对象。在经过分子动力学模拟平衡后，分析不同抗菌聚氨基酸的表面静电 势，从能量的角度对不同抗菌聚氨基酸结合负电细菌细胞膜的能力作预测。
分子动力学模拟采用YASARA软件实现，将初步优化的不同抗菌聚氨基酸 结构作为分子动力学模拟的初始构象，采用AMBER14力场，用周期性标准立 方体盒子包裹模型，并将结构置于盒子中心。添加Na+和Cl-来平衡电荷，并采 用PME(Paticle-mesh Ewald)计算长程库仑力，截断半径设为
Figure GDA0002101574000000121
压力为 0.1 MPa，pH＝7.4，模拟温度设为常温298 K。使用YASARA软件包中的 md_run.mcr脚本对不同抗菌聚氨基酸分别进行了20ns的分子动力学模拟，模拟 步长为2fs，每10ps输出一个构象。对模拟结果采用YASARA中的 md_analysis.mcr脚本进行分析均方根偏差和范德华半径，并结合Chimera中的 APBS(Adaptive PoissoN-Boltzmann Solver)工具进行静电势计算，采用PyMol 软件进行结构可视化。多肽表面正静电势由弱到强分别用白色、蓝色和紫色表 示。结果如图3所示。
由图3可知，四种抗菌聚氨基酸的表面静电势为正值，并且静电势的强弱 顺序为：线形PLL<P1<P2<P5。由于线形PLL与P2的电荷数目相近但形状 不同，所以本实施例结果表明了把抗菌聚氨基酸设计为星形，有利于提高抗菌 聚氨基酸的电荷性质，促进抗菌聚氨基酸与带负电的细菌细胞膜的结合。由于 P2比P1的支链长度长1倍，P5比P1的支链数目多接近1倍，P1<P2<P5的 表面静电势计算结果表明：电荷数目和密度的提高都有利于提高抗菌聚氨基酸 结合细菌的趋势，而且增加支链数目比增加支链长度更能显著提高星形抗菌聚氨基酸的表面静电势。
(2)Zeta电位表征
Zeta电位是微粒表面荷电性质与荷电大小的标志。称取适量的实施例1制 备得到的星形PLL和线形PLL溶于pH7.4，0.02 M的磷酸缓冲液中，聚合物的 浓度为1mg/mL。把样品装入电位样品池，用马尔文纳米粒径电位分析仪测定 样品的zeta电位。结果如图4所示。
可见，星形PLL与线形PLL在pH7.4，0.02 M磷酸缓冲液中的zeta电位为 正值，归因于PLL侧链氨基的质子化。与分子量相近的线形PLL相比，星形PLL 的zeta电位明显增大，说明把PLL结构设计为星形结构，有助于显著提高其在 溶液中表面所带电荷数量。星形PLL的zeta电位与其结构密切相关，随着PLL 支链聚合度(长度)的增加，zeta电位逐渐增大。Zeta电位预实验的测试结果与 表面静电势计算结果一致，进一步说明星形抗菌聚氨基酸比线形抗菌聚氨基酸 更有利于结合带负电荷的细菌细胞膜。
实施例4星形PLL抗菌聚氨基酸(PEI-g-PLL)的抗菌活性与选择性研究
(1)最小抑菌浓度研究
取革兰氏阳性菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA，ATCC 33591)、耐 甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE，RP62A)、粪肠球菌(E.faecalis，ATCC 700802)) 和革兰氏阴性菌(铜绿假单胞菌(P.aeruginosa，ATCC 27853)、鲍曼不动杆菌 (A.baumannii，ATCC 19606))接种于MHB中，并培养至对数生长期，然后 稀释至2×105 CFU·mL-1。抗菌聚氨基酸样品用0.1M的柠檬酸钠缓冲溶液(pH 6.0)溶解，并用MHB培养基稀释至400、200、100、50、25、12.5和6.2μg·mL-1。 吸取50μL不同浓度的样品溶液于96孔板中，加入50μL稀释好的菌液，使每 孔最终接种细菌浓度为1×105 CFU·mL-1且聚合物的浓度分别为200、100、50、 25、12.5、6.3和3.1μg·mL-1。混合好的样品置于37℃培养箱中培养20h。用 酶标仪测量600nm处的吸光度，并记录实验结果。本实验以MHB与菌液的混 合物为阳性对照，纯MHB培养基作为阴性对照，把抑制细菌生长的最小浓度定 义为最小抑菌浓度(MIC)。其中，线形PLL与P1～P4对不同致病菌的最小抑菌 浓度(MIC)结果如表4所示。
表4星形PLL与线形PLL的抗菌和溶血活性
Figure GDA0002101574000000141
a)HC50：溶血率达50％时抗菌聚氨基酸溶液的浓度；
b)选择性：HC50/MIC(MRSE)。
由表4可知：所有抗菌聚氨基酸都表现出明显的广谱抑菌活性，甚至对于 典型的“超级细菌”，如MRSA和MRSE等耐药菌也表现出明显的抑菌活性。在 支链数目一定的情况下，支链长度(或聚合度)较短的结构有利于杀死革兰士 阳性菌，而支链长度(或聚合度)较长的结构有利于杀死革兰士阴性菌。分子 量适中的P2表现出最为优异的抑菌活性，它对于革兰氏阳性菌MRSA和MRSE 的MIC分别是12和6μg·mL-1，对于革兰氏阴性菌P.aeruginosa和A.baumannii 的MIC是25和50μg·mL-1。P2的MIC值比很多典型的抗菌聚氨基酸小，也小 于其线形对照。由此可见，把抗菌聚氨基酸设计为星形结构，有利于提高抗菌 聚氨基酸结合细菌的能力，从而提高其抗菌活性。星形抗菌聚氨基酸的活性大 小受支链长度的影响，具有一定变化规律。
(2)杀菌动力学曲线
为了进一步探索星形PLL作为抗菌聚氨基酸的优势，本实施例采用平板菌 落计数法，以线形PLL为对照，测定了P2共聚物对MRSA菌的杀菌动力学。
具体步骤如下：
取对数期的MRSA细菌，用MHB培养基稀释，使菌液浓度约为2×105 CFU·mL-1，备用。适量星形抗菌聚氨基酸用0.1M柠檬酸钠缓冲溶液(pH6.0) 溶解，然后用MHB稀释到浓度分别为4×MIC、8×MIC和16×MIC。各取0.5 mL聚合物溶液与菌液，混合均匀，使聚合物终浓度为2×MIC、4×MIC和8× MIC。把混合好的培养物置于37℃孵育，并分别在0、1、2、4和6h几个时间 点取样，按10倍比例稀释制成不同浓度的稀释液。取10μL稀释液接种到9cm 的MH琼脂平板上，在37℃下培养过夜。然后进行菌落计数，每毫升培养物内 的细菌数＝菌落数×100×稀释倍数。以不同时间点为横坐标，不同时间点培 养物中菌落数的对数为纵坐标绘制杀菌曲线。结果如图5所示。
由图5可知，不加抗菌聚氨基酸的MRSA在6h内迅速增殖，而加入抗菌 聚氨基酸后细菌的增殖被抑制。P2对MRSA的杀菌效果呈时间和剂量依赖性， 在与MRSA菌混合6h内能完全杀死细菌。相比之下，线形PLL在观察的时间 内(6h)不能有效杀死细菌，只能在一定程度上抑制细菌的增殖。本实施例结 果表明把抗菌聚氨基酸设计为星形有利于提高抗菌聚氨基酸的杀菌速率。
(3)小鼠皮肤感染的治疗研究
本研究选用MRSA诱发昆明小鼠的皮肤脓肿作为动物模型，采用P2与其线 性对照作为抗菌药物，初步探究星形抗菌聚氨基酸的体内抗菌优势。
①皮肤感染模型的建立与治疗
取体重18～22g的健康ICR小鼠，用电动剃毛器剃掉小鼠背部的毛，并用 75％的酒精消毒背部皮肤。把生长到对数期的MRSA用无菌PBS清洗后重悬(1 ×108 CFU·mL-1)，然后注射100μL菌液到皮下。待菌液被吸收后(30min)，在 注射菌液的相同部位注射100μL一定浓度的星形抗菌聚氨基酸PBS溶液或纯 PBS溶液(作为阳性对照)。在48h后，颈椎脱臼处死小鼠，解剖取出背部皮下 脓肿处的皮肤。
在给小鼠皮下注射1×107CFU的MRSA 48h后，PBS组小鼠的背部明显肿起， 其皮下能够观察到明显的大块脓肿，说明造模成功(图6中B)。用星形PLL治疗后，其皮下 脓肿明显减小(图6中A)，可见星形PLL发挥了一定的抗菌作用。
②皮下活菌含量的定量分析
为了进一步确定皮下组织中的活菌数，对皮下活菌含量进行定量分析。
取脓肿处皮肤，加入1mL无菌PBS，制成匀浆液。将匀浆液按100、10-1、10-2、 10-3、10-4的10倍比例稀释，制成不同浓度的稀释液。取10μL稀释液接种到MH琼脂平板 上，在37℃下孵育过夜，计算平板上的细菌菌落数。每毫升匀浆液内的活菌数＝(菌落数 ×100×稀释倍数)/匀浆液体积。定量分析结果应用SPSS 17.0统计软件进行统计分析，组 间比较用单因素方差分析(ANOVA)，若差异有统计学意义，用LSD-t法进行组间两两比较。 以P<0.05为差异有统计学意义。结果如图6中C所示，线形PLL和星形PLL的体内抗菌活 性都呈现剂量依赖性。与线形PLL相比，星形PLL更能显著降低感染部位的活菌数量。采用 高剂量共聚物P2治疗感染部位后，组织匀浆液中的活菌浓度比线形PLL组小13倍以上 (p<0.05)，比PBS组小1700倍以上(p<0.001)。实验结果体现了星形抗菌聚氨基酸在体内 抗菌方面的优势，是一种很有潜力的新型高效抗菌药物。
(4)溶血活性研究
为了初步探究星形PLL的生物安全性，本实施例还选用小鼠血红细胞测 试了P1～P4的溶血率。使用半数溶血浓度(HC50)来量化抗菌聚氨基酸的溶 血副作用。具体步骤如下：
釆集新鲜的小鼠血液于EDTA-K2抗凝管中，离心收集底部红细胞。用 PBS缓冲溶液洗涤红细胞3次，配成5％v/v浓度的红细胞悬液。用PBS配 制浓度为8000、4000、2000、1000、500、250、125、62.5、31.3和15.6μg·mL-1的聚合物溶液，然后与等体积的红细胞悬液混合，置于37℃培养箱内恒温 孵育1h。本实验以相同体积的PBS作为0％溶血的阴性对照，2％Triton X-100 作为100％溶血的阳性对照，各设三个复孔。培养结束后，在3500rpm下离 心10min。取30μL上清加入含100μL PBS的96孔板中混匀，然后用酶标 仪在540nm处测吸光度值。聚合物的溶血活性用半数溶血浓度(HC50)表 示。溶血率根据以下公式计算：
溶血率(％)＝(Asample-APBS)/(ATriton-APBS)×100％.
Asample表示聚合物与红细胞混合物的吸光度；
ATriton表示阳性对照的吸光度；
APBS表示阴性对照的吸光度。
结果如表4所示：星形PLL和线形PLL在7.8～2000μg·mL-1的浓度范围内， 皆未表现出明显的溶血副作用。P1和P2的HC50大于4000μg·mL-1，而P3和 P4的HC50大于2000μg·mL-1。星形PLL的溶血副作用随着分子量增加而增加， 具有一定规律性变化。特别是P1和P2的半数溶血浓度高达4000μg·mL-1以上， 体现了它们极高的生物安全性和应用潜力。
(5)选择性研究
采用HC50值除以MIC值可以用于量化抗菌聚氨基酸的选择性。较高的 HC50/MIC值说明抗菌聚氨基酸更倾向于杀死细菌而不是血红细胞，具有较高的 选择性。如表4所示，所研究的几种抗菌聚氨基酸都具有较好的选择性，而且 P2的HC50是MRSE的MIC的667倍以上。本项目通过预实验发现，支链长度 适中的星形抗菌聚氨基酸具有更好的选择性。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对 以上实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技 术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细， 但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域 的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和 改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附 权利要求为准。

Claims (8)

1.一种支化抗菌聚氨基酸，其特征在于，所述支化抗菌聚氨基酸为星型支化聚合物，由内核与支链组成；
所述内核为含有4～8个氨基的支化聚合物，所述内核选自树枝状聚赖氨酸，所述支链通过肽键与内核偶联；所述支链为纯亲水型聚合物嵌段，所述纯亲水型聚合物嵌段选自聚赖氨酸，所述纯亲水型聚合物嵌段的聚合度为5～10，且所述纯亲水型聚合物嵌段的单体不包括疏水型单体。
2.根据权利要求1所述的支化抗菌聚氨基酸，其特征在于，所述内核为含有4个或8个氨基的树枝状聚赖氨酸，所述纯亲水型聚合物嵌段为聚合度为5～10的聚赖氨酸。
3.根据权利要求1～2任一项所述的支化抗菌聚氨基酸，其特征在于，所述支化抗菌聚氨基酸的表面静电势为正值，Zeta电位＞5mV。
4.根据权利要求1所述的支化抗菌聚氨基酸，其特征在于，所述内核为含有4个氨基的树枝状聚赖氨酸。
5.根据权利要求1所述的支化抗菌聚氨基酸，其特征在于，所述内核为含有8个氨基的树枝状聚赖氨酸。
6.一种支化抗菌聚氨基酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将支化聚合物修饰在树脂上，所述支化聚合物上含有4～8个氨基，所述支化聚合物为树枝状聚赖氨酸；
(2)以所述支化聚合物为内核，采用Nα-芴甲氧羰基-Nε-叔丁氧羰基-赖氨酸作为反应物，以DMF为溶剂，1-羟基苯并三唑和N，N'-二异丙基碳二亚胺为缩合剂进行耦联反应；
所述Nα-芴甲氧羰基-Nε-叔丁氧羰基-赖氨酸的α-氨基用Fmoc保护且ε-氨基用Boc保护；
(3)用含哌啶的DMF溶液脱去Fmoc保护基；
(4)重复步骤(2)和步骤(3)，以形成所述支化抗菌聚氨基酸的纯亲水型聚合物嵌段支链，控制所述支链的聚合度为5～10；
(5)用TFA/DCM混合溶液把多肽从树脂上切下并脱去Boc保护基，纯化后，即得支化抗菌聚氨基酸。
7.根据权利要求6所述的支化抗菌聚氨基酸的制备方法，其特征在于，所述支化聚合物为树枝状聚赖氨酸；步骤(1)所述的将支化聚合物修饰在树脂上，包括以下步骤：
用含哌啶的DMF溶液脱去Rink Amide-MBHAResin树脂的Fmoc保护基团，加入N，N'-双芴甲氧羰基-赖氨酸，以DMF为溶剂，1-羟基苯并三唑和N，N'-二异丙基碳二亚胺为缩合剂进行偶联反应，再用含DMF溶液脱去Fmoc保护基；重复偶联反应和脱去Fmoc保护基2～3次，即得含有4～8个氨基的树枝状聚-赖氨酸。
8.权利要求1-5任一项所述的支化抗菌聚氨基酸在制备抗菌聚合物、抗菌药物、抗菌洗涤剂、抗菌涂层中的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN110438162B (zh) * 2019-08-22 2021-06-25 广州晶欣生物科技有限公司 一种改良型非脂质体转染试剂盒及其应用方法
CN112876670B (zh) * 2021-02-25 2022-05-20 中国科学院理化技术研究所 一种抗菌防污的聚合物刷及其制备方法和应用
CN114990055A (zh) * 2022-05-30 2022-09-02 浙江大学 一种含有支化结构抗菌肽的新型细胞培养基及其制备方法
CN114989265A (zh) * 2022-05-30 2022-09-02 浙江大学 一种具有高效广谱抗细菌、真菌功能的营养型支化结构聚多肽

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1683014A (zh) * 2005-03-07 2005-10-19 天津大学 用于基因治疗的树枝状聚赖氨酸衍生物载体的制备方法
CN102775602A (zh) * 2012-08-15 2012-11-14 中国科学院长春应用化学研究所 一种聚乙烯亚胺-聚赖氨酸共聚物及其制备方法
CN104403107A (zh) * 2014-10-30 2015-03-11 中山大学 一种改性阳离子聚氨基酸及其制备方法和应用
CN104447963A (zh) * 2014-11-14 2015-03-25 杭州阿德莱诺泰制药技术有限公司 一种制备阿肽地尔的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1683014A (zh) * 2005-03-07 2005-10-19 天津大学 用于基因治疗的树枝状聚赖氨酸衍生物载体的制备方法
CN102775602A (zh) * 2012-08-15 2012-11-14 中国科学院长春应用化学研究所 一种聚乙烯亚胺-聚赖氨酸共聚物及其制备方法
CN104403107A (zh) * 2014-10-30 2015-03-11 中山大学 一种改性阳离子聚氨基酸及其制备方法和应用
CN104447963A (zh) * 2014-11-14 2015-03-25 杭州阿德莱诺泰制药技术有限公司 一种制备阿肽地尔的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"基于聚乙烯亚胺接枝聚赖氨酸星形嵌段共聚物的纳米药物载体与抗菌肽研究";陆超;《学位论文》;20180424;第22,23,106,108,112,113页 *
Reverse Engineering Truncations of an Antimicrobial Peptide Dimer to Identify the Origins of Potency and Broad Spectrum of Action;Anantharaman, Aparna;《JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY》;20100826;第6079-6088页 *
陆超."基于聚乙烯亚胺接枝聚赖氨酸星形嵌段共聚物的纳米药物载体与抗菌肽研究".《学位论文》.2018, *

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