CN111796091B - 用于区分动物感染布氏杆菌或布氏杆菌菌影疫苗的试剂盒 - Google Patents
用于区分动物感染布氏杆菌或布氏杆菌菌影疫苗的试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种用于区分动物感染布氏杆菌或布氏杆菌菌影疫苗的试剂盒，涉及生物检测技术领域。该试剂盒包含L7/L12‑SodC融合蛋白，L7/L12‑SodC融合蛋白含有核糖体L7/L12片段和Cu‑Zn超氧化歧化酶片段；若L7/L12‑SodC融合蛋白捕获抗体的量低于阈值，则待测样品感染的为布氏杆菌菌影疫苗；若L7/L12‑SodC融合蛋白捕获抗体的量高于阈值，则待测样品感染的为布氏杆菌。该试剂盒缓解了现有技术中存在的动物养殖场所布氏杆菌净化困难的问题。
Description
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，尤其是涉及一种用于区分动物感染布氏杆菌或布氏杆菌菌影疫苗的试剂盒。
背景技术
近年来，布氏杆菌病在我国内蒙古、新疆、青海等重要牧区的牛、羊发病率非常高，相应的牧区里牧民、兽医防疫人员的发病率也不断上升。快速扼制布氏杆菌的扩散成了当务之急，根据国外其他国家的控制手段及国内部分地区成功控制布氏菌病疫情的经验，接种疫苗是首选。布氏杆菌疫苗研发前期经历了几个阶段，如：弱毒疫苗、灭活疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗等，但最终发现，仅有弱毒疫苗能够起到较好的控制和保护作用，而弱毒疫苗的使用，一是对防疫人员不安全，二是不利于养殖场布氏菌病的净化，造成一些养殖场不愿意接种免疫，在一定程度上反而促进了布氏杆菌病疫情的发展。菌影疫苗因其具有布氏杆菌的菌壳，保留了完整的LPS、外膜蛋白等重要免疫原，具有与弱毒菌株类似的免疫效力；同时其细胞器、细胞质等均流出菌体外，不具备繁殖能力，属于生物灭活疫苗，可以有效控制布氏杆菌的扩散，对动物、防疫人员、牧民等具有非常好的安全性，从而成为布氏杆菌疫苗的候选之一。
从目前的研究数据来看，布氏杆菌菌影疫苗代替弱毒疫苗即将成为可能。菌影疫苗广泛使用后，面临最大问题是如何鉴别。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种用于区分动物感染布氏杆菌或布氏杆菌菌影疫苗的试剂盒，缓解了现有技术中存在的动物养殖场所布氏杆菌净化困难的问题。
本发明的第二目的在于提供一种非诊断治疗目的的区分动物接种布氏杆菌菌影疫苗或布氏杆菌感染的方法。
为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：
根据本发明的一个方面，本发明提供了一种用于区分动物感染布氏杆菌或布氏杆菌菌影疫苗的试剂盒，所述试剂盒包含L7/L12-SodC融合蛋白，所述L7/L12-SodC融合蛋白含有核糖体L7/L12片段和Cu-Zn超氧化歧化酶片段；
若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获抗体的量低于阈值，则待测样品感染的为布氏杆菌菌影疫苗；若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获抗体的量高于阈值，则待测样品感染的为布氏杆菌。
优选地，所述L7/L12-SodC融合蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
优选地，所述试剂盒为间接ELISA检测试剂盒，所述试剂盒中用于包被于固相载体的抗原包括所述L7/L12-SodC融合蛋白。
优选地，所述L7/L12-SodC融合蛋白的浓度为80～120μg/ml，优选为100μg/ml。
优选地，若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的OD492nm值＜0.8，则待测样品判定为感染布氏杆菌菌影疫苗；
优选地，若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的OD492nm值在0.22～0.79之间，则待测样品判定为感染布氏杆菌菌影疫苗。
优选地，若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的OD492nm值≥0.8，则待测样品判定为感染布氏杆菌；
优选地，若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的OD492nm值在0.8～2.48之间，则待测样品判定为感染布氏杆菌。
优选地，所述试剂盒还包括用于结合捕获抗体的二抗，所述二抗被标记物标记；
所述标记物包括发光基团和/或发光基团的猝灭基团，同位素，受体和其配体其中之一，抗原和其抗体其中之一，或者，酶和其底物其中之一；
优选地，二抗被辣根过氧化物酶标记，采用DAB显色。
根据本发明的另一个方面，本发明还提供了一种区分动物接种布氏杆菌菌影疫苗或布氏杆菌感染的方法，包括使用所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获待测样品中的抗体，若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获抗体的量低于阈值，则待测样品感染的为布氏杆菌菌影疫苗；若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获抗体的量高于阈值，则待测样品感染的为布氏杆菌；
优选地，所述L7/L12-SodC融合蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
优选地，采用间接ELISA的方法检测待测样品中的抗体，以所述L7/L12-SodC融合蛋白作为包被于固相载体的抗原。
优选地，若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的OD492nm值＜0.8，则待测样品判定为感染布氏杆菌菌影疫苗；和/或，
若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的OD492nm值≥0.8，则待测样品判定为感染布氏杆菌；
优选地，若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的OD492nm值在0.22～0.79之间，则待测样品判定为感染布氏杆菌菌影疫苗；
优选地，若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的OD492nm值在0.8～2.48之间，则待测样品判定为感染布氏杆菌；
优选地，所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体与被辣根过氧化物酶标记的二抗结合后，采用DAB显色，然后检测OD492nm值。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明提供的用于区分动物感染布氏杆菌或布氏杆菌菌影疫苗的试剂盒，以含有布氏杆菌核糖体L7/L12片段和Cu-Zn超氧化歧化酶片段的融合蛋白捕获待测样本中的抗体，通过区分L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的量来区分待测样品是由于感染布氏杆菌而获得抗体，还是由于免疫了布氏杆菌菌影疫苗而产生的抗体。本发明提供的用于区分动物感染布氏杆菌或布氏杆菌菌影疫苗的试剂盒能够鉴别牛感染的布氏杆菌病是因布氏杆菌菌影疫苗株引起或感染野毒株或弱毒株引起，为动物养殖场所提供数据，便于动物养殖场所对布氏杆菌病的净化管理。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例1提供的纯化后L7/L12-SodC融合蛋白SDS－PAGE电泳图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
根据本发明的一个方面，本发明提供了一种用于区分动物感染布氏杆菌或布氏杆菌菌影疫苗的试剂盒，所述试剂盒包含L7/L12-SodC融合蛋白，所述L7/L12-SodC融合蛋白含有布氏杆菌核糖体L7/L12片段和Cu-Zn超氧化歧化酶片段。布氏杆菌核糖体L7/L12和Cu-Zn超氧化歧化酶是布氏杆菌比较稳定的抗原，在体内能够产生稳定水平的抗体，因此本发明使用含有核糖体L7/L12片段和Cu-Zn超氧化歧化酶片段的融合蛋白来捕获待测样品中的抗体，可保证不同样品间捕获到的抗体水平稳定。
布氏杆菌菌影疫苗是通过调控噬菌体裂解基因，在细菌表面形成跨膜通道，细菌中的细胞质因渗透压差的作用大量流出，疫苗纯化工艺将除去培养基中大量的细胞质，仅保留的菌壳。因此菌影疫苗中的核糖体L7/L12及Cu-Zn超氧化歧化酶大量减少，其接种动物后，产生的抗体量明显低于活菌免疫产生的抗体，或感染野生型布氏杆菌产生的抗体。因此本发明通过区分L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的量来区分待测样品是由于感染布氏杆菌而获得抗体，还是由于免疫了布氏杆菌菌影疫苗而产生的抗体。具体的：若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获抗体的量低于阈值，则待测样品感染的为布氏杆菌菌影疫苗；若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获抗体的量高于阈值，则待测样品感染的为布氏杆菌。所述阈值为区分待测样品中的抗体是由于感染布氏杆菌产生还是由于免疫布氏杆菌菌影疫苗产生的所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的量。可以理解的是，由于用于检测L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的量的方法的差异，用于区分布氏杆菌和不是杆菌菌影疫苗的阈值也不相同，本发明对此不作特别的限制。本发明所述的感染布氏杆菌中的布氏杆菌可以为来源于野生型的布氏杆菌，或是来源于布氏杆菌弱毒疫苗中的弱毒株，即感染的为具有完整生理结构的布氏杆菌。本发明提供的用于区分动物感染布氏杆菌或布氏杆菌菌影疫苗的试剂盒能够鉴别牛感染的布氏杆菌病是因布氏杆菌菌影疫苗株引起或感染野毒株或弱毒株引起，为动物养殖场所提供数据，便于动物养殖场所对布氏杆菌病的净化管理。本发明检测的样品来源的动物包括牛或羊，优选包括牛。所述样品优选包括血清。
在一些优选的实施方式中，所述L7/L12-SodC融合蛋白的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的L7/L12-SodC融合蛋白能够良好的捕获待测样品中的抗体，本发明通过实验发现以如SEQ ID NO.1所示的L7/L12-SodC融合蛋白包被固相载体后，捕获感染布氏弱毒株疫苗的血清中的抗体量和捕获感染布氏杆菌菌影疫苗的血清中的抗体量能够形成明显且稳定的差异，说明该融合蛋白的捕获能力佳且稳定。
在一些优选的实施方式中，所述试剂盒为间接ELISA试剂盒，所述试剂盒中用于包被于固相载体的抗原包括所述L7/L12-SodC融合蛋白。间接ELISA的原理如下：将抗原与固相载体相连结，形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。加入待测样品，使待测样品中能够被抗原捕获的抗体，即一抗，与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，加酶标二抗。固相免疫复合物中的抗体与酶标二抗结合，从而间接地标记上酶。洗涤后，加底物显色。间接ELISA具有如下优点：酶标二抗可加强信号，提高灵敏度；灵活性更大，同一酶标二抗可应用于多种不同的一抗；不直接标记一抗，可以保留更多的免疫反应性；成本更低，使用标记抗体更少。其中所述L7/L12-SodC融合蛋白的浓度优选为80～120μg/ml，例如可以为但不限于为80μg/ml、90μg/ml、100μg/ml、110μg/ml或120μg/ml。
当所述试剂盒为间接ELISA试剂盒，以所述L7/L12-SodC融合蛋白作为包被于固相载体的抗原时，优选按照如下标准区分待测样品中的抗体是由于感染布氏杆菌产生还是由于免疫布氏杆菌菌影疫苗产生。
在一些优选的实施方式中，若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的OD492nm值＜0.8，则待测样品判定为感染布氏杆菌菌影疫苗，更优选地，若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的OD492nm值在0.22～0.79之间，则待测样品判定为感染布氏杆菌菌影疫苗。
在一些优选的实施方式中，若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的OD492nm值≥0.8，则待测样品判定为感染布氏杆菌；更优选地，若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的OD492nm值在0.8～2.48之间，则待测样品判定为感染布氏杆菌。
可以理解的是，所述间接ELISA试剂盒还可以包含本领域常规的用于实施ELISA的试剂或耗材，试剂的实例包括但不限于标记物标记的二抗、缓冲液、封闭液或洗涤液等；耗材的实例包括但不限于酶标板等。在一些可选的实施方式中，标记于二抗的标记物包括但不限于发光基团和/或发光基团的猝灭基团，同位素，受体和其配体其中之一，抗原和其抗体其中之一，或者，酶和其底物其中之一。所述二抗优选采用辣根过氧化物酶标记，采用DAB显色。
根据本发明的另一个方面，本发明还提供了区分动物接种布氏杆菌菌影疫苗或布氏杆菌感染的方法，包括使用所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获待测样品中的抗体，若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获抗体的量低于阈值，则待测样品感染的为布氏杆菌菌影疫苗；若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获抗体的量高于阈值，则待测样品感染的为布氏杆菌。其中所述L7/L12-SodC融合蛋白优选使用核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的融合蛋白。本发明提供的区分动物接种布氏杆菌菌影疫苗或布氏杆菌感染的方法和上述用于区分动物感染布氏杆菌或布氏杆菌菌影疫苗的试剂盒基于相同的发明构思，因此其原理和有益效果也相同，在此不再赘述。
需要说明的是，本发明提供的区分动物接种布氏杆菌菌影疫苗或布氏杆菌感染的方法是一种非诊断和治疗目的的鉴别方法，其目的是对饲养动物的环境进行评估，便于对饲养动物的场所进行管理，以协助养殖场所中布氏杆菌的净化。本发明提供的方法是在动物已患有布氏杆菌病的前提下对动物染病的诱因进行分析，因此其不涉及疾病的诊断；而即使知晓动物的患病原因，也对布氏杆菌病的治疗无干预作用。
在一些优选的实施方式中，采用间接ELISA的方法检测待测样品中的抗体，以所述L7/L12-SodC融合蛋白作为包被于固相载体的抗原。间接ELISA的实施方法可参考本领域间接ELISA的常规实验方法，本发明对此不作限制。优选按照如下标准区分待测样品中的抗体是由于感染布氏杆菌产生还是由于免疫布氏杆菌菌影疫苗产生。
若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的OD492nm值＜0.8，则待测样品判定为感染布氏杆菌菌影疫苗，更优选地，若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的OD492nm值在0.22～0.79之间，则待测样品判定为感染布氏杆菌菌影疫苗。
和/或，若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的OD492nm值≥0.8，则待测样品判定为感染布氏杆菌；更优选地，若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的OD492nm值在0.8～2.48之间，则待测样品判定为感染布氏杆菌。
在一些优选的实施方式中，所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体与被辣根过氧化物酶标记的二抗结合后，采用DAB显色，然后检测OD492nm值。
下面结合优选实施例进一步说明本发明的技术方案和有益效果。
实施例1
L7/L12-SodC融合蛋白表达及纯化：
1.1优化后的L7/L12-SodC融合基因如SEQ ID NO.1所示，人工合成如SEQ ID NO.1所示的基因序列，然后使用如下引物对合成的L7/L12-SodC融合基因进行扩增，基因序列及引物序列由上海生工合成，引物序列如下：
1.2连接与转化：
(1)质粒pET-30a(+)、L7/L12-SodC融合基因进行KpnI、BamHI双酶切。
(2)酶切产物进行1％琼脂糖凝胶电泳，凝胶回收目的条带并纯化。
(3)T4-DNA连接酶连接质粒和L7/L12-SodC融合基因。
(4)卡那霉素(100ml/L)固体培养基筛选L7/L12-SodC-pET-30a(+)转化至大肠杆菌BL21阳性株。
(5)双酶切鉴定L7/L12-SodC-pET-30a(+)重组原核表达载体。
1.3L7/L12-SodC融合蛋白的原核表达及纯化：
(1)挑取含有L7/L12-SodC-pET-30a(+)表达载体的大肠杆菌BL21在LB固体培养基(含100mg/L卡那霉素)单个菌落于20mL的LB液体培养基(含100mg/L卡那霉素)过夜培养。
(2)取5ml培养菌液接种至500ml的LB液体培养基(含100mg/L卡那霉素)，培养至OD600到0.6，加入IPTG(0.4mmol/L)溶液，28℃，140rpm诱导3h。
(3)6000rpm，10min离心，沉淀菌体。
(4)加入10mL裂解液重悬菌体。
(5)超声破碎。
(6)按照Ni柱纯化步骤进行表达蛋白纯化。
(7)SDS-PAG检测蛋白纯度，Bradford方法检测蛋白浓度，SDS-PAG的结果如图1所示，其中泳道1为Marker，泳道2为L7/L12-SodC融合蛋白。
实施例2
ELISA检测方法的建立：
(1)包被：用包被稀释液(PBS PH7.2)稀释实施例1制备得到的L7/L12-SodC融合表达蛋白浓度为100μg/ml，加入ELISA板微孔中，每孔100μl，4℃孵育24h。
(2)封闭：弃去包被液，每孔加入5％鱼精蛋白250μl，37℃孵育1h。
(3)洗板：弃去封闭液，加入洗涤液满孔，微振5s，弃去洗涤液，洗3遍，拍干。
(4)加样：血清样品稀释1:100，每孔加100μl，37℃孵育1h。
(5)洗板：弃去样品，加入洗涤液满孔，微振5s，弃去洗涤液，洗3遍，拍干。
(6)加酶标二抗：稀释抗鼠酶标二抗1：4000，每孔加100μl，37℃孵育1h。
(7)洗板：弃去样品，加入洗涤液满孔，微振5s，弃去洗涤液，洗3遍，拍干。
(8)加底物(现配)：每孔加底物100μl，37℃避光放置20min。
(9)终止反应：加入50μl终止液，检测OD492nm值。
效果例
(1)牛15头，随机分为实验组1、实验组2、对照组各5头。
(2)疫苗免疫：实验组1免疫菌影疫苗剂量109CFU/头份，实验组2免疫A19疫苗剂量109CFU/头份，PBS做对照。
(3)免疫第28d颈部采血5ml。
(4)37℃2h，1000g离心20min，取上清4℃保存。
(5)采用实施例2建立的ELISA检测方法对血清进行检测，实验结果如表1所示。
表1.牛免疫菌影疫苗、A19、对照组ELISA检测抗体OD值
从表1的实验结果可以看出，免疫菌影疫苗的实验组1的L7/L12-SodC抗体的OD492nm均低于0.8，而免疫弱毒疫苗的实验组2L7/L12-SodC抗体的OD492nm均高于0.8，且两组L7/L12-SodC抗体的OD492nm值差异显著；同时实验组1和对照组相比，实验组1的L7/L12-SodC抗体的OD492nm值高于对照组，且具有显著的差异，说明实施例2建立的ELISA检测方法能够很好的区分弱毒株疫苗免疫和菌影疫苗免疫。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 天康生物股份有限公司
<120> 用于区分动物感染布氏杆菌或布氏杆菌菌影疫苗的试剂盒
<160> 3
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 915
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
atggctgatc tcgcaaagat cgttgaagac ctttcggccc tgaccgttct ggaagccgct 60
gagctgtcca agcttctcga agagaagtgg ggcgtttcgg ctgctgctcc ggtcgctgtt 120
gctgctgccg gtggcgctgc ccctgctgct gccgcagaag aaaagaccga attcgacgtc 180
gttctcgctg acggcggcgc taacaagatc aacgtgatca aggaagtgcg cgcactcacc 240
ggtctcggcc tcaaggaagc caaggacctg gtcgaaggcg ctccgaaggc tgtcaaggaa 300
ggcgcctcga aggacgaagc tgagaagatc aaggcacagc tcgaagctgc tggcgccaag 360
gttgaactca agggaggagg atctggagga ggatctatga agtccttatt tattgcatcg 420
acaatggtgc ttatggcttt tccggctttc gcagaaagca cgacggtaaa aatgtatgag 480
gcgctgccga ccggaccggg taaagaagtt ggcaccgtgg tcatttccga agccccgggc 540
gggctgcact tcaaggtgaa tatggaaaag ctgacgccgg gctatcatgg ctttcatgtt 600
cacgaaaatc caagctgcgc tccgggagaa aaagacggca agatcgtacc ggctcttgct 660
gccggcgggc attatgatcc gggtaatacc catcaccatt taggacctga aggtgatgga 720
catatgggcg atttgccacg cctgagcgcc aatgctgacg gcaaggtgag tgaaaccgtt 780
gtcgctccac atctcaagaa attggcggaa atcaagcagc gttctttgat ggtccatgtc 840
ggaggggata attattccga taagcctgag ccgcttggtg gcggtggtgc ccgttttgcc 900
tgcggcgtga tcgaa 915
<210> 2
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
ggggtaccat ggctgatctc gcaaagatcg 30
<210> 3
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
ccgcggatcc ttcgatcacg ccgcaggcaa 30
Claims (11)
1.一种用于区分动物感染布氏杆菌或布氏杆菌菌影疫苗的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含L7/L12-SodC融合蛋白，所述L7/L12-SodC融合蛋白含有核糖体L7/L12片段和Cu-Zn超氧化歧化酶片段；
所述L7/L12-SodC融合蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的OD492nm值＜0.8，则待测样品判定为感染布氏杆菌菌影疫苗；和/或，
若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的OD492nm值≥0.8，则待测样品判定为感染布氏杆菌。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒为间接ELISA检测试剂盒，所述试剂盒中用于包被于固相载体的抗原包括所述L7/L12-SodC融合蛋白。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述L7/L12-SodC融合蛋白的浓度为80～120μg/ml。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述L7/L12-SodC融合蛋白的浓度为100μg/ml。
5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括用于结合捕获抗体的二抗，所述二抗被标记物标记；
所述标记物包括发光基团和/或发光基团的猝灭基团，同位素，受体和其配体其中之一，抗原和其抗体其中之一，或者，酶和其底物其中之一。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，二抗被辣根过氧化物酶标记，采用DAB显色。
7.一种非诊断和治疗目的的区分动物接种布氏杆菌菌影疫苗或布氏杆菌感染的方法，其特征在于，包括使用权利要求1中所述的L7/L12-SodC融合蛋白捕获待测样品中的抗体；
所述L7/L12-SodC融合蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的OD492nm值＜0.8，则待测样品判定为感染布氏杆菌菌影疫苗；和/或，
若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的OD492nm值≥0.8，则待测样品判定为感染布氏杆菌。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，采用间接ELISA的方法检测待测样品中的抗体，以所述L7/L12-SodC融合蛋白作为包被于固相载体的抗原。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的OD492nm值在0.22～0.79之间，则待测样品判定为感染布氏杆菌菌影疫苗。
10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，若所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体的OD492nm值在0.8～2.48之间，则待测样品判定为感染布氏杆菌。
11.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述L7/L12-SodC融合蛋白捕获的抗体与被辣根过氧化物酶标记的二抗结合后，采用DAB显色，然后检测OD492nm值。
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