CN111793116A - 一种透皮七肽、含有该透皮七肽的美容组合物及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物制品及化妆品技术领域，公开了一种透皮七肽、含有该透皮七肽的美容组合物及制备方法。该透皮七肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。该美容组合物包括透皮七肽、透明质酸和水，所述透皮七肽的浓度为20～50μg/mL，所述透明质酸的浓度为50～80mg/mL。该制备方法通过将透皮七肽串联后转入大肠杆菌扩大培养，并酶切去串联后得到透皮七肽。本发明的优点在于，该透皮肽能有效渗透入肌肤内里，增加皮肤弹性，解决细纹等皮肤问题，该美容组合物通过将透皮七肽和透明质酸以特定比例组合，在有效增加美容组合物保湿能力的同时充分提升透皮七肽的功效；该制备方法通过重组工程菌等生物技术，扩大生产透皮七肽，纯度高，可适用于大规模生产。

Description

一种透皮七肽、含有该透皮七肽的美容组合物及制备方法

技术领域

本发明属于生物制品及化妆品技术领域，简而言之，具体涉及一种透皮七肽、含有该透皮七肽的美容组合物及制备方法。

背景技术

近年来，随着社会的不断发展和进步，人们对于化妆品的需求越来越倾向于“自然”、“天然”，对含有天然成分的化妆品青睐有加。使用者的这一需求也促使研发机构对于化妆品活性成分的研究从化学类原料向中药、生物等天然原料转移。由于某些中药类原料和生物类原料与机体的相容性好、副作用小且效果显著，人们对于这两类原料的研究也越来越多。

人们的皮肤从外到内依次包括表皮、真皮和皮下组织。我们常说的护肤即对皮肤表皮的最外层进行护理，目前的大多数护肤品，最多也只能达到皮肤表皮的角质层。其原因在于皮肤角质层由角层细胞和细胞间质组成，形成了一种“砖墙结构”，细胞间脂质的弯曲通道既阻止了皮肤表皮中水分散失，又阻止了外界物质的进入，同时也包括护肤品中的各种昂贵的有效成分。因此，目前市面上的大多数产品，即使其用料昂贵，成本高，定位高端护肤品，其中的有效成分依然无法部分或全部渗透进入肌肤内里，无法从根本上改善肌肤状态，当然也就无法起到很好保养效果。由于角质层具有高度亲脂性结构，是大分子和亲水性物质的天然屏障，而位于角质层下方的活性表皮和真皮层则为亲水结构，因此，如果要想达到较好的护肤保养效果，则在不影响角质层结构的情况下，使功效成分进入角质层才能从根本上改善皮肤状态，达到较好的护肤保养和美容的效果。

细胞穿透肽又称为穿膜肽、跨膜肽等，在目前透皮给药领域中有广泛研究。透皮短肽(Transdermalpeptide1，TD-1，CAS号为918629-48-8)是其中的典型代表，该短肽由11个氨基酸组成，可携带各种化学药物、天然药物及生物制品进入人体皮下组织，无需物理方法协助就能打开皮肤屏障，通过毛细血管吸收达到治疗或预防疾病的效果。随着研究范围的逐渐扩大，越来越多的细胞穿透肽被发现和证实，也逐渐发现其在美容护肤中的功效。然而，目前的大多数细胞穿透肽在美容护肤方面的研究都停留在证实其功效的层面上，主要原因在于细胞穿透肽的氨基酸数量小，一般采用化学方法合成，但化学方法合成细胞穿透肽成本会比较高，无法实现量产，因此也限制了细胞穿透肽在美容护肤方面的进一步研究和应用。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明目的在于提供一种透皮七肽、含有该透皮七肽的美容组合物及其制备方法。该透皮肽能有效渗透入肌肤内里，增加皮肤弹性，解决细纹等皮肤问题，该美容组合物通过将透皮七肽和透明质酸以特定比例配合，在有效增加美容组合物保湿能力的同时充分提升透皮七肽的功效；该制备方法通过重组工程菌等生物技术，扩大生产透皮七肽，纯度高，可适用于大规模生产。

本发明所采用的技术方案为：

一方面，本发明提供了一种透皮七肽，所述透皮七肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

优选的，上述制备方法，所述透皮七肽串联8次后的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

另一方面，本发明提供了一种含有前述透皮七肽的美容组合物，其特征在于，包括透皮七肽、透明质酸和水，所述透皮七肽的浓度为20～50μg/mL，所述透明质酸的浓度为50～80mg/mL。

另一方面，本发明提供了一种前述透皮七肽的制备方法，包括如下步骤：合成SEQID NO.2所示核苷酸，得到HN；将HN与载体分别双酶切后连接，得到重组质粒；将重组质粒转入大肠杆菌，扩大培养，得到HN工程菌；培养HN工程菌，加入诱导剂诱导，得到发酵菌液；将发酵菌液离心取沉淀，向沉淀中加入包涵体溶解液，离心收集上清，得到包涵体蛋白溶液；向包涵体蛋白溶液中加入复性液，混匀，过阴离子交换柱，得到纯化后蛋白；向纯化后蛋白中加入肠激酶酶切后再加入胰蛋白酶酶切，灭酶后得到酶解液；将酶解液超速离心后冷冻干燥，得到透皮七肽。

优选的，上述制备方法，所述核苷酸序列的5'的酶切位点为Xho I，所述核苷酸序列的3'端的酶切位点为Bgl II。

优选的，上述制备方法，所述载体为pET-30a(+)。

优选的，上述制备方法，所述诱导剂为IPTG，IPTG的终浓度为0.8mmol/L，诱导时间为6h。

优选的，上述制备方法，复性包涵体蛋白所需复性液为10mL/mg，所述复性液中尿素浓度为6～8mol/L，Tris-Cl的浓度为50mmol/L，所述复性液的pH为7.9～8.2。

优选的，上述制备方法，所述肠激酶的终浓度为0.3U/mL，所述胰蛋白酶的终浓度为1.0U/mL。

优选的，上述制备方法，所述超速离心包括一次超速离心和二次超速离心，所述一次超速离心的离心力为50000g，离心时间为2h，所述一次超速离心的离心力为85000g，离心时间为5h。

本发明的有益效果为：

本发明提供的透皮肽具有七个氨基酸，能渗透皮肤屏障，有效渗透入肌肤内里，增加皮肤弹性，显著减少皮肤经UV照射后的回弹时间，解决细纹等皮肤问题。本发明提供的含有透皮七肽的美容组合物通过将透皮七肽和透明质酸以特定比例组合，在有效增加美容组合物保湿能力的同时充分提升透皮七肽的功效，使得整体增加皮肤弹性、修复UV照射后的问题皮肤的效果更好，从而显著提升组合物的美容效果；本发明提供的制备方法通过将透皮七肽的氨基酸序列优化后串联，再依据大肠杆菌密码子偏好性反向翻译为核苷酸序列，并将该核苷酸序列串联后转入大肠杆菌中，利用重组工程菌等生物技术，扩大生产含有透皮七肽的质粒，再去质粒，去标签，去串联，最终成功制得纯度高的透皮七肽，可适用于大规模生产。

附图说明

图1是本发明实施例1中不同诱导条件得到的菌液OD₆₀₀值；

图2是本发明实施例1中不同诱导条件得到的菌液中总蛋白和目的蛋白的含量；

图3是本发明实施例1中不同诱导时间时pET-30a(+)-HN-DE3的相对数量；

图4是本发明实施例1提供的透皮七肽和实施例2～4中提供的含有透皮七肽的美容组合物对皮肤弹性的影响。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步阐释。

实施例1

本实施例的目的在于提供一种透皮七肽。

1.制备透皮七肽的核苷酸序列

筛选网上公布的透皮肽，并对其进行优化，优化后的透皮七肽的氨基酸序列如SEQID NO.1所示，由于短肽氨基酸数太少，无法进入重组表达系统，故以SEQ ID NO.1所示氨基酸为重复单元，串联7～9次，本实施例中选择串联8次，过长的串联易造成目的蛋白自聚，对串联后的氨基酸序列进行优化后将其逆向翻译为核苷酸序列，并按照有利于大肠杆菌表达系统进行翻译，翻译后的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。修饰SEQ ID NO.2所示核苷酸序列，以便其能适应载体和后续的切割，结果如SEQ ID NO.3所示。将SEQ ID NO.3两端加上酶切位点后送往生物公司合成，并进行验证确认，得到透皮七肽的核苷酸序列，如SEQ IDNO.4所示，SEQ ID NO.4的5'有Xho I切割位点(小写斜体双横线字母)和肠激酶切割位点(小写字母)，3'有终止密码子(小写且有波浪线的字母)和Bgl II切割位点(小写斜体双横线字母)。

表1

2.制备重组表达载体

为便于描述，将SEQ ID NO.3所示序列命名为HN，SEQ ID NO.4所示序列命名为HN4，由于HN4两端分别有Xho I和Bgl II位点，将HN4用Xho I和Bgl II酶切，再将pUC18载体也用Xho I和Bgl II酶切后，用T4连接酶将酶切后的HN4和pUC18进行重组连接，再经过后续的转化、克隆、挑选阳性克隆子、提取质粒及测序验证，最终得到将SEQ ID NO.3插入pUC18的重组载体，命名为pUC18-HN。

将1μL pUC18-HN与50μL DH5α感受态混匀，冰上放置30min后，42℃水浴2min，立即放冰上孵育5min，再加入1mL含氨苄的LB液体培养基中，37℃震荡培育1h，转速为220r/min，去800mL上清，余下上清重悬沉淀后均匀涂于LB固体培养基上，37℃倒置培养12～16h，挑选阳性单克隆，送往生物公司测序验证，验证正确的成功菌液即保存有pUC18-HN质粒的大肠杆菌，命名为HN-DH5α。

3.制备重组表达工程菌

利用质粒试剂盒提取HN-DH5α中的pUC18-HN质粒，将提取得到的pUC18-HN质粒于-20℃保存备用。将前述pUC18-HN质粒双酶切，酶切体系如下表所示，于37℃反应2.5h，酶切结束后用1.2％的琼脂糖凝胶检测目的片段，将目的片段用胶回收试剂盒回收，得到HN的DNA，于-20℃保存备用。

表2

试剂	体积(μL)
		Xho I	1
Bgl II	1
		10×K buffer	2
质粒DNA	10
		ddH<sub>2</sub>O	6

将含有pET-30a(+)载体的大肠杆菌接种于50mL含卡那霉素的LB液体培养基中，37℃、180r/min震荡培养过夜，利用质粒提取试剂盒参照说明书提取载体，得到pET-30a(+)空载。将pET-30a(+)空载进行双酶切，酶切条件和酶切体系如表2所示。再利琼脂糖凝胶电泳收集目的条带，用胶回收试剂盒回收pET-30a(+)空载，得到酶切后的pET-30a(+)空载。

表3

试剂	体积(μL)
		HN的DNA	3.5
酶切后的pET-30a(+)空载	1
		10×DNA Ligase Buffer	2
T4 DNA Ligase	1.5
		ddH<sub>2</sub>O	17

由于HN的DNA和酶切后的pET-30a(+)空载均被Xho I和Bgl II酶切过，因此可用T4连接酶将二者连接，即重组。将HN的DNA和酶切后的pET-30a(+)空载按照表3所示体系加样，于16℃连接过夜。再将连接产物转入感受态细胞DH5α，后续培养过程参见“2.制备重组表达载体”，挑选阳性单克隆，送往生物公司测序验证，验证正确的成功菌液即含有pET-30a(+)-HN重组质粒的大肠杆菌DH5α，命名为pET-30a(+)-HN-DH5α。

将pET-30a(+)-HN-DH5α接种于50mL含卡那霉素的LB培养基中，于37℃、220r/min条件下培养过夜，参照质粒提取试剂盒说明书提取质粒，得到的质粒即为pET-30a(+)-HN重组载体。检测提取的pET-30a(+)-HN重组载体的质量，达到要求的即可进行后续步骤。将pET-30a(+)-HN重组载体转化入大肠杆菌DE3中，涂抹在含卡那霉素的LB平板上，37℃过夜培养，将得到的阳性菌落测序验证，验证正确的菌液即为含有pET-30a(+)-HN重组工程菌，命名为pET-30a(+)-HN-DE3。

4.重组工程菌的诱导表达

取1mL pET-30a(+)-HN-DE3接种至50mL含卡那霉素的LB培养基中，37℃、200r/min震荡培养过夜，活化后的菌种按照体积比1％接种至大容量的LB培养基中，37℃、200r/min恒温摇床培养至OD₆₀₀为1.0时，添加IPTG至其终浓度为0.4～1.6mmol/L，分析不同浓度的IPTG对菌液生长的影响，筛选出最优浓度后，以最优浓度诱导2～10h，检测不同组别的菌液的OD₆₀₀。不同终浓度IPTG对菌液生长影响结果如图1所示。由图1可知，当IPTG终浓度为0.8mmol/L时，对菌液的生长促进效果最佳，过量的IPTG对细胞有毒性，抑制了菌液的生长。因此，选择0.8mmol/L的IPTG诱导pET-30a(+)-HN-DE3 2h、4h、6h、8h和10h后，将菌液处理后跑SDS-PAGE胶，提取总蛋白和目的蛋白的灰度值，处理后如图2所示，当IPTG诱导时间小于6h时，目的蛋白的含量随时间的延长而增加，当IPTG诱导时间大于6h时，总蛋白中目的蛋白的百分含量逐渐下降，但菌液中重组工程菌的数量增长如图3所示，由图3可知，超过6h后，菌液增长变缓慢。由于总蛋白含量(也就是菌液数量)和目的蛋白占比是获得更多目的蛋白的关键，因此6h为最佳诱导时间。由此可见，后续诱导应当选择0.8mmol/L的IPTG诱导6h作为诱导条件。

取最优组菌液进行放大培养，IPTG终浓度为0.8mmol/L，诱导时间为6h，离心收集菌体和上清(上清一)。将菌体反复冻融三次，加入破菌缓冲液，利用超声破碎，于4℃、8000g离心10min，收集上清(上清二)和沉淀(菌体沉淀中加入包涵体溶解液，4℃溶解2h，8000g离心10min收集上清，即上清三)，将上清一、上清二和上清三过SDS-PAGE胶检测，结果显示，仅上清三中有大量的目的片段，表明重组蛋白存在于菌体内，并且以不溶的包涵体形式存在。

5.短肽的纯化和酶切

按4中所述方法制备上清三，即为包涵体蛋白。向上清三中按体积比1:10逐滴加入复性液，复性液为pH为8.0的Tris-Cl溶液(50mmol/L Tris-Cl)，其中尿素浓度为7mol/L，滴加完成后，在室温静置2小时，离心，取上清，将上清过阴离子交换柱Q-sepharose，得到纯化后蛋白。

取纯化后的蛋白1mg，按体积质量比10mL:1mg加入10×肠激酶酶切缓冲溶液混合，再加入肠激酶(肠激酶终浓度为0.3U/mL)，37℃水浴18～20h，得到反应液一，将反应液一过镍柱，去除His标签，得到串联的透皮七肽。

将串联的透皮七肽用Tris-Cl缓冲液稀释，按体积比10:1加入等浓度的胰蛋白酶的Tris-Cl缓冲液(胰蛋白酶的终浓度为1.0U/mL)，37℃水浴3h，然后100℃10min灭酶，得到反应液二。将反应液于50000g超速离心2h，取上清(去除切割酶)，再将上清于85000g离心5h，取沉淀(收集目的透皮七肽，其分子量大于其中的无机试剂)，冷冻干燥，即得到透皮七肽冻干粉。

实施例2

本实施例的目的在于提供一种含有透皮七肽的美容组合物。

精确称取实施例1提供的透皮七肽冻干粉(纯度>95％)，用ddH₂O将其配置成浓度为100μg/mL的溶液，得到透皮七肽溶液；

选用10KDa的透明质酸为基底材料，加入适量的超纯水，用ddH₂O将其配置成浓度为100mg/mL的透明质酸溶液，搅拌均匀，得到透明质酸溶液；

将透皮七肽溶液和透明质酸溶液按体积比1:1混合，搅拌均匀后静置2h，得到含有透皮七肽的美容组合物。

实施例3

本实施例的目的在于提供一种含有透皮七肽的美容组合物。

精确称取实施例1提供的透皮七肽冻干粉(纯度>95％)，用ddH₂O将其配置成浓度为100μg/mL的溶液，得到透皮七肽溶液；

选用10KDa的透明质酸为基底材料，加入适量的超纯水，用ddH₂O将其配置成浓度为100mg/mL的透明质酸溶液，搅拌均匀，得到透明质酸溶液；

将透皮七肽溶液和透明质酸溶液按体积比1:2.5混合，搅拌均匀后静置2h，得到含有透皮七肽的美容组合物。

实施例4

本实施例的目的在于提供一种含有透皮七肽的美容组合物。

精确称取实施例1提供的透皮七肽冻干粉(纯度>95％)，用ddH₂O将其配置成浓度为100μg/mL的溶液，得到透皮七肽溶液；

选用10KDa的透明质酸为基底材料，加入适量的超纯水，用ddH₂O将其配置成浓度为100mg/mL的透明质酸溶液，搅拌均匀，得到透明质酸溶液；

将透皮七肽溶液和透明质酸溶液按体积比1:4混合，搅拌均匀后静置2h，得到含有透皮七肽的美容组合物。

实施例2～4中所用到的透明质酸具有独特的分子结构，其浓度越高或分子量越大，分子之间的缠绕程度越高，配制而成的透明质酸溶液的黏度越大；反之，透明质酸的浓度越低或分子量越小，则分子的缠绕程度越低，配制而成的透明质酸溶液的黏度越小，因此适宜的浓度和分子量可以使透明质酸溶液具有极高的保水性和保湿性，也更容易添加其他化妆品或护肤品原料，进而制备成各种不同类型的护肤品或化妆品。因此，在实际生产中，可以添加除透明质酸以外其他化妆品或护肤品行业通用的材料或原料，以获得更好的使用感受。

试验例1

本试验例的目的在于验证本实施例提供的透皮七肽和含有透皮七肽的美容组合物的功效。

选择25±2g的小鼠，正常饲养一周后，随机分成6组，依次1组：包括空白组1(不照UV)，2组：空白组2(生理盐水)；3组：透皮七肽组(实施例1提供的透皮七肽冻干粉制备的溶液，透皮七肽的浓度为35μg/mL)；4组：组合物A组(实施例2提供的含有透皮七肽的美容组合物)；5组：组合物B组(实施例3提供的含有透皮七肽的美容组合物)；6组：组合物C组(实施例4提供的含有透皮七肽的美容组合物)。在小鼠背部相同位置脱毛，脱毛面积为1cm²，除空白组1外，其他5组均每周2次UV照射，照射量为150mJ/cm²，照射5周后，开始涂抹生理盐水、透皮七肽或含有透皮七肽的美容组合物，涂抹至第10周。每周对小鼠背部处理皮肤进行观察，对其衰老(如弹性、皱纹和红斑)宏观特征进行评价。沿小鼠背部中线较靠后位置的皮肤，采用提皮测试法检测小鼠背部皮肤弹性，用食指和拇指轻轻提起后立即放开，提起高度以小鼠四肢不悬空为界限，用秒表记录皮肤恢复如初的时间。

当使用UV连续照射小鼠5周后，裸露的皮肤出现皮屑、粗糙和红肿现象，且出现较深的皱纹。从第5周开始对小鼠进行处理：除空白组1外，每组均对应组别的溶液，每天涂抹两次，以涂满裸露皮肤为准。涂抹溶液后，小鼠皮肤出现皮屑的情况得到缓解，但空白组2的小鼠的皮肤依然粗糙和红肿，透皮七肽组、组合物A组、组合物B组和组合物C组的小鼠皮肤的粗糙等现象得到缓解，皱纹稍微变浅。其中，透皮七肽组与组合物B组小鼠皮肤均明显变得细腻光滑，皱纹较大程度变浅，但组合物B组的皱纹改善程度优于透皮七肽组，都明显改善皮肤红肿粗糙等现象，而且透皮七肽组优于组合物A组和组合物C组，组合物A组稍逊于组合物C组，由此可见，透明质酸溶液虽然具有较强的保湿性能，但其也需要适宜浓度，才能提升其中有益成分对皮肤的修复功能，过高的透明质酸浓度反而对有益成分的渗透有一定的抑制作用，而过低的透明质酸浓度对有益成分的渗透和功能提升无特别明显的助力。

由图4可知，从第5周以后，各组间小鼠的提皮恢复时间差异逐渐增大。组合物A组和组合物C组在第5周后的增长速度减缓程度基本相当，但都显著低于空白组2(P<0.05)，但组合物A组的提皮恢复时间比组合物C组略低，透皮七肽组和组合物B组从第5周后增长速度减缓最为明显(P<0.01)，显著低于组合物A组和组合物C组，其中组合物B组在第9周后的提皮时间显著低于透皮七肽组，表明透皮七肽能显著降低UV照射后的提皮恢复时间，并且以透明质酸溶液作为基材制辅以透皮七肽作为功效成分得的美容组合物，对UV照射后的皮肤修复效果更好。

由此可见，本实施例1提供的透皮七肽可显著缓解UV照射后引起的皮肤红肿等问题，并提升皮肤的提皮恢复时间，即可显著增加皮肤弹性，当辅以透明质酸为基材后，适宜浓度的透明质酸能显著提升透皮七肽对于皮肤的修复功效，但过高或过低的透明质酸浓度则可能会影响透皮七肽的功效。因此，本发明提供的透皮七肽可以用于制备护肤品或者化妆品，改善细纹，解决UV照射后的皮肤问题，增加皮肤弹性，比如制备成实施例2～4所示的美容组合物，或者在此基础上再添加化妆品或护肤品行业内可接受的辅料，制备成水、乳、面霜、精油、面膜或医美用品等。或者用于运送改善其他肌肤问题的功效成分，制备功效更为齐全的化妆品或者护肤品，其形式不限于前述方式，还可以是其他任意可接受形状、质地或可接受的使用方式的化妆品或护肤品。应当理解的是，由于透皮七肽的分子特性，除了可用于化妆品或护肤品行业外，还可以用于其他需要渗透给药的领域。

本发明不局限于上述可选的实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品。上述具体实施方式不应理解成对本发明的保护范围的限制，本发明的保护范围应当以权利要求书中界定的为准，并且说明书可以用于解释权利要求书。

序列表

<110> 广州和佳润颜医药有限公司

<120> 一种透皮七肽、含有该透皮七肽的美容组合物及制备方法

<141> 2020-07-17

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Phe Glu Gly Pro Ala Cys Arg

1 5

<210> 2

<211> 168

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

tttgaaggtc ctgcttgtcg tttcgagggc cccgcctgcc gctttgaagg accagcatgt 60

cgattcgagg ggccggcgtg ccggtttgaa ggtcctgctt gtagattcga gggccccgcc 120

tgcaggtttg aaggaccagc atgtcgtttc gaggggccgg cgtgccgc 168

<210> 3

<211> 194

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gacgacgacg acaagttttt gaaggtcctg cttgtcgttt cgagggcccc gcctgccgct 60

ttgaaggacc agcatgtcga ttcgaggggc cggcgtgccg gtttgaaggt cctgcttgta 120

gattcgaggg ccccgcctgc aggtttgaag gaccagcatg tcgtttcgag gggccggcgt 180

gccgctaata ataa 194

<210> 4

<211> 210

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

ccctcgagga cgacgacgac aagtttttga aggtcctgct tgtcgtttcg agggccccgc 60

ctgccgcttt gaaggaccag catgtcgatt cgaggggccg gcgtgccggt ttgaaggtcc 120

tgcttgtaga ttcgagggcc ccgcctgcag gtttgaagga ccagcatgtc gtttcgaggg 180

gccggcgtgc cgctaataat aaagatcttc 210

Claims (10)

1.一种透皮七肽，其特征在于，所述透皮七肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的透皮七肽，其特征在于，所述透皮七肽串联8次后的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.一种含有权利要求1或2所述的透皮七肽的美容组合物，其特征在于，包括透皮七肽、透明质酸和水，所述透皮七肽的浓度为20～50μg/mL，所述透明质酸的浓度为50～80mg/mL。

4.一种权利要求2所述的透皮七肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：合成SEQID NO.2所示核苷酸，得到HN；将HN与载体分别双酶切后连接，得到重组质粒；将重组质粒转入大肠杆菌，扩大培养，得到HN工程菌；培养HN工程菌，加入诱导剂诱导，得到发酵菌液；将发酵菌液离心取沉淀，向沉淀中加入包涵体溶解液，离心收集上清，得到包涵体蛋白溶液；向包涵体蛋白溶液中加入复性液，混匀，过阴离子交换柱，得到纯化后蛋白；向纯化后蛋白中加入肠激酶酶切后再加入胰蛋白酶酶切，灭酶后得到酶解液；将酶解液超速离心后冷冻干燥，得到透皮七肽。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述核苷酸序列的5'的酶切位点为Xho I，所述核苷酸序列的3'端的酶切位点为Bgl II。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述载体为pET-30a(+)。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述诱导剂为IPTG，IPTG的终浓度为0.8mmol/L，诱导时间为6h。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，复性包涵体蛋白所需复性液为10mL/mg，所述复性液中尿素浓度为6～8mol/L，Tris-Cl的浓度为50mmol/L，所述复性液的pH为7.9～8.2。

9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述肠激酶的终浓度为0.3U/mL，所述胰蛋白酶的终浓度为1.0U/mL。

10.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述超速离心包括一次超速离心和二次超速离心，所述一次超速离心的离心力为50000g，离心时间为2h，所述一次超速离心的离心力为85000g，离心时间为5h。

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