TWI754828B - Ogg1的粉末化組成物及其用途 - Google Patents

Abstract

本發明揭示一種粉末化組成物，其包含有OGG1以及一單一保護劑，其中，該單一保護劑為甘露醇。

Description

OGG1的粉末化組成物及其用途

本發明是有關一種粉末化組成物，其包含有OGG1以及一單一保護劑，其中，該單一保護劑為甘露醇。

8-側氧基鳥嘌呤(8-oxoG)損傷[8-oxoguanine (8-oxoG) lesion]是一種常見的DNA損傷(DNA lesion)。當人類個體長期暴露於活性氧族(reactive oxygen species, ROS)、游離輻射(ionizing radiation)以及紫外線(ultraviolet, UV)的照射下時，容易產生突變鹼基副產物(mutagenic base byproduct) 8-oxoG，進而會導致各種不同的疾病，包括皮膚損害(skin damage)、癌症[諸如大腸直腸癌(colorectal cancer)以及肺癌(lung cancer)]以及神經性疾病(neurological disease)[諸如巴金森氏症(Parkinson’s disease)以及阿茲海默氏症(Alzheimer’s disease)]。

8-側氧基鳥嘌呤DNA醣苷酶(8-oxoguanine DNA glycosylase, OGG1)是一種DNA修復酵素(DNA repair enzyme)，它在基因組DNA與粒線體DNA中皆存在有活性，能夠藉由鹼基切除修復路徑(base excision repair pathway)而從經損傷的DNA上切除8-oxoG，據此達到治療和/或預防8-oxoG損傷的效用。因此，OGG1目前已被廣泛地應用於化妝品(cosmetics)以及藥品(medicine)中。

然而，由於OGG1具有較差的安定性(stability)，容易隨著時間而漸漸失去其活性。因此，本領域的相關研究人員已在利用冷凍乾燥處理(lyophilization treatment)來將OGG1製備成一安定性較高的固態製劑(solid preparation)時，嘗試使用適當的保護劑(protecting agent)來減少OGG1活性的損失。例如，一由Proteintech Group Inc.所生產之貨號為Ag7320的OGG1融合蛋白質(OGG1 fusion protein)是藉由對OGG1添加以甘露醇(mannitol)與海藻糖(trehalose)來進行冷凍乾燥處理所得到之一呈凍乾粉末(lyophilized powder)的OGG1，可儲存在-20℃至-80℃下歷時12個月。

經研究，申請人意外地發現，在利用冷凍乾燥處理時，單獨使用甘露醇作為保護劑來製備OGG1的粉末化組成物(powdery composition)，能夠有效地增進OGG1的安定性，甚至可在室溫下儲存歷時長達24個月。

發明概要

於是，在第一個方面，本發明提供一種粉末化組成物，其包含有OGG1以及一單一保護劑，其中，該單一保護劑為甘露醇

在第二個方面，本發明提供一種如上所述的粉末化組成物供應用於製備一用來治療和/或預防8-oxoG損傷之醫藥品的用途。

在第三個方面，本發明提供一種用於治療和/或預防8-oxoG損傷的方法，其包括對一需要治療和/或預防8-oxoG損傷的個體投予(administering)一如上所述的粉末化組成物。

在第四個方面，本發明提供一種如上所述的粉末化組成物作為化妝品的用途。

發明的詳細說明

要被瞭解的是：若有任何一件前案刊物在此被引述，該前案刊物不構成一個下述承認：在台灣或任何其他國家之中，該前案刊物形成本技藝中的常見一般知識之一部分。

為了這本說明書之目的，將被清楚地瞭解的是：文字“包含有(comprising)”意指“包含但不限於”，以及文字“包括(comprises)”具有一對應的意義。

除非另外有所定義，在本文中所使用的所有技術性與科學術語具有熟悉本發明所屬技藝的人士所共同瞭解的意義。一熟悉本技藝者會認知到許多與那些被描述於本文中者相似或等效的方法和材料，它們可被用於實施本發明。當然，本發明決不受到所描述的方法和材料之限制。

如本文中所用的，“蛋白質”、“多肽(polypeptide)”和“胜肽(peptide)”等術語可被相互交換使用，且意指一種由胺基酸殘基所構成的聚合物，其中一或多個胺基酸殘基是天然存在的胺基酸(naturally occurring amino acids)或人造的化學仿效物(artificial chemical mimics)。

在尋找能夠使OGG1具有較高安定性的保護劑(protecting agent)上，申請人經由實驗而發現到，在利用冷凍乾燥處理(lyophilization treatment)時，單獨使用甘露醇(mannitol)作為保護劑來製備OGG1的粉末化組成物，能夠有效地提升OGG1的安定性，進而達到延長其保存期限的效用。

因此，本發明提供一種粉末化組成物，其包含有OGG1以及一單一保護劑，其中，該單一保護劑為甘露醇。

依據本發明，該粉末化組成物是藉由將OGG1與甘露醇混合並接著對所得到的混合物進行一冷凍乾燥處理而得到之一呈白色粉末狀的乾燥產物。

依據本發明，該冷凍乾燥處理可以採用熟習此項技藝者所詳知且慣用的技術來進行。

可瞭解到的是，有關冷凍乾燥處理的操作條件會進一步隨著OGG1與甘露醇的用量比例等因素而被變動，以便達致最佳的萃取效果。而這些操作條件的選擇是熟習此項技藝者能例行性地自行決定的。

依據本發明，OGG1以及甘露醇是呈一範圍落在1：33 (w/w)至1：2450 (w/w)內的比例。在本發明的一個較佳具體例中，OGG1以及甘露醇是呈一為1：240 (w/w)的比例。

依據本發明，OGG1可以是來自於微生物[諸如藤黃微球菌(Micrococcus luteus )]、植物[諸如阿拉伯芥(Arabidopsis thaliana )]或動物[諸如智慧人(Homo sapiens )以及浮游生物(plankton)]的OGG1。在本發明的一個較佳具體例中，OGG1是來自於智慧人，亦被稱為人類OGG1 (human OGG1, hOGG1)。

依據本發明，hOGG1可以是一選自於由下列所構成之群組中的選擇性剪接異構型(alternatively spliced isoforms)：hOGG1-1a、hOGG1-1b、hOGG1-1c、hOGG1-2a、hOGG1-2b、hOGG1-2c、hOGG1-2d以及hOGG1-2e，以及它們的組合。在本發明的一個較佳具體例中，hOGG1是hOGG1-1a。

依據本發明，OGG1可以採用熟習此項技藝者所詳知且慣用的遺傳工程技術而被製備。例如，利用重組DNA技術(recombinant DNA technology)，將一編碼OGG1的核酸編碼序列插入至一表現載體(expression vector)內，繼而將之轉形(transformation)或轉染(transfection)至一合適的宿主細胞中，接著讓該核酸編碼序列於該宿主細胞內被表現，藉此而獲得重組型OGG1。這些技術都是熟悉此項技術人士可根據本身的專業素養來實施，並且可參考本技藝中所詳知的教科書，例如：Molecular Cloning: A Laboratory Manual。

依據本發明，該重組型OGG1的純化可使用一具有本技藝中的通常技術者所熟知的標準蛋白質分離純化技術而被進行。這些標準蛋白質分離純化技術包括，但不限於：鹽析法(salting out)、溶劑沉澱法(solvent precipitation)、透析法(dialysis)、超濾法(ultrafiltration)、凝膠過濾法(gel filtration)、離心過濾法(centrifugal filtration)、SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳法(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)、等電點電泳法(isoelectric point electrophoresis)、逆相層析法(reverse phase chromatography)、陰離子交換層析法(anion exchange chromatography)、親和力層析法(affinity chromatography)以及色層焦集法(chromatofocusing)。

在本發明的一個較佳具體例中，OGG1是藉由使選殖自人類ogg1 cDNA選殖株(貨號為SC309025，廠牌為OriGen)的rhOGG1 基因(recombinant humanOGG1 gene)於大腸桿菌中表現與純化而被獲得。

此外，OGG1亦可利用本技藝中所慣用的分離純化方法而從一如上所述的微生物、植物或動物的來源中被分離純化出來。

另擇地，OGG1亦可以利用化學家所熟知的傳統化學合成方法來進行製備，例如使用一商業上可獲得的合成套組(synthesis kit)或者固相胜肽合成法(solid phase peptide synthesis)。

此外，該粉末化組成物被預期可供應用於製備一用來治療和/或預防8-oxoG損傷之醫藥品的用途。

如本文中所使用的，術語“8-oxoG損傷”意指人類個體的任何部位在經過活性氧族(reactive oxygen species, ROS)、游離輻射(ionizing radiation)以及紫外線(ultraviolet, UV)的過度暴露(overexposure)之後所引起之帶有8-oxoG突變的DNA損傷，其所導致的疾病包括，但不限於：皮膚損害(skin damage)、癌症[諸如大腸直腸癌(colorectal cancer)以及肺癌(lung cancer)]以及神經性疾病(neurological disease)[諸如巴金森氏症(Parkinson’s disease)，以及阿茲海默氏症(Alzheimer’s disease)]。

如本文中所使用的，術語“治療(treating)”或“治療(treatment)”8-oxoG損傷意指該損傷的嚴重性(severity)或該損傷的症狀(symptom)被減少(reduced)，或是該損傷被部分地(partially)或完全地(entirely)消除(eliminated)。

如本文中所使用的，術語“預防(preventing)”或“預防(prevention)”8-oxoG損傷意指一個體在還沒有被診斷具有該損傷時，消除(eliminate)或減少(reduce)該損傷的發生率(incidence)，以及減緩(slow)、延遲(delay)、控制(control)或減少(decrease)該損傷的可能性(likelihood)或機率(probability)。

依據本發明，該醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於局部投藥(topical administration)之劑型(dosage form)。

依據本發明，該醫藥品可進一步包含有一被廣泛地使用於藥物製造技術之藥學上可接受的載劑(pharmaceutically acceptable carrier)。例如，該藥學上可接受的載劑可包含一或多種選自於下列的試劑：溶劑(solvent)、緩衝液(buffer)、乳化劑(emulsifier)、懸浮劑(suspending agent)、分解劑(decomposer)、崩解劑(disintegrating agent)、分散劑(dispersing agent)、黏結劑(binding agent)、賦形劑(excipient)、安定劑(stabilizing agent)、螯合劑(chelating agent)、稀釋劑(diluent)、膠凝劑(gelling agent)、防腐劑(preservative)、潤濕劑(wetting agent)、潤滑劑(lubricant)、吸收延遲劑(absorption delaying agent)、脂質體(liposome)以及類似之物。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

依據本發明，該醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於局部地施用於皮膚上的外部製劑(external preparation)，這包括，但不限於：乳劑(emulsion)、凝膠(gel)、軟膏(ointment)、乳霜(cream)、貼片(patch)、擦劑(liniment)、粉末(powder)、氣溶膠(aerosol)、噴霧(spray)、乳液(lotion)、乳漿(serum)、糊劑(paste)、泡沫(foam)、滴劑(drop)、懸浮液(suspension)、油膏(salve)、繃帶(bandage)以及類似之物。

依據本發明，該外部製劑是藉由將本發明的醫藥品與一為熟習此項技藝者所詳知的基底(base)相混合而被製備。

依據本發明，該基底可包含有一或多種選自於下列的添加劑(additives)：水、醇(alcohols)、甘醇(glycol)、碳氫化合物(hydrocarbons)[諸如石油膠(petroleum jelly)以及白凡士林(white petrolatum)]、蠟(wax)[諸如石蠟(paraffin)以及黃蠟(yellow wax)]、保存劑(preserving agents)、抗氧化劑(antioxidants)、界面活性劑(surfactants)、吸收增強劑(absorption enhancers)、安定劑(stabilizing agents)、膠凝劑(gelling agents)[諸如卡波普^® 941 (carbopol^® 941)、微結晶纖維素(microcrystalline cellulose)以及羧基甲基纖維素(carboxymethylcellulose)]、活性劑(active agents)、保濕劑(humectants)、氣味吸收劑(odor absorbers)、香料(fragrances)、pH調整劑(pH adjusting agents)、螯合劑(chelating agents)、乳化劑(emulsifiers)、閉塞劑(occlusive agents)、軟化劑(emollients)、增稠劑(thickeners)、助溶劑(solubilizing agents)、滲透增強劑(penetration enhancers)、抗刺激劑(anti-irritants)、著色劑(colorants)以及推進劑(propellants)等。有關這些添加劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

本發明亦提供一種用於治療和/或預防8-oxoG損傷的方法，其包括對一需要治療和/或預防8-oxoG損傷的個體投予一如上所述的粉末化組成物。

如本文中所用的，術語“投予(administering)”與“投藥”以及“施用(application)”可被交換地使用。

依據本發明，該粉末化組成物的投藥劑量與投藥次數會視下列因素而變化：要被改善的疾病之嚴重性，投藥途徑，以及要被改善的個體之體重、年齡、身體狀況與反應。而有關投藥劑量與投藥次數的選擇是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

特別地，該粉末化組成物亦被預期可供應用於作為化妝品。

依據本發明，該化妝品可進一步包含有一被廣泛地使用於化妝品製造技術之化妝品上可接受的佐劑(cosmetically acceptable adjuvant)。例如，該化妝品上可接受的佐劑可包含有一或多種選自於下列的試劑：溶劑(solvent)、膠凝劑、活性劑、防腐劑(preservative)、抗氧化劑、遮蔽劑(screening agent)、螯合劑、介面活性劑、染色試劑(coloring agent)、增稠劑(thickening agent)、填料(filler)、香料以及氣味吸收劑。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

依據本發明，該化妝品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於護膚(skincare)或化妝(makeup)的形式，這包括，但不限於：水性溶液(aqueous solution)、水-醇溶液(aqueous-alcohol solution)或油性溶液(oily solution)、呈水包油型(oil-in-water type)、油包水型(water-in-oil type)或複合型之乳劑、凝膠、軟膏、乳霜、面膜(mask)、貼片、貼布(pack)、擦劑、粉末、氣溶膠、噴霧、乳液、乳漿、糊劑、泡沫、分散液、滴劑、慕斯(mousse)、防曬油(sunblock)、化妝水(tonic water)、粉底(foundation)、眼影(eyeshadow)、卸妝產品(makeup remover products)、肥皂(soap)以及其他身體清潔產品(body cleansing products)等。

依據本發明，該化妝品亦可與一或多種選自於下列之已知活性的外用劑(external use agents)一起合併使用：美白劑(whitening agents)[諸如維生素A酸(tretinoin)、兒茶素(catechin)、麴酸、熊果苷以及維生素C]、保濕劑、抗發炎劑(anti-inflammatory agents)、殺菌劑(bactericides)、紫外線吸收劑(ultraviolet absorbers)、植物萃取物(plant extracts)[諸如蘆薈萃取物(aloe extract)]、皮膚營養劑(skin nutrients)、麻醉劑(anesthetics)、抗痘劑(anti-acne agent)、止癢劑(antipruritic)、止痛劑(analgesic)、抗皮膚炎劑(antidermatitis agents)、抗過角化劑(antihyperkeratolytic agents)、抗乾皮膚劑(anti-dry skin agents)、抗乾癬劑(antipsoriatic agents)、抗老化劑(antiaging agents)、抗皺劑(antiwrinkle agents)、抗皮脂溢出劑(antiseborrheic agents)、傷口治療劑(wound-healing agents)、皮質類固醇(corticosteroids)以及激素(hormones)。有關這些外用劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

較佳實施例之詳細說明

本發明將就下面的實施例來做進一步說明，但應瞭解的是，該等實施例僅是供例示說明用，而不應被解釋為本發明的實施上的限制。實施例 一般實驗材料： 1.  下面實施例中被使用來進行聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)的引子(primers)是委託基龍米克斯生物科技股份有限公司(Genomics Biosci & Tech)來代為合成。 2.  下面實施例中所使用的限制酶是購自於Promega corporation。 3.  下面實施例中所使用的質體pQE70是購自於Qiagen (Valencia, CA)。 4.  下面實施例中所使用的勝任大腸桿菌DH5α細胞(competent E. coli DH5α cells)以及勝任大腸桿菌BL21 (DE3)細胞[competentE. coli BL21 (DE3) cell]是購自於益生生技開發股份有限公司(Yeastern Biotech Co., Ltd.)。 5.  下面實施例中所使用的甘露醇(mannitol)以及海藻糖(trehalose)分別是購自於PanReac以及Carbosynth。 6.  下面實施例中被使用來進行OGG1活性分析(OGG1 activity assay)的DNA片段是委託Sigma-Aldrich來代為合成。 一般實驗方法： 1.  除非另有指明，在本發明中所採用的實驗方法[包括DNA選殖(DNA cloning)、PCR以及轉形(transformation)]是使用本領域中熟悉此項技術人士所詳知的技術或者依據製造商所提供的操作指引來進行。實施例1. 製備本發明之含有重組型人類 8- 側氧基鳥嘌呤 DNA 醣苷酶 (recombinant human 8-oxoguanine DNA glycosylase, rhOGG1) 的粉末化組成物 (powdery composition) 實驗材料： 1.  製備含有rhOGG1 基因的大腸桿菌BL21 (DE3)轉形株：

有關rhOGG1 基因的選殖大體上是參照Molecular Cloning: A Laboratory Manual當中所述的方法來進行。簡言之，以人類ogg1 cDNA選殖株(human ogg1 cDNA clone)(貨號為SC309025，廠牌為OriGen)作為模版並使用1組依據NCBI登錄編號NM_002542.4 [智慧人(Homo sapiens )中針對8-側氧基鳥嘌呤DNA醣苷酶(OGG1)的轉錄變異體1a (transcript variant 1a)的mRNA]當中所示的核苷酸序列而被設計出之具有如下所示之核苷酸序列的引子對(其中底線表示限制酶切割位址)來進行PCR，藉此而擴增出一個帶有rhOGG1 基因的PCR產物。 前向引子rhOGG1-F 5’-aaaagcatgc gtatgcctgcccgcgcgcttc-3’ (序列辨識編號：1)Sph I 反向引子rhOGG1-R 5’-aaaagatct gccttccggccctttggaac-3’ (序列辨識編號：2)Bgl II

接著，利用限制酶Sph I/Bgl II來將該PCR產物選殖至質體pQE70中，繼而將所得到的重組型載體pQE70-rhOGG1轉形至勝任大腸桿菌DH5α細胞中並利用胺

青黴素(ampicillin)來進行篩選，繼而抽取出該重組型載體pQE70-rhOGG1，並且利用限制酶切割與定序分析來進行確認。

之後，將經確認的重組型載體pQE70-rhOGG1轉形至勝任大腸桿菌BL21 (DE3)細胞中並利用胺

青黴素來進行篩選，藉此而得到含有rhOGG1基因的大腸桿菌BL21 (DE3)轉形株。 實驗方法：

首先，以異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside, IPTG)來誘導上面“實驗材料”的第1項當中所得到之含有rhOGG1基因的大腸桿菌BL21 (DE3)轉形株表現rhOGG1蛋白質，繼而以一高壓細胞破碎機(型號為T5/40/EE/GA，廠牌為Constant systems)來將細胞打破並予以離心與過濾。

接著，將所得到的上澄液分成3組，其中包括1個甘露醇組、1個海藻糖組以及1個混合組。各組上澄液是藉由使用一AKTA Explorer 100管柱層析儀的管柱層析法(column chromatography)來依序進行rhOGG1蛋白質的純化以及緩衝液的置換。有關管柱層析法的各項操作條件被顯示於下面的表1中。 表1.   管柱層析法的操作條件

目的	操作參數	條件
純化rhOGG1	管柱	His XK 50/20管柱
偵測波長	UV-280 nm
洗提液	緩衝液A (包含有Na2 HPO4 ‧12H2 O、NaCl以及H3 PO4 )/緩衝液B [包含有Na2 HPO4 ‧12H2 O、NaCl、H3 PO4 以及咪唑(imidazole)]，70：30 (v/v)
流速(mL/分鐘)	40
置換 緩衝液	管柱	Desalting XK 26/G25管柱
偵測波長	UV-280 nm
洗提液	磷酸鹽緩衝液(phosphate buffer)
流速(mL/分鐘)	13.8

於洗提時，當洗提波峰達到15 mAU以上時，將洗出物收集於預先被添加以適量之如下面表2中所示的保護劑(protecting agent)的血清瓶中，而使得各組的洗出物含有相同含量的保護劑。 表2.   各個組別所使用的保護劑種類及其含量

組別	保護劑	含量(mg/mL)
甘露醇組	甘露醇	50
海藻糖組	海藻糖	50
混合組	海藻糖	25
甘露醇	25

之後，以一冷凍乾燥機(型號為coolsafe 55-4，廠牌為ScanVac)來進行冷凍乾燥歷時48小時，而得到呈凍乾粉末(lyophilized powder)之含有rhOGG1的粉末化組成物(powdery composition)，其中OGG1以及甘露醇是呈一約為1：240 (w/w)的比例。實施例 2. 組合使用甘露醇與海藻糖以及單獨使用甘露醇作為保護劑對於 rhOGG1 的粉末化組成物 之 安定性 (stability) 的影響

於本實施例中，為探討不同保護劑的組合使用與單一種保護劑的使用在提升rhOGG1之安定性上的效用比較，申請人將依據上面實施例1所得到之混合組與甘露醇組的粉末化組成物拿來進行安定性試驗。 實驗方法：

各組的粉末化組成物是依照食藥署所公布的「藥品安定性試驗基準」來進行安定性的加速試驗(accelerated testing)。在開始進行安定性加速試驗之後的第1個月以及第6個月結束之時，觀察各組粉末化組成物的外觀；以及在開始進行安定性加速試驗之前(亦即第0個月)與在開始進行安定性加速試驗之後的第2、4以及5個月結束之時，對各組的粉末化組成物各取50 mg，繼而分別溶於1 mL的純水中以作為待測樣品並被拿來進行下面的OGG1活性分析(OGG1 activity assay)。

有關OGG1活性分析大體上是參照TW 201531569 A當中所述的方法來進行。首先，將一具有如下所示之帶有8-側氧基鳥嘌呤(8-oxoguanine, 8-oxoG)的核苷酸序列的DNA片段(下稱DNA片段1)[其5’端以及3’端分別被附接以一螢光報導基團(fluorescent reporter group)(亦即，FAM染劑)以及一螢光淬火基團(fluorescent quencher group)(亦即，BHQ1)]以及一具有如下所示之互補序列的DNA片段(下稱DNA片段2)進行黏合(annealing)[其操作條件為：在90℃下反應歷時5分鐘、在60℃下反應歷時10分鐘以及在25℃下反應歷時10分鐘]，藉此而得到一DNA受質(DNA substrate)。 DNA片段1 5’-catcgttgtcncagacctggtggat-3’ (序列辨識編號：3) DNA片段2 5’-cggtatccaccaggtctgcgacaacgatgaagcc-3’ (序列辨識編號：4) 其中符號n代表8-oxoG。

接著，對各組待測樣品加入該DNA受質、10X反應緩衝液(reaction buffer)(含有500 mM NaCl、100 mM Tris-HCl、100 mM MgCl₂ 以及10 mM DTT)以及S1核酸酶(S1 nuclease)並予以混合，繼而以一即時定量聚合酶鏈反應分析儀(real time quantitative PCR analyzer)(Biometra)在37℃下作用歷時1小時，然後在95℃下歷時1分鐘以終止酵素反應。待所得到的反應物回溫至25℃之後，混合以99%甲醯胺(formamide)[含有0.1%溴酚藍(bromophenol blue)]，並且使用20%之含有7 M尿素(urea)的變性凝膠(denaturing gel)來進行電泳。

接著，使用一冷光螢光影像系統(型號為170-8070，廠牌為Bio-Rad)來測量各組在該凝膠上呈一大小為25 mer之DNA片段的螢光強度(fluorescence intensity)，並且使用該系統的分析軟體來進行分析。另外，以一不含有8-oxoG的DNA片段1來代替DNA受質進行相同的實驗以作為對照組(control)。

有關rhOGG1的相對活性(relative activity)是藉由將各組所測得的螢光強度以對照組所測得的螢光強度來進行標準化而獲得。 結果：

藉由觀察外觀而發現到，混合組的粉末化組成物在開始進行安定性加速試驗之後的第1個月已因產生褐變反應(browning reaction)而呈褐色塊狀，相對地，甘露醇組的粉末化組成物在開始進行安定性加速試驗之後的第6個月仍然呈白色粉末狀。

圖1顯示各組粉末化組成物所測得的rhOGG1的相對活性。從圖1可見，與甘露醇組相較之下，混合組的rhOGG1的相對活性會隨著時間而有明顯下降的情形，特別地，在開始進行安定性加速試驗之後的第5個月，混合組的rhOGG1的相對活性已下降至40%以下，而甘露醇組的rhOGG1的相對活性仍有70%以上。

這個實驗結果顯示，單獨使用甘露醇作為保護劑所製得的粉末化組成物在提升rhOGG1之安定性上能夠展現出一優異的效用。實施例 3. 單獨使用甘露醇與海藻糖作為保護劑對於 rhOGG1 的粉末化組成物 之 安定性的影響

於本實施例中，為探討不同種類的保護劑在提升rhOGG1之安定性上的效用比較，申請人將依據上面實施例1所得到之甘露醇組與海藻糖組的粉末化組成物拿來進行安定性試驗。 實驗方法： A、 安定性的加速試驗：

各組的粉末化組成物是依照食藥署所公布的「藥品安定性試驗基準」來進行安定性的加速試驗。在開始進行安定性加速試驗之後的第1個月結束之時，觀察各組粉末化組成物的外觀；以及在開始進行安定性加速試驗之前(亦即第0個月)與在開始進行安定性加速試驗之後的第1、2以及4個月結束之時，對各組的粉末化組成物各取50 mg，繼而分別溶於1 mL的純水中以作為待測樣品並被拿來進行上面實施例2當中所述的OGG1活性分析。B、 安定性的長期試驗 (long-term testing) ：

各組的粉末化組成物是依照食藥署所公布的「藥品安定性試驗基準」來進行安定性的長期試驗。在開始進行安定性長期試驗之前(亦即第0個月)與在開始進行安定性長期試驗之後的第1至24個月結束之時，對各組的粉末化組成物各取50 mg，繼而分別溶於1 mL的純水中以作為待測樣品並被拿來進行上面實施例2當中所述的OGG1活性分析。 結果： A、 安定性的加速試驗：

藉由觀察外觀而發現到，海藻糖組的粉末化組成物在開始進行安定性加速試驗之後的第1個月已因產生褐變反應而呈褐色粉末狀，相對地，甘露醇組的粉末化組成物仍然呈白色粉末狀。

圖2顯示各組粉末化組成物所測得的rhOGG1的相對活性。從圖2可見，甘露醇組的rhOGG1的相對活性在歷時4個月的安定性加速試驗期間皆維持在90%以上，相對地，海藻糖組的rhOGG1的相對活性會隨著時間而有明顯下降的情形，並且在開始進行安定性加速試驗之後的第4個月下降至50%。B、 安定性的長期試驗：

這個實驗結果顯示，甘露醇組的rhOGG1的相對活性在歷時24個月的安定性長期試驗期間皆能夠維持在90%以上，相對地，海藻糖組的rhOGG1的相對活性在開始進行安定性長期試驗之後的第7個月即下降至80% (數據未顯示)。

綜合以上的實驗結果，申請人認為：單獨使用甘露醇作為保護劑所製得的粉末化組成物能夠有效地提升rhOGG1的安定性，延緩褐變反應的發生，進而達到延長其保存期限的效用。

於本說明書中被引述之所有專利和文獻以其整體被併入本案作為參考資料。若有所衝突時，本案詳細說明(包含界定在內)將佔上風。

雖然本發明已參考上述特定的具體例被描述，明顯地在不背離本發明之範圍和精神之下可作出很多的修改和變化。因此意欲的是，本發明僅受如隨文檢附之申請專利範圍所示者之限制。

本發明的上述以及其它目的、特徵與優點，在參照以下的詳細說明與較佳實施例和隨文檢附的圖式後，將變得明顯，其中： 圖1與圖2分別顯示各組粉末化組成物所測得的rhOGG1的相對活性。

Claims (7)

1. 一種粉末化組成物，其包含有8-側氧基鳥嘌呤DNA醣苷酶(OGG1)以及一單一保護劑，其中，該單一保護劑為甘露醇。
2. 如請求項1的粉末化組成物，其中，OGG1以及甘露醇是呈一範圍落在1：33(w/w)至1：2450(w/w)內的比例。
3. 如請求項2的粉末化組成物，其中，OGG1以及甘露醇是呈一為1：240(w/w)的比例。
4. 一種如請求項1至3中任一項的粉末化組成物供應用於製備一用來修復皮膚損傷之醫藥品的用途。
5. 如請求項4的用途，其中該醫藥品是呈一供局部施用的形式。
6. 一種如請求項1至3中任一項的粉末化組成物作為化妝品的用途。
7. 如請求項6的用途，其中該化妝品是呈一供局部施用的形式。

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