CN111787981A - 改变身体组成的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及改变个体身体组成的组合物和方法，其中所述改变身体组成是同时增加肌肉量和减少脂肪量。本发明还涉及用于减少个体中的脂肪量的组合物和方法。所述组合物和方法还增加个体的肌肉体积和瘦体重。本发明还涉及包含GDF8抑制剂和激活素A抑制剂的组合物，以及所述组合物治疗特征在于脂肪量增加和/或肌肉体积减小的疾病和病症的用途。

Description

改变身体组成的方法
本申请在2019年3月1日作为PCT国际专利申请提交，并且要求在2018年3月1日提交的美国临时申请号62/637,017的优先权，其公开内容通过引用整体并入本文。
序列表
本申请包括名为“Sequence-Listing-40848-091WOU1”的电子形式的序列表，其在2019年3月1日生成，大小为288千字节(KB)(295,202字节)。Txt文档“Sequence-Listing-40848-091USU1”的内容在此并入本文。
技术领域
本发明涉及用于改变个体身体组成的组合物和方法。所述组合物和方法还减少个体的脂肪量。所述组合物和方法还增加个体的肌肉体积和/或瘦体重。更具体地说，本发明涉及包含GDF8抑制剂和激活素A抑制剂的组合物和这类组合物治疗以脂肪量增加和/或肌肉体积减小或瘦体重减小为特征的疾病和病症的用途。
发明背景
生长和分化因子-8(GDF8，也称为肌生成抑制蛋白)是属于生长因子的转化生长因子-β(TGF-β)超家族的分泌配体。GDF8在骨骼肌的发育和维持中起关键作用，作为肌生成和骨骼肌量的负调节物起作用。肌生成抑制蛋白突变(包括敲除)翻译为如下表型，所述表型主要是增加的肌肉量，但可以由肌肉化(更多的肌纤维)、肌纤维组成(更大的肌纤维横截面积)、增加的蛋白质/DNA比等的变化组成。
GDF8的抗体和治疗方法公开于例如US8,840,894中。抗GDF8抗体也在例如美国专利号6,096,506；7,320,789；7,261,893；7,807,159；7,888,486；7,635,760；7,632,499；在美国专利申请公开2006/0263354；2007/0178095；2008/0299126；2010/0166764；2009/0148436；和国际专利申请公开WO2004/037861；WO2007/047112；WO2010/070094中提及。
激活素(Activins)属于转化生长因子-β(TGF-β)超家族，并且对细胞增殖、分化、代谢、内稳态和细胞凋亡以及免疫应答和组织修复发挥广泛的生物学作用。激活素A是二硫键连接的同型二聚体(两条β-A链)，其结合并活化I型(Act RI-A和Act RI-B)和II型(ActRII-A和Act RII-B)丝氨酸-苏氨酸激酶受体的异聚复合物。
激活素A的抗体及其用途公开于例如US8,309,082；9,718,881；以及国际专利申请公开WO2008/031061中。
包含抗GDF8抗体和抗激活素A抗体的组合物和治疗方法公开于例如US8,871,209中。
肥胖症是世界上三分之一人口的全球性问题。在美国，平均肥胖率超过20％。肥胖症相关疾病的成本惊人，总计1902亿美元，约美国年医疗费用的21％。肥胖症是与失常(升高)的脂肪量相关的慢性低度炎症为特征的流行病。在Framingham心脏研究参与者中，在调整临床危险因素和总体肥胖之后，腹部肥胖与心血管疾病(CVD)事件有关。Britton JACC2013 62；921。腹部内脏脂肪积累与冠状非钙化斑块的进展正相关。Imai Atherosclerosis2012。因为高脂肪量与诸如充血性心力衰竭、高血压/血压升高、肺栓塞、骨关节炎、淋巴水肿、胃食管反流病、慢性肾衰竭、癌症、脂肪肝病、甚至抑郁症的严重病症相关，所以仍然需要降低个体中总脂肪和/或男性型(android)脂肪量的疗法。
发明简述
在一个方面，本发明涉及改变个体身体组成，即增加肌肉量和减少脂肪量的方法，其包括向个体施用包含有效量GDF8抑制剂的第一组合物和包含有效量激活素A抑制剂的第二组合物。在另一个方面，本发明涉及诱导个体脂肪量减少的方法，所述方法包括向个体施用有效量的包含GDF8抑制剂和激活素A抑制剂的组合物。
在另一个方面，本发明涉及治疗以脂肪量增加为特征或与脂肪量增加相关的疾病或障碍的方法，所述方法包括向有需要的个体施用包含有效量GDF8抑制剂的第一组合物和包含有效量的激活素A抑制剂的第二组合物。在另一个方面，本发明涉及治疗以脂肪量增加为特征或与脂肪量增加相关的疾病或障碍的方法，所述方法包括向有需要的个体施用有效量的包含GDF8抑制剂和激活素A抑制剂的组合物。在一个方面，本发明涉及改变个体身体组成的方法，即增加肌肉量和减少脂肪量的方法，所述方法包括向个体施用有效量的GDF8抑制剂和有效量的激活素A抑制剂，其中总体重有不明显的变化。因此，在本发明的一个方面，施用有效量GDF8抑制剂和有效量激活素A抑制剂的个体将经历肌肉量增加同时脂肪量减少，导致总体重变化最小和/或不显著。
在一个方面，本发明涉及GDF8抑制剂和/或激活素A抑制剂在制备药物中的用途，所述药物用于实现个体脂肪量的减少。在另一个方面，本发明涉及GDF8抑制剂和/或激活素A抑制剂在制备药物中的用途，所述药物用于治疗个体中与脂肪量增加相关的疾病或障碍。
在一些实施方案中，提供了用于治疗特征在于脂肪量增加的疾病或障碍的方法中的GDF8抑制剂，其中所述方法包括向个体施用GDF8抑制剂和激活素A抑制剂。
在一些实施方案中，提供了用于治疗特征在于脂肪量增加的疾病或障碍的方法中的激活素A抑制剂，其中所述方法包括向个体施用激活素A抑制剂和GDF8抑制剂。
在一些实施方案中，提供了用于减少个体中脂肪量的非治疗性方法，所述方法包括向个体施用激活素A抑制剂和GDF8抑制剂。
在根据本发明方法的一个实施方案中，GDF8抑制剂的有效量包括选自至少0.1mg/kg至约10gm/kg,1mg/kg至约1gm/kg和10mg/kg至100mg/kg的给药方案。在根据本发明方法的另一个实施方案中，GDF8抑制剂的有效量包括选自约0.01至约20mg/kg体重,约0.1至约10mg/kg体重和约0.1至约5mg/kg体重的单剂量的给药方案。
在根据本发明的方法的另一个实施方案中，激活素A抑制剂的有效量包括选自至少0.1mg/kg至约10gm/kg,1mg/kg至约1gm/kg和10mg/kg至100mg/kg的给药方案。在根据本发明方法的另一个实施方案中，激活素A抑制剂的有效量包括选自约0.01至约20mg/kg体重,约0.1至约10mg/kg体重和约0.1至约5mg/kg体重的单剂量的给药方案。
在根据本发明方法的一个实施方案中，GDF8抑制剂的有效量为6mg/kg体重且激活素A抑制剂的有效量为3mg/kg体重。在根据本发明方法的一个实施方案中，GDF8抑制剂的有效量为6mg/kg体重且激活素A抑制剂的有效量为10mg/kg体重。
在根据本发明的方法的一个实施方案中，第一组合物被配制用于静脉内、皮下或口服施用。在根据本发明的方法的另一个实施方案中，第二组合物被配制用于静脉内、皮下或口服施用。在根据本发明的方法的一些实施方案中，将第一和第二组合物同时或顺序地施用于个体。
在根据本发明的方法的一个实施方案中，在施用前将第一和第二组合物合并成第三组合物。在另一个实施方案中，第三组合物被配制用于静脉内、皮下或口服施用。
在一个实施方案中，根据本发明的方法还包括在施用之前测定个体的总脂肪量。在另一个实施方案中，根据本发明的方法还包括在施用后测定个体的总脂肪量，并且施用第一和第二组合物直至个体的总脂肪量降低至少2％至8％,2.5％至6％,3％至4％或至少2.0％,至少2.5％,至少3.0％或至少3.5％或更多。
在一个实施方案中，根据本发明的方法还包括在施用之前测定个体中的男性型脂肪量。在另一个实施方案中，根据本发明的方法还包括在施用之后测定个体中的男性型脂肪量，并且施用第一组合物和第二组合物直至个体的男性型脂肪量降低至少2％至8％,2.5％至6％,3％至4％或至少2.0％,至少2.5％,至少3.0％或至少3.5％或更多。
在一个实施方案中，根据本发明的方法还包括在施用之前测定个体中的皮下脂肪组织体积。在另一个实施方案中，根据本发明的方法还包括在施用后测定个体的皮下脂肪组织体积，并且施用第一组合物和第二组合物直至个体的男性型脂肪量降低至少2％至8％,2.5％至6％,3％至4％或至少2.0％,至少2.5％,至少3.0％或至少3.5％或更多。
在一些实施方案中，提供了一种方法，其包括向有需要的个体施用有效量的GDF8抑制剂和有效量的激活素A抑制剂，其中所述GDF8抑制剂和激活素A抑制剂在48小时或更短、24小时或更短、12小时或更短、6小时或更短、3小时或更短或1小时或更短时间内共同施用。
在一些实施方案中，提供了方法，其包括向有需要的个体施用有效量的GDF8抑制剂和有效量的激活素A抑制剂，其中个体表现出总脂肪量、男性型脂肪量和/或皮下脂肪组织体积的降低。
在一些实施方案中，提供了方法，其包括向有需要的个体施用有效量的GDF8抑制剂和有效量的激活素A抑制剂，其中个体在施用后4周或更长时间，或8周或更长时间后表现出总脂肪量、男性型脂肪量和/或皮下脂肪组织体积的降低。
在一些实施方案中，提供了方法，其包括向有需要的个体施用有效量的GDF8抑制剂和有效量的激活素A抑制剂，其中个体表现出总脂肪量、男性型脂肪量和/或皮下脂肪组织体积的降低，其中个体不表现出大腿肌内脂肪组织体积降低。
在一些实施方案中，提供了方法，其包括向有需要的个体施用有效量的GDF8抑制剂和有效量的激活素A抑制剂，其中个体表现出总脂肪量、男性型脂肪量和/或皮下脂肪组织体积的降低，其中在施用后4周或更长时间，或8周或更长时间后个体不表现出大腿肌内脂肪组织体积降低。
在一些实施方案中，提供了套盒，其包括含有有效量GDF8抑制剂的第一容器和含有有效量特异性激活素A抑制剂的第二容器。
在一些实施方案中，GDF8抑制剂是特异性结合GDF8的分离的抗体或其抗原结合片段。
在本发明方法的一个实施方案中，GDF8抑制剂是特异性结合GDF8的抗体或其抗原结合片段。在另一个实施方案中，特异性结合GDF8的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ IDNO:360的重链可变区(HCVR)的重链互补决定区(HCDR)，和含有SEQ ID NO:368的轻链可变区(LCVR)的轻链互补决定区(LCDR)。在又一个实施方案中，特异性结合GDF8的抗体或抗原结合片段包含三个HCDR和三个LCDR，所述HCDR包含SEQ ID NO:362、SEQ ID NO:364和SEQID NO:366，所述LCDR包含SEQ ID NO:370、SEQ ID NO:372和SEQ ID NO:374。。
在一些实施方案中，激活素A抑制剂是特异性结合激活素A的分离的抗体或其抗原结合片段。
在根据本发明方法的一个实施方案中，激活素A抑制剂是特异性结合激活素A的抗体或其抗原结合片段。在另一个实施方案中，特异性结合激活素A的抗体或抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:553的重链可变区(HCVR)的重链互补决定区(HCDRs)和含有SEQ ID NO:537的轻链可变区(LCVR)的轻链互补决定区(LCDRs)。在又一个实施方案中，特异性结合激活素A的抗体或抗原结合片段包含三个HCDR和三个LCDR，所述HCDR包含SEQ ID NO:555,SEQID NO:557和SEQ ID NO:559，所述LCDR包含SEQ ID NO:539,SEQ ID NO:541和SEQ ID NO:543。
在根据本发明方法的一个实施方案中，激活素A抑制剂的有效剂量为选自100％至200％的GDF8抑制剂的有效剂量、100％至250％的GDF8抑制剂的有效剂量、100％至300％的GDF8抑制剂的有效剂量和100％至400％重量的GDF8抑制剂的有效剂量。
在根据本发明的方法的另一个实施方案中，激活素A抑制剂的有效剂量与GDF8抑制剂的有效剂量的重量比为10:1至1:10,8:1至1:8,6:1至1:6,3:1至1:3或约2:1至1:2。在根据本发明的方法的另一个实施方案中，激活素A抑制剂有效剂量的重量比为以重量计GDF8抑制剂的量的约1.5至2.0倍。
在根据本发明方法的一个实施方案中，GDF8抑制剂为特异性结合GDF8且还特异性结合激活素A的双特异性抗体或其抗原结合片段。在另一个实施方案中，激活素A抑制剂为特异性结合激活素A且还特异性结合GDF8的双特异性抗体或其抗原结合片段。
在根据本发明方法的一个实施方案中，个体中脂肪量的减少是通过DXA(双能X射线吸收测定法)测定的总脂肪量的减少。在根据本发明的方法的另一个实施方案中，个体中脂肪量的减少为通过DXA(双能X射线吸收测定法)测定的男性型脂肪量的减少。
在根据本发明方法的一个实施方案中，个体中脂肪量的减少是通过MRI(磁共振成像)测定的皮下脂肪组织体积的减少。
在根据本发明的方法的一个实施方案中，个体经历肌肉体积的增加。肌肉体积可以是大腿肌肉组织体积，例如通过MRI测定。在一些实施方案中，肌肉体积可以是大腿肌肉组织体积，例如通过MRI测定。在一些实施方案中，大腿肌肉体积可以是包括肌内脂肪组织和大血管的大腿肌肉组织体积，或者不包括肌内脂肪组织和大血管的大腿肌肉组织体积，例如，通过MRI测定的。
在根据本发明方法的一个实施方案中，个体经历总瘦体重的增加。总瘦体重可以通过DXA(双X射线吸收测定法)测定。
在根据本发明方法的一个实施方案中，个体经历四肢瘦体重增加。四肢瘦体重可通过DXA测定，并且例如通过aLBM方程计算。
在根据本发明方法的一个实施方案中，个体经历总脂肪量的减少，例如，通过DXA所测定。
在根据本发明方法的一个实施方案中，个体经历男性型脂肪量的减少，例如，通过DXA所测定。
在根据本发明方法的一个实施方案中，个体经历皮下脂肪组织体积的减少，例如，通过DXA所测定。
在根据本发明方法的一个实施方案中，个体经历手臂和腿的脂肪量总和的减少，例如，通过DXA所测定。
在本发明的一个实施方案中，个体不表现出大腿肌内脂肪组织体积的减少，例如，如通过MRI测定的。
在本发明的一个实施方案中，个体不表现出总骨矿物质密度(BMD)量的降低，例如，通过DXA所测定。
在本发明的一个实施方案中，个体不表现出总骨矿物质含量(BMC)量的降低，例如，通过DXA所测定。
在本发明的一个实施方案中，个体表现出总骨矿物质含量(BMC)量的增加，例如，通过DXA所测定。
在根据本发明的方法的另一个实施方案中，个体没有肌肉萎缩病症或疾病。
在一些实施方案中，提供了用于改变身体组成、减少脂肪量、增加瘦体重或治疗以脂肪量增加为特征或与脂肪量增加相关的疾病或障碍的套盒，所述套盒包括第一容器和第二容器，所述第一容器包含含有有效量的GDF8抑制剂的组合物，所述第二容器包含含有有效量的激活素A抑制剂的第二组合物。
在一些实施方案中，提供了提供了用于制备用作套盒中的药物的第一组合物的GDF8抑制剂，所述套盒用于改变身体组成、减少脂肪量、增加瘦体重或治疗以脂肪量增加为特征或与脂肪量增加相关的疾病或障碍，所述套盒还包含含有激活素A抑制剂的第二组合物。
在一些实施方案中，提供了提供了用于制备用作套盒中的药物的第一组合物的激活素A抑制剂，所述套盒用于改变身体组成、减少脂肪量、增加瘦体重或治疗以脂肪量增加为特征或与脂肪量增加相关的疾病或障碍，所述套盒还包含含有GDF8抑制剂的第二组合物。
在一些实施方案中，提供了用于制备用于套盒的第一组合物的GDF8抑制剂，所述套盒用于改变个体的身体组成、减少脂肪量或增加瘦体重，所述套盒还包含含有激活素A抑制剂的第二组合物。
在一些实施方案中，提供了用于制备用于套盒的第一组合物的激活素A抑制剂，所述套盒用于改变个体的身体组成、减少脂肪量或增加瘦体重，所述套盒还包含含有GDF8抑制剂的第二组合物。
在一些实施方案中，提供了用于在个体中改变身体组成、减少脂肪量、增加瘦体重或治疗以脂肪量增加或瘦体重降低为特征或与脂肪量增加或瘦体重降低相关的疾病或障碍的包含GDF8抑制剂的第一组合物，其中个体已接受包含激活素A抑制剂的第二组合物。
在一些实施方案中，提供了用于在个体中改变身体组成、减少脂肪量、增加瘦体重、或治疗以脂肪量增加或瘦体重降低为特征或与脂肪量增加或瘦体重降低相关的疾病或障碍的包含激活素A抑制剂的第一组合物，其中个体已接受包含GDF8抑制剂的第二组合物。
在一些实施方案中，提供了用于改变身体组成、减少脂肪量、增加瘦体重,或治疗以脂肪量增加或瘦体重降低为特征或与脂肪量增加或瘦体重降低相关的疾病或障碍的方法中的包含GDF8抑制剂的第一组合物，所述方法还包括施用包含激活素A抑制剂的第二组合物。
在一些实施方案中，提供了用于改变身体组成、减少脂肪量、增加瘦体重,或治疗以脂肪量增加或瘦体重降低为特征或与脂肪量增加或瘦体重降低相关的疾病或障碍的方法中的包含激活素A抑制剂的第一组合物，所述方法还包括施用包含GDF8抑制剂的第二组合物。
在一些实施方案中，提供了包含激活素A抑制剂和GDF8抑制剂的组合物，其用于改变身体组成、减少脂肪量、增加瘦体重或治疗或预防以脂肪量增加或瘦体重降低为特征或与脂肪量增加或瘦体重降低相关的疾病或障碍。
通过阅读随后的详细描述，本发明的其它实施方案将变得显而易见。
附图简述
图1显示了描述在接受单独抗-GDF8抗体REGN1033的70岁或更大年龄的少肌症患者中12周后的临床研究结果的柱状图，作为与安慰剂相比总瘦体重自基线的百分比变化LS平均值和SE。当与安慰剂相比时，接受REGN1033的患者在三个给药方案中的每一个中在12周时表现出显著增加的总瘦体重(n＝65)。接受100mg抗-GDF8抗体REGN1033 Q4W S.C.的患者相对于安慰剂显示1.66％总瘦体重的差异(n＝62，P＝0.0077)。接受300mg抗-GDF8Q4WSC的患者相对于安慰剂显示1.78％总瘦体重的差异(n＝64，P＝0.0043)。接受300mg Q2WSC的患者相对于安慰剂显示2.29％总瘦体重的差异(n＝59，P＝0.0004)。
图2A显示了表1，其具有根据实施例2的用于48名健康绝经后妇女研究的递增剂量组。使用单一静脉内剂量的抗-GDF8抗体REGN1033和/或抗激活素A抗体REGN2477。在初步分析中，将各组中安慰剂组和高剂量组合组合并，得到12名个体施用安慰剂和12名个体施用高剂量组合，如表中的加框区域所示。
图2B显示了描述在健康绝经后妇女中静脉内施用单次剂量的抗激活素A抗体REGN2477和/或抗-GDF8抗体REGN1033后第8周大腿肌肉体积(通过MRI测定)％变化的柱状图。抗-GDF8(6mg/kg)、抗-GDF8(6mg/kg)+中剂量抗激活素A(3mg/kg)和抗-GDF8(6mg/kg)+高剂量抗激活素A(10mg/kg)组显示出与安慰剂相比大腿肌肉体积％变化的显著增加。((*标称P＜0.5，相对于安慰剂，****标称P＜0.0001，相对于安慰剂)。
图2C显示了描述在健康绝经后妇女中静脉内施用单次剂量的抗激活素A抗体REGN2477和/或抗-GDF8抗体REGN1033后第8周总脂肪量(通过DXA测定)％变化的柱状图。数字显示了与安慰剂相比的变化。抗-GDF8(6mg/kg)+高剂量抗激活素A(10mg/kg)组显示出总脂肪量％变化的显著降低。(*标称P＜0.05，相对于安慰剂)。
图3显示线形图，其描绘了在健康绝经后妇女中静脉内施用抗激活素A抗体REGN2477和/或抗-GDF8抗体REGN1033后第0、4和8周的LS平均(SE)大腿肌肉体积自基线的变化百分比(通过MRI)。在静脉内施用单次剂量4周后，抗-GDF8(6mg/kg)、抗-GDF8(6mg/kg)+低剂量抗激活素A(1mg/kg)、抗-GDF8(6mg/kg)+中剂量抗激活素A(3mg/kg)和抗-GDF8(6mg/kg)+高剂量抗激活素A(10mg/kg)组中的每一组均表现出与安慰剂相比大腿肌肉体积(通过MRI测定，排除肌内脂肪组织)％变化的显著增加。在静脉内施用单次剂量8周后，在抗-GDF8(6mg/kg)+中剂量抗-激活素A(3mg/kg)和抗-GDF8(6mg/kg)+高剂量抗-激活素A(10mg/kg)组中显示了大腿肌肉体积％变化相对于安慰剂的显著增加。(*标称P＜0.05，**标称P＜0.001)。各组的N值示于图2A中。
图4显示了线形图，其描绘了在对于多个个体的安慰剂、抗-GDF8(6mg/kg)、高剂量抗-激活素A(10mg/kg)、抗-GDF8(6mg/kg)+低剂量抗-激活素A(1mg/kg)、抗-GDF8(6mg/kg)+中剂量抗-激活素A(3mg/kg)和抗-GDF8(6mg/kg)+高剂量抗-激活素A(10mg/kg)组中，在健康绝经后妇女中静脉内施用单次剂量的抗激活素A抗体REGN2477和/或抗-GDF8抗体REGN1033后第0、4和8周的大腿肌肉体积的百分比变化(相对于基线)的个体数据(通过MRI)，所述百分比变化为相对于基线的％变化。在用REGN2477+REGN1033组合治疗后的个体个体中一致地观察到大腿肌肉体积的增加。在每个治疗组中，不同的线表示不同的个体。
图5显示线形图，其描述了六组中在健康绝经后妇女中静脉内施用单次剂量的抗-激活素A抗体REGN2477和/或抗-GDF8抗体REGN1033后第0、4和8周的四肢瘦(身体)体重(即手臂和腿中瘦组织的总和)自基线百分比变化LS(最小二乘法)平均值(SE)。各组的N值示于图2A中。4周和8周后，包括抗-GDF8(6mg/kg)+低剂量抗-激活素A(1mg/kg),抗-GDF8(6mg/kg)+中剂量抗-激活素A(3mg/kg)和抗-GDF8(6mg/kg)+高剂量抗-激活素A(10mg/kg)组的三个组合剂量组中的每一组与安慰剂相比，显示四肢瘦体重的显著增加％变化LS平均值差异(*标称p<0.05，**标称p<0.001)。各组的N值示于图2A中。
图6显示了线形图，其描绘了安慰剂、抗-GDF8(6mg/kg)、高剂量抗-激活素A(10mg/kg)、抗-GDF8(6mg/kg)+低剂量抗-激活素A(1mg/kg)、抗-GDF8(6mg/kg)+中剂量抗-激活素A(3mg/kg)和抗-GDF8(6mg/kg)+高剂量抗-激活素A(10mg/kg)组中，健康绝经后妇女在静脉内施用单次剂量的抗激活素A抗体REGN2477和/或抗-GDF8抗体REGN1033后第0、4和8周平均(SE＝标准误差)总脂肪量百分比(如通过DXA测定)变化。各组的N值示于图2A中。高剂量组(抗-GDF8(6mg/kg)+高剂量抗激活素A(10mg/kg))在第4周和第8周与安慰剂相比以百分比变化LS平均值差异显示总脂肪量的显著降低(*标称P＜0.05)。激活素A和GDF8的阻断导致总脂肪量的降低，如DXA所评估。
图7显示了线形图，其描绘了六组中在健康绝经后妇女中静脉内施用单次剂量的抗激活素A抗体REGN2477和/或抗-GDF8抗体REGN1033后，男性型脂肪量在第0、4和8周的平均(SE)百分比变化，所述六个组包括安慰剂、抗-GDF8(6mg/kg)、高剂量(10mg/kg)抗-激活素A、抗-GDF8(6mg/kg)+低剂量(1mg/kg)抗-激活素A、抗-GDF8(6mg/kg)+中剂量(3mg/kg)抗-激活素A和抗-GDF8(6mg/kg)+高剂量(10mg/kg)抗-激活素A组。与安慰剂相比，在第4周和第8周，高剂量REGN1033+REGN2477组显示男性型脂肪量(通过DXA)的显著降低的百分比变化LS平均值差异(*标称P＜0.05)。各组的N值示于图2A中。如DXA所评估，激活素A和GDF8的阻断也与男性型脂肪量的降低相关。
图8显示了线形图，其描绘了六组中在健康绝经后妇女中静脉内施用单次剂量的抗激活素A抗体REGN2477和/或抗-GDF8抗体REGN1033后第0、4和8周，大腿肌肉体积(不包括肌内脂肪组织和大血管)中带有SE的LS平均百分比变化，所述六组包括安慰剂、抗-GDF8(6mg/kg)、高剂量(10mg/kg)抗-激活素A、抗-GDF8(6mg/kg)+低剂量(1mg/kg)抗-激活素A、抗-GDF8(6mg/kg)+中剂量(3mg/kg)抗-激活素A和抗-GDF8(6mg/kg)+高剂量(10mg/kg)抗-激活素A组。各组的N值示于图2A中。与安慰剂相比，在4周和8周，REGN2477+REGN1033中组和高组显示出大腿肌肉体积的平均％变化显著增加。(*标称P＜0.05，**标称P＜0.001)。
图9显示了线形图，其描绘了在六组健康绝经后妇女中静脉内施用单次剂量的抗激活素A抗体REGN2477和/或抗-GDF8抗体REGN1033后第0、4和8周，总瘦体重中带有SE的LS平均百分比变化，所述六个组包括安慰剂、抗-GDF8(6mg/kg)、高剂量(10mg/kg)抗-激活素A、抗-GDF8(6mg/kg)+低剂量(1mg/kg)抗-激活素A、抗-GDF8(6mg/kg)+中剂量(3mg/kg)抗-激活素A和抗-GDF8(6mg/kg)+高剂量(10mg/kg)抗-激活素A组。各组的N值示于图2A中。
与安慰剂相比，在4周和8周，REGN2477+REGN1033中剂量组和高剂量组与安慰剂相比表现出总瘦体重％变化的显著增加。(*标称P＜0.05)。
图10显示了线形图，其描绘了在六组中健康绝经后妇女中静脉内施用单次剂量的抗激活素A抗体REGN2477和/或抗-GDF8抗体REGN1033后第0、4和8周，四肢瘦体重(通过aLBM方程计算)(kg)带有SE的LS平均百分比变化，所述六组包括安慰剂、抗-GDF8、高剂量(10mg/kg)抗-激活素A、抗-GDF8+低剂量(1mg/kg)抗-激活素A、抗-GDF8+中剂量(3mg/kg)抗-激活素A和抗-GDF8+高剂量(10mg/kg)抗-激活素A组。各组的N值示于图2A中。与安慰剂相比，在4周和8周，在各低、中和高剂量组中，REGN2477+REGN1033治疗导致通过aLBM方程计算的四肢瘦体重(kg)的％变化显著增加(*p<0.05,**p<0.001)。
图11显示了线形图，其描绘了在六组健康绝经后妇女中静脉内施用单次剂量的抗激活素A抗体REGN2477和/或抗-GDF8抗体REGN1033后第0、4和8周，总脂肪量(kg)的带有SE的LS平均百分比变化，所述六组包括安慰剂、抗-GDF8(6mg/kg)、高剂量(10mg/kg)抗-激活素A、抗-GDF8+低剂量(1mg/kg)抗-激活素A、抗-GDF8(6mg/kg)+中剂量(3mg/kg)抗-激活素A和抗-GDF8(6mg/kg)+高剂量(10mg/kg)抗-激活素A组。各组的N值示于图2A中。高剂量组合REGN2477+REGN1033治疗组在8周时显示显著降低的总脂肪量％：与安慰剂-0.65％相比，-3.92％(高剂量组)。(*标称P＜0.05)。
图12显示了线形图，其描绘了在六组中的健康绝经后妇女中静脉内施用单次剂量的抗激活素A抗体REGN2477和/或抗-GDF8抗体REGN1033后第0、4和8周，大腿肌肉体积(cm3)(包括肌内脂肪组织和大血管)中带有SE的LS平均百分比变化，所述六组包括安慰剂、抗-GDF8、高剂量(10mg/kg)抗-激活素A、抗-GDF8+低剂量(1mg/kg)抗-激活素A、抗-GDF8+中剂量(3mg/kg)抗-激活素A和抗-GDF8+高剂量(10mg/kg)抗-激活素A组。各组的N值示于图2A中。与安慰剂相比，在中和高治疗组中在4周和8周，高和中剂量REGN2477+REGN1033治疗组显示出大腿肌肉体积(包括肌内脂肪组织和大血管)的％变化的显著增加(*标称p<0.05，**标称p<0.001)。
图13显示了线形图，其描述了在六个组中的健康绝经后妇女中静脉内施用单次剂量的抗激活素A抗体REGN2477和/或抗-GDF8抗体REGN1033后第0、4和8周，四肢瘦体重(手臂和腿的瘦体重的总和)(kg)的带有SE的LS平均百分比变化，所述六组包括安慰剂、抗-GDF8、高剂量(10mg/kg)抗-激活素A、抗-GDF8+低剂量(1mg/kg)抗-激活素A、抗-GDF8+中剂量(3mg/kg)抗-激活素A和抗-GDF8+高剂量(10mg/kg)抗-激活素A组。各组的N值示于图2A中。在4周和8周，四肢瘦体重在每个REGN2477+REGN1033低、中和高治疗组中相对于安慰剂的平均变化百分比显著增加(*标称p<0.05，*标称*p<0.001)。
图14显示了线形图，其描绘了在六个组的健康绝经后妇女中静脉内施用单次剂量的抗激活素A抗体REGN2477和/或抗-GDF8抗体REGN1033后第0、4和8周，男性型脂肪量(kg)中带有SE的LS平均百分比变化，所述六组包括安慰剂、抗-GDF8、高剂量(10mg/kg)抗-激活素A、抗-GDF8+低剂量(1mg/kg)抗-激活素A、抗-GDF8+中剂量(3mg/kg)抗-激活素A和抗-GDF8+高剂量(10mg/kg)抗-激活素A组。各组的N值示于图2A中。与安慰剂相比，高剂量REGN1033+REGN2477组在第4周和第8周显示男性型脂肪量(通过DXA)的％变化显著降低(*标称p<0.05)。
图15显示了线形图，其描绘了在六组的健康绝经后妇女中静脉内施用单次剂量的抗激活素A抗体REGN2477和/或抗-GDF8抗体REGN1033后第0、4和8周，大腿肌内脂肪组织体积(cm3)的带有SE的LS平均百分比变化，所述六组包括安慰剂、抗-GDF8、高剂量(10mg/kg)抗-激活素A、抗-GDF8+低剂量(1mg/kg)抗-激活素A、抗-GDF8+中剂量(3mg/kg)抗-激活素A和抗-GDF8+高剂量(10mg/kg)抗-激活素A组。各组的N值示于图2A中。在8周，高剂量REGN1033+REGN2477组与安慰剂相比表现出增加的大腿肌内脂肪组织体积(作为平均％变化)。(*标称p<0.05)。
图16显示了线形图，其描绘了在六组的健康绝经后妇女中静脉内施用单次剂量的抗-激活素A抗体REGN2477和/或抗-GDF8抗体REGN1033后第0、4和8周，肌肉内和肌肉周围脂肪组织(IMAT)总和的带有SE的LS平均百分比变化，所述六组包括安慰剂、抗-GDF8、高剂量(10mg/kg)抗-激活素A、抗-GDF8+低剂量(1mg/kg)抗-激活素A、抗-GDF8+中剂量(3mg/kg)抗-激活素A和抗-GDF8+高剂量(10mg/kg)抗-激活素A组。各组的N值示于图2A中。在第4周和第8周，组合REGN1033+REGN2477治疗组与安慰剂在肌肉内和肌肉周围脂肪组织(IMAT)总和的带有SE的LS平均百分比变化方面没有显著差异。
图17显示了线形图，其描绘了在六组的健康绝经后妇女中静脉内施用单次剂量的抗-激活素A抗体REGN2477和/或抗-GDF8抗体REGN1033后第0、4和8周，皮下脂肪组织体积(cm3)的带有SE的LS平均百分比变化，所述六组包括安慰剂、抗-GDF8、高剂量(10mg/kg)抗-激活素A、抗-GDF8+低剂量(1mg/kg)抗-激活素A、抗-GDF8+中剂量(3mg/kg)抗-激活素A和抗-GDF8+高剂量(10mg/kg)抗-激活素A组。各组的N值示于图2A中。在8周，与安慰剂相比，REGN1033+REGN2477低和中处理组显示皮下脂肪组织体积％变化的显著减少(*标称p<0.05)。
发明详述
在描述本发明之前，应理解本发明不限于所述的特定组合物、方法和实验条件，因为这些组合物、方法和条件可以变化。还应理解，本文所用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，而不是旨在限制，因为本发明的范围仅由所附权利要求书限制。除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。
除非上下文另外清楚地规定，否则如本说明书和所附的权利要求中使用的单数形式包括复数指示物。因此，例如，提及“方法”包括一种或更多种方法和/或本文描述的类型步骤，和/或其对本领域技术人员而言在阅读本公开内容后将变得显而易见。
如本文使用的，当提及特定列举的数值使用时，术语“约”意指该值可以从所列举的值起的变化不超过1％。例如，如本文使用的，表述“约100”包括99和101，以及其间的所有值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
尽管与本文所述的那些类似或等同的任何方法和材料可用于实施本发明，但现在描述优选的方法和材料。本文提及的所有出版物均全文引入本文作为参考。
抗体和抗体的抗原结合片段
如本文使用的术语“抗体”意图指包含通过二硫键相互连接的四条多肽链(两条重(H)链和两条轻(L)链)的免疫球蛋白分子，以及其多聚体(例如，IgM)。每一条重链包含重链可变区(在本文被缩写为HCVR或VH)和重链恒定区。重链恒定区包含三个结构域，CH1、CH2和CH3。每一条轻链包含轻链可变区(在本文被缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域(CL1)。VH和VL区可以被进一步细分为称为互补决定区(CDR)的高变区，其中散布着较为保守的称为框架区(FR)的区域。每一个VH和VL包含三个CDR和四个FR，按以下顺序从氨基末端至羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本发明的不同实施方案中，抗体(或其抗原结合部分)的FR可以与人类种系序列相同，或者可以是天然或人工修饰的。氨基酸共有序列可以基于两个或更多个CDR的并排分析(side-by-side analysis)而定义。
抗体在本文中可以根据以下命名法提及:Fc前缀(例如"H1M,""H2aM"、"H4H")，后面是数字标识符(例如"10446")，后面是"P"、"P2"或"N"后缀。因此，根据该命名法，抗体在本文中可称为例如例如"H4H10446P2"。本文所用抗体名称上的H1M、H2M和H4H前缀表示抗体的特定Fc区同种型。例如，"H2aM"抗体具有小鼠IgG2a Fc，而"H4H"抗体具有人IgG4 Fc。如本领域普通技术人员所理解的，具有特定Fc同种型的抗体可转化为具有不同Fc同种型的抗体(例如，具有小鼠IgG2a Fc的抗体可转化为具有人IgG4的抗体等)，但在任何情况下，可变区(包括CDR)将保持相同，且预期结合特性相同或基本相似，而与Fc区的性质无关。
如本文使用的术语“抗体”还包括完整抗体分子的抗原结合片段。如本文使用的，术语抗体的“抗原结合部分”、抗体的“抗原结合片段”等，包括特异性结合抗原以形成复合物的任何天然存在的、可酶促获得的、合成的或基因工程化的多肽或糖蛋白。抗体的抗原结合片段可以使用任何合适的标准技术诸如蛋白水解消化或涉及编码抗体可变结构域以及任选地恒定结构域的DNA的操作和表达的重组基因工程化技术，从例如完整抗体分子得到。此类DNA是已知的和/或从例如商购来源、DNA文库(包括，例如，噬菌体-抗体文库)容易可得，或可以合成。DNA可以被测序并且以化学方式或通过使用分子生物学技术被操作，以例如将一个或更多个可变结构域和/或恒定结构域排列为合适的构型，或引入密码子、产生半胱氨酸残基、修饰、添加或缺失氨基酸等。
抗原结合片段的非限制性实例包括:(i)Fab片段；(ii)F(ab')2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；和(vii)由模拟抗体高变区的氨基酸残基(例如分离的互补决定区(CDR)，如CDR3肽)或受限FR3-CDR3-FR4肽组成的最小识别单位。如本文所用，表达"抗原结合片段"内还包括其它工程化改造的分子，例如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失抗体、嵌合抗体、CDR移植抗体、双抗体、三抗体、四抗体、微型抗体、纳米抗体(例如单价纳米抗体、二价纳米抗体等)、小模块免疫药物(SMIPs)和shark可变IgNAR结构域。
抗体的抗原结合片段通常将包含至少一个可变结构域。可变结构域可以为任何尺寸或可以具有任何氨基酸组成，并且通常将包含与一个或更多个框架序列相邻的或与一个或更多个框架序列符合读框的至少一个CDR。在具有与VL结构域缔合的VH结构域的抗原结合片段中，VH结构域和VL结构域可以以任何合适排列相对于彼此定位。例如，可变区可以是二聚化的且包含VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚体。可选地，抗体的抗原结合片段可以包含单体VH结构域或VL结构域。
在一些实施方案中，抗体的抗原结合片段可以包含与至少一个恒定结构域共价连接的至少一个可变结构域。可在用于本发明的抗体的抗原结合片段内发现的可变区和恒定区的非限制性示例性构型包括：(i)VH-CH1；(ii)VH-CH2；(iii)VH-CH3；(iv)VH-CH1-CH2；(v)VH-CH1-CH2-CH3；(vi)VH-CH2-CH3；(vii)VH-CL；(viii)VL-CH1；(ix)VL-CH2；(x)VL-CH3；(xi)VL-CH1-CH2；(xii)VL-CH1-CH2-CH3；(xiii)VL-CH2-CH3；和(xiv)VL-CL。在可变结构域和恒定结构域的任何构型中，包括以上列出的任何示例性构型中，可变结构域和恒定结构域可以彼此直接连接或可以由完整的或部分的铰链区或接头区域连接。铰链区可以由至少2个(例如，5个、10个、15个、20个、40个、60个或更多个)氨基酸组成，其在单个肽分子中相邻的可变结构域和/或恒定结构域之间产生柔性或半柔性的连接(linkage)。此外，本发明的抗体的抗原结合片段可以包含以上列出的任何可变结构域和恒定结构域构型彼此非共价缔合和/或与一个或更多个单体VH结构域或VL结构域(例如，通过二硫键)缔合的同二聚体或异二聚体(或其他多聚体)。
完整抗体分子和抗原结合片段可以是单特异性或多特异性的(例如，双特异性的)。抗体的多特异性抗体或抗原结合片段通常将包含至少两个不同的可变结构域，其中每一个可变结构域能够与单独的抗原或同一抗原上的不同表位特异性结合。使用本领域可用的常规技术，可以使任何多特异性抗体形式适用于本文所述的抗体或抗原结合片段的情况。
本发明的组合物和方法中使用的抗体可以通过补体依赖性细胞毒性(CDC)或抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)起作用。“补体依赖性细胞毒性”(CDC)指在补体存在下通过本发明的抗体裂解表达抗原的细胞。“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”(ADCC)指细胞介导的反应，其中表达Fc受体(FcR)的非特异性细胞毒性细胞(例如，自然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)识别靶细胞上结合的抗体并从而导致靶细胞裂解。CDC和ADCC可以使用本领域熟知且可得的测定法来测定。(参见，例如，美国专利第5,500,362号和第5,821,337号，以及Clynes等，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)95:652-656(1998))。
本文所述的抗体可以包含人抗体和/或重组人抗体或其片段或由人抗体和/或重组人抗体或其片段组成。如本文所用的术语"人抗体"包括具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。人抗体仍然可以包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)，例如在CDR中，特别是在CDR3中。然而，本文所用的术语"人抗体"不是要包括其中来源于另外的哺乳动物物种(例如小鼠)种系的CDR序列已被移植到人框架序列上的抗体。
本文所述的抗体分子可以包含重组旨在人抗体或其抗原结合片段或由其组成。本文所用的术语"重组人抗体"预期包括通过重组方法制备、表达、产生或分离的所有人抗体，例如使用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体、从重组、组合人抗体文库中分离的抗体、从人免疫球蛋白基因转基因的动物(例如小鼠)中分离的抗体(参见例如Taylor等人(1992)Nucl.Acids Res.20:6287-6295)或通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接至其它DNA序列的任何其它方法制备、表达、产生或分离的抗体。这样的重组人抗体具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。然而，在一些实施方案中，对这样的重组人抗体进行体外诱变(或者，当使用人Ig序列转基因动物时，进行体内体细胞诱变)，因此重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列是这样的序列，其虽然来源于人种系VH和VL序列并与之相关，但可以不天然存在于体内人抗体种系所有组成部分中。重组抗体可用于本发明组合物和方法的另外的实施方案中。
如本文所用的"分离的抗体"是指已经从其天然环境的至少一种组分鉴定和分离和/或回收的抗体。例如，从生物体、组织或细胞(抗体天然存在于其中或在其中天然产生)的至少一种组分分离或去除的抗体是用于本发明目的"分离的抗体"。分离的抗体还包括重组细胞内原位的抗体，以及已经进行了至少一个纯化或分离步骤的抗体。根据一些实施方案，分离的抗体可以基本上不含其它细胞材料和/或化学品。分离的抗体可用于本发明的组合物和方法的另外的实施方案中。
当至少约60至75％的样品显示单一种类的多肽时，蛋白质或多肽是"基本上纯的"、"基本上均质的"或"基本上纯化的"。多肽或蛋白质可以是单体或多聚体。基本上纯的多肽或蛋白质通常包含约50％、60、70％、80％或90％w/w的蛋白质样品，通常约95％，优选超过99％纯。蛋白质纯度或同质性可通过本领域熟知的多种方法来指示，例如蛋白质样品的聚丙烯酰胺凝胶电泳，随后在用本领域熟知的染色剂染色凝胶后观察单个多肽条带。对于某些目的，通过使用HPLC或本领域公知的其它纯化方法可以提供更高的分辨率。
本文所用的术语"多肽类似物或变体"是指由至少25个氨基酸的区段组成的多肽，所述区段与氨基酸序列的一部分具有基本同一性，并且具有至少一种以下性质：(1)在合适的结合条件下与GDF8特异性结合，或(2)阻断GDF8生物活性的能力。通常，多肽类似物或变体包含相对于天然存在序列的保守氨基酸取代(或插入或缺失)。类似物通常为至少20个氨基酸长，至少50、60、70、80、90、100、150或200个氨基酸长或更长，并且通常可以与全长的天然存在的多肽一样长。
优选的氨基酸取代是那些：降低对蛋白水解的敏感性，(2)降低对氧化的敏感性，(3)改变形成蛋白复合物的结合亲和力，(4)改变结合亲和力，和(4)赋予或改变这些类似物的其它物理化学或功能特性。类似物可以包括不同于天然存在的肽序列的各种突变。例如，可以在天然存在的序列中进行单个或多个氨基酸取代(优选保守氨基酸取代)(优选在形成分子间接触的结构域之外的多肽的部分中)。保守氨基酸取代不应实质上改变亲本序列的结构特征(例如，置换氨基酸不应倾向于破坏亲本序列中存在的螺旋或破坏表征亲本序列的其它类型的二级结构)。本领域公认的多肽二级和三级结构的实例描述于蛋白质、结构和分子原理中(Creighton 1984W.H.Freeman和Company,New York；Introduction toProtein Structure(Branden&Tooze编撰,1991,Garland Publishing,NY)；和Thornton等人，1991Nature 354:105中，其各自通过引用并入本文。
非肽类似物通常在制药工业中用作具有与模板肽的性质类似的性质的药物。这些类型的非肽化合物被称为"肽模拟物"或"模拟肽"(参见，例如，Fauchere(1986)J.Adv.DrugRes.15:29；和Evans等人(1987)J.Med.Chem.30:1229，将其通过引用并入本文)。用相同类型的D-氨基酸(例如，D-赖氨酸代替L-赖氨酸)系统取代共有序列的一个或多个氨基酸，也可以用于产生更稳定的肽，此外，可以通过本领域已知的方法(Rizo等人(1992)Ann.Rev.Biochem.61:387，将其通过引用并入本文)，通过加入能够形成环化肽的分子内二硫键的内部半胱氨酸残基，可产生包含共有序列或基本上相同的共有序列变异的约束肽。
当应用于多肽时，术语“实质同一性(substantial identity)”或“实质相同(substantially identical)”意指当诸如使用缺省空位权重(default gap weights)通过程序GAP或BESTFIT最佳比对时，两个肽序列共有至少约80％序列同一性，至少约90％序列同一性、至少约95％序列同一性、至少约98％序列同一性或至少约99％序列同一性。优选地，不相同的残基位置差别在于保守氨基酸取代。“保守氨基酸取代”为其中氨基酸残基被具有相似化学特性(例如，电荷或疏水性)的侧链(R基团)的另一个氨基酸残基取代的氨基酸取代。通常，保守氨基酸取代基本上不会改变蛋白的功能特性。在其中两个或更多个氨基酸序列彼此差别在于保守取代的情况下，序列同一性百分比或相似性程度可以被上调以校正取代的保守性质。用于做出该调整的手段是本领域技术人员熟知的。参见，例如，Pearson(1994)Methods Mol.Biol.24：307-331，本文通过引用并入。具有相似化学特性的侧链的氨基酸组的实例包括：1)脂肪族侧链：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；2)脂肪族-羟基侧链：丝氨酸和苏氨酸；3)包含酰胺的侧链：天冬酰胺和谷氨酰胺；4)芳香族侧链：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；5)碱性侧链：赖氨酸、精氨酸和组氨酸；和6)包含硫的侧链为半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守氨基酸取代的组为：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸和天冬酰胺-谷氨酰胺。可选地，保守替代为在Gonnet等(1992)Science 256：1443-45(本文通过引用并入)中公开的PAM250对数似然矩阵(log-likelihood matrix)中具有正值的任何改变。“中度保守”替代为在PAM250对数似然矩阵中具有非负值的任何改变。
多肽的序列相似性(也被称为序列同一性)通常使用序列分析软件来测定。蛋白分析软件使用分配至多个取代、缺失和包括保守氨基酸取代的其他修饰的相似度量来使相似序列匹配。例如，GCG包含程序诸如“Gap”和“Bestfit”，该程序可以使用缺省参数来确定密切相关的多肽之间(诸如来自不同物种的生物体的同源性多肽之间，或者野生型蛋白与其突变蛋白之间)的序列同源性或序列同一性。参见，例如，GCG 6.1版。多肽序列也可以使用GCG 6.1版中的程序FASTA使用缺省参数或推荐的参数进行比较。FASTA(例如，FASTA2和FASTA3)提供查询序列与搜索序列之间的比对和最佳重叠区域的序列同一性百分比(Pearson(2000)，同上)。当将本发明的序列与包含来自不同生物体的大量序列的数据库进行比较时，另一个优选的算法为计算机程序BLAST，特别地blastp或tblastn(使用缺省参数)。参见，例如，Altschul等(1990)J.Mol.Biol.215：403-410和Altschul等(1997)NucleicAcids Res.25：3389402，其每一个通过引用并入本文。
比较同源性的多肽序列的长度通常将为至少约16个氨基酸残基、至少约20个残基、至少约24个残基、至少约28个残基或至少约35个残基。当搜索包含来自大量不同生物体的序列的数据库时，比较氨基酸序列是优选的。
在一些实施方案中，本发明涉及改变个体身体组成的方法，所述方法包括向个体施用包含有效量GDF8抑制剂的第一组合物和包含有效量的激活素A抑制剂的第二组合物。
在一些实施方案中，本发明涉及诱导个体脂肪量减少的方法，所述方法包括向个体施用包含有效量GDF8抑制剂的第一组合物和包含有效量的激活素A抑制剂的第二组合物。
在一些实施方案中，本发明涉及诱导个体肌肉量增加的方法，所述方法包括向有需要的个体施用包含有效量GDF8抑制剂的第一组合物和包含有效量的激活素A抑制剂的第二组合物。
在一些实施方案中，本发明涉及改变个体身体组成的方法，所述方法包括向个体施用包含有效量的GDF8抑制剂和有效量的激活素A抑制剂的组合物。
在一些实施方案中，本发明涉及诱导个体脂肪量减少的方法，所述方法包括向个体施用包含有效量的GDF8抑制剂和有效量的激活素A抑制剂的组合物。
在一些实施方案中，本发明涉及诱导个体肌肉量增加的方法，所述方法包括向有需要的个体施用包含有效量的GDF8抑制剂和有效量的激活素A抑制剂的组合物。
在一些实施方案中，所述个体是人个体。人类个体可以是成年人类个体。个体可以是男性或女性个体。个体可以是健康个体。个体可能患有不期望的脂肪量。个体可能患有特征在于脂肪量增加和/或肌肉体积减小或瘦体重减少的疾病和病症，或处于患有所述疾病和病症的风险中。所述个体可以是绝经后女性个体。个体可以是40岁或更大、50岁或更大、60岁或更大、或70岁或更大的男性个体或女性个体。
在一些实施方案中，本发明涉及方法，所述方法包括向有需要的个体施用包含GDF8抑制剂的组合物和包含激活素A抑制剂的组合物用于治疗或预防以脂肪量增加和/或肌肉体积减小或瘦体重减小为特征的疾病和病症。
在根据本发明的一些实施方案中，个体患有至少一种可能与脂肪量增加有关的疾病或障碍。在一些实施方案中，所述疾病或障碍可以选自肥胖症、代谢综合征、营养病症、高胆固醇、血脂异常、心血管疾病、蜂窝织炎、癌症(包括结肠癌、食道癌、肾癌、胰腺癌、胆囊癌、乳腺癌或子宫内膜癌)、多囊卵巢综合征、痛风、胆囊疾病、睡眠呼吸暂停、呼吸障碍、哮喘、骨关节炎、白内障、充血性心力衰竭、心脏扩大、高血压/血压升高、肺栓塞、淋巴水肿、胃食管反流病、疝气、慢性肾衰竭、尿失禁、结缔组织疾病和脂肪肝病。在另一个实施方案中，所述疾病或障碍可以是少肌症。
GDF8抑制剂
本发明包括改变个体身体组成、诱导个体脂肪量减少和增加个体瘦重的方法，和治疗个体特征在于脂肪量增加的疾病或障碍的方法，所述方法包括向个体施用包含有效量GDF8抑制剂的组合物。
术语"GDF8"(也称为"生长和分化因子-8"和"肌生成抑制蛋白")是指具有SEQ IDNO:340的氨基酸序列的蛋白质(成熟蛋白质)。根据本发明，GDF8特异性结合蛋白特异性结合GDF8，但不结合其它ActRIIB配体，例如GDF3、BMP2、BMP4、BMP7、BMP9、BMP10、GDF11、激活素A、激活素B、激活素AB、Nodal等。
如本文所用，"GDF8抑制剂"是与人GDF8结合或相互作用并在体外或体内干扰或抑制GDF8的正常生物学功能的任何物质。GDF8抑制剂类别的非限制性实例包括小分子GDF8拮抗剂、基于核酸的GDF8表达或活性的抑制剂(例如siRNA或反义)、与GDF8特异性相互作用的基于肽的分子(例如肽抗体)、与GDF8特异性相互作用的受体分子、GDF8-结合支架分子、包含特异性结合GDF8的受体的配体结合部分的蛋白、和抗GDF8适体或其部分。在一个优选实施方案中，可用于本发明上下文的GDF8抑制剂是特异性结合人GDF8的抗GDF8抗体或其抗原结合片段。抗GDF8抗体包括中和/或阻断抗体。由抗GDF8中和/或阻断抗体引起的抑制不必是完全的，只要它可用适当的试验检测。
如本文所用，表述"抗GDF8抗体"还包括多特异性抗原结合分子(例如双特异性抗体)，其中该多特异性抗原结合分子的至少一个结合结构域(例如"结合臂")特异性结合GDF8。
可用于本发明的组合物和方法的示例性抗-GDF8抗体包括，例如，全-人抗-GDF8抗体H4H1657N2，也称为REGN1033，(例如，抗-GDF8抗体，其包含分别具有氨基酸序列SEQ IDNO:360和SEQ ID NO:368的重链和轻链可变区，如美国专利号8,840,894中所述)。可用于本发明组合物和方法的其它GDF8拮抗剂包括US2006/0263354和US7,807,159中所述的抗-GDF8抗体(例如命名为2_112_1的抗体，例如具有ATCC保藏命名PTA-6574，或例如命名为2_112_K的抗体，例如具有HCVR/LCVR氨基酸序列SEQ ID NO:620和621)；如美国专利8,999,343和美国公开2013/0209489中所述的抗-GDF8抗体(例如，12A5-5，例如具有HCVR/LCVR氨基酸序列SEQ ID NO:622和623)；如美国公开号2013/0142788中所述的抗-GDF8抗体(例如，10B3H8L5，例如，具有HCVR/LCVR氨基酸序列SEQ ID NO:624和625，和10B3H8L5-Fc-失活的)；如美国专利8,940,874和7,261,893所述的抗-GDF8抗体(例如司他莫单抗/MYO-29，例如具有HCVR/LCVR氨基酸序列SEQ ID NO:626和627)；如美国专利8,415,459所述的抗-GDF8抗体(例如RK22/PF-0625616，例如具有HCVR/LCVR氨基酸序列SEQ ID NO:628和629)；美国专利7,731,961中所述的抗-GDF8抗体(例如JA-16，例如具有HCVR氨基酸序列SEQ ID NO:630的CDR)；美国专利No.8,496,934或7,888,486中所述的抗-GDF8抗体(例如RK35，例如具有HCVR/LCVR氨基酸序列SEQ ID NO:631和632)，美国专利No.8,992,913中所述的抗-GDF8抗体(例如OGD1.0.0，例如具有HCVR/LCVR氨基酸序列SEQ ID NO:633和634)；欧洲专利1773 041B1中所述的抗-GDF8 Fab分子和例如美国专利7,635,760和8,063,188中所述的抗-GDF8抗体(例如，C12，例如，具有SEQ ID NO:635和636的HCVR/LCVR氨基酸序列，C12-N93H和/或510C2，具有SEQ ID NO:637和638的HCVR/LCVR氨基酸序列)，美国专利7,632,499中所述的抗-GDF8抗体(例如，41C1E4/兰度戈组单抗/LY2495655，例如，具有SEQ ID NO:639和640的HCVR/LCVR氨基酸序列)。在一些实施方案中，抗-GDF8抗体可分别具有兰度戈组单抗的全长重链和全长轻链氨基酸序列，例如SEQ ID No 641和642。在一些实施方案中，抗-GDF8抗体可包含兰度戈组单抗的三个重链CDR(HCDR)和三个轻链CDR(LCDR)，例如分别根据SEQ ID No:643/644/645/646/647/648通过Chothia定义。
在一个实施方案中，抗-GDF8抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(HCVR)，其具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:2,18,34,50,66,82,98,114,130,146,162,178,194,210,226,242,258,274,290,306,360和376或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列。
在另一个实施方案中，抗-GDF8抗体或其抗原结合片段包含选自SEQ ID NO:10,26,42,58,74,90,106,122,138,154,170,186,202,218,234,250,266,282,298,314,322,368和384的轻链可变区(LCVR)氨基酸序列或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列。
在另一个实施方案中，抗-GDF8抗体或其抗原结合片段包含HCVR氨基酸序列和LCVR氨基酸序列，其中HCVR/LCVR序列对选自SEQ ID NO:2/10,18/26,34/42,50/58,66/74,82/90,98/106,114/122,130/138,146/154,162/170,178/186,194/202,210/218,226/234,242/250,258/266,274/282,290/298,306/314,114/322,360/368和376/384。
在另一个实施方案中，抗-GDF8抗体或其抗原结合片段包含HCVR氨基酸序列和LCVR氨基酸序列，其中HCVR/LCVR序列对选自(HCVR/LCVR):21-E5(SEQ ID NO:34/42)；21-B9(SEQ ID NO:18/26)；21-E9(SEQ ID NO:98/106)；21-A2(SEQ ID NO:2/10)；22-D3(SEQID NO:50/58)；22-E6(SEQ ID NO:66/74)；22-G10(SEQ ID NO:82/90)；1A2(SEQ ID NO:226/234)；20B12(SEQ ID NO:274/282)；58C8(SEQ ID NO:242/250)；19F2(SEQ ID NO:258/266)；8D12-1(SEQ ID NO:114/122)；4E3-7(SEQ ID NO:194/202)；9B11-12(SEQ ID NO:162/170)；4B9(SEQ ID NO:226/234)；1H4-5(SEQ ID NO:210/218)；9B4-3(SEQ ID NO:178/186)；3E2-1(SEQ ID NO:290/298)；4G3-25(SEQ ID NO:306/314)；4B6-6(SEQ ID NO:130/138)；H4H1657N2(SEQ ID NO:360/368)；H4H1669P(SEQ ID NO:376/384)。
在另一个实施方案中，抗-GDF8抗体或其抗原结合片段包含重链互补决定区3(HCDR3)结构域和轻链CDR3(LCDR3)结构域，其中所述HCDR3结构域具有选自SEQ ID NO:8,24,40,56,72,88,104,120,136,152,168,184,200,216,232,248,264,280,296,312,366和382的氨基酸序列或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列，且所述LCDR3结构域具有选自SEQ ID NO:16,32,48,64,80,96,112,128,144,160,176,192,208,224,240,256,272,288,304,320,328,374和390的氨基酸序列或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列。在另一个实施方案中，抗-GDF8抗体或其抗原结合片段包含HCDR3/LCDR3氨基酸序列对，其选自SEQ IDNO:8/16,24/32,40/48,56/64,72/80,88/96,104/112,120/128,136/144,152/160,168/176,184/192,200/208,216/224,232/240,248/256,264/272,280/288,296/304,312/320,120/328,366/374和382/390。
在另一个实施方案中，抗-GDF8抗体或其抗原结合片段包含重链CDR1(HCDR1)和CDR2(HCDR2)结构域和轻链CDR1(LCDR1)和CDR2(LCDR2)结构域，其中所述HCDR1结构域具有选自SEQ ID NO:4,20,36,52,68,84,100,116,132,148,164,180,196,212,228,244,260,276,292,308,362和378的氨基酸序列或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列；HCDR2结构域具有选自SEQ ID NO:6,22,38,54,70,86,102,118,134,150,166,182,198,214,230,246,262,278,294,310,364和380的氨基酸序列或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列；LCDR1结构域具有选自SEQ ID NO:12,28,44,60,76,92,108,124,140,156,172,188,204,220,236,252,268,284,300,316,324,370和386的氨基酸序列或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列，且LCDR2结构域具有选自SEQID NO:14,30,46,62,78,94,110,126,142,158,174,190,206,222,238,254,270,286,302,318,326,372和388的氨基酸序列或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列。在另一个实施方案中，HCDR1,HCDR2和HCDR3结构域具有相应氨基酸序列组合，其选自SEQ ID NO:36/38/40,116/118/120,228/230/232,362/364/366和378/380/382；且LCDR1,LCDR2和LCDR3结构域具有相应氨基酸序列组合，其选自SEQ ID NO:44/46/48,124/126/128,236/238/240,370/372/374和386/388/390。
在又另一个实施方案中，抗-GDF8抗体或其抗原结合片段(HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3)的重链和轻链CDR结构域具有选自SEQ ID NO:36/38/40/44/46/48(例如21-E5),116/118/120/124/126/128(例如8D12),228/230/232/236/238/240(例如1A2),362/364/366/370/372/374(例如H4H1657N2)和378/380/382/386/388/390(例如H4H1669P)的氨基酸序列组合。
在另一个实施方案中，抗-GDF8抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链可变区(HCVR/LCVR)氨基酸序列对内所含的重链和轻链CDR结构域，所述序列对选自SEQ ID NO:2/10,18/26,34/42,50/58,66/74,82/90,98/106,114/122,130/138,146/154,162/170,178/186,194/202,210/218,226/234,242/250,258/266,274/282,290/298,306/314,114/322,360/368和376/384。
用于鉴定HCVR和LCVR氨基酸序列中的CDR的方法和技术是本领域熟知的，并且可以被用于鉴定本文公开的指定HCVR和/或LCVR氨基酸序列中的CDR。可以用于鉴定CDR边界的示例性约定包括例如，Kabat定义法、Chothia定义法和AbM定义法。一般来讲，Kabat定义法基于序列的变化性、Chothia定义法基于结构环区的位置、并且AbM定义法为Kabat与Chothia方法之间的折衷。参见，例如，″Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，″National Institutes of Health，Bethesda，Md.(1991)；Al-Lazikani等，J.Mol.Biol.273：927-948(1997)；以及Martin等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：9268-9272(1989)。公共数据库也可用于鉴定抗体中的CDR序列。
在一个实施方案中，抗-GDF8抗体或其抗原结合片段包含HCVR，其具有由选自SEQID NO:1,17,33,49,65,81,97,113,129,145,161,177,193,209,225,241,257,273,289,305,359和375的核酸序列编码的氨基酸序列或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列。
在另一个实施方案中，抗-GDF8抗体或其抗原结合片段包含LCVR，其具有由选自SEQ ID NO:9,25,41,57,73,89,105,121,137,153,169,185,201,217,233,249,265,281,297,313,321,367和383的核酸序列编码的氨基酸序列或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列。
在另一个实施方案中，抗-GDF8抗体或其抗原结合片段包含HCVR/LCVR对，其具有由选自SEQ ID NO:1/9,17/25,33/41,49/57,65/73,81/89,97/105,113/121,129/137,145/153,161/169,177/185,193/201,209/217,225/233,241/249,257/265,273/281,289/297,305/313,113/321,359/367和375/383的核酸分子对编码的氨基酸序列。
在另一个实施方案中，抗-GDF8抗体或其抗原结合片段包含HCDR3结构域，其具有由选自SEQ ID NO:7,23,39,55,71,87,103,119,135,151,167,183,199,215,231,247,263,279,295,311,365和381的核酸序列编码的氨基酸序列或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列，和LCDR3结构域，其具有由选自SEQ IDNO:15,31,47,63,79,95,111,127,143,159,175,191,207,223,239,255,271,287,303,319,327,373和389的核酸序列编码的氨基酸序列或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列。在一个实施方案中，HCDR3/LCDR3结构域对具有由选自SEQ ID NO:7/15,23/31,39/47,55/63,71/79,87/95,103/111,119/127,135/143,151/159,167/175,183/191,199/207,215/223,231/239,247/255,263/271,279/287,295/303,311/319,119/327,365/373和381/389的核酸序列对编码的氨基酸序列。
在另一个实施方案中，抗-GDF8抗体或其抗原结合片段包含HCDR1和HCDR2结构域,和LCDR1和LCDR2结构域，其中所述HCDR1结构域具有由选自SEQ ID NO:3,19,35,51,67,83,99,115,131,147,163,179,195,211,227,243,259,275,291,307,361和377的核酸序列编码的氨基酸序列或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列，HCDR2结构域具有由选自SEQ ID NO:5,21,37,53,69,85,101,117,133,149,165,181,197,213,229,245,261,277,293,309,363和379的核酸序列编码的氨基酸序列或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列，LCDR1结构域具有由选自SEQ ID NO:11,27,43,59,75,91,107,123,139,155,171,187,203,219,235,251,267,283,299,315,323,369和385的核酸序列编码的氨基酸序列或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列，且LCDR2结构域具有由选自SEQ ID NO:13,29,45,61,77,93,109,125,141,157,173,189,205,221,237,253,269,285,301,317,325,371和387的核酸序列编码的氨基酸序列。
在另一个实施方案中，抗-GDF8抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链CDR结构域(HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3)，其具有由SEQ ID NO:35/37/39/43/45/47,115/117/119/123/125/127,227/229/231/235/237/239,361/363/365/369/371/373或377/379/381/385/387/389的核酸序列组编码的氨基酸序列组合。
在一个优选实施方案中，特异性结合GDF8的抗-GDF8抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO:360的重链可变区(HCVR)的HCDR和含有SEQ ID NO:368的轻链可变区(LCVR)的LCDR。在另一个实施方案中，特异性结合GDF8的抗-GDF8抗体或抗原结合片段包含三个HCDR和三个LCDR，所述HCDR包含SEQ ID NO:362、SEQ ID NO:364和SEQ ID NO:366，所述LCDR包含SEQ ID NO:370、SEQ ID NO:372和SEQ ID NO:374。
在另一个实施方案中，抗-GDF8抗体或其抗原结合片段为完全人类或人源化抗体或抗体片段，其以约1nM或更少的亲和力(被表示为解离常数“KD”)结合GDF8，如通过表面等离子体共振测定(例如，BIACORETM)测定的。在一些实施方案中，本发明的抗体表现出以下的KD：约700pM或更少；约500pM或更少；约320pM或更少；约160pM或更少；约100pM或更少；约50pM或更少；约10pM或更少；或约5pM或更少。
在另一个实施方案中，抗-GDF8抗体或其抗原结合片段为完全人类或人源化单克隆抗体(mAb)，其特异性结合并抑制人类GDF8，且表现出以下的IC50：少于或等于约10nM；约5nM或更少；约3nM或更少；约2nM或更少；约1nM或更少；约500pM或更少；或约200pM或更少，如通过GDF8诱导型萤光素酶测定法测定的。
在一个实施方案中，抗-GDF8抗体或其抗原结合片段具有修饰的糖基化模式。在一些应用中，去除不需要的糖基化位点的修饰可能是有用的，或者缺少寡糖链上存在的岩藻糖部分的抗体，例如，用于增加抗体依赖性细胞毒性(ADCC)功能(Shield等人(2002)JBC277:26733)。在其它应用中，可以进行半乳糖基化的修饰以修饰补体依赖性细胞毒性(CDC)。
在另一个实施方案中，抗-GDF8抗体或其抗原结合片段与另外的包含HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3结构域组合的抗体竞争与GDF8的特异性结合，所述结构域组合具有选自SEQ ID NO:36/38/40/44/46/48、116/118/120/124/126/128、228/230/232/236/238/240、362/364/366/370/372/374或378/380/382/386/388/390的氨基酸序列。在另一个实施方案中，抗-GDF8抗体或其抗原结合片段与包含SEQ ID NO:2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、258/266、274/282、290/298、306/314、114/322、360/368或376/384的HCVR/LCVR氨基酸序列对的另外的抗体竞争与GDF8的特异性结合。
在另一个实施方案中，抗-GDF8抗体或其抗原结合片段识别GDF8上被另外的抗体识别的表位，所述另外的抗体包含具有选自SEQ ID NO:36/38/40/44/46/48、116/118/120/124/126/128、228/230/232/236/238/240、362/364/366/370/372/374或378/380/382/386/388/390的氨基酸序列的HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3结构域组合。在另一个实施方案中，抗-GDF8抗体或其抗原结合片段识别GDF8上被另外的抗体识别的表位，所述另外的抗体包含SEQ ID NO:2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、258/266、274/282、290/298、306/314、114/322、360/368或376/384的HCVR/LCVR氨基酸序列对。
激活素A抑制剂
本发明包括在个体中改变身体组成、诱导脂肪量减少和/或增加瘦体重的方法，和在个体中治疗特征在于脂肪量增加的疾病或障碍的方法，所述方法包括向个体施用包含有效量的激活素A抑制剂的组合物。
本文所用的"激活素A抑制剂"是与人激活素A结合或相互作用并在体外或体内干扰或抑制激活素A正常生物功能的任何活性剂。激活素A抑制剂类别的非限制性实例包括小分子激活素A拮抗剂、基于核酸的激活素A表达或活性的抑制剂(例如siRNA或反义)、与激活素A特异性相互作用的基于肽的分子(例如肽抗体)、与激活素A特异性相互作用的受体分子、激活素A结合支架分子、包含特异性结合激活素A的受体的配体结合部分的蛋白质、以及抗-激活素A适体或其部分。在一个优选的实施方案中，可用于本发明的上下文中的激活素A抑制剂是特异性结合人激活素A的抗-激活素A抗体或其抗原结合片段。由抗-激活素A中和/或阻断抗体引起的抑制不必是完全的，只要它是使用适当的测定可检测的。
激活素是包含βA和/或βB亚基的同源和异源二聚体分子。βA亚基具有SEQ ID NO:617的氨基酸序列，βB亚基具有SEQ ID NO:619的氨基酸序列。激活素A是两个βA亚基的同源二聚体；激活素B是两个βB亚基的同源二聚体；激活素AB是一个βA亚基和一个βB亚基的异源二聚体。抗激活素A抗体或其抗原结合片段特异性结合βA亚基。由于βA亚基在激活素A和激活素AB分子中都存在，因此"抗-激活素A抗体或其抗原结合片段"可以特异性结合激活素A以及激活素AB(通过其与βA亚基的相互作用)。因此，抗-激活素A抗体或其抗原结合片段特异性结合激活素A，或结合激活素A和激活素AB，但不结合其他ActRIIB配体，例如激活素B、GDF3、GDF8、BMP2、BMP4、BMP7、BMP9、BMP10、GDF11、Nodal等。
在一些实施方案中，如美国专利号9,718,881中所述使用抗-激活素A抗体或其抗原结合片段。可用于本发明的组合物和方法中的示例性抗-激活素A抗体包括，例如，完全人抗-激活素抗体H4H10446P2，也称为REGN2477(例如，抗-激活素A抗体，其包含分别具有SEQID NO:162和SEQ ID NO:146的重链可变区和轻链可变区，如美国专利号9,718,881中所述)。
表2列出了所选抗-激活素A抗体的重链和轻链可变区氨基酸序列对以及它们相应的可用于本发明组合物和方法中的抗体标识符。相应的核酸序列标识符列于表3。
表2:抗-激活素A氨基酸序列标识符
Figure BDA0002658714950000211
Figure BDA0002658714950000221
表3:抗-激活素A核酸序列标识符
Figure BDA0002658714950000222
在一个实施方案中，抗-激活素A抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(HCVR)，其具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:393,409,425,441,457,473,489,497,505,513,521,529,545,553,561,569,577,585和593或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列。
在另一个实施方案中，抗-激活素A抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区(LCVR)，其具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:401,417,433,449,465,481,537和601或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列。
在另一个实施方案中，抗-激活素A抗体或其抗原结合片段包含HCVR和LCVR(HCVR/LCVR)氨基酸序列对，其选自SEQ ID NO:393/401,409/417,425/433,441/449,457/465,473/481,489/481,497/481,505/481,513/481,521/481,529/537,545/537,553/537,561/537,569/537,577/537,585/537和593/601。
在另一个实施方案中，抗-激活素A抗体或其抗原结合片段包含重链CDR3(HCDR3)结构域，其具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:399,415,431,447,463,479,495,503,511,519,527,535,551,559,567,575,583,591和599或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列；和轻链CDR3(LCDR3)结构域，其具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:407,423,439,455,471,487,543和607或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列。
在另一个实施方案中，抗-激活素A抗体或其抗原结合片段包含HCDR3/LCDR3氨基酸序列对，其选自SEQ ID NO:399/407,415/423,431/439,447/455,463/471,479/487,495/487,503/487,511/487,519/487,527/487,535/543,551/543,559/543,567/543,575/543,583/543,591/543和599/607。
在另一个实施方案中，抗-激活素A抗体或其抗原结合片段包含重链CDR1(HCDR1)结构域，其具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:395,411,427,443,459,475,491,499,507,515,523,531,547,555,563,571,579,587和595或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列；重链CDR2(HCDR2)结构域，其具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:397,413,429,445,461,477,493,501,509,517,525,533,549,557,565,573,581,589和597或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列；轻链CDR1(LCDR1)结构域，其具有选自以下的氨基酸序列：SEQID NO:403,419,435,451,467,483,539和603或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列；和轻链CDR2(LCDR2)结构域，其具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:405,421,437,453,469,485,541和605或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列。
在另一个实施方案中，抗-激活素A抗体或其抗原结合片段分别包含HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3结构域，其具有选自以下的氨基酸序列:SEQ ID NO:395-397-8-403-405-407；411-413-415-419-421-423；36-429-431-435-437-439；443-445-447-451-453-455；459-461-463-467-469-471；475-477-479-483-485-487；491-493-495-483-485-487；499-501-503-483-485-487；507-509-511-483-485-487；515-517-519-483-485-487；523-525-527-483-485-487；531-533-535-539-541-543；547-549-551-539-541-543；555-557-559-539-541-543(H4H10446P2)；563-565-567-539-541-543；571-573-575-539-541-543；579-581-583-539-541-543；587-589-591-539-541-543；和595-597-599-603-605-607。
在另一个实施方案中，抗-激活素A抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链CDR结构域，所述重链和轻链CDR结构域包含在选自SEQ ID NO:393/401,409/417,425/433,441/449,457/465,473/481,489/481,497/481,505/481,513/481,521/481,529/537,545/537,553/537,561/537,569/537,577/537,585/537和593/601的重链和轻链可变区(HCVR/LCVR)序列对中。
在一个实施方案中，抗-激活素A抗体或其抗原结合片段包含HCVR，其具有由选自SEQ ID NO:392,408,424,440,456,472,488,496,504,512,520,528,544,552,560,568,576,584和592的核酸序列编码的氨基酸序列或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列。
在另一个实施方案中，抗-激活素A抗体或其抗原结合片段包含LCVR，其具有由选自SEQ ID NO:400,416,432,448,464,480,536和600的核酸序列编码的氨基酸序列或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列。
在另一个实施方案中，抗-激活素A抗体或其抗原结合片段包含HCVR和LCVR，其中所述HCVR/LCVR对具有由选自SEQ ID NO:392/400,408/416,424/432,440/448,456/464,472/480,488/480,496/480,504/480,512/480,520/480,528/536,544/536,552/536,560/536,568/536,576/536,584/536和592/600的核酸序列对编码的氨基酸序列。
在另一个实施方案中，抗-激活素A抗体或其抗原结合片段包含HCDR3结构域，其具有由选自SEQ ID NO:398,414,430,446,462,478,498,502,510,518,526,534,550,558,566,574,582,590和598的核酸序列编码的氨基酸序列或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列，和LCDR3结构域，其具有由选自SEQ IDNO:406,422,435,454,470,486,542和606的核酸序列编码的氨基酸序列或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列。在一个实施方案中，HCDR3/LCDR3结构域组具有由选自SEQ ID NO:398/406,414/422,430/438,446/454,462/470,478/486,494/486,502/486,510/486,518/486,526/486,534/542,550/542,558/542,566/542,574/542,582/542,590/542和598/606的核酸序列对编码的氨基酸序列。
在另一个实施方案中，抗-激活素A抗体或其抗原结合片段包含HCDR1和HCDR2结构域以及LCDR1和LCDR2结构域，其中所述HCDR1结构域具有由选自SEQ ID NO:394,410,426,442,458,474,490,498,506,514,522,530,546,554,562,570,578,586和594的核酸序列编码的氨基酸序列或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列，HCDR2结构域具有由选自SEQ ID NO:396,412,428,444,460,476,492,500,508,516,524,532,548,556,564,572,580,588和596的核酸序列编码的氨基酸序列或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列，LCDR1结构域具有由选自SEQ ID NO:402,418,434,450,466,482,538和602的核酸序列编码的氨基酸序列或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列，且LCDR2结构域具有由选自SEQ ID NO:404,420,436,452,468,484,540和604的核酸序列编码的氨基酸序列或其基本相似的具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的序列。
在另一个实施方案中，抗-激活素A抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链CDR(HCDR1,HCDR2,HCDR3,LCDR1,LCDR2,LCDR3)结构域，其具有由选自以下的核酸序列编码的氨基酸序列：SEQ ID NO:394/396/398/402/404/406,410/412/414/418/420/422,426/428/430/434/436/438,442/444/446/450/452/454,458/460/462/466/468/470,474/476/478/482/484/486,490/492/494/482/484/486,498/500/502/482/484/486,506/508/510/482/484/486,514/516/518/482/484/486,522/524/526/482/484/486,530/532/534/538/540/542,546/548/550/538/540/542,554/556/558/538/540/542,562/564/566/538/540/542,570/572/574/538/540/542,578/580/582/538/540/542,586/588/590/538/540/542和594/596/598/602/604/606。
在一个实施方案中，抗-激活素A抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:553/537的HCVR和LCVR(HCVR/LCVR)氨基序列对，且抗-GDF8抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:360/368的HCVR和LCVR(HCVR/LCVR)氨基序列对。
在另一个实施方案中，抗-激活素A抗体或其抗原结合片段分别包含HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3结构域，其具有以下的氨基酸序列:SEQ ID NO:555-557-559-539-541-543(H4H10446P2)，且抗-GDF8抗体或其抗原结合片段分别包含HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3结构域，其具有以下的氨基酸序列:SEQ ID NO:362/364/366/370/372/374(例如H4H1657N2)。
在另一个实施方案中，抗-激活素A抗体或其抗原结合片段具有修饰的糖基化模式。在一些应用中，去除不需要的糖基化位点的修饰可能是有用的，或者缺少寡糖链上存在的岩藻糖部分的抗体，例如，用于增加抗体依赖性细胞毒性(ADCC)功能(Shield等人(2002)JBC277:26733)。在其它应用中，可以进行半乳糖基化的修饰以修饰补体依赖性细胞毒性(CDC)。
与相应的种系序列相比，本文所述的完全-人抗-激活素A和/或抗-GDF8抗体可在重链和轻链可变结构域的构架区和/或CDR区中包含一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失。通过将本文公开的氨基酸序列与可从例如公共抗体序列数据库获得的种系序列进行比较，可以容易地确定这样的突变。在另外的实施方案中，本发明的组合物和方法使用衍生自本文公开的任何氨基酸序列的抗体及其抗原结合片段，其中一个或多个构架区和/或CDR区内的一个或多个氨基酸回复突变为相应的种系残基或相应种系残基的保守氨基酸取代(天然或非天然)(这样的序列变化在本文中称为"种系回复突变")。本领域普通技术人员，从本文所述的重链和轻链可变区序列开始，可以容易地产生包含一个或多个单独的种系回复突变或其组合的许多抗体和抗原结合片段。在一些实施方案中，VH和/或VL结构域内的所有构架和/或CDR残基都突变回种系序列。在其它实施方案中，仅某些残基突变回种系序列，例如仅FR1前8个氨基酸内或FR4后8个氨基酸内发现的突变残基，或仅CDR1、CDR2或CDR3内发现的突变残基。此外，用于本发明的组合物和方法的抗体和抗原结合片段可以在构架区和/或CDR区含有两个或多个种系回复突变的任何组合，即其中某些个体残基突变回种系序列，而保持与种系序列不同的某些其它残基。一旦获得，可以容易地测试含有一个或多个种系回复突变的抗体和抗原结合片段的一种或多种所需特性，例如改善的结合特异性、增加的结合亲和力、改善或增强的拮抗或激动生物特性(视情况而定)、降低的免疫原性等。以这种一般方式获得的抗体和抗原结合片段包括在本发明内。
在其它实施方案中，本发明的组合物和方法使用包含本文所述HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列中任一种的变体的抗-GDF8抗体和/或抗-激活素A抗体(或其抗原结合片段)，所述变体具有一个或多个保守取代。例如，在一些实施方案中，本发明组合物和方法中使用的抗-GDF8抗体和/或抗-激活素A抗体具有HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列，相对于本文所述的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列中的任一种，其具有例如10个或更少、8个或更少、6个或更少、4个或更少等保守氨基酸取代。
双特异性抗体
双特异性抗体(bsAbs)组合两种抗体的特异性，并同时结合不同的抗原或表位。将两个或更多个抗原识别元件工程化到单个抗体中。在本发明方法的一个实施方案中，所述组合物包含含有GDF8特异性结合结构域和激活素A特异性结合结构域的抗体。本文所用的术语(抗原)"特异性结合结构域"包括这样的多肽或由其组成：(i)抗体分子的抗原结合片段，(ii)与特定抗原特异性相互作用的肽(例如肽抗体)，和/或(iii)特异性结合特定抗原的受体的配体结合部分。例如，包括双特异性抗体，其一个臂包含特异性结合GDF8的第一重链可变区/轻链可变区(HCVR/LCVR)对，另一个臂包含特异性结合激活素A的第二HCVR/LCVR对。
双特异性抗体可根据已知方法制备，包括化学交联、杂交瘤/细胞杂交瘤、杵臼、CrossMab、双可变域免疫球蛋白、重组工程(串联单链可变片段/双抗体)和对接和锁定。可用于本发明的其它示例性双特异性形式包括但不限于例如IgG-scFv融合物、双可变结构域(DVD)-Ig、共同轻链、CrossFab、(SEED)body、亮氨酸拉链、Duobody、IgG1/IgG2、双重作用Fab(DAF)-IgG和Mab2双特异性形式(参见例如Klein等人，mAbs 4:6,1-11(2012)和其中引用的参考文献，以回顾前述形式)。双特异性抗体也可使用肽/核酸缀合来构建，例如，其中使用具有正交化学反应性的非天然氨基酸来产生位点特异性抗体-寡核苷酸缀合物，其然后自组装成具有限定组成、效价和几何形状的多聚体复合物。(参见，例如Kazane等人,J AmChem Soc.135(1):340–346(2013))。
特异性结合
本文所用的术语"特异性结合"等是指抗原特异性结合蛋白或抗原特异性结合结构域与特定抗原形成复合物，特征为解离常数(KD)为500pM或更低，并且在普通测试条件下不结合其它不相关抗原。"不相关抗原"是彼此具有小于95％氨基酸同一性的蛋白质、肽或多肽。用于确定两种分子是否彼此特异性结合的方法是本领域公知的，并且包括例如平衡透析、表面等离子体共振等。例如，如本发明上下文中使用的抗原特异性结合蛋白或抗原特异性结合结构域包括以低于约500pM、低于约400pM、低于约300pM、低于约200pM、低于约100pM、低于约90pM、低于约80pM、低于约70pM、低于约60pM、低于约50pM、低于约40pM、低于约30pM、低于约20pM、低于约10pM、低于约5pM、低于约4pM、低于约2pM、低于约1pM、低于约0.5pM、低于约0.2pM、低于约0.1pM或低于约0.05pM的KD结合特定抗原(例如GDF8，激活素A)或其部分的抗体或其抗原结合片段，如表面等离子体共振测定所测。
抗体结合(抗原)可以根据为亲和力量度的KD来定量。KD值越低，抗体的结合亲和力越高。本文所用的术语"KD"意指特定抗体-抗原相互作用的平衡解离常数。表面等离子体共振可用于测定配体结合，例如抗体-抗原相互作用。
本文所用的术语"表面等离子体共振"是指一种光学现象，其允许通过检测生物传感器基质内蛋白质浓度的变化来分析实时生物特异性相互作用，例如使用BIACORETM系统(Pharmacia Biosensor AB,Uppsala,Sweden和Piscataway,N.J.)。
术语"表位"包括能够特异性结合免疫球蛋白或T细胞受体的任何决定簇，优选多肽决定簇。在一些实施方案中，表位决定簇包括分子的化学活性表面基团，例如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基，并且在一些实施方案中，可以具有特定的三维结构特征和/或特定的电荷特征。表位是抗原被抗体结合的区域。在一些实施方案中，当抗体优先识别蛋白质和/或大分子的复杂混合物中的其靶抗原时，称其特异性结合抗原。例如当KD小于或等于10-8M、小于或等于10-9M或小于或等于10-10M时，抗体被认为特异性结合抗原。
人抗体的制备
产生单克隆抗体，包括完全人单克隆抗体的方法是本领域已知的。任何这些已知方法可用于本发明的上下文中以制备特异性结合GDF8和/或激活素A的人抗体。
使用VELOCIMMUNETM技术或任何其它已知的产生单克隆抗体的方法，最初分离到GDF8和/或激活素A的高亲和力嵌合抗体，其具有人可变区和小鼠恒定区。如下面的实验部分所述，对抗体进行表征并选择所需的特征，包括亲和力、选择性、表位等。用所需的人恒定区替换小鼠恒定区，以产生本发明的完全人抗体，例如野生型或修饰的IgG1或IgG4。尽管所选的恒定区可根据具体用途而变化，但高亲和性抗原结合和靶特异性特征存在于可变区中。
通常，当通过与固定在固相上或在溶液相中的抗原结合时测定时，用于本发明方法的抗体具有非常高的亲和力，典型地具有约10-12至约约10-9M的KD。
药物组合物和施用方法
本发明包括改变个体身体组成的方法。如本文所用，短语"改变身体组成"是指个体中瘦体重、脂肪量和/或骨量中的一种或多种的变化。在一些实施方案中，个体的身体组成可通过向个体施用有效量的GDF8抑制剂和激活素A抑制剂来改变。瘦体重可以是例如大腿肌肉体积、四肢瘦体重或总瘦体重等。在一些方面，大腿肌肉体积可以指不包括肌肉内脂肪组织和大血管的大腿肌肉组织体积。在一些方面，大腿肌肉体积可以指包括肌肉内脂肪组织和大血管的大腿肌肉组织体积。在一些方面，四肢瘦体重可通过例如aLBM方程计算。在一些方面，四肢瘦体重可通过手臂和腿的瘦体重的总和来计算。脂肪量可以是例如总脂肪量、男性型脂肪量、肌内和肌肉周围脂肪组织(IMAT)之和、皮下脂肪组织体积、手臂和腿部的脂肪量之和、大腿肌内脂肪组织等。骨量可以是例如总骨矿物质密度(BMD)量、总骨矿物质含量(BMC)量等。在一些实施方案中，改变身体组成包括肌肉量的增加和/或脂肪量的减少。在一些实施方案中，改变身体组成包括同时增加肌肉量和减少脂肪量。在一些实施方案中，改变身体组成包括同时增加肌肉量和减少脂肪量，而不减少骨量。在一些实施方案中，改变身体组成包括骨矿物质含量量的增加。在一些实施方案中，改变身体组成包括总脂肪量、男性型脂肪量和/或皮下脂肪量的减少。在一些实施方案中，改变身体组成包括总脂肪量、男性型脂肪量和/或皮下脂肪量的减少，而不减少大腿肌内脂肪组织体积。
本发明包括改变身体组成，例如诱导个体脂肪量减少的方法，和治疗特征在于脂肪量增加的疾病或障碍的方法，所述方法包括向个体施用包含有效量GDF8抑制剂的第一组合物和包含有效量的激活素A抑制剂的第二组合物。第一和第二组合物可以同时或依次向个体施用。第一和第二组合物也可以在施用前合并成第三组合物。因此，在一些实施方案中，可向个体施用包含GDF8抑制剂和激活素A抑制剂两者的组合物。在这种组合物中的GDF8抑制剂可以是例如抗-GDF8抗体。在这样的组合物中的激活素A抑制剂可以是例如抗-激活素A抗体。
许多适当的制剂可见于所有药物化学家已知的药剂配方手册(formulary)：Remington's Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，PA。这些制剂包括，例如，粉末、糊剂、软膏、凝胶剂、蜡状物、油、脂质、含脂质(阳离子或阴离子)的囊泡(vesicle)(诸如LIPOFECTINTM)、DNA缀合物、无水吸收糊剂、水包油和油包水乳剂、聚乙二醇乳剂(emulsions carbowax)(各种分子量的聚乙二醇)、半固体凝胶和含聚乙二醇的半固体混合物。前述混合物中的任一种可以适用于根据本发明的治疗和疗法，条件是通过施用途径，制剂中的活性成分不会被制剂失活，并且制剂是生理学上相容的且可耐受的。还参见Powell等″Compendium of excipients for parenteral formulations″PDA(1998)JPharm Sci Technol52：238-311。
多种递送系统是已知的并且可以用于施用本发明的药物组合物，例如，封装在脂质体、微粒、微胶囊中、能够表达突变病毒的重组细胞、受体介导的胞吞(参见，例如，Wu等,1987,J.Biol.Chem.262：4429-4432)。施用方法包括，但不限于，皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外和口服途径。组合物可以通过任何方便的途径，例如通过输注或弹丸式注射(bolus injection)、通过经由上皮或粘膜衬层(诸如，口腔黏膜、直肠和肠粘膜等)吸收被施用，并且也可以与其他生物学活性剂一起被施用。
本发明的药物组合物可以用标准的针头和注射器皮下或静脉内递送。另外，关于皮下递送，笔式递送装置(pen delivery device)容易地在递送本发明的药物组合物方面具有应用。此类笔式递送装置可以是可重复使用的或一次性的。可重复使用的笔式递送装置通常利用可替代的药筒，所述药筒包含药物组合物。在药筒内的所有药物组合物已经被施用并且药筒为空的后，空药筒可以容易地被弃去并且被包含药物组合物的新药筒替代。然后笔式递送装置可以被重新使用。在一次性笔式递送装置中，不存在可替代的药筒。而是，使一次性笔式递送装置预填充有药物组合物，所述药物组合物保持在装置内的贮器(reservoir)中。在贮器中的药物组合物被清空后，整个装置被弃去。
许多可重复使用的笔式以及自动注射器递送装置在皮下递送本发明的药物组合物方面具有应用。实例包括，但不限于AUTOPENTM(Owen Mumford,Inc.,Woodstock,UK)、DISETRONICTM pen(Disetronic Medical Systems,Bergdorf,瑞士)、HUMALOG MIX 75/25TMpen、HUMALOGTM pen、HUMALIN 70/30TM pen(Eli Lilly和Co.,Indianapolis,IN)、NOVOPENTMI、II和III(Novo Nordisk,Copenhagen，丹麦)、NOVOPEN JUNIORTM(Novo Nordisk,Copenhagen，丹麦)、BDTM pen(Becton Dickinson,Franklin Lakes,NJ)、OPTIPENTM、OPTIPEN PROTM、OPTIPEN STARLETTM和OPTICLIKTM(Sanofi-Aventis,Frankfurt，德国)，此处仅举几例。在皮下递送本发明的药物组合物方面具有应用的一次性笔式递送装置的实例包括，但不限于SOLOSTARTM pen(Sanofi-Aventis)、FLEXPENTM(Novo Nordisk)和KWIKPENTM(Eli Lilly)、SURECLICKTM Autoinjector(Amgen,Thousand Oaks,CA)、PENLETTM(Haselmeier,Stuttgart，德国)、EPIPEN(Dey,L.P.)和HUMIRATM Pen(Abbott Labs,AbbottPark IL)，此处仅举几例。
在某些情况下，本发明的药物组合物可以在控释系统中递送。在一个实施方案中，可以使用泵(参见Langer,supra；Sefton,1987,CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14:201)。在另一个实施方案中，可以使用聚合物材料；参见，Medical Applications of ControlledRelease,Langer和Wise(编撰),1974,CRC Pres.,Boca Raton,Florida。在又另一个实施方案中，可将控释系统置于组合物的靶标附近，因此仅需要全身剂量的一部分(参见，例如Goodson,1984,in Medical Applications of Controlled Release,见上文，第2卷，第115-138页)。其他控释系统在Langer,1990,Science 249:1527-1533的综述中讨论。
可注射制品可以包括用于静脉内、皮下、皮内和肌内注射、滴注等的剂型。这些可注射制品可以通过已知的方法制备。例如，可注射制品可以通过例如在常规用于注射的无菌水性介质或油性介质中溶解、悬浮或乳化以上描述的抗体或其盐来制备。作为用于注射的水性介质，存在例如生理盐水、包含葡萄糖及其他助剂等的等渗溶液等，其可以与适当的增溶剂诸如醇(例如，乙醇)、多元醇(例如，丙二醇、聚乙二醇)、非离子表面活性剂[例如，聚山梨醇酯80、HCO-50(氢化蓖麻油的聚氧乙烯(50mol)加合物)]等组合使用。作为油性介质，采用例如芝麻油、大豆油等，其可以与增溶剂诸如苯甲酸苄酯、苯甲醇等组合使用。如此制备的注射剂优选地填充在适当的安瓿中。
有利地，将以上描述用于口服或肠胃外使用的药物组合物制备为适用于容纳一定剂量的活性成分的呈单位剂量的剂型。此类呈单位剂量的剂型包括，例如，片剂、丸剂、胶囊、注射剂(安瓿)、栓剂等。
剂量
可向个体施用的活性成分(例如抗-GDF8抗体和/或抗-激活素A抗体)的量通常是治疗有效量。术语"有效量"是活性成分例如抗体或抗体的抗原结合片段的浓度或量，其导致实现特定的所述目的。术语"有效量"与术语"治疗有效量"可互换使用，并且表示有效实现所述治疗效果的活性成分例如抗体或其抗原结合片段的浓度或量。(治疗)有效量可凭经验确定。
如本文所用，短语"治疗有效量"或"有效量"是指导致脂肪量可检测减少的抗原特异性结合蛋白和/或抗原结合分子(例如抗体)的剂量。在一些实施方案中，有效量还可以导致以下参数中的一个或多个的增加：体重、肌肉量(例如，胫骨前肌[TA]肌肉量、腓肠肌[GA]肌肉量、四头肌[Quad]肌肉量、四肢瘦体重等)、肌肉体积(例如，大腿肌肉体积)、肌肉强度/力量和/或肌肉功能以及葡萄糖耐量。
GDF8抑制剂(例如抗-GDF8抗体)和/或激活素A抑制剂(例如抗-激活素A抗体)的"治疗有效量"或"有效量"包括例如当向个体施用时，导致总脂肪量降低至少约2％至8％、至少2.5％至6％、至少3％至4％或至少约2.0％、至少约2.5％、至少约3.0％或至少约3.5％或更多的GDF8抑制剂和/或激活素A抑制剂的量。例如，GDF8抑制剂(例如抗-GDF8抗体)和/或激活素A抑制剂(例如抗-激活素A抗体)的"治疗有效量"或"有效量"包括，例如，当向个体施用时，导致总脂肪量降低至少约3.5％或更多的GDF8抑制剂和/或激活素A抑制剂的量。
在一些实施方案中，GDF8抑制剂(例如抗-GDF8抗体)和/或激活素A抑制剂(例如抗-激活素A抗体)的"治疗有效量"或“有效量”包括例如当向个体施用时，导致男性型脂肪量降低至少约2％至8％、至少2.5％至6％、至少3％至4％或至少约2.0％、至少约2.5％、至少约3.0％或至少约3.5％或更多的GDF8抑制剂和/或激活素A抑制剂的量。例如，GDF8抑制剂(例如抗-GDF8抗体)和/或激活素A抑制剂(例如抗-激活素A抗体)的"治疗有效量"或“有效量”包括例如当向个体施用时，导致男性型脂肪量减少至少约3.5％的GDF8抑制剂和/或激活素A抑制剂的量。
在一些实施方案中，与对照治疗的个体相比，所述量还导致TA或GA肌肉量增加至少至少2％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％或更多。
在一些实施方案中，GDF8抑制剂(例如抗-GDF8抗体)和/或激活素A抑制剂(例如抗-激活素A抗体)的"治疗有效量"或“有效量”包括例如当向个体施用时，导致大腿肌肉体积增加至少约2％至8％、2.5％至6％、3％至4％或至少2.0％、至少2.5％、至少3.0％或至少3.5％或更多的GDF8抑制剂和/或激活素A抑制剂的量。
在一些实施方案中，GDF8抑制剂(例如抗-GDF8抗体)和/或激活素A抑制剂(例如抗-激活素A抗体)的"治疗有效量"或“有效量”包括例如当向个体施用时，导致总瘦体重增加至少约2％至8％、2.5％至6％、3％至4％或至少2.0％、至少2.5％、至少3.0％或至少3.5％或更多的GDF8抑制剂和/或激活素A抑制剂的量。
在一些实施方案中，GDF8抑制剂(例如抗-GDF8抗体)和/或激活素A抑制剂(例如抗-激活素A抗体)的"治疗有效量"或“有效量”包括例如当向个体施用时，导致四肢瘦体重增加至少约2％至8％、2.5％至6％、3％至4％或至少2.0％、至少2.5％、至少3.0％或至少3.5％或更多的GDF8抑制剂和/或激活素A抑制剂的量。
在一些实施方案中，与对照治疗的个体相比，所述量还导致TA或GA肌肉量增加至少2％、3％、5％、10％、15％、20％、25％或更多。
在一些实施方案中，(治疗)有效量的特异性结合GDF8和激活素A的抗-GDF8抗体、抗-激活素A抗体或双特异性抗体可以为约0.05mg至约600mg；例如约0.05mg、约0.1mg、约1.0mg、约1.5mg、约2.0mg、约10mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约150mg、约160mg、约170mg、约180mg、约190mg、约200mg、约210mg、约220mg、约230mg、约240mg、约250mg、约260mg、约270mg、约280mg、约290mg、约300mg、约310mg、约320mg、约330mg、约340mg、约350mg、约360mg、约370mg、约380mg、约390mg、约400mg、约410mg、约420mg、约430mg、约440mg、约450mg、约460mg、约470mg、约480mg、约490mg、约500mg、约510mg、约520mg、约530mg、约540mg、约550mg、约560mg、约570mg、约580mg、约590mg或约600mg的相应抗体。剂量可以根据待施用的个体的年龄和大小、目标疾病、病症、施用途径等而变化。根据病症的严重程度，可以调整治疗的频率和持续时间。
各剂量中所含抗体(例如抗-GDF8抗体、抗-激活素A抗体或特异性结合GDF8和激活素A的双特异性抗体)的量可表示为每千克患者体重的抗体毫克数形式(即mg/kg)。例如，根据本发明方法施用的第一、第二或第三组合物中的抗-GDF8抗体、抗-激活素A抗体和/或抗-GDF8/抗-激活素A双特异性抗体可以以约0.0001至约50mg/kg患者体重的剂量施用于患者(例如0.5mg/kg、1.0mg/kg、1.5mg/kg、2.0mg/kg、2.5mg/kg、3.0mg/kg、3.5mg/kg、4.0mg/kg、4.5mg/kg、5.0mg/kg、5.5mg/kg、6.0mg/kg、6.5mg/kg、7.0mg/kg、7.5mg/kg、8.0mg/kg、8.5mg/kg、9.0mg/kg、9.5mg/kg、10.0mg/kg、10.5mg/kg、11.0mg/kg、11.5mg/kg等)。
在一些实施方案中，GDF8抑制剂(例如抗-GDF8抗体)的有效量可包括选自至少0.1mg/kg至约10gm/kg、1mg/kg至约1gm/kg和10mg/kg至100mg/kg的给药方案。在一些实施方案中，激活素A抑制剂(例如抗-激活素A抗体)的有效量可包括选自至少0.1mg/kg至约10gm/kg、1mg/kg至约1gm/kg和10mg/kg至100mg/kg的给药方案。
在另外的实施方案中，GDF8抑制剂(例如抗-GDF8抗体)的有效量可包括选自约0.01至约20mg/kg体重、约0.1至约10mg/kg体重和约0.1至约5mg/kg体重的单剂量的给药方案。在另外的实施方案中，激活素A抑制剂(例如抗-激活素A抗体)的有效量可包括选自约0.01至约20mg/kg体重、约0.1至约10mg/kg体重和约0.1至约5mg/kg体重的单剂量的给药方案。在一个具体方面，有效量的抗-GDF8抗体为约2mg/kg-10mg/kg、4mg/kg-8mg/kg或约6mg/kg个体体重，且有效量的抗-激活素A抗体为0.5mg/kg-15mg/kg、2mg/kg-12mg/kg、约3mg/kg或约10mg/kg个体体重。
在一些实施方案中，根据本发明方法施用的第一、第二和第三组合物可包含等量的GDF8抑制剂(例如抗-GDF8抗体)和/或激活素A抑制剂(例如抗-激活素A抗体)。或者，组合物中GDF8抑制剂(例如抗-GDF8抗体)的量可小于或大于激活素A抑制剂(例如抗-激活素A抗体)的量。GDF8抑制剂(例如抗-GDF8抗体)的有效量在与激活素A抑制剂(例如抗-激活素A抗体)组合时可以低于在单独的组合物中的有效量。当与GDF8抑制剂(例如抗-GDF8抗体)组合时，激活素A抑制剂(例如抗-激活素A抗体)的有效量可以低于在单独的组合物中的有效量。本领域普通技术人员使用常规实验将能够确定产生所需治疗效果所需的组合物中各组分的合适量。
本公开的各方面
本公开提供了使用GDF8抑制剂和激活素A抑制剂来降低个体中的脂肪量(诱导脂肪量降低)的组合物、套盒和方法。本公开还提供了使用GDF8抑制剂和激活素A抑制剂治疗个体中与脂肪量增加相关或以脂肪量增加为特征的疾病、障碍和/或病症的组合物、套盒和方法。在优选实施方案中，GDF8抑制剂是特异性结合GDF8的抗体或其抗原结合片段。
治疗方法
本发明包括通过特异性结合GDF8和/或激活素A改变身体组成的方法，例如，诱导个体中脂肪量降低的方法,增加个体肌肉量的方法和治疗特征在于脂肪量增加的疾病或障碍的方法。例如，本发明包括诱导个体中脂肪量降低的方法，诱导个体中肌肉量增加的方法和在个体中治疗特征在于脂肪量增加的疾病或障碍的方法，所述方法通过向个体施用i)包含抗-GDF8抗体的组合物和抗-激活素A抗体的组合物或ii)包含抗-GDF8抗体和抗-激活素A抗体二者的组合物或iii)包含双特异性抗体的组合物，所述双特异性抗体包含第一可变结构域和第二可变结构域，所述第一可变结构域包含特异性结合GDF8的HCVR/LCVR对，所述第二可变结构域包含特异性结合激活素A的HCVR/LCVR对。本文公开或涉及的GDF8抑制剂和/或激活素A抑制剂中的任一种可以在本发明的这些方面中使用。
在包括向个体施用GDF8抑制剂和激活素A抑制剂的方法中，GDF8抑制剂(例如，抗-GDF8抗体)和激活素A抑制剂(例如，抗-激活素A抗体)可同时或基本上同时向个体施用，例如，以单一治疗剂量(第三组合物)或以两个单独的剂量(第一和第二组合物)，其同时施用或彼此相隔小于约5分钟内施用。或者，可将GDF8抑制剂和激活素A抑制剂(第一和第二组合物)依次向个体施用，例如以时间上彼此分开超过约5分钟的单独治疗剂量施用。
根据本发明方法的个体的脂肪量的减少可以是通过DXA(双能X射线吸收测定法)测定的总脂肪量的减少。
在另一个实施方案中，根据本发明的方法的个体中脂肪量的减少是男性型脂肪量(即与上身/中身相关的内脏脂肪)的减少，如通过DXA(双能X射线吸收测定法)测定的。在男性型肥胖症中，个体在他或她的腹部区域周围储存脂肪。男性型肥胖症也可以出现在上身的其他区域中，如上胸部(前或后)颈项区域，并且甚至肩膀。男性型肥胖症的个体患有肥胖相关疾病/障碍如心脏病和代谢综合征的风险较大。出现痛风、动脉相关疾病(由于高血压)和多种癌症的可能性也与表现出男性型肥胖症的个体中的中心类型的脂肪分布有关。
体脂肪评估在精度和准确度方面是不同的。常见的人体测定包括：体重、腰围和使用皮肤卡尺的皮褶测定。更复杂的方法包括：生物电阻抗分析(BIA)、BOD POD和双能X射线吸收测定法(DEXA或DXA)。DXA是特别准确和有效的，因为它在估计体脂肪和肌肉时考虑骨矿物质含量。DEXA扫描可评估脂肪分布的不同区域，以确定男性型/女性型脂肪比率，其不同于体重指数。DXA可以测定总脂肪量、全身肌肉量、内脏脂肪(器官周围的脂肪)水平、肌内脂肪(肌肉之间的脂肪)、总骨矿物质密度，并且甚至可以提供区域分析(breakdowns)。最后，DXA可以准确地评估与胰岛素抗性增加有关的体脂肪的分布。
避免副作用
本发明包括改变身体组成、例如诱导个体脂肪量减少的方法，和治疗特征在于脂肪量增加的疾病或障碍的方法，所述方法包括向个体施用GDF8抑制剂和激活素A抑制剂，而不引起与施用结合多个(例如3个或更多个)ActRIIB配体的分子相关的不良副作用，例如美国专利号8,871,209中所述。例如，称为ACE-031(Acceleon Pharma,Inc.,Cambridge，MA)的临床分子是由ActRIIB的细胞外部分与IgG Fc结构域融合组成的多聚体(该分子在本文中也称为"ActRIIB-Fc")。ActRIIB-Fc结合GDF8以及其它ActRIIB配体，例如激活素A、激活素B、GDF11、BMP9、BMP10和TGFβ，并且已知当施用于人患者时引起各种不良副作用。例如，在Ib期递增剂量研究中，施用ACE-031至绝经后妇女显示可引起血红蛋白的不期望的增加和FSH水平的降低。此外，由于包括鼻和牙龈出血的不利影响，停止了对患有肌营养不良的儿科患者ACE-031的II期研究。在用ActRIIB-Fc治疗的患者中也观察到扩张的血管。ACE-031对杜兴氏肌营养不良(DMD)男孩的影响证实了瘦体重增加和脂肪量减少的趋势，但非肌肉相关的不良事件促成决定停止研究。(Campbell等2017 Muscle Nerve 55:458-464)。特异性抑制GDF8和激活素A(例如，通过施用抗-GDF8抗体和抗-激活素A抗体)，而不抑制其它ActRIIB配体如激活素B、GDF11、BMP9、BMP10和TGFβ，导致脂肪量降低的增加，而不引起与非特异性激活素-结合剂如ActRIIB-Fc相关的不良副作用。
施用方案
根据本发明的一些实施方案，可以在确定的时间过程中向个体施用多剂量的本发明的组合物(例如，包含GDF8抑制剂和/或激活素A抑制剂(例如抗-GDF8抗体和/或抗-激活素A抗体，或针对GDF8和激活素A的双特异性抗体)的组合物)。根据本发明这一个方面的方法包括向个体依次施用多剂量的本发明的组合物。如本文所用，"依次施用"是指在不同的时间点，例如在由预定间隔(例如，小时、天、周或月)分开的不同天，将每剂量的本发明组合物向个体施用。本发明包括方法，所述方法包括向患者依次施用初始剂量的第一和/或第二组合物；或第三组合物；随后是第一和/或第二组合物的一个或多个第二剂量；或第三组合物；并且任选地随后是第一组合物和/或第二组合物的一个或多个第三剂量；或第三组合物。
术语"初始剂量"、"第二剂量"和"第三剂量"是指施用本发明组合物的时间顺序。因此，"初始剂量"是在治疗方案开始时施用的剂量(也称为"基线剂量")；"第二剂量"是在初始剂量之后施用的剂量；而"第三剂量"是在第二剂量后施用的剂量。初始、第二和第三剂量可都含有相同量的活性成分，例如抗-GDF8抗体和/或抗-激活素A抗体，但通常在施用频率方面彼此不同。然而，在一些实施方案中，在治疗过程中，初始、第二和/或第三剂量中所含的活性成分的量将彼此不同(例如，视情况向上或向下调整)。
在本发明的一个示例性实施方案中，在紧接的前一剂之后1至30天(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或更多)施用各第二剂量和/或第三剂量。本文所用的短语"紧接的前一剂量"是指，以多次施用的顺序，在施用顺序中的下一剂量之前向个体施用的本发明组合物的剂量，没有中间剂量。
根据本发明这一个方面的方法可以包括对患者施用任何数量的第二和/或第三剂量的本发明组合物。例如，在一些实施方案中，仅向患者施用单一第二剂量。在其它实施方案中，向患者施用两个或更多个(例如，2、3、4、5、6、7、8或更多个)第二剂量。同样，在一些实施方案中，仅向患者施用单一第三剂量。在其它实施方案中，向患者施用两个或更多个(例如，2、3、4、5、6、7、8或更多个)第三剂。
在涉及多个第二剂量的实施方案中，每个第二剂量可以以与其他第二剂量相同的频率施用。例如，可在紧接的前一剂量之后1至29天对患者施用各第二剂量。类似地，在涉及多个第三剂量的实施方案中，每个第三剂量可以以与其他第三剂量相同的频率施用。例如，可在紧接的前一剂量之后1至60天对患者施用各第三剂量。或者，向患者施用第二和/或第三剂量的频率可在治疗方案的过程中变化。施用频率也可以在治疗过程中由医生调整，这取决于临床检查后个体患者的需要。
在一个实施方案中，个体可进行初步DXA，然后接受包含抗-GDF8抗体和抗-激活素A抗体的组合物(或包含抗-GDF8抗体的组合物和包含抗-激活素A抗体的组合物)，然后进行DXA跟踪。如果后续DXA中的脂肪量没有明显降低(与初始DXA相比)，个体可再次接受组合物。在另一个实施方案中，随后的施用剂量和频率可以根据后续DXA的结果而变化。
组合疗法
根据一些实施方案，本发明方法包括向个体施用一种或多种其它治疗剂，其可有利地与含GDF8抑制剂和/或激活素A抑制剂的组合物组合。本文所用表述"组合"是指其它治疗剂在包含GDF8抑制剂和/或激活素A抑制剂的药物组合物之前、之后或同时施用。术语"组合"还包括依次或同时施用GDF8抑制剂、激活素A抑制剂、或这两者和第二治疗剂。术语"治疗剂"还意味着包括特定的疗法。
其它治疗剂可以是，例如，另外的GDF8拮抗剂/抑制剂、另外的激活素A拮抗剂/抑制剂、生长因子抑制剂、免疫抑制剂、代谢抑制剂、酶抑制剂和细胞毒性剂/细胞抑制剂、IL-1拮抗剂(包括，例如，US6,927,044中所述的IL-1拮抗剂)、IL-6拮抗剂、IL-6R拮抗剂(包括，例如，US7,582,298中所述的抗IL-6R抗体)、IL-13拮抗剂、肿瘤坏死因子(TNF)拮抗剂、IL-8拮抗剂、IL-9拮抗剂、IL-17拮抗剂、IL-5拮抗剂、IgE拮抗剂、CD48拮抗剂、IL-31拮抗剂(包括，例如，US7,531,637中所述的)、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)拮抗剂(包括，例如，US2011/027468中所述的)、干扰素-γ(IFNγ)抗生素、局部用皮质类固醇、他克莫司、吡美莫司、环胞素、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、色甘酸钠、蛋白水解酶抑制剂、全身用皮质类固醇、全身性免疫疗法、抗-组胺、化学疗法、光疗法或其组合。
在进一步的实施方案中，本发明的特征在于组合物，所述另外的治疗剂选自(1)3-羟基-3-甲基戊二酰基-辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂，例如西立伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、罗苏伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀等；(2)胆固醇摄取和/或胆汁酸再吸收的抑制剂；(3)烟酸，其增加脂蛋白分解代谢；(4)贝特类或两亲羧酸，其降低低密度脂蛋白(LDL)水平，改善高密度脂蛋白(HDL)和TG水平，并减少非致命性心脏病发作的次数；和(5)LXR转录因子的活化剂，其在胆固醇消除中起作用，例如22-羟基胆固醇，或固定组合，例如依泽麦布加辛伐他汀；他汀与胆汁树脂(例如考来烯胺、考来替泊、考来维仑)、烟酸与他汀化合物的固定组合(例如烟酸与洛伐他汀)；或与其它降脂剂如ω-3-脂肪酸乙酯(例如omacor)的固定组合。
在更进一步的实施方案中，第二治疗剂选自胰高血糖素的一种或多种其它抑制剂/拮抗剂或胰高血糖素受体的抑制剂/拮抗剂，以及其它分子的抑制剂，例如ANGPTL8(例如抗-ANGPTL8抗体)的抑制剂，以及其它分子的抑制剂，例如ANGPTL3(例如抗-ANGPTL3抗体)、ANGPTL4、ANGPTL5、ANGPTL6、载脂蛋白C-III(也称为APOC3；参见例如，US8530439,US7750141,US7598227中所述的APOC3的抑制剂，和volanesorsen，也称为ISIS-APOCIIIRx)和前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9型(PCSK9)，其参与脂质代谢，特别是胆固醇和/或甘油三酯稳态。这些分子的抑制剂包括特异性结合这些分子并阻断其活性的小分子、反义分子和抗体。
在进一步的实施方案中，如果需要，另外的治疗剂可以选自镇痛药、抗炎剂，包括非甾体抗炎药(NSAIDS)，例如Cox-2抑制剂等，以改善和/或减轻伴随的潜在病症的症状。
另外的治疗剂可以在第一和/或第二组合物；或本文所述的第三组合物之前、同时或之后施用。为了本公开的目的，所述施用方案可认为是抗-GDF8抗体和/或抗-激活素A抗体与第二治疗活性组分"组合"施用。
实施例
提出以下实施例，以便为本领域普通技术人员提供关于如何制备和使用本发明的方法和组合物的完整的公开内容和描述，并且不意图限制发明人认为是他们的发明的范围。已经做出努力以确保关于使用的数值(例如，量、温度，等)的准确性，但应考虑某些实验误差和偏差。除非另外指示，份数为重量份数，分子量为平均分子量，温度为摄氏度，且压力为大气压或接近大气压。
实施例1.在临床研究中，单独的抗-GDF8将总瘦体重增加至多3％：少肌症2期数据
在70岁和以上的患者(包括患有少肌症的男性和绝经后女性)中进行随机的、双盲的、安慰剂对照的介入研究2期临床试验。患者用单独的皮下抗-GDF8抗体REG1033(H4H1657N2)治疗12周，以100mg抗-GDF8抗体，Q4W s.c.(n＝62)；300mg抗-GDF8抗体Q4Ws.c.(n＝64)或300mg抗-GDF8抗体Q2W s.c.(n＝59)，或安慰剂(n＝65)。如图1所示，当以三个剂量中的每一个单独使用REGN1033时，12周后与安慰剂相比患者总瘦体重显著增加，如图1和表4所示。
表4.单独使用抗-GDF8 REGN1033至第12周的总瘦体重％变化
Figure BDA0002658714950000351
对强度和功能的影响是不同的。抗-GDF8通常是安全的和良好耐受的(反应，如果有的话，是温和的)。表4显示，接受100mg或300mg剂量的REGN1033的患者显示显著增加的总瘦体重，为从安慰剂至第12周数据的％变化。在该研究中，单独的抗-GDF8抗体REGN1033使总瘦体重增加了高达3％。300mg方案还导致总脂肪量和男性型脂肪量的减少。
实施例2.抗-GDF8和抗-激活素组合的首次在人进行的剂量递增研究
开始了随机双盲安慰剂对照剂量递增研究，以评估静脉内抗-GDF8抗体和抗-激活素A抗体的组合相对于单独各组分对身体组成的耐受性和影响。
本研究的首要目的是评估抗-激活素A抗体(例如H4H10446P2＝REGN2477)单独和与抗-GDF8抗体(例如H4H1657N2＝REGN1033)组合在年龄45至70岁的健康绝经后妇女中的安全性和耐受性。
研究的次要目的包括：通过磁共振成像(MRI)测定的单独的REGN2477、单独的REGN1033和REGN2477+REGN1033组合对大腿肌肉体积的影响的评估，以及通过双能X射线吸收测定法(DXA)测定的单独的REGN2477、单独的REGN1033和REGN2477+REGN1033组合对总的和区域性的身体组成的影响的评估。
研究设计
该研究是随机、双盲、安慰剂对照、剂量递增研究，以评价静脉内单独的REGN2477(抗-激活素A)和与REGN1033(抗-GDF8)的组合在健康绝经后妇女中的安全性、耐受性和药效学。
将总共48名受试者随机分配到以下4个连续递增的REGN2477 IV剂量组中的1个，其中8名受试者以6:2的比例随机分配到前3个组(组A、B和C)的每一个中，24名受试者以1:1:1:1的比例(各6名受试者)随机分配到组D中。
·组A:4名受试者REGN1033(6mg/kg IV)+REGN2477低剂量(1mg/kg IV)或2名受试者安慰剂
·组B:4名受试者REGN1033(6mg/kg IV)+REGN2477中剂量(3mg/kg IV)或2名受试者安慰剂
·组C:4名受试者REGN1033(6mg/kg IV)+REGN2477高剂量(10mg/kg IV)或2名受试者安慰剂
·组D:REGN1033(6mg/kg IV+REGN2477高剂量(10mg/kg IV)安慰剂、REGN2477(10mg/kg IV)或REGN1033(6mg/kg IV)
受试者接受静脉内施用单次剂量的抗-GDF8抗体REGN1033和/或抗-激活素A抗体REGN2477中的一种或两种。在初步分析中，在各组中将安慰剂组和高剂量组合组合并，得到12名受试者服用安慰剂，12名受试者服用高剂量组合，如图2A所示。图2A所示的给药方案用于随后的图2B至17中的每一个所示的研究中。
受试者参与长达28天的筛选期，随后在第1天进行基线和治疗随访，并且随访期为113天。
功效和安全性分析
完整分析集(FAS)包括所有随机的受试者；它基于分配的治疗(随机)。使用FAS分析功效终点。安全性分析集(SAF)包括接受任何研究药物的所有随机受试者；它基于所接受的治疗(如所治疗的)。使用SAF分析治疗依从性/施用和所有临床安全变量。
功效变量包括：大腿肌肉组织体积，不包括和包括肌肉内脂肪组织和大血管，通过磁共振成像(MRI)测定；通过双重X射线吸收测定法(DXA)测定的总瘦体重；通过DXA测定的四肢瘦体重(通过LBM方程计算)；和通过DXA测定的总脂肪量。
根据下表5，在各治疗组之间平衡受试者的人口统计学和基线特征:
表5.在各治疗组之间平衡基线特征
Figure BDA0002658714950000371
统计方法
使用协方差分析(ANCOVA)模型，用治疗组作为固定效应，基线值作为连续协变量，分析全分析集(FAS)中从基线到第4周或第8周的百分比变化和功效变量变化。从该模型中提供了每个治疗组在第4周和第8周的最小二乘平均值，其具有相应的标准误差、置信区间和P值，用于治疗比较。将安慰剂受试者合并在各组中。未输入缺失的功效数据。在本研究中没有应用多次测试的调整。
结果
共48名受试者随机服用研究药物并完成研究。由于‘输注部位肿胀’的不良事件，REGN2477+REGN1033高剂量组中的一个受试者具有中断的研究药物输注。
功效
在第8周，组合中激活素A和GDF8两者的阻断增加了大腿肌肉体积并降低了脂肪量，如图2B和2C所示。在最高剂量组合下观察到最大的效果。
图2B显示了显示在绝经后妇女单次给药后8周通过MRI测定的大腿肌肉体积％变化的柱状图。数字显示了与安慰剂相比的变化。*表示相对于安慰剂标称p<0.05；****表示相对于安慰剂标称p<0.0001。抗-激活素A抗体和/或抗-GDF8抗体的单剂量(mg/kg)显示在柱状图下。与安慰剂相比，用中剂量和高剂量组合的REGN2477+REGN1033治疗导致大腿肌肉体积以剂量相关方式显著增加(分别为p<0.05；p<0.0001)。在第8周，相对于使用安慰剂的0.88％，高剂量组中的受试者表现出从基线起高达7.73％的％变化。
图2C显示柱状图，其显示绝经后妇女单剂量给药后8周通过DXA测定的总脂肪量的％变化。数字显示了与安慰剂相比的变化。*表示相对于安慰剂的标称p<0.05；****表示相对于安慰剂的标称p<0.0001。抗-激活素A抗体和/或抗-GDF8抗体的单剂量(mg/kg)显示在柱状图下。与安慰剂相比，用高剂量REGN2477+REGN1033组合治疗导致总脂肪量显著降低(p<0.05)。
如图3所示，抗-激活素A抗体REGN2477与抗-GDF8抗体REGN1033组合导致大腿肌肉体积的剂量依赖性增加。通过MRI测定的不包括肌肉间脂肪组织和大血管的大腿肌肉体积结果同样总结在下表6中。与安慰剂相比，用中剂量和高剂量REGN2477+REGN1033组合治疗导致大腿肌肉体积显著增加(p<0.05)，如表6所示。
表6.通过MRI*测定的大腿肌肉体积
Figure BDA0002658714950000381
*排除肌肉间脂肪组织和大血管
如表4所示，与安慰剂相比，用中和高剂量组合的REGN2477+REGN1033治疗导致大腿肌肉体积以剂量相关方式显著增加。
图4显示在用抗-激活素A+抗-GDF8组合治疗后的个体受试者中一致地观察到大腿肌肉体积增加。在每个治疗组中，不同的线表示不同的个体。
抗-激活素A抗体REGN2477+抗-GDF8抗体REGN1033组合对四肢瘦体重(手臂和腿的瘦体重之和)的影响模式与图5中所示的对大腿肌肉体积所见的相似。通过DXA测定的四肢瘦体重结果同样总结于表7中。与安慰剂相比，中和高剂量组合显著增加四肢瘦体重，如表7中所示。
表7.四肢瘦体重，通过DXA
Figure BDA0002658714950000391
如图6所示，阻断激活素A和GDF8导致总脂肪量的降低，如DXA所评估的。在第8周通过DXA测定，与安慰剂相比，抗-GDF8抗体REGN1033和抗-激活素A抗体REGN2477的高剂量组合使总脂肪量显著降低(*p<0.05)。通过DXA测定的总脂肪量结果同样总结于下表8中。
表8.通过DXA测定的总脂肪量
Figure BDA0002658714950000392
*p<0.05
如DXA所评估的，还发现激活素A和GDF8的阻断与男性型脂肪量的降低相关，如图7所示。在第8周时，抗-GDF8抗体REGN1033和抗-激活素A抗体REGN2477的高剂量组合与安慰剂相比显著降低男性型脂肪量(*p<0.05)，通过DXA测定。
进一步的功效结果示于图8至17中，并总结于下表中。高、中和低剂量的REGN2477+REGN1033示于图2A中。
与安慰剂相比，REGN2477+REGN1033中剂量(p<0.05)和高剂量组(p<0.001)表现出显著增加的大腿肌肉体积(不包括肌内脂肪组织和大血管)(图8)。在8周，与安慰剂组中的0.88％相比，REGN2477+REGN1033高剂量组中的大腿肌肉体积增加了7.73％(标称p<0.001)。与安慰剂相比，中等剂量的REGN2477+REGN1033和单独的REGN1033也显著增加了大腿肌肉体积。在用组合治疗的个体受试者中一致地观察到大腿肌肉体积的以剂量响应方式增加。(数据未显示)。
与安慰剂相比，REGN2477+REGN1033高剂量组显示总瘦体重(通过DXA测定)显著增加(p<0.05)(图9)。
与安慰剂相比，在组合REGN2477+REGN1033治疗组的每一个中四肢瘦体重(通过aLBM方程计算)显著增加(低剂量p<0.05，中和高剂量组p<0.001)(图10)。在第8周，与安慰剂组中的0.76％相比，REGN2477+REGN1033中剂量组中的四肢瘦体重从基线增加7.15％。类似地，与安慰剂组中的0.76％相比，REGN2477+REGN1033高剂量组中的四肢瘦体重从基线增加5.7％。
在高剂量REGN2477+REGN1033治疗组中总脂肪量显著降低；与安慰剂0.5％相比，总脂肪量减少：3.92％(高剂量组)(标称p<0.05)(图11)。
在4周和8周，与安慰剂相比，在中和高剂量REGN2477+REGN1033组和REGN1033组中的每组中，大腿肌肉体积(包括肌内脂肪组织和大血管)都显著增加(图12)。在4周，与安慰剂相比，低剂量REGN2477+REGN1033也表现出大腿肌肉体积(包括肌内脂肪组织和大血管)的显著增加。
与安慰剂相比，在组合REGN2477+REGN1033治疗组的每一个中，四肢瘦体重(手臂和腿之和)在4周和8周时都显著增加(p<0.05)(图13)。
高剂量REGN2477+REGN1033治疗组中的男性型脂肪量也显著减少(图14)。与安慰剂中没有减少相比，高剂量REGN2477+REGN1033组中男性型脂肪量减少了6.6％。
在8周与安慰剂相比，高剂量REGN2477+REGN1033组中的大腿肌内脂肪组织体积(cm3)显著增加(p<0.05)(图15)。
在高剂量组中，在肌内和外周血管脂肪组织(IMAT)的总和观察到脂肪组织的减少(图16)，在低和中剂量组中，在皮下脂肪组织观察到脂肪组织减少。(图17)。相反，高剂量组中的大腿肌肉内脂肪组织增加至8％，相比之下安慰剂减少了4％。(图17)。
在第4周和第8周与安慰剂相比，在高剂量组中REGN2477+REGN1033均显著增加了肌肉体积和瘦体重的所有主要量度；在第4周的效果通常不如在第8周的效果明显(表9)。第8周关键身体组成测定的变化百分比总结(完整分析集，LS平均值和SE呈现)显示下表9中。
表9.第8周的身体组成变化总结
Figure BDA0002658714950000401
Figure BDA0002658714950000411
*p<0.05；**p<0.001
在上表9中，相对于基线的变化和与安慰剂的差异是基于ANCOVA模型的最小二乘(LS)平均值，其中基线作为协变量，治疗作为固定因子。标准误差(SE)和p值也取自ANCOVA。记录了标称p-值。
骨矿物质密度(BMD)量和骨矿物质含量(BMC)量由DXA测定，如表10所示，在高剂量下，R2477+R1033增加骨矿物质含量，如DXA所测定，而总骨矿物质密度没有变化(表10)。
如表10所示测定手臂和腿部脂肪量的和。高剂量时，R2477+R1033减少手臂和腿部脂肪量的总和(p<0.05)。
来自首要终点分析的数据示于下表10中。
表10:功效终点的初步分析
Figure BDA0002658714950000412
Figure BDA0002658714950000421
Figure BDA0002658714950000431
Figure BDA0002658714950000441
Figure BDA0002658714950000451
Figure BDA0002658714950000461
Figure BDA0002658714950000471
Figure BDA0002658714950000481
Figure BDA0002658714950000491
Figure BDA0002658714950000501
Figure BDA0002658714950000511
注意：最小二乘(LS)平均值、标准误差(SE)和p值取自ANCOVA。该模型包括作为协变量的基线测定和作为固定因子的治疗。
*指示p-值<0.05；**指示p-值<0.001。
与安慰剂相比，R2477+R1033组合在中剂量组和高剂量组中显著增加了大腿肌肉体积和总瘦体重(图8和9)，在所有剂量组中显著增加了四肢瘦体重(图10)，并且在高剂量组中显著降低了总脂肪量以及男性型脂肪量(表10)。在第4周和第8周，与安慰剂相比，高剂量组中的R2477+R1033显著增加肌肉体积和瘦体重的所有主要量度；在第4周的效果通常不如在第8周的效果明显(表10)。在第8周，高剂量抗-激活素A R2477+抗-GDF8R1033组与安慰剂相比显示增加的总骨矿物质含量的％变化，如通过DXA测定的，而总骨矿物质密度没有变化(表10)。
安全性
除了安慰剂受试者报告的一个"桡骨骨折"的严重TEAE外，所有治疗后出现的不良事件(TEAE)的严重性均为轻度至中度。没有严重的不良事件，没有死亡，并且没有由于TEAE引起的中断。头痛是每个治疗组中最常见的TEAE，在所有研究对象的58.3％和安慰剂对象的50％中发生。肌肉痉挛、恶心和口腔溃疡是REGN2477+REGN1033组中的其它常见TEAE，其在组合R2477+R1033组中的25％或更多受试者中发生；这些TEAE在安慰剂组中出现频率较低，但似乎没有任何明确的剂量-反应关系。没有明显的出血或腹泻信号，即与激活素受体阻断相关的不良事件。一次流鼻血(鼻出血的优选术语)TEAE发生在R2477+R1033剂量组中-9分钟后解决。
对潜在临床显著性值(PCSV)的评述揭示，在实验室、生命体征和ECG中，在REG2477+REGN1033和安慰剂之间没有显著差异，这将指示REGN2477+REGN1033的负面影响。在实验室、生命体征和ECG类别中，在组合的REGN2477+REGN1033剂量组(N为24)中有0-2名受试者有PCSV；然而，PCSV的受试者的百分比等于或低于安慰剂组中发现的百分比。没有与肝功能测试相关的治疗后出现的PCSV。
结论
在健康的绝经后妇女中，静脉内施用单次剂量的REGN2477+REGN1033增加了大腿肌肉体积、总瘦体重和四肢瘦体重。一个令人惊讶的发现是大腿肌肉变化的一致性：所有暴露于该组合的个体都表现出大腿肌肉体积的增加，如图4所示。此外，静脉内施用单次剂量的REGN2477+REGN1033减少了总脂肪，特别是男性型脂肪量。单独用REGN1033治疗增加了大腿肌肉体积。
总体上，在该临床研究中，REGN2477、REGN1033和REGN2477+REGN1033被认为具有可接受的安全性特征，并且被良好耐受。没有严重的不良事件。
本发明的范围不受本文所述的具体实施方案的限制。实际上，除了本文所述的那些之外，根据前面的描述和附图，本发明的各种修改对于本领域技术人员将变得显而易见。这些修改都将落入所附权利要求的范围内。
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Claims (34)

1.改变个体身体组成的方法，所述方法包括向个体施用包含有效量GDF8抑制剂的第一组合物和包含有效量的激活素A抑制剂的第二组合物。
2.权利要求1的方法，其中所述改变身体组成包括诱导个体脂肪量减少，所述方法包括向个体施用包含有效量的GDF8抑制剂的第一组合物和包含有效量的激活素A抑制剂的第二组合物。
3.权利要求1或权利要求2的方法，其中所述改变身体组成包括诱导个体肌肉量增加，所述方法包括施用包含有效量的GDF8抑制剂的第一组合物和包含有效量的激活素A抑制剂的第二组合物。
4.改变个体身体组成的方法，所述方法包括向个体施用包含有效量的GDF8抑制剂和有效量的激活素A抑制剂的组合物。
5.权利要求4的方法，其中所述改变身体组成包括诱导个体脂肪量减少，所述方法包括向个体施用包含有效量的GDF8抑制剂和有效量的激活素A抑制剂的组合物。
6.权利要求3或权利要求4的方法，其中所述改变身体组成包括诱导个体肌肉量增加，所述方法包括向有需要的个体施用包含有效量的GDF8抑制剂和有效量的激活素A抑制剂的组合物。
7.权利要求1-6中任一项的方法，其中GDF8抑制剂的有效量包括选自至少0.01mg/kg至约10gm/kg、1mg/kg至约1gm/kg和10mg/kg至100mg/kg的给药方案。
8.权利要求1-7中任一项的方法，其中激活素A抑制剂的有效量包括选自至少0.01mg/kg至约10gm/kg、1mg/kg至约1gm/kg和10mg/kg至100mg/kg的给药方案。
9.权利要求1-6中任一项的方法，其中GDF8抑制剂的有效量包括选自约0.01至约20mg/kg体重、约0.1至约10mg/kg体重和约0.1至约5mg/kg体重的单剂量的给药方案。
10.权利要求1-6或9中任一项的方法，其中激活素A抑制剂的有效量包括选自约0.01至约20mg/kg体重、约0.1至约10mg/kg体重和约0.1至约5mg/kg体重的单剂量的给药方案。
11.权利要求7-10中任一项的方法，其中GDF8抑制剂的有效量为6mg/kg个体体重。
12.权利要求7-11中任一项的方法，其中激活素A抑制剂的有效量为3mg/kg或10mg/kg个体体重。
13.权利要求1-3中任一项的方法，其中第一组合物被配制用于静脉内、皮下或口服施用。
14.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述第二组合物被配制用于静脉内、皮下或口服施用。
15.权利要求1-3中任一项的方法，其中在施用前将第一和第二组合物合并成第三组合物。
16.权利要求15的方法，其中所述第三组合物被配制用于静脉内、皮下或口服施用。
17.权利要求3-6中任一项的方法，其中所述组合物被配制用于静脉内、皮下或口服施用。
18.权利要求1-17中任一项的方法，其还包括在施用之前测定个体的总脂肪量和/或男性型脂肪量。
19.权利要求18的方法，其还包括在施用后测定个体的总脂肪量和/或男性型脂肪量，和施用所述组合物直至个体的总脂肪量和/或男性型脂肪量降低至少约2％至8％、至少约2.5％至6％、至少约3％至4％或至少约3.5％。
20.权利要求1-19中任一项的方法，其中所述GDF8抑制剂是特异性结合GDF8的分离的抗体或其抗原结合片段。
21.权利要求20的方法，其中所述特异性结合GDF8的抗体或抗原结合片段包含含有SEQID NO:360的重链可变区(HCVR)的重链互补决定区(HCDR)，和含有SEQ ID NO:368的轻链可变区(LCVR)的轻链互补决定区(LCDR)。
22.权利要求20或21的方法，其中所述特异性结合GDF8的抗体或抗原结合片段包含三个HCDR和三个LCDR，所述三个HCDR包含SEQ ID NO:362、SEQ ID NO:364和SEQ ID NO:366，所述三个LCDR包含SEQ ID NO:370、SEQ ID NO:372和SEQ ID NO:374。
23.权利要求1-22中任一项的方法，其中所述激活素A抑制剂是特异性结合激活素A的分离的抗体或其抗原结合片段。
24.权利要求23的方法，其中特异性结合激活素A的抗体或抗原结合片段包含含有SEQID NO:553的重链可变区(HCVR)的重链互补决定区(HCDR)，和含有SEQ ID NO:537的轻链可变区(LCVR)的轻链互补决定区(LCDR)。
25.权利要求23或24的方法，其中特异性结合激活素A的抗体或抗原结合片段包含三个HCDR和三个LCDR，所述三个HCDR包含SEQ ID NO:555、SEQ ID NO:557和SEQ ID NO:559，所述三个LCDR包含SEQ ID NO:539、SEQ ID NO:541和SEQ ID NO:543。
26.权利要求1-25中任一项的方法，其中所述激活素A抑制剂的量为选自100％至200％的GDF8抑制剂的量、100％至250％的GDF8抑制剂的量、100％至300％的GDF8抑制剂的量和100％至400％的GDF8抑制剂的量，以重量计。
27.权利要求26的方法，其中所述激活素A抑制剂的量以重量计是所述GDF8抑制剂的量的约1.5至2.0倍。
28.权利要求1-27中任一项的方法，其中个体中脂肪量的减少是通过DXA(双能X射线吸收测定法)测定的总脂肪量的减少。
29.权利要求1-28中任一项的方法，其中个体中脂肪量减少是通过DXA(双能X射线吸收测定法)测定的男性型脂肪量的减少。
30.权利要求1-29中任一项的方法，其中个体在施用后经历肌肉体积增加。
31.权利要求1-30中任一项的方法，其中所述个体不具有肌肉萎缩病症或疾病。
32.GDF8抑制剂，其用于治疗特征在于脂肪量增加的疾病或障碍的方法中，其中所述方法包括向个体施用GDF8抑制剂和激活素A抑制剂。
33.激活素A抑制剂，其用于治疗特征在于脂肪量增加的疾病或障碍的方法中，其中所述方法包括向个体施用激活素A抑制剂和GDF8抑制剂。
34.用于减少个体中脂肪量的非治疗性方法，所述方法包括向个体施用激活素A抑制剂和GDF8抑制剂。
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