CN111748635B - 胆管癌的miRNA标记物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本申请提供了用于诊断胆管癌的miRNA标记物及其应用。本申请所提供的miRNA标记物包括miR‑151a‑5p，miR‑191‑5p，以及miR‑4732‑3p中的一种或多种，可用于快速而准确地筛查、预测、诊断或预后胆管癌。

Description

胆管癌的miRNA标记物及其应用
技术领域
本申请属于分子生物学领域，具体涉及用于筛查、预测、诊断或预后胆管癌的miRNA标记物及其应用。
背景技术
外泌体是一种能被机体内大多数细胞分泌的微小膜泡，具有脂质双层膜，直径大约为30-150nm。外泌体广泛存在并分布于各种体液中，携带和传递重要的信号分子，形成了一种全新的细胞-细胞间信息传递系统，影响细胞的生理状态并与多种疾病的发生与进程密切相关。
外泌体可以通过作为一种细胞间的交流机制直接促进肿瘤细胞生长、侵袭和迁移，其中包含的miRNA是一类重要的在细胞间传递信息的功能性的分子。通过筛选、鉴别肿瘤细胞分泌的外泌体中的小RNA，可以为肿瘤的早期诊断提供新的线索和更为便捷的手段。
发明内容
本申请发明人通过对胆管癌病人循环血外泌体中miRNA的探索性研究，首次意外发现了可以准确稳定地用作胆管癌筛查、预测、诊断或预后的miRNA分子标记物。
基于此，一方面，本申请提供了用于筛查、预测、诊断或预后胆管癌的试剂盒、微阵列或生物芯片，其包括用于特异性检测选自以下一种或多种miRNA标记物的工具或试剂：miR-151a-5p，miR-191-5p，以及miR-4732-3p。
在具体实施方案中，本申请所提供的试剂盒、微阵列或生物芯片，其中所包括的工具或试剂进一步包括能够特异性检测所述miRNA标记物的引物和/或探针。
在具体实施方案中，标记物miR-151a-5p的引物和/或探针序列为：ucgaggagcucacagucuagu；标记物miR-191-5p的引物和/或探针序列为：caacggaaucccaaaagcagcug；标记物miR-4732-3p的引物和/或探针序列为：gcccugaccuguccuguucug。
另一方面，本申请提供了miRNA标记物在制备用于筛查、预测、诊断或预后胆管癌的试剂盒、微阵列或生物芯片中的用途，其中所述miRNA标记物选自以下一种或多种：miR-151a-5p，miR-191-5p，以及miR-4732-3p。
又一方面，本申请提供了特异性检测miRNA标记物的工具或试剂在制备用于筛查、预测、诊断或预后胆管癌的试剂盒、微阵列或生物芯片中的用途，其中所述miRNA标记物选自以下一种或多种：miR-151a-5p，miR-191-5p，以及miR-4732-3p。
还一方面，本申请提供了特异性检测miRNA标记物的引物和/或探针在制备用于筛查、预测、诊断或预后胆管癌的试剂盒、微阵列或生物芯片中的用途，其中所述miRNA标记物选自以下一种或多种：miR-151a-5p，miR-191-5p，以及miR-4732-3p。
在具体实施方案中，本申请所涉及的miRNA标记物选自以下一种或多种：初始miR-151a-5p，前体miR-151a-5p，成熟miR-151a-5p，初始miR-191-5p，前体miR-191-5p，成熟miR-191-5p，初始miR-4732-3p，前体miR-4732-3p，以及成熟miR-4732-3p。
在具体实施方案中，初始miR-151a-5p，初始miR-191-5p，以及初始miR-4732-3p能够在细胞内被剪切并表达成相应的成熟miR-151a-5p，成熟miR-191-5p，成熟miR-4732-3p；前体miR-151a-5p，前体miR-191-5p，以及前体miR-4732-3p能够在细胞内被剪切并表达成相应的成熟miR-151a-5p，成熟miR-191-5p，成熟miR-4732-3p。
在另一具体实施方案中，本申请所涉及的miRNA标记物来自受试者的循环血外泌体。
相对现有的分子标记，本申请所提供的miRNA分子标记物能够准确地筛查、预测、诊断或预后胆管癌的发生和发展，具有快速、稳定的特点。
基于本申请所提供的miRNA分子标记物而制备的产品或工具，例如试剂盒、微阵列、生物芯片或其他类似的检测工具，可以通过对受试者循环血的快速检测对胆管癌进行筛查、预测、诊断或预后。本申请所提供的方法及其相关产品具有较高的特异性、灵敏度和准确性。
附图说明
图1为胆管癌病人循环血外泌体中校准后的miRNA整体表达量。
图2为胆管癌病人循环血外泌体中高表达的miRNA表达量。
图3为扩大样本进一步检测胆管癌病人循环血外泌体中高表达的miRNA表达量。
图4为高表达的miRNA在胆管癌病人手术后的循环血外泌体中的表达量。
图5为高表达的miRNA预测胆管癌的准确率。
具体实施方案
胆管癌是一种重要的胆道恶性肿瘤，针对胆管癌特异的miRNA鲜有报道，特别是对胆管癌细胞分泌到循环血中的外泌体miRNA的鉴定仍是空白。
本申请发明人首次筛选并验证了利用循环血外泌体中的miRNA预测胆管癌的发生与发展。
具体而言，本申请发明人基于中国人群(汉族为主)的样本，通过高通量测序，意外发现了一批胆管癌病人循环血外泌体中特异高表达的miRNA。
进一步地，本申请发明人通过扩大规模验证了胆管癌病人血液外泌体中miR-151a-5p，miR-191-5p以及miR-4732-3p的水平显著高于正常人血液外泌体中miR-151a-5p，miR-191-5p以及miR-4732-3p的水平，并且在手术后胆管癌病人循环血外泌体中miR-151a-5p，miR-191-5p以及miR-4732-3p的水平显著降低，表明循环血外泌体中miR-151a-5p，miR-191-5p以及miR-4732-3p可以作为胆管癌筛查、预测、诊断或预后的标记物，为预防或治疗胆管癌的临床方案制定提供基础。例如，若受试者循环血外泌体miR-151a-5p，miR-191-5p或miR-4732-3p中任一种或多种的表达量升高，则可以判断受试者具有患胆管癌的风险或已患有胆管癌；若经治疗后的胆管癌病人循环血外泌体miR-151a-5p，miR-191-5p或miR-4732-3p中任一种或多种的表达量降低，则可以判断胆管癌病人治疗效果好或未复发。
基于此，本申请发明人开发了可用于快速、准确地对胆管癌进行筛查、预测、诊断或预后的产品或工具，包括试剂盒、微阵列、生物芯片或其他类似的检测工具。
为了更好地理解本申请的内容，下面将结合具体实施例和附图作进一步说明。应当理解的是，这些实施例仅用于对本申请进一步说明而非限制本申请的范围。此外，在阅读了本申请所述的内容后，本领域技术人员对本申请所作出的一些非实质性的改动或调整，仍落入本申请的保护范围。
下列实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为本领域的常规实验方法。
实施例1
本实施例提供了通过高通量测序鉴定胆管癌病人循环血外泌体中特异高表达的miRNA。具体方法请参见：Xue Xinying，et al.,Exosomal miRNA profiling before andafter surgery revealed potential diagnostic and prognostic markers for lungadenocarcinoma，Acta Biochim Biophys Sin(Shanghai),Vol.52,No.3,Pages 281-293,2020。
采样的病人信息如表1所示。
表1
Figure BDA0002626780810000041
胆管癌病人循环血外泌体中校准后的miRNA整体表达量如图1所示。
结果表明，在胆管癌病人循环血外泌体中高表达的miRNA包括：miR-1-3p，miR-96-5p，miR-151a-5p，miR-191-5p，miR-192-5p，miR-182-5p，NC_000010.11_21778，miR-4732-3p，miR-26a-5p以及miR-146b-5p，具体数据请参见图2。
实施例2
本实施例通过扩大样本进一步验证实施例1所鉴定的胆管癌病人循环血外泌体中高表达的miRNA。
具体地，通过对比40名正常人和45名胆管癌病人血液外泌体中miR-151a-5p，miR-191-5p以及miR-4732-3p的水平，发现胆管癌病人血液外泌体中miR-151a-5p，miR-191-5p以及miR-4732-3p显著高于正常人血液外泌体中miR-151a-5p，miR-191-5p以及miR-4732-3p的水平，如图3所示。
实施例3
本实施例进一步检测了胆管癌病人在接受手术治疗之后，其循环血外泌体中miR-151a-5p，miR-191-5p以及miR-4732-3p的表达量。
胆管癌病人循环血外泌体中miR-151a-5p，miR-191-5p以及miR-4732-3p在手术后显著降低，如图4所示。
实施例4
本实施例评估了miR-151a-5p，miR-191-5p以及miR-4732-3p预测胆管癌的准确率和特异性，具体方法请参见：Xi Chen,et al.,Characterization of microRNAs inserum:a novel class of biomarkers for diagnosis of cancer and other diseases,Cell Research,No.10,Page997-1006,2008。
如图5所示，表明胆管癌病人循环血外泌体中miR-151a-5p，miR-191-5p以及miR-4732-3p预测胆管癌的特异性和准确率均较高，尤其是miR-151a-5p，其预测胆管癌的AUC为0.8694，是极好的预测模型。
上述说明并非对本申请的限制，本申请也并不限于上述举例。本技术领域的普通技术人员在本申请的实质范围内，做出的变化、改型、添加或替换，也应属于本申请的保护范围。

Claims (6)

1.来自循环血外泌体的miRNA标记物在制备用于筛查、预测或诊断胆管癌的试剂盒、微阵列或生物芯片中的用途，其中所述miRNA标记物为miR-151a-5p。
2.来自循环血外泌体的miRNA标记物在制备用于筛查、预测或诊断胆管癌的试剂盒、微阵列或生物芯片中的用途，其中所述miRNA标记物为miR-151a-5p和miR-191-5p。
3.特异性检测来自循环血外泌体的miRNA标记物的工具或试剂在制备用于筛查、预测或诊断胆管癌的试剂盒、微阵列或生物芯片中的用途，其中所述miRNA标记物为miR-151a-5p。
4.特异性检测来自循环血外泌体的miRNA标记物的工具或试剂在制备用于筛查、预测或诊断胆管癌的试剂盒、微阵列或生物芯片中的用途，其中所述miRNA标记物为miR-151a-5p和miR-191-5p。
5.如权利要求3或4所述的用途，其中所述工具或试剂包括能够特异性检测所述miRNA标记物的引物和/或探针。
6.如权利要求4所述的用途，其中用于特异性检测标记物miR-151a-5p的引物和/或探针序列为：ucgaggagcucacagucuagu；用于特异性检测标记物miR-191-5p的引物和/或探针序列为：caacggaaucccaaaagcagcug。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114990216B (zh) * 2022-05-31 2023-04-21 山东大学齐鲁医院 微小rna分子作为生物标记物在胆管癌预后中的应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019163900A1 (ja) * 2018-02-22 2019-08-29 国立大学法人大阪大学 Ｒｎａ修飾を利用した分析・診断法
WO2020058472A1 (en) * 2018-09-20 2020-03-26 Tamirna Gmbh Micro-rna signatures for the prediction of liver dysfunction

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014036429A1 (en) * 2012-08-31 2014-03-06 Aptamir Therapeutics, Inc. Mirna modulators of chronic visceral inflammation
KR102490804B1 (ko) * 2014-06-11 2023-01-20 도레이 카부시키가이샤 담도암 검출 키트 또는 디바이스 및 검출 방법
EP3239303A1 (en) * 2016-04-26 2017-11-01 Advanced Marker Discovery, S.L. In vitro method for identifying pancreatic cancer or intraductal papillary mucinous neoplasm of the pancreas
CN107475363B (zh) * 2017-06-26 2021-04-02 深圳大学 一种非小细胞肺癌的生物标记物组合、该生物标记物组合的筛选及其应用
CN107385035B (zh) * 2017-07-18 2021-01-08 深圳大学 与2型糖尿病视网膜病变相关的血清/血浆miRNA标志物及其应用
CN110564852A (zh) * 2019-08-06 2019-12-13 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所) 与人类多发性骨髓瘤相关的miRNAs表达图谱模型、构建方法及应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019163900A1 (ja) * 2018-02-22 2019-08-29 国立大学法人大阪大学 Ｒｎａ修飾を利用した分析・診断法
WO2020058472A1 (en) * 2018-09-20 2020-03-26 Tamirna Gmbh Micro-rna signatures for the prediction of liver dysfunction

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
94例肺癌合并其他原发恶性肿瘤生存分析;奥婷等;《解放军医学院学报》;20160129(第05期);432-436 *
Concomitant dysregulation of microRNAs miR-151-3p and miR-126 correlates with improved survival in resected cholangiocarcinoma;McNally ME等;《HPB (Oxford).》;20120704;第15卷(第4期);摘要 *
Elevation of miR-191-5p level and its potential signaling pathways in hepatocellular carcinoma: a study validated by microarray and in-house qRT-PCR with 1,291 clinical samples;Wu HY 等;《Int J Clin Exp Pathol》;20190401;第12卷(第4期);第1452页第2段，第1439页末段 *

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