CN111748513A - 一种炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基及其制备方法和产孢培养方法 - Google Patents

一种炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基及其制备方法和产孢培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基及其制备方法和产孢培养方法，每1000mL该培养基中含有燕麦片25‑35g和硫酸铵1‑3g；该培养基的制备方法包括：取燕麦片，向其中加水，于沸水浴中煎煮50‑80min，过滤，得滤液，向滤液中加水补足1000mL，得培养液；将硫酸铵加入该培养液中，搅拌均匀，调pH值为7.0‑8.5，灭菌制得。采用该培养基进行产孢的方法为：将供试菌活化并制取菌饼，将菌饼移入上述制得的培养基中；将含有菌饼的培养基于25‑32℃、半光照半黑暗、120‑130r/min振荡条件下培养。该培养基和产孢方法可有效解决现有的培养基和产孢方法存在的产孢量少，产孢时间长的问题。

Description

一种炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基及其制备方法和产 孢培养方法
技术领域
本发明涉及培养基技术领域，具体涉及一种炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基及其制备方法和产孢方法。
背景技术
植物炭疽病是我国作物、果蔬及观赏植物等普遍发生的一类病害，主要由炭疽菌属病原菌导致。炭疽菌分类归为子囊菌门、粪壳菌纲、肉座菌亚纲目小丛壳科、小丛壳属。炭疽菌属真菌在我国分布广泛，从东北到海南省均有分布，多种植物可以作为其寄主，具有广泛寄生性。该菌常为害植物叶、花、果、茎及嫩枝，引发各种农作物的炭疽病，造成叶斑、叶枯、花腐、果腐和枝枯等症状，影响植物的生长发育，降低作物品质，严重时可造成落花、落果，甚至植株死亡，导致农作物减产。
高粱炭疽病是一种世界范围发生的病害，1852年高粱炭疽病在意大利首次被报道。目前，高粱炭疽病在我国高粱产区也普遍发生，它已成为高粱生产上最主要的叶部病害之一，苗期可危害叶片，导致叶枯、死苗，成株期主要危害叶片，可侵染茎秆、穗枝梗和籽粒，严重时可减产50％以上或造成毁灭性灾害。高粱炭疽菌属无性菌类腔孢纲黑盘孢目炭疽菌属。国内外对高粱炭疽菌的鉴定所用的培养基均为PDA培养基，但PDA培养基分离获得的病菌产孢量较少，是制约研究高粱炭疽病的瓶颈。为顺利进行后续的孢子萌发条件、侵染过程、病害防治药剂筛选，品种鉴定等研究，因此，掌握高粱炭疽病菌分生孢子大量产生的方法是关键的问题。
发明内容
针对现有技术中的上述不足，本发明提供了一炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基及其制备方法和产孢方法，该培养基和产孢方法可有效解决现有的培养基和产孢方法存在的产孢量少的问题。
为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基，每1000mL培养基包括以下组分：燕麦25-35g，硫酸铵1-3g，余量为水。
进一步地，每1000mL培养基包括以下组分：燕麦30g份，硫酸铵2g，余量为水。
上述方案所产生的有益效果为：该培养基的成分简单，原料易得，原料成本低廉。培养基与孢子产生关系较大，采用不同的培养基或改变培养基的成分是促进孢子产生最主要的途径。燕麦中的营养物质不同于马铃薯，其中的营养物质成份更适合高粱刺盘孢的生长发育。
上述的炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基的制备方法，包括以下步骤：
(1)取燕麦片，向其中加水，于沸水浴中煎煮50-80min，过滤，得滤液，向滤液中加水补足1000mL，得培养液；
(2)将硫酸铵加入步骤(1)中的培养液中，搅拌均匀，调pH值为7.0-8.5，灭菌，制得。
进一步地，步骤(1)中的水浴煎煮时间为60min。
进一步地，步骤(2)中pH值为8.0。
进一步地，具体灭菌条件为：在高压湿热灭菌锅中，于121℃条件下灭菌20min。
采用上述培养基进行炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养方法，包括以下步骤：将炭疽病菌高粱刺盘孢加入上述培养基中，于25-32℃、120-130r/min，半光照半黑暗条件下进行培养。
进一步地，还包括对炭疽病菌高粱刺盘孢进行活化的过程。
进一步地，步骤(2)中在30℃、125r/min、半黑暗半光照条件下培养。
上述方案所产生的有益效果为：在半光照半黑暗、振荡条件下培养，可快速诱导产孢，在较短的时间内便可获得大量孢子，以供研究所需，具体半光照半黑暗培养过程为：每天有12小时处于光照条件下培养，另外12小时处于黑暗条件下培养。
本发明所产生的有益效果为：
本发明中的培养基原料简单易得，成本低廉；制备过程简单易于操作，制备成本低；采用本方法制得的培养基对炭疽病菌高粱刺盘孢进行培养，可以快速诱导炭疽病菌高粱刺盘孢产孢，具有产孢量大的优点。
具体实施方式
实施例1
一种炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基，每1000mL培养基包括以下组分：燕麦片25g和硫酸铵1g。
上述炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基的制备方法包括以下步骤：
(1)取燕麦片，向其中加水，于沸水浴中煎煮50min，过滤，得滤液，向滤液中加水补足1000mL，得培养液；
(2)将硫酸铵加入步骤(1)中的培养液中，搅拌均匀，调pH值为7.0，灭菌，制得。
采用上述培养基进行炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养方法，包括以下步骤：
(1)将高粱炭疽菌在PDA平板上于30℃常规条件下培养5天，然后在无菌条件下用打孔器从菌落边缘打取直径为5mm的菌饼，将菌饼移入上述方法制得的培养基中；
(2)将步骤(1)中含有菌饼的培养基于25℃、半黑暗半光照和120r/min振荡条件下培养8天。
实施例2
一种炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基，每1000mL培养基包括以下组分：燕麦片35g和硫酸铵3g。
上述炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基的制备方法包括以下步骤：
(1)取燕麦片，向其中加水，于沸水浴中煎煮80min，过滤，得滤液，向滤液中加水补足1000mL，得培养液；
(2)将硫酸铵加入步骤(1)中的培养液中，搅拌均匀，pH值为8.5，灭菌，制得。
采用上述培养基进行炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养方法，包括以下步骤：
(1)将高粱炭疽菌在PDA平板上于30℃常规条件下培养5天，然后在无菌条件下用打孔器从菌落边缘打取直径为5mm的菌饼，将菌饼移入上述方法制得的培养基中；
(2)将步骤(1)中含有菌饼的培养基于32℃、半黑暗半光照和130r/min振荡条件下培养8天。
实施例3
一种炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基，每1000mL培养基包括以下组分：燕麦片30g和硫酸铵2g。
上述炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基的制备方法包括以下步骤：
(1)取燕麦片，向其中加水，于沸水浴中煎煮60min，过滤，得滤液，向滤液中加水补足1000mL，得培养液；
(2)将硫酸铵加入步骤(1)中的培养液中，搅拌均匀，调pH值为8.0，灭菌，制得。
采用上述培养基进行炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养方法，包括以下步骤：
(1)将高粱炭疽菌在PDA平板上于30℃常规条件下培养5天，然后在无菌条件下用打孔器从菌落边缘打取直径为5mm的菌饼，将菌饼移入上述方法制得的培养基中；
(2)将步骤(1)中含有菌饼的培养基于30℃、半黑暗半光照和125r/min振荡条件下培养8天。
对比例1
一种炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基，每1000mL培养基包括以下组分：燕麦片30g和硫酸铵0.5g。
上述炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基的制备方法包括以下步骤：
(1)取燕麦片，向其中加水，于沸水浴中煎煮30min，过滤，得滤液，向滤液中加水补足1000mL，得培养液；
(2)将硫酸铵加入步骤(1)中的培养液中，搅拌均匀，调pH值为6.0，灭菌，制得。
采用上述培养基进行炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养方法，包括以下步骤：
(1)将高粱炭疽菌在PDA平板上于35℃常规条件下培养5天，然后在无菌条件下用打孔器从菌落边缘打取直径为5mm的菌饼，将菌饼移入上述方法制得的培养基中；
(2)将步骤(1)中含有菌饼的培养基于30℃、半黑暗半光照和125r/min振荡条件下培养8天。
对比例2
一种炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基，每1000mL培养基包括以下组分：燕麦片30g和硫酸铵5g。
上述炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基的制备方法包括以下步骤：
(1)取燕麦片，向其中加水，于沸水浴中煎煮90min，过滤，得滤液，向滤液中加水补足1000mL，得培养液；
(2)将硫酸铵加入步骤(1)中的培养液中，搅拌均匀，pH值为9.0，灭菌，制得。
采用上述培养基进行炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养方法，包括以下步骤：
(1)将高粱炭疽菌在PDA平板上于30℃常规条件下培养5天，然后在无菌条件下用打孔器从菌落边缘打取直径为5mm的菌饼，将菌饼移入上述方法制得的培养基中；
(2)将步骤(1)中含有菌饼的培养基于30℃、半黑暗半光照和125r/min振荡条件下培养8天。
对比例3
一种炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养方法，包括以下步骤：
(1)将高粱炭疽菌在PDA平板上于30℃黑暗条件下培养5天，然后在无菌条件下用打孔器从菌落边缘打取直径为5mm的菌饼，将菌饼移入PD液体培养基中；
(2)将步骤(1)中含有菌饼的PD液体培养基于30℃常规条件下培养8天。
对比例4
一种炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养方法，包括以下步骤：
(1)将高粱炭疽菌在PDA平板上于30℃常规条件下培养5天，然后在无菌条件下用打孔器从菌落边缘打取直径为5mm的菌饼，将菌饼移入SNA液体培养基中；
(2)将步骤(1)中含有菌饼的SNA液体培养基于30℃常规条件下培养8天。
对比例5
一种炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养方法，包括以下步骤：
(1)将高粱炭疽菌在PDA平板上于30℃常规条件下培养5天，然后在无菌条件下用打孔器从菌落边缘打取直径为5mm的菌饼，将菌饼移入PD液体培养基中；
(2)将步骤(1)中含有菌饼的PD液体培养基于30℃、半黑暗半光照和125r/min振荡条件下培养8天。
对比例6
一种炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基，每1000mL培养基包括以下重量份的组分：燕麦片30g和硫酸铵2g。
上述炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基的制备方法包括以下步骤：
(1)取燕麦片，向其中加水，于沸水浴中煎煮60min，过滤，得滤液，向滤液中加水补足1000mL，得培养液；
(2)将硫酸铵加入步骤(1)中的培养液中，搅拌均匀，调pH值为8.0，灭菌，制得。
采用上述培养基进行炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养方法，包括以下步骤：
(1)将高粱炭疽菌在PDA平板上于30℃常规条件下培养5天，然后在无菌条件下用打孔器从菌落边缘打取直径为5mm的菌饼，将菌饼移入上述方法制得的培养基中；
(2)将步骤(1)中含有菌饼的培养基于30℃常规条件下培养8天。
试验例
分别对实施例1-3和对比例1-5中培养后的产孢数量进行统计，具体结果见表1。
表1：产孢数量统计表
产孢数量(×10<sup>6</sup>个/mL)
实施例1 8.1
实施例2 6.6
实施例3 8.4
对比例1 1.1
对比例2 1.7
对比例3 0.23
对比例4 0.08
对比例5 0.9
对比例6 2.9
通过上表中的数据得知，按照本申请实施例1-3中的方法培养的炭疽病菌高粱刺盘孢的产孢数量均高于对比例1-6中的培养方法的产孢数量，尤其是按照实施例3中的培养的方法培养的产孢数量最高，产孢所需的时间最短。
将对比例1-2与实施例1-3中的数据进行对比可知，改变培养基中的制备参数和成分用量后，培养相同的时间后，对比例1-2中的产孢数量远远小于实施例1-3中的产孢数量，证明培养基的制备参数和原料用量均对炭疽病菌高粱刺盘孢的产孢量有影响。
将对比例3-4与实施例1-3中的数据进行对比可知，采用常规的培养方法和培养基对炭疽病菌高粱刺盘孢进行培养相同的时间，其产孢数量远远低于实施例1-3中的产孢数量，证明本发明中的培养基和产孢培养方法可以促进炭疽病菌高粱刺盘孢产孢。
将对比例5与实施例1-3和对比例3中的数据进行对比可知，改变培养基后，还采用本申请中的培养方法，其在相同培养时间内，对比例5中的产孢数量远远低于实施例1-3中的产孢数量，但是高于对比例3中的产孢数量，证明本申请中的培养基非常有利于炭疽病菌高粱刺盘孢产孢。
将对比例6与实施例1-3和对比例3-4中的数据进行对比可知，采用现有的培养方法和本申请中的培养基进行培养相同时间后，炭疽病菌高粱刺盘孢的产孢数量低于实施例1-3中的产孢数量，但是高于对比例3-4中的产孢数量，证明本申请中的培养方法有利于炭疽病菌高粱刺盘孢产孢。

Claims (7)

1.一种炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基，其特征在于，每1000mL培养基包括以下组分：燕麦片25-35g，硫酸铵1-3g，余量为水。
2.如权利要求1所述的炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基，其特征在于，每1000mL培养基包括以下组分：燕麦片30g份，硫酸铵2g，余量为水。
3.权利要求1或2中所述的炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取燕麦片，向其中加水，于沸水浴中煎煮50-80min，过滤，得滤液，向滤液中加水补足1000mL，得培养液；
(2)向步骤(1)的培养液中加入硫酸铵，搅拌均匀，调pH值为7.0-8.5，灭菌，制得。
4.如权利要求3所述的炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基的制备方法，其特征在于，步骤(1)中的水浴煎煮时间为60min。
5.如权利要求3所述的炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养基的制备方法，其特征在于，步骤(2)中pH值为8.0。
6.采用权利要求1或2中任一项所述的培养基进行炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：将炭疽病菌高粱刺盘孢加入权利要求1或2所述培养基中，于25-32℃、120-130r/min，半光照半黑暗条件下进行培养。
7.如权利要求6所述的炭疽病菌高粱刺盘孢高效产孢培养方法，其特征在于，还包括对炭疽病菌高粱刺盘孢进行活化的过程。
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