CN111733088B - 一种包含酿酒酵母的微生态复合添加剂及其应用 - Google Patents

一种包含酿酒酵母的微生态复合添加剂及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111733088B
CN111733088B CN202010519173.XA CN202010519173A CN111733088B CN 111733088 B CN111733088 B CN 111733088B CN 202010519173 A CN202010519173 A CN 202010519173A CN 111733088 B CN111733088 B CN 111733088B
Authority
CN
China
Prior art keywords
saccharomyces cerevisiae
mst01
vitamin
microecological
improve
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202010519173.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN111733088A (zh
Inventor
王磊
周怡
刘广
郭本月
魏万权
倪梦丽
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Qingdao Master Biological Technology Co ltd
Yantai University
Original Assignee
Qingdao Master Biological Technology Co ltd
Yantai University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Qingdao Master Biological Technology Co ltd, Yantai University filed Critical Qingdao Master Biological Technology Co ltd
Priority to CN202010519173.XA priority Critical patent/CN111733088B/zh
Publication of CN111733088A publication Critical patent/CN111733088A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111733088B publication Critical patent/CN111733088B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • C12N1/18—Baker's yeast; Brewer's yeast
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/163—Sugars; Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/174—Vitamins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/80—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for aquatic animals, e.g. fish, crustaceans or molluscs

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Fodder In General (AREA)
  • Feed For Specific Animals (AREA)

Abstract

本发明涉及功能微生物筛选与应用技术领域，具体提供了一种微生态复合添加剂及其在水产养殖中的应用。所述的微生态复合添加剂包含酿酒酵母MST01(Saccharomyces cerevisiae MST01)，保藏编号为CCTCC NO:M2020092，能够显著提高养殖动物对饲料的利用率，促进养殖动物生长，改善肉质，还能够提高水产动物免疫力，提高全周期存活率，可广泛应用于水产饲料领域。

Description

一种包含酿酒酵母的微生态复合添加剂及其应用
技术领域
本发明涉及功能微生物筛选技术领域，具体涉及一株酿酒酵母及其在水产养殖中的应用。
背景技术
随着水产品需求量的增加及水产品贸易的国际化发展，水产养殖业近年来发展突飞猛进。但是，水产养殖的集约化和高密度规模日益扩大，养殖环境的恶化和疾病的危害给水产养殖业带来了巨大的经济损失。
凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)由于适应盐度广泛，在我国水产养殖业中占有很大的比例。随着凡纳滨对虾养殖业的迅猛发展，凡纳滨对虾病害日益严重，抗生素成为传统的首选解决途径。然而，使用过量的抗生素不仅会对对虾肠道的正常菌群结构产生破坏作用，而且容易导致病原菌产生耐药性，耐药菌株经过水体或对虾进入人体，最终危害人体健康，这些现象已引起人们的高度关注。
基于细菌在生物种群中的重要作用及地位，许多学者将有活性的益生菌作为添加剂添加到饲料中，通过维持肠道菌群平衡来提高动物免疫力，进而起到防病抗病的效果。由于益生菌在水生生物体内既不会出现耐药性也不会产生残留，所以益生菌替代抗生素已成为众多学者的研究热点。研究表明，在饲料中添加益生菌不仅可以促进水生动物快速生长，提高存活率，而且可以通过增强水生动物的免疫力来降低疾病的发生率。益生菌的作用机理是建立有机体肠道内微生物群系，保护有机体免疫系统，进而提高有机体免疫力，增强有机体消化吸收能力。益生菌能够参与动物体内微生物平衡，直接通过增强动物对肠内有害微生物群落的抑制作用，或通过增强非特异性免疫功能来预防疾病，进而间接起到促进动物生长的作用，提高动物饲料的转化率。因此，近些年对于益生菌的筛选成为本领域内的研究热点，也对水产饲料配方的改进具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种微生态复合添加剂及其在水产养殖中的应用。所述的微生态复合添加剂包含酿酒酵母菌株，能够显著提高养殖动物对饲料的利用率，促进养殖动物生长，改善肉质，还能够提高水产动物免疫力，提高全周期存活率，可广泛应用于水产饲料领域。
本发明一方面提供了一种微生态复合添加剂，包含益生菌、益生元和复合维生素。
所述的益生菌为酿酒酵母MST01(Saccharomyces cerevisiae MST01)，于2020年4月29日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M2020092。
所述的益生元由低聚果糖和壳寡糖组成。
进一步优选，所述益生元中低聚果糖和壳寡糖的质量比为5-11：1。
所述的复合维生素由维生素A、维生素E、维生素C和维生素B6组成。
进一步优选，所述的微生态复合添加剂中各组分及其含量分别为：酿酒酵母MST01菌粉10-45g/kg，低聚果糖40-55g/kg，壳寡糖5-8g/kg，维生素A 20-25g/kg，维生素E15-21g/kg、维生素C 40-55g/kg和维生素B6 4-5.5g/kg。
进一步优选，所述的微生态复合添加剂中各组分及其含量分别为：酿酒酵母MST01菌粉45g/kg，低聚果糖40g/kg，壳寡糖6g/kg，维生素A 20g/kg，维生素E15g/kg、维生素C40g/kg和维生素B6 4g/kg。
所述菌粉中酿酒酵母MST01活菌量为109CFU/ml。
本发明还提供了上述微生态复合添加剂在水产饲料中的应用。
本发明的有益效果：
本发明筛选到的酿酒酵母MST01，能有效抑制副溶血弧菌、哈维氏弧菌等病原菌，减少养殖动物病害发生的几率，同时还能作为饲料添加剂，显著提高养殖动物对饲料的利用率，促进动物生长。
所述酿酒酵母MST01可作为益生菌应用于凡纳滨对虾的养殖生产过程中，对虾的存活生长都得到了显著提升，代表免疫力的各个血清中指标也都得到了明显提高，其中总抗氧化力提高了315.4％，血清中碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、超氧化物歧化酶的含量分别提高了81.6％、38.7％、20.4％；凡纳滨对虾肌肉的弹性和咀嚼性得到明显改善，分别提高了34.9％、30.8％；并且，凡纳滨对虾肌肉的脂肪酸组成也得到明显的优化，饱和脂肪酸含量降低了20.5％，而不饱和脂肪酸含量提高了21.8％，其中EPA和DHA的含量分别提高了23.2％和34.4％，凡纳滨对虾的肉质和营养价值都得到极大的提高。
酿酒酵母MST01还可应用于发酵豆粕的生产，能显著降低豆粕中抗营养因子的含量，提高豆粕的营养价值，其中单宁、植酸、胰蛋白酶抑制因子、大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白、蔗糖、棉子糖、水苏糖等抗营养因子的含量分别降低了40.2％、13.6％、87.2％、77.6％、55.1％、99.8％、99.1％、84.0％，效果非常显著。
酿酒酵母MST01还能有效改善养殖水体的水质，治理水污染。酿酒酵母MST01处理75天后，实验组养殖水体的透明度提高了93.3％，COD和NH4-N含量分别降低了24.3％和75.3％，效果非常显著。
此外，酿酒酵母MST01有良好的稳定性，30℃条件下保存一年活菌保留率仍超过85％。
本发明提供的包含酿酒酵母MST01的微生态复合添加剂能显著提高养殖动物对饲料的利用率，促进养殖动物生长，改善肉质，还能够提高水产动物免疫力，提高全周期存活率。通过在饲料中添加所述微生态复合添加剂，实验组凡纳滨对虾的肌肉咀嚼性和弹性都有明显的改善，分别提高了38.9％和38.7％；并且实验组凡纳滨对虾肌肉中不饱和脂肪酸含量提高了16.9％，饱和脂肪酸含量降低了15.0％，效果非常显著；实验组鲤鱼的增重率提高了48.2-57.9％(P<0.05)，鲤鱼肠道中胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的活力分别提高了28.5-48.0％、20.6-35.2％、34.8-58.7％。
具体实施方式
本发明实施例中选用的设备和试剂可以选自市售任意一种。对于实施例中所用到的具体方法或材料，本领域技术人员可以在本发明技术思路的基础上，根据已有的技术进行常规的替换选择，而不仅限于本发明实施例的具体记载。
其中实施例中选用的培养基，具体配方如下：
2216E海水培养基：蛋白胨5g，酵母浸出物1g，磷酸铁0.01g，海水1000ml，pH7.6-7.8，配制固体培养基加入15-20g的琼脂，121℃灭菌20min。
TSB培养基：胰蛋白胨大豆肉汤30g，氯化钠15g，蒸馏水1000ml，pH7.4-7.6，配制固体培养基加入15-20g的琼脂，121℃灭菌20min。
MRS培养基：蛋白胨10g，牛肉膏10g，葡萄糖20g，酵母粉5g，吐温-80lml，磷酸二氢钾2g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.15g，蒸馏水1000ml，pH6.2-6.4，加入15-20g的琼脂以配制固体培养基，115℃灭菌20min。
下面结合具体实施例进一步阐述本发明。
实施例1：菌株的分离、筛选与鉴定
1、样品：
采集于日照市某凡纳滨对虾养殖场，无菌操作摘取健康、活力强的对虾肠道，待后续分离。
2、筛选方法
取肠道样品放入研磨器，放入生理盐水，匀浆，低速离心，使样品中细菌充分散布于上层生理盐水中，10倍梯度稀释，分别接种于2216E、TSB和MRS固体培养基上，28℃培养24h-48h。选取均匀清晰的单菌落，划线纯化细菌。单菌落依此命名为MST01、MST02、MST03……、MST30。
以副溶血弧菌和哈维氏弧菌为指示菌，采用平板拮抗法筛选益生菌。在涂有指示菌的平板上点种待筛选的细菌菌液，28℃恒温培养，48h内观察点种区周围是否出现抑菌透明区或覆盖区。最终，申请人共筛选到10株病原拮抗菌对上述两种致病菌均有不同程度的抑制作用，具体结果如表1所示。
表1潜在益生菌株抑菌情况
Figure BDA0002531301540000031
Figure BDA0002531301540000041
从表1的数据可以看出，本发明筛选到的10株病原拮抗菌中菌株MST01对副溶血弧菌和哈维氏弧菌的综合抑菌能力最强。
4、菌株鉴定
1)菌落形态特征：将上述菌株MST01重新划线培养，菌落为圆形，浅黄色，隆起，光滑，湿润，革兰氏阳性，细胞为卵圆形或椭圆形，出芽生殖，可以初步确定是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。
2)提取上述菌株MST01的基因组DNA，利用PCR技术扩增16SrRNA序列，通过测序BLAST比对分析，其与已公布的多株酿酒酵母的16S rRNA序列相似度高达97％，鉴定证实菌株MST01为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，与生化鉴定结果一致。
3)将上述菌株MST01命名为酿酒酵母MST01(Saccharomyces cerevisiae MST01)，于2020年4月29日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M2020092。
实施例2酿酒酵母MST01对凡纳滨对虾生长、免疫及抗应激能力的影响
本实验设对照组和益生菌组，每组分别设置三个平行，每个平行200条凡纳滨对虾。以高温熟化的商业配合饲料为基础饲料。其中，对照组饲喂基础饲料，益生菌组饲喂含有107CFU/g酿酒酵母MST01的饲料。养殖实验持续56天，每日按虾体重的3-5％投喂，根据摄食量情况随时对投饵量进行调整，每天早晚各投喂一次，吸底排污一次。实验期间溶氧≥7mg/l，温度29±l℃，盐度21-22‰，pH 8.0±0.3。养殖实验结束后，对凡纳滨对虾进行计数并称重，计算其存活率、特定生长率、增重率等。尾静脉取血，测定总抗氧化力、血清碱性磷酸酶、血清酸性磷酸酶、血清超氧化物歧化酶活力等，具体结果见表2和表3。
表2酿酒酵母MST01对凡纳滨对虾生长和存活的影响
Figure BDA0002531301540000042
Figure BDA0002531301540000051
注：不同的字母表示差异显著(P＜0.05)。
表3酿酒酵母MST01对凡纳滨对虾免疫力的影响
对照组 益生菌组
总抗氧化力(U/ml) 2.92±0.34<sup>a</sup> 12.13±0.58<sup>b</sup>
血清碱性磷酸酶(金氏单位/100ml) 3.81±1.57<sup>a</sup> 6.92±1.83<sup>b</sup>
血清酸性磷酸酶(金氏单位/100ml) 9.54±1.06<sup>a</sup> 13.23±1.21<sup>b</sup>
血清超氧化物歧化酶(U/ml) 155.58±8.64<sup>a</sup> 187.34±5.39<sup>b</sup>
注：不同的字母表示差异显著(P＜0.05)。
从表2和3的数据可以看出，与对照组相比，添加了本发明提供的酿酒酵母MST01的益生菌组对虾的存活率、增重率、特定生长率分别提高了19.0％、38.0％、10.8％，饲料系数降低了42.5％，效果显著。此外，益生菌组对虾的总抗氧化力提高了315.4％，血清中碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、超氧化物歧化酶的含量分别提高了81.6％、38.7％、20.4％。从而说明，本发明提供的酿酒酵母MST01能显著提高对虾的存活率，促进对虾生长发育，提高对虾的免疫抗病能力，取得了意料不到的技术效果。
实施例3酿酒酵母MST01对凡纳滨对虾肌肉品质、脂肪酸组成的影响
在凡纳滨对虾饲料中添加酿酒酵母MST01,采用质构仪和气相色谱法分析喂养后对虾的肌肉质构和脂肪酸含量变化,研究酿酒酵母MST01对凡纳滨对虾肌肉品质的影响。
1、菌悬液制备
将酿酒酵母MST01以1％的接种量接种于营养培养基中，在37℃条件下静置培养20h，培养后4000r/min离心15min，无菌生理盐水洗涤3次，重悬于无菌生理盐水中，调整菌悬液浓度为109CFU/mL。
2、含菌饲料制备
将处理好的菌悬液加入到商业对虾饲料中混匀，最终菌浓度为107CFU/g饲料，对照组用等量无菌生理盐水与饲料混合。配制完成的饲料在室温自然晾干后于4℃密封储存。
3、凡纳滨对虾幼虾分组与饲养
本实验设对照组和益生菌组，每组分别设置三个平行，每个平行30条凡纳滨对虾(初始体重2.18±0.03)。以高温熟化的商业配合饲料为基础饲料。其中，对照组饲喂基础饲料，益生菌组饲喂含有107CFU/g酿酒酵母MST01的饲料。实验在循环水系统中进行，实验持续30天，每日按虾体重的3-5％投喂，根据摄食量情况随时对投饵量进行调整，每天早晚各投喂一次，并吸底排污一次。实验期间溶氧≥6mg/l，温度27±l℃，盐度24-26‰，pH8.0±0.3。
3、肌肉质构分析和脂肪酸组成分析
饲养结束后将对虾饥饿处理1d后取样，利用质构仪对凡纳滨对虾肌肉第2腹节进行分析，测定对虾肌肉的硬度、弹性和咀嚼性，具体结果见表4。
肌肉中的总脂肪用氯仿-甲醇提取，将提取到的脂肪直接进行甲酯化，然后进行气相色谱分析，具体步骤如下：即取10mg样品，加0.6mL 0.5mol/L NaOH溶液，100℃水浴5min。冷却后加0.8mL 14％BF3/甲醇溶液，100℃水浴5min后冷却。加0.4mL正己烷，混匀30s后加2mL饱和食盐水，震荡离心后取上层有机溶剂层，进行气相色谱分析(Agilent,6890)，每组四个平行。气相色谱条件：美国Agilent公司HP-INNOWAX石英毛细管柱(19091N-113)，30m×0.320mm×0.25μm；进样口温：250℃；分流式进样，分流比20：1；进样量1μL；柱流速1mL/min；升温程序：170℃保留5min,以1.5℃/min升至220℃，保留5min；载气：N2。脂肪酸的组成情况详见表5。
4、结果分析
表4酿酒酵母MST01对凡纳滨对虾肌肉质构性质的影响
硬度(gf) 咀嚼性(mJ) 弹性(mm)
对照组 298.07±0.68a 98.00±3.56a 0.78±0.02a
益生菌组 367.58±1.22b 132.23±4.21b 1.02±0.03b
注：不同的字母表示差异显著(P＜0.05)。
从表4的结果可以看出，与对照组相比，在饲料中添加酿酒酵母MST01的益生菌组凡纳滨对虾的肌肉硬度、咀嚼性和弹性分别提高了23.3％、34.9％、30.8％，从而说明，本发明提供的酿酒酵母MST01能显著改善凡纳滨对虾的肉质，有助于提高凡纳滨对虾的品质和售价。
表5酿酒酵母MST01对凡纳滨对虾肌肉脂肪酸组成的影响
Figure BDA0002531301540000061
Figure BDA0002531301540000071
注：不同的字母表示差异显著(P＜0.05)。
从表5的结果可以看出，与对照组相比，在饲料中添加酿酒酵母MST01的益生菌组凡纳滨对虾肌肉中饱和脂肪酸含量降低了20.5％，而不饱和脂肪酸含量提高了21.8％，其中EPA和DHA的含量分别提高了23.2％和34.4％。从而说明，本发明提供的酿酒酵母MST01能显著改善凡纳滨对虾肌肉的脂肪酸组成，提高不饱和脂肪酸，尤其是EPA和DHA的含量，降低饱和脂肪酸含量，大大提高了凡纳滨对虾的营养价值。
实施例4酿酒酵母MST01在豆粕发酵中的应用
将酿酒酵母MST01以1％的接种量接种在营养培养基中，在37℃条件下静置培养20h，培养后确认菌的浓度达到108CFU/ml以上，然后将菌液以2％的添加量(ml/g)接种在市售普通豆粕中，加无菌水调整至最终水分40-42％。将混合物放于密闭发酵袋中，置于35℃环境下恒温发酵72小时。发酵完成后40℃低温烘干，然后检测发酵豆粕中的常规营养成分以及抗营养因子含量，具体结果见表6。
表6发酵前后豆粕中营养成分以及抗营养因子的变化
Figure BDA0002531301540000072
Figure BDA0002531301540000081
注：不同的字母表示差异显著(P＜0.05)。
从表6的结果可以看出，与普通豆粕相比，经过酿酒酵母MST01发酵后的发酵豆粕中粗蛋白和粗脂肪含量基本没有变化，而单宁、植酸、胰蛋白酶抑制因子、大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白、蔗糖、棉子糖、水苏糖等抗营养因子的含量分别降低了40.2％、13.6％、87.2％、77.6％、55.1％、99.8％、99.1％、84.0％，效果非常显著。从而说明，本发明提供的酿酒酵母MST01能显著降低豆粕中抗营养因子的含量，提高豆粕的营养价值，可广泛应用于发酵豆粕及其他发酵饲料的生产。
实施例5酿酒酵母MST01在改善养殖水体水质方面的应用
将酿酒酵母MST01以1％的接种量接种在营养培养基中，在37℃条件下静置培养20h，培养后确认菌的浓度达到108CFU/ml以上。
南美白对虾，体长1～1.2cm，来自日照市，暂养3d后用于试验。试验容器为200L圆桶。海水为砂滤海水，盐度28‰。
试验设空白对照组和酿酒酵母MST01实验组，其中实验组分别按0.5ml/L和1.0ml/L的比例添加上述酿酒酵母菌液。每个试验组设三个平行重复(桶)，每桶采用随机分配法加入南美白对虾100尾。试验过程中连续充气，控温26±0.5℃，历时80d；其间每7天加入一次经上述方式培养的培养液。共换水3次，每次换水约50％。饲养前期投喂卤虫、轮虫、微囊包膜饵料，后期投喂对虾配合饵料。
分别于第15天、35天、55天和第75天对养殖水体的透明度、COD、NH4-N、pH进行了测定，具体结果见表7。
表7酿酒酵母MST01对养殖水质化学指标的影响
Figure BDA0002531301540000082
Figure BDA0002531301540000091
从表7的结果可知，与空白对照组相比，添加酿酒酵母MST01的两个实验组养殖水体的透明度得到显著升高，COD和NH4-N含量显著降低，pH值无明显差异，其中酿酒酵母MST01处理75天后，实验组养殖水体的透明度提高了93.3％，COD和NH4-N含量分别降低了24.3％和75.3％，效果非常显著。从而说明，本发明筛选到的酿酒酵母MST01能显著改善养殖用水的水质，有利于保证养殖动物的健康生长，取得了意料不到的技术效果，可广泛应用于水体净化领域。
实施例6酿酒酵母MST01的稳定性测试
将酿酒酵母MST01以1％的接种量接种在营养培养基中，在37℃条件下静置培养20h，培养后确认菌的浓度达到108CFU/ml以上。以冷冻干燥的方式制作成酿酒酵母MST01冻干菌粉，经测定，冻干菌粉中活菌数为7.8×109CFU/g。
将酿酒酵母MST01冻干粉放置在30℃培养箱中进行加速实验，每隔30天检测活菌存活量，连续监测360天。
结果显示，本发明提供的酿酒酵母MST01在30℃条件下保存一年后，活菌保留率仍超过85％，从而说明酿酒酵母MST01的稳定性非常强，有利于延长产品的货架期，提高产品效果，取得了意料不到的技术效果。
综上，本发明筛选到的酿酒酵母MST01，能有效抑制副溶血弧菌、哈维氏弧菌等病原菌，减少养殖动物病害发生的几率，同时还能作为饲料添加剂，显著提高养殖动物对饲料的利用率，促进动物生长。所述酿酒酵母MST01可作为益生菌应用于凡纳滨对虾的养殖生产过程中，对虾的存活生长都得到了显著提升，代表免疫力的各个血清中指标也都得到了明显提高。酿酒酵母MST01对凡纳滨对虾肌肉弹性和咀嚼性有明显的改善作用，并且能显著改善凡纳滨对虾肌肉的脂肪酸组成，提高不饱和脂肪酸含量，降低饱和脂肪酸含量。酿酒酵母MST01还可以用于发酵豆粕，能显著降低豆粕中的单宁、胰蛋白酶抑制因子、大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白、蔗糖、棉子糖、水苏糖等抗营养因子的含量，提高豆粕的营养价值。此外，酿酒酵母MST01还能有效改善养殖水体的水质，治理水污染。加速贮存稳定性实验表明，酿酒酵母MST01有良好的稳定性，30℃条件下保存一年活菌保留率仍超过85％。
实施例7
一种微生态复合添加剂，每公斤添加剂中含有：酿酒酵母MST01菌粉10g，低聚果糖50g，壳寡糖5g，维生素A 25g，维生素E 20g、维生素C 50g和维生素B6 5.5g。
所述酿酒酵母MST01菌粉是通过冷冻干燥方法制作而成的，其中酿酒酵母MST01的活菌量约为109CFU/g。
实施例8
一种微生态复合添加剂，每公斤添加剂中含有：酿酒酵母MST01菌粉25g，低聚果糖55g，壳寡糖8g，维生素A 22g，维生素E 21g、维生素C 55g和维生素B6 4.5g。
所述酿酒酵母MST01菌粉是通过冷冻干燥方法制作而成的，其中酿酒酵母MST01的活菌量约为109CFU/g。
实施例9
一种微生态复合添加剂，每公斤添加剂中含有：酿酒酵母MST01菌粉45g，低聚果糖40g，壳寡糖6g，维生素A 20g，维生素E15g、维生素C 40g和维生素B6 4g。
所述酿酒酵母MST01菌粉是通过冷冻干燥方法制作而成的，其中酿酒酵母MST01的活菌量约为109CFU/g。
实施例10微生态复合添加剂对凡纳滨对虾肌肉品质、脂肪酸组成的影响
1、凡纳滨对虾幼虾分组与饲养
本实验设对照组和实验组，每组分别设置三个平行，每个平行30条凡纳滨对虾(初始体重2.18±0.03)。以高温熟化的商业配合饲料为基础饲料。其中，对照组饲喂基础饲料，实验组饲喂的饲料是在基础饲料中按2g/kg添加实施例7所述微生态复合添加剂。实验在循环水系统中进行，实验持续30天，每日按虾体重的3-5％投喂，根据摄食量情况随时对投饵量进行调整，每天早晚各投喂一次，并吸底排污一次。实验期间溶氧≥6mg/l，温度27±l℃，盐度24-26‰，pH8.0±0.3。
2、肌肉质构分析和脂肪酸组成分析
饲养结束后将对虾饥饿处理1d后取样,利用质构仪对凡纳滨对虾肌肉第2腹节进行分析，测定对虾肌肉的硬度、弹性和咀嚼性，具体结果见表8。肌肉中的总脂肪用氯仿-甲醇提取，将提取到的脂肪直接进行甲酯化，然后进行气相色谱分析，具体步骤如下：即取10mg样品，加0.6mL 0.5mol/L NaOH溶液，100℃水浴5min。冷却后加0.8mL14％BF3/甲醇溶液，100℃水浴5min后冷却。加0.4mL正己烷，混匀30s后加2mL饱和食盐水，震荡离心后取上层有机溶剂层，进行气相色谱分析(Agilent,6890)。每组四个平行。气相色谱条件：美国Agilent公司HP-INNOWAX石英毛细管柱(19091N-113)，30m×0.320mm×0.25μm；进样口温度：250℃；分流式进样，分流比20：1；进样量1μL；柱流速1mL/min；升温程序：170℃保留5min，以1.5℃/min升至220℃，保留5min；载气：N2。具体结果见表9。
3、结果分析
表8微生态复合添加剂对凡纳滨对虾肌肉质构性质的影响
硬度(gf) 咀嚼性(mJ) 弹性(mm)
对照组 287.27±0.45a 96.33±3.22a 0.75±0.14a
实验组 372.33±1.54b 133.76±2.35b 1.04±0.12b
注：不同的字母表示差异显著(P＜0.05)。
表9微生态复合添加剂对凡纳滨对虾肌肉脂肪酸组成的影响
脂肪酸 实验组 对照组
饱和脂肪酸ΣSFA 31.73±2.05b 37.32±1.44a
单不饱和脂肪酸ΣMUFA 15.08±1.37 15.77±0.14
多不饱和脂肪酸ΣPUFA 57.37±3.75b 47.04±1.65a
不饱和脂肪酸ΣUFA 75.13±2.11b 64.38±2.55a
注：不同的字母表示差异显著(P＜0.05)。
从表8和9的数据可以看出，与对照组相比，在饲料中添加本发明所述微生态复合添加剂的实验组凡纳滨对虾的肌肉咀嚼性和弹性都有明显的改善，分别提高了38.9％和38.7％；并且实验组凡纳滨对虾肌肉中不饱和脂肪酸含量提高了16.9％，饱和脂肪酸含量降低了15.0％，效果非常显著。从而说明，本发明提供的包含酿酒酵母MST01的微生态复合添加剂能有效改善凡纳滨对虾的肌肉品质及肌肉中脂肪酸的组成，取得了意料不到的技术效果。
实施例11微生态复合添加剂对鲤鱼生长、免疫、消化酶活力及水质的影响。
选用初始体重为26.32±0.88g的鲤鱼幼鱼，随机分配分为4组，每组设4个重复，每个重复50尾鱼。对照组(T0)：投喂基础饲料，实验组：在基础饲料中上按3‰质量比添加本发明所述微生态复合添加剂，其中T1添加实施例7中所述微生态复合添加剂，T2添加实施例8所述微生态复合添加剂，T3添加实施例9所述微生态复合添加剂。试验为期8周，期间水温25±2℃，溶氧保持在5.0mg/L以上。养殖实验结束后，随机选取25尾鱼，分别检测鲤鱼的增重率及肠道中胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的活力，具体结果见表10。
表10微生态复合添加剂对鲤鱼生长性能的影响
Figure BDA0002531301540000111
Figure BDA0002531301540000121
从表10的结果可以看出，与对照组相比，添加本发明所述微生态复合添加剂的实验组鲤鱼的增重率提高了48.2-57.9％(P<0.05)，鲤鱼肠道中胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的活力分别提高了28.5-48.0％、20.6-35.2％、34.8-58.7％。从而说明，本发明提供的包含酿酒酵母MST01的微生态复合添加剂能有效促进养殖动物生长，提高饲料利用率，效果显著。
综上，本发明提供的包含酿酒酵母MST01的微生态复合添加剂能显著提高养殖动物对饲料的利用率，促进养殖动物生长，并且能够提高水产动物免疫力，提高全周期存活率，同时还能净化养殖水体，并能提高养殖动物的肉质品质从而提高经济价值。有助于提高养殖户的经济效益，并保持养殖水体的洁净稳定，应用前景广阔。

Claims (8)

1.一种微生态复合添加剂，其特征在于，所述的复合添加剂包含益生菌、益生元和复合维生素；所述的益生菌为酿酒酵母MST01(Saccharomyces cerevisiae MST01)，其保藏编号为CCTCC NO:M 2020092。
2.如权利要求1所述的微生态复合添加剂，其特征在于，所述的益生元由低聚果糖和壳寡糖组成。
3.如权利要求2所述的微生态复合添加剂，其特征在于，所述的益生元中低聚果糖和壳寡糖的质量比为5-11：1。
4.如权利要求2或3所述的微生态复合添加剂，其特征在于，所述的复合维生素由维生素A、维生素E、维生素C和维生素B6组成。
5.如权利要求4所述的微生态复合添加剂，其特征在于，所述的微生态复合添加剂中各组分及其含量分别为：酿酒酵母MST01菌粉10-45g/kg，低聚果糖40-55g/kg，壳寡糖5-8g/kg，维生素A 20-25g/kg，维生素E 15-21g/kg、维生素C 40-55g/kg和维生素B6 4-5.5g/kg。
6.如权利要求5所述的微生态复合添加剂，其特征在于，所述的微生态复合添加剂中各组分及其含量分别为：酿酒酵母MST01菌粉45g/kg，低聚果糖40g/kg，壳寡糖6g/kg，维生素A20g/kg，维生素E 15g/kg、维生素C 40g/kg和维生素B6 4g/kg。
7.如权利要求5或6所述的微生态复合添加剂，其特征在于，所述菌粉中酿酒酵母MST01活菌量为109CFU/ml。
8.权利要求1-7任一所述的微生态复合添加剂在水产饲料中的应用。
CN202010519173.XA 2020-06-09 2020-06-09 一种包含酿酒酵母的微生态复合添加剂及其应用 Active CN111733088B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010519173.XA CN111733088B (zh) 2020-06-09 2020-06-09 一种包含酿酒酵母的微生态复合添加剂及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010519173.XA CN111733088B (zh) 2020-06-09 2020-06-09 一种包含酿酒酵母的微生态复合添加剂及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111733088A CN111733088A (zh) 2020-10-02
CN111733088B true CN111733088B (zh) 2021-05-28

Family

ID=72650037

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010519173.XA Active CN111733088B (zh) 2020-06-09 2020-06-09 一种包含酿酒酵母的微生态复合添加剂及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111733088B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115843921B (zh) * 2023-02-14 2023-07-04 成都铁骑力士饲料有限公司 一种降低湿糟渣在饲料应用中霉变的生物预处理方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101496822A (zh) * 2009-02-18 2009-08-05 上海谱莱生物技术有限公司 复合益生菌微生态制剂及制备方法
CN107574136A (zh) * 2017-10-30 2018-01-12 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 一种水产养殖用半固体微生态制剂的制备方法
CN108277163A (zh) * 2018-04-17 2018-07-13 宁波浮田生物技术有限公司 一种分离纯化裸藻藻种的方法
CN110692847A (zh) * 2019-11-15 2020-01-17 河南省科学院生物研究所有限责任公司 一种兔用无抗生素混合型饲料添加剂
CN110747139A (zh) * 2018-07-24 2020-02-04 仝丹丹 一种对虾抗应激的微生物制剂及其制备方法
CN110959750A (zh) * 2018-09-30 2020-04-07 安琪酵母股份有限公司 一种酵母细胞壁在渔用抗菌剂领域中的应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030235565A1 (en) * 2002-06-18 2003-12-25 Cheung Ling Yuk Feed additives for shrimp culture

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101496822A (zh) * 2009-02-18 2009-08-05 上海谱莱生物技术有限公司 复合益生菌微生态制剂及制备方法
CN107574136A (zh) * 2017-10-30 2018-01-12 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 一种水产养殖用半固体微生态制剂的制备方法
CN108277163A (zh) * 2018-04-17 2018-07-13 宁波浮田生物技术有限公司 一种分离纯化裸藻藻种的方法
CN110747139A (zh) * 2018-07-24 2020-02-04 仝丹丹 一种对虾抗应激的微生物制剂及其制备方法
CN110959750A (zh) * 2018-09-30 2020-04-07 安琪酵母股份有限公司 一种酵母细胞壁在渔用抗菌剂领域中的应用
CN110692847A (zh) * 2019-11-15 2020-01-17 河南省科学院生物研究所有限责任公司 一种兔用无抗生素混合型饲料添加剂

Also Published As

Publication number Publication date
CN111733088A (zh) 2020-10-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107047934A (zh) 利用枯草芽孢杆菌菌株以增强动物健康的方法
CN109749957B (zh) 一种具有水产病原菌拮抗特性的格氏乳杆菌制剂的制备及应用
EP2836082A2 (en) Microbial strains and their use in animals
CN105368749B (zh) 一株枯草芽孢杆菌及包含该菌株的饲料添加剂
CN111690558B (zh) 一株枯草芽孢杆菌菌株及其在水产养殖中的应用
CN116083262A (zh) 有水产病原菌拮抗特性的植物乳杆菌菌株及其制剂的制备及应用
CN111676145B (zh) 一株酿酒酵母及其在水产养殖中的应用
CN114540232B (zh) 有水产病原菌拮抗特性的鼠李糖乳杆菌及其制剂的制备及应用
CN114032196A (zh) 一种微生物制剂、其制备方法及应用
CN114651915A (zh) 一种提高免疫促进生长的后生元、制备方法及应用
CN111733088B (zh) 一种包含酿酒酵母的微生态复合添加剂及其应用
CN111676153B (zh) 一株植物乳杆菌及其在水产发酵饲料中的应用
CN107603901A (zh) 一种产黄曲霉素b1降解酶的枯草芽孢杆菌及其应用
CN113088468A (zh) 干酪乳杆菌Ma.GLRGJ 1及其应用
CN109321478B (zh) 一种降解霉菌毒素的菌株yk18及其应用
Jafaryan et al. Effects of bioencapsulated Daphnia magna with Saccharomyces cerevisiae on the growth and feeding performance of Persian sturgeon (Acipenser persicus) larvae
CN111676158B (zh) 一株乳酸片球菌及其在水产养殖中的应用
CN111685230B (zh) 一种包含屎肠球菌的微生物发酵剂及其在水产发酵饲料生产中的应用
CN111685229B (zh) 一种微生态复合添加剂及其在水产养殖中的应用
CN111690560B (zh) 一种屎肠球菌及其在水产养殖中的应用
CN114015626A (zh) 一种具有抑菌功能的类植物乳杆菌及其复合制剂及应用
CN111690573B (zh) 一种可用于动物肠道益生菌的希氏乳杆菌及其发酵制备的酵素和应用
Das et al. Inclusion of different levels of solid-state fermented mahua oil cake on growth, digestibility and immunological parameters of rohu (Labeo rohita)
CN111728081A (zh) 一种饲料添加剂用复合菌发酵液及其制备方法
SAHANDI et al. Effect of possible probiotic strains on suppression of Vibrio and enhancement of growth in rotifer, Brachionus plicatilis

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant