CN111685230B - 一种包含屎肠球菌的微生物发酵剂及其在水产发酵饲料生产中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及功能微生物筛选与应用技术领域，具体提供了一种包含屎肠球菌（Enterococcus faecium）的微生物发酵剂，并提供了其在水产发酵饲料生产中的应用。所述微生物发酵剂能显著降低饲料中抗营养因子的含量，提高发酵饲料的营养价值，进而有效促进水产动物生长，提高其免疫力和抗病能力。

Description

一种包含屎肠球菌的微生物发酵剂及其在水产发酵饲料生产中的应用
技术领域
本发明涉及功能微生物筛选技术领域，具体涉及一种包含屎肠球菌的微生物发酵剂及其在水产发酵饲料生产中的应用。
背景技术
1974年Parker首创益生菌一词，最早提出益生菌有利于肠道微生态平衡。目前普遍认为，益生菌的作用主要是改善动物新陈代谢、提高营养物质吸收利用率和免疫力、减少环境污染等。益生菌因具有无毒、无残留、无抗药性、无污染等特点，逐渐被广泛应用。
随着水产养殖业的发展和养殖强度的增加，水产动物病害爆发频繁。传统的抗生素药物虽然对治疗疾病有积极效用，但长期使用会产生巨大的负面效应：病原菌产生耐药性，效力下降；药物残留干扰水产动物肠道内有益微生物菌群的生长和繁殖，影响水产动物的健康；残留在水体中的抗生素破坏养殖生态环境，水产品质量下降。
自从Kozasa发现分离自土壤的芽抱杆菌可以提高养殖鳗鲡抵御爱德华氏弧菌(Edward siellatarda)的能力，有益微生物在水产养殖中的应用研究得到了快速发展。水产益生菌作用的发挥主要是通过调节肠道微生物群落结构，增强养殖生物对营养的吸收利用，进而促进其生长；或通过增强养殖生物非特异性免疫功能，从而提高其健康水平。目前应用于水产养殖上的益生菌种类很多，其中以芽孢杆菌属和酵母菌属的应用最为普遍。例如，2013年Mirbakhsh等在虾苗培养中使用枯草芽孢杆菌SI02和花域枯草芽孢杆菌IS03(B.vallismortis IS03)，提高了幼苗的生长率及成活率。2014年王芸等发现了一种分离自凡纳滨对虾的肠道的解淀粉芽孢杆菌SIP0902，该菌株对包括副溶血弧菌、鳗弧菌、溶藻弧菌等7种水产动物致病弧菌均具有较强的拮抗效果。2017年，荣克明等发现了一株酿酒酵母F2，该菌株能够降解氨氮，可在养殖水体中快速转化氨氮成蛋白质，同时产生大量菌体为水生动物提供饵料，维持水产动物肠道微生态平衡，提高水产动物存活率和产量。2019年薛明洋等发现了一种含有甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)对维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、爱德华氏菌、霉实假单胞菌、无乳链球菌均有抑菌效果，可应用于水产动物疾病的治疗。
水产用益生菌除了考虑益生菌在肠道内定殖以及定殖的时间外，还应注意其耐酸、耐盐、耐热等特性，这些因素均会影响益生菌的活性及作用效果。所以，筛选的益生菌应具有如下特点：(1)在低pH值和胆汁中可以存活，可在肠内定殖，竞争优势强；(2)易于获得，在体内易繁殖，体外易培养，不与病原菌杂交；(3)产生的抑菌物质对机体本身没有危害；(4)能够提高机体免疫力；(5)经高热加工后，益生菌活性好，稳定性高；(6)不带耐药因子或所含耐药因子少。
随着人们对水产品安全和品质的要求不断提高，以及水产养殖疾病问题日益突出，益生菌成了可以替代抗生素及化学药品，防止水产动物病害的最佳选择，所以筛选出适用于水产养殖的优质益生菌是当前急需解决的问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种包含屎肠球菌(Enterococcus faecium)的微生物发酵剂，并提供了其在水产发酵饲料生产中的应用。所述微生物发酵剂能显著降低饲料中抗营养因子的含量，提高发酵饲料的营养价值，进而有效促进水产动物生长，提高其免疫力和抗病能力。
本发明一方面提供了一种微生物发酵剂，包含益生菌、生物酶和保护剂。
所述的益生菌为屎肠球菌CD01(Enterococcus faecium CD01)，已于2020年4月29日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M2020088。
所述的生物酶由中性蛋白酶和植酸酶组成。
所述的保护剂由碳酸氢钠和磷酸二氢钾组成。
进一步优选的，所述的保护剂中碳酸氢钠、磷酸二氢钾的重量比为2-3:1。
所述的微生物发酵剂中各组分及其含量分别为：屎肠球菌CD01 1012-1013CFU/kg，中性蛋白酶800-1500万U/kg，植酸酶500-1000万U/kg，碳酸氢钠25-36g/kg，磷酸二氢钾10-15g/kg。
进一步优选的，所述的微生物发酵剂中各组分及其含量分别为：屎肠球菌CD011012CFU/kg，中性蛋白酶1500万U/kg，植酸酶800万U/kg，碳酸氢钠30g/kg，磷酸二氢钾15g/kg。
本发明还提供了上述微生物发酵剂在水产发酵饲料生产中的应用。
有益效果
本发明筛选到的屎肠球菌CD01对灿烂弧菌和副溶血弧菌两种致病菌具有很强的抑制效果；对青霉素、四环素、氯霉素、诺氟沙星敏感，而对庆大霉素表现耐药，对环丙沙星表现中等耐药；对酸碱的耐受性强。
所述屎肠球菌CD01可作为饲料添加剂，显著促进养殖动物生长，提高免疫力。与对照组相比，添加了屎肠球菌CD01的益生菌组中鲤鱼苗的增重率、SOD活力、LZM活力、POD活力、AKP活力、分别提高了61.9％、42.0％、64.3％、14.3％，同时应对副溶血弧菌攻毒试验的成活率提高了26.2％。
所述屎肠球菌CD01还可以应用于发酵饲料的生产。与对照组相比，饲喂屎肠球菌CD01发酵饲料的实验组对虾增重率和特定生长率分别提高了16.0％、24.2％，饵料系数降低了14.0％；而实验组对虾血液中超氧化物歧化酶、溶菌酶、过氧化物酶活力分别提高了31.9％、279.8％、21.7％，总抗氧化力提高了1.47倍。效果非常显著。
本发明筛选到的屎肠球菌CD01生长性能优秀，抗逆性强，能有效抑制病原菌，促进养殖动物生长，并且能够提高水产动物免疫力，提高全周期存活率，有助于提高养殖户的经济效益，在水产养殖中应用前景广阔。
本发明提供的包含屎肠球菌CD01的微生物发酵剂可广泛应用于发酵饲料的生产，能显著降低饲料中抗营养因子的含量，提高发酵饲料的营养价值。与普通豆粕相比，通过本发明所述微生物发酵剂发酵后的豆粕中单宁、植酸、胰蛋白酶抑制因子、大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白、棉子糖等抗营养因子的含量分别降低了54.1％、60.4％、87.2％、81.7％、65.7％、99.1％，而易被养殖动物消化吸收的酸溶蛋白含量增加了350.0％，效果非常显著。饲喂所述微生物发酵剂发酵后的饲料的实验组南美白对虾的增重率、特定生长率分别提高了18.51％、9.18％，而成活率提高了11.45％；而且实验组对虾的各个免疫指标均好于对照组。从而说明，本发明提供的包含屎肠球菌CD01的微生物发酵剂发酵后的饲料对南美白对虾的生长有显著的促进作用，可以有效提高南美白对虾的免疫力及抗病能力，因此可以广泛应用于水产养殖领域。
具体实施方式
本发明实施例中选用的设备和试剂可以选自市售任意一种。对于实施例中所用到的具体方法或材料，本领域技术人员可以在本发明技术思路的基础上，根据已有的技术进行常规的替换选择，而不仅限于本发明实施例的具体记载。
其中实施例中选用的培养基，具体配方如下：
MRS培养基：蛋白胨10g，牛肉膏10g，葡萄糖20g，酵母粉5g，吐温-80lml，磷酸二氢钾2g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.15g，蒸馏水1000ml，pH6.2-6.4，加入15-20g的琼脂以配制固体培养基，115℃灭菌20min。
营养肉汤培养基(1L)：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g。将以上成分加入蒸馏水中，定容到1000mL，加热溶解，调节pH为7.3±0.2；分装后121℃高压灭菌20min。(注：固体培养基在此基础上加1.5％琼脂粉)。
2216E海水培养基：蛋白陈5g，酵母浸出物1g，磷酸铁0.01g，海水1000ml，pH7.6-7.8，配制固体培养基加入15-20g的琼脂，121℃灭菌20min。
TSB培养基：胰蛋白胨大豆肉汤30g，氯化钠15g，蒸馏水1000ml，pH7.4-7.6，配制固体培养基加入15-20g的琼脂，121℃灭菌20min。
下面结合具体实施例进一步阐述本发明。
实施例1菌株的分离、筛选与鉴定
1、样品
采集于青岛市胶州市九龙镇中河道的鲫鱼。
2、筛选方法
将鲫鱼体表用无菌水冲洗后进行解剖，取出肠道，去除肠系膜等附着物，剪取有肠道内容物的肠道，然后加入2mL预冷的无菌生理盐水，充分匀浆，离心，取上清液10倍系列稀释。取原液、10-1、10-2三个稀释度的样品各100uL，进行MRS平板涂布，每个稀释梯度设置3个平行，35℃恒温培养48h。挑取生长良好的单菌落，并通过多次划线纯化，编号CD01、CD02、CD03……、CD18，纯化后的菌株用40％甘油和MRS液体培养基1:1制成菌悬液，-80℃保藏备用。
将活化好的菌株菌液稀释后在MRS平板上涂布，置于10℃、55℃培养观察生长情况；并在调节pH到pH4.0、pH9.6在MRS平板上涂布，置于35℃培养观察生长情况；同样在加入6.5％NaCl的MRS平板上涂布，置于35℃培养观察生长情况。通过生长观察比较试验，筛选出了CD01、CD04、CD06、CD07、CD11、CD14、CD15、CD17、CD18共9株较优秀的菌株。
以致病菌——灿烂弧菌(Vibrio splendidus)和副溶血弧菌(VibrioParahemolyticus)为指示菌，采用平板拮抗法筛选益生菌。在涂有指示菌的平板上点种待筛选的细菌菌液，28℃恒温培养，48h内观察点种区周围是否出现抑菌透明区或覆盖区，分别测量抑菌圈直径和菌落直径，评价各菌株的抑菌作用效果，具体结果见表1。
表1 待筛选菌株的抑菌情况
Figure BDA0002532404510000041
从表1的数据可以看出，本发明筛选到的9株菌对于灿烂弧菌和副溶血弧菌均有不同程度的抑制作用，其中CD01菌株对这两种致病菌的抑制效果最强。
3、菌株鉴定
(1)菌落生物学特性：
CD01菌株在MRS琼脂平板上生长性能良好，30h即可形成0.5-1mm大小乳白色圆形菌落；菌落圆整、光滑、隆起；生长增殖能力强，可兼性厌氧生长，在10℃-55℃范围内均能生长，最适生长温度28℃-40℃；生长酸碱度范围pH4-10，最适pH值是5.3-6.8。
CD01菌株部分生化特性如表2所示：
表2 CD01菌株的部分生化特性
Figure BDA0002532404510000051
注：“+”表示阳性反应，“-”表示阴性反应
(2)分子生物学鉴定
提取上述CD01菌株的基因组DNA，利用PCR技术扩增16SrRNA序列，将测序结果进行NCBI BLAST比对分析。结果显示，CD01菌株与已公布的多株屎肠球菌的16S rRNA序列相似度高达98.8％，鉴定证实为屎肠球菌(Enterococcus faecium)，与生化鉴定结果一致。
申请人将上述CD01菌株命名为屎肠球菌CD01(Enterococcus faecium CD01)，已于2020年4月29日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M 2020088。
实施例2屎肠球菌CD01耐酸碱性实验
将活化的屎肠球菌CD01以2％的接种量分别接种于pH2.5的盐酸溶液、pH10.0的氢氧化钠溶液及pH6.8的蒸馏水37℃静置培养取接0h，1h，2h，4h的培养液，分别作连续10倍稀释，从每一稀释度取0.1mL涂于MRS平板，观察生长情况并进行菌落计数，计算活菌保留率，具体结果见表3。
活菌保留率(％)＝(某h时的活菌量-0h时的活菌量)/0h时的活菌量×100％。
表3 屎肠球菌株CD01对不同pH环境的耐受性
Figure BDA0002532404510000061
从表3的结果可以看出，本发明提供的屎肠球菌CD01在pH2.5条件下孵育2h、4h后，活菌数仅有少量减少，活菌保留率超过95％；在pH10.0条件下孵育2h、4h后，活菌数维持在3.78×107CFU/mL，活菌保留率超过97％；而在pH6.8条件下孵育，屎肠球菌CD01的菌量增加了39.8％和103.1％。从而说明，本发明提供的屎肠球菌CD01对酸碱性条件具有很强的耐受性，为其广泛应用打下基础。
实施例3屎肠球菌CD01对不同抗生素敏感性试验
将MRS固体培养基融化后冷却至50℃，每30mL加入活化好的屎肠球菌CD01菌液0.5mL(约108CFU/mL)倾倒平板，待平板表面略干后，放入常见抗生素(青霉素、庆大霉素、四环素、氯霉素、诺氟沙星、环丙沙星)药敏纸片35℃培养，观察生长情况，测量抑菌圈直径。
表4 屎肠球菌株CD01对不同抗生素的敏感性试验结果
Figure BDA0002532404510000062
Figure BDA0002532404510000071
从表4的结果可以看出，本发明提供的屎肠球菌CD01对青霉素、四环素、氯霉素、诺氟沙星敏感，而对庆大霉素表现耐药，对环丙沙星表现中等耐药。
实施例4屎肠球菌CD01对鲤鱼生长、免疫及抗病力的影响
1、菌粉的制备
将屎肠球菌CD01进行活化，扩大培养，经液态发酵、离心、浓缩、冻干，制成活菌含量约为1010CFU/g的菌粉。
2、实验设计
实验设对照组和益生菌组，每组分别设置三个平行。每个平行鲫鱼苗30尾(初始体重6.98±0.14g)。其中，对照组以市售饲料为基础饲料，益生菌组是在基础饲料中按3.5‰添加上述屎肠球菌CD01菌粉，混合均匀投喂鲤鱼苗。养殖实验在室内循环水养殖系统开展，共进行30天，每天投饵两次，pH 7.6±0.4，水温20-22℃，溶氧充足。
养殖实验结束后，对鲤鱼进行计数并称重，计算其特定生长率。每组随机抽取3尾鱼。用100mL/L的丁香油麻醉，采用尾静脉采血法抽取鲤鱼血液，37℃静置1h，5000r/min离心10min，收集血清于-80℃保存；检测血清中的超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LZM)、过氧化氢酶(POD)、碱性磷酸酶(AKP)活力。以副溶血弧菌为病原菌，对鲤鱼进行腹腔注射，进行2周的观察，及时捞出死亡的鲤鱼苗，计算存活率。具体结果见表5。
表5 屎肠球菌CD01对鲤鱼生长、免疫及抗病力的影响
对照组 益生菌添加组
初始体重g 6.99±0.14 6.97±0.13
终末体重g 13.25±0.41 14.37±0.47
增重率％ <![CDATA[89.56±1.79<sup>a</sup>]]> <![CDATA[106.17±2.07<sup>b</sup>]]>
SOD活力mU/L <![CDATA[0.42±0.03<sup>a</sup>]]> <![CDATA[0.68±0.04<sup>b</sup>]]>
LZM活力mU/L <![CDATA[0.50±0.03<sup>a</sup>]]> <![CDATA[0.71±0.05<sup>b</sup>]]>
POD活力mU/L <![CDATA[0.28±0.02<sup>a</sup>]]> <![CDATA[0.46±0.04<sup>b</sup>]]>
AKP活力mU/L 0.49±0.05 0.56±0.04
存活率％ <![CDATA[67.8±5.1<sup>a</sup>]]> <![CDATA[85.6±1.9<sup>b</sup>]]>
注：不同的字母表示差异显著(P＜0.05)。
从表5的结果可以看出，与对照组相比，添加了屎肠球菌CD01的益生菌组中鲤鱼苗的增重率、SOD活力、LZM活力、POD活力、AKP活力、分别提高了61.9％、42.0％、64.3％、14.3％，同时应对副溶血弧菌攻毒试验的成活率提高了26.2％。从而说明本发明所述屎肠球菌CD01对鲤鱼苗的生长有显著的促进作用，并能有效提高鲤鱼苗的免疫力及抵抗副溶血弧菌的能力，因此可以作为益生菌广泛应用于鱼类的养殖生产过程中。
实施例5采用屎肠球菌CD01发酵的饲料对南美白对虾生长的影响
本实验设对照组和发酵饲料组，以市售的对虾商业配合饲料为基础饲料。其中，对照组饲喂基础饲料，发酵饲料处理如下：将屎肠球菌CD01以1％的接种量接种在营养肉汤培养基中，在35℃条件下静置培养20h,培养后确认菌的浓度达到108CFU/ml以上，然后将菌液以2％的接种量接种在基础饲料中，加无菌水调整至最终水分29-30％。将混合物装入呼吸发酵袋封口，置于35℃环境下恒温发酵96小时。发酵完成后具有特殊的发酵风味，冻存于-20℃冰箱。
每组分别设置三个平行，每个平行50尾凡纳滨对虾。养殖实验持续8周，每日按虾体重的3-4％投喂，根据摄食量情况随时对投饵量进行调整，对照组和发酵饲料组投喂饲料的干物质重保持一致；每天早晚各投喂一次，吸底排污一次。实验期间溶氧≥7mg/l，温度28±2℃，盐度20-22‰，pH 8.0±0.3。养殖实验结束后，对凡纳滨对虾进行计数并称重，计算其存活率、特定生长率、增重率等。每平行取15—20尾虾！用无菌注射器插入心脏取血，离心后移出血清分装保存备用；采用试剂盒测定血清超氧化物歧化酶、溶菌酶、过氧化物酶活力及总抗氧化力等。具体结果见表6和表7。
表6 屎肠球菌CD01发酵的饲料对南美白对虾生长和存活的影响
对照组 发酵饲料组
初始体重g 1.42±0.05 1.41±0.05
终末体重g 5.95±0.30 6.49±0.24
存活率％ <![CDATA[86.67±4.16<sup>a</sup>]]> <![CDATA[96.67±2.31<sup>b</sup>]]>
增重率％ <![CDATA[319.05±21.79<sup>a</sup>]]> <![CDATA[370.09±15.36<sup>b</sup>]]>
特定生长率％ <![CDATA[2.36±0.08<sup>a</sup>]]> <![CDATA[2.93±0.06<sup>b</sup>]]>
饵料系数 <![CDATA[1.57±0.10<sup>a</sup>]]> <![CDATA[1.35±0.07<sup>b</sup>]]>
注：不同的字母表示差异显著(P＜0.05)。
表7 屎肠球菌CD01发酵的饲料对南美白对虾免疫力的影响
对照组 发酵饲料组
超氧化物歧化酶活力 <![CDATA[204.42±17.03<sup>a</sup>]]> <![CDATA[269.68±23.04<sup>b</sup>]]>
溶菌酶活力 <![CDATA[1.24±0.93<sup>a</sup>]]> <![CDATA[4.71±2.05<sup>b</sup>]]>
过氧化物酶活力 57.57±2.32 70.08±1.03
总抗氧化力 <![CDATA[3.46±0.65<sup>a</sup>]]> <![CDATA[8.56±0.74<sup>b</sup>]]>
注：不同的字母表示差异显著(P＜0.05)。
从表6和表7的结果可以看出，与对照组相比，饲喂屎肠球菌CD01发酵饲料的实验组对虾增重率和特定生长率分别提高了16.0％、24.2％，饵料系数降低了14.0％；而实验组对虾血液中超氧化物歧化酶、溶菌酶、过氧化物酶活力分别提高了31.9％、279.8％、21.7％，总抗氧化力提高了1.47倍。从而说明，本发明提供的屎肠球菌CD01能显著促进养殖动物的存活生长，提高了养殖动物的免疫力和抗病能力，取得了意料不到的技术效果。
综上，本发明筛选到的屎肠球菌CD01，生长性能优秀，抗逆性强，能有效抑制病原菌，能作为饲料添加剂促进养殖动物生长，并且能够提高水产动物免疫力，提高全周期存活率，有助于提高养殖户的经济效益，在水产养殖中应用前景广阔。
实施例6
一种微生物发酵剂，其各组分及其含量分别为：屎肠球菌CD01 1012CFU/kg，中性蛋白酶1000万U/kg，植酸酶1000万U/kg，碳酸氢钠25g/kg，磷酸二氢钾10g/kg。
实施例7
一种微生物发酵剂，其各组分及其含量分别为：屎肠球菌CD01 1012CFU/kg，中性蛋白酶1500万U/kg，植酸酶800万U/kg，碳酸氢钠30g/kg，磷酸二氢钾15g/kg。
实施例8
一种微生物发酵剂，其各组分及其含量分别为：屎肠球菌CD01 1013CFU/kg，中性蛋白酶800万U/kg，植酸酶500万U/kg，碳酸氢钠36g/kg，磷酸二氢钾12g/kg。
实施例9微生物发酵剂发酵豆粕对豆粕营养价值的改善
按0.5％的质量比将实施例6所述微生物发酵剂加水溶解后接种到普通市售豆粕中，加无菌水调整至最终水分40-42％。将混合物放于密闭发酵袋中，置于35℃环境下恒温发酵72小时。发酵完成后40℃低温烘干，然后检测常规营养成分以及抗营养因子含量变化，具体结果见表8。
表8 发酵前后豆粕营养成分以及抗营养因子的变化
普通豆粕 发酵豆粕
粗蛋白(g/100g) 54.62 54.68
粗脂肪(g/100g) 2 2
酸溶蛋白(％) 4.2 18.9
单宁(mg/kg) 2683.72 1230.56
植酸(mg/g) 27.01 10.69
胰蛋白酶抑制因子(mg/g) 2.81 0.36
大豆球蛋白(mg/g) 168.35 30.73
β-伴大豆球蛋白(mg/g) 190.20 65.31
棉子糖(g/100g) 1.14 0.01
从表1的结果可以看出，与普通豆粕相比，通过本发明所述微生物发酵剂发酵后的豆粕中单宁、植酸、胰蛋白酶抑制因子、大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白、棉子糖等抗营养因子的含量分别降低了54.1％、60.4％、87.2％、81.7％、65.7％、99.1％，而易被养殖动物消化吸收的酸溶蛋白含量增加了350.0％，极大提高豆粕的营养价值，效果非常显著。
实施例10微生物发酵剂发酵饲料对南美白对虾生长性能的影响
实验设对照组和实验组，每组分别设置三个平行。每个平行50尾南美白对虾。其中，对照组以高温熟化的商业配合饲料为基础饲料，实验组是在基础饲料中按0.5％质量比添加实施例7所述微生物发酵剂加水进行发酵处理，加无菌水调整至最终水分29％。将混合物放于密闭发酵袋中，置于35℃环境下恒温发酵96小时。
养殖实验在室内海水循环养殖系统开展，共进行8周，每日按虾体重的3-5％早晚各投喂一次，吸底排污一次。实验期间溶氧≥7mg/l，温度29±l℃，盐度21-22‰，pH 8.0±0.3。
养殖实验结束后，对南美白对虾进行计数并称重，计算其存活率、特定生长率、增重率等。每平行取15-20尾虾，用无菌注射器插入心脏取血，离心后移出血清分装保存备用；采用试剂盒测定血清超氧化物歧化酶、溶菌酶、过氧化物酶活力及总抗氧化力等，具体结果见表9和表10。
表9 微生物发酵剂发酵饲料对南美白对虾生长和存活的影响
对照组 发酵饲料组
初始体重g 1.46±0.05 1.45±0.05
终末体重g 6.15±0.31 6.97±0.25
存活率％ <![CDATA[87.33±3.06<sup>a</sup>]]> <![CDATA[97.33±1.15<sup>b</sup>]]>
增重率％ <![CDATA[321.23±21.79<sup>a</sup>]]> <![CDATA[380.69±15.36<sup>b</sup>]]>
特定生长率％ <![CDATA[2.57±0.08<sup>a</sup>]]> <![CDATA[2.80±0.06<sup>b</sup>]]>
饵料系数 <![CDATA[1.54±0.10<sup>a</sup>]]> <![CDATA[1.32±0.07<sup>b</sup>]]>
注：不同的字母表示差异显著(P＜0.05)。
表10 微生物发酵剂发酵饲料对南美白对虾免疫力的影响
对照组 发酵饲料组
超氧化物歧化酶活力 <![CDATA[200.48±16.87<sup>a</sup>]]> <![CDATA[272.64±22.15<sup>b</sup>]]>
溶菌酶活力 <![CDATA[1.25±0.97<sup>a</sup>]]> <![CDATA[4.86±1.85<sup>b</sup>]]>
过氧化物酶活力 56.94±2.62 60.81±1.67
总抗氧化力 <![CDATA[3.58±0.60<sup>a</sup>]]> <![CDATA[8.37±0.73<sup>b</sup>]]>
注：不同的字母表示差异显著(P＜0.05)。
从表9、表10的结果可以看出，与对照组相比，饲喂本发明所述微生物发酵剂发酵后的饲料的实验组南美白对虾的增重率、特定生长率分别提高了18.51％、9.18％，而成活率提高了11.45％；而且实验组对虾的各个免疫指标均好于对照组。从而说明，本发明提供的包含屎肠球菌CD01的微生物发酵剂发酵后的饲料对南美白对虾的生长有显著的促进作用，可以有效提高南美白对虾的免疫力及抗病能力，因此可以广泛应用于南美白对虾的养殖生产过程中。
综上，本发明提供的包含屎肠球菌CD01的微生物发酵剂能显著降低饲料中的抗营养因子含量，提高饲料的营养价值。经该发酵剂发酵后的饲料饲喂养殖动物，能显著提高养殖动物对饲料的利用率，促进生长，并且能够提高养殖动物的免疫力，应用前景广泛。

Claims (3)

1.一种用于制备水产发酵饲料的微生物发酵剂，其特征在于，所述的微生物发酵剂中各组分及其含量分别为：屎肠球菌（Enterococcus faecium）CD01 1012-1013CFU/kg，中性蛋白酶800-1500万U/kg，植酸酶500-1000万U/kg，碳酸氢钠25-36g/kg，磷酸二氢钾10-15g/kg；所述屎肠球菌CD01的保藏编号为CCTCC NO: M 2020088。
2.如权利要求1所述的微生物发酵剂，其特征在于，所述的微生物发酵剂中各组分及其含量分别为：屎肠球菌CD01 1012CFU/kg，中性蛋白酶1500万U/kg，植酸酶800万U/kg，碳酸氢钠30g/kg，磷酸二氢钾15g/kg。
3.权利要求1或2所述的微生物发酵剂在制备水产发酵饲料中的应用。
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