CN111704566A - 一种N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制备方法 - Google Patents

一种N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种N‑芴甲氧羰基‑γ‑（S‑三苯甲基‑半胱胺基）‑L‑谷氨酸的制备方法，主要解决原工艺中的复杂性，周期长，成本高，收率低等技术问题，本发明包括以下步骤：(1)、N‑芴甲氧羰基‑L‑谷氨酸的制备；(2)、N‑芴甲氧羰基‑L‑谷氨酸‑1‑苄酯的制备；(3)、S‑三苯甲基半胱胺的制备；(4)、N‑芴甲氧羰基‑γ‑（S‑三苯甲基‑半胱胺基）‑L谷氨酸‑α‑苄酯的制备；（5）、N‑芴甲氧羰基‑γ‑（S‑三苯甲基‑半胱胺基）‑L谷氨酸的制备。本发明具有快速、高产、分离和纯化简单，且使用的溶剂为对环境友好的溶剂，适合大批量生产。

Description

一种N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的 制备方法
技术领域
本发明涉及多肽合成、药物多肽等领域，具体涉及一种N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制备方法。
背景技术
目前现有技术中，N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸及其中间体的制备方法路线为：将谷氨酸通过侧链羧基苄基保护做成h-glu(obzl)- OH，再经过和z-基团反应得到z-glu(obzl)- OH，在通异丁烯反应制备得到z-glu(obzl)-otbu，再加氢裂解得到h-glu-otbu，在和fmoc-基团反应得到fmoc-glu-otbu，再和hosu反应做成fmoc-glu(osu)-otbu，再和先期做好的S-三苯甲基半胱胺反应制得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-otbu，最后再脱除叔丁基得到fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-COOH。此方案步骤繁琐，周期长，得率低，成本高，不适宜商业化生产。
发明内容
本发明技术目的在于克服原工艺中的复杂性，周期长，成本高，收率低等技术问题，提供了一种N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸及其中间体的制备方法，该方法简单易控制，反应周期较短，成本低，适宜于规模化生产。
为了达到上述发明目的，本发明采用的技术方案是：一种N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）、将谷氨酸加入水和丙酮的混合液中，再加入氢氧化钠搅拌，冰浴降温并加入氨基保护剂fmoc基团供体进行反应，TLC跟踪检测进程，后经过酸化萃取、水洗，盐水洗，制得到fmoc-glu-OH；
(2)、将fmoc-glu-OH和苄基供体混合于二甲基甲酰胺中，加入木瓜蛋白酶并加热反应,TLC跟踪监测反应进程，反应好后加水稀释，并经乙酸乙酯洗涤，在加醋酸乙酯和柠檬酸酸化萃取，并经水洗，盐水洗，浓缩加石油醚结晶制得fmoc-glu-obzl；
（3）、将2-巯基乙胺加入冰醋酸中，升温，之后加入三苯甲基供体物，之后缓慢加入三甲基氯硅烷，机械搅拌反应，之后降温至4-6℃，并用质量百分含量20%的醋酸钠水溶液调节体系pH值并搅拌结晶，之后将体系过滤，滤饼经水和乙醚冲洗，晾干后制备得到S-三苯甲基半胱胺；
（4）、将fmoc-glu-obzl加入THF中，机械搅拌并降温，之后加入缩合剂和三乙胺，之后再加入S-三苯甲基半胱胺反应，TLC跟踪监测反应进程，反应完后减压浓缩出去thf，之后加乙酸乙酯溶解，再经酸水洗、碱水洗，水洗，盐水洗，干燥，浓缩结晶得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-obzl；
（5）、将fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-obzl加入甲醇中，之后加入钯炭，并通氢气反应，TLC跟踪监测进程，反应完成后，过滤去钯炭，之后浓缩至干加少许醋酸乙酯溶解并加石油醚结晶，之后抽滤烘干得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-COOH，经NMR和MS验证，结构符合预期。
所述步骤（1），谷氨酸和fmoc-基团的物质的量比为1:（1-1.5），反应的温度为：10-20℃，反应时间为6-12h，所述的fmoc-基团供体为fmoc-osu、fmoc-CL或fmoc-NH2中的一种。优选fmoc-基团供体为fmoc-osu。
所述步骤（2），fmoc-glu-OH、苄基供体的物质的量比为：1:（1-1.6），反应温度为38-42℃，反应时间为22-26h，所述木瓜蛋白酶的用量为氨基酸质量的10%-15%，所述苄基供体为苯甲醇、溴化苄或氯化苄中的一种，优选溴化苄。
所述步骤（3），2-巯基乙胺、三苯甲基供体物和三甲基氯硅烷的物质的量比为1:（1-1.5）:（0.9-1.3），所述反应温度为30-50℃，所述反应时间为2-6h，所述三苯甲基供体物为三苯甲醇、三苯基溴甲烷或三苯基氯甲烷中的一种，优选三苯基溴甲烷。
所述步骤（4），fmoc-glu-obzl、缩合剂和S-三苯甲基半胱胺物质的量比的比为：1:（0.9-1.3）:（1-1.3），所述反应温度为5-15℃，所述反应时间14-18h，所述的缩合剂为HTBU、TBTU或HOBT中的一种，优选TBTU。
所述步骤（5），所加的钯炭用量为氨基酸重量的5%-15%，所述反应时间为12-24h。
所述TLC跟踪检测进程的条件：1）正丁醇:冰醋酸：水的体积比=4:1:1；2）三氯甲烷:甲醇:乙酸体积比=90:8:2。
本发明的有益效果：本发明制备方法通过先制备成价格低廉的fmoc-glu-obzl来代替价格昂贵的fmoc-glu-otbu，并最终制得N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸，此方法简单易控制，大大简化了工艺，降低了成本，缩短了周期，适用于大规模生产，本发明制得N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸收率高，质量也有明显的提高。
附图说明
图1为本发明实施例1产物的色谱图谱。
图2为本发明实施例1产物的质谱图谱。
图3为本发明实施例1产物的核磁图谱。
图4为本发明实施例2产物的色谱图谱。
图5为本发明实施例3产物的色谱图谱。
图6为本发明实施例4产物的色谱图谱。
图7为本发明实施例5产物的色谱图谱。
图8为本发明实施例6产物的色谱图谱。
图9为本发明实施例6产物的质谱图谱。
图10为本发明实施例6产物的核磁图谱。
图11为本发明实施例7产物的色谱图谱。
图12为本发明比较例产物的质谱图谱。
具体实施方式
下面结合具体实例对本发明进行详细的描述，但他们不是对本发明的进一步限制。
实验所用主要检测仪器：
1、岛津20A
2、检验条件：色谱柱：4.6*250㎜，sinoCHrom ODS-BP 5μm
3、检测波长：220nm
4、流动相：A： 0.1%质量百分浓度三氟乙酸溶液
B：0.1%质量百分浓度三氟乙酸乙腈混合溶液
5、流速：1.0ml/min
6、柱温：25℃
7、岛津：LCMS-2020质谱仪
8、瓦立安400兆核磁共振波普仪。
实施例1，
1.1、将100g（0.68mol）谷氨酸加入1L水和丙酮的混合液中，冰浴降温，再加入2N的氢氧化钠水溶液搅拌调节体系pH值为8-9，待温度小于5℃后，开始分批缓慢加入229g（0.68mol）的fmoc-osu，升温至10℃进行反应，TLC检测，反应12h后结束，后向体系中加入1L醋酸乙酯萃洗杂质3次，再加3L醋酸乙酯并加入盐酸酸化pH值为1-2，之后油相用1L酸水洗2次、1L水洗2次，1L盐水洗，无水硫酸钠干燥，之后浓缩结晶，抽滤制得到fmoc-glu-OH，烘干得到185.3g（73.8%，0.50mol）。
1.2、将185.3g（0.50mol）fmoc-glu-OH和85.5g（0.5mol）溴化苄混合于926ml的二甲基甲酰胺中，加入18.5g木瓜蛋白酶。之升温至42℃反应26h反应,TLC跟踪监测反应进程，反应好后加1L水稀释，再加入3L乙酸乙酯，乙酯相再用1.5L水洗3次，1.5L盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，之后浓缩加石油醚结晶制得fmoc-glu-obzl，烘干得102.1g（44.3%，0.22mol）。
1.3、将100g（1.3mol）2-巯基乙胺加入冰醋酸中，升温，之后加入628.8g（1.95mol）三苯基溴甲烷，之后缓慢加入126.8g（1.17mol）三甲基氯硅烷，机械搅拌下升温至30℃反应6h，之后降温至5℃，并用质量百分含量20%的醋酸钠水溶液调节体系pH值并搅拌结晶，之后将体系过滤，滤饼经水和乙醚冲洗，得到S-三苯甲基半胱胺，烘干得319.7g（77.2%，1mol）。
1.4、将102.1g（0.22mol）fmoc-glu-obzl加入THF中，机械搅拌并降温，之后加入63.6g（0.198mol）TBTU和三乙胺，之后再加入70.3g(0.22mol)S-三苯甲基半胱胺反应，控制温度在15℃下反应18h，TLC跟踪监测反应进程，反应完后减压浓缩出去THF，之后加3L乙酸乙酯溶解，用质量百分含量5%的柠檬酸水洗3次、质量百分含量5%的碳酸钠水洗3次，1.5L水洗2次，1.5L饱和盐水1洗，干燥，过滤，浓缩结晶得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-obzl，得到120g（71.2%，0.158mol）。
1.5、将120g（0.158mol）fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-obzl加入甲醇中，之后加入6g钯炭，常温下通氢气反应24h，TLC跟踪监测进程，之后过滤去钯炭，之后浓缩至干加少许醋酸乙酯溶解并加石油醚结晶，之后抽滤烘干得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)- COOH 81.1g（76.6%，0.12mol），经分析，符合预期。参见图1、图2、图3。
实施例2
2.1、将100g（0.68mol）谷氨酸加入1L水和丙酮的混合液中，冰浴降温，再加入2N的氢氧化钠水溶液搅拌调节体系pH值为8-9，待温度小于5℃后，开始分批缓慢加入286.6g（0.85mol）的fmoc-osu，升温至15℃进行反应，TLC检测，反应9h后结束，后向体系中加入1L醋酸乙酯萃洗杂质3次，再加3L醋酸乙酯并加入盐酸酸化pH值为1-2，之后油相用1L酸水洗2次、1L水洗2次，1L盐水洗，无水硫酸钠干燥，之后浓缩结晶，抽滤制得到fmoc-glu- OH，烘干得到206.8g（82.4%，0.56mol）。
2.2、将206.8g（0.56mol）fmoc-glu- OH和124.5g（0.73mol）溴化苄混合于1034ml的二甲基甲酰胺中，加入25.9g木瓜蛋白酶。之升温至40℃反应24h反应,TLC跟踪监测反应进程，反应好后加1L水稀释，再加入3L乙酸乙酯，乙酯相再用1.5L水洗3次，1.5L盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，之后浓缩加石油醚结晶制得fmoc-glu-obzl，烘干得147.1g（57.2%，0.32mol）。
2.3、将100g（1.3mol）2-巯基乙胺加入冰醋酸中，升温，之后加入525.2g（1.625mol）三苯基溴甲烷，之后缓慢加入155.3g（1.43mol）三甲基氯硅烷，机械搅拌下升温至40℃反应4h，之后降温至4℃，并用质量百分含量20%的醋酸钠水溶液调节体系pH值并搅拌结晶，之后将体系过滤，滤饼经水和乙醚冲洗，得到S-三苯甲基半胱胺，烘干得347.9g（84%，1.09mol）。
2.4、将147.1g（0.32mol）fmoc-glu-obzl加入THF中，机械搅拌并降温，之后加入113g（0.352mol）TBTU和三乙胺，之后再加入122.6g(0.384mol)S-三苯甲基半胱胺反应，控制温度在10℃下反应16h ，TLC跟踪监测反应进程，反应完后减压浓缩出去THF，之后加3L乙酸乙酯溶解，用质量百分含量5%的柠檬酸水洗3次、质量百分含量5%的碳酸钠水洗3次，1.5L水洗2次，1.5L饱和盐水1洗，干燥，过滤，浓缩结晶得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-obzl，得到184.9g（76.1%，0.24mol）。
2.5、将184.9g（0.24mol）fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-obzl加入甲醇中，之后加入18.5g钯炭，并通氢气反应18h，TLC跟踪监测进程，之后过滤去钯炭，之后浓缩至干加少许醋酸乙酯溶解并加石油醚结晶，之后抽滤烘干得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-COOH 137.9g（84.5%，0.2mol），经分析符合预期。参见图4。
实施例3
3.1、将100g（0.68mol）谷氨酸加入1L水和丙酮的混合液中，冰浴降温，再加入2N的氢氧化钠水溶液搅拌调节体系pH值为8-9，待温度小于5℃后，开始分批缓慢加入344g（1.02mol）的fmoc-osu，升温至20℃进行反应，TLC检测，反应6h后结束，后向体系中加入1L醋酸乙酯萃洗杂质3次，再加3L醋酸乙酯并加入盐酸酸化pH值为1-2，之后油相用1L酸水洗2次、1L水洗2次，1L盐水洗，无水硫酸钠干燥，之后浓缩结晶，抽滤制得到fmoc-glu-OH，烘干得到200.9g（82%，0.54mol）。
3.2、将200.9g（0.54mol）fmoc-glu-OH和147.8g（0.86mol）溴化苄混合于1004.5ml的二甲基甲酰胺中，加入30.1g木瓜蛋白酶。之升温至38℃反应22h反应,TLC跟踪监测反应进程，反应好后加1L水稀释，再加入3L乙酸乙酯，乙酯相再用1.5L水洗3次，1.5L盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，之后浓缩加石油醚结晶制得fmoc-glu-obzl，烘干得137.2g（54.9%，0.298mol）。
3.3、将100g（1.3mol）2-巯基乙胺加入冰醋酸中，升温，之后加入420.2g（1.3mol）三苯基溴甲烷，之后缓慢加入183.5g（1.69mol）三甲基氯硅烷，机械搅拌下升温至50℃反应2h，之后降温至6℃，并用质量百分含量20%的醋酸钠水溶液调节体系pH值并搅拌结晶，之后将体系过滤，滤饼经水和乙醚冲洗，得到S-三苯甲基半胱胺，烘干得338g（81.6%，1.06mol）。
3.4、将137.2g（0.298mol）fmoc-glu-obzl加入THF中，机械搅拌并降温，之后加入124.3g（0.387mol）TBTU和三乙胺，之后再加入123.7g(0.387mol)S-三苯甲基半胱胺反应，控制温度在5℃下反应14h ，TLC跟踪监测反应进程，反应完后减压浓缩出去THF，之后加3L乙酸乙酯溶解，用质量百分含量5%的柠檬酸水洗3次、质量百分含量5%的碳酸钠水洗3次，1.5L水洗2次，1.5L饱和盐水1洗，干燥，过滤，浓缩结晶得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-obzl，得到167g（73.7%，0.22mol）。
3.5、将167g（0.22mol）fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-obzl加入甲醇中，之后加入25g钯炭，并通氢气反应12h，TLC跟踪监测进程，之后过滤去钯炭，之后浓缩至干加少许醋酸乙酯溶解并加石油醚结晶，之后抽滤烘干得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-COOH 118.2g（80.2%，0.176mol），经分析符合预期。见图5。
实施例4
4.1、将100g（0.68mol）谷氨酸加入1L水和丙酮的混合液中，冰浴降温，再加入2N的氢氧化钠水溶液搅拌调节体系pH值为8-9，待温度小于5℃后，开始分批缓慢加入229g（0.68mol）的fmoc-osu，升温至10℃进行反应，TLC检测，反应6h后结束，后向体系中加入1L醋酸乙酯萃洗杂质3次，再加3L醋酸乙酯并加入盐酸酸化pH值为1-2，之后油相用1L酸水洗2次、1L水洗2次，1L盐水洗，无水硫酸钠干燥，之后浓缩结晶，抽滤制得到fmoc-glu- OH，烘干得到176.3g（70.2%，0.48mol）。
4.2、将176.3g（0.48mol）fmoc-glu- OH和82.1g（0.48mol）溴化苄混合于881.5ml的二甲基甲酰胺中，加入26.4g木瓜蛋白酶。之升温至42℃反应22h反应,TLC跟踪监测反应进程，反应好后加1L水稀释，再加入3L乙酸乙酯，乙酯相再用1.5L水洗3次，1.5L盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，之后浓缩加石油醚结晶制得fmoc-glu-obzl，烘干得106.6g（48.6%，0.232mol。
4.3、将100g（1.3mol）2-巯基乙胺加入冰醋酸中，升温，之后加入628.8g（1.95mol）三苯基溴甲烷，之后缓慢加入183.5g（1.69mol）三甲基氯硅烷，机械搅拌下升温至30℃反应2h，之后降温至5℃左右，并用质量百分含量20%的醋酸钠水溶液调节体系pH值并搅拌结晶，之后将体系过滤，滤饼经水和乙醚冲洗，得到S-三苯甲基半胱胺，烘干得343g（82.8%，1.07mol）。
4.4、将106.6g（0.232mol）fmoc-glu-obzl加入THF中，机械搅拌并降温，之后加入67.4g（0.0.21mol）TBTU和三乙胺，之后再加入96.3g(0.3mol)S-三苯甲基半胱胺反应，控制温度在5℃下反应18h，TLC跟踪监测反应进程，反应完后减压浓缩出去THF，之后加3L乙酸乙酯溶解，用质量百分含量5%的柠檬酸水洗3次、质量百分含量5%的碳酸钠水洗3次，1.5L水洗2次，1.5L饱和盐水1洗，干燥，过滤，浓缩结晶得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-obzl，得到122.7g（69.7%，0.16mol）。
4.5、将122.7g（0.16mol）fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-obzl加入甲醇中，之后加入6.1g钯炭，并通氢气反应12h，TLC跟踪监测进程，之后过滤去钯炭，之后浓缩至干加少许醋酸乙酯溶解并加石油醚结晶，之后抽滤烘干得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-COOH 59.7g（55.1%，0.089mol），经分析符合预期。见图6。
实施例5
5.1、将100g（0.68mol）谷氨酸加入1L水和丙酮的混合液中，冰浴降温，再加入2N的氢氧化钠水溶液搅拌调节体系pH值为8-9，待温度小于5℃后，开始分批缓慢加入344g（1.02mol）的fmoc-osu，升温至20℃进行反应，TLC检测，反应12h后结束，后向体系中加入1L醋酸乙酯萃洗杂质3次，再加3L醋酸乙酯并加入盐酸酸化pH值为1-2，之后油相用1L酸水洗2次、1L水洗2次，1L盐水洗，无水硫酸钠干燥，之后浓缩结晶，抽滤制得到fmoc-glu- OH，烘干得到196.4g（78.2%，0.48mol）。
5.2将196.4g（0.48mol）fmoc-glu- OH和131.3g（0.768mol）溴化苄混合于982ml的二甲基甲酰胺中，加入19.6g木瓜蛋白酶。之升温至38℃反应26h反应,TLC跟踪监测反应进程，反应好后加1L水稀释，再加入3L乙酸乙酯，乙酯相再用1.5L水洗3次，1.5L盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，之后浓缩加石油醚结晶制得fmoc-glu-obzl，烘干得136g（55.7%，0.296mol）。
5.3、将100g（1.3mol）2-巯基乙胺加入冰醋酸中，升温，之后加入420.2g（1.3mol）三苯基溴甲烷，之后缓慢加入126.8g（1.17mol）三甲基氯硅烷，机械搅拌下升温至50℃反应6h，之后降温至5℃左右，并用质量百分含量20%的醋酸钠水溶液调节体系pH值并搅拌结晶，之后将体系过滤，滤饼经水和乙醚冲洗，得到S-三苯甲基半胱胺，烘干得313.5g（75.7%，0.98mol）。
5.4、将196.4g（0.48mol））fmoc-glu-obzl加入THF中，机械搅拌并降温，之后加入200.3g（0.624mol）TBTU和三乙胺，之后再加入153.3g(0.48mol)S-三苯甲基半胱胺反应，控制温度在15℃下反应14h ，TLC跟踪监测反应进程，反应完后减压浓缩出去THF，之后加3L乙酸乙酯溶解，用质量百分含量5%的柠檬酸水洗3次、质量百分含量5%的碳酸钠水洗3次，1.5L水洗2次，1.5L饱和盐水1洗，干燥，过滤，浓缩结晶得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-obzl，得到243.3g（75%，0.32mol）。
5.5、将243.3g（0.32mol）fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-obzl加入甲醇中，之后加入36.5g钯炭，并通氢气反应24h，TLC跟踪监测进程，之后过滤去钯炭，之后浓缩至干加少许醋酸乙酯溶解并加石油醚结晶，之后抽滤烘干得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-COOH 179.7g（83.7%，0.268mol），经分析符合预期。见图7。
实施例6
6.1、将100g（0.68mol）谷氨酸加入1L水和丙酮的混合液中，冰浴降温，再加入2N的氢氧化钠水溶液搅拌调节体系pH值为8-9，待温度小于5℃后，开始分批缓慢加入228.7g（0.884mol）的fmoc-CL，升温至10℃进行反应，TLC检测杂点较多，反应12h后结束，后向体系中加入1L醋酸乙酯萃洗杂质3次，再加3L醋酸乙酯并加入盐酸酸化pH值为1-2，之后油相用1L酸水洗2次、1L水洗2次，1L盐水洗，无水硫酸钠干燥，之后浓缩结晶，抽滤制得到fmoc-glu- OH，烘干得到150.9g（60.1%，0.41mol）。
6.2、将150.9g（0.41mol）fmoc-glu-OH和91.2g（0.533mol）氯化苄混合于1034ml的二甲基甲酰胺中，加入18.8g木瓜蛋白酶。之升温至40℃反应24h反应,TLC跟踪监测反应进程，反应好后加1L水稀释，再加入3L乙酸乙酯，乙酯相再用1.5L水洗3次，1.5L盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，之后浓缩加石油醚结晶制得fmoc-glu-obzl，烘干得107.4g（57.2%，0.32mol）。
6.3、将100g（1.3mol）2-巯基乙胺加入冰醋酸中，升温，之后加入423g（1.625mol）三苯甲醇，之后缓慢加入155.3g（1.43mol）三甲基氯硅烷，机械搅拌下升温至60℃反应6h，之后降温至5℃左右，并用质量百分含量20%的醋酸钠水溶液调节体系pH值并搅拌结晶，之后将体系过滤，滤饼经水和乙醚冲洗，得到S-三苯甲基半胱胺，烘干得259.7g（62.7%，1.09mol）。
6.4、将107.4g（0.32mol）fmoc-glu-obzl加入THF中，机械搅拌并降温，之后加入113g（0.352mol）HOBT和三乙胺，之后再加入122.6g(0.384mol)S-三苯甲基半胱胺反应，控制温度在10℃下反应16h ，TLC跟踪监测反应进程，反应完后减压浓缩出去THF，之后加3L乙酸乙酯溶解，用质量百分含量5%的柠檬酸水洗3次、质量百分含量5%的碳酸钠水洗3次，1.5L水洗2次，1.5L饱和盐水1洗，干燥，过滤，浓缩结晶得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-obzl，得到134g（75.5%，0.176mol）。
6.5、将134g（0.176mol）fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-obzl加入甲醇中，之后加入13.5g钯炭，并通氢气反应18h，TLC跟踪监测进程，之后过滤去钯炭，之后浓缩至干加少许醋酸乙酯溶解并加石油醚结晶，之后抽滤烘干得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-COOH 97.9g（82.8%，0.146mol），经分析符合预期。见图8、图9、图10。
实施例7
7.1、将100g（0.68mol）谷氨酸加入1L水和丙酮的混合液中，冰浴降温，再加入2N的氢氧化钠水溶液搅拌调节体系pH值为8-9，待温度小于5℃后，开始分批缓慢加入229g（0.68mol）的fmoc-NH2，升温至10℃进行反应，TLC检测，反应12h后结束，后向体系中加入1L醋酸乙酯萃洗杂质3次，再加3L醋酸乙酯并加入盐酸酸化pH值为1-2，之后油相用1L酸水洗2次、1L水洗2次，1L盐水洗，无水硫酸钠干燥，之后浓缩结晶，抽滤制得到fmoc-glu-OH，烘干得到185.3g（73.8%，0.50mol）。
7.2、将185.3g（0.50mol）fmoc-glu-OH和81g（0.75mol）苯甲醇混合于926ml的二甲基甲酰胺中，加入27.8g木瓜蛋白酶。之升温至42℃反应26h反应,TLC跟踪监测反应进程，反应好后加1L水稀释，再加入3L乙酸乙酯，乙酯相再用1.5L水洗3次，1.5L盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，之后浓缩加石油醚结晶制得fmoc-glu-obzl，烘干得88.7g（38.5%，0.19mol）。
7.3、将100g（1.3mol）2-巯基乙胺加入冰醋酸中，升温，之后加入525.2g（1.625mol）三苯基氯甲烷，之后缓慢加入155.3g（1.43mol）三甲基氯硅烷，机械搅拌下升温至40℃反应4h，之后降温至5℃左右，并用质量百分含量20%的醋酸钠水溶液调节体系pH值并搅拌结晶，之后将体系过滤，滤饼经水和乙醚冲洗，得到S-三苯甲基半胱胺，烘干得347.9g（84%，1.09mol）。
7.4、88.7g（0.19mol）fmoc-glu-obzl加入THF中，机械搅拌并降温，之后加入79.3g（0.21mol）HBTU和三乙胺，之后再加入78.9g(0.247mol)S-三苯甲基半胱胺反应，控制温度在10℃下反应16h ，TLC跟踪监测反应进程，反应完后减压浓缩出去THF，之后加3L乙酸乙酯溶解，用质量百分含量5%的柠檬酸水洗3次、质量百分含量5%的碳酸钠水洗3次，1.5L水洗2次，1.5L饱和盐水1洗，干燥，过滤，浓缩结晶得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-obzl，得到109g（74.5%，0.0.14mol）。
7.5、将109g（0.0.14mol）fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-obzl加入甲醇中，之后加入11g钯炭，并通氢气反应18h，TLC跟踪监测进程，之后过滤去钯炭，之后浓缩至干加少许醋酸乙酯溶解并加石油醚结晶，之后抽滤烘干得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-COOH 80.5g（83.7%，0.12mol），经分析符合预期。见图11。
比较例
1、将100g 谷氨酸悬浮于1L的乙醚中，降温并滴加123g浓硫酸，10-20℃反应6h，之后加入680g苯甲醇反应过夜，之后浓缩除去乙醚，再加入600ml酒精，降温，之后用三乙胺调节体系pH值至8左右，析出大量固体，抽滤，固体用热水重结晶一次，烘干得到104g ，即为h-glu(obzl)-OH。
2、将104g h-glu(obzl)-OH悬浮于1L水中，再加入600mlTHF，用碳酸钠调节体系pH值为8-9，之后缓慢加入142g z-osu反应12h，之后用乙醚洗涤3次，加入3L醋酸乙酯并用柠檬酸酸化pH值为2-3， 之后乙酯相用质量百分含量5%的柠檬酸水洗涤3次，水洗3次，饱和盐水洗一次，干燥，浓缩加石油醚结晶，抽滤，烘干得116.5g，即为z-glu(obzl)- OH。
3、将 116.5g z-glu(obzl)-OH 悬浮用1L二氯甲烷中，之后降温并滴加6ml浓硫酸，之后通入200g异丁烯密封反应4天，之后真空拉走多余的异丁烯，之后用碳酸钠调节体系pH值8左右，静置分层，油相再用质量百分含量5%的碳酸钠水溶液洗3次，水洗三次，干燥，浓缩至余油180g 左右，即为z-glu(obzl)-otbu。
4、将180g z-glu(obzl)-otbu加入1L甲醇中，之后加入18g钯炭，之后通入氢气反应3天，反应完成过滤除去钯炭，之后浓缩并加乙醚结晶，得到38g ，即为h-glu-otbu。
5、将 38g h-glu-otbu 悬浮于38ml的水中，降温，再加入250ml丙酮，用碳酸钠调节体系pH值为8-9，之后加入70g fmoc-osu，反应完全后，用醋酸乙酯和石油醚的混合液洗三次，之后加入1L醋酸乙酯并用柠檬酸调节体系pH值为3左右，油相再用质量百分含量5%的柠檬酸水洗3次，水洗3次，饱和盐水洗一次，干燥，浓缩后加石油醚结晶，烘干的71g，即为fmoc-glu-otbu。
6、将500g（0.65mol）2-巯基乙胺加入冰醋酸中，升温，之后加入211.5g（0.81mol）三苯甲醇，之后缓慢加入101.5g（0.715mol）三氟化硼乙醚，机械搅拌下升温至60℃反应6h，之后降温至5℃左右，并用质量百分含量20%的醋酸钠水溶液调节体系pH值并搅拌结晶，之后将体系过滤，滤饼经水和乙醚冲洗，得到S-三苯甲基半胱胺，烘干得113.3g（0.35mol）备用。
7、将71g fmoc-glu-otbu 加入71ml THF中，再加入20.2g 1-羟基琥珀酰亚胺，降温至0℃以下，之后加入DCC的THF溶液（36gX150ml）反应12h,之后降温并过滤除去副产物，母液浓缩后加石油醚结晶，抽滤烘干得到72.3g粗品，乙酯和石油醚重结晶一次得到61g,即为fmoc-glu(osu)-otbu。
8、将35g S-三苯甲基半胱胺溶于350ml THF中，之后降温，用三乙胺调节pH值为8-9，之后滴加fmoc-glu(osu)-otbu的THF溶液（61gx240ml），反应好后，浓缩除去一半THF,之后加入乙酸乙酯溶解，用质量百分含量5%的碳酸钠水溶液洗涤三次，水洗2次，饱和盐水洗1次，无水硫酸镁干燥过夜，过滤，减压蒸馏后加石油醚结晶 ，抽滤得到68g，即为fmoc-glu(nhCH2CH2strt)-otbu。
9、将68g fmoc-glu(nhCH2CH2strt)-otbu悬浮于 680ml的乙醚中，之后通入盐酸气，TLC跟踪监测反应进程，反应完全后，体系低温减压浓缩除去部分乙醚，之后加石油醚结晶，得到25g,即为fmoc-glu(nhCH2CH2strt)-COOH，经分析符合要求，见图12。

Claims (8)

1.一种N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）、将谷氨酸加入水和丙酮的混合液中，再加入氢氧化钠搅拌，冰浴降温并加入氨基保护剂fmoc基团供体进行反应，TLC跟踪检测进程，后经过酸化萃取、水洗，盐水洗，制得到fmoc-glu-OH；
(2)、将fmoc-glu-OH和苄基供体混合于二甲基甲酰胺中，加入木瓜蛋白酶并加热反应,TLC跟踪监测反应进程，反应好后加水稀释，并经乙酸乙酯洗涤，在加醋酸乙酯和柠檬酸酸化萃取，并经水洗，盐水洗，浓缩加石油醚结晶制得fmoc-glu-obzl；
（3）、将2-巯基乙胺加入冰醋酸中，升温，之后加入三苯甲基供体物，之后缓慢加入三甲基氯硅烷，机械搅拌反应，之后降温至4-6℃，并用醋酸钠水溶液调节体系pH值并搅拌结晶，之后将体系过滤，滤饼经水和乙醚冲洗，晾干后制备得到S-三苯甲基半胱胺；
（4）、将fmoc-glu-obzl加入THF中，机械搅拌并降温，之后加入缩合剂和三乙胺，之后再加入S-三苯甲基半胱胺反应，TLC跟踪监测反应进程，反应完后减压浓缩出去thf，之后加乙酸乙酯溶解，再经酸水洗、碱水洗，水洗，盐水洗，干燥，浓缩结晶得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-obzl；
（5）、将fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-obzl加入甲醇中，之后加入钯炭，并通氢气反应，TLC跟踪监测进程，反应完成后，过滤去钯炭，之后浓缩至干加少许醋酸乙酯溶解并加石油醚结晶，之后抽滤烘干得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-COOH。
2.根据权利要求1所述的一种N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制备
方法，其特征在于，所述步骤（1），谷氨酸和fmoc-基团的物质的量比为1:（1-1.5），反应的温度为：10-20℃，反应时间为6-12h，所述的fmoc-基团供体为fmoc-osu、fmoc-CL或fmoc-NH2中的一种。
3.根据权利要求2所述的一种N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制备方法，其特征在于，所述的fmoc-基团供体为fmoc-osu。
4.根据权利要求1所述的一种N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制备方法，其特征在于，所述步骤（2），fmoc-glu-OH、苄基供体的物质的量比为：1:（1-1.6），反应温度为38-42℃，反应时间为22-26h，所述木瓜蛋白酶的用量为氨基酸质量的10%-15%，所述苄基供体为苯甲醇、溴化苄或氯化苄中的一种。
5.根据权利要求1所述的一种N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制备方法，其特征在于，所述步骤（3），2-巯基乙胺、三苯甲基供体物和三甲基氯硅烷的物质的量比为1：（1-1.5）：（0.9-1.3），所述反应温度为30-50℃，所述反应时间为2-6h，所述三苯甲基供体物为三苯甲醇、三苯基溴甲烷、三苯基氯甲烷中的一种。
6.根据权利要求1所述的一种N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制备方法，其特征在于，所述步骤（4），fmoc-glu-obzl、缩合剂和S-三苯甲基半胱胺的比为：1:（0.9-1.3）:（1-1.3），所述反应温度为5-15℃，所述反应时间14-18h，所述的缩合剂为HTBU、TBTU或HOBT中的一种。
7.根据权利要求1所述的一种N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制备方法，其特征在于，所述步骤（5），所加的钯炭用量为氨基酸量的5%-15%，所述反应时间为12-24h。
8.根据权利要求1所述一种N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制备方法，其特征在于, 所述TLC跟踪检测进程的条件：1）正丁醇：冰醋酸：水的体积比=4:1:1，2）三氯甲烷:甲醇:乙酸体积比=90:8:2。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116178214A (zh) * 2022-12-08 2023-05-30 吉尔生化（上海）有限公司 一种n-(9-芴甲氧羰基)-谷氨酸-1-叔丁酯的制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5786336A (en) * 1991-04-29 1998-07-28 Terrapin Technologies, Inc. Target-selective protocols based on mimics
CN101423857A (zh) * 2008-12-10 2009-05-06 天津大学 Z-l-丙氨酰-l-谷氨酰胺的酶合成方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5786336A (en) * 1991-04-29 1998-07-28 Terrapin Technologies, Inc. Target-selective protocols based on mimics
CN101423857A (zh) * 2008-12-10 2009-05-06 天津大学 Z-l-丙氨酰-l-谷氨酰胺的酶合成方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MYL`ENE MORIN,等: "c-Glutamyl transpeptidase acylation with peptidic substrates: free energy relationships measured by an HPLC kinetic assay", 《ORG. BIOMOL. CHEM.》 *
ROBERT C. KELLY,等: "Synthesis of (ii)- and (S)-(glu)Thz and the Corresponding Bisthiazole Dipeptide of Dolastatin 3", 《J. ORG. CHEM.》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116178214A (zh) * 2022-12-08 2023-05-30 吉尔生化（上海）有限公司 一种n-(9-芴甲氧羰基)-谷氨酸-1-叔丁酯的制备方法
CN116178214B (zh) * 2022-12-08 2024-03-26 吉尔生化（上海）有限公司 一种n-(9-芴甲氧羰基)-谷氨酸-1-叔丁酯的制备方法

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