CN111655732B - 抗her2抗体或其抗原结合片段及包含其的嵌合抗原受体 - Google Patents

抗her2抗体或其抗原结合片段及包含其的嵌合抗原受体 Download PDF

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Abstract

本发明涉及用于癌症的预防或治疗的新型抗HER2抗体或其抗原结合片段，包括其的嵌合抗原受体及其用途。本发明的抗体是特异性结合在癌细胞(特别是乳腺癌或胃癌细胞)中高表达的HER2并且结合与传统的曲妥珠单抗所结合的表位不同的表位的抗体。与曲妥珠单抗相比，本发明的抗体显示出对曲妥珠单抗无反应性(或具有耐药性)或敏感性降低的未表达HER2的癌细胞的更好的杀伤能力。另外，当本发明的抗HER2抗体与曲妥珠单抗组合施用时，获得对曲妥珠单抗抗体所作用的癌细胞的协同杀伤能力。因此，本发明的组合物可非常有效地用于与曲妥珠单抗组合施用以治疗癌症或治疗不用曲妥珠单抗治疗的癌症。

Description

抗HER2抗体或其抗原结合片段及包含其的嵌合抗原受体
技术领域
该研究是在韩国贸易、工业和能源部的支持下进行的，项目号为1415118385。该项目的研发管理机构是韩国技术进步研究所，研发项目的名称为“全球创新技术联盟”，研究名称为“基于新型表位筛选平台技术的全球抗体药物的开发”。该研究由AbClon Inc.于2011年11月1日至2014年10月31日进行。
本申请要求于2017年11月14日向韩国知识产权局提交的韩国专利申请第10-2017-0151841的优先权，其全部公开内容通过引用并入本文。
本公开涉及新型抗HER2抗体或其抗原结合片段，包括其的嵌合抗原受体及其用途。
背景技术
Her2/neu(ErbB2)基因编码185kDa跨膜糖蛋白，其属于表皮生长因子受体(EGFR)家族。Her2蛋白包括由620个氨基酸残基组成的细胞外结构域，由23个氨基酸残基组成的跨膜结构域和由490个氨基酸残基组成的具有酪氨酸激酶活性的细胞内结构域(Akiyama T等人,Science,232(4758):1644-1646(1986))。
具有多种特征的抗HER2抗体(aHER2 Ab)描述于：Tagliabue等人，Int.J.Cancer47:933-937(1991)；McKenzie等人，Oncogene 4:543-548(1989)；Maier等人，CancerRes.51:5361-5369(1991)；Bacus等人，Molecular Carcinogenesis3:350-362(1990)；Stancovski等人，PNAS USA 88:8691-8695(1991)；Bacus等人，Cancer Research 52:2580-2589(1992)；Xu等人，Int.J.Cancer 53:401-408(1993)；WO94/00136；Kasprzyk等人，Cancer Research 52:2771-2776(1992)；Hancock等人，Cancer Res.51:4575-4580(1991)；Shawver等人，Cancer Res.54:1367-1373(1994)；Arteaga等人，Cancer Res.54:3758-3765(1994)；Harwerth等人，J.Biol.Chem.267:15160-15167(1992)；US专利第5783186号；Kao等人，US专利申请公开第2009/0285837(2009)号；Ross等人，The Oncologist8:307-325(2003)；和Klapper等人，Oncogene 14:2099-2109(1997)。
商业上最成功的抗HER2抗体是曲妥珠单抗(作为郝赛汀TM是可商购获得的，美国专利第5821337号)，并且已经对其进行了许多研究：Sapino，A.等人，Annals of Oncology(2007)18:1963-1968；Bussolati，G等人，British Journal of Cancer(2005)92，1261-1267；和Glazyrin A等人，J Histology&Cytochemistry(2007)55(1):25-33。
尽管曲妥珠单抗已经在商业上获得成功，但是曲妥珠单抗用于治疗目的的用途受到限制，因为存在多种对该抗体无反应性(或具有耐药性)或敏感性降低的癌细胞。因此，已经尝试解决该抗体的治疗问题。
例如，美国专利第7674460号公开了一种使用HER2拮抗剂如曲妥珠单抗和PC细胞衍生的生长因子(PCDGF)拮抗剂来提高癌细胞的HER2敏感性的方法。WO2011/127297公开了使用FoxM1抑制剂和曲妥珠单抗的组合抑制曲妥珠单抗耐药性肿瘤细胞增殖的方法。
美国专利申请公开第2010-0183604号公开了一种使用丝切蛋白抑制剂、PAK1抑制剂、LIMK抑制剂、RHO抑制剂、ROCK1抑制剂或ROCK2抑制剂治疗曲妥珠单抗耐药性癌症的方法。
发明内容
技术问题
本公开的发明人努力开发了新型抗体，其能够预防或治疗癌症(特别是乳腺癌和胃癌)；对于对曲妥珠单抗无反应性(或具有耐药性)或敏感性降低的癌细胞显示出更好的杀伤能力(或增殖抑制能力)；并且与单独施用曲妥珠单抗相比，当该抗体与曲妥珠单抗共同施用时，能够以改善的抗癌活性预防或治疗癌症。结果，开发了一种新型抗体并且完成了本公开，该新型抗体对曲妥珠单抗几乎不起作用的HER2过表达的癌细胞显示出更好的杀伤能力，或者当与曲妥珠单抗抗体共同施用时，显示出改善的抗癌活性。
本公开内容涉及提供针对HER2(人表皮生长因子受体2)的抗体(抗HER2抗体)或其抗原结合片段。
本公开还涉及提供包含抗HER2抗体或其抗原结合片段的融合蛋白。
本公开内容还涉及提供包含抗HER2抗体或其抗原结合片段的嵌合抗原受体(CAR)和表达该受体的效应细胞。
本公开还涉及提供编码抗HER2抗体或其抗原结合片段或嵌合抗原受体的核酸分子。
本公开还涉及提供包含核酸分子的重组载体。
本公开还涉及提供用重组载体转化的宿主细胞。
本公开还涉及提供用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含抗HER2抗体或其抗原结合片段。
本公开还涉及提供用于诊断癌症的试剂盒，其包括抗HER2抗体或其抗原结合片段。
本公开还涉及提供通过向对象施用包含抗HER2抗体或其抗原结合片段的组合物来预防或治疗癌症的方法。
本公开还涉及提供通过向对象施用表达嵌合抗原受体的效应细胞来治疗与HER2过表达有关的疾病(例如，癌症)的方法。
技术方案
本公开提供了已经经历亲和力成熟的特异性结合HER2(人表皮生长因子受体2)的抗体及其经修饰的抗体。
本公开的第一方面提供了包含以下的针对HER2(人表皮生长因子受体2)的抗体，或其抗原结合片段：
(a)重链可变区，其包含以下重链CDR(互补决定区)氨基酸序列：
SEQ ID NO 1的CDRH1，SEQ ID NO 2的CDRH2和SEQ ID NO 3的CDRH3；和
(b)轻链可变区，其包含以下轻链CDR氨基酸序列：
SEQ ID NO 4的CDRL1，SEQ ID NO 5的CDRL2和SEQ ID NO 6的CDRL3。
本公开的第二方面提供了包含以下的针对HER2(人表皮生长因子受体2)的抗体，或其抗原结合片段：
(a)重链可变区，其包含以下重链CDR(互补决定区)氨基酸序列：
SEQ ID NO 7的CDRH1，SEQ ID NO 8的CDRH2和SEQ ID NO 9、71或72的CDRH3；和
(b)轻链可变区，其包含以下轻链CDR氨基酸序列：
SEQ ID NO 10的CDRL1，SEQ ID NO 11的CDRL2和SEQ ID NO 12、73或74的CDRL3。
本公开的第三方面提供了包含以下的针对HER2(人表皮生长因子受体2)的抗体，或其抗原结合片段：
(a)重链可变区，其包含以下重链CDR(互补决定区)氨基酸序列：
SEQ ID NO 13的CDRH1，SEQ ID NO 14的CDRH2和SEQ ID NO 15的CDRH3；和
(b)轻链可变区，其包含以下轻链CDR氨基酸序列：
SEQ ID NO 16的CDRL1，SEQ ID NO 17的CDRL2和SEQ ID NO 18的CDRL3。
本公开的第四方面提供了包含以下的针对HER2(人表皮生长因子受体2)的抗体，或其抗原结合片段：
(a)重链可变区，其包含以下重链CDR(互补决定区)氨基酸序列：
SEQ ID NO 19的CDRH1，SEQ ID NO 20的CDRH2和SEQ ID NO 21的CDRH3；和
(b)轻链可变区，其包含以下轻链CDR氨基酸序列：
SEQ ID NO 22的CDRL1，SEQ ID NO 23的CDRL2和SEQ ID NO 24的CDRL3。
本公开的第五方面提供了包含以下的针对HER2(人表皮生长因子受体2)的抗体，或其抗原结合片段：
(a)重链可变区，其包含以下重链CDR(互补决定区)氨基酸序列：
SEQ ID NO 25的CDRH1，SEQ ID NO 26的CDRH2和SEQ ID NO 27的CDRH3；和
(b)轻链可变区，其包含以下轻链CDR氨基酸序列：
SEQ ID NO 28的CDRL1，SEQ ID NO 29的CDRL2和SEQ ID NO 30的CDRL3。
第一方面的抗体、第二方面的抗体、第三方面的抗体、第四方面的抗体和第五方面的抗体分别指2G10、39D2、24D3、1G3和8G11抗体。它们是小鼠抗体或嵌合抗体。其中，人源化抗体表示为以hz为前缀，例如hz2G10、hz39D2和hz8G11抗体。
本公开的发明人努力开发了新型抗体，其能够预防或治疗癌症(特别是乳腺癌和胃癌)；对于对曲妥珠单抗无反应性(或具有耐药性)或敏感性降低的癌细胞显示出更好的杀伤能力(或增殖抑制能力)；并且与单独施用曲妥珠单抗相比，当该抗体与曲妥珠单抗共同施用时，能够以改善的抗癌活性预防或治疗癌症。结果，开发了一种新型抗体并且完成了本公开，该新型抗体对曲妥珠单抗几乎不起作用的HER2过表达的癌细胞显示出更好的杀伤能力，或者当与曲妥珠单抗抗体共同施用时，显示出改善的抗癌活性。
本公开的抗体或其抗原结合片段具有对HER2的特异性结合能力。特别地，在本公开的抗体中，类似于曲妥珠单抗，hz2G10和hz39D2与HER2的结构域1-4的结构域1中的表位结合，24D3与结构域3中的表位结合，并且1G3和hz8G11与结构域4中的表位结合，但结合不同于曲妥珠单抗所结合的表位。
在本公开中，术语“曲妥珠单抗”是指美国专利第5821337号中公开的抗体。
当单独或与曲妥珠单抗组合使用时，本公开内容的抗体对于对曲妥珠单抗无反应性(或具有耐药性)或敏感性降低的癌细胞具有优异的杀伤能力或增殖抑制能力。在本公开中，对于癌细胞，术语“杀伤”、“增殖抑制”或“生长抑制”以相同的含义互换使用。
在本公开中，术语“抗体”是指特定针对HER2的抗体，不仅包括整个抗体，还包括抗体分子的抗原结合片段。
完整抗体具有两条全长轻链和两条全长重链。轻链和重链通过二硫键连接。重链的恒定区具有γ、μ、α、δ和ε类型，并具有γ1、γ2、γ3、γ4、α1和α2子类。轻链的恒定区具有κ和λ类型。
在本公开中，术语“抗原结合片段”是指具有抗原结合能力的片段，并且包括Fab、F(ab')、F(ab')2、Fv等。在抗体片段中，Fab(抗原结合片段)具有含轻链可变区和重链可变区、轻链恒定区和重链第一恒定区(CH1)的结构，并且具有一个抗原结合位点。Fab'与Fab的区别在于，它在重链CH1结构域的C末端具有包括至少一个半胱氨酸残基的铰链区。在F(ab')2抗体中，Fab'的铰链区中的半胱氨酸残基形成二硫键。在现有技术中已知用于产生具有最小抗体片段的Fv片段的重组技术，其中Fv仅具有重链可变区和轻链可变区。双链可变片段(dcFv)通过非共价键连接至重链可变区和轻链可变区，单链可变片段(scFv)通常经由肽接头共价连接至重链可变区或C末端，以形成二聚体，例如双链Fv。这些抗体片段可使用蛋白酶获得(例如，Fab可通过用木瓜蛋白酶裂解完整抗体而获得，而F(ab')2片段可通过用胃蛋白酶裂解而获得)，或可使用遗传重组技术制备。
具体地，在本公开中，抗体包括单克隆抗体、多特异性抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单链Fv(scFv)、单链抗体、Fab片段、F(ab')片段、二硫键连接的Fv(sdFv)、抗独特型(抗Id)抗体和这些抗体的表位结合片段，但不限于此。
在本公开中，术语“重链”包括含有可变区结构域VH和三个恒定区结构域CH1、CH2和CH3的全长重链，其包含具有足以赋予抗原特异性的可变区序列的氨基酸序列及其片段。另外，在本公开中，术语“轻链”包括含有可变区结构域VL和恒定区结构域CL的全长轻链，其包含具有足以赋予抗原特异性的可变区序列的氨基酸序列及其片段。
在本公开中，术语“可变区”或“可变结构域”是指与抗体结合抗原相关的抗体重链或轻链的结构域。通常，天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为VH和VL)具有相似的结构，并且每个结构域包含四个保守框架区(FR)和三个高变区(HVR)(Kindt等人,KubyImmunology,第6版,W.H.Freeman and Co.,第91页(2007))。
在本公开中，术语“CDR(互补决定区)”是指免疫球蛋白的重链和轻链的高变区的氨基酸序列(Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第4版,U.S.Department of Health and Human Services,National Institutes of Health(1987))。重链(CDRH1、CDRH2和CDRH3)和轻链(CDRL1、CDRL2和CDRL3)的每个都包含三个CDR。CDR提供主要的接触残基以使抗体与抗原或表位结合。
在本公开中，术语“框架区”或“FR”是指除高变区(HVR)残基以外的可变结构域残基。可变结构域的FR通常由四个FR结构域组成：FR1、FR2、FR3和FR4。因此，HVR和FR序列通常按以下顺序出现在VH中：
FRH1(重链的框架区1)-CDRH1(重链的互补决定区1)-FRH2-CDRH2-FRH3-CDRH3-FRH4。
并且，HVR和FR序列通常按以下顺序出现在VL(或Vk)中：
FRL1(轻链的框架区1)-CDRL1(轻链的互补决定区1)-FRL2-CDRL2-FRL3-CDRL3-FRL4。
在本公开中，术语“特异性结合”是指抗体或其抗原结合片段或另一种构建体例如scFv在生理条件下与抗原形成相对稳定的复合物。特异性结合的特征在于约1×10-6M或小于1×10-6M的平衡解离常数(例如，Kd越小，结合越紧密)。确定两个分子是否特异性结合的方法是本领域众所周知的，例如平衡透析、表面等离振子共振等。
在本公开中，术语“亲和力”是指分子(例如，抗体)的单个结合位点与其结合伴侣(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另有说明，否则“结合亲和力”是指固有结合亲和力，其反映结合对的成员(例如抗体和抗原)之间的1:1相互作用。分子X与其伴侣Y的亲和力通常可以用解离常数(Kd)表示。亲和力可以通过本领域已知的常规方法来测量，包括本公开中描述的那些方法。
在本公开中，“人抗体”或“人源化抗体”具有对应于由人或人细胞产生的抗体，或衍生自利用人抗体库或其他人抗体编码序列的非人来源的抗体的氨基酸序列。
在本公开中，术语“嵌合抗体”是指重链和/或轻链的一部分衍生自特定来源或物种而重链和/或轻链的其余部分衍生来自不同的来源或物种的抗体。
在特异性识别HER2的范围内，本公开的抗HER2抗体或其抗原结合片段可以包括在所附序列表中描述的氨基酸序列的变体。例如，可以修饰抗体的氨基酸序列以改善抗体的结合亲和力和/或其他生物学特性。此类修饰包括例如抗体的氨基酸序列残基的缺失、插入和/或置换。
这种氨基酸变化是基于氨基酸侧链取代基的相对相似性，例如疏水性、亲水性、电荷、大小等。通过对氨基酸侧链取代基的大小、形状和类型进行分析，认识到精氨酸、赖氨酸和组氨酸是带正电荷的残基；丙氨酸、甘氨酸和丝氨酸具有相似的大小；苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸具有相似的形状。基于这些考虑，从而认识到精氨酸、赖氨酸和组氨酸；丙氨酸、甘氨酸和丝氨酸；苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸是生物学功能等同物。
为了引入突变，可以考虑氨基酸的亲水性指数。根据每个氨基酸的疏水性和电荷来分配亲水性指数：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)；和精氨酸(-4.5)。
氨基酸的亲水性指数对于赋予蛋白质相互作用的生物学功能非常重要。众所周知，当用具有相似亲水性指数的氨基酸进行置换时，可以保留相似的生物活性。在这方面，当引入突变时，在亲水指数差异优选在±2之内，更优选在±1之内，甚至更优选在±0.5之内的氨基酸之间进行置换。
同时，还众所周知的是，具有相似亲水性值的氨基酸之间的置换产生具有等同生物活性的蛋白质。如美国专利第4554101号中所公开的，将以下亲水性值赋予氨基酸残基：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0±1)；谷氨酸(+3.0±1)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰胺(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；苏氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5±1)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)；色氨酸(-3.4)。
在这方面，当引入突变时，在亲水性值差异优选在±2之内，更优选在±1之内，甚至更优选在±0.5之内的氨基酸之间进行置换。
不完全改变分子活性的蛋白质中的氨基酸置换是本领域已知的(H.Neurath，R.L.Hill,The Proteins,Academic Press,New York,1979)。最常见的置换是以下氨基酸残基之间的置换：Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Thy/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。
在本公开的示例性实施方案中，hz2G10抗体和2G10抗体的重链可变区分别包括SEQ ID NO 31和32的氨基酸序列。
在本公开的示例性实施方案中，hz2G10抗体和2G10抗体的轻链可变区分别包括SEQ ID NO 35和77的氨基酸序列。
在本公开的示例性实施方案中，hz39D2抗体和39D2抗体的重链可变区分别包括SEQ ID NO 39和83的氨基酸序列。
在本公开的示例性实施方案中，hz39D2抗体和39D2抗体的轻链可变区分别包括SEQ ID NO 43和85的氨基酸序列。
在本公开的一个示例性实施方案中，24D3抗体的重链可变区包括SEQ ID NO 47的氨基酸序列。
在本公开的一个示例性实施方案中，24D3抗体的轻链可变区包括SEQ ID NO 51的氨基酸序列。
在本公开的一个示例性实施方案中，1G3抗体的重链可变区包括SEQ ID NO 55的氨基酸序列。
在本公开的一个示例性实施方案中，1G3抗体的轻链可变区包括SEQ ID NO 59的氨基酸序列。
在本公开的一个示例性实施方案中，hz8G11抗体和8G11抗体的重链可变区分别包括SEQ ID NO 63和79的氨基酸序列。
在本公开的一个示例性实施方案中，hz8G11抗体和8G11抗体的轻链可变区分别包括SEQ ID NO 67和81的氨基酸序列。
在本公开的抗体包括单克隆抗体、多特异性抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单链Fv(scFv)、单链抗体、Fab片段、F(ab')片段、二硫键连接的Fv(dsFv)、抗独特型(抗Id)抗体和这些抗体的表位结合片段，但不限于此。
同时，本公开的抗体的独特之处在于其CDR序列与现有抗HER2抗体的CDR序列具有非常低的同源性(相似性)。例如，对来自本公开的抗体的hz2G10进行BLAST检索的结果显示，本公开的抗体与美国专利第8314213号和第8404811号中公开的抗体的最高CDR序列同源性小于50％。另外，美国专利第8314213号和第8404811号中公开的抗体分别结合CD25和EGFL7，并且其靶标不同于本公开的抗体的靶标。
另外，本公开的抗HER2抗体或其抗原结合片段包括抗HER2抗体，该抗HER2抗体在上述氨基酸序列中包括微小变化，包括几乎不影响抗体或其抗原结合片段的三级结构和功能的修饰。因此，在一些示例性实施方案中，抗体可以具有与上述序列具有至少90％、93％、95％或98％相似性的氨基酸序列。
此外，在本公开中，抗体或其抗原结合片段的重链可变区和轻链可变区可以通过接头连接，该接头由通式(GnSm)p或(SmGn)p表示的氨基酸序列组成。
式中，n、m和p满足以下条件：
n是1至7的整数；
m是0至7的整数；
n+m是8或小于8的整数；和
p是1至7的整数。
在本公开的特定示例性实施方案中，n＝1至5并且m＝0至5。在更具体的示例性实施方案中，n＝4且m＝1。在另一个更具体的示例性实施方案中，接头是(G4S)3或(S4G)3。
在另一个示例性实施方案中，接头是VDGS。在另一个示例性实施方案中，接头是ASGS。
另外，根据本发明的抗体或抗原结合片段的轻链可变区和重链可变区可以处于以下取向：
轻链可变区-接头-重链可变区；或者
重链可变区-接头-轻链可变区。
本公开的另一方面提供了包含抗HER2抗体或其抗原结合片段的融合蛋白。
在本公开中，制备融合蛋白用于生产纯化效率，提高生物学活性，提高稳定性，改善折叠性，和/或改善与功能性部分的结合，以使本公开的抗HER2抗体或其抗原结合片段具有附加功能。融合蛋白可以形成为两个或多于两个多肽链，其通过共价键连接，也可以为缀合物的形式，其中两个或多于两个多肽链通过化学缀合连接。
本公开的另一方面提供了嵌合抗原受体多肽，其包含：
(a)HER2结合结构域；
(b)跨膜结构域(TM)；
(c)共刺激结构域；和
(d)细胞内信号传导结构域(ICD)。
在本公开中，术语“嵌合抗原受体(CAR)”是指人工构建的杂合蛋白(融合蛋白)或多肽，其包含与效应细胞信号传导结构域或效应细胞激活结构域(例如T细胞信号传导结构域或T细胞激活结构域)连接的靶标结合结构域(例如单链可变片段(scFv))。通常，嵌合抗原受体能够通过利用单克隆抗体的抗原结合特性以非MHC限制的方式将T细胞特异性和反应性重定向至所选靶标。非MHC限制的抗原识别赋予了识别表达CAR的T细胞上的抗原的能力，从而绕开了肿瘤逃逸的主要机制。而且，当在T细胞中表达时，CAR有利地不与内源性T细胞受体(TCR)α链和β链二聚化。
在本公开的一个示例性实施方案中，本公开的嵌合抗原受体识别HER2抗原并在细胞表面表达，因为它包含HER2结合结构域，所述HER2结合结构域包括本公开的抗HER2抗体或其抗原结合片段。
本公开的嵌合抗原受体包含跨膜结构域，因为它在细胞表面表达。跨膜结构域可以是选自T细胞受体α链、β链或ζ链，CD28，CD3ε，CD45，CD4，CD5，CD8，CD9，CD16，CD22，CD33，CD37，CD64，CD80，CD86，CD134，CD137和CD154的蛋白质的跨膜结构域，但不限于此。
在本公开的一个具体示例性实施方案中，跨膜结构域可以是CD8或CD28的跨膜结构域。
本公开内容的嵌合抗原受体的共刺激结构域可以是从选自MHC I类分子、TNF受体蛋白、免疫球蛋白样蛋白、细胞因子受体、整联蛋白、信号转导的淋巴细胞活化分子(SLAM)、激活性NK细胞受体、BTLA(B淋巴细胞和T淋巴细胞弱化因子)、Toll样配体受体、OX40、CD2、CD7、CD27、CD28、CD30、CD40、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、4-1BB(CD137)、B7-H3、CDS、ICAM-1、ICOS(CD278)、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM(LIGHTR)、KIRDS2、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、NKG2D、NKG2C、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244、2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD19a和与CD83特异性结合的配体的蛋白获得的功能性信号传导结构域，但不限于此。
在本公开的一个具体示例性实施方案中，共刺激结构域可以是从选自CD28、OX40、4-1BB(CD137)和/或ICOS(CD278)的蛋白获得的功能性信号传导结构域，更具体地是CD28和/或OX40的功能性信号传导结构域。
在本公开的另一个示例性实施方案中，细胞内信号传导结构域是4-1BB、CD28、OX40或CD3ζ的功能性信号传导结构域，或其组合。最具体地，细胞内信号传导结构域是CD3ζ的功能性信号传导结构域。
本公开的嵌合抗原受体的HER2结合结构域通过铰链结构域与跨膜结构域连接。
在本公开的另一个示例性实施方案中，铰链结构域可以是IgG4铰链、CD8铰链或IgD铰链。
本公开的另一方面提供了编码上述抗HER2抗体或其抗原结合片段或嵌合抗原受体多肽的核酸分子。
在本公开中，术语“核酸分子”涵盖DNA(gDNA和cDNA)和RNA分子，并且作为核酸分子的基本结构单元的核苷酸不仅包括天然核苷酸，而且还包括具有修饰的糖或碱基的类似物(Scheit,Nucleotide Analogs,John Wiley,New York(1980)；Uhlman and Peyman,Chemical Reviews,90:543-584(1990))。
编码本公开的抗体或其抗原结合片段或嵌合抗原受体多肽的核苷酸序列不限于特定的核苷酸序列，只要是编码构成嵌合抗原受体分子的氨基酸序列的核苷酸序列即可。
这是因为核苷酸序列的变化可能不会通过表达导致蛋白序列的变化。这称为密码子简并性。因此，核苷酸序列包括包含功能上等同的密码子、或编码相同氨基酸的密码子(例如，由于密码子简并性而编码精氨酸或丝氨酸的六个密码子)、或编码生物学上等同的氨基酸的密码子的核苷酸序列。
在本公开的一个具体示例性实施方案中，所附序列表中描述了编码构成本公开的抗HER2抗体的重链CDR、轻链CDR、重链可变区、轻链可变区、重链或轻链的多肽或其抗原结合片段的核苷酸序列。
编码抗HER2抗体或其抗原结合片段或嵌合抗原受体多肽的本公开的核酸分子应理解为涵盖与该核苷酸序列具有高同一性的核苷酸序列。高同一性是指，当本公开内容的核苷酸序列与另一个序列尽可能彼此对应地比对，并且使用本领域常用的算法分析比对的序列时，核苷酸序列表现出至少80％同源性，更具体地至少90％同源性，最具体地至少95％同源性。
当考虑生物学等同活性的变化时，应理解，编码本公开的抗体或抗原结合片段或嵌合抗原受体多肽的核酸分子包括与序列表中描述的序列具有高同一性的序列。高同一性是指，当本公开的序列和另一个序列尽可能彼此对应地比对，并且使用本领域常用的算法分析比对的序列时，所述序列具有至少61％的同源性，更具体地70％同源性，进一步更具体地80％同源性，最具体地90％同源性。用于序列比较的比对方法是本领域已知的。用于比对的各种方法和算法公开于Smith和Waterman，Adv.Appl.Math.2:482(1981)；Needleman和Wunsch，J.Mol.Bio.48:443(1970)；Pearson和Lipman，Methods in Mol.Biol.24:307-31(1988)；Higgins和Sharp，Gene 73:237-44(1988)；Higgins和Sharp，CABIOS 5:151-3(1989)；Corpet等人，Nuc.Acids Res.16:10881-90(1988)；Huang等人，Comp.Appl.BioSci.8:155-65(1992)和Pearson等人，Meth.Mol.Biol.24:307-31(1994)。NCBI的基本局部比对搜索工具(BLAST)(Altschul等人，J.Mol.Biol.215:403-10(1990))可从NBCI(美国国家生物技术信息中心)和互联网上访问，并可与诸如blastp、blastn、blastx、tblastn和tblastx的序列分析程序结合使用。可以通过NCBI网站的BLAST网页访问BLAST。使用此类程序比较序列同源性的方法可从NCBI网站的BLAST帮助页面获得。
本公开的另一方面提供了包含核酸分子的重组载体。
在本公开中，术语“载体”包括递送载体和表达载体。
在本公开中，术语“递送载体”是指包含分离的核酸并且可以用于将分离的核酸递送到细胞中的材料的组合物。它包括线性多核苷酸，与离子型化合物或两亲化合物结合的多核苷酸，质粒和病毒，但不限于此。更具体地，递送载体包括自复制质粒或病毒。该术语也被解释为包括促进核酸转移到细胞中的非质粒化合物和非病毒化合物，例如聚赖氨酸化合物、脂质体等。病毒递送载体的实例包括腺病毒载体、腺相关病毒载体、逆转录病毒载体和慢病毒载体，但不限于此。
在本公开中，术语“表达载体”是指包含重组核苷酸的载体，所述重组核苷酸包括可操作地连接至用于在宿主细胞中表达靶基因的待表达的核苷酸序列的表达控制序列。表达载体包括足以表达的顺式作用元件和用于表达的其他元件，其可由宿主细胞或体外表达系统提供。表达载体包括质粒载体，该质粒载体包括重组多核苷酸；黏粒载体；和病毒载体，例如噬菌体载体、腺病毒载体、慢病毒载体、逆转录病毒载体和腺相关病毒载体。在本公开的一个特定示例性实施方案中，将编码开关分子的核酸分子可操作地连接至本公开的载体的启动子。在本公开中，术语“可操作地连接”是指核酸表达控制序列(例如，启动子、信号序列或转录因子结合位点的阵列)与另一核酸序列之间的功能连接，其中该控制序列影响该另一核酸序列的转录和/或翻译。
可以根据本领域中已知的各种方法来构建本公开的重组载体系统。具体的方法描述于Sambrook等人，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory Press(2001)，该文献通过引用并入到本公开中。
本公开的载体可以被构建为用于基因克隆的载体，用于蛋白表达的载体或用于基因递送的载体。另外，可以通过使用原核细胞或真核细胞作为宿主细胞来构建本公开的载体。
例如，当本公开的载体是表达载体并且真核细胞用作宿主细胞时，可以使用源自哺乳动物细胞基因组的启动子(例如，金属硫蛋白启动子、β-肌动蛋白启动子、人血红蛋白启动子和人肌肉肌酸启动子)或源自哺乳动物病毒的启动子(例如，腺病毒晚期启动子、牛痘病毒7.5K启动子、SV40启动子、巨细胞病毒启动子、HSV的tk启动子、小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)启动子、HIV的LTR启动子、莫洛尼病毒启动子、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)启动子和劳斯肉瘤病毒(RSV)启动子，它们通常具有聚腺苷酸序列作为转录终止序列。
在本公开的示例性实施方案中，当载体是递送载体时，它可以是“逆转录病毒载体”。逆转录病毒为基因递送系统提供了便利的平台。被选择用于基因递送的基因可以插入逆转录病毒载体中并且可以包装在逆转录病毒颗粒内。然后，可将重组逆转录病毒体内或体外递送至靶宿主细胞。许多逆转录病毒载体是本领域已知的。在本公开的特定示例性实施方案中，逆转录病毒载体可以是pMT逆转录病毒载体，其是基于MLV的逆转录病毒载体，但不限于此。
在本公开的另一个示例性实施方案中，载体是慢病毒载体或腺病毒载体。
本公开的载体可以与其他序列融合，以易于纯化由此表达的多肽或蛋白质。例如，融合序列可以是谷胱甘肽S-转移酶(Pharmacia，美国)、麦芽糖结合蛋白(NEB，美国)、FLAG(IBI，美国)，6x His(六组氨酸；Quiagen，美国)等。同时，本公开的表达载体可以包括用于评估本公开的抗体或其抗原结合片段或包含它们的CAR多肽的表达的选择标记基因和/或报告基因。选择标记基因包括本领域常用的抗生素抗性基因，例如，对氨苄青霉素、庆大霉素、羧苄青霉素、氯霉素、链霉素、卡那霉素、遗传霉素、新霉素和四环素具有抗性的基因。报告基因包括萤光素酶、β-半乳糖苷酶、氯霉素、乙酰转移酶或绿色荧光蛋白基因。
将本公开的重组载体引入细胞并使其表达的方法在相关领域是众所周知的。根据本领域已知的方法，可以将载体容易地引入宿主细胞，例如哺乳动物细胞、细菌细胞、酵母细胞或昆虫细胞。例如，可以通过物理、化学或生物学手段将载体递送到宿主细胞中。物理手段包括磷酸钙共沉淀、脂质转染、粒子轰击、显微注射、电穿孔等。化学手段包括胶体分散系统，例如大分子复合物、纳米胶囊、微球、珠和基于脂质的系统，包括水包油乳液、胶束、混合胶束和脂质体。并且，生物学手段包括使用如上所述的DNA或RNA载体，例如慢病毒载体、逆转录病毒载体等。
本公开的另一方面提供了用重组载体转化的宿主细胞。
能够稳定且连续地克隆和表达本公开的载体的宿主细胞可以是本领域已知的任何宿主细胞。例如，适合载体的真核宿主细胞包括猴肾细胞7(COS7)、NSO细胞、SP2/0细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、W138细胞、小仓鼠肾脏(BHK)细胞、MDCK细胞、骨髓瘤细胞、HuT 78细胞和HEK-293细胞，但不限于此。
本公开的另一方面提供了表达嵌合抗原受体(CAR)多肽的效应细胞。
在本公开的示例性实施方案中，效应细胞选自树突状细胞、杀伤性树突状细胞、肥大细胞、自然杀伤细胞、B淋巴细胞、T淋巴细胞、巨噬细胞及其前体细胞，但不限于此。T淋巴细胞选自炎性T淋巴细胞、细胞毒性T淋巴细胞、调节性T淋巴细胞或辅助性T淋巴细胞。
在本公开中，效应细胞包括自体细胞群或同种异体细胞群。也就是说，效应细胞包括表达HER2特异性CAR多肽的自体细胞群或同种异体细胞群。
在本公开的另一个示例性实施方案中，效应细胞包括用载体转染或转导的细胞群，所述载体包含编码HER2特异性CAR多肽的核酸分子。转染或转导可以通过本领域已知的各种方式来实现，没有限制。
因此，在本公开的一个具体示例性实施方案中，将编码HER2特异性CAR的核酸分子递送至效应细胞，例如T淋巴细胞或自然杀伤细胞，并使其转录为mRNA。HER2特异性CAR多肽从mRNA翻译而来，并在效应细胞的表面上表达。
本公开的另一方面提供了用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含：(a)药学有效量的上述本公开的抗HER2抗体或其抗原结合片段；和(b)药学上可接受的载剂。
本公开的另一方面提供了用于治疗癌症或炎性疾病的药物组合物，其包含表达上述嵌合抗原受体多肽的效应细胞。
药物组合物是用于免疫疗法的药物组合物，其包含表达抗HER2抗体或其抗原结合片段或嵌合抗原受体多肽的效应细胞。
在本公开中，“免疫疗法”是指通过激活免疫系统来治疗癌症。免疫疗法分为主动免疫疗法和被动免疫疗法。主动免疫疗法包括：i)通过将癌细胞或癌细胞产生的物质注入人体来激活免疫系统的癌症疫苗疗法，和ii)通过施用免疫调节剂，例如细胞因子(干扰素、白介素等)、生长因子等来激活特定白细胞的免疫调节疗法。被动免疫疗法包括抗体疗法和免疫细胞疗法。具体而言，免疫细胞疗法包括树突状细胞疫苗疗法、嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞疗法、自然杀伤(NK)细胞疗法、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)疗法、过继细胞转移等，但不限于此。在本公开中，免疫疗法主要是指使用抗HER2抗体的抗体疗法和使用HER2特异性CAR的免疫细胞疗法。
本公开的药物组合物包含表达本公开的抗HER2抗体或其抗原结合片段；嵌合抗原受体多肽；或嵌合抗原受体的效应细胞作为有效成分。因此，将省略上述细节的描述以避免重复。
如以下实施例所示，本公开的抗HER2抗体对于对曲妥珠单抗几乎不起作用的MCF-7细胞表现出更好的杀伤能力。另外，当与曲妥珠单抗共同施用时，本公开的抗HER2抗体表现出对SKBR3乳腺癌细胞的改善的杀伤能力。因此，本公开内容的组合物对于与曲妥珠单抗联合施用用于治疗癌症和用于治疗不用曲妥珠单抗治疗的癌症非常有效。
可以通过本公开的组合物预防或治疗的癌症包括本领域已知的各种癌症。例如，其包括乳腺癌、卵巢癌、胃癌、肺癌、肝癌、胆管癌、支气管癌、鼻咽癌、喉癌、胰腺癌、膀胱癌、肾癌、结肠直肠癌、结肠癌、宫颈癌、脑癌、前列腺癌、骨癌、头颈癌、皮肤癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌或输尿管癌。
具体地，可以通过本公开的组合物预防或治疗的癌症是表达HER2的癌症，更具体地是表达HER2的乳腺癌或胃癌。
本公开内容的药物组合物中包含的药学上可接受的载剂是制备中常用的载剂，包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁、矿物油等，但不限于此。除了上述成分之外，本公开的药物组合物还可包含润滑剂、湿润剂、甜味剂、调味剂、乳化剂、混悬剂、防腐剂等。合适的药学上可接受的载剂和制剂在Remington's Pharmaceutical Sciences(第19版，1995)中有详细描述。
本公开的药物组合物可以经口或肠胃外施用。例如，其可以静脉内、皮下、肌内、腹膜内、局部、鼻内、肺内、鞘内、经眼、皮内、透皮等方式施用。
本公开的药物组合物的施用剂量取决于诸如配制方法、施用方法、年龄、体重、患者的性别、病理状况、食物、施用时间、施用途径、排泄率和反应性等因素而变化。受过正规训练的医师可以轻松确定并开出用于有效治疗或预防的施用剂量。在本公开的一个具体的示例性实施方案中，本公开的药物组合物的每日施用剂量是0.0001mg/kg至100mg/kg。在本公开中，术语“药学有效量”是指足以预防或治疗癌症的量。
根据本公开所属技术领域普通技术人员可以容易地采用的方法，可以使用药学上可接受的载剂和/或赋形剂将本公开的药物组合物配制成单位剂量形式或多剂量形式。制剂可以是在油性或水性介质中的溶液、混悬剂、乳剂、提取物、散剂、栓剂、粉剂、颗粒剂、片剂或胶囊剂的形式，并且还可以包含分散剂或稳定剂。
在本公开的示例性实施方案中，本公开的药物组合物还可以包含曲妥珠单抗。
本公开的药物组合物除了上述的活性成分外，还可以包含另一种药物活性药剂或药物，例如化学治疗剂，例如天冬酰胺酶、白消安、卡铂、顺铂、柔红霉素、阿霉素、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤、紫杉醇、利妥昔单抗、长春碱、长春新碱等；靶向治疗剂如贝伐单抗、奥拉帕尼等；或免疫检查点抑制剂如纳武单抗或派姆单抗，或可以与它们联合施用。
本公开的另一方面提供了用于治疗癌症的方法，该方法包括向需要治疗的对象施用包含表达抗HER2抗体或其抗原结合片段或HER2特异性嵌合抗原受体的效应细胞的组合物的步骤。
通过本公开的治疗方法治疗的癌症与以上关于药物组合物所定义的相同。
在本公开的一个示例性实施方案中，对象可以是哺乳动物或人类。
由于本公开的用于治疗癌症或炎性疾病的方法使用表达上述抗体或抗原结合片段或嵌合抗原受体的效应细胞作为有效成分，因此，为避免重复，将省略对上述细节的描述。
上述抗HER2抗体或其抗原结合片段可以用于诊断，例如癌症的诊断。
因此，本公开的另一方面提供了用于诊断癌症的试剂盒，其包括本公开的抗HER2抗体或其抗原结合片段。
由于本公开的诊断试剂盒包括上述本公开的抗HER2抗体或其抗原结合片段，并且诊断与上文关于本公开药物组合物所述的相同的疾病，因此，为了避免冗余，将省略上述描述的详细说明。
由于试剂盒包含抗体，因此可以制备成适合各种免疫测定或免疫染色应用的试剂盒。免疫测定或免疫染色包括放射免疫测定、放射免疫沉淀、免疫沉淀、酶联免疫吸附测定(ELISA)、捕获ELISA、抑制或竞争测定、夹心测定、流式细胞术、免疫荧光染色和免疫亲和纯化，但不限于此。免疫测定或免疫染色的方法描述于Enzyme Immunoassay,E.T.Maggio编辑,CRC Press,Boca Raton,Florida,1980；Gaastra,W.,Enzyme-linked immunosorbentassay(ELISA),in Methods in Molecular Biology,卷1,Walker,J.M.编辑,HumanaPress,NJ,1984；以及Ed Harlow和David Lane,Using Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1999，其通过引用并入本公开。
例如，当通过放射免疫测定法进行本公开的方法时，可以使用经放射性同位素标记的抗体(例如，C14、I125、P32或S35)来检测HER2蛋白。当通过ELISA进行本发明的方法时，本公开的具体示例性实施方案包括：(i)将待分析样品涂覆在固体基质表面上的步骤；(ii)使样品与作为一抗的本发明的抗HER2抗体反应的步骤；(iii)使步骤(ii)的产物与偶联有酶的二抗反应的步骤；和(iv)测量酶活性的步骤。
固体基质的适当实例是烃聚合物(例如，聚苯乙烯或聚丙烯)、玻璃、金属或凝胶，最特别是微量滴定板。
与二抗偶联的酶可以包括催化生色反应、荧光反应、发光反应或红外反应的酶，但不限于此。例如，其包括碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶、萤光素酶和细胞色素P450。当碱性磷酸酶用作与二抗偶联的酶时，显色底物如溴氯吲哚磷酸酯(BCIP)、硝基蓝四唑(NBT)、萘酚-AS-B1-磷酸酯和增强的化学荧光(ECF)可用作底物。当使用辣根过氧化物酶时，可以使用底物如氯萘酚、氨基乙基咔唑、二氨基联苯胺、D-萤光素、光泽精(硝酸双-N-甲基吖啶/>)、间苯二酚苄醚、鲁米诺、Amplex Red(10-乙酰-3,7-二羟基苯/>嗪)、HYR(对苯二胺盐酸盐和邻苯二酚)、四甲基联苯胺(TMB)、2,2-叠氮基-二[3-乙基苯并噻唑啉磺酸盐](ABTS)、邻苯二胺(OPD)、萘酚/吡喃宁、葡萄糖氧化酶、t-NBT(硝基蓝四唑/>)和m-PMS(吩嗪硫酸甲酯)。
当通过捕获ELISA进行本发明的方法时，该方法包括：(i)将作为捕获抗体的HER2抗体包被在固体基质的表面上的步骤；(ii)使捕获抗体与样品反应的步骤；(iii)使步骤(ii)的产物与缀合有标记的HER2检测抗体反应的步骤；和(iv)测量由标记产生的信号的步骤。
本公开的抗HER2抗体具有产生可被检测抗体检测的信号的标记。该标记包括化学物质(例如生物素)、酶(碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶或细胞色素P450)、放射性物质(例如C14、I125、P32和S35)、荧光物质(例如荧光素)、发光材料、化学发光材料和FRET(荧光共振能量转移)材料，但不限于此。Ed Harlow和David Lane,Using Antibodies:ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1999中介绍了各种标记和标记方法。
在ELISA方法和捕获ELISA中，可以根据本领域已知的各种方法来进行酶活性的测量或信号的测量。当使用生物素作为标记时，使用链霉抗生物素蛋白可以容易地检测到信号；当使用萤光素酶作为标记时，使用萤光素可以容易地检测到信号。
本公开的试剂盒可以应用到的样品包括细胞、组织、组织衍生的提取物、裂解物、纯化产物、血液、血浆、血清、淋巴或腹水，但不限于此。
本公开的抗体可以用于体内或体外成像。本公开的另一方面提供了一种用于成像的组合物，其包含缀合物，其中本公开的抗体缀合至产生可检测信号的标记。
产生可检测信号的标记包括T1造影剂(例如Gd螯合物)、T2造影剂(例如超顺磁性材料(例如磁铁矿、Fe3O4、γ-Fe2O3、锰铁氧体、钴铁氧体和镍铁氧体))、放射性同位素(例如11C、15O、13N、P32、S35、44Sc、45Ti、118I、136La、198Tl、200Tl、205Bi和206Bi)、荧光材料(荧光素、藻红蛋白、罗丹明、丽丝胺、Cy3和Cy5)、化学发光材料、磁性颗粒、质量标记或电子致密颗粒，但不限于此。
有益效果
本公开的特征和优点可以总结如下：
(a)本公开的抗体或抗原结合片段是特异性结合在癌细胞(特别是乳腺癌或胃癌细胞)中高表达的HER2并且结合与曲妥珠单抗所结合的表位不同的表位的抗体。本公开提供了抗体或抗原结合片段、包含其的嵌合抗原受体及其用途。
(b)本公开的抗体或抗原结合片段的独特之处在于其CDR序列与现有靶向HER2的抗体的CDR序列具有非常低的同源性。
(c)当与曲妥珠单抗相比时，本公开的抗体显示出对不表达HER2的癌细胞的更好的杀伤能力，所述不表达HER2的癌细胞对曲妥珠单抗没有反应性(或具有耐药性)或敏感性降低。另外，当本公开的抗HER2抗体与曲妥珠单抗组合施用时，获得对曲妥珠单抗所作用的癌细胞的协同杀伤能力。因此，本公开的组合物可非常有效地用于与曲妥珠单抗组合施用以治疗癌症或治疗不用曲妥珠单抗治疗的癌症。特别地，当在诸如T淋巴细胞等效应细胞中表达时，包含本公开的抗HER2抗体或抗原结合片段的嵌合抗原受体可以有效地用于各种HER2相关癌症的免疫细胞疗法。
(d)不希望受到理论的束缚，认为本公开的抗体由于结合与曲妥珠单抗所结合的表位不同的表位并以与曲妥珠单抗不同的方式抑制HER2而显示出上述效果。
附图说明
图1显示了通过ELISA分析hz2G10、hz39D2、24D3、1G3和hz8G11克隆对HER2-ECD-Fc抗原的亲和力的结果。
图2显示了研究hz2G10、hz39D2、24D3、1G3和hz8G11克隆所结合的HER2胞外结构域的结果。
图3a和图3b显示了分析单独施用本公开的五种抗体(hz2G10、hz39D2、24D3、1G3和hz8G11)对HER2过表达的乳腺癌细胞(SKBR3)和未表达HER2的乳腺癌细胞(MCF-7)生长的抑制作用的结果。
图3c和图3d显示了分析本公开的五种抗体(hz2G10、hz39D2、24D3、1G3和hz8G11)和曲妥珠单抗(TRA)抗体联合施用对抑制HER2过表达的乳腺癌细胞SKBR3)和不表达HER2的乳腺癌细胞(MCF-7)生长的抑制作用的结果。
图4显示了研究通过表达ErbB家族而开发的抗体的特异性的结果。西妥昔单抗(CET)、曲妥珠单抗(TRA)和帕曲土单抗(patritumab，AMG888，AMG)分别用作与EGFR、HER2和HER3结合的对照组。
图5a至图5e显示了比较开发的抗体与曲妥珠单抗的表位的结果。为了与曲妥珠单抗的表位比较，将曲妥珠单抗和HER2-His固定在传感器芯片上，然后分析与本公开的五种抗体的结合。
图6a至图6c显示了分析单独施用hz39D2及其亲和力改善的克隆(hz39D2.14、hz39D2.22和hz39D2.23)或与曲妥珠单抗抗体联合施用对HER2过表达的胃癌和乳腺癌细胞生长的抑制作用的结果。
本发明最佳实施方案
以下会通过实施例详细地描述本公开。然而，以下实施例仅用于说明性目的，并且对于本领域普通技术人员将显而易见的是，本公开的范围不受所述实施例限制。
实施例
实施例1：抗HER2抗体的开发
为了开发抗体，使用动物细胞产生了HER2蛋白的胞外结构域(ECD)。使用HindIII和BamHI限制酶，将其中人IgG1的铰链区和Fc区(CH2-CH3)结合至ECD的C末端的DNA克隆到pCEP4(Invitrogen，目录号V044-50)中。然后，使用聚乙烯亚胺(Polyscience Inc.，目录号23966)将克隆的载体瞬时转化到FreeStyle 293F(Invitrogen，目录号R790-07)细胞中，然后使用Protein-A Ceramic HyperD F树脂(PALL，目录号20078-028)从细胞培养物中纯化克隆的载体。使用蛋白质测定染料(Bio-Rad，目录号500-0006)对纯化的蛋白质进行定量，并在SDS-PAGE后通过考马斯亮蓝染色研究其浓度和纯度。将100μg蛋白抗原与弗氏佐剂(Sigma，目录号F5506)混合，然后腹膜内注射到BALB/c小鼠(Dae Han Bio)中。2周后，进一步注射100μg在PBS中稀释的抗原。3天后，取出小鼠的脾脏并分离淋巴细胞。将分离的淋巴细胞与SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞(ATCC，目录号CRL-1581)以5:1的比例混合，然后使用PEG-1500(Roche，目录号783641)进行融合。选择性地分选出融合细胞(杂交瘤)，并在含有HAT补充剂(Sigma，目录号H0262)的培养基中培养。
通过ELISA检查获得的杂交瘤细胞，以确定它们是否是产生结合抗原的抗体的细胞。在室温下将HER2-ECD-Fc或ChromPure人IgG(hIgG，Jackson ImmunoresearchLab.Inc.，目录号009-000-003)以1μg/mL的浓度在Costar 96孔板(Corning，目录号3590)上固定1小时。将所得物用TBS-T(0.05％Triton X-100)洗涤3次，然后在室温下用300μL的TBS-T/SM(2％脱脂奶)封闭30分钟。清洗封闭的板3次并添加杂交瘤培养物后，使抗体在37℃下结合1小时。洗涤3次后，加入在TBS-T/SM中稀释至1:5000的抗mIgG-HRP(Pierce，目录号31439)作为二抗，使该抗体在37℃下结合1小时。洗涤所得物3次并添加TMB(SurModics，目录号TMBC-1000-01)后，使混合物在室温下显色5分钟。然后，通过加入1N硫酸(DukSan，目录号254)来停止显色。使用Victor X3(PerkinElmer，目录号2030-0030)在450nm处测量吸光度，并选择与HER2-ECD-Fc特异性结合的抗体。
由于HER2是在细胞表面表达的蛋白质，因此通过基于细胞的ELISA研究了开发的抗体是否与过表达HER2的细胞结合。将HER2过表达的SKOV-3卵巢癌细胞(Korean CellLine Bank，目录号30077)以10000个细胞/孔等分到Costar 96孔细胞培养板(Corning，目录号3595)中，然后培养24小时。第二天，除去细胞培养物上清液后，将所得物用PBS洗涤3次，并在加入杂交瘤细胞培养物后于37℃进一步培养2小时。用TBS-T洗涤3次并加入在PBS/FBS(3％FBS)中稀释为1:5000的山羊抗mIgG-HRP作为二抗，将所得物在室温下处理1小时。用TBS-T洗涤3次后，使用TMB显色。选择61个显示出比SP2/0细胞培养物吸光度更高的克隆作为阴性对照组。
将从与HER2特异性结合的单克隆抗体中最终选择的五种抗体(hz2G10、hz39D2、24D3、1G3、hz8G11)修饰为嵌合抗体或人源化抗体(hz)。嵌合抗体或人源化抗体的氨基酸序列在所附序列表中描述。
最终选择的五种抗体(hz2G10、hz39D2、24D3、1G3，hz8G11)的吸光度显示在图1和表1中。
[表1]
验证五种所选抗体的HER2蛋白与胞外结构域(ECD)的结合
实施例2：验证开发的HER2蛋白抗体的结合位点
通过ELISA验证了所选择的五种抗体(hz2G10、hz39D2、24D3、1G3，hz8G11)与HER2蛋白的胞外结构域(ECD)的结合位点。对于ELISA，使用动物细胞产生了ERBB家族蛋白的胞外结构域(ECD)，并将其用作抗原。具体地，使用HindIII和BamHI限制酶将其中人IgG1的铰链区和Fc区(CH2-CH3)结合至ECD的C末端的DNA克隆到pCEP4(Invitrogen，目录号V044-50)中。然后，使用聚乙烯亚胺(Polyscience Inc.，目录号23966)将克隆的载体瞬时转化到FreeStyle 293F(Invitrogen，目录号R790-07)细胞中，然后使用Protein-A CeramicHyperD F树脂(PALL，目录号20078-028)从细胞培养物中纯化HER2-ECD DI Fc、HER2-ECDDII Fc、HER2-ECD DIII Fc、HER2-ECD DIV Fc和HER2-ECD Fc融合蛋白。使用蛋白质测定染料(Bio-Rad，目录号500-0006)对纯化的蛋白质进行定量，并在SDS-PAGE后通过考马斯亮蓝染色研究其浓度和纯度。
将HER2-ECD DI Fc、HER2-ECD DII Fc、HER2-ECD DIII Fc、HER2-ECD DIV Fc和HER2-ECD Fc融合蛋白以1μg/mL的浓度在4℃下在Costar 96孔板(Corning，目录号3590)上固定过夜。将所得物用TBS-T(0.05％Triton X-100)洗涤3次，然后在室温下用100μL TBS-T/BSA(5％BSA)封闭1小时。洗涤封闭的板3次并加入抗HER2抗体后，使该抗体在室温下结合1小时。洗涤3次，然后加入在TBS-T/BSA中稀释至1:3000的抗人IgG-HRP作为二抗，使该抗体在室温下结合1小时。洗涤所得物3次并添加TMB(SurModics，目录号TMBC-1000-01)后，使混合物在室温下显色5分钟。然后，通过加入1N硫酸(DukSan，目录号254)来停止显色。使用Victor X3(PerkinElmer，目录号2030-0030)在450nm处测量吸光度。
结果如图2所示。
如图2所示，在本公开开发的抗体中，hz2G10和hz39D2结合于HER2蛋白的胞外结构域的结构域1，24D3结合于结构域3，1G3和hz8G11结合于结构域4。
从该结果可以看出，本公开的五种抗体通过结合与曲妥珠单抗(TRA)所结合的HER2蛋白的胞外结构域4不同的HER结构域(hz2G10、hz39D2、24D3)可以抑制HER2过表达的癌细胞的生长，或在单独使用或与曲妥珠单抗联合施用时，可显示出显著更优的抑制细胞生长的作用。因此，这些抗体可单独或与曲妥珠单抗一起有效地用于预防或治疗与HER2蛋白表达有关的癌症。
实施例3：比较开发的抗体对乳腺癌细胞生长的抑制作用
通过单独使用MCF-7或将其与曲妥珠单抗一起使用来治疗HER2过表达的SKBR3乳腺癌细胞或不表达HER2的乳腺癌细胞，从而分析细胞生存力。对于联合施用，将所开发的抗体和曲妥珠单抗以1:1的重量比混合。将SKBR3细胞(Korean Cell Line Bank，目录号30030，5000个细胞/孔)和MCF-7细胞(ATCC，目录号HTB22，5000个细胞/孔)等分到96孔板上并培养24小时。用纯化的抗体以20μg/mL的终浓度处理后，将细胞进一步培养4天。为了测量细胞生存力，加入CCK-8(Dojindo，目录号CK-04-13)至终浓度为10％，并在37℃处理3小时后测量吸光度。相对于未经抗体处理的孔的吸光度作为100％计算相对细胞生存力。
结果示于图3a至3d和表2中。
[表2]
用抗体处理的HER2阳性SKBR3乳腺癌细胞和HER2阴性MCF-7乳腺癌细胞的相对细胞生存力(单一疗法)
在上表中，hIgG代表人IgG。如图3a、图3b和表2所示，本公开的五种抗体在单独治疗时显示出抑制SKBR3乳腺癌细胞增殖的作用。与不同浓度的阳性对照曲妥珠单抗相比，它们显示出相当的或更好的抑制细胞生长的作用(图3a)。然而，本公开的五种抗体没有显示出像阳性对照曲妥珠单抗那样的抑制HER2阴性MCF-7细胞增殖的明显作用(图3b)。
[表3]
用抗体处理的HER2阳性SKBR3乳腺癌细胞和HER2阴性MCF-7乳腺癌细胞的相对细胞生存力(联合疗法)
在上表中，hIgG表示用人IgG处理的测试组，TRA+表示曲妥珠单抗和本发明的抗体联合施用的测试组。如图3c、图3d和表3所示，与使用曲妥珠单抗的单一疗法相比，当与曲妥珠单抗一起用于治疗SKR3乳腺癌细胞时，本公开的所有五种抗体(hz2G10、hz39D2、24D3、1G3，hz8G11)显示出相当的或更好的细胞生长抑制作用(3c)。
不希望受到理论的束缚，认为本公开的抗体由于结合与曲妥珠单抗所结合的表位不同的HER2上的表位并以与曲妥珠单抗不同的方式抑制HER2而显示出上述效果。
实施例4：抗体序列分析
为了分析抗体序列，使用各自的杂交瘤RNA构建了噬菌体Fab抗体文库，并进行了三步淘选以获得与HER2-ECD-Fc结合的噬菌体(Phage display:alaboratory manual，Carlos Barbas III等人，Cold Spring Harbor Laboratory Press)。培养杂交瘤后，使用SV总RNA分离系统(Promega，目录号Z3100)分离RNA，并由此合成cDNA。使用已知的引物组(请参见Phage display:a laboratory manual,Carlos Barbas III等人,Cold SpringHarbor Laboratory Press)，扩增抗体的可变区并在连接到人Ck(κ链)和CH1之后使用Sfi-I限制酶将其克隆到pComb3X载体(Barbas Laboratory，Scripps Research Institute)中，然后转化到ER2537细菌(New England Biolabs，目录号801-N)中。将转化的细菌用VCSM13辅助噬菌体(Stratagene，目录号200251)转染，并使用固定有HER2-ECD-Fc的免疫管获得与HER2-ECD-Fc结合的克隆。
从抗体的克隆中，通过ELISA确认与HER2-ECD-Fc结合的抗体。将经转化的细菌的菌落在37℃下培养，直到600nm处的吸光度达到0.5，然后以终浓度为1mM的IPTG处理，并以Fab形式表达抗体，同时在30℃下过夜培养。通过离心5mL培养物收集细胞后，将细胞悬浮于0.4mL的1xTES(50mM Tris，1mM EDTA，20体积/体积％蔗糖，pH8.0)中，然后在4℃处理10分钟。向其中添加0.6mL的0.2xTES，并在4℃下进一步处理30分钟后，将所得产物离心，并取上清液。用TBS-T清洗涂有浓度为1μg/mL HER2-ECD-Fc的Costar 96孔半区板(Corning Inc.，目录号3690)3次后，用TBS-T(3％脱脂奶，0.05％Triton X-100)在室温下封闭1小时。使用TBS-T/SM以1:3的比例稀释每个菌落的培养液或周质提取物(周质)，并使其在室温下结合1小时。洗涤3次并用稀释至1:5000的抗HA-HRP(Roche，目录号120-138-190-01)作为二抗后，使所得物在室温下结合1小时。洗涤3次后，使用TMB使所得物显色。
在细胞培养物或周质提取物中，大多数菌落显示出0.2或高于0.2的吸光度，并针对这些克隆分析了抗体的碱基序列。碱基序列分析表明，源自单个杂交瘤的菌落具有相同的序列。
表4和表5总结了每个克隆产生的抗体的CDR序列。
[表4]
[表5]
表4和表5显示了所开发的抗体的重链CDR(CDRH)和轻链CDR(CDRL)的氨基酸序列。
实施例5：开发的HER2抗体的特异性
通过ELISA研究了开发的本公开的五种抗体是否特异性结合属于ErbB家族蛋白的HER2。为了确认所开发的抗体是否特异性结合属于ErbB家族蛋白的HER2，通过ELISA检查了属于ErbB家族的EGFR、HER2、HER3和HER4的胞外结构域。EGFR的胞外结构域(EGFR-ECD-Fc)以与上述实施例2中所述的HER2-ECD-Fc相同的方式产生，并且购买HER3(R&D Systems，#348-RB-050)和HER4(R&D Systems，#1131-ER-050)蛋白。西妥昔单抗(CET)、曲妥珠单抗(TRA)和帕曲土单抗(patritumab，AMG888，AMG)分别用作与EGFR、HER2和HER3结合的对照组抗体。
结果如图4所示。
从图4可以看出，其证实了本发明的五种抗体与人ErbB家族蛋白中的HER2特异性结合。
实施例6：比较开发的抗体和曲妥珠单抗的表位
已知抗HER2抗体曲妥珠单抗结合HER2 ECD的四个结构域中的结构域4。为了研究开发的抗体和曲妥珠单抗是否共享HER2的表位，使用Octet(Pall ForteBio)进行了表位鉴定(epitope binning)。通过使用ECD/NHS的胺偶联以10μg/mL的浓度将曲妥珠单抗固定在AR2G传感器芯片(ForteBio，目录号18-5092(托盘)，18-5093(支持包)，18-5094(外壳))上。在使HER2-ECD-His蛋白以10μg/mL的浓度与固定了曲妥珠单抗的传感器芯片结合10分钟后，使曲妥珠单抗与HER2-ECD之间的结合稳定5分钟。然后，将本公开的五种抗体以10μg/mL的浓度结合10分钟，并且使抗原与抗体之间的结合稳定10分钟。在固定曲妥珠单抗后，使用动力学缓冲液(ForteBio，目录号18-1092)稀释所有抗体和抗原。在稳定过程中使用了相同的缓冲液。如果另外添加的抗体结合与曲妥珠单抗结合的HER2-ECD蛋白，则可以解释为该抗体不与曲妥珠单抗共享表位。
结果如图5a至图5e所示。
如图5a至图5e所示，证实了所开发的抗体hz2G10、hz39D2、24D3和hz8G11具有与曲妥珠单抗不同的表位，因为它们结合与曲妥珠单抗结合的HER2-ECD。相反，1G3并未结合与曲妥珠单抗结合的HER2-ECD，这表明它与曲妥珠单抗共享表位。
实施例7：亲和力增强的hz39D2抗体的开发
为了开发基于人源化39D2抗体(hz39D2)的亲和力增强的抗体，本公开的发明人开发了随机化的具有轻链或重链的CDR3的噬菌体抗体文库(Phage display:a laboratorymanual,Carlos Barbas III等人,Cold Spring Harbor Laboratory Press)。根据Kabat编号对应于重链CDR3的D101和Y102的D和Y，和根据Kabat编号对应于轻链的CDR3的P95、W96、T97的P、W和T被排除在随机化之外，因为它们是人抗体中常见的氨基酸。合成引物，使得腺嘌呤(A)、胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)和胸腺嘧啶(T)以相同的比例随机插入对应于待随机化的氨基酸的密码子的第一位置和第二位置，将鸟嘌呤(G)或胞嘧啶(C)以相同的比例插入第三位置。从开发的文库中，使用HER2-ECD-His蛋白通过生物淘筛来选择亲和力更高的克隆。表6和表7总结了最终选择的三种抗体hz39D2.14、hz39D2.22和hz39D2.23的CDR序列数据。用下划线标出经修饰以改善亲和力的氨基酸残基。
[表6]
[表7]
产生IgG抗体以验证三种选定抗体(hz39D2.14、hz39D2.22和hz39D2.23)的增强的亲和力。通过ECD/NHS将2000RU的山羊抗人IgG(Invitrogen，#H10500)固定在CM5传感器芯片上。然后，以50μL/min的速率使抗体结合5分钟，然后通过使缓冲液流动稳定5分钟。稳定抗体后，使HER2-ECD-His蛋白以50μL/min的速率结合4分钟，然后通过使缓冲液流动15分钟进行分离。在分析浓度之后，将所得物使用10mM甘氨酸(pH1.5)再循环，然后进行后续测定。使用BIAevaluation软件分析抗体的亲和力。分析结果总结在表8中。如表8所示，与hz39D2相比，所有三种选择的抗体(hz39D2.14、hz39D2.22和hz39D2.23)显示出改善的亲和力。
[表8]
克隆 Ka(1/Ms) Kd(1/s) KD(M)
hz39D2 6.8E+04 2.5E-03 3.7E-08
hz39D2.14 3.7E+04 3.0E-04 8.0E-09
hz39D2.22 8.1E+04 1.6E-04 2.0E-09
hz39D2.23 7.1E+04 2.0E-04 2.8E-09
使用HER2过表达的NCI-N87和OE-19胃癌细胞以及BT-474乳腺癌细胞分析具有改善的亲和力的三种抗体(hz39D2.14、hz39D2.22和hz39D2.23)的抗癌作用。用浓度为5μg/mL的每种抗体单独或与曲妥珠单抗组合处理细胞后，分析癌细胞的生存力(图6a至图6c)。如图6a至图6c所示，证实了亲和力增强的hz39D2.14、hz39D2.22和hz39D2.23抗体在单独处理时显示出改善的抑制癌细胞增殖的效果。

Claims (21)

1.一种抗HER2(人表皮生长因子受体2)的抗体或其抗原结合片段，包含：
(a)包含SEQ ID NO 7的CDRH1，SEQ ID NO 8的CDRH2和SEQ ID NO 9的CDRH3的重链可变区，和包含SEQ ID NO 10的CDRL1，SEQ ID NO 11的CDRL2，和SEQ ID NO 12的CDRL3的轻链可变区；
(b)包含SEQ ID NO 7的CDRH1，SEQ ID NO 8的CDRH2和SEQ ID NO 71的CDRH3的重链可变区，和包含SEQ ID NO 10的CDRL1，SEQ ID NO 11的CDRL2，和SEQ ID NO 12的CDRL3的轻链可变区；
(c)包含SEQ ID NO 7的CDRH1，SEQ ID NO 8的CDRH2和SEQ ID NO 72的CDRH3的重链可变区，和包含SEQ ID NO 10的CDRL1，SEQ ID NO 11的CDRL2，和SEQ ID NO 73的CDRL3的轻链可变区；或
(d)包含SEQ ID NO 7的CDRH1，SEQ ID NO 8的CDRH2和SEQ ID NO 72的CDRH3的重链可变区，和包含SEQ ID NO 10的CDRL1，SEQ ID NO 11的CDRL2，和SEQ ID NO 74的CDRL3的轻链可变区。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中，
(a)重链可变区包含SEQ ID NO 39的氨基酸序列，并且轻链可变区包含SEQ ID NO 43的氨基酸序列；
(b)重链可变区包含SEQ ID NO 83的氨基酸序列，并且轻链可变区包含SEQ ID NO 85的氨基酸序列；
(c)重链可变区包含SEQ ID NO 87的氨基酸序列，并且轻链可变区包含SEQ ID NO 91的氨基酸序列；
(d)重链可变区包含SEQ ID NO 95的氨基酸序列，并且轻链可变区包含SEQ ID NO 99的氨基酸序列；或
(e)重链可变区包含SEQ ID NO 103的氨基酸序列，并且轻链可变区包含SEQ ID NO107的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中，
(a)抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO 41的氨基酸序列的重链，并且抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO 45的氨基酸序列的轻链；
(b)抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO 89的氨基酸序列的重链，并且抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO 93的氨基酸序列的轻链；
(c)抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO 97的氨基酸序列的重链，并且抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO 101的氨基酸序列的轻链；或
(d)抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO 105的氨基酸序列的重链，并且抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO 109的氨基酸序列的轻链。
4.一种嵌合抗原受体多肽，其包含：
(a)HER2结合结构域，其包含根据权利要求1至3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段；
(b)跨膜结构域(TM)；
(c)共刺激结构域；和
(d)细胞内信号传导结构域(ICD)。
5.根据权利要求4所述的嵌合抗原受体多肽，其中，跨膜结构域是选自T细胞受体α链、β链或ζ链，CD28，CD3ε，CD45，CD4，CD5，CD8，CD9，CD16，CD22，CD33，CD37，CD64，CD80，CD86，CD134，CD137和CD154的蛋白的跨膜结构域。
6.根据权利要求4所述的嵌合抗原受体多肽，其中，共刺激结构域是从选自MHC I类分子、TNF受体蛋白、免疫球蛋白样蛋白、细胞因子受体、整联蛋白、信号转导的淋巴细胞活化分子(SLAM)、激活性NK细胞受体、BTLA(B淋巴细胞和T淋巴细胞弱化因子)、Toll样配体受体、OX40、CD2、CD7、CD27、CD28、CD30、CD40、CDS、ICAM-1、LFA-1(CD11a/CD18)、4-1BB(CD137)、B7-H3、ICOS(CD278)、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM(LIGHTR)、KIRDS2、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、ITGAM、CD11b、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、ITGB7、NKG2D、NKG2C、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRTAM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD19a和与CD83特异性结合的配体的蛋白获得的功能性信号传导结构域。
7.根据权利要求6所述的嵌合抗原受体多肽，其中，信号转导的淋巴细胞活化分子(SLAM)选自SLAMF7、SLAMF4(CD244、2B4)、SLAMF6(NTB-A、Ly108)、SLAM(SLAMF1、CD150、IPO-3)和BLAME(SLAMF8)。
8.根据权利要求6所述的嵌合抗原受体多肽，其中，TNF受体蛋白是TNFR2。
9.根据权利要求4所述的嵌合抗原受体多肽，其中，细胞内信号传导结构域包含4-1BB、CD28、OX40或CD3ζ的功能性信号传导结构域，或其组合。
10.一种核酸分子，其编码根据权利要求1所述的抗HER2抗体或其抗原结合片段。
11.一种核酸分子，其编码权利要求4所述的嵌合抗原受体多肽。
12.一种重组载体，其包含根据权利要求10或11所述的核酸分子。
13.一种宿主细胞，其用根据权利要求12所述的重组载体转化。
14.一种效应细胞，其表达根据权利要求4所述的嵌合抗原受体多肽。
15.根据权利要求14所述的效应细胞，其中，所述效应细胞选自树突状细胞、肥大细胞、自然杀伤细胞、B淋巴细胞、T淋巴细胞、巨噬细胞及其前体细胞。
16.根据权利要求15所述的效应细胞，其中，树突状细胞是杀伤性树突状细胞。
17.根据权利要求15所述的效应细胞，其中，T淋巴细胞选自炎性T淋巴细胞、细胞毒性T淋巴细胞、调节性T淋巴细胞或辅助性T淋巴细胞。
18.一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含：(a)药学有效量的权利要求1或2所述的抗HER2的抗体或其抗原结合片段；和(b)药学上可接受的载剂。
19.一种用于治疗癌症的药物组合物，其包含表达根据权利要求14所述的嵌合抗原受体多肽的效应细胞。
20.根据权利要求18或19所述的组合物，其中所述药物组合物还包含曲妥珠单抗。
21.一种用于诊断癌症的试剂盒，其包含根据权利要求1至3中任一项所述的抗HER2的抗体或其抗原结合片段。
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Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012021512A2 (en) 2010-08-10 2012-02-16 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Erythrocyte-binding therapeutics
US9517257B2 (en) 2010-08-10 2016-12-13 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Erythrocyte-binding therapeutics
US9850296B2 (en) 2010-08-10 2017-12-26 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Erythrocyte-binding therapeutics
US10946079B2 (en) 2014-02-21 2021-03-16 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Glycotargeting therapeutics
AU2015233084B2 (en) 2014-02-21 2020-12-17 Anokion Sa Glycotargeting therapeutics
US10953101B2 (en) 2014-02-21 2021-03-23 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Glycotargeting therapeutics
US10046056B2 (en) 2014-02-21 2018-08-14 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Glycotargeting therapeutics
KR101697473B1 (ko) 2014-11-26 2017-01-18 주식회사 녹십자랩셀 T 세포를 이용한 자연살해세포의 배양방법
EP3638296A1 (en) 2017-06-16 2020-04-22 The University Of Chicago Compositions and methods for inducing immune tolerance
US11649294B2 (en) 2017-11-14 2023-05-16 GC Cell Corporation Anti-HER2 antibody or antigen-binding fragment thereof, and chimeric antigen receptor comprising same
EP3790901A1 (en) * 2018-05-07 2021-03-17 Anokion SA Glycophorin a antigen-binding proteins
CN110790840A (zh) * 2018-08-01 2020-02-14 三生国健药业（上海）股份有限公司 结合人her2的抗体、其制备方法和用途
KR102666554B1 (ko) * 2021-05-25 2024-05-20 주식회사 이수앱지스 ErbB3 특이적인 키메라 항원 수용체 및 이를 발현하는 면역세포 치료제
CN114656559B (zh) * 2022-04-26 2023-06-02 生工生物工程（上海）股份有限公司 一种特异性结合ck7蛋白的结合蛋白、试剂盒及其应用
CN114805584B (zh) * 2022-06-30 2022-09-09 上海优替济生生物医药有限公司 抗原结合蛋白及其用途
CN116047081B (zh) * 2023-01-10 2024-02-13 北京新源长青生物科技有限公司 检测Aβ40、Aβ42的试剂盒与方法
CN115957321A (zh) * 2023-03-03 2023-04-14 盛禾(中国)生物制药有限公司 一种抗her2抗体在制备治疗癌症的药物中的用途
CN118206662A (zh) * 2024-05-14 2024-06-18 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种靶向Her2的新型单克隆抗体及其应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5821337A (en) * 1991-06-14 1998-10-13 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants
KR20150048783A (ko) * 2012-08-20 2015-05-07 프레드 헛친슨 켄서 리서치 센터 세포 면역요법을 위한 방법 및 조성물
WO2017079705A1 (en) * 2015-11-05 2017-05-11 Juno Therapeutics, Inc. Chimeric receptors containing traf-inducing domains and related compositions and methods
WO2017079694A2 (en) * 2015-11-04 2017-05-11 Priceman Saul J Chimeric antigen receptors targeting her2
WO2017167967A1 (en) * 2016-04-01 2017-10-05 Istituto Biochimico Italiano Giovanni Lorenzini S.P.A. Erbb2-targeting antibody

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4554101A (en) 1981-01-09 1985-11-19 New York Blood Center, Inc. Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity
CA2120745A1 (en) 1992-06-30 1994-01-06 Philip G. Kasprzyk A combination of anti-erbb-2 monoclonal antibodies and method of using
US5783186A (en) 1995-12-05 1998-07-21 Amgen Inc. Antibody-induced apoptosis
US7371376B1 (en) * 1996-10-18 2008-05-13 Genentech, Inc. Anti-ErbB2 antibodies
JP2007517763A (ja) 2003-08-01 2007-07-05 エイアンドジー ファーマスーティカル インコーポレイテッド Ｈｅｒ２アンタゴニストを用いた治療への感受性を回復させる組成物および方法
KR20150043558A (ko) * 2004-07-22 2015-04-22 제넨테크, 인크. Ｈｅｒ２ 항체 조성물
EP2163258A1 (en) 2007-06-19 2010-03-17 Takeda Pharmaceutical Company Limited Preventive/remedy for cancer
US8314213B2 (en) 2008-04-18 2012-11-20 Xencor, Inc. Human equivalent monoclonal antibodies engineered from nonhuman variable regions
JP2010006705A (ja) * 2008-06-13 2010-01-14 Atlas Antibodies Ab Ｈｅｒ２サブセット
KR20120005021A (ko) 2009-05-08 2012-01-13 제넨테크, 인크. 인간화 항-ｅｇｆｌ７ 항체 및 그의 사용 방법
WO2011127297A1 (en) 2010-04-07 2011-10-13 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Method of treating tumor resistant to herceptin or paclitaxel using foxm1 inhibitors and detecting same
JP6082344B2 (ja) * 2010-05-27 2017-02-15 ゲンマブ エー／エス Ｈｅｒ２エピトープに対するモノクローナル抗体
KR101453462B1 (ko) * 2013-05-16 2014-10-23 앱클론(주) Her2에 특이적으로 결합하는 항체
GB201518136D0 (en) * 2015-10-14 2015-11-25 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd Novel chimeric antigen receptors
KR20160022857A (ko) * 2016-02-18 2016-03-02 앱클론(주) Her2에 특이적으로 결합하는 항체

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5821337A (en) * 1991-06-14 1998-10-13 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants
KR20150048783A (ko) * 2012-08-20 2015-05-07 프레드 헛친슨 켄서 리서치 센터 세포 면역요법을 위한 방법 및 조성물
WO2017079694A2 (en) * 2015-11-04 2017-05-11 Priceman Saul J Chimeric antigen receptors targeting her2
WO2017079705A1 (en) * 2015-11-05 2017-05-11 Juno Therapeutics, Inc. Chimeric receptors containing traf-inducing domains and related compositions and methods
WO2017167967A1 (en) * 2016-04-01 2017-10-05 Istituto Biochimico Italiano Giovanni Lorenzini S.P.A. Erbb2-targeting antibody

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NAHTA等.The HER-2-targeting antibodies trastuzumab and pertuzumab synergistically inhibit the survival of breast cancer cells.《Cancer Res》.2004,第2343-2346页. *

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