CN111650167A - 一种包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器，将分裂适配体与纳米簇信标相融合。此外，由于银纳米簇具有可调的荧光特性以及分裂适配体对目标物的特异性识别，该传感器可以实现对多种目标物的特异性检测，通过改变适配体序列，可以拓宽该策略的应用范围。本发明具有免标记，无酶，灵敏度高的优点，能够灵敏的检测出生物样品中的目标物含量。
Description
技术领域
本发明涉及一种生物传感器，具体为一种包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器。
背景技术
通过指数富集配体系统进化(systematic evolution of ligands byexponential enrichment，SELEX)技术可以在众多核酸序列中筛选出与目标物具有高亲和力的核酸适配体序列，由于这种特异性的识别我们可以检测多种目标物分子，包括小分子氨基酸到大分子蛋白等。在生物传感分析领域中，多数是基于竞争性结合的检测策略，但是这种策略存在着非特异性的干扰，降低最终结果的准确性。根据报道，一些适体可以被分裂成多条短片段，这些短片段仍具有特异性识别目标物的能力。当加入目标检测物时，这些被分裂的适体片段与目标物形成一种夹心型的复合物，这种复合物不会引起构象的改变，可以有效地克服完整适体识别的缺点。
分裂适配体以被广泛应用于构建荧光、比色以及电化学的适体传感领域中。其中基于分裂适体的荧光传感方法具有高灵敏性、便携性以及简易性等优点，但是这种策略往往需要在双链DNA中嵌入具有毒性的荧光染料，所以会产生毒性的担忧。或者是基于依赖于距离的荧光法进行表征，这类方法相对而言可以简化检测步骤以及避免使用带有毒性的荧光染料。DNA-银纳米簇是一种具有高度光稳定性、低毒性以及合成简单等优点的荧光纳米材料。
发明内容
发明目的：本发明的目的在于提供一种增强检测的灵敏度和准确度的包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器。
技术方案：本发明所述的包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器，通过以下方法制备，具体包括如下步骤：
a)将银离子与DNA模板共同孵育形成DNA-银纳米簇信标DNA-AgNCs；其中，DNA模板为分裂适配体1，所述DNA-AgNCs即为AgNCs-Apt1；
b)分别将含有不同浓度的目标物样品，与a)所得的AgNCs-Apt1溶液、富含鸟嘌呤增强子序列的分裂适配体2GRS-Apt2溶液以及反应缓冲液1等量混合；其中，目标物样品选自腺苷、可卡因、17β-雌二醇、凝血酶中的一种；
c)将b)所得的样品溶液在2000-4000rpm的转速进行离心，接着将其置于20-25℃下孵育，在激发波长为550-570nm下，记录610-640nm发射波长下的荧光强度；通过绘制关系曲线图，计算目标物浓度与荧光强度之间的关系，用于定量目标分子；
d)将健康志愿者的血清样品进行离心，接着加入Tris-HCl缓冲液将血清样品稀释50-100倍后，取10-20μL作为待测目标物样品进行b)、c)操作步骤；
e)将待测目标样品在610-640nm处的发射波长获得的荧光强度，与步骤c)获得的关系图进行对比，计算出血清样品中的目标物含量。
所述的包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器，步骤b)中所述的反应缓冲液1是Tris-HCl缓冲溶液。
所述的包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器，用以下DNA序列分别制备腺苷、可卡因、17β-雌二醇以及凝血酶的分裂适配体：
所述的包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器，步骤b)中AgNCs-Apt1与GRS-Apt2以及含有不同浓度目标物的检测样品混合于缓冲液1中，步骤为：将1体积的AgNCs-Apt1溶液、1体积的GRS-Apt2溶液、2体积含有不同浓度的目标物样品分别与6体积的反应缓冲液1混合反应。
所述的包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器，步骤b)所述的混合条件为20-25℃下孵育20-40min。
所述的包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器，步骤b)所述的腺苷的浓度范围是0-1600nM，可卡因的浓度范围是0-2000nM，17β-雌二醇的浓度范围是0-2000nM，凝血酶的浓度范围是0-2000nM。
所述的包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器，步骤c)具体为：将步骤b)所得混合物分别在激发波长为561nm下，测定样品627nm处的荧光值。
所述的包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器，所述的AgNCs-Apt1是通过加入硝酸银、硼氢化钠，使其原位还原生成。
所述的包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器，所述的DNA-银纳米簇信标是通过以下步骤制备得到的：将目标分子的纳米簇信标模板即分裂适配体1Apt1溶解于缓冲液1中，加热至90-95℃，维持5-15min后迅速转移至冰水浴中，随后加入硝酸银溶液，涡旋混合后避光20-25℃反应20-40min，接着，迅速加入硼氢化钠溶液，充分振摇混合过夜；目标分子为腺苷、可卡因、17β-雌二醇、凝血酶中的一种。
本发明的方法原理如图1所示，可以看出当溶液中没有目标分子时，NCB对彼此分离。随着目标的加入会产生夹心型复合体，激活NCB产生高荧光输出。检测不同浓度目标分子荧光强度，绘制关系曲线图，定量目标分子。
有益效果：与现有技术相比，本发明的荧光传感器高灵敏，检测限达到了picomolar的水平。DNA-AgNCs作为荧光探针，具有低成本、强荧光的优点。同时，DNA-AgNCs具有模块化设计的优点，不同序列组成的DNA-AgNCs的荧光物理性质具有显著差异，可根据实际应用选择合适的序列合成DNA-AgNCs，具有通用型强，检测方法简易，成本更低廉的优势。此外，本发明采用简易的纳米簇信标与拆分适配体结合形成夹心型的复合体系可用以构建开启式荧光传感平台。本发明的荧光传感器可用于多种目标物的检测，具有无需额外标记、无酶、高通量检测的优势，具有良好的应用前景。
附图说明
图1为该方法的原理图；
图2A是基于分裂适配体的夹心型纳米簇信标组装的多功能开启式荧光生物传感方法检测不同浓度的腺苷对应的荧光强度；图2B为基于FRET的传感器对不同浓度下腺苷的荧光变化；图2C为基于分裂适配体的夹心型纳米簇信标组装的多功能开启式荧光生物传感方法的特异性分析；
图3为基于优化后的基于分裂适配体的夹心型纳米簇信标组装的多功能开启式荧光生物传感方法对不同浓度目标物样品的荧光变化。
具体实施方式
药品和试剂：实验中所使用的的所有DNA均由生工生物工程(上海，中国)合成，并且经HPLC纯化。分析纯分析纯的AgNO3、NaBH4美国西格玛公司购买而来。
腺苷、可卡因、17β-雌二醇以及凝血酶的分裂适配体的DNA序列如下所示：
实施例1
一种目标物分子为腺苷、可卡因、17β-雌二醇或凝血酶的检测方法，包括以下步骤：
(1)DNA-银纳米簇信标AgNCs-Apt1的制备：Tris 1.21g、800mL的去离子水、42ml0.1mol/L的盐酸定容到1L，pH＝7.4配制缓冲液1。将12.5μL的1.2μM的腺苷纳米簇信标模板溶解于940μL缓冲液1中，加热至95℃，维持10min后迅速转移至冰水浴中，快速降温，随后加入45μL，4mM新制硝酸银溶液，涡旋混合后避光25℃反应30min，接着，迅速加入7μL，13.2mM新制硼氢化钠溶液，充分振摇混合过夜；
(2)目标物的定量：将10μL的1μM的AgNCs-Apt1溶液、10μL 1μM GRS-Apt2溶液、20μL不同浓度的目标物腺苷溶液以及60μL的反应缓冲液1进行混合，置于室温下25℃孵育30min。目标物腺苷溶液在0nM-1600nM浓度中选取2nM、10nM、20nM、50nM、100nM、200nM、250nM、500nM、800nM、1000nM、1200nM、1500nM作为取样点。
(3)目标物的荧光检测：将得到的含有不同浓度目标物的混合液进行荧光测定实验。将不同溶液分别置于561nm的激发波长下，然后记录627nm的发射波长下的荧光强度，如图2A、图2B所示。
将(1)中腺苷纳米簇信标模板换成可卡因纳米簇信标模板，目标物溶液在0-2000nM浓度中选取取样点，其他条件不变。
将(1)中腺苷纳米簇信标模板换成17β-雌二醇纳米簇信标模板，目标物溶液在0-2000nM浓度中选取取样点，其他条件不变。
将(1)中腺苷纳米簇信标模板换成凝血酶纳米簇信标模板，目标物溶液在0-2000nM浓度中选取取样点，其他条件不变。
实施例2
本发明检测方法的选择性实验：重复实施实例1中的步骤，将目标物换成其他目标分子和目标分子的类似物，即牛血清白蛋白，溶菌酶，多巴胺，人血清白蛋白，尿苷，鸟嘌呤，胞嘧啶，其它条件不变，检测荧光，得到本方法检测目标目标分子的选择性结果图，如图2C所示，从图中可以看出本发明所述方法对目标分子具有良好的选择性。
实施例3
组装孵育时间的实验
采用腺苷纳米簇信标模，目标物溶液为1000nM，孵育时间在0-60min中选取，统一实验的其他变量，结果如图3所示。
实施例4
本发明检测方法的回收率实验
将样品换成健康人体血清，并向将样品加入相同量的目标分子，分别进行加样检测，分别添加7、9、12nM的腺苷，添加60、120、180nM的凝血酶进行检测，获得本方法在实际样品检测中的回收率，结果见表1。
表1本发明所制备的传感器检测人体血清中腺苷和凝血酶的检测结果
序列表
<110> 南京师范大学
<120> 一种包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器
<160> 8
<170> SIPOSequenceListing 1.0
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<212> DNA
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<210> 6
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
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g 61
Claims (9)
1.一种包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器，其特征在于通过以下方法制备，具体包括如下步骤：
a)将银离子与DNA模板共同孵育形成DNA-银纳米簇信标DNA-AgNCs；其中，DNA模板为分裂适配体1，所述DNA-AgNCs即为AgNCs-Apt1；
b)分别将含有不同浓度的目标物样品，与a)所得的AgNCs-Apt1溶液、富含鸟嘌呤增强子序列的分裂适配体2GRS-Apt2溶液以及反应缓冲液1等量混合；其中，目标物样品选自腺苷、可卡因、17β-雌二醇、凝血酶中的一种；
c)将b)所得的样品溶液在2000-4000rpm的转速进行离心，接着将其置于20-25℃下孵育，在激发波长为550-570nm下，记录610-640nm发射波长下的荧光强度；通过绘制关系曲线图，计算目标物浓度与荧光强度之间的关系，用于定量目标分子；
d)将健康志愿者的血清样品进行离心，接着加入Tris-HCl缓冲液将血清样品稀释50-100倍后，取10-20μL作为待测目标物样品进行b)、c)操作步骤；
e)将待测目标样品在610-640nm处的发射波长获得的荧光强度，与步骤c)获得的关系图进行对比，计算出血清样品中的目标物含量。
2.根据权利要求1所述的包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器，其特征在于步骤b)中所述的反应缓冲液1是Tris-HCl缓冲溶液。
3.根据权利要求1所述的包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器，其特征在于用以下DNA序列分别制备腺苷、可卡因、17β-雌二醇以及凝血酶的分裂适配体：
4.根据权利要求1所述的包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器，其特征在于步骤b)中AgNCs-Apt1与GRS-Apt2以及含有不同浓度目标物的检测样品混合于缓冲液1中，步骤为：将1体积的AgNCs-Apt1溶液、1体积的GRS-Apt2溶液、2体积含有不同浓度的目标物样品分别与6体积的反应缓冲液1混合反应。
5.根据权利要求1所述的包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器，其特征在于步骤b)所述的混合条件为20-25℃下孵育20-40min。
6.根据权利要求1所述的包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器，其特征在于步骤b)所述的腺苷的浓度范围是0-1600nM，可卡因的浓度范围是0-2000nM，17β-雌二醇的浓度范围是0-2000nM，凝血酶的浓度范围是0-2000nM。
7.根据权利要求1所述的包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器，其特征在于，步骤c)具体为：将步骤b)所得混合物分别在激发波长为561nm下，测定样品627nm处的荧光值。
8.根据权利要求1所述的包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器，其特征在于所述的AgNCs-Apt1是通过加入硝酸银、硼氢化钠，使其原位还原生成。
9.根据权利要求1所述的包含分裂适配体的纳米簇信标型多功能荧光传感器，其特征在于，所述的DNA-银纳米簇信标是通过以下步骤制备得到的：将目标分子的纳米簇信标模板即分裂适配体1Apt1溶解于缓冲液1中，加热至90-95℃，维持5-15min后迅速转移至冰水浴中，随后加入硝酸银溶液，涡旋混合后避光20-25℃反应20-40min，接着，迅速加入硼氢化钠溶液，充分振摇混合过夜；目标分子为腺苷、可卡因、17β-雌二醇、凝血酶中的一种。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113552104A (zh) * | 2021-07-20 | 2021-10-26 | 江南大学 | 一种dna三通结-银簇比率型荧光传感器及检测氯霉素的方法 |
Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080254446A1 (en) * | 2003-11-22 | 2008-10-16 | Techno Medica Co., Ltd | Method of Detecting Target Molecule by Using Aptamer |
| US20110212540A1 (en) * | 2010-02-19 | 2011-09-01 | Yeh Hsin-Chih | Probe and method for DNA detection |
| CN103913443A (zh) * | 2014-04-23 | 2014-07-09 | 安徽师范大学 | 一种基于DNA-银纳米簇（DNA-Ag NCs）适体传感器，及其制备方法，用途以及检测方法 |
| WO2016003148A1 (ko) * | 2014-07-02 | 2016-01-07 | 기초과학연구원 | 은이온에 특이적 형광 증대 현상을 보이는 디옥시리보 핵산 기반의 은나노클러스터와 이의 제조 방법 및 이에 따른 은이온 감응 센서 |
| US20160131668A1 (en) * | 2014-10-31 | 2016-05-12 | The Florida International University Board Of Trustees | Materials and methods for rapid and specific detection of cocaine |
| CN105928917A (zh) * | 2016-04-20 | 2016-09-07 | 盐城工学院 | 一种银纳米簇传感器及其制备方法和应用 |
| CN108444957A (zh) * | 2018-02-05 | 2018-08-24 | 南京医科大学 | 一种基于dna-银纳米簇与聚吡咯纳米粒的转录因子检测方法 |
| CN108458998A (zh) * | 2018-01-29 | 2018-08-28 | 山西大学 | 一种基于免标记荧光增强的适配体dna银纳米簇测定铅离子的方法 |
| CN108949906A (zh) * | 2018-06-22 | 2018-12-07 | 中南大学 | 一种用于HER2检测的dsDNA-AgNCs荧光探针及其构建方法和应用 |
| CN109991202A (zh) * | 2019-04-16 | 2019-07-09 | 南京医科大学 | 一种基于核酸适配体荧光传感器用于多目标物检测的方法 |
-
2020
- 2020-06-08 CN CN202010512037.8A patent/CN111650167B/zh active Active
Patent Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080254446A1 (en) * | 2003-11-22 | 2008-10-16 | Techno Medica Co., Ltd | Method of Detecting Target Molecule by Using Aptamer |
| US20110212540A1 (en) * | 2010-02-19 | 2011-09-01 | Yeh Hsin-Chih | Probe and method for DNA detection |
| CN103913443A (zh) * | 2014-04-23 | 2014-07-09 | 安徽师范大学 | 一种基于DNA-银纳米簇（DNA-Ag NCs）适体传感器，及其制备方法，用途以及检测方法 |
| WO2016003148A1 (ko) * | 2014-07-02 | 2016-01-07 | 기초과학연구원 | 은이온에 특이적 형광 증대 현상을 보이는 디옥시리보 핵산 기반의 은나노클러스터와 이의 제조 방법 및 이에 따른 은이온 감응 센서 |
| US20160131668A1 (en) * | 2014-10-31 | 2016-05-12 | The Florida International University Board Of Trustees | Materials and methods for rapid and specific detection of cocaine |
| CN105928917A (zh) * | 2016-04-20 | 2016-09-07 | 盐城工学院 | 一种银纳米簇传感器及其制备方法和应用 |
| CN108458998A (zh) * | 2018-01-29 | 2018-08-28 | 山西大学 | 一种基于免标记荧光增强的适配体dna银纳米簇测定铅离子的方法 |
| CN108444957A (zh) * | 2018-02-05 | 2018-08-24 | 南京医科大学 | 一种基于dna-银纳米簇与聚吡咯纳米粒的转录因子检测方法 |
| CN108949906A (zh) * | 2018-06-22 | 2018-12-07 | 中南大学 | 一种用于HER2检测的dsDNA-AgNCs荧光探针及其构建方法和应用 |
| CN109991202A (zh) * | 2019-04-16 | 2019-07-09 | 南京医科大学 | 一种基于核酸适配体荧光传感器用于多目标物检测的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 林碧霞等: "基于DNA模板合成的银簇建立"点亮型"荧光法检测卡那霉素", 《分析测试学报》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113552104A (zh) * | 2021-07-20 | 2021-10-26 | 江南大学 | 一种dna三通结-银簇比率型荧光传感器及检测氯霉素的方法 |
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