CN111647079A - 一种抗新型冠状病毒n蛋白的中和抗体 - Google Patents

一种抗新型冠状病毒n蛋白的中和抗体 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种抗新型冠状病毒N蛋白的中和抗体，它由轻链和重链组成，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明所述抗体能够特异性识别和结合SARS‑CoV‑2 N蛋白，实验结果显示，其与2019‑NCOV Nucleocapsid的亲和常数KD值为111nM，EC50值为3.975μg/mL；其与NCOV‑SARI‑N‑his的EC50值为4.752μg/mL。

Description

一种抗新型冠状病毒N蛋白的中和抗体
技术领域
本发明涉及一种来自RNA病毒，具体涉及一种抗新型冠状病毒N蛋白的中和抗体。
背景技术
2019新型冠状病毒的病原体是新型冠状病毒(2019-nCoV，COVID-19或SARS-CoV-2)。SARS-CoV-2属冠状病毒科(Coro-naviridae)冠状病毒属(Coronavirus)，是一类有包膜的单股正链RNA病毒。新型冠状病毒基因编码多个结构蛋白，如N蛋白、M蛋白、E蛋白和S蛋白等，S蛋白可特异性地与宿主受体结合，是病毒入侵宿言易感细胞的关键蛋白，M蛋白和E蛋白参考病毒细胞膜的形成，而N蛋白则参与病毒的装配。这些蛋白包括多个抗原表位，利用抗原与抗体特异性结合的原理，可通过抗体检测抗原的存在，从而直接证明样本中含有新型冠状病毒。
新型冠状病毒传播迅速，具有极强的传染性。到目前为止，还没有专门用于预防的疫苗和治疗新型冠状病毒的特效药物，一般采用非特异性治疗，预防严重的并发症，降低重症发病率和死亡率，提高治愈率。目前，各研究机构多是致力于针对SARS-CoV-2的S蛋白研发抗体产品，如公开号CN111333722A的发明专利，采用噬菌体展示技术，构建了一个高容量的人源免疫性噬菌体抗体文库，并以SARS-CoV-2-S蛋白为靶标，筛选人源抗体单链抗体片段并获得了对SARS-CoV-2病毒有较强的中和作用的抗体。又如公开号为CN111303280A的发明专利，公开了一种抗SARS-CoV-2的全人源单克隆抗体，该单抗与S抗原的亲和常数KD是1.0nM。而针对新型冠状病毒N蛋白的抗体产品极少，仅见有公开号为CN111269313A的发明专利公开了一种抗N蛋白单克隆抗体，实验结果显示，采用间接ELISA法测定得到的抗体的相对亲和力为1.835×10-10mol/L。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种与N蛋白亲和力较理想的抗新型冠状病毒N蛋白的中和抗体。
本发明所述的抗新型冠状病毒N蛋白的中和抗体，它由轻链和重链组成，其中轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
本发明所述的抗新型冠状病毒N蛋白的中和抗体的轻链的氨基酸序列如SEQ IDNO：3所示，重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。该抗体是针对新型冠状病毒N蛋白(SARS-CoV-2N蛋白)的抗体产品，所述的新型冠状病毒N蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示。
申请人发现，本发明所述抗体能够特异性识别和结合SARS-CoV-2N抗原蛋白，因此，本申请还包括该抗体在制备诊断新型冠状病毒的试剂，或者是在制备治疗新型冠状病毒的药物中的应用。
本申请进一步包括一种诊断和/或治疗和/或预防新型冠状病毒所致疾病的产品，其以本发明所述抗体作为活性成分。
与现有技术相比，本发明所述抗体能够特异性识别和结合SARS-CoV-2N蛋白，实验结果显示，其与2019-NCOV Nucleocapsid(原核表达N蛋白)的亲和常数KD值为111nM，EC50值为3.975μg/mL；其与NCOV-SARI-N-his(真核表达N蛋白)的EC50值为4.752μg/mL。
附图说明
图1为亲和柱纯化后的抗新型冠状病毒N蛋白的中和抗体SDS-PAGE检测图谱，其中M表示标准蛋白分子量；Me表示合并的培养基；FT表示流穿液；W表示洗涤液；E表示纯化后的抗新型冠状病毒N蛋白的中和抗体。
图2为Western Blot验证抗新型冠状病毒N蛋白的中和抗体蛋白表达电泳图，其中M表示标准蛋白分子量；E表示纯化后的抗新型冠状病毒N蛋白的中和抗体。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的详述，以更好地理解本发明的内容，但本发明并不限于以下实施例。
以下内容中出现的“Fab 20抗体”或“Fab 20”均为本发明所述抗新型冠状病毒N蛋白的中和抗体的简称。
实施例1
1.Fab 20抗体的表达及纯化
1.1寻找Fab 20抗体的序列
从SARS-CoV的抗体库中进行筛选、确定SARS-CoV-2N抗原蛋白的Fab 20抗体的氨基酸序列。其中，SARS-CoV-2N蛋白的氨基酸序列、Fab 20抗体的轻链(L chain)可变区的氨基酸序列、重链(H chain)可变区的氨基酸序列以及Fab 20抗体轻链的全长氨基酸序列和重链的全长氨基酸序列分别如下：
所述SARS-CoV-2N蛋白的氨基酸序列为：
MSDNGPQNQRNAPRITFGGPSDSTGSNQNGERSGARSKQRRPQGLPNNTASWFTALTQHGKEDLKFPRGQGVPINTNSSPDDQIGYYRRATRRIRGGDGKMKDLSPRWYFYYLGTGPEAGLPYGANKDGIIWVATEGALNTPKDHIGTRNPANNAAIVLQLPQGTTLPKGFYAEGSRGGSQASSRSSSRSRNSSRNSTPGSSRGTSPARMAGNGGDAALALLLLDRLNQLESKMSGKGQQQQGQTVTKKSAAEASKKPRQKRTATKAYNVTQAFGRRGPEQTQGNFGDQELIRQGTDYKHWPQIAQFAPSASAFFGMSRIGMEVTPSGTWLTYTGAIKLDDKDPNFKDQVILLNKHIDAYKTFPPTEPKKDKKKKADETQALPQRQKKQQTVTLLPAADLDDFSKQLQQSMSSADSTQA(SEQ ID NO：5)。
Fab 20抗体轻链可变区的氨基酸序列为：
EIELTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPTTFGQGTRLEIK(SEQ ID NO：1)。
Fab 20抗体重链可变区的氨基酸序列为：
QVQLLEQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGTIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGWSSSAGGYYGMDVWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO：2)。
Fab 20抗体的轻链的全长氨基酸序列为：
EIELTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPTTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO：3)。
Fab 20抗体的重链的全长氨基酸序列为：
QVQLLEQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGTIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGWSSSAGGYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHHHHHH(SEQ ID NO：4)。
1.2 Fab 20抗体的表达
1.2.1)细胞培养
293F细胞(上海纽普生物科技有限公司)，用含10％胎牛血清和100U/mL双抗(青链霉素混合液)的DMEM培养基，于75mL培养瓶培养细胞，细胞计数板检测，确保细胞浓度为：0.5×106细胞/mL。
根据标准操作手册培养悬浮293F细胞，按0.5×106细胞/mL的接种量接种，在1L的摇瓶加入300mL含10％胎牛血清和100U/mL双抗(青链霉素混合液)的DMEM培养基中接种细胞。置于5％二氧化碳浓度的摇床培养箱中孵育24h，摇床设置参数为37℃，120rpm，细胞计数板检测，确保细胞密度达到1×106细胞/mL。
1.2.2)重组质粒的构建
将编码Fab 20的重链(H chain)和轻链(L chain)分别构建到pTT5哺乳动物细胞载体，获得编码Fab20重链重组质粒和轻链重组质粒(由上海纽普生物科技有限公司完成)。取300μg的Fab20重组质粒(重链重组质粒和轻链重组质粒的摩尔比为1.1:0.9)加入30mLPBS，涡旋混合3秒，得到PBS/重组质粒的混合液，冰浴保存。
1.2.3)重组质粒转染至细胞内
取1.2mL过滤除菌的PEI(聚乙烯亚胺)溶液(0.5mg/mL)加入上述的PBS/重组质粒的混合液中，室温下静置20min，得到PBS/重组质粒/PEI混合液。将PBS/重组质粒/PEI混合液加到293F细胞中(共转染比例为1μg DNA：1.5μg PEI：106个细胞)。
1.2.4)表达蛋白的收集
转染成功后，置于原设定条件的二氧化碳浓度的摇床培养箱中孵育。5天后，收集培养上清液，合并含蛋白的DMEM培养基，于-80℃保存。
1.3 Fab 20抗体的纯化
1.3.1)溶液配置
缓冲液：PBS(pH 7.4)。
洗涤液：用PBS配制，20mmol/L咪唑的洗涤液(pH 7.4)。
洗脱液：用PBS配制，500mmol/L咪唑的洗脱液(pH 7.4)。
1.3.2)Ni-NTA装柱(载样量为10-20mg蛋白/mL)
加入3mL Ni-NTA介质，重悬介质后静置。
1.3.3)上样(流速300cm/h)
从-80℃中取出步骤1.2.4)所得的合并的培养基解冻后，使用0.45μm过滤器过滤，并收集流出液作为流穿液。
1.3.4)洗涤(流速300cm/h)
上样完毕后，用5倍柱体积洗涤液洗涤层析柱，收集流出液。
1.3.5)洗脱(流速300cm/h)
用3mL的洗脱液洗脱蛋白，汇集洗脱液。
1.3.6)检测蛋白表达情况
通过SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)检测Fab20抗体蛋白表达情况，检测孔分别为合并的培养基、流穿液、洗涤液、纯化后的Fab20抗体。结果如图1所示。由图1可知，纯化前在合并的培养基中可清晰检测到Fab抗体蛋白表达(25.96KD)；纯化后，得到单一且浓度较高(0.45mg/ml)的抗体蛋白，而在流穿液和洗涤液中只有少量抗体蛋白残留，表明Fab抗体蛋白纯化成功。
1.3.7)Western Blot(免疫印迹)验证
利用BeyoECL Plus(超敏ECL化学发光试剂盒)和HRP-Conjugated His-TagAntibody标签抗体(表达成功的Fab20带有His标签)通过Western Blot(免疫印迹)方法验证(结果如图2所示)，确定获得Fab20抗体。如图2所示，在25.96KD处检测到一条带，表明该抗体成功表达。
2.ELISA方法检测Fab 20抗体与SARS-CoV-2N蛋白结合力
2.1从市面上购买2019-NCOV Nucleocapsid(原核表达N蛋白，购自近岸蛋白质科技有限公司)、NCOV-SARI-N-his(真核表达N蛋白，购自三优生物医药有限公司)和cyno-BCMA-his抗原蛋白(参照，购自三优生物医药有限公司)。
2.2抗体ELISA检测：
2.2.1)包被：在7块96孔半孔酶标板中，分别加入2μg/mL的NCOV-SARI-N-his(真核表达N蛋白)、2019-NCOV Nucleocapsid(原核表达N蛋白)和cyno-BCMA-his抗原蛋白，前2个抗原的酶标板上的第11列包被抗原cyno-BCMA-his，30μL/孔，4℃包被过夜。
2.2.2)洗板：PBST(含吐温-20的磷酸盐缓冲液，pH 7.4)洗板3次。
2.2.3)封闭：5％PBS-Milk(磷酸缓冲盐溶液-脱脂奶粉)，室温孵育2h。
2.2.4)洗板：PBST洗板3次。
2.2.5)加样：稀释液用1％Milk-PBS，NCOV-SARI-N-his、2019-NCOVNucleocapsid、和cyno-BCMA-his的酶标板上的所有样品蛋白均以10μg/mL为初始浓度，在稀释板中，第8行9倍梯度稀释，其余均3倍梯度稀释；30μL/孔加入到各孔中，室温孵育1h。
2.2.6)洗板：PBST洗板3次。
2.2.7)加二抗：稀释液用1％Milk-PBS，1：4000稀释二抗Goat-Anti-Human-IgGKappa+Lambda-HRP(购自Sigma)，30μL/孔加入到各孔中，室温孵育50min。
2.2.8)洗板：PBST洗板9次。
2.2.9)加TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺，购自SurModics)：30μL/孔，室温，避光显色1min～5min。
2.2.10)终止反应：加2mol/L盐酸，30μL/孔，终止反应。
2.2.11)数据采集：采用酶标仪，读取OD450吸光值。
3.实验结果与分析
ELISA结果表1所示，抗体HFab20/LFab20可与抗原NCOV-SARI-N-his2和019-NCOVNucleocapsid有结合，EC50分别为4.752μg/mL和3.975μg/mL。
表1.Fab20与新型冠状病毒2019-nCoV N蛋白结合的EC50值
Figure BDA0002569557920000051
3.生物膜干涉(Biolayer Interferometry Technology)方法检测Fab 20抗体对SARS-CoV-2的N蛋白亲和力
利用Fortebio BLItz仪器检测Fab 20抗体对SARS-CoV-2的N蛋白抗原的亲和动力学常数。
3.1用0.1％BSA+0.05％Tween 20的PBS(pH 7.2)溶解，配制获得1×KB buffer。
3.2 Fab20抗体用1×KB buffer配制成5μg/mL。
3.3 2019-NCOV Nucleocapsid(原核表达N蛋白)用1×KB缓冲液2倍比分别稀释成8000，4000，2000nmol/L。
3.4打开Fortebio仪器及相关软件，选择Advanced Kientics实验模式。
3.5分析程序按下述表2设置。
表2.Fortebio BLItz运行方法
Figure BDA0002569557920000061
3.6实验结果
通过Global拟合模式下Fab 20和抗原N protein的结合解离曲线，得到Fab 20抗体与抗原N protein的KD值为111nM，如下述表3所示。
表3.Global拟合模式亲和动力学检测结果
Figure BDA0002569557920000062
序列表
<120> 一种抗新型冠状病毒N蛋白的中和抗体
<130> 2020
<160> 5
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 112
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Glu Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 2
<211> 125
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
Gln Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly
1 5 10 15
Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser
20 25 30
Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Gly Thr Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys
50 55 60
Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala
65 70 75 80
Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gly Gly Trp Ser Ser Ser Ala Gly Gly Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 3
<211> 219
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 3
Glu Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Pro Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 4
<211> 237
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 4
Gln Val Gln Leu Leu Glu Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly
1 5 10 15
Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser
20 25 30
Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Gly Thr Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys
50 55 60
Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala
65 70 75 80
Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gly Gly Trp Ser Ser Ser Ala Gly Gly Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
130 135 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
195 200 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
210 215 220
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His His His His His His
225 230 235
<210> 5
<211> 419
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 5
Met Ser Asp Asn Gly Pro Gln Asn Gln Arg Asn Ala Pro Arg Ile Thr
1 5 10 15
Phe Gly Gly Pro Ser Asp Ser Thr Gly Ser Asn Gln Asn Gly Glu Arg
20 25 30
Ser Gly Ala Arg Ser Lys Gln Arg Arg Pro Gln Gly Leu Pro Asn Asn
35 40 45
Thr Ala Ser Trp Phe Thr Ala Leu Thr Gln His Gly Lys Glu Asp Leu
50 55 60
Lys Phe Pro Arg Gly Gln Gly Val Pro Ile Asn Thr Asn Ser Ser Pro
65 70 75 80
Asp Asp Gln Ile Gly Tyr Tyr Arg Arg Ala Thr Arg Arg Ile Arg Gly
85 90 95
Gly Asp Gly Lys Met Lys Asp Leu Ser Pro Arg Trp Tyr Phe Tyr Tyr
100 105 110
Leu Gly Thr Gly Pro Glu Ala Gly Leu Pro Tyr Gly Ala Asn Lys Asp
115 120 125
Gly Ile Ile Trp Val Ala Thr Glu Gly Ala Leu Asn Thr Pro Lys Asp
130 135 140
His Ile Gly Thr Arg Asn Pro Ala Asn Asn Ala Ala Ile Val Leu Gln
145 150 155 160
Leu Pro Gln Gly Thr Thr Leu Pro Lys Gly Phe Tyr Ala Glu Gly Ser
165 170 175
Arg Gly Gly Ser Gln Ala Ser Ser Arg Ser Ser Ser Arg Ser Arg Asn
180 185 190
Ser Ser Arg Asn Ser Thr Pro Gly Ser Ser Arg Gly Thr Ser Pro Ala
195 200 205
Arg Met Ala Gly Asn Gly Gly Asp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Leu Leu
210 215 220
Asp Arg Leu Asn Gln Leu Glu Ser Lys Met Ser Gly Lys Gly Gln Gln
225 230 235 240
Gln Gln Gly Gln Thr Val Thr Lys Lys Ser Ala Ala Glu Ala Ser Lys
245 250 255
Lys Pro Arg Gln Lys Arg Thr Ala Thr Lys Ala Tyr Asn Val Thr Gln
260 265 270
Ala Phe Gly Arg Arg Gly Pro Glu Gln Thr Gln Gly Asn Phe Gly Asp
275 280 285
Gln Glu Leu Ile Arg Gln Gly Thr Asp Tyr Lys His Trp Pro Gln Ile
290 295 300
Ala Gln Phe Ala Pro Ser Ala Ser Ala Phe Phe Gly Met Ser Arg Ile
305 310 315 320
Gly Met Glu Val Thr Pro Ser Gly Thr Trp Leu Thr Tyr Thr Gly Ala
325 330 335
Ile Lys Leu Asp Asp Lys Asp Pro Asn Phe Lys Asp Gln Val Ile Leu
340 345 350
Leu Asn Lys His Ile Asp Ala Tyr Lys Thr Phe Pro Pro Thr Glu Pro
355 360 365
Lys Lys Asp Lys Lys Lys Lys Ala Asp Glu Thr Gln Ala Leu Pro Gln
370 375 380
Arg Gln Lys Lys Gln Gln Thr Val Thr Leu Leu Pro Ala Ala Asp Leu
385 390 395 400
Asp Asp Phe Ser Lys Gln Leu Gln Gln Ser Met Ser Ser Ala Asp Ser
405 410 415
Thr Gln Ala

Claims (4)

1.一种抗新型冠状病毒N蛋白的中和抗体，它由轻链和重链组成，其特征是，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
2.根据权利要求1所述的抗新型冠状病毒N蛋白的中和抗体，其特征是，所述抗体轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。
3.权利要求1所述抗体在制备诊断新型冠状病毒的试剂，或者是在制备治疗新型冠状病毒的药物中的应用。
4.诊断和/或治疗和/或预防新型冠状病毒所致疾病的产品，其特征是，所述产品中的活性成分为权利要求1所述抗体。
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