CN111646996A - 吡唑并嘧啶哌嗪酮类化合物及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种吡唑并嘧啶哌嗪酮类化合物及其制备方法和应用，属于有机化合物合成及医药应用领域。吡唑并嘧啶哌嗪酮类化合物其结构式如下所示：

Description

吡唑并嘧啶哌嗪酮类化合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及有机化合物合成及医药应用领域，尤其涉及吡唑并嘧啶哌嗪酮类化合物及其制备方法和应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B，PKB，亦称Akt)信号通路对于调节细胞的生长、增殖、自噬以及凋亡有着重要的作用。该通路在淋巴瘤，前列腺癌，骨髓瘤及卵巢癌，子宫内膜癌，肝癌，肺癌，胰腺癌，滤泡状甲状腺癌和急、慢性白血病等多种肿瘤细胞中经常观察到过度激活的现象。(参见：Rodon,J.；Dienstmann,R.；Serra,V.；Tabernero,J.Development of PI3Kinhibitors:lessons learned from early clinical trials.Nature Reviews ClinicalOncology 2013,10,143-153.)该通路在很多肿瘤中出现持续过度活化标志着预后不好；该通路的激活影响肿瘤治疗的耐药性，对该通路的抑制作用可以增加化疗或放疗的效果。(参见：Kim,W.；Seong,J.；An,J.H.；Oh,H.J.Enhancement of tumor radioresponse bywortmannin in C3H/HeJ hepatocarcinoma.Journal of radiation research(Tokyo)2007,48,187-195.)因此，阻断PI3K/Akt信号传导通路的持续激活为靶向治疗癌症提供了新策略，进而作用于此信号通路的抑制剂成为治疗肿瘤的潜在治疗药物。(参见：Arcaro,A.；Guerreiro,A.S.The phosphoinositide 3-kinase pathway in human cancer:Genetic alterations and therapeutic implications.Current Genomics 2007,8,271-306.)作为PI3K的下游靶标，Akt是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，又称为蛋白激酶B(protein kinase B，PKB)，是一种通过将磷脂酰肌醇募集到质膜从而被激活的一种苏氨酸激酶，在细胞凋亡和存活、细胞增殖、血管增生和调控细胞周期和代谢以及抵抗化疗和放疗中起关键作用。(参见：Hanada,M.；Feng,J.；Hemmings,B.A.Structure,regulation andfunction of PKB/Akt-A major therapeutic target.Cellular&Molecular BiologyLetters 2003,8,527.)
至今已有众多小分子抑制剂被报道，GDC0068是一种选择性，竞争性的Akt抑制剂，抑制Akt1，Akt2，Akt3的IC50分别为5nM，18nM和8nM。目前，数十项GDC0068或与其他药物联合用于治疗实体瘤、多形胶质母细胞瘤、乳腺癌、雌激素受体阳性乳腺癌等临床I/II期试验正在开展。(参见：Lin,J.；Sampath,D.；Nannini,M.A.；Lee,B.B.；Degtyarev,M.；Oeh,J.；Savage,H.；Guan,Z.；Hong,R.；Kassees,R.；Lee,L.B.；Risom,T.；Gross,S.；Liederer,B.M.；Koeppen,H.；Skelton,N.J.；Wallin,J.J.；Belvin,M.；Punnoose,E.；Friedman,L.S.；Lin,K.Targeting activated AKT with GDC0068,a novel selective AKT inhibitorthat is efficacious in multiple tumor models.Clinical Cancer Research 2013,19,1760-1772.)同时，该药物有多项III期临床研究正在进行(NCT04177108，NCT03072238)。同时，发明人发现，现有技术中报道的有Akt1激酶抑制剂仍然存在对Akt1激酶抑制活性较弱等缺点。
发明内容
针对目前现有技术的不足，本发明提供一种结构新颖的吡唑并嘧啶哌嗪酮类化合物及其制备方法和应用，经试验证明，本发明提供的吡唑并嘧啶哌嗪酮类化合物表现出对Akt1激酶较强的抑制活性，同时对套细胞淋巴瘤(MCL)具有抗增殖活性，具有良好的实际应用之价值。
为了实现上述技术目的，本发明的技术方案如下：
本发明的第一个方面，提供一种化合物，其结构式如式I所示：
Figure BDA0002537104760000021
其中，R1选自H和卤素，R2选自氨基、取代氨基、含一个或多个杂原子的五元或六元环烷基，所述杂原子选自N。
本发明的第二个方面，提供一种制备上述化合物的方法，其包括以中间体1为起始原料通过以下反应路线制备式I化合物；
Figure BDA0002537104760000031
本发明的第三个方面，提供一种药物组合物，其含有上述的化合物或其药学上可接受的盐。
所述盐包括水不溶性的盐，以及特别是水溶性盐。
本发明的式I的化合物及其盐可包含(例如，当以结晶形式分离时)各种量的溶剂。因此，本发明的范围还包括本发明的式I的化合物的所有溶剂合物，特别是所有水合物，以及本发明的式I的化合物的盐的所有溶剂合物，特别是所有水合物。
本发明的第四个方面，提供一种药物制剂，其包含上述化合物或其药学上可接受的盐或含有上述化合物或其药学上可接受的盐的组合物和药学上可接受的辅料和/或载体。
本发明的第五个方面，提供上述化合物或其药学上可接受的盐或含有上述化合物的组合物在制备Akt激酶抑制剂药物中的应用。
本发明的第六个方面，提供上述化合物或其药学上可接受的盐或含有上述化合物的组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
以上一个或多个技术方案的有益技术效果：
上述技术方案提供通过优选母核和N取代侧链，保留柔性适中的哌嗪环作为LINK连接链，最终获得一系列吡唑并嘧啶哌嗪酮类化合物。经构效关系分析，化学结构修饰设计发现结构新颖、具有研究潜力的Akt抑制剂，上述技术方案中大部分化合物在浓度为1μM对Akt1的抑制率大于70％，在浓度为0.01μM对Akt1的抑制率与阳性对照GDC0068相当，且探究了其对五株套细胞淋巴瘤的抑制活性具有一定的创新性，对于抗肿瘤药物的研发具有十分重要的意义，也因此具有良好的实际应用之价值。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。
如前所述，现有技术中报道的有Akt1激酶抑制剂仍然存在对Akt1激酶抑制活性较弱等缺点。
有鉴于此，本发明的一个具体实施方式中，提供一种化合物，其结构式如式I所示：
Figure BDA0002537104760000041
其中，R1选自H和卤素，R2选自氨基、取代氨基、含一个或多个杂原子的五元或六元环烷基，所述杂原子选自N；
本发明的又一具体实施方式中，R1的取代位置可以在对位、邻位或间位；所述卤素选自Cl、Br；所述取代氨基为被C1～C5的直链或支链烷基所取代的氨基；所述含一个或多个N原子的五元或六元环烷基选自吡咯、取代吡咯、哌啶、吗啉、哌嗪和取代哌嗪；
所述取代吡咯或取代哌嗪各自独立地选自被C1～C5的直链或支链的烷基所取代的吡咯基或哌嗪基；
本发明的又一具体实施方式中所述R2选自
Figure BDA0002537104760000042
Figure BDA0002537104760000043
本发明的又一具体实施方式中，所述化合物包含其消旋体及立体异构体。
本发明的又一具体实施方式中，根据如上所述，本发明包含以下化合物：
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-溴苯基)-2-(二甲基氨基)乙酮(I-1)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-溴苯基)-2-(二乙基氨基)乙酮(I-2)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-溴苯基)-2-(吡咯烷-1-基)乙酮(I-3)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-溴苯基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮(I-4)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-溴苯基)-2-(二甲基氨基)乙酮(I-5)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-溴苯基)-2-(二乙基氨基)乙酮(I-6)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-溴苯基)-2-(吡咯烷-1-基)乙酮(I-7)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-溴苯基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮(I-8)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-溴苯基)-2-(二甲基氨基)乙酮(I-9)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-溴苯基)-2-(二乙基氨基)乙酮(I-10)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-溴苯基)-2-(吡咯烷-1-基)乙酮(I-11)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-溴苯基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮(I-12)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氯苯基)-2-(二甲基氨基)乙酮(I-13)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氯苯基)-2-(二乙基氨基)乙酮(I-14)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氯苯基)-2-(吡咯烷-1-基)乙酮(I-15)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氯苯基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮(I-16)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-氯苯基)-2-(二甲基氨基)乙酮(I-17)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-氯苯基)-2-(二乙基氨基)乙酮(I-18)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-氯苯基)-2-(吡咯烷-1-基)乙酮(I-19)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-氯苯基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮(I-20)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-氯苯基)-2-(二甲基氨基)乙酮(I-21)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-氯苯基)-2-(二乙基氨基)乙酮(I-22)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-氯苯基)-2-(吡咯烷-1-基)乙酮(I-23)
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-氯苯基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮(I-24)
本发明的又一具体实施方式中，提供一种制备上述化合物的方法，其包括以中间体1为起始原料通过以下反应路线制备式I化合物；
Figure BDA0002537104760000061
反应路线中试剂及条件：a.N-溴代丁二酰亚胺(NBS)，N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，室温；b.1-Boc-哌嗪，N,N-二异丙基乙胺(DIEA)，1,4-二氧六环，50℃；c.氯化氢-四氢呋喃，室温；d.甲醇，盐酸，80℃；e.NBS，偶氮二异丁腈(AIBN)，四氯化碳；f.取代胺R2，DIEA，乙腈，85℃；g.乙醇，1M氢氧化钠；h.1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(EDCI)，1-羟基苯并三唑(HOBT)，DIEA，DMF，室温。
本发明的又一具体实施方式中，所述合成步骤如下：
(1)起始原料1在DMF中，与NBS反应得中间体2；
(2)中间体2，1-Boc-哌嗪，DIEA，在DMF中反应生成中间体3；
(3)中间体3在氯化氢和四氢呋喃体积比为1:4的溶液中，脱掉Boc保护基，得中间体4；
(4)起始原料5在甲醇溶液中，发生酯化反应得中间体6；
(5)中间体6在DMF中，与NBS反应得中间体7；
(6)中间体7，取代胺R2，DIEA，在乙腈中反应生成中间体8；
(7)中间体8在乙醇溶液中，1M氢氧化钠作用下反应得中间体9；
(8)中间体9和11在EDCI，HOBT，DIEA存在条件下，与中间体4反应后，得目标产物I。
本发明的又一具体实施方式中，所述中间体4的合成路线如下：
Figure BDA0002537104760000071
反应路线中试剂及条件：a.NBS，DMF，室温；b.1-Boc-哌嗪，DIEA，1,4-二氧六环，50℃；c.氯化氢-四氢呋喃，室温。
(i)将3-溴-4-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶起始原料1溶于DMF中，加入NBS，室温搅拌24h，反应毕，将反应液倒入冰水中，过滤，滤饼用水洗涤，干燥，得中间体2；
(ii)将中间体2、1-叔丁氧羰基哌嗪、DIEA溶于二氧六环中，50℃回流反应20min，减压蒸除溶剂，加入水，乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯，依次用水和饱和氯化钠溶液洗涤三次，无水硫酸钠干燥，过滤，硅胶柱层析，得粗品，用乙醇重结晶，得白色固体中间体3；
(iii)将中间体3溶于氯化氢和四氢呋喃体积比为1:4的溶液中，室温反应24h。反应毕，析出白色固体，过滤，得中间体4。
本发明的又一具体实施方式中，所述中间体9的合成路线如下：
Figure BDA0002537104760000072
反应路线中试剂及条件：a.甲醇，盐酸，80℃；b.NBS，AIBN，CCl4；c.取代胺R2，DIEA，CH3CN，85℃；d.乙醇，1M NaOH，室温。
(i)将原料5溶于甲醇中，加入3滴浓盐酸，80℃加热回流2h。反应毕，减压蒸除溶剂，加入水，乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯，依次用水、饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂，得中间体6。
(ii)将中间体6溶于四氯化碳溶液中，常温3h内分三次加入NBS及AIBN，85℃回流反应2h。反应毕，减压蒸除溶剂，加入水，乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯，依次用水和饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，洗脱系统为石油醚/乙酸乙酯＝6:1～1:1，得中间体7。
(iii)中间体7溶于乙腈中，常温条件下加入取代胺R2和DIEA，85℃加热回流反应40min。反应毕，减压蒸除溶剂，加入水，乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯，依次用水、饱和氯化铵和饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，洗脱系统为石油醚/乙酸乙酯＝15:1～10:1～8:1，得中间体8；
(iv)将中间体8溶于无水乙醇和蒸馏水体积比为2:1的溶液中，加入适量1M氢氧化钠溶液，室温搅拌，反应24h。反应毕，减压蒸除乙醇，用1M盐酸溶液调节pH约为5-6，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，洗脱系统为二氯甲烷/甲醇＝8:1～6:1～2:1，得中间体9。
更具体的，基于中间体4和中间体9制备目标化合物I，其合成路线如下：
Figure BDA0002537104760000081
反应路线中试剂及条件：a.EDCI，HOBT，DIEA，DMF，室温。
将中间体9溶于DMF中，冰浴条件下，依次加入HOBT、DIEA和EDCI，继续搅拌30min，TLC检测中间体9活化完全，加入中间体4。反应毕，减压蒸除溶剂，加入水，二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷，依次用水、饱和氯化铵和饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，洗脱系统为二氯甲烷/甲醇＝120:1～100:1～80:1～60:1，得终产物即化合物I。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种药物组合物，其含有上述的化合物或其药学上可接受的盐。
所述盐包括水不溶性的盐，以及特别是水溶性盐。
本发明的式I的化合物及其盐可包含(例如，当以结晶形式分离时)各种量的溶剂。因此，本发明的范围还包括本发明的式I的化合物的所有溶剂合物，特别是所有水合物，以及本发明的式I的化合物的盐的所有溶剂合物，特别是所有水合物。
本发明化合物的药物组合物，可以以选自以下任意方式施与：口服、喷雾吸入、直肠给药、鼻腔给药、阴道给药、局部给药、非肠道给药如皮下、静脉、肌内、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内或颅内注射或输入，或借助一种外植的储器用药，其中优选口服、肌注、腹膜内或静脉内用药方式。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种药物制剂，其包含上述化合物或其药学上可接受的盐或含有上述化合物或其药学上可接受的盐的组合物和药学上可接受的辅料和/或载体。
本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药。给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混旋剂型。其他剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂、包合物、填埋剂、贴剂、擦剂等。
本发明的药物组合或药物制剂中还可以含有常用的载体，这里所述可药用载体包括但不局限于：离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白如人血清蛋白，缓冲物质如磷酸盐，甘油，山梨酯，山梨酸钾，饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白，磷酸氢二钠，磷酸氢钾，氯化钠，锌盐，胶态氧化硅，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素物质，聚乙二醇，羧甲基纤维素钠，聚丙烯酸酯，蜂蜡，羊毛酯等。载体在药物组合物中的含量可以是1重量％-98重量％，通常大约占到80重量％。为方便起见，局部麻醉剂，防腐剂，缓冲剂等可直接溶于载体中。
口服片剂和胶囊可以含有赋形剂如粘合剂，如糖浆，阿拉伯胶，山梨醇，黄芪胶，或聚乙烯吡咯烷酮，填充剂，如乳糖，蔗糖，玉米淀粉，磷酸钙，山梨醇，氨基乙酸，润滑剂，如硬脂酸镁，滑石，聚乙二醇，硅土，崩解剂，如马铃薯淀粉，或可接受的增润剂，如月桂醇钠硫酸盐。片剂可以用制药学上公知的方法包衣。
口服液可以制成水和油的悬浮液，溶液，乳浊液，糖浆，也可以制成干品，用前补充水或其它合适的媒质。这种液体制剂可以包含常规的添加剂，如悬浮剂，山梨醇，纤维素甲醚，葡萄糖糖浆，凝胶，羟乙基纤维素，羧甲基纤维素，硬脂酸铝凝胶，氢化的食用油脂，乳化剂，如卵磷脂，山梨聚糖单油酸盐，阿拉伯树胶；或非水载体(可能包含可食用油)，如杏仁油，油脂如甘油，乙二醇，或乙醇；防腐剂，如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯，山梨酸。如需要可添加调味剂或着色剂。
栓剂可包含常规的栓剂基质，如可可黄油或其它甘油酯。
对于胃肠外投药，液态剂型通常由化合物和一种消毒的载体制成。载体首选水。依照所选载体和药物浓度的不同，化合物既可溶于载体中也可制成悬浮溶液，在制成注射用溶液时先将化合物溶于水中，过滤消毒后装入封口瓶或安瓿中。
必须认识到，本发明化合物的最佳给药剂量和间隔是由化合物性质和诸如给药的形式、路径和不为以及所治疗的特定哺乳动物等外部条件决定的，而这一最佳给药剂量可用常规的技术确定。同时也必须认识到，最佳的疗程，即同时化合物在额定的时间内每日的剂量，可用本领域内公知的方法确定。
本发明的又一具体实施方式中，提供上述化合物或其药学上可接受的盐或含有上述化合物的组合物在制备Akt激酶抑制剂药物中的应用。
本发明的又一具体实施方式中，提供上述化合物或其药学上可接受的盐或含有上述化合物的组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
需要说明的是，肿瘤在本发明中如本领域技术人员所知的那样加以使用。良性肿瘤被定义为不能在体内形成侵略性、转移性肿瘤的细胞过度增殖。反之，恶性肿瘤被定义为能够形成全身性疾病(例如在远端器官中形成肿瘤转移)的具有多种细胞异常和生化异常的细胞。
本发明的又一具体实施方式中，本发明的化合物可用于治疗恶性瘤。可用本发明的化合物治疗的恶性瘤的实例包括实体瘤和血液瘤。实体瘤可以是例如乳腺、膀胱、骨、脑、中枢和外周神经系统、结肠、内分泌腺(如甲状腺和肾上腺皮质)、食道、子宫内膜、生殖细胞、头和颈、肾、肝、肺、喉和下咽的肿瘤、间皮瘤、卵巢、胰腺、前列腺、直肠、肾、小肠、软组织、睾丸、胃、皮肤、输尿管、阴道和外阴的肿瘤。恶性瘤包括遗传性癌症，例如视网膜母细胞瘤和肾母细胞瘤(Wilmstumor)。此外，恶性瘤包括在所述器官中的原发性肿瘤及在远端器官中的相应继发性肿瘤(肿瘤转移)。血液瘤可以是例如侵略性和无痛形式的白血病和淋巴瘤，即非霍奇金病、慢性和急性髓样白血病(CML/AML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、霍奇金病、多发性骨髓瘤和T-细胞型淋巴瘤。还包括骨髓增生异常综合征、浆细胞瘤、类肿瘤综合征和未知原发部位的癌症及AIDS相关的恶性瘤。
应注意的是，恶性瘤不一定要求在远端器官中形成转移。某些肿瘤通过它们的侵略性生长性质对原发性器官本身施加毁灭性效应。这些可导致组织和器官结构破坏，最终导致所指器官的功能衰竭和死亡。
以下通过实施例对本发明做进一步解释说明，但不构成对本发明的限制。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
实施例：
1)中间体2的制备
将4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(1)(6.47mmol)置于100ml反应瓶中，加入20mlDMF溶液，磁力搅拌至溶解。常温搅拌加入NBS(6.79mmol)，室温反应24h，TLC检测反应完全，将反应液倒入200ml冰水中淬灭，搅拌下逐渐析出白色固体。抽滤，滤饼用水洗涤，过滤，干燥得中间体2，白色固体，收率为98.7％。Mp：276-280℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):14.86(s,1H),8.86(s,1H).MS(ESI)m/z:233[M+H]+.
2)中间体3的制备
将中间体2(4.28mmol)和1-Boc-哌嗪(6.43mmol)置于250ml反应瓶中，加入20ml二氧六环溶液，磁力搅拌至溶解。常温滴加DIEA(8.57mmol)，50℃油浴反应20min，溶液逐渐变黄，TLC检测反应完全。反应液冷却后，减压蒸除溶剂，倒入50ml水，乙酸乙酯(15ml×3)萃取，合并有机相。依次用水和饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠进行干燥，减压蒸除溶剂得黄色固体3，收率为75.5％。Mp:202-204℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.46(s,1H),3.93(d,J＝4.9Hz,4H),3.52(d,J＝4.9Hz,4H),1.51(s,9H).
3)中间体4的制备
将中间体3(2.61mmol)置于100ml反应瓶中，加入8ml四氢呋喃(THF)溶液，磁力搅拌至溶解。常温滴加2ml浓盐酸(VTHF:VHCl＝4:1)，常温反应24h，析出固体，TLC检测反应完全。过滤，滤饼用乙酸乙酯进行洗涤，得类白色中间体4，收率为98.3％，中间体4未经核磁确证直接投入下一步反应。Mp:290-292℃。
4)中间体6的合成通法
将中间体6(17.99mmol)置于250ml反应瓶中，加入20ml四氯化碳溶液，磁力搅拌至溶解。常温3h内分三次加入NBS(17.99mmol)及AIBN(1.799mmol)，85℃回流反应2h。TLC检测反应完全，反应液冷却后，减压蒸除溶剂，得透明油状物。倒入50ml水，乙酸乙酯(15ml×3)萃取，合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠进行干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，洗脱系统为石油醚/乙酸乙酯＝6:1～1:1，得中间体7。
中间体6a：淡黄色油状物，产率98.1％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.62(d,J＝8.3Hz,2H),7.43(d,J＝8.3Hz,2H),3.69(s,2H),3.62(s,3H).
中间体6b：淡黄色油状物，产率95.5％。1H NM R(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.50(s,1H),7.47(dd,J＝5.4,3.4Hz,1H),7.30–7.26(m,2H),3.72(s,2H),3.62(s,3H).
中间体6c：淡黄色油状物，产率94.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.72(d,J＝7.9Hz,1H),7.49(dt,J＝14.8,6.8Hz,2H),7.27–7.21(m,1H),3.83(s,2H),3.63(s,3H).
中间体6d：淡黄色油状物，产率92.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.30(d,J＝8.4Hz,2H),7.38(d,J＝8.3Hz,2H),3.70(s,2H),3.62(s,3H).
中间体6e：淡黄色油状物，产率98.0％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.46(s,1H),7.35(dd,J＝5.4,3.4Hz,1H),7.20–7.16(m,2H),3.71(s,2H),3.52(s,3H).
中间体6f：淡黄色油状物，产率96.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.55(d,J＝7.9Hz,1H),7.24(dt,J＝14.8,6.8Hz,2H),7.21–7.15(m,1H),3.62(s,2H),3.41(s,3H).
5)中间体7的合成通法
将中间体6(17.99mmol)置于250ml反应瓶中，加入20ml四氯化碳溶液，磁力搅拌至溶解。常温3h内分三次加入NBS(17.99mmol)及AIBN(1.799mmol)，85℃回流反应2h。TLC检测反应完全，反应液冷却后，减压蒸除溶剂，得透明油状物。倒入50ml水，乙酸乙酯(15ml×3)萃取，合并有机相，依次用水和饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠进行干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，洗脱系统为石油醚/乙酸乙酯＝6:1～1:1，得中间体7。
中间体7a：淡黄色油状物，产率95.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.82(d,J＝8.5Hz,2H),7.37(d,J＝8.5Hz,2H),6.00(s,1H),3.74(s,3H).
中间体7b：淡黄色油状物，产率96.7％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.77(d,J＝7.7Hz,2H),7.42(d,J＝7.7Hz,1H),7.31(d,J＝7.8Hz,1H),5.19(s,1H),3.92(s,3H).
中间体7c：淡黄色油状物，产率94.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.49(dd,J＝7.7,1.5Hz,1H),7.40(s,2H),7.19(m,1H),5.39(s,1H),3.88(s,3H).
中间体7d：淡黄色油状物，产率96.5％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.48(d,J＝8.4Hz,2H),7.35(d,J＝8.4Hz,2H),5.65(s,1H),3.51(s,3H).
中间体7e：淡黄色油状物，产率90.6％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.37(d,J＝7.7Hz,2H),7.18(d,J＝7.7Hz,1H),7.12(d,J＝7.8Hz,1H),4.7 9(s,1H),3.72(s,3H).
中间体7f：淡黄色油状物，产率92.1％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.38(dd,J＝7.7,1.5Hz,1H),7.32(s,2H),7.18(m,1H),5.21(s,1H),3.62(s,3H).
6)中间体8的合成通法
将中间体7(3.26mmol)置于250ml反应瓶中，加入20ml乙腈，磁力搅拌至溶解。常温加入取代胺(3.58mmol)和DIEA(4.89mmol)，85℃加热回流反应40min。TLC检测反应完全，反应液冷却后，减压蒸除溶剂。倒入50ml水，乙酸乙酯(15ml×3)萃取，合并有机相，依次用水、饱和食盐水和饱和氯化铵洗涤三次，无水硫酸钠进行干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，洗脱系统为石油醚/乙酸乙酯＝12:1～10:1～8:1，得中间体8。
中间体8a：浅黄色油状物，产率92.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.54(q,J＝8.4Hz,4H),3.99(s,1H),2.34(s,6H).
中间体8b：黄色油状物，产率90.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.55(t,J＝7.5Hz,2H),7.34(d,J＝8.4Hz,2H),4.51(s,1H),2.63(d,J＝8.5Hz,4H),0.92(t,J＝7.1Hz,6H)
中间体8c：黄色油状物，产率96.7％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.30(t,J＝7.0Hz,2H),7.19(d,J＝7.9Hz,2H),3.69(s,1H),2.26(d,J＝33.3Hz,4H),1.57(s,4H).
中间体8d：浅黄色油状物，产率77.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.354(t,J＝7.0Hz,2H),7.34(d,J＝7.8Hz,2H),3.55(s,1H),3.42(s,3H),2.38(s,6H),2.12(s,2H).
中间体8e：浅黄色油状物，产率89.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.52(s,1H),7.48(d,J＝8.0Hz,1H),7.28(d,J＝7.6Hz,1H),7.23(d,J＝7.5Hz,1H),3.89(s,1H),2.37(s,6H).
中间体8f：黄色油状物，产率90.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.58(s,1H),7.52(d,J＝8.2Hz,1H),7.38(d,J＝7.7Hz,1H),7.34(d,J＝7.7Hz,1H),4.55(s,1H),2.51(t,J＝7.0Hz,4H),0.93(t,J＝7.1Hz,6H).
中间体8g：黄色油状物，产率80.0％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.65(s,1H),7.40(s,1H),7.24–7.17(m,2H),3.91(s,1H),2.51(d,J＝35.3Hz,4H),1.82(s,4H).
中间体8h：浅黄色油状物，产率79.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.62(s,1H),7.45(s,1H),7.26–7.17(m,2H),3.77(s,1H),3.48(s,3H),2.35(s,6H),2.22(s,2H).
中间体8i：黄色油状物，产率80.9％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.62(d,J＝7.2Hz,1H),7.53(d,J＝6.1Hz,1H),7.40(t,J＝7.0Hz,1H),7.25(dd,J＝10.4,4.1Hz,1H),3.88(s,1H),2.35(s,6H).
中间体8g：浅黄色油状物，产率82.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.68(d,J＝7.7Hz,1H),7.55(d,J＝6.6Hz,1H),7.46(t,J＝7.4Hz,1H),7.27(dd,J＝10.8,4.3Hz,1H),4.80(s,1H),2.68–2.52(m,4H),0.93(t,J＝7.1Hz,6H).
中间体8k：浅黄色油状物，产率92.7％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.60(d,J＝7.5Hz,1H),7.48(d,J＝6.4Hz,1H),7.33(t,J＝7.2Hz,1H),7.25(dd,J＝10.6,4.1Hz,1H),3.89(s,1H),2.49(d,J＝34.9Hz,4H),1.80(s,4H).
中间体8l：浅黄色油状物，产率80.5％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.59(d,J＝7.3Hz,1H),7.41(d,J＝6.2Hz,1H),7.31(t,J＝7.0Hz,1H),7.23(dd,J＝10.4,3.9Hz,1H),3.87(s,1H),3.59(s,3H),2.36(s,6H),2.15(s,2H).
中间体8m：黄色油状物，产率82.5％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.42(q,J＝8.6Hz,4H),4.05(s,1H),2.13(s,6H).
中间体8n：黄色油状物，产率79.0％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.45–7.37(m,4H),4.53(s,1H),2.52–2.49(m,4H),0.92(t,J＝7.1Hz,6H).
中间体8o：浅黄色油状物，产率83.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.49(d,J＝8.4Hz,2H),7.36(d,J＝8.4Hz,2H),3.89(s,1H),2.48(dd,J＝44.8,5.8Hz,4H),1.81(d,J＝6.1Hz,4H).
中间体8p：黄色油状物，产率62.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.49(d,J＝8.3Hz,2H),7.35(d,J＝8.3Hz,2H),3.99(s,1H),3.72–3.63(m,3H),2.48(s,8H).
中间体8q：浅黄色油状物，产率80.7％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.40(s,1H),7.38–7.35(m,2H),7.32(d,J＝4.8Hz,1H),4.16(s,1H),2.15(s,6H).
中间体8r：浅黄色油状物，产率83.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.44(s,1H),7.40–7.37(m,2H),7.36(d,J＝5.6Hz,1H),4.56(s,1H),2.50(dd,J＝13.5,7.4Hz,4H),0.93(t,J＝7.1Hz,6H).
中间体8s：黄色油状物，产率87.6％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.50(s,1H),7.36(d,J＝6.6Hz,1H),7.30–7.24(m,2H),3.89(d,J＝9.1Hz,1H),2.50(dd,J＝43.1,6.0Hz,4H),1.81(t,J＝9.9Hz,4H).
中间体8t：黄色油状物，产率89.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.45(s,1H),7.41(d,J＝5.2Hz,2H),7.38–7.34(m,1H),4.15(s,1H),3.62(s,3H),2.34(s,6H),2.13(s,2H).
中间体8u：黄色油状物，产率85.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.55(dd,J＝7.2,1.4Hz,1H),7.45(d,J＝7.7Hz,1H),7.39–7.37(m,2H),4.15(s,1H),2.22(s,6H).
中间体8v：浅黄色油状物，产率89.7％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.35(dd,J＝7.5,1.7Hz,1H),7.32(s,2H),7.19(m,1H),4.27(s,1H),2.39(dd,J＝11.5,7.0Hz,4H),0.98(t,J＝7.1Hz,6H).
中间体8w：黄色油状物，产率81.9％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.42(dd,J＝7.2,1.9Hz,1H),7.38(s,2H),7.22(m,1H),3.79(d,J＝9.0Hz,1H),2.57(dd,J＝30.1,5.6Hz,4H),1.61(t,J＝9.7Hz,4H).
中间体8x：浅黄色油状物，产率88.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.57(dd,J＝7.4,1.6Hz,1H),7.47(d,J＝7.9Hz,1H),7.41–7.31(m,2H),4.56(s,1H),3.62(s,3H),2.41(d,J＝4.4Hz,2H),2.32(s,3H),2.14(s,3H).
7)中间体9的合成通法
取100ml烧杯，加入16ml无水乙醇和8ml蒸馏水，磁力搅拌均匀。将中间体8(3.54mmol)置于100ml反应瓶中，加入上述乙醇和水的混合溶剂20ml，再加1M氢氧化钠溶液1ml，室温搅拌反应过夜。TLC检测反应毕，减压蒸除溶剂，用1M盐酸溶液调pH约为5-6，蒸除溶剂，硅胶柱层析，洗脱系统为二氯甲烷/甲醇＝8:1～6:1～2:1，得中间体9。
中间体9a：类白色固体，产率73.6％。Mp:135-137℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.73(d,J＝7.9Hz,2H),7.46(d,J＝8.0Hz,2H),5.09(s,1H),2.67(s,6H).
中间体9b：类白色固体，产率76.5％。Mp:169-174℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.59(d,J＝8.3Hz,2H),7.45(d,J＝8.4Hz,2H),4.39(s,1H),2.93–2.72(m,4H),1.05(t,J＝7.2Hz,6H).
中间体9c：类白色固体，产率59.7％。Mp:139-145℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.73(d,J＝8.3Hz,2H),7.56(d,J＝8.3Hz,2H),5.30(s,1H),3.33(s,4H),1.94(s,4H).
中间体9d：类白色固体，产率61.7％。Mp:147-152℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.51(d,J＝8.2Hz,2H),7.37(d,J＝8.2Hz,2H),3.82(s,1H),2.51(s,8H),2.17(s,3H).
中间体9e：类白色固体，产率40.2％。Mp:172-176℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.68(s,1H),7.62(d,J＝7.9Hz,1H),7.47(d,J＝7.7Hz,1H),7.40(t,J＝7.8Hz,1H),4.39(s,1H),2.64(s,6H).
中间体9f：类白色固体，产率76.5％。Mp:142-147℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.48(s,1H),7.32(d,J＝7.2Hz,1H),7.17(d,J＝6.8Hz,1H),7.12(t,J＝7.2Hz,1H)4.38(s,1H),2.62(m,4H),1.18(t,J＝7.2Hz,6H).
中间体9g：类白色固体，产率72.7％。Mp:178-180℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.79(s,1H),7.64(d,J＝8.0Hz,1H),7.57(d,J＝7.7Hz,1H),7.37(t,J＝7.9Hz,1H),4.59(s,1H),2.04(d,J＝23.3Hz,6H),1.24(t,J＝7.1Hz,2H).
中间体9h：类白色固体，产率64.3％。Mp:164-169℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.61(s,1H),7.38(t,J＝7.6Hz,2H),7.24(t,J＝7.7Hz,1H),3.54(s,1H),2.50(s,3H),2.27(s,5H),2.13(s,3H).
中间体9i：类白色固体，产率88.0％。Mp:162-166℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.63(s,2H),7.40(s,1H),7.26(s,1H),4.41(s,1H),2.36(s,6H).
中间体9g：类白色固体，产率61.7％。Mp:175-177℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.86(dd,J＝28.3,7.6Hz,2H),7.62(t,J＝7.5Hz,1H),7.56(t,J＝7.2Hz,1H),5.33(s,1H),3.15(d,J＝65.3Hz,4H),1.21(t,J＝6.7Hz,6H).
中间体9k：类白色固体，产率77.1％。Mp:180-185℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.48(d,J＝7.3Hz,1H),7.37(d,J＝6.2Hz,1H),7.28(t,J＝7.0Hz,1H),7.25(dd,J＝10.6,4.1Hz,1H),4.56(s,1H),2.48(d,J＝29.4Hz,4H),1.77(s,4H).
中间体9l：类白色固体，产率69.4％。Mp:153-155℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.73(d,J＝7.7Hz,1H),7.51(d,J＝8.0Hz,1H),7.30(t,J＝7.4Hz,1H),7.19(t,J＝7.5Hz,1H),4.10(s,1H),2.29(dd,J＝19.9,10.8Hz,8H),2.13(s,3H).
中间体9m：类白色固体，产率71.3％。Mp:146-148℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.45(s,4H),4.15(s,1H),2.42(s,6H).
中间体9n：类白色固体，产率70.8％。Mp:171-174℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.48(dd,J＝24.5,8.4Hz,4H),4.41(s,1H),2.82(dtd,J＝20.7,13.5,7.0Hz,4H),1.05(t,J＝7.1Hz,6H).
中间体9o：类白色固体，产率69.7％。Mp:134-137℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.52(dd,J＝28.0,8.1Hz,4H),4.72(s,1H),3.31(s,4H),2.04(d,J＝21.7Hz,4H).
中间体9p：类白色固体，产率70.5％。Mp:189-190℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.35(d,J＝42.7Hz,4H),3.53(s,1H),2.51(s,3H),2.27(d,J＝18.1Hz,8H).
中间体9q：类白色固体，产率72.5％。Mp:167-171℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.51(s,1H),7.40(s,3H),4.11(s,1H),2.41(s,6H).
中间体9r：类白色固体，产率83.2％。Mp:178-182℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.60(s,1H),7.43(dd,J＝13.3,4.3Hz,3H),4.43(s,1H),2.85(dtd,J＝20.6,13.5,6.9Hz,4H),1.07(t,J＝7.1Hz,6H).
中间体9s：类白色固体，产率69.3％。Mp:132-136℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.56(s,1H),7.40(s,3H),4.32(s,1H),3.08(s,2H),2.81(s,2H),1.85(s,4H).
中间体9t：类白色固体，产率76.8％。Mp:166-169℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.47(s,1H),7.36(s,3H),3.94(s,1H),2.50(s,8H),2.22(s,3H).
中间体9u：类白色固体，产率74.6％。Mp:141-149℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.65(s,1H),7.49(s,1H),7.43–7.37(m,2H),4.60(s,1H),2.47(s,6H).
中间体9v：白色固体，产率68.7％。Mp:157-159℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.69(d,J＝6.6Hz,1H),7.52(d,J＝8.0Hz,1H),7.44–7.34(m,2H),4.84(s,1H),3.00–2.73(m,4H),1.06(t,J＝7.1Hz,6H).
中间体9w：白色固体，产率70.2％。Mp:144-147℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.67(d,J＝7.3Hz,1H),7.41(d,J＝7.6Hz,1H),7.37–7.24(m,2H),4.32(s,1H),2.29(s,2H),2.17(s,2H),1.90(s,4H).
中间体9x：类白色固体，产率69.8％。Mp:171-179℃。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.40(s,1H),7.73(d,J＝6.1Hz,1H),7.40(d,J＝7.7Hz,1H),7.33–7.28(m,1H),4.92(s,1H),2.76–2.47(m,8H),1.26(s,3H).
8)目标化合物I系列的合成通法
将中间体9(1.06mmol)置于100ml反应瓶中，加入20ml DMF。冰浴条件下，依次加入HOBT(1.27mmol)、DIEA(4.24mmol)和EDCI(1.27mmol)，继续搅拌30min。TLC检测中间体9活化完全，加入中间体4(1.06mmol)。加毕，室温搅拌过夜。TLC检测反应完毕，将反应液倒入200ml冰水中淬灭，搅拌下未析出固体。二氯甲烷(15ml×3)萃取，合并有机相，依次用20ml水、饱和氯化铵和饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠进行干燥，过滤，减压蒸除溶剂，硅胶柱层析，洗脱系统为二氯甲烷/甲醇＝120:1～100:1～80:1～60:1。得白色固体产物I-1～I-24。
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-溴苯基)-2-(二甲基氨基)乙酮(I-1)白色固体，产率77.4％，Mp:184-188℃。1H NMR(400MHz,CH3OD)δ(ppm):8.26(s,1H),7.56(s,2H),7.43(d,J＝8.4Hz,2H),4.40(s,1H),3.95–3.63(m,8H),2.25(s,6H).13C NMR(101MHz,CH3OD)δ169.79,159.06,156.79,154.40,135.20(2C),131.69(2C),130.81,122.22,118.81,101.59,70.18,48.80(2C),44.85,42.42(2C),41.81.HRMS(ESI):calcd for C19H21Br2N7O[M+H]+523.0154,found 524.0206.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-溴苯基)-2-(二乙基氨基)乙酮(I-2)白色固体，产率59.4％，Mp:198-201℃。1H NMR(400MHz,CH3OD)δ(ppm):8.28(s,1H),7.53(d,J＝8.2Hz,2H),7.42(d,J＝8.3Hz,2H),4.91(s,1H),3.93(d,J＝5.1Hz,1H),3.86(s,2H),3.82–3.74(m,6H),2.66(ddd,J＝53.8,13.5,6.9Hz,4H),1.01(t,J＝7.1Hz,6H).13C NMR(101MHz,CH3OD)δ170.68,159.08,156.67,154.50,135.73(2C),131.41(2C),131.08,121.76,118.93,101.61,65.25,48.87(2C),45.76,44.90,43.66(2C),10.98(2C).HRMS(ESI):calcd for C21H25Br2N7O[M+H]+551.0467,found552.0504.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-溴苯基)-2-(吡咯烷-1-基)乙酮(I-3)白色固体，产率71.2％，Mp:150-152℃。1H NMR(400MHz,CH3OD)δ(ppm):8.27(s,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,2H),7.45(d,J＝8.4Hz,2H),4.45(s,1H),4.01–3.60(m,8H),2.69(d,J＝8.2Hz,2H),2.39(d,J＝8.6Hz,2H),1.81(d,J＝6.1Hz,4H).13C NMR(101MHz,CH3OD)δ169.66,159.05,156.57,154.54,136.05(2C),131.71(2C),130.44,122.10,118.97,101.59,69.46,52.09(2C),48.76(2C),44.72,41.87,22.70(2C).HRMS(ESI):calcd for C21H23Br2N7O[M+H]+549.0310,found 550.0348.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-溴苯基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮(I-4)类白色固体，产率69.4％，Mp:171-173℃。1H NMR(400MHz,CH3OD)δ(ppm):8.40(s,1H),7.37(dd,J＝20.2,8.4Hz,4H),4.31(s,1H),3.86(d,J＝10.9Hz,3H),3.78(dd,J＝20.5,9.8Hz,4H),3.61(d,J＝7.2Hz,1H),3.57–3.48(m,1H),2.58(s,8H),2.32(s,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ168.90,158.84,156.95,154.79,134.22(2C),131.95(2C),130.69,122.44,119.72,101.98,71.51,54.90(2C),51.12,49.43,48.65,45.79(2C),45.06,42.14.HRMS(ESI):calcd for C22H26Br2N8O[M+H]+578.0576,found579.0606.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-溴苯基)-2-(二甲基氨基)乙酮(I-5)白色固体，产率84.3％，Mp:180-183℃。1H NMR(400MHz,CH3OD)δ(ppm):8.42(s,1H),7.63(s,1H),7.43(dd,J＝30.8,7.6Hz,3H),4.22(s,1H),3.90(d,J＝8.8Hz,3H),3.86–3.76(m,4H),3.73(d,J＝5.5Hz,1H),2.33(s,6H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ169.19,158.77,156.87,154.77,138.22,131.90,131.54,130.32,127.58,122.92,119.86,101.93,72.07,49.39,48.63,45.07,43.40(2C),42.07.HRMS(ESI):calcd for C19H21Br2N7O[M+H]+523.0154,found 524.0208.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-溴苯基)-2-(二乙基氨基)乙酮(I-6)白色固体，产率62.2％，Mp:106-109℃。1H NMR(400MHz,CH3OD)δ(ppm):8.28(s,1H),7.71(s,1H),7.47(t,J＝8.7Hz,2H),7.29(dd,J＝14.2,6.3Hz,1H),4.93(s,1H),3.96–3.70(m,8H),2.74(dd,J＝13.6,7.0Hz,2H),2.59(dd,J＝13.6,7.0Hz,2H),1.01(t,J＝7.1Hz,6H).13C NMR(101MHz,CH3OD)δ170.54,159.05,156.64,154.52,139.08,132.07,130.97,130.01,127.97,122.23,118.96,101.60,65.31,48.90,48.84,44.90,43.63(2C),41.73,10.92(2C).HRMS(ESI):calcd for C21H25Br2N7O[M+H]+551.0467,found552.0506.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-溴苯基)-2-(吡咯烷-1-基)乙酮(I-7)白色固体，产率57.6％，Mp:123-124℃。1H NMR(400MHz,CH3OD)δ(ppm):8.27(s,1H),7.76(s,1H),7.51(d,J＝8.1Hz,2H),7.31(t,J＝7.8Hz,1H),4.50(s,1H),3.96–3.85(m,4H),3.81–3.71(m,4H),2.72(d,J＝8.3Hz,2H),2.41(d,J＝8.5Hz,2H),1.81(s,4H).13C NMR(101MHz,CH3OD)δ170.68,169.41,158.99,156.47,154.59,139.12,131.38,130.36,127.43,122.49,119.10,101.57,69.38,52.15(2C),48.82,45.75,44.69,41.90,22.70(2C).HRMS(ESI):calcd for C21H23Br2N7O[M+H]+549.0310,found 550.0346.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-溴苯基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮(I-8)类白色固体，产率58.6％，Mp:162-167℃。1H NMR(400MHz,CH3OD)δ(ppm):8.28(s,1H),7.72(s,1H),7.48(d,J＝11.5Hz,2H),7.32(d,J＝7.8Hz,1H),4.54(s,1H),3.98–3.70(m,8H),2.55(s,8H),2.30(s,3H).13C NMR(101MHz,CH3OD)δ169.55,159.02,156.53,154.59,137.85,131.83,131.34,130.24,127.94,122.44,119.02,101.59,69.26,54.21(2C),50.15,48.81 48.74,44.90(s),44.33(2C),41.88.HRMS(ESI):calcd forC22H26Br2N8O[M+H]+578.0576,found 579.0612.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-溴苯基)-2-(二甲基氨基)乙酮(I-9)白色固体，产率59.9％，Mp:132-135℃。1H NMR(400MHz,CH3OD)δ(ppm):8.22(s,1H),7.64(d,J＝6.3Hz,2H),7.42–7.37(m,1H),7.27(t,J＝8.5Hz,1H),4.83(s,1H),3.98(t,J＝12.3Hz,2H),3.88–3.82(m,2H),3.78(s,2H),3.63(dd,J＝13.7,9.4Hz,2H),2.30(s,6H).HRMS(ESI):calcd for C19H21Br2N7O[M+H]+523.0154,found 524.0197.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-溴苯基)-2-(二乙基氨基)乙酮(I-10)白色固体，产率45.3％，Mp:89-91℃。1H NMR(400MHz,CH3OD)δ(ppm):8.28(s,1H),7.64(d,J＝7.9Hz,1H),7.54(d,J＝7.7Hz,1H),7.36(t,J＝7.5Hz,1H),7.23(t,J＝7.0Hz,1H),5.26(s,1H),4.09–3.78(m,4H),3.78–3.64(m,4H),2.78(t,J＝10.7Hz,4H),0.98(t,J＝7.1Hz,6H).13C NMR(101MHz,CH3OD)δ170.88,159.07,156.57,154.56,136.43,133.11,130.80,129.52,127.35,124.86,118.99,101.63,64.93,48.94,48.62,44.98,44.41(2C),41.73,12.55(2C).HRMS(ESI):calcd for C21H25Br2N7O[M+H]+551.0467,found 552.0528.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-溴苯基)-2-(吡咯烷-1-基)乙酮(I-11)白色固体，产率59.1％，Mp:132-135℃。1H NMR(400MHz,CH3OD)δ(ppm):8.26(s,1H),7.67(d,J＝7.9Hz,2H),7.38(t,J＝7.5Hz,1H),7.25(t,J＝7.6Hz,1H),4.93(s,1H),3.80(ddd,J＝93.4,37.5,12.7Hz,8H),2.83(d,J＝7.9Hz,2H),2.46(d,J＝5.4Hz,2H),1.79(s,4H).13C NMR(101MHz,CH3OD)δ169.81,159.03,156.71,154.45,135.95,133.04,130.44,129.98,128.10,124.04,118.85,101.57,67.08,51.47(2C),48.69,48.66,44.79,42.11,22.76(2C).HRMS(ESI):calcd for C21H23Br2N7O[M+H]+549.0310,found550.0371.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-溴苯基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮(I-12)类白色固体，产率48.8％，Mp:145-146℃。1H NMR(400MHz,CH3OD)δ(ppm):8.28(s,1H),7.73(d,J＝7.9Hz,1H),7.50(d,J＝7.7Hz,1H),7.41(t,J＝7.5Hz,1H),7.30(t,J＝7.6Hz,1H),5.14(s,1H),4.00(d,J＝11.6Hz,2H),3.89(d,J＝11.4Hz,2H),3.66(d,J＝9.6Hz,3H),3.55(d,J＝13.9Hz,1H),3.23–3.15(m,4H),2.99(s,4H),2.81(s,3H).13CNMR(101MHz,CH3OD)δ169.58,159.00,156.40,154.65,134.11,133.53,130.47,130.45,128.00,125.13,119.06,101.60,66.97,53.89(2C),48.71,48.39,47.08(2C),44.86,42.35,41.81.HRMS(ESI):calcd for C22H26Br2N8O[M+H]+578.0576,found 579.0608.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氯苯基)-2-(二甲基氨基)乙酮(I-13)白色固体，产率61.2％，Mp:127-130℃。1H NMR(400MHz,CH3OD)δ(ppm):8.26(s,1H),7.56(s,2H),7.43(d,J＝8.4Hz,2H),4.40(s,1H),3.95–3.63(m,8H),2.25(s,6H).13C NMR(101MHz,CH3OD)δ169.79,159.06,156.79,154.40,135.20(2C),131.69(2C),130.81,122.22,118.81,101.59,70.18,48.80(2C),44.85,42.42(2C),41.81.HRMS(ESI):calcd for C19H21BrClN7O[M+H]+479.0659,found 480.0702.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氯苯基)-2-(二乙基氨基)乙酮(I-14)白色固体，产率63.6％，Mp:122-125℃。1H NMR(400MHz,CH3OD)δ(ppm):8.28(s,1H),7.48(d,J＝8.4Hz,2H),7.38(d,J＝8.4Hz,2H),4.92(s,1H),3.94–3.83(m,4H),3.81–3.73(m,4H),2.73(dd,J＝13.6,7.0Hz,2H),2.57(dd,J＝17.3,10.4Hz,2H),1.01(t,J＝7.1Hz,6H).13C NMR(101MHz,CH3OD)δ170.77,159.11,156.84,154.40,135.27,133.72,130.77(2C),128.38(2C),118.82,101.61,65.18,48.88(2C),45.77,44.90,43.62(2C),10.96(2C).HRMS(ESI):calcd for C21H25BrClN7O[M+H]+507.0972,found 508.1025.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氯苯基)-2-(吡咯烷-1-基)乙酮(I-15)白色固体，产率64.5％，Mp:140-142℃。1H NMR(400MHz,CH3OD)δ(ppm):8.27(s,1H),7.53(d,J＝8.4Hz,2H),7.39(d,J＝8.4Hz,2H),4.50(s,1H),3.90(dd,J＝24.3,6.5Hz,4H),3.79–3.67(m,4H),2.71(d,J＝8.4Hz,2H),2.41(d,J＝8.6Hz,2H),1.81(s,4H).13C NMR(101MHz,CH3OD)δ169.63,159.05,156.62,154.50,135.43,134.13,130.16(2C),128.71(2C),118.91,101.58,69.35,52.14(2C),48.83,48.77,44.73,41.87,22.70(2C).HRMS(ESI):calcd for C21H23BrClN7O[M+H]+505.0816,found 506.0914.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氯苯基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮(I-16)白色固体，产率81.3％，Mp:144-145℃。1H NMR(400MHz,CH3OD)δ(ppm):8.40(s,1H),7.37(dd,J＝20.2,8.4Hz,4H),4.31(s,1H),3.80(dd,J＝42.2,10.5Hz,7H),3.63(dd,J＝14.5,7.2Hz,1H),2.58(s,6H),2.32(s,3H).13C NMR(101MHz,CH3OD)δ169.70,159.02,156.43,154.63,134.18,133.93,130.63,128.66,119.07,101.60,68.95,54.12(2C),52.24,49.70,48.82,48.77,44.89,44.00(2C),41.82.HRMS(ESI):calcd forC22H26BrClN8O[M+H]+534.1081,found 536.1112.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-氯苯基)-2-(二甲基氨基)乙酮(I-17)白色固体，产率60.2％，Mp:98-101℃。1H NMR(400MHz,CH3OD)δ(ppm):8.25(s,1H),7.57(s,1H),7.47–7.32(m,4H),4.42(s,1H),3.87(d,J＝25.0Hz,4H),3.78–3.66(m,4H),2.25(s,6H).13C NMR(101MHz,CH3OD)δ169.72,159.23,157.60,153.95,138.31,134.45,130.02,128.77,128.39,127.37,118.28,101.60,70.23,48.89,48.82,44.88,42.43(2C),41.86.HRMS(ESI):calcd for C19H21BrClN7O[M+H]+479.0659,found480.0696.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-氯苯基)-2-(二乙基氨基)乙酮(I-18)白色固体，产率67.3％，Mp:91-94℃。1H NMR(400MHz,CH3OD)δ(ppm):8.28(s,1H),7.44–7.31(m,4H),4.93(s,1H),3.90(dd,J＝20.6,11.1Hz,4H),3.80(t,J＝10.5Hz,4H),2.72(dt,J＝14.1,7.0Hz,2H),2.59(dd,J＝13.6,7.0Hz,2H),1.01(t,J＝7.1Hz,6H).13C NMR(101MHz,CH3OD)δ170.61,159.05,156.59,154.53,138.86,134.19,129.74,129.12,127.97,127.53,119.00,101.60,65.33,48.87(2C),44.88,43.62(2C),41.72,10.95(2C).HRMS(ESI):calcd for C21H25BrClN7O[M+H]+507.0972,found 508.1010.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-氯苯基)-2-(吡咯烷-1-基)乙酮(I-19)白色固体，产率65.7％，Mp:127-130℃。1H NMR(400MHz,CH3OD)δ(ppm):8.28(s,1H),7.60(s,1H),7.47(d,J＝6.7Hz,1H),7.41–7.32(m,2H),4.49(s,1H),3.89(dd,J＝23.7,12.6Hz,4H),3.73(dd,J＝19.5,9.0Hz,4H),2.70(d,J＝11.7Hz,2H),2.40(d,J＝8.8Hz,2H),1.81(s,4H).13C NMR(101MHz,CH3OD)δ169.54,159.05,156.57,154.55,139.03,134.46,130.07(s),128.43,128.40,128.33,127.00,118.98,101.59,69.46,52.12(2C),48.79,48.72,44.69,41.88,22.69(2C).HRMS(ESI):calcd for C21H23BrClN7O[M+H]+505.0816,found 506.0840.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-氯苯基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮(I-20)白色固体，产率62.1％，Mp:128-132℃。1H NMR(400MHz,CH3OD)δ(ppm):8.41(s,1H),7.46(s,1H),7.31(d,J＝7.3Hz,3H),4.32(s,1H),3.97–3.72(m,8H),2.58(d,J＝22.9Hz,8H),2.31(s,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ168.76,158.83,157.01,154.69,137.23,134.75,129.98,129.01,128.59,127.22,119.58,101.96,71.61,54.87(2C),51.09,49.44,48.66,45.76(2C),45.09(s),42.17.HRMS(ESI):calcd forC22H26BrClN8O[M+H]+534.1081,found 536.1129.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-氯苯基)-2-(二甲基氨基)乙酮(I-21)白色固体，产率61.9％，Mp:108-112℃。1H NMR(400MHz,MeOD)δ(ppm):8.26(s,1H),7.64(d,J＝12.9Hz,1H),7.54–7.48(m,1H),7.35(d,J＝9.4Hz,2H),3.98(d,J＝9.8Hz,2H),3.82(dd,J＝34.3,10.8Hz,3H),3.54(s,3H),2.30(s,6H).13C NMR(101MHz,MeOD)δ169.78,159.04,156.74,154.43,134.03,133.55,130.17,129.95,129.66,127.53,118.82,101.57,66.02,48.73,48.62,44.68,42.20(2C),42.02.HRMS(ESI):calcd forC19H21BrClN7O[M+H]+479.0659,found 480.0703.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-氯苯基)-2-(二乙基氨基)乙酮(I-22)白色固体，产率51.2％，Mp:115-117℃。1H NMR(400MHz,MeOD)δ(ppm):8.22(s,1H),7.67(dd,J＝17.7,7.5Hz,2H),7.39(t,J＝5.8Hz,1H),7.27(t,J＝7.7Hz,1H),4.83(s,1H),4.00(d,J＝14.8Hz,2H),3.86(d,J＝7.0Hz,2H),3.78(s,2H),3.69–3.58(m,2H),2.32(s,6H).13C NMR(101MHz,MeOD)δ170.84,159.12,156.79,154.44,134.70,134.15,130.65,129.65,129.33,126.83,118.86,101.63,62.18,48.94,48.67,44.89,44.24(2C),41.76,12.19(2C).HRMS(ESI):calcd for C21H25BrClN7O[M+H]+507.0972,found 508.1011.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-氯苯基)-2-(吡咯烷-1-基)乙酮(I-23)类白色固体，产率80.3％，Mp:124-127℃。1H NMR(400MHz,MeOD)δ(ppm):8.26(s,1H),7.67(d,J＝5.2Hz,1H),7.47(d,J＝7.7Hz,1H),7.34(d,J＝8.3Hz,2H),4.98(s,1H),3.77(ddd,J＝76.0,33.5,9.2Hz,8H),2.81(d,J＝8.3Hz,2H),2.46(d,J＝8.5Hz,2H),1.80(s,4H).13C NMR(101MHz,MeOD)δ169.66,159.00,156.49,154.57,134.18,133.27,130.20,129.78,129.60,127.57,118.98,101.57,64.68,51.56(2C),48.73,48.00,44.59,42.05,22.72(2C).HRMS(ESI):calcd for C21H23BrClN7O[M+H]+505.0816,found506.0867.
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-氯苯基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮(I-24)白色固体，产率76.1％，Mp:146-150℃。1H NMR(400MHz,CH3OD)δ(ppm):8.40(s,1H),7.37(dd,J＝20.2,8.4Hz,4H),4.31(s,1H),3.86(d,J＝10.9Hz,3H),3.82–3.71(m,4H),3.68–3.59(m,1H),2.58(s,8H),2.32(s,3H).13C NMR(101MHz,CH3OD)δ169.54,159.01,156.41,154.65,134.33,132.49,130.33,130.19,129.96,127.45,119.05,101.61,64.57,53.95(2C),52.21(2C),48.75,48.44,44.75,42.79,41.85.HRMS(ESI):calcd for C22H26BrClN8O[M+H]+534.1081,found 536.1116.
效果验证
化合物对Akt1抑制活性测试及对套细胞淋巴瘤(MCL)细胞株的生长抑制测定实验
1)化合物对Akt1激酶抑制活性实验：
实验方法：
化合物储备液的配制：所有化合物均用100％DMSO制备为最终测定浓度的50倍的工作储备液。Akt激酶的稀释：将激酶与20mM MOPS缓冲液，1mM EDTA，0.01％Brij-35，5％甘油，0.1％β-巯基乙醇，1mg/mL BSA进行稀释。首先将该化合物的工作储备液作为反应中的第一组分添加到测定中，随后加入稀释的BTK激酶Buffer；接着添加Mg/ATP混合物来引发反应，反应在振动台室温下孵育40min后，通过添加浓度为0.5％的磷酸来终止反应；然后将10μL反应液点样到P30滤垫上，先用0.425的磷酸中洗涤4次，每次4分钟，然后在甲醇中洗涤一次后进行干燥；采用BioTek多功能酶标仪Synnergy 2TM检测发射波长620nm和665nm的荧光值，并计算抑制率。目标化合物对Akt1激酶抑制活性测定实验结果见表1。
Figure BDA0002537104760000241
CountC：化合物测试组(C)的计数；
CountP：阳性对照组的计数。阳性对照组(P)包含除目标化合物外的所有反应组成成分，添加最终浓度为2％DMSO代替目标化合物，以控制溶剂效果(剩余激酶活性100％)；
CountB：空白对照组的计数。空白对照组(B)包含除目标化合物外的所有反应组成成分，其中参考抑制剂星形孢菌素(Staurosporine)代替目标化合物，以消除了激酶活性并建立了基线(剩余激酶活性0％)。
应用GraphPad Prism 6.0软件，以浓度对数为横坐标，抑制率为纵坐标，拟合曲线，计算IC50值，结果见表2。
表1目标化合物对Akt1激酶的抑制活性测定数据
Figure BDA0002537104760000242
Figure BDA0002537104760000251
以临床试验中具有较好选择性的ATP竞争性Akt抑制剂GDC0068作为阳性对照。表1实验数据表明，化合物I-1、I-2、I-3、I-4、I-13、I-14、I-15和I-16在浓度为1μM对Akt1的抑制率大于70％，在浓度为0.01μM对Akt1的抑制率与阳性对照GDC0068相当。为进一步评价化合物活性，我们选取上述部分化合物，测定对Akt1激酶的半数抑制浓度(IC50值)，见表2。
表2优选化合物对Akt1激酶的IC50
Figure BDA0002537104760000252
Figure BDA0002537104760000261
表2实验数据表明，化合物I-3、I-4、I-13、I-14和I-16对Akt1激酶抑制活性较强，IC50值分别为23.54、20.55、28.92、29.51和15.03nM，活性均优于阳性对照GDC0068(33.62nM)。且化合物I-16的抑制活性比GDC0068高2倍。
2)化合物对MCL细胞株的生长抑制活性实验：
实验方法：
取对数生长期MCL细胞株，在96孔培养板中进行接种，细胞数为1×104/孔，在其中加入含不同浓度待测化合物的细胞培养液(终浓度为0.93-60μM)。同时设立DMSO空白对照组和阳性对照组，并且调整DMSO浓度≤1‰。将96孔培养板置37℃，5％CO2恒温培养箱中孵育72h。然后每孔加入
Figure BDA0002537104760000264
试剂，用Synergy HTX多功能检测仪(BioTek，USA)检测仪进行测定。测定在570nm波长下的吸光值(OD值)，所得数值与阴性DMSO对照组进行归一化处理，应用GraphPad Prism 6.0软件(GraphPad Software，USA)，以浓度对数为横坐标，抑制率为纵坐标，拟合曲线计算IC50值。
Figure BDA0002537104760000262
化合物对MCL细胞株的生长抑制活性测定结果见表3。
表3目标化合物对MCL细胞株的生长抑制活性测定数据
Figure BDA0002537104760000263
Figure BDA0002537104760000271
ND＝Not Detected
表3实验数据表明，与MCL上市药物ibrutinib(IBN)相比，该系列化合物对MCL的生长抑制活性较好。其中，化合物I-1和I-13对两株套细胞淋巴瘤(Maver-1和Z-138)的抑制活性强于IBN，化合物I-3和I-15对三株套细胞淋巴瘤(Rec-1、Maver-1和Z-138)的抑制活性强于IBN。I-4和I-16对五株套细胞淋巴瘤的抑制活性强于IBN。对Akt具有较强抑制作用的I-16亦对五株MCL细胞表现略强于IBN 2-10倍的抗增殖活性。
应注意的是，以上实例仅用于说明本发明的技术方案而非对其进行限制。尽管参照所给出的实例对本发明进行了详细说明，但是本领域的普通技术人员可根据需要对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围。

Claims (10)

1.一种化合物，其结构式如式I所示：
Figure FDA0002537104750000011
其中，R1选自H和卤素，R2选自氨基、取代氨基、含一个或多个杂原子的五元或六元环烷基，所述杂原子选自N。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，
R1的取代位置在对位、邻位或间位；所述卤素选自Cl、Br；
所述取代氨基为被C1～C5的直链或支链烷基所取代的氨基；所述含一个或多个N原子的五元或六元环烷基选自吡咯、取代吡咯、哌啶、吗啉、哌嗪和取代哌嗪；
所述取代吡咯或取代哌嗪各自独立地选自被C1～C5的直链或支链的烷基所取代的吡咯基或哌嗪基；
优选的，所述R2选自
Figure FDA0002537104750000012
优选的，所述化合物包含其消旋体及立体异构体。
3.如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，包含以下化合物：
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-溴苯基)-2-(二甲基氨基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-溴苯基)-2-(二乙基氨基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-溴苯基)-2-(吡咯烷-1-基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-溴苯基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-溴苯基)-2-(二甲基氨基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-溴苯基)-2-(二乙基氨基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-溴苯基)-2-(吡咯烷-1-基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-溴苯基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-溴苯基)-2-(二甲基氨基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-溴苯基)-2-(二乙基氨基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-溴苯基)-2-(吡咯烷-1-基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-溴苯基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氯苯基)-2-(二甲基氨基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氯苯基)-2-(二乙基氨基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氯苯基)-2-(吡咯烷-1-基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-氯苯基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-氯苯基)-2-(二甲基氨基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-氯苯基)-2-(二乙基氨基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-氯苯基)-2-(吡咯烷-1-基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(3-氯苯基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-氯苯基)-2-(二甲基氨基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-氯苯基)-2-(二乙基氨基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-氯苯基)-2-(吡咯烷-1-基)乙酮；
1-(4-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2-氯苯基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酮。
4.一种制备权利要求1-3任一项所述化合物的方法，其包括以中间体1为起始原料通过以下反应路线制备式I化合物
Figure FDA0002537104750000031
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述合成步骤如下：
(1)起始原料1在DMF中，与NBS反应得中间体2；
(2)中间体2，1-Boc-哌嗪，DIEA，在DMF中反应生成中间体3；
(3)中间体3在氯化氢和四氢呋喃体积比为1:4的溶液中，脱掉Boc保护基，得中间体4；
(4)起始原料5在甲醇溶液中，发生酯化反应得中间体6；
(5)中间体6在DMF中，与NBS反应得中间体7；
(6)中间体7，取代胺R2，DIEA，在乙腈中反应生成中间体8；
(7)中间体8在乙醇溶液中，1M氢氧化钠作用下反应得中间体9；
(8)中间体9和11在EDCI，HOBT，DIEA存在条件下，与中间体4反应后，得目标产物I。
6.一种药物组合物，其含有权利要求1-3任一项所述化合物或其药学上可接受的盐。
7.一种药物制剂，其包含权利要求1-3任一项所述化合物或其药学上可接受的盐或含有上述化合物或其药学上可接受的盐的组合物和药学上可接受的辅料和/或载体。
8.权利要求1-3任一项所述化合物或其药学上可接受的盐或含有上述化合物的组合物在制备Akt激酶抑制剂药物中的应用。
9.权利要求1-3任一项所述化合物或其药学上可接受的盐或含有上述化合物的组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
10.如权利要求9所述应用，其特征在于，所述肿瘤包括良性瘤和恶性瘤；优选的，恶性瘤的实例包括实体瘤和血液瘤；
实体瘤包括乳腺、膀胱、骨、脑、中枢和外周神经系统、结肠、内分泌腺、食道、子宫内膜、生殖细胞、头和颈、肾、肝、肺、喉和下咽的肿瘤、间皮瘤、卵巢、胰腺、前列腺、直肠、肾、小肠、软组织、睾丸、胃、皮肤、输尿管、阴道和外阴的肿瘤；血液瘤包括白血病和淋巴瘤。
CN202010536309.8A 2020-06-12 2020-06-12 吡唑并嘧啶哌嗪酮类化合物及其制备方法与应用 Pending CN111646996A (zh)

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