CN111643436B - 一种含海绵骨针的生发剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生发剂技术领域，具体公开一种含海绵骨针的生发剂，按质量分数计由以下组分制成：三肽‑1铜0.1‑2.5％、海绵骨针5‑90％、吡咯烷基二氨基嘧啶氧化物2‑90％。本发明提供的含海绵骨针的生发剂，利用海绵微针对头皮造成的微孔结构，可以显著增加头皮对生发剂的吸收率，起到较佳的生发作用。

Description

一种含海绵骨针的生发剂

技术领域

本发明涉及生发剂技术领域，具体公开一种含海绵骨针的生发剂。

背景技术

近年来，随着对毛发再生领域的深入研究，人们发现毛发生长受到毛囊及毛囊周围组织的综合调控，那就是毛囊的萎缩与退化，萎缩与退化的毛囊无法吸收周围头皮养分，毛发自然不再生长。所以，生发的关键是让毛囊重新恢复机能。

头皮是皮肤的一部分，本质是一种生物膜屏障，尤其是其最外层的角质层，用以保护机体免受外界各种有害物质和外源性病原体的入侵。一般只有极少数的小分子物质(分子量<500Da)可以有效地通过皮肤角质层屏障，而绝大部分药物分子或生物活性成分，尤其是越来越热门的生物大分子药物和活性物质，包括多糖、多肽、蛋白、核酸、siRNA等均很难通过皮肤渗透吸收。因此，如何克服皮肤屏障，安全有效地将各种理化性质不同的生物大分子药物或活性物质经皮输送至毛囊部位，是一项极具挑战性的工作，同时也是毛发的研究难点和热点。

脱发疾病中大量毛囊停滞在休止期，不再进入生长期，这与调控毛囊生长的细胞因子含量降低及信号通路的表达有关，通过因子及信号通路的表达对毛囊进行基因调控，将极大地改变防脱发领域的现状，但目前信号因子及信号通路只是存在理论阶段，仅可以在动物及细胞层面上实现验证，如何进行实际的应用存在安全性、经济性以及实用性(因子无法实现大规模生产，稳定性存在问题，导致容易失效，成本高等)。

目前全国乃至全球脱发是个普遍问题，治疗上目前有米诺地尔、非那雄安等药品可以使用，米诺地尔为外用药物，针对脱发效果较好，对生发效果很弱，非那雄安为女性口服药物。其他类型的产品如防脱化妆品类、医疗器械产品等几乎全为外用产品，由于头皮吸收问题，导致产品效果不佳。

发明内容

针对以上技术问题，本发明提供以下技术方案：

本发明提供的含海绵骨针的生发剂，按质量分数计由以下组分制成：三肽-1铜0.1-2.5％、海绵骨针5-90％、吡咯烷基二氨基嘧啶氧化物2-90％。

优选地，按质量分数计由以下组分制成：三肽-1铜0.1-2.5％、海绵骨针30-55％、吡咯烷基二氨基嘧啶氧化物40-60％。

优选地，所述海绵骨针为形态单一、结构完整且纯度不低于90％的海绵骨针。

进一步优选地，所述海绵骨针为蜂海绵骨针。

更进一步优选地，所述海绵骨针的长度为30um-800um。

本发明还提供一种生发促进剂，其含有上述所述的生发剂作为有效成分。

上述所述生发促进剂为化妆品、医疗器械产品及消毒产品中任一种。

上述所述化妆品的制备方法包括以下步骤：

S1、按质量分数称取三肽-1铜、海绵骨针及吡咯烷基二氨基嘧啶氧化物，混合均匀，得生发剂混合物；

S2、按质量分数称取丁二醇15％、甘油5％、生发剂混合物10％、苯氧乙醇0.5％、聚季铵盐-37 1.5％、EDTA二钠0.2％、水67.8％，备用；

S3、将步骤S2中称取的水、丁二醇、甘油、聚季铵盐-37及EDTA二钠混匀后加热至75℃-85℃，搅拌至完全溶解，降温至45℃，再加入称取的生发剂混合物搅拌至完全溶解后，加入苯氧乙醇，混合均匀，降温至室温，即得。

对比现有技术，本发明的有益效果为：

1、本发明提供的含海绵骨针的生发剂，由于三肽-1铜及吡咯烷基二氨基嘧啶氧化物的头皮吸收率受限，利用海绵微针对头皮造成微孔结构，可以增加头皮对各个成分的吸收率；其中，三肽-1铜吸收效率提高，可以补充微量元素铜的含量，铜可以促进酶的活化，吡咯烷基二氨基嘧啶氧化物可以通过扩张血管增加供血情况，三肽-1铜与吡咯烷基二氨基嘧啶氧化物联用能够恢复毛囊部位的营养供应；

2、本发明提供的含海绵骨针的生发剂，将吡咯烷基二氨基嘧啶氧化物、三肽-1铜和海绵骨针联合使用，其中吡咯烷基二氨基嘧啶氧化物具有生发功效；铜肽(三肽-1铜)能够增加毛囊部位酶活性，为毛囊提供铜离子，促进毛发生长因子(VEGF)表达；海绵骨针可以到达毛囊部位，造成的新创面可以促进成纤维细胞生长因子的分泌，刺激血管形成，改善头皮中毛囊部位的血液循环刺激信号通路(Wnt10b及β-catenin蛋白)表达、抑制JAK-STAT信号通路等调控毛囊机能的恢复，故三者联用能够起到起到很好的生发效果。

附图说明

图1是四周后各组小鼠背部体毛的生长状态图；

图2是各组小鼠毛长度的变化趋势图；

图3是各组小鼠毛囊数量及毛发直径变化图；其中，图a是毛囊数量变化图；图b是毛发直径变化图；

图4是各组小鼠毛囊组织变化图；

图5是各组小鼠背部组织β-连环蛋白表达量的结果图；

图6是临床使用初期毛发的平均密度图；

图7是临床使用终期毛发的平均密度图。

具体实施方式

为了使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案能予以实施，下面结合具体实施例和附图对本发明作进一步说明，但所举实施例不作为对本发明的限定。

实施例1

一种含海绵骨针的生发剂，按质量分数计由以下组分制成：三肽-1铜0.25％、蜂海绵(Sponge Haliclona sp.)骨针10％、吡咯烷基二氨基嘧啶氧化物89.75％。

其中，海绵骨针为形态单一、结构完整且纯度为99％的海绵骨针，针长长度为30um。

该含海绵骨针的生发剂能够进一步制成化妆品使用，具体制备方法如下：

S1、按质量分数称取三肽-1铜、海绵骨针及吡咯烷基二氨基嘧啶氧化物，混合均匀，得生发剂混合物；

S2、按质量分数称取丁二醇15％、甘油5％、生发剂混合物10％、苯氧乙醇0.5％、聚季铵盐-37 1.5％、EDTA二钠0.2％、水67.8％，备用；

S3、将步骤S2中称取的水、丁二醇、甘油、聚季铵盐-37及EDTA二钠混匀后加热至75℃-85℃，搅拌至完全溶解，降温至45℃，再加入称取的生发剂混合物搅拌至完全溶解后，加入苯氧乙醇，混合均匀，降温至室温，即得到含有该生发剂的化妆品。

使用时配合按摩方式将该化妆品直接涂抹于清洁后的头皮上即可。

实施例2

一种含海绵骨针的生发剂，按质量分数计由以下组分制成：三肽-1铜2.5％、海绵骨针90％、吡咯烷基二氨基嘧啶氧化物7.5％。

其中，海绵骨针为形态单一、结构完整且纯度为90％的海绵骨针，针长长度为800um。

该含海绵骨针的生发剂能够与医疗器械类产品结合使用，具体制备方法包括以下步骤：

S1、按质量分数称取三肽-1铜、海绵骨针及吡咯烷基二氨基嘧啶氧化物，混合均匀，得生发剂混合物；

S2、按质量分数称取丙二醇8％、甘油5％、生发剂混合物50％、苯氧乙醇0.5％、卡波姆1.5％、EDTA二钠0.2％及水34.8％，备用；

S3、将S2中称取的水、丙二醇、甘油、卡波姆及EDTA二钠混合均匀后加热至75℃-85℃，搅拌溶解完全，降温至45℃，加入生发剂混合物搅拌至完全溶解，再加入苯氧乙醇，混合均匀，降温至室温，将得到的产品涂覆于背衬材料上，即得到含有该生发剂的医疗器械产品。

使用时配合按摩方式将组合物直接涂抹于清洁后的头皮上即可。

实施例3

一种含海绵骨针的生发剂，按质量分数计由以下组分制成：三肽-1铜0.15％、海绵骨针55％、吡咯烷基二氨基嘧啶氧化物44.85％；

其中，海绵骨针为形态单一、结构完整且纯度为95％的海绵骨针，针长长度为600um。

该含海绵骨针的生发剂可以与消毒成分联合使用，得到既能够生发、又能消毒的产品，其具体制备方法包括以下步骤：

S1、按质量分数称取三肽-1铜、海绵骨针及吡咯烷基二氨基嘧啶氧化物，混合均匀，得生发剂混合物；

S2、按质量分数称取丁二醇15％、甘油5％、生发剂混合物10％、聚六亚甲基双胍0.089％、聚季铵盐-37 1.5％、EDTA二钠0.2％及水68.211％，备用；

S3、将S2中称取的水、丁二醇、甘油、聚季铵盐-37及EDTA二钠混合均匀后加热至75℃-85℃，搅拌至完全溶解，降温至45℃，加入生发剂混合物搅拌至完全溶解，再加入聚六亚甲基双胍，混合均匀，降温至室温，即得到含有该生发剂的消毒类产品，该产品可以同时抑制或杀灭头皮滋生的病菌，保证生发剂的生发效果。

使用时配合按摩方式将组合物直接涂抹于清洁后的头皮上即可。

下面对本申请提供的含海绵骨针的生发剂的促进生发效果进行评价。

1.实验动物的饲养及生发剂的涂敷

(1)试样的准备

样品：实施例1制备的样品；

对照药物：米诺地尔(MXD)。

(2)实验动物的饲养

从Orientbio购买24只出生6周龄的C57BL/6N雄鼠，在饲养室环境中适应两个星期后，分为阴性对照组(CON)、阳性对照组(MXD)以及实验组共三个组来进行实验。动物饲养室维持了温度21±2.0℃、相对湿度50±5％、12小时昼夜周期环境。实验期间，给小鼠自由供给常规固体饲料和水。

(3)样品的皮肤涂敷及肉眼观察方法

为了观察促进生发效果，使用具有背部皮肤的颜色呈粉红色的休止期体毛的8周龄小鼠。使用小鼠用剪毛器剔掉小鼠背部的毛后，每天下午四点涂敷试样一次，持续四周。将作为实验物质的实施例1样品(1g/小鼠/日)和作为对照药物使用的米诺地尔(3mg/小鼠/日)溶解在载体(乙醇：水：丙二醇＝5：3：2)中来使用，并对阴性对照组只涂敷载体。

为了肉眼确认毛生长的状态而开始涂敷，在经过一周、两周、三周以及四周的时间点利用乙醚轻度麻醉实验动物后，拍摄背部照片。使用尺子来测量毛的长度，以评估毛生长的程度。

2.体重变化的测量

在涂敷生发剂之前到结束的时间点期间每周测量实验动物的体重。阴性对照组(CON组)和实验组以及阳性对照组(MXD组)的初始体重无显著差异，在涂敷实验物质四周后测量的体重也无显著差异。

3.生发状态及毛的长度的变化

(1)生发的肉眼特征

将试样涂敷在小鼠的背部部位四周，通过拍摄照片来确认每周生长毛的形态。当进入休止期的小鼠剃除毛时，体表面的颜色呈粉红色。随着实验的进行体表面的颜色变黑色的情况下，意味着毛发周期从休止期进入生长期。阴性对照组(CON)两周后毛几乎没有生长，实验组中小鼠毛从涂敷第三周开始生长，与阴性对照组相比，四周后观察到在更多的个体中均匀且旺盛地生长出毛，如图1所示。

(2)毛长度的变化

在实验期间(四周)每周测量毛的长度。与阴性对照组相比，实验组的毛的长度从第三周开始显著增加，四周后显著增加至434％(p＜0.001)，如图2所示。因此，可知本发明提供的生发剂具有优异的促进毛发生长的效果。

4.背部皮肤的组织学分析

涂敷四周后，处死实验动物，利用剪刀和钳子提取以涂敷试验物质的部位为中心的皮肤组织试样后，用福尔马林固定。利用醇和二甲苯逐步脱水后，将其包埋在石蜡中，用切片机制造5μm的切片，然后用醇和二甲苯除去石蜡。实施苏木精-伊红染色后，利用光学显微镜观察毛囊组织的组织学变化。病理镜检负责人通过镜检评估生发周期，在光学显微镜上测量毛囊的数量及直径，在40倍率光学显微镜下测量了各试验组的毛囊数，结果显示如图3及图4所示。

由图3可知，与阴性对照组(CON)相比，实验组(增加166％)和MXD组的毛囊数显著增加；通过图像分析评估各试验组的毛囊直径，与阴性对照组相比，实验组(增加38％)和MXD组的毛囊直径显著增加。

由图4可知，利用显微镜测量，观察到实验组和MXD组中毛囊数量均优于对照组，这种现象认为与生发剂的促进生发效果有关。

5、调节小鼠皮肤组织的生发相关蛋白质表达

5.1、分析皮肤组织中与促进生发相关的蛋白质的表达

(1)蛋白质印迹(Western blot)分析法

将规定量的皮肤组织用液氮和裂解缓冲液在研钵中均质化，然后在13,000×g，4℃下离心分离20分钟，然后取中间层并借助考马斯亮蓝(又称Bradford)法蛋白质定量。将50μg的蛋白质在SDS-聚丙烯酰胺凝胶上电泳，然后电印迹到聚偏二氟乙烯(PVDF)超薄膜，并分别与β-连环蛋白及β-肌动蛋白抗体(Cell Signaling Technology公司，Danvers,MA,USA)反应。用化学发光检测系统(chemiluminescent detection system,Amersham)使各蛋白质的信号可视化，然后使用Quantity One Analysis Software(Bio-Rad Laboratories)定量化条带厚度。

(2)与促进生发相关的蛋白质的表达分析结果

已知Wnt/β-连环蛋白信号传递系统是参与通过调节毛囊周期来促进进入生长期(anagen)的信号传递系统。为了确认这些与促进生发相关的信号传递系统是否活性化，借助蛋白质印迹在背部皮肤组织分析β-连环蛋白表达量的结果，在实验组的情况下，与阴性对照组相比，β-连环蛋白的蛋白质表达显著增加71％，提示本发明提供的生发剂的效果比米诺地尔组更佳，如图5所示。

6、在体外培养模型中对毛发生长影响的试验

样品来源：取健康志愿者头皮组织，志愿者无染发、头部皮肤病等问题，年龄20-40岁之间。在显微镜下分离头皮组织，收集生长初期的毛囊组织。

组织培养：把毛囊组织加入包含10ng/mL皮质醇、10μg/mL胰岛素、2mM L-谷氨酰胺、100U/mL青霉素的培养基，并置于37℃，5％CO₂的培养箱中，连续培养28天。加入生发剂以及等体积的生理盐水作为对照组和2％的米诺地尔作为阳性对照组。

数据测定：分别在培养0天、7天、14天、21天及28天头发长度的增长率，结果见表1。

表1各组头发增长率(％)

分组	7天	14天	21天	28天
					对照组	5.1	9.8	16.3	22.5
2％米诺地尔	8.7	16.7	25.9	36.8
					生发剂	11.3	20.9	32.5	44.7

由表1可以看出，2％米诺地尔组的毛发生长明显长于对照组，说明该培养成功。使用生发剂组，其头发也明显长于对照组及米诺地尔组，显示本发明提供的生发剂具有明显促进毛发生长的作用。

7、促进头发生长临床试验

选择60名因雄激素性秃发的志愿者，平均年龄46岁，所有志愿者均无缺铁性贫血，甲状腺以及相关的病理特状，其头部毛发也均没有接受过任何的治疗。在本实验区域，至少有200根头发，其中70％处于生长初期。

15人使用实施例1生发剂组，15人使用米诺地尔，15人使用安慰剂，15人使用铜肽，15人使用吡咯烷基二氨基嘧啶氧化物，各组药物的浓度一样。在检测的头部区域削发(削发区域面积约1.8cm²)，连续3天采集削发部位图片，评估生长初期和终期的毛发。每天晚上使用药物一次，连续4个月。采用显微镜与自动数据图像采集分析仪器记录D0(第0天)和4个月的数据。比较D0(第0天)与4个月，各组头发处于生长期的平均密度以及各组头发处于毛发终期的平均密度，毛发初期和终期的平均密度对比结果分别如图6和图7所示。

试验结果表明，生发剂组能有效促进毛发生长，使处于毛发生长期的头发增多，表明生发剂可以在临床上用于秃头的治疗；生发剂组合物组明显优于单个成分铜肽组和吡咯烷基二氨基嘧啶氧化物组，表现显著的协同效应。

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (8)

1.一种含海绵骨针的生发剂，其特征在于，按质量分数计由以下组分制成：三肽-1铜0.1-2.5％、海绵骨针5-90％、吡咯烷基二氨基嘧啶氧化物2-90％。

2.根据权利要求1所述的含海绵骨针的生发剂，其特征在于，按质量分数计由以下组分制成：三肽-1铜0.1-2.5％、海绵骨针30-55％、吡咯烷基二氨基嘧啶氧化物40-60％。

3.根据权利要求1或2所述的含海绵骨针的生发剂，其特征在于，所述海绵骨针为形态单一、结构完整且纯度不低于90％的海绵骨针。

4.根据权利要求3所述的含海绵骨针的生发剂，其特征在于，所述海绵骨针为蜂海绵骨针。

5.根据权利要求4所述的含海绵骨针的生发剂，其特征在于，所述海绵骨针的长度为30um-800um。

6.一种生发促进剂，其特征在于，含有权利要求1或2所述的生发剂作为有效成分。

7.根据权利要求6所述的生发促进剂，其特征在于，所述生发促进剂为化妆品、医疗器械产品及消毒产品中任一种。

8.根据权利要求7所述的生发促进剂，其特征在于，所述化妆品的制备方法包括以下步骤：

S1、按质量分数称取三肽-1铜、海绵骨针及吡咯烷基二氨基嘧啶氧化物，混合均匀，得生发剂混合物；

S2、按质量分数称取丁二醇15％、甘油5％、生发剂混合物10％、苯氧乙醇0.5％、聚季铵盐-37 1.5％、EDTA二钠0.2％、水67.8％，备用；

S3、将步骤S2中称取的水、丁二醇、甘油、聚季铵盐-37及EDTA二钠混匀后加热至75℃-85℃，搅拌至完全溶解，降温至45℃，再加入称取的生发剂混合物搅拌至完全溶解后，加入苯氧乙醇，混合均匀，降温至室温，即得。

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