CN111621505A

CN111621505A - 一种石榴PgBEL1基因及其应用

Info

Publication number: CN111621505A
Application number: CN202010714852.2A
Authority: CN
Inventors: 苑兆和; 赵玉洁; 王永伟; 李变变; 王沙
Original assignee: Nanjing Forestry University
Current assignee: Nanjing Forestry University
Priority date: 2020-07-23
Filing date: 2020-07-23
Publication date: 2020-09-04

Abstract

本发明公开了一种石榴PgBEL1基因及其应用，涉及基因工程领域，该石榴PgBEL1基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明在石榴全基因组数据的基础上，克隆调控胚珠发育关键基因PgBEL1全长编码序列，通过表达分析，证明了石榴PgBEL1基因在石榴花发育过程中对完全花和不完全花器官发育有很大影响。该石榴PgBEL1基因与植物雌蕊中胚珠生长发育相关，为植物雌雄生殖器官发育的调控基因提供了一种研究方向，也为BEL1蛋白功能的相关研究提供了一种途径，应用于植物器官发育基因功能研究中，具有很好的应用前景。

Description

一种石榴PgBEL1基因及其应用

技术领域

本发明涉及植物基因工程技术领域，具体而言，涉及一种石榴PgBEL1基因及其应用。

背景技术

石榴(Punica granatum L.)属于千屈菜科石榴属，因富含特有的安石榴苷和花青苷等多酚类物质，被誉为‘超级水果’，是集经济、营养、药用、观赏和生态价值于一体的优良果树。石榴有完全花和不完全花两种类型，完全花基部有明显的膨大，外形筒状，可发育成果实；而不完全花基部较小，外形钟状，花后脱落，不结实。石榴不完全花雌蕊败育是由于胚珠发育异常，不能形成卵细胞所致。

植物TALE(Three amino-acid loop extension)基因家族编码一类包含同源异型盒结构域的转录因子。根据序列和进化上的差异，植物TALE基因家族可进一步被分为BELL(BEL1-like homeodomain)和KNOX(KNO TTED1-like homeobox)两个亚家族。拟南芥中，KNOX亚家族由9个成员组成，其蛋白结构含有1个MEINBOX结构域和1个HD结构域；而BEL L亚家族有13个基因，其蛋白结构含有1个MID结构域和一个HD结构域，BELL蛋白可通过MID结构域特异性识别并结合KNOX蛋白的MEIN BOX结构域形成二聚体，从细胞质转移到细胞核中调控植物的生长发育。

在拟南芥中，异位表达MDH1基因导致拟南芥株系矮化，育性降低、心皮及角果褶皱畸形。在土豆中，超表达StBEL5基因其茎快的生长增快，同时伴随着茎叶的快速增长。目前，关于BEL1基因功能的研究主要集中在模式植物拟南芥，在园艺植物上鲜见其相关研究报道。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种石榴PgBEL1基因及其应用。

本发明是这样实现的：

第一方面，实施例提供了一种石榴PgBEL1基因，其碱基序列如SEQ ID No.2所示。

第二方面，实施例提供了如前述实施例所述的石榴PgBEL1基因编码的BEL1蛋白，所述BEL1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

第三方面，实施例提供了一种重组载体，其包括前述实施例所述的石榴PgBEL1基因。

第四方面，实施例提供了一种宿主细胞，其包括前述实施例所述的重组载体。

第五方面，实施例提供了一种核酸组合，其包括用于检测如前述实施例所述的石榴PgBEL1基因的引物对和/或探针。

第六方面，实施例提供了如前述实施例所述的石榴PgBEL1基因在调控植物生长发育中的应用。

第七方面，实施例提供如前述实施例所述的石榴PgBEL1基因在制备转基因植物中的应用。

本发明具有以下有益效果：

本发明实施例提供了一种石榴PgBEL1基因及其应用，该石榴PgBEL1基因与植物生长发育相关，尤其在石榴花发育过程中，对完全化和不完全花器官的发育有很大影响，该基因为植物雌雄生殖器官发育的调控基因提供了一种研究方向，也为BEL1蛋白功能的相关研究提供一种途径。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本发明实施例的步骤4.3中的PCR产物的电泳结果图；

图2为本发明实施例的步骤4.4中的PCR产物的电泳图；

图3为本发明验证例中的BEL1基因在完全花及不完全花中的表达中的表达分析结果图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

首先，实施例提供了一种石榴PgBEL1基因，其碱基序列如SEQ ID No.2所示。需要说明的是，该石榴PgBEL1基因是一种分离的核酸。

具体地，所述石榴PgBEL1基因的碱基序列为：ATGGTCAGAGAACTCTGTGAGAGCAGCGAATCGAGAGACGACTACATGGCCTCCTCGACGGCGGCGGAAGTTGCCAACAATTTCTGCTACCCGGATCACCACTCGGCGGCGGCGGCCCATTTCGTGGGCCACATCCCCGCAGGCTACGACCCGATCTTCAGCAACATGACCCAGAACGTCGACATGATTGGGTTCGGAATGAAGAACGGACTGGTGGGTGTCAACCACGACTCGGGCAACTGGCAGGAGAACAAGCTGTTCGTGGATGATTCCTCTATCCGGTGTGTGTTCCCCTGCGAGGGTAACGAGAGGCCGAGCCAGGGCCTATCGCTCTCCCTCTCCTCAGCAGATCCCTCGAGCATCGGCCTTCAGCAGTTCGAGCTGAGGCCCGCAAACAACAACCAGCAGGATCACCATCATGAGATGAGGGATCACCATCATCAGCAGCACGCGTCGACCTTCGGGAAGTCTCCCGCGTTGCAAGGTCAAGTAGGGCAGCTTCAGCTGAGGAGCTCCAAGTACTTGGGCCCAGTTCAGGAGCTGCTGAATGAGTTTTGTAGCCTTGAGACTAATATCACTAAGCAGCAAGGCAATACTGATCAGACACCGACTAAGCCGAAGACCCAAAGGGCTAACAAGCAGTGGGAGGATATTAACAATGGAGGCAATCTCAGCTCGTCGTCTAACCCGAAGAATCAGTCCCTGAGCTCACTTGAGTTTTTGGAGTTGCAGAAGAGAAAGACAAAGCTGCTCTCACTTCTTGAAGAGGTTGATAGAAGATACAGGCATTACTGCGACCAGATGAAGGCGGTAGTGTCTTCCTTCGAGGCCGTGGCGGGCCATGGAGCGGCCAAGGTGTATTCAGCCTTGGCCTCAAGGGCCATGTCGAGGCACTTCCGGTGTCTGAGGGATGGAATTGTTGGCCAGATCAAGGAGACCAAGAAGGCCATGGGAGAGAAGGATCTAGTGACACCCGGAACAAGTCGGGGCGAGACCCCAAGGCTAAAAGTTATTGATCAGGCGCTGAGGCAGCAACGAGCCTTGCAGCAGATGAGCATGATGGAGAGCCACCCATGGAGGCCACAGCGTGGCTTGCCGGAGAGATCCGTGTCAGTCCTTCGAGCCTGGCTCTTTGAACATTTCCTCCACCCGTACCCGAGCGATGTTGATAAGCACATATTAGCCCGCCAAACCGGTCTATCAAGAAGTCAGGTTTCCAACTGGTTTATTAATGCACGGGTGAGGCTGTGGAAACCCATGGTGGAAGAGATGTACTTGGAAGAAACAAAGGAGCAAGACAATATGGGCTCGTCGGACGGGGCCACTGACCTCGAGGACGGCACTGCCAGGCAGAGTAATCAGAACCCCCATGGAGCGCCCGGCGCACTGCAACCGCGACTGGAGGATCAGAAGCCGACTGTTGGTCAGCTTGTCCGAATCGACTCAGAGTGCCTCTCCTCCATAATCACGAGCCCTGACAAGAGTGACCACCATCACCCATCCAGGAGTGCTCGGAGTAATAATCTTCAGGATCAGCATGGTCATAGTATCCTCCAGCACGGGTTTGGAAGGGTCGGGGATGGTTTCGGTGCCATGGAGCTCGACTTCTCCTCCTACGATCACCACTCAACAGGGGGCGGGGTGTCACTGACTCTAGGGTTGCAGCAGCATGGAGGGAGCGGCGGAGTCAGCCTCGCCTTCTCGCCTACATCACAGAGCTCGCTGTTCTACCCGAGAGACCACATGGAGGACTGCCAGCCCGTCCAGTACTCGCTCTTGGACAGCGAGGGACAGAACTTGCCCTACCGGAACTTGATGGGGGCACAGTTGCTTCATGATTTGGCCGGTTAA。

本发明实施例提供了如前述实施例所述的石榴PgBEL1基因编码的BEL1蛋白BEL1蛋白，所述BEL1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。该BEL1蛋白与植物的生长发育相关，尤其是石榴花器官的发育相关，该基因及其编码的蛋白可应用于调控石榴花器官的发育中，为石榴花器官的发育的调控基因的研究提供一种新的途径。

具体地，BEL1蛋白的氨基酸序列为：MVRELCESSESRDDYMASSTAAEVANNFCYPDHHSAAAAHFVGHIPAGYDPIFSNMTQNVDMIGFGMKNGLVGVNHDSGNWQENKLFVDDSSIRCVFPCEGNERPSQGLSLSLSSADPSSIGLQQFELRPANNNQQDHHHEMRDHHHQQHASTFGKSPALQGQVGQLQLRSSKYLGPVQELLNEFCSLETNITKQQGNTDQTPTKPKTQRANKQWEDINNGGNLSSSSNPKNQSLSSLEFLELQKRKTKLLSLLEEVDRRYRHYCDQMKAVVSSFEAVAGHGAAKVYSALASRAMSRHFRCLRDGIVGQIKETKKAMGEKDLVTPGTSRGETPRLKVIDQALRQQRALQQMSMMESHPWRPQRGLPERSVSVLRAWLFEHFLHPYPSDVDKHILARQTGLSRSQVSNWFINARVRLWKPMVEEMYLEETKEQDNMGSSDGATDLEDGTARQSNQNPHGAPGALQPRLEDQKPTVGQLVRIDSECLSSIITSPDKSDHHHPSRSARSNNLQDQHGHSILQHGFGRVGDGFGAMELDFSSYDHHSTGGGVSLTLGLQQHGGSGGVSLAFSPTSQSSLFYPRDHMEDCQPVQYSLLDSEGQNLPYRNLMGAQLLHDLAG。

本发明实施例提供了一种重组载体，其含有如前述实施例所述的分离的核酸。

具体地，所述重组载体包括以下任一载体：目的基因克隆载体(保存和克隆目的基因，如E.coli质粒)、中间克隆载体(由大肠质粒插入T-DNA片段及目的基因、标记基因等构建而成，是构建中间表达载体的基础质粒)、中间表达载体(含有植物特异性启动子的中间载体，作为构建转化载体的质粒)和/或植物基因转化载体(用于目的基因导入植物细胞的载体)。

本发明实施例提供了一种宿主细胞，其含有如前述实施例所述的重组载体。

本发明实施例提供了一种核酸组合，其包括用于检测如实施例所述的石榴PgBEL1基因的引物对和/或探针。引物对和探针的检测区域选自石榴PgBEL1基因序列中的任一区域或全长区域。

优选地，所述引物对的序列如SEQ ID No.3～4所示或如SEQ ID No.5～6所示。

本发明实施例还提供了实施例所述的石榴PgBEL1基因在在调控植物生长发育中的应用。

优选地，所述调控植物生长发育是指调控石榴的花器官发育。

优选地，所述调控植物的花器官发育包括：调控雄蕊的发育、雌蕊的发育、完全花的成熟和胚珠的形成中的至少一种。

本发明实施例还提供了如前述实施方式所述的石榴PgBEL1基因在制备转基因植物中的应用。

在可选的实施方式中，所述应用包括采用间接转化法和/或DNA直接转化法将如前世实施例所述的石榴PgBEL1基因转入植物组织中，筛选转基因植物。

具体地，间接转化法包括农杆菌介导法和病毒介导法，DNA直接转化法包括基因枪法、电击法、花粉管道通道法、化学物质诱导法、显微注射法和脂质体法中的至少一种。

实施例

本实施例提供一种石榴PgBEL1基因以及编码的BEL1蛋白。

1.RNA的提取和cDNA的合成

实验材料采自南京林业大学白马基地石榴资源圃五年生‘泰山红’石榴品种。

参照百泰克(Bio Corporation)RP3302 RNA提取试剂盒分离提取不同发育阶段石榴花RNA，然后使用PrimeScript^TMRT reagent Kitwith gDNA Eraser(TaKaRa)试剂盒对提取的RNA进行cDNA合成反应，cDNA的20μL反应体系中包含50ng RNA，反转录条件为37℃，15min；85℃，5s，操作方法包括去除基因组反应和反转录反应，然后将得到的反转录产物于-20℃或更低温度保存备用。

2.克隆基因

通过RT-PCR对步骤1的得到的cDNA进行克隆，PCR扩增所用的聚合酶为PV2，在50μL体系中加入以下成分：2ⅹPCR Mix 25μL，高保真聚合酶(PV2)1μL，模板2μL，加灭菌水至50μL。

PCR反应条件为：95℃，3min；95℃，25s；62℃，20s；72℃，40s；共25个循环；72℃，1min。

扩增基因编码区全长的引物为PgBEL1-S和PgBEL1-A，序列如下；

PgBEL1-S:5’-ATGGTCAGAGAACTCTGTGAGAGCA-3’(序列如SEQ ID No.3)；

PgBEL1-A:5’-TTAACCGGCCAAATCATGAAGCAAC-3’(序列如SEQ ID No.4)；

然后，将得到的PCR产物经过1％琼脂糖凝胶电泳分离后用DNA凝胶回收试剂盒(TSINGKE)进行分离纯化，并送公司测序。

PgBEL1基因开放阅读框为1851bp，共编码616个氨基酸，其中，氨基酸序列如SEQID No.1所示，碱基序列如SEQ ID No.2所示。

3.Real-time RT-PCR

用荧光定量Real-time RT-PCR对步骤2得到的PgBEL1基因进行表达分析。

荧光定量PCR所用cDNA模板稀释成10ng/μL，聚合酶为TB GreenPremix Ex Taq(Tli RNaseH Plus)，仪器为7500Real-Time PCR System(Applied Biosystems)。PgActin为实验的内参基因。

PCR的反应体系为：TB Green Premix Ex Taq 10μL，ROX Reference Dye Ⅱ 0.4μL，上游引物和下游引物各0.4μL，cDNA模板2μL，加灭菌水至20μL。

PCR反应程序为：(1)95℃，30s；(2)95℃，5s；60℃，34s；共40个循环；(3)95℃，15s；60℃，1min；95℃，15s。

PgBEL1荧光定量PCR所用引物序列为：

QPgBEL1-S:5’-CCGACTAAGCCGAAGACC-3’(序列如SEQ ID No.5所示)；

QPgBEL1-A:5’-TCGCAGTAATGCCTGTATCT-3’(序列如SEQ ID No.6所示)。

内参基因pgActin所用引物序列为：

QPgActin-S:5’-AGTCCTCTTCCAGCCATCTC-3’；

QPgActin-A:5’-CACTGAGCACAATGTTTCCA-3’。

4.构建载体

将步骤3得到的PCR产物用于载体构建。

4.1平末端连接

用EcoRV处理PUC57质粒，进行胶回收。

将PUC57质粒与PCR产物进行连接，反应体系为：3μL 3.3中胶回收产物、2μL PUC57(线性化载体)、1μLT4连接酶和4μL缓冲液。

室温放置30min后，将反应得到的溶液(10μL)进行转化以及菌液涂布实验，37℃温育过夜。

4.2筛选菌落

挑取步骤4.1中过夜平板中单菌落，用BEL1-1和BEL1-10引物进行菌落PCR，然后，进行电泳鉴定阳性克隆(结果参照附图1)。在阳性克隆中，随机选择4个阳性菌用4mL单管37℃摇床培养过夜。

BEL1-1和BEL1-10引物的序列如下：

BEL1-1:5’-ACGCTCGACACTAGTGGATCCAAAGAATTCATGGTCAGAGAACTCTGTGAGAGCAGCGAATCGAGAGACGACTACATGGCCTCCTCGACGGCGGC-3’；

BEL1-14:5’-AACCTCTTCAAGAAGTGAGAGCAGCTTTGTCTTTCTCTTCTGCAACTCCAAAAACTCAAGTGAGCTCAGGGACTGATTCTTCGGGTTAGACGACG-3’。

4.3重组连接

用EcoRI/XbaI处理SAK277质粒,进行胶回收(SAK277质粒的XbaI甲基化，转化JM110感受态以去甲基化)。

将步骤4.3中的PCR产物与SAK227质粒进行重组连接，重组反应体系为：4μL 3.3中胶回收产物、3.5μLSAK277(线性化载体)和2.5μL重组酶。50℃水浴25min，放置2-3min使温度降低，然后进行转化及菌液涂布实验，37℃温育过夜。

4.4筛选菌落

挑取步骤4.3中过夜平板中单菌落，用BEL1-1和BEL1-24引物进行菌落PCR。

BEL11-1:5’-ACGCTCGACACTAGTGGATCCAAAGAATTCATGGTCAGAGAACTCTGTGAGAGCAGCGAATCGAGAGACGACTACATGGCCTCCTCGACGGCGGC-3’；

BEL11-24:5’-TCGCATATCTCATTAAAGCAGGACTCTAGATTAACCGGCCAAATCATGAAGCAACTGTGCCCCCATCAAGTTCCGGTAGGGCAAGTTCTGTCCCTCGCT-3’；

然后，进行电泳鉴定阳性克隆(结果参照附图2)。在阳性克隆中，随机选择4个阳性菌用4mL单管37℃摇床培养过夜。

4.5提取质粒送测

将步骤4.4中的过夜菌液提取质粒，并送测序。阳性菌液用BEL1-VE-seqF、BEL1-VE-seqR和BEL1-5seq 1引物测序，获得正确质粒。

BEL1-VE-seqF、BEL1-VE-seqR和BEL1-5seq 1引物的序列如下。

BEL1-VE-seqF：5’-GACGCACAATCCCACTATCC-3’；

BEL1-VE-seqR：5’-TAAGGATCTGAGCTACACAT-3’；

BEL1-5seq 1：5’-CAGGAGCTGCTGAATGAGTT-3’。

验证例

验证石榴PgBEL1基因在石榴不完全花和完全花的表达模式。

通过荧光定量PCR验证PgBEL1在石榴不完全花和完全花的表达模式。使用BioTeke植物总RNA提取试剂盒(离心柱型)分别提取‘泰山红’石榴完全花和不完全花八个发育阶段花器官总RNA，利用反转录试剂盒获得cDNA(PrimeScript^TMRT reagent Kit with gDNAEraser，TaKaRa)，以cDNA为模板对不同发育阶段中石榴PgBEL1基因的表达情况进行分析。

结果请参照附图3，石榴花为完全花原基，发育过程中，部分花芽雌蕊败育形成不完全花即不完全花。不完全花基部较小，花外形钟状，花后脱落，不结果；完全花的基部有明显的膨大，外形筒状，发育成果实。

由图3可知，表明在不完全花和完全花的发育进程中，PgBEL1基因都有一定的表达。在花的发育前期(3.0mm-12.0mm)，基因在两种花的表达量很相似。

在两种花的发育中期成熟阶段，基因的表达在不完全花和完全花中出现叫交替性的表达模式，预测石榴PgBEL1基因在中期的表达可以促进雌雄花的成熟及胚珠的形态建成。

中期的交替性表可能是因为雌雄花的发育是不同步的，在12.1mm-14.0mm阶段，是雄花的生长期，而之后是完全花的快速生长时期。在花的发育后期，雌雄花中石榴PgBEL1基因表达量都很高，且在雄花中的表达量高于完全花中的表达量，预示着石榴PgBEL1基因在花的后期发育中发挥着重要的作用。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

SEQUENCE LISTING

<110> 南京林业大学

<120> 一种石榴PgBEL1基因及其应用

<160> 6

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 616

<212> PRT

<213> Punica granatum L.

<400> 1

Met Val Arg Glu Leu Cys Glu Ser Ser Glu Ser Arg Asp Asp Tyr Met

1 5 10 15

Ala Ser Ser Thr Ala Ala Glu Val Ala Asn Asn Phe Cys Tyr Pro Asp

20 25 30

His His Ser Ala Ala Ala Ala His Phe Val Gly His Ile Pro Ala Gly

35 40 45

Tyr Asp Pro Ile Phe Ser Asn Met Thr Gln Asn Val Asp Met Ile Gly

50 55 60

Phe Gly Met Lys Asn Gly Leu Val Gly Val Asn His Asp Ser Gly Asn

65 70 75 80

Trp Gln Glu Asn Lys Leu Phe Val Asp Asp Ser Ser Ile Arg Cys Val

85 90 95

Phe Pro Cys Glu Gly Asn Glu Arg Pro Ser Gln Gly Leu Ser Leu Ser

100 105 110

Leu Ser Ser Ala Asp Pro Ser Ser Ile Gly Leu Gln Gln Phe Glu Leu

115 120 125

Arg Pro Ala Asn Asn Asn Gln Gln Asp His His His Glu Met Arg Asp

130 135 140

His His His Gln Gln His Ala Ser Thr Phe Gly Lys Ser Pro Ala Leu

145 150 155 160

Gln Gly Gln Val Gly Gln Leu Gln Leu Arg Ser Ser Lys Tyr Leu Gly

165 170 175

Pro Val Gln Glu Leu Leu Asn Glu Phe Cys Ser Leu Glu Thr Asn Ile

180 185 190

Thr Lys Gln Gln Gly Asn Thr Asp Gln Thr Pro Thr Lys Pro Lys Thr

195 200 205

Gln Arg Ala Asn Lys Gln Trp Glu Asp Ile Asn Asn Gly Gly Asn Leu

210 215 220

Ser Ser Ser Ser Asn Pro Lys Asn Gln Ser Leu Ser Ser Leu Glu Phe

225 230 235 240

Leu Glu Leu Gln Lys Arg Lys Thr Lys Leu Leu Ser Leu Leu Glu Glu

245 250 255

Val Asp Arg Arg Tyr Arg His Tyr Cys Asp Gln Met Lys Ala Val Val

260 265 270

Ser Ser Phe Glu Ala Val Ala Gly His Gly Ala Ala Lys Val Tyr Ser

275 280 285

Ala Leu Ala Ser Arg Ala Met Ser Arg His Phe Arg Cys Leu Arg Asp

290 295 300

Gly Ile Val Gly Gln Ile Lys Glu Thr Lys Lys Ala Met Gly Glu Lys

305 310 315 320

Asp Leu Val Thr Pro Gly Thr Ser Arg Gly Glu Thr Pro Arg Leu Lys

325 330 335

Val Ile Asp Gln Ala Leu Arg Gln Gln Arg Ala Leu Gln Gln Met Ser

340 345 350

Met Met Glu Ser His Pro Trp Arg Pro Gln Arg Gly Leu Pro Glu Arg

355 360 365

Ser Val Ser Val Leu Arg Ala Trp Leu Phe Glu His Phe Leu His Pro

370 375 380

Tyr Pro Ser Asp Val Asp Lys His Ile Leu Ala Arg Gln Thr Gly Leu

385 390 395 400

Ser Arg Ser Gln Val Ser Asn Trp Phe Ile Asn Ala Arg Val Arg Leu

405 410 415

Trp Lys Pro Met Val Glu Glu Met Tyr Leu Glu Glu Thr Lys Glu Gln

420 425 430

Asp Asn Met Gly Ser Ser Asp Gly Ala Thr Asp Leu Glu Asp Gly Thr

435 440 445

Ala Arg Gln Ser Asn Gln Asn Pro His Gly Ala Pro Gly Ala Leu Gln

450 455 460

Pro Arg Leu Glu Asp Gln Lys Pro Thr Val Gly Gln Leu Val Arg Ile

465 470 475 480

Asp Ser Glu Cys Leu Ser Ser Ile Ile Thr Ser Pro Asp Lys Ser Asp

485 490 495

His His His Pro Ser Arg Ser Ala Arg Ser Asn Asn Leu Gln Asp Gln

500 505 510

His Gly His Ser Ile Leu Gln His Gly Phe Gly Arg Val Gly Asp Gly

515 520 525

Phe Gly Ala Met Glu Leu Asp Phe Ser Ser Tyr Asp His His Ser Thr

530 535 540

Gly Gly Gly Val Ser Leu Thr Leu Gly Leu Gln Gln His Gly Gly Ser

545 550 555 560

Gly Gly Val Ser Leu Ala Phe Ser Pro Thr Ser Gln Ser Ser Leu Phe

565 570 575

Tyr Pro Arg Asp His Met Glu Asp Cys Gln Pro Val Gln Tyr Ser Leu

580 585 590

Leu Asp Ser Glu Gly Gln Asn Leu Pro Tyr Arg Asn Leu Met Gly Ala

595 600 605

Gln Leu Leu His Asp Leu Ala Gly

610 615

<210> 2

<211> 1851

<212> DNA

<213> Punica granatum L.

<400> 2

atggtcagag aactctgtga gagcagcgaa tcgagagacg actacatggc ctcctcgacg 60

gcggcggaag ttgccaacaa tttctgctac ccggatcacc actcggcggc ggcggcccat 120

ttcgtgggcc acatccccgc aggctacgac ccgatcttca gcaacatgac ccagaacgtc 180

gacatgattg ggttcggaat gaagaacgga ctggtgggtg tcaaccacga ctcgggcaac 240

tggcaggaga acaagctgtt cgtggatgat tcctctatcc ggtgtgtgtt cccctgcgag 300

ggtaacgaga ggccgagcca gggcctatcg ctctccctct cctcagcaga tccctcgagc 360

atcggccttc agcagttcga gctgaggccc gcaaacaaca accagcagga tcaccatcat 420

gagatgaggg atcaccatca tcagcagcac gcgtcgacct tcgggaagtc tcccgcgttg 480

caaggtcaag tagggcagct tcagctgagg agctccaagt acttgggccc agttcaggag 540

ctgctgaatg agttttgtag ccttgagact aatatcacta agcagcaagg caatactgat 600

cagacaccga ctaagccgaa gacccaaagg gctaacaagc agtgggagga tattaacaat 660

ggaggcaatc tcagctcgtc gtctaacccg aagaatcagt ccctgagctc acttgagttt 720

ttggagttgc agaagagaaa gacaaagctg ctctcacttc ttgaagaggt tgatagaaga 780

tacaggcatt actgcgacca gatgaaggcg gtagtgtctt ccttcgaggc cgtggcgggc 840

catggagcgg ccaaggtgta ttcagccttg gcctcaaggg ccatgtcgag gcacttccgg 900

tgtctgaggg atggaattgt tggccagatc aaggagacca agaaggccat gggagagaag 960

gatctagtga cacccggaac aagtcggggc gagaccccaa ggctaaaagt tattgatcag 1020

gcgctgaggc agcaacgagc cttgcagcag atgagcatga tggagagcca cccatggagg 1080

ccacagcgtg gcttgccgga gagatccgtg tcagtccttc gagcctggct ctttgaacat 1140

ttcctccacc cgtacccgag cgatgttgat aagcacatat tagcccgcca aaccggtcta 1200

tcaagaagtc aggtttccaa ctggtttatt aatgcacggg tgaggctgtg gaaacccatg 1260

gtggaagaga tgtacttgga agaaacaaag gagcaagaca atatgggctc gtcggacggg 1320

gccactgacc tcgaggacgg cactgccagg cagagtaatc agaaccccca tggagcgccc 1380

ggcgcactgc aaccgcgact ggaggatcag aagccgactg ttggtcagct tgtccgaatc 1440

gactcagagt gcctctcctc cataatcacg agccctgaca agagtgacca ccatcaccca 1500

tccaggagtg ctcggagtaa taatcttcag gatcagcatg gtcatagtat cctccagcac 1560

gggtttggaa gggtcgggga tggtttcggt gccatggagc tcgacttctc ctcctacgat 1620

caccactcaa cagggggcgg ggtgtcactg actctagggt tgcagcagca tggagggagc 1680

ggcggagtca gcctcgcctt ctcgcctaca tcacagagct cgctgttcta cccgagagac 1740

cacatggagg actgccagcc cgtccagtac tcgctcttgg acagcgaggg acagaacttg 1800

ccctaccgga acttgatggg ggcacagttg cttcatgatt tggccggtta a 1851

<210> 3

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

atggtcagag aactctgtga gagca 25

<210> 4

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

ttaaccggcc aaatcatgaa gcaac 25

<210> 5

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

ccgactaagc cgaagacc 18

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

tcgcagtaat gcctgtatct 20

Claims

1.一种石榴PgBEL1基因，其特征在于，其碱基序列如SEQ ID No.2所示。

2.如权利要求1所述的石榴PgBEL1基因编码的BEL1蛋白，其特征在于，所述BEL1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

3.一种重组载体，所述重组载体含有如权利要求1所述的石榴PgBEL1基因。

4.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有如权利要求3所述的重组载体。

5.一种核酸组合，其特征在于，其包括用于检测如权利要求1所述的石榴PgBEL1基因的引物对和/或探针。

6.根据权利要求5所述的核酸组合，其特征在于，所述引物对的序列如SEQ ID No.3～4所示或如SEQ ID No.5～6所示。

7.如权利要求1所述的石榴PgBEL1基因在调控植物生长发育中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述调控植物生长发育是指调控石榴花器官发育；

9.如权利要求1所述的石榴PgBEL1基因在制备转基因植物中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述应用包括：采用间接转化法和/或DNA直接转化法将所述石榴PgBEL1基因转入植物组织中，筛选转基因植物。