CN111593129A - 白梭吻鲈家系鉴定用引物及白梭吻鲈家系鉴定方法 - Google Patents

白梭吻鲈家系鉴定用引物及白梭吻鲈家系鉴定方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了白梭吻鲈家系鉴定用引物及白梭吻鲈家系鉴定方法，包括34个引物组，每个引物组包括两条正向引物以及一条反向引物。有助于快速、准确鉴别不同家系的白梭吻鲈，并结合子代的生长指标和亲本电子标记信息，实现亲本的遗传选育操作，本发明对于白梭吻鲈的遗传选育具有重要的应用价值。

Description

白梭吻鲈家系鉴定用引物及白梭吻鲈家系鉴定方法
技术领域
本发明属于遗传育种领域，具体涉及一种适用于白梭吻鲈家系鉴定及优秀家系筛选的方法。
背景技术
白梭吻鲈（Sander lucioperca）属于鲈形目（Perciformes）、鲈科（Percidae）、梭吻鲈属（Sander），是一种新兴的淡水经济鱼类。原分布于欧洲的黑海、里海以及波罗的海等水系，目前在北美及亚洲地区也有分布，在我国仅分布于新疆伊犁河水系和额尔齐斯河水系。由于具有病害少、生长快、肉质细嫩、肌间刺少、蛋白质以及五种致鲜氨基酸含量高等优点，已成为极具养殖潜力的经济鱼类之一。近年来该鱼已在山东、北京、江苏、广东等地进行了养殖。为了促进白梭吻鲈养殖业的持续发展，进行白梭吻鲈良种选育工作已显得十分必要。
随着白梭吻鲈养殖规模的不断扩大，部分养殖区发现其生长速度下降严重，可能是近亲繁殖导致其生长性状退化，因此迫切需要开展白梭吻鲈育种研究，选育出优良品系，以适应白梭吻鲈养殖业的发展需要。家系选择育种是保持优良经济性状以及获得优良品种和品系的重要手段，已在动植物中广泛应用；而完整、准确的系谱信息能够避免近交、保持物种的遗传多样性，对促进白梭吻鲈的遗传改良工作有重要的现实意义。
发明内容
本发明解决的问题是提供了一种适用于白梭吻鲈家系鉴定的方法与引物，有助于快速、准确鉴别不同家系的白梭吻鲈，并结合子代的生长指标和亲本电子标记信息，实现亲本的遗传选育操作，本发明对于白梭吻鲈的遗传选育具有重要的应用价值。
本发明采用如下技术方案：
白梭吻鲈家系鉴定用引物，包括34个引物组，每个引物组包括两条正向引物以及一条反向引物；所述34个引物组具体如下：
34个引物组序列信息
位点locus Primer_AlleleFAM Primer_AlleleHEX Primer_Common
Marker36755 CACCAGGTATAATATGATTGAAATGTGAT CACCAGGTATAATATGATTGAAATGTGAC TGTATTCCTTCTTCATGCAAGCCACTTT
Marker161054 ATTTAAAACGACCGTTATTCAACTCTTTC CATATTTAAAACGACCGTTATTCAACTCTTTT GCCTTTCTACAGGGCCCAGAATTTT
Marker36461 GCAGCAATTAACCAGCTTTTAACATA GCAGCAATTAACCAGCTTTTAACATG GAGAGGATCAGACTTGTAACAACCATTAA
Marker104940 TGTGTGACTTCCCGTTGTGTTCT GTGTGACTTCCCGTTGTGTTCC GCTCTGAACTGGCCGTGGAGTT
Marker4315 CATCAAGAGTGGAAAAGGAGAATAGA CATCAAGAGTGGAAAAGGAGAATAGG GTTCCCTTGGTCTCGGTTTAAATTAGATT
Marker35696 CGTTAATTACATTAAACGTCTCCAAGATTA CGTTAATTACATTAAACGTCTCCAAGATTT GGGTGTGTGGTGAAACAGAAGCTTT
Marker75079 GCCAGGAATAGAACATATTTCTCATAAATAA CCAGGAATAGAACATATTTCTCATAAATAG GTCACTGTCCTCTATGATAAAACCTCAAT
Marker48555 TCCATAGATGTAAATATGTAACATATAATGAC CCATAGATGTAAATATGTAACATATAATGAT CAAACTGCATGGGAACAATGCAAAATGAT
Marker62060 CGTGGTAATAAAAAGGCAGGCCG CGTGGTAATAAAAAGGCAGGCCA GAACACCCTGCTGTGTGCGCAA
Marker20169 CATTTCCGTTTTATTTATCTCACCCCTT TCCGTTTTATTTATCTCACCCCTC GGAAAGTGATTCAAAATCATTAGAACGTCA
Marker70573 GGGAGCTGTGTATGAGGCCG GGGAGCTGTGTATGAGGCCA TTCAACCACAGAGTCCACTCTTATTTCTT
Marker13787 AGATCCAAAACATCAGTCAATTACATTATC AAAGATCCAAAACATCAGTCAATTACATTATT CAGCAGCGAACAGGAACAGAGGAA
Marker71805 CAGCCCAATAACACCAGGCCAT AGCCCAATAACACCAGGCCAC GACAAATCAGTTTTAGATTTGCCACAAGTT
Marker93880 AGACTACAGCCTCCTACACCCA GACTACAGCCTCCTACACCCG GTTCGTCCAATCAGGTGCAGCCAT
Gene7126-2 AGCCGCTGCCATGGGTCCA GCCGCTGCCATGGGTCCG GGWGCAAGGAGTGTGTACTCTGTTT
Gene 7255 GCCGTAATGCATGTGACTTGAAATTT GCCGTAATGCATGTGACTTGAAATTG CTGCCATCATGTATATGAGATATGAGTCTA
SNP_113351 AGATATATTCCACAGATTTAATCCTTCTG CAGATATATTCCACAGATTTAATCCTTCTA CTGACTAGAGATGGTGTATTCATTTAACTT
SNP_14483 CACCTCAATAACCACCATATAAAAAAGTTA ACCTCAATAACCACCATATAAAAAAGTTC TCATTGTGAATGGTGCCTGTTATCGTTT
SNP_14480 GTCCTAGAAAATATTTAGATCCCCCG GTCCTAGAAAATATTTAGATCCCCCA GTAATGAGACCCCACTCCCTCAAAA
SNP_8555 CAGGATGCACATCCACGGAATTG CAGGATGCACATCCACGGAATTA CTATGCGATTGGTTTTGTTGAATCAGTGTA
SNP_23093_1 CTACTCCTGTTCCAACCTGGAT CTACTCCTGTTCCAACCTGGAC AAGGCCCAGTCTGCATACTTCCATA
SNP_23093_2 CCAGTGCTCGCAAGCCATTTCT CAGTGCTCGCAAGCCATTTCC GTATGAGGGAGCTCAATAGGAATTTCTTT
GHR ATGCCTGTGGGGTACATC CTGCTATGCCTGTGGGGTACATA GGTGAGAGGTTCCCCAGCAGTT
IGF1R CAGTCTAAAATGGTTACAATTAGGCAAC CAGTCTAAAATGGTTACAATTAGGCAAG TATGGTTTATCTGCATTTATTCCAGGCTTT
IGF1_1 GAGCGCATGGCGCACAGAAG AAGAGCGCATGGCGCACAGAAA CACTGCTCGGATGAATGGGTTTTCAT
IGF2 CGGGTGAATGACGACGTGCA CGGGTGAATGACGACGTGCT GGGCGGTCACTCACCTAATATACAT
M1134 GTTGGAGTTGAGAGACAACATCTTTA GTTGGAGTTGAGAGACAACATCTTTC TGTAGTCCGTTTGTAACCTGAGTAGTATT
M35446 TTTAAACAATGTTCCACTCAACTGCG ATTTTAAACAATGTTCCACTCAACTGCA GCTGCGCAATGAAAAGCAATCAATCTAAA
M41746 GTGGGCCTGGGCCAAGCG GTGGGCCTGGGCCAAGCT ATGATGACTGTCTTGACAGATTTGGACTT
M45510 CCTTGATCGGATTCAACAGACGC CCTTGATCGGATTCAACAGACGT GCTTCCCATCATCCAGGCCCAT
M56328 GATCTGCAAACGACCAAAGT GCTGATCTGCAAACGACCAAAGC GAGCTAAGGCTGCAGCGTTTTCATA
M79524 TAATTATGACTCAACAGATCGGTGGA AATTATGACTCAACAGATCGGTGGG CACGGGCTGTAAACCATCGGAAATT
M83612 TTTCTATAAGGCTTCTTGTTCCACTC TTTCTATAAGGCTTCTTGTTCCACTT TAACTGATAAATCCCGGCTTAATCCCTTA
M98079 GTTTCTATCACTTTTCTGCCATGCTT GTTTCTATCACTTTTCTGCCATGCTA CATTGGTATTTTAGTGCCCTGGGCAT
本发明进一步公开了所述白梭吻鲈家系鉴定用引物在白梭吻鲈家系鉴定或者白梭吻鲈家系筛选中的应用。
利用所述白梭吻鲈家系鉴定用引物鉴定白梭吻鲈家系的方法，包括以下步骤：
（1）对每尾白梭吻鲈成鱼亲本植入电子标记；按雌雄数量比1∶1对植入电子标记的白梭吻鲈成鱼亲本进行配对，得到雌雄亲本对；然后每对雌雄亲本对经人工催产后产卵，待仔鱼平游后得到每对雌雄亲本对所对应的鱼苗，即获得一个家系；
（2）采集每尾白梭吻鲈成鱼亲本的DNA；分别以每尾亲本的DNA为模板，利用所述白梭吻鲈家系鉴定用引物进行PCR反应，然后对PCR产物进行凝胶电泳，根据荧光值得到每尾亲本对应的基因分型；
（3）取每个家系等量的鱼苗，混合后于一个培育池塘中进行培育；然后采集培育的每尾子代的DNA、表型数据；分别以每尾子代的DNA为模板，利用所述白梭吻鲈家系鉴定用引物进行PCR反应，然后对PCR产物进行凝胶电泳，根据荧光值得到每尾子代对应的基因分型；
（4）比较每尾亲本对应的基因分型与每尾子代对应的基因分型，确定子代所属家系，完成白梭吻鲈家系的鉴定。
利用所述白梭吻鲈家系鉴定用引物筛选白梭吻鲈家系的方法，包括以下步骤：
（1）对每尾白梭吻鲈亲本植入电子标记；按雌雄数量比1∶1对植入电子标记的白梭吻鲈亲本进行配对；然后每对雌雄亲本对经人工催产后产卵，待仔鱼平游得到每对雌雄亲本对对应的鱼苗，即获得1个家系；
（2）取每个家系等量的鱼苗，混合后于一个培育池塘中进行培育；然后采集培育的每尾子代的DNA、表型数据；分别以每尾子代的DNA为模板，利用所述白梭吻鲈家系鉴定用引物进行PCR反应，然后对PCR产物进行凝胶电泳，根据荧光值得到每尾子代对应的基因分型；
（3）采集每尾亲本的DNA；分别以每尾亲本的DNA为模板，利用所述白梭吻鲈家系鉴定用引物进行PCR反应，然后对PCR产物进行凝胶电泳，根据荧光值得到每尾亲本对应的基因分型；比较每尾亲本对应的基因分型与每尾子代对应的基因分型，确定家系，完成白梭吻鲈家系的鉴定；根据各家系子代的表型数据，确定生长快速的家系，结合亲本的电子标记信息，筛选出生长快速家系的亲本，所筛选到的生长快速家系亲本将用于下一年度的人工繁殖。
上述技术方案中，采集鳍条边缘用于提取每尾亲本的DNA；植入电子标记、采集每尾亲本（子代）的DNA的具体方法为现有常规技术。
上述技术方案中，每对雌雄亲本对经人工催产后分别置于不同网箱中产卵。
上述技术方案中，7个月后采集培育的每尾子代的DNA、表型数据；表型数据包括全长、体长、体重。
上述技术方案中，利用所述白梭吻鲈家系鉴定用引物进行PCR反应，然后对PCR产物进行凝胶电泳，根据荧光值得到每尾亲本对应的基因分型；具体过程都为常规技术。
上述技术方案中，比较每尾亲本对应的基因分型与每尾子代对应的基因分型，确定家系；具体过程为常规比较方法，可通过人工比较，也可通过计算机程序比较。
上述技术方案中，根据各家系子代的生长指标，筛选出生长快速的家系，完成白梭吻鲈家系的筛选，结合电子标记，从亲本群体中筛选出快速生长家系的亲本；具体过程为常规筛选方法。
本发明中，白梭吻鲈家系鉴定用引物符合单核苷酸多态性即DNA序列上的单个碱基变异，作为分子遗传标记优于微卫星标记，具有基因组分布广、易于检测、高遗传稳定性等优点，在家系鉴定中有明显的优势。
本发明公开的上述方法可以参考如下步骤：
1）选择白梭吻鲈外形正常、健康的成鱼作为亲本，对亲本群体中的所有个体进行电子标记，并采集鳍条边缘，用于提取DNA；
2）对亲本进行雌雄甄别和配对，1尾雌鱼配1尾雄鱼，每对亲本经人工催产后分别置于不同网箱中产卵，根据电子标记记录亲本配对情况；待仔鱼平游后取各个亲本对等量的鱼苗混合，然后放于同一培育池塘中进行培育，7个月后对子代进行生长指标测量（全长、体长和体重），并采集各个个体DNA样本；
3）将亲本及其子代的DNA，利用34个引物组（两条正向特异性引物和一条反向通用引物）分别进行竞争性等位基因特异性PCR，两条正向引物对应两种荧光信号，经过PCR反应，最终检测两种荧光的荧光值大小来判断样本分型情况；
4）根据亲本分型情况对候选子代进行甄别，符合亲本基因型的单个碱基变异位点数最多的子代则判为该家系子代，完成白梭吻鲈家系的鉴定；
5）根据甄别到各家系中的子代的生长指标进行生长快速家系的筛选，淘汰生长慢速家系，结合亲本电子标记信息，筛选出生长快速家系的亲本，所筛选到的生长快速家系亲本将用于下一年度的人工繁殖。
本发明公开的PCR反应可在广泛的基因组DNA样品中（甚至是一些复杂基因组的DNA样品），对单个碱基变异和特定位点上的InDels进行精准的双等位基因判断，具有高通量、低成本、灵活快速的特点。本发明利用单核苷酸多态性分型技术建立白梭吻鲈家系鉴定方案，确定个体间亲缘关系，为白梭吻鲈进一步遗传选育工作奠定坚实的基础。
与现有技术相比，本发明的白梭吻鲈家系鉴定方法具有如下有益效果：应用本技术可将白梭吻鲈混养群体按不同家系区分开来，有助于白梭吻鲈保种、繁殖配组和选育，减少养殖环境因素对遗传选育操作的影响。在选育子代培育过程中可以将大量的家系放养在同一个池内进行养殖，避免了每个家系都需要一个独立养殖单元所造成的池塘浪费情况，大大降低了人工管理与操作的强度；同时，因为同池饲养各个家系的养殖环境完全保持一致，显著降低了外界环境条件对于性状表型值造成的差异，这将有利于后续家系和个体经济性状的遗传分析与准确评定。
附图说明
图1为M35696分型结果。
具体实施方式
实施例一
白梭吻鲈家系鉴定用引物，包括34个引物组，每个引物组包括两条正向引物以及一条反向引物；所述34个引物组的序列信息具体如表1所示。
表1 34个白梭吻鲈家系鉴定用引物组
位点locus Primer_AlleleFAM Primer_AlleleHEX Primer_Common
Marker36755 CACCAGGTATAATATGATTGAAATGTGAT CACCAGGTATAATATGATTGAAATGTGAC TGTATTCCTTCTTCATGCAAGCCACTTT
Marker161054 ATTTAAAACGACCGTTATTCAACTCTTTC CATATTTAAAACGACCGTTATTCAACTCTTTT GCCTTTCTACAGGGCCCAGAATTTT
Marker36461 GCAGCAATTAACCAGCTTTTAACATA GCAGCAATTAACCAGCTTTTAACATG GAGAGGATCAGACTTGTAACAACCATTAA
Marker104940 TGTGTGACTTCCCGTTGTGTTCT GTGTGACTTCCCGTTGTGTTCC GCTCTGAACTGGCCGTGGAGTT
Marker4315 CATCAAGAGTGGAAAAGGAGAATAGA CATCAAGAGTGGAAAAGGAGAATAGG GTTCCCTTGGTCTCGGTTTAAATTAGATT
Marker35696 CGTTAATTACATTAAACGTCTCCAAGATTA CGTTAATTACATTAAACGTCTCCAAGATTT GGGTGTGTGGTGAAACAGAAGCTTT
Marker75079 GCCAGGAATAGAACATATTTCTCATAAATAA CCAGGAATAGAACATATTTCTCATAAATAG GTCACTGTCCTCTATGATAAAACCTCAAT
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Marker70573 GGGAGCTGTGTATGAGGCCG GGGAGCTGTGTATGAGGCCA TTCAACCACAGAGTCCACTCTTATTTCTT
Marker13787 AGATCCAAAACATCAGTCAATTACATTATC AAAGATCCAAAACATCAGTCAATTACATTATT CAGCAGCGAACAGGAACAGAGGAA
Marker71805 CAGCCCAATAACACCAGGCCAT AGCCCAATAACACCAGGCCAC GACAAATCAGTTTTAGATTTGCCACAAGTT
Marker93880 AGACTACAGCCTCCTACACCCA GACTACAGCCTCCTACACCCG GTTCGTCCAATCAGGTGCAGCCAT
Gene7126-2 AGCCGCTGCCATGGGTCCA GCCGCTGCCATGGGTCCG GGWGCAAGGAGTGTGTACTCTGTTT
Gene 7255 GCCGTAATGCATGTGACTTGAAATTT GCCGTAATGCATGTGACTTGAAATTG CTGCCATCATGTATATGAGATATGAGTCTA
SNP_113351 AGATATATTCCACAGATTTAATCCTTCTG CAGATATATTCCACAGATTTAATCCTTCTA CTGACTAGAGATGGTGTATTCATTTAACTT
SNP_14483 CACCTCAATAACCACCATATAAAAAAGTTA ACCTCAATAACCACCATATAAAAAAGTTC TCATTGTGAATGGTGCCTGTTATCGTTT
SNP_14480 GTCCTAGAAAATATTTAGATCCCCCG GTCCTAGAAAATATTTAGATCCCCCA GTAATGAGACCCCACTCCCTCAAAA
SNP_8555 CAGGATGCACATCCACGGAATTG CAGGATGCACATCCACGGAATTA CTATGCGATTGGTTTTGTTGAATCAGTGTA
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SNP_23093_2 CCAGTGCTCGCAAGCCATTTCT CAGTGCTCGCAAGCCATTTCC GTATGAGGGAGCTCAATAGGAATTTCTTT
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IGF1R CAGTCTAAAATGGTTACAATTAGGCAAC CAGTCTAAAATGGTTACAATTAGGCAAG TATGGTTTATCTGCATTTATTCCAGGCTTT
IGF1_1 GAGCGCATGGCGCACAGAAG AAGAGCGCATGGCGCACAGAAA CACTGCTCGGATGAATGGGTTTTCAT
IGF2 CGGGTGAATGACGACGTGCA CGGGTGAATGACGACGTGCT GGGCGGTCACTCACCTAATATACAT
M1134 GTTGGAGTTGAGAGACAACATCTTTA GTTGGAGTTGAGAGACAACATCTTTC TGTAGTCCGTTTGTAACCTGAGTAGTATT
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M83612 TTTCTATAAGGCTTCTTGTTCCACTC TTTCTATAAGGCTTCTTGTTCCACTT TAACTGATAAATCCCGGCTTAATCCCTTA
M98079 GTTTCTATCACTTTTCTGCCATGCTT GTTTCTATCACTTTTCTGCCATGCTA CATTGGTATTTTAGTGCCCTGGGCAT
实施例二
利用实施例一所述白梭吻鲈家系鉴定用引物鉴定白梭吻鲈家系的方法，具体步骤如下：
1）常规选择雌、雄白梭吻鲈各50尾白梭吻鲈成鱼作为亲本，对亲本群体中的所有个体进行常规电子标记；亲本健康，具有常规正常的体型、体色；
2）对亲本进行雌雄甄别和配对（共50对），采用HCG进行人工催产，1尾雌鱼配1尾雄鱼，每对亲本经人工催产后分别置于不同网箱中产卵，网箱规格为2m×1m×1m，网目为80目，所有网箱均设置在同一池塘中；根据电子标记记录亲本配对情况，待仔鱼平游后取其中25对亲本的子代进行等量混合，每对亲本的子代各取约3000尾左右，然后放于同一培育池塘中进行培育，经培育7个月后，随机采样其中598尾子代，进行生长指标测量（全长、体长和体重），并采集各个子代个体DNA样本；
3）分别取亲本、子代尾鳍（50mg）剪碎，用于提取DNA；基因组DNA提取参照标准酚-氯仿抽提程序进行，1%的琼脂糖凝胶120 V电泳40 min检测DNA质量，微量分光光度计检测DNA浓度，最后加水稀释至200 ng/μl，具体操作为常规方法；
4）利用实施例一所述白梭吻鲈家系鉴定用引物（两条正向特异性引物和一条反向通用引物）进行竞争性等位基因特异性PCR反应，两条正向引物对应两种荧光信号，经过PCR反应，最终检测两种荧光信号的荧光值大小来判断样本分型情况，参见图1，以M35696分型结果为例；
PCR反应具体为常规技术，具体实验流程如下：
（1）通过 Replikator 仪器将DNA样本从 96 孔板中转移到 384 孔板，最终再转移至1536 孔板中；
（2）将装有 DNA 的 1536 孔板置于烘箱中烘干；
（3）干燥后的 1536 孔板通过 Meridian 仪器进行 PCR 体系构建，每个反应仅需 1ul反应体系；KSAP分型反应体系及反应条件如下：
Figure 136390DEST_PATH_IMAGE001
（4）将加好反应体系的孔板进行封膜，并快速进行低速离心，离心后进行水浴PCR反应；反应条件如下：
Figure 381689DEST_PATH_IMAGE002
（5）将完成反应的孔板，擦干水降温后，在酶标仪Pherastar上进行读板，两条正向引物对应两种荧光信号；根据两种荧光信号的荧光值大小得到不同分型结果，从而得到子代和亲本的基因型数据，具体为常规操作，给出附图1为参考；
5）将亲本基因分型与子代基因分型对比，符合该亲本家系基因型的SNP位点数最多的子代则判为该家系子代，完成白梭吻鲈家系的鉴定。
针对亲本基因分型对598个子代个体进行家系鉴定与筛选，成功鉴定出25个家系（亲本分属25个家系）的538个个体（表2），鉴定率达到了89.97%；其中F23号家系的子代数最多为57个，其次为F11家系的46尾和F16家系的41尾，每个家系的平均子代数为22尾。如果采用表1前30个引物组作为白梭吻鲈家系鉴定用引物，同样的方法，针对亲本基因分型对598个子代个体进行家系鉴定与筛选，成功鉴定出25个家系（亲本分属25个家系）的456个个体。
通过34个SNP分子标记建立了亲本及子代的基因型数据，成功甄别来自25个家系的538个体。25个家系子代的全长、体长和体重的平均值见表2。结合每个家系子代的生长指标，筛选到F4、F6、F7、F9、F10、F11、F25、和F30等8个生长快的家系（F8标准差过大，舍去），通过家系间LSD多重比较发现家系F10的全长、体长和体重显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）大于所有家系，所筛选到的生长快速家系亲本将用于下一年度的人工繁殖。
表2 25个白梭吻鲈家系子代生长性状相关分析
Figure 270228DEST_PATH_IMAGE004
说明本发明公开的白梭吻鲈家系鉴定用引物鉴定白梭吻鲈家系的方法科学、合理，可用于指导生产。
序列表
<110> 苏州大学
<120> 白梭吻鲈家系鉴定用引物及白梭吻鲈家系鉴定方法
<160> 102
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
caccaggtat aatatgattg aaatgtgat 29
<210> 2
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
caccaggtat aatatgattg aaatgtgac 29
<210> 3
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
tgtattcctt cttcatgcaa gccacttt 28
<210> 4
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
atttaaaacg accgttattc aactctttc 29
<210> 5
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
catatttaaa acgaccgtta ttcaactctt tt 32
<210> 6
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
gcctttctac agggcccaga atttt 25
<210> 7
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
gcagcaatta accagctttt aacata 26
<210> 8
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
gcagcaatta accagctttt aacatg 26
<210> 9
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
gagaggatca gacttgtaac aaccattaa 29
<210> 10
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
tgtgtgactt cccgttgtgt tct 23
<210> 11
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
gtgtgacttc ccgttgtgtt cc 22
<210> 12
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
gctctgaact ggccgtggag tt 22
<210> 13
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
catcaagagt ggaaaaggag aataga 26
<210> 14
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
catcaagagt ggaaaaggag aatagg 26
<210> 15
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
gttcccttgg tctcggttta aattagatt 29
<210> 16
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
cgttaattac attaaacgtc tccaagatta 30
<210> 17
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
cgttaattac attaaacgtc tccaagattt 30
<210> 18
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
gggtgtgtgg tgaaacagaa gcttt 25
<210> 19
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
gccaggaata gaacatattt ctcataaata a 31
<210> 20
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
ccaggaatag aacatatttc tcataaatag 30
<210> 21
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
gtcactgtcc tctatgataa aacctcaat 29
<210> 22
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
tccatagatg taaatatgta acatataatg ac 32
<210> 23
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
ccatagatgt aaatatgtaa catataatga t 31
<210> 24
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
caaactgcat gggaacaatg caaaatgat 29
<210> 25
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
cgtggtaata aaaaggcagg ccg 23
<210> 26
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
cgtggtaata aaaaggcagg cca 23
<210> 27
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
gaacaccctg ctgtgtgcgc aa 22
<210> 28
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
catttccgtt ttatttatct cacccctt 28
<210> 29
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
tccgttttat ttatctcacc cctc 24
<210> 30
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
ggaaagtgat tcaaaatcat tagaacgtca 30
<210> 31
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
gggagctgtg tatgaggccg 20
<210> 32
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
gggagctgtg tatgaggcca 20
<210> 33
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
ttcaaccaca gagtccactc ttatttctt 29
<210> 34
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
agatccaaaa catcagtcaa ttacattatc 30
<210> 35
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
aaagatccaa aacatcagtc aattacatta tt 32
<210> 36
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
cagcagcgaa caggaacaga ggaa 24
<210> 37
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
cagcccaata acaccaggcc at 22
<210> 38
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 38
agcccaataa caccaggcca c 21
<210> 39
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
gacaaatcag ttttagattt gccacaagtt 30
<210> 40
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 40
agactacagc ctcctacacc ca 22
<210> 41
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 41
gactacagcc tcctacaccc g 21
<210> 42
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 42
gttcgtccaa tcaggtgcag ccat 24
<210> 43
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 43
agccgctgcc atgggtcca 19
<210> 44
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 44
gccgctgcca tgggtccg 18
<210> 45
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 45
ggwgcaagga gtgtgtactc tgttt 25
<210> 46
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 46
gccgtaatgc atgtgacttg aaattt 26
<210> 47
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 47
gccgtaatgc atgtgacttg aaattg 26
<210> 48
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 48
ctgccatcat gtatatgaga tatgagtcta 30
<210> 49
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 49
agatatattc cacagattta atccttctg 29
<210> 50
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 50
cagatatatt ccacagattt aatccttcta 30
<210> 51
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 51
ctgactagag atggtgtatt catttaactt 30
<210> 52
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 52
cacctcaata accaccatat aaaaaagtta 30
<210> 53
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 53
acctcaataa ccaccatata aaaaagttc 29
<210> 54
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 54
tcattgtgaa tggtgcctgt tatcgttt 28
<210> 55
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 55
gtcctagaaa atatttagat cccccg 26
<210> 56
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 56
gtcctagaaa atatttagat ccccca 26
<210> 57
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 57
gtaatgagac cccactccct caaaa 25
<210> 58
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 58
caggatgcac atccacggaa ttg 23
<210> 59
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 59
caggatgcac atccacggaa tta 23
<210> 60
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 60
ctatgcgatt ggttttgttg aatcagtgta 30
<210> 61
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 61
ctactcctgt tccaacctgg at 22
<210> 62
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 62
ctactcctgt tccaacctgg ac 22
<210> 63
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 63
aaggcccagt ctgcatactt ccata 25
<210> 64
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 64
ccagtgctcg caagccattt ct 22
<210> 65
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 65
cagtgctcgc aagccatttc c 21
<210> 66
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 66
gtatgaggga gctcaatagg aatttcttt 29
<210> 67
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 67
atgcctgtgg ggtacatc 18
<210> 68
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 68
ctgctatgcc tgtggggtac ata 23
<210> 69
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 69
ggtgagaggt tccccagcag tt 22
<210> 70
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 70
cagtctaaaa tggttacaat taggcaac 28
<210> 71
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 71
cagtctaaaa tggttacaat taggcaag 28
<210> 72
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 72
tatggtttat ctgcatttat tccaggcttt 30
<210> 73
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 73
gagcgcatgg cgcacagaag 20
<210> 74
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 74
aagagcgcat ggcgcacaga aa 22
<210> 75
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 75
cactgctcgg atgaatgggt tttcat 26
<210> 76
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 76
cgggtgaatg acgacgtgca 20
<210> 77
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 77
cgggtgaatg acgacgtgct 20
<210> 78
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 78
gggcggtcac tcacctaata tacat 25
<210> 79
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 79
gttggagttg agagacaaca tcttta 26
<210> 80
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 80
gttggagttg agagacaaca tctttc 26
<210> 81
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 81
tgtagtccgt ttgtaacctg agtagtatt 29
<210> 82
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 82
tttaaacaat gttccactca actgcg 26
<210> 83
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 83
attttaaaca atgttccact caactgca 28
<210> 84
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 84
gctgcgcaat gaaaagcaat caatctaaa 29
<210> 85
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 85
gtgggcctgg gccaagcg 18
<210> 86
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 86
gtgggcctgg gccaagct 18
<210> 87
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 87
atgatgactg tcttgacaga tttggactt 29
<210> 88
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 88
ccttgatcgg attcaacaga cgc 23
<210> 89
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 89
ccttgatcgg attcaacaga cgt 23
<210> 90
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 90
gcttcccatc atccaggccc at 22
<210> 91
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 91
gatctgcaaa cgaccaaagt 20
<210> 92
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 92
gctgatctgc aaacgaccaa agc 23
<210> 93
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 93
gagctaaggc tgcagcgttt tcata 25
<210> 94
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 94
taattatgac tcaacagatc ggtgga 26
<210> 95
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 95
aattatgact caacagatcg gtggg 25
<210> 96
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 96
cacgggctgt aaaccatcgg aaatt 25
<210> 97
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 97
tttctataag gcttcttgtt ccactc 26
<210> 98
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 98
tttctataag gcttcttgtt ccactt 26
<210> 99
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 99
taactgataa atcccggctt aatccctta 29
<210> 100
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 100
gtttctatca cttttctgcc atgctt 26
<210> 101
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 101
gtttctatca cttttctgcc atgcta 26
<210> 102
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 102
cattggtatt ttagtgccct gggcat 26

Claims (10)

1.白梭吻鲈家系鉴定用引物，包括34个引物组，每个引物组包括两条正向引物以及一条反向引物；所述34个引物组具体如下：
位点locus Primer_AlleleFAM Primer_AlleleHEX Primer_Common Marker36755 CACCAGGTATAATATGATTGAAATGTGAT CACCAGGTATAATATGATTGAAATGTGAC TGTATTCCTTCTTCATGCAAGCCACTTT Marker161054 ATTTAAAACGACCGTTATTCAACTCTTTC CATATTTAAAACGACCGTTATTCAACTCTTTT GCCTTTCTACAGGGCCCAGAATTTT Marker36461 GCAGCAATTAACCAGCTTTTAACATA GCAGCAATTAACCAGCTTTTAACATG GAGAGGATCAGACTTGTAACAACCATTAA Marker104940 TGTGTGACTTCCCGTTGTGTTCT GTGTGACTTCCCGTTGTGTTCC GCTCTGAACTGGCCGTGGAGTT Marker4315 CATCAAGAGTGGAAAAGGAGAATAGA CATCAAGAGTGGAAAAGGAGAATAGG GTTCCCTTGGTCTCGGTTTAAATTAGATT Marker35696 CGTTAATTACATTAAACGTCTCCAAGATTA CGTTAATTACATTAAACGTCTCCAAGATTT GGGTGTGTGGTGAAACAGAAGCTTT Marker75079 GCCAGGAATAGAACATATTTCTCATAAATAA CCAGGAATAGAACATATTTCTCATAAATAG GTCACTGTCCTCTATGATAAAACCTCAAT Marker48555 TCCATAGATGTAAATATGTAACATATAATGAC CCATAGATGTAAATATGTAACATATAATGAT CAAACTGCATGGGAACAATGCAAAATGAT Marker62060 CGTGGTAATAAAAAGGCAGGCCG CGTGGTAATAAAAAGGCAGGCCA GAACACCCTGCTGTGTGCGCAA Marker20169 CATTTCCGTTTTATTTATCTCACCCCTT TCCGTTTTATTTATCTCACCCCTC GGAAAGTGATTCAAAATCATTAGAACGTCA Marker70573 GGGAGCTGTGTATGAGGCCG GGGAGCTGTGTATGAGGCCA TTCAACCACAGAGTCCACTCTTATTTCTT Marker13787 AGATCCAAAACATCAGTCAATTACATTATC AAAGATCCAAAACATCAGTCAATTACATTATT CAGCAGCGAACAGGAACAGAGGAA Marker71805 CAGCCCAATAACACCAGGCCAT AGCCCAATAACACCAGGCCAC GACAAATCAGTTTTAGATTTGCCACAAGTT Marker93880 AGACTACAGCCTCCTACACCCA GACTACAGCCTCCTACACCCG GTTCGTCCAATCAGGTGCAGCCAT Gene7126-2 AGCCGCTGCCATGGGTCCA GCCGCTGCCATGGGTCCG GGWGCAAGGAGTGTGTACTCTGTTT Gene 7255 GCCGTAATGCATGTGACTTGAAATTT GCCGTAATGCATGTGACTTGAAATTG CTGCCATCATGTATATGAGATATGAGTCTA SNP_113351 AGATATATTCCACAGATTTAATCCTTCTG CAGATATATTCCACAGATTTAATCCTTCTA CTGACTAGAGATGGTGTATTCATTTAACTT SNP_14483 CACCTCAATAACCACCATATAAAAAAGTTA ACCTCAATAACCACCATATAAAAAAGTTC TCATTGTGAATGGTGCCTGTTATCGTTT SNP_14480 GTCCTAGAAAATATTTAGATCCCCCG GTCCTAGAAAATATTTAGATCCCCCA GTAATGAGACCCCACTCCCTCAAAA SNP_8555 CAGGATGCACATCCACGGAATTG CAGGATGCACATCCACGGAATTA CTATGCGATTGGTTTTGTTGAATCAGTGTA SNP_23093_1 CTACTCCTGTTCCAACCTGGAT CTACTCCTGTTCCAACCTGGAC AAGGCCCAGTCTGCATACTTCCATA SNP_23093_2 CCAGTGCTCGCAAGCCATTTCT CAGTGCTCGCAAGCCATTTCC GTATGAGGGAGCTCAATAGGAATTTCTTT GHR ATGCCTGTGGGGTACATC CTGCTATGCCTGTGGGGTACATA GGTGAGAGGTTCCCCAGCAGTT IGF1R CAGTCTAAAATGGTTACAATTAGGCAAC CAGTCTAAAATGGTTACAATTAGGCAAG TATGGTTTATCTGCATTTATTCCAGGCTTT IGF1_1 GAGCGCATGGCGCACAGAAG AAGAGCGCATGGCGCACAGAAA CACTGCTCGGATGAATGGGTTTTCAT IGF2 CGGGTGAATGACGACGTGCA CGGGTGAATGACGACGTGCT GGGCGGTCACTCACCTAATATACAT M1134 GTTGGAGTTGAGAGACAACATCTTTA GTTGGAGTTGAGAGACAACATCTTTC TGTAGTCCGTTTGTAACCTGAGTAGTATT M35446 TTTAAACAATGTTCCACTCAACTGCG ATTTTAAACAATGTTCCACTCAACTGCA GCTGCGCAATGAAAAGCAATCAATCTAAA M41746 GTGGGCCTGGGCCAAGCG GTGGGCCTGGGCCAAGCT ATGATGACTGTCTTGACAGATTTGGACTT M45510 CCTTGATCGGATTCAACAGACGC CCTTGATCGGATTCAACAGACGT GCTTCCCATCATCCAGGCCCAT M56328 GATCTGCAAACGACCAAAGT GCTGATCTGCAAACGACCAAAGC GAGCTAAGGCTGCAGCGTTTTCATA M79524 TAATTATGACTCAACAGATCGGTGGA AATTATGACTCAACAGATCGGTGGG CACGGGCTGTAAACCATCGGAAATT M83612 TTTCTATAAGGCTTCTTGTTCCACTC TTTCTATAAGGCTTCTTGTTCCACTT TAACTGATAAATCCCGGCTTAATCCCTTA M98079 GTTTCTATCACTTTTCTGCCATGCTT GTTTCTATCACTTTTCTGCCATGCTA CATTGGTATTTTAGTGCCCTGGGCAT
。
2.权利要求1所述白梭吻鲈家系鉴定用引物在白梭吻鲈家系鉴定或者白梭吻鲈家系筛选中的应用。
3.权利要求1所述白梭吻鲈家系鉴定用引物在白梭吻鲈家系筛选中的应用。
4.利用权利要求1所述白梭吻鲈家系鉴定用引物鉴定白梭吻鲈家系的方法，包括以下步骤：
（1）对每尾白梭吻鲈成鱼亲本植入电子标记；按雌雄数量比1∶1对植入电子标记的白梭吻鲈成鱼亲本进行配对，得到雌雄亲本对；然后每对雌雄亲本对经人工催产后产卵，待仔鱼平游后得到每对雌雄亲本对所对应的鱼苗，即获得一个家系；
（2）采集每尾白梭吻鲈成鱼亲本的DNA；分别以每尾亲本的DNA为模板，利用所述白梭吻鲈家系鉴定用引物进行PCR反应，然后对PCR产物进行凝胶电泳，根据荧光值得到每尾亲本对应的基因分型；
（3）取每个家系等量的鱼苗，混合后于一个培育池塘中进行培育；然后采集培育的每尾子代的DNA、表型数据；分别以每尾子代的DNA为模板，利用所述白梭吻鲈家系鉴定用引物进行PCR反应，然后对PCR产物进行凝胶电泳，根据荧光值得到每尾子代对应的基因分型；
（4）比较每尾亲本对应的基因分型与每尾子代对应的基因分型，确定子代所属家系，完成白梭吻鲈家系的鉴定。
5.利用权利要求1所述白梭吻鲈家系鉴定用引物筛选白梭吻鲈家系的方法，包括以下步骤：
（1）对每尾白梭吻鲈亲本植入电子标记；按雌雄数量比1∶1对植入电子标记的白梭吻鲈亲本进行配对；然后每对雌雄亲本对经人工催产后产卵，待仔鱼平游得到每对雌雄亲本对对应的鱼苗，即获得1个家系；
（2）取每个家系等量的鱼苗，混合后于一个培育池塘中进行培育；然后采集培育的每尾子代的DNA、表型数据；分别以每尾子代的DNA为模板，利用所述白梭吻鲈家系鉴定用引物进行PCR反应，然后对PCR产物进行凝胶电泳，根据荧光值得到每尾子代对应的基因分型；
（3）采集每尾亲本的DNA；分别以每尾亲本的DNA为模板，利用所述白梭吻鲈家系鉴定用引物进行PCR反应，然后对PCR产物进行凝胶电泳，根据荧光值得到每尾亲本对应的基因分型；比较每尾亲本对应的基因分型与每尾子代对应的基因分型，确定家系，完成白梭吻鲈家系的鉴定；根据各家系子代的表型数据，确定生长快速的家系，结合亲本的电子标记信息，筛选出生长快速家系的亲本。
6.根据权利要求4或者5所述的方法，其特征在于，采集鳍条边缘用于提取每尾亲本的DNA。
7.根据权利要求4或者5所述的方法，其特征在于，每对雌雄亲本对经人工催产后分别置于不同网箱中产卵。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，网箱的网目为70～90目。
9.根据权利要求4或者5所述的方法，其特征在于，表型数据包括全长、体长、体重。
10.根据权利要求4或者5所述的方法，其特征在于，7个月后采集培育的每尾子代的DNA、表型数据。
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