CN111593096B - 一种海水中海地瓜幼体生物量的检测统计方法 - Google Patents
一种海水中海地瓜幼体生物量的检测统计方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111593096B CN111593096B CN202010370366.3A CN202010370366A CN111593096B CN 111593096 B CN111593096 B CN 111593096B CN 202010370366 A CN202010370366 A CN 202010370366A CN 111593096 B CN111593096 B CN 111593096B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dna
- value
- sea cucumber
- sea
- biomass
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 title claims abstract description 22
- 244000017020 Ipomoea batatas Species 0.000 title claims abstract description 18
- 235000002678 Ipomoea batatas Nutrition 0.000 title claims abstract description 18
- 239000013535 sea water Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 13
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 claims abstract description 17
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 claims description 3
- 241000251511 Holothuroidea Species 0.000 abstract description 44
- 101100329008 Artemia franciscana COI gene Proteins 0.000 abstract description 18
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 10
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 abstract description 4
- 238000012113 quantitative test Methods 0.000 abstract description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 45
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 45
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 34
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 21
- 241001560086 Pachyrhizus Species 0.000 description 14
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 9
- 241000145256 Acaudina molpadioides Species 0.000 description 8
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 6
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 6
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 4
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 241000145248 Acaudina Species 0.000 description 3
- 241000965254 Apostichopus japonicus Species 0.000 description 3
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 241000456520 Acaudina leucoprocta Species 0.000 description 1
- 244000205754 Colocasia esculenta Species 0.000 description 1
- 235000006481 Colocasia esculenta Nutrition 0.000 description 1
- 241000504965 Echinoderma Species 0.000 description 1
- 241000258955 Echinodermata Species 0.000 description 1
- 240000002072 Solanum torvum Species 0.000 description 1
- 235000013358 Solanum torvum Nutrition 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6851—Quantitative amplification
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
海水中海地瓜幼体生物量的检测统计方法包括：提取海地瓜成体DNA，测序得到COⅠ基因序列；以PCR产物为起始标准品制作4个浓度梯度的标准品；设计荧光定量PCR特异性引物并验证，通过后得到CT值‑DNA浓度对数值的标准曲线；取不同干重海地瓜组织提取DNA，以不同干重的海地瓜组织的DNA为模板进行荧光定量PCR定量测试，得到DNA质量与海地瓜组织干重的趋势直线方程；测出待测海水样品中DNA的CT值，将CT值带入海地瓜组织干重‑CT值推导关系式得到海地瓜幼体DNA的浓度值，计算得到所含海地瓜幼体的DNA质量；通过干湿重比例及推导关系式计算出海地瓜幼体的湿重。
Description
技术领域
本发明属于浮游生物的生物量统计领域，尤其涉及一种核电站海水域海地瓜幼体生物量的统计方法。
背景技术
海地瓜(Acaudina spp)，隶属棘皮动物门(Echinodermata)，海参纲(Holothuroidea)，海参亚纲，芋参目(Molpadida)，尻参科(Caudinidae)，海地瓜属(Acaudina)。该属有两个种——白肛海地瓜(Acaudina leucoprocta H.L.Clark)和海地瓜(Acaudina molpadioidea Semper)。俗称海茄子，盛产于亚热带沙质海区，日本、菲律宾、印度尼西亚，我国海南、广东、福建、浙江沿海均有。目前对于海地瓜的研究主要集中在海地瓜的营养价值、药用价值以及生理功能方面，对海地瓜的生物量统计的报道较少，唐娅菲等研究表明海地瓜在核电站附近海域能够引起核电站发生堵塞取水系统从而影响取水安全的事件，对核电站的运行安全存在一定的威胁作用。针对核电站运行而言，海地瓜是一种致灾生物，因此对其生物量的估算可以有效的采取措施控制海地瓜的数量，从而保障核电站的健康运行。
目前浮游生物的估算方法主要有：血球计数法、分光光度计法、干重测量法、流式细胞法等。目前对浮游生物的生物量统计主要是针对某一类，按直径大小，还比较缺少针对海域某一种浮游生物的生物量的估算方法。
发明内容
本发明针对现有技术存在的问题和不足，提供一种海水中海地瓜幼体生物量的检测统计方法，解决了针对某一海域中海地瓜幼体生物量的估算难题，能够较为快速、准确的估算出某一海域海地瓜幼体的生物量，同时也能为其他水生生物幼体的估算提供参考。
本发明是通过下述技术方案来解决上述技术问题的：
本发明提供一种海水中海地瓜幼体生物量的检测统计方法，其特点在于，其包括以下步骤：
S1、使用《海洋动物基因组DNA提取试剂盒》提取海地瓜成体DNA，设计海地瓜成体DNA中COⅠ基因的引物，使用COⅠ基因的引物进行PCR扩增，测序得到COⅠ基因序列，将COⅠ基因序列进行Blast比对，鉴定出该COⅠ基因序列为海地瓜的COⅠ基因序列；
其中，COⅠ基因的引物序列为：
上游序列：GACATGGCTTTCCCACGAATG
下游序列：GCTCGTGTGTCTACGTCCA
PCR扩增时，其退火温度为53℃；
S2、以步骤S1得到的PCR产物为起始标准品，制作4个浓度梯度10-2、10-3、10-4、10-5的标准品；
S3、根据测序得到的海地瓜COⅠ基因序列，设计荧光定量PCR特异性引物，并验证引物特异性，验证通过后，再通过荧光定量PCR绝对定量得到CT值-DNA浓度对数值的标准曲线及对应的直线方程；
荧光定量PCR特异性引物序列为：
上游序列：GAGGTGTGGGTACAGGATGA
下游序列：CTTAGTAAGAGGAGGAAGGCGG
PCR扩增时，其退火温度为：60℃；
S4、取不同干重的海地瓜组织并提取DNA，并以不同干重的海地瓜组织所对应的DNA为模板进行荧光定量PCR定量测试，根据步骤S3的标准曲线得到不同干重的海地瓜组织的DNA所对应的浓度值，进而得到DNA质量与海地瓜组织干重的标准曲线及对应的直线方程；
S5、联立步骤S3中的CT值-DNA浓度对数值的直线方程和步骤S4中的DNA质量与海地瓜组织干重的趋势直线方程，以得到海地瓜组织干重与CT值之间的推导关系式，通过荧光定量PCR测出待测海水样品中DNA的CT值，并将CT值带入推导关系式计算可得到待测海水样品中海地瓜幼体DNA的浓度值，根据待测海水样品中DNA体积，计算得到待测海水样品中所含海地瓜幼体的DNA质量；
S6、通过待测海水样品中海地瓜幼体的干湿重比例以及推导关系式计算得到海地瓜幼体的湿重。
较佳地，步骤S3中，CT值-DNA浓度对数值的标准曲线的直线方程为：y＝-3.956x+13.139。
较佳地，步骤S4中，海地瓜组织的不同干重分别为：10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、90mg、120mg。
较佳地，步骤S4中，DNA质量与海地瓜组织干重的标准曲线的直线方程式为：y＝0.2266x。
较佳地，步骤S5中，海地瓜组织干重与CT值之间的推导关系式为： 表示海地瓜测试干重；n标表示标准品浓度；CT测表示测试水样得到的CT值；V测表示水样DNA模板体积；n测表示水样测试得到的目标DNA浓度；n标+测表示标准品与水样混合后的测试浓度。
较佳地，步骤S6中，干湿重比例为：26.2％。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明的积极进步效果在于：
本发明提供一种快速检测海水水域中海地瓜的生物量，通过测试可以估算出海地瓜生物量的暴发时期，从而为采取预防措施提供一定的时间准备，达到对海地瓜生物量的暴发预警和致灾管控。
本发明通过从核电站海域的水样中提取DNA，设计特异性引物进行荧光定量PCR实验得到CT值，并将测试得到的CT值直接带入推导公式可以直接较为准确、高效、快速地估算出某一海域中幼体海地瓜的生物量，从而克服了传统估算方法的高工作量和高误差的弊端，大幅度的减少时间、物质成本，降低工作量，能够预测核电站海域中海地瓜生物量的暴发阈值和暴发时期，为核电站海域中海地瓜生物量的管控提供一定的预警和防范措施准备和其他海洋生物幼体的生物量估算提供一定的技术参考，具有良好的应用前景。
附图说明
图1为本发明较佳实施例的验证引物特异性的示意图，其中a：其他物种DNA混合物；b：其他物种DNA混合物+海地瓜DNA模板；c：海地瓜DNA模板；d：水样环境DNA。
图2为本发明较佳实施例的熔解曲线的示意图。
图3为本发明较佳实施例的CT值-DNA浓度对数值的标准曲线示意图。
图4为本发明较佳实施例的DNA质量与海地瓜组织干重的标准曲线示意图。
图5为本发明较佳实施例的测试水样扩增曲线示意图。
图6为本发明较佳实施例的测试水样+目标DNA扩增曲线示意图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本实施例提供一种海水中海地瓜幼体生物量的检测统计方法，其包括以下步骤：
S1、使用《海洋动物基因组DNA提取试剂盒》提取海地瓜成体DNA，设计海地瓜成体DNA中COⅠ基因的引物，使用COⅠ基因的引物进行PCR(聚合酶链式反应)扩增，PCR扩增时，其退火温度为53℃，测序得到COⅠ基因序列，将COⅠ基因序列进行Blast比对，鉴定出该COⅠ基因序列为海地瓜的COⅠ基因序列。
其中，COⅠ基因的引物序列及PCR配制分别为表1-1、表1-2：
表1-1海地瓜COⅠ基因PCR引物
表1-2普通PCR配制25μL体系
S2、以步骤S1得到的PCR产物，并以纯化海地瓜成体DNA为起始标准品，制作4个浓度梯度10-2、10-3、10-4、10-5的标准品。
S3、根据测序得到的海地瓜COⅠ基因序列，设计荧光定量PCR特异性引物，并验证引物特异性(如图1、图2)，PCR扩增时，其退火温度为：60℃，验证通过后，再通过荧光定量PCR绝对定量得到CT值-DNA浓度对数值的标准曲线及对应的直线方程：y＝-3.956x+13.139，标准曲线如图3。
荧光定量PCR特异性引物序列及反应体系分别为表2-1、表2-2：
表2-1海地瓜荧光定量PCR特异性引物
表2-2荧光定量PCR反应体系
S4、取不同干重的海地瓜组织并提取DNA，并以不同干重的海地瓜组织所对应的DNA为模板进行荧光定量PCR定量测试，根据步骤S3的标准曲线得到不同干重的海地瓜组织的DNA所对应的浓度值，进而得到DNA质量(μg)与海地瓜组织干重(mg)的标准曲线及对应的直线方程：y＝0.2266x，标准曲线如图4。
其中，海地瓜组织的不同干重分别为：10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、90mg、120mg。
S5、联立步骤S3中的CT值-DNA浓度对数值的直线方程和步骤S4中的DNA质量与海地瓜组织干重的趋势直线方程，以得到海地瓜组织干重与CT值之间的推导关系式，通过荧光定量PCR测出待测海水样品中DNA的CT值，并将CT值带入推导关系式计算可得到待测海水样品中海地瓜幼体DNA的浓度值，根据待测海水样品中DNA体积，计算得到待测海水样品中所含海地瓜幼体的DNA质量(μg)。
其中，海地瓜组织干重与CT值之间的推导关系式为：
N测表示海地瓜测试干重；n标表示标准品浓度；CT测表示测试水样得到的CT值；V测表示水样DNA模板体积；n测表示水样测试得到的目标DNA浓度；n标+测表示标准品与水样混合后的测试浓度。
S6、通过待测海水样品中海地瓜幼体的干湿重比例(26.2％)以及推导关系式计算得到海地瓜幼体的湿重。
以福建晴川湾海域为例，取水样，使用《海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒-离心柱型》，提取DNA，置于-20℃保存。然后进行荧光定量PCR实验，体系参照表2-2，结果如图5，CT值为23.505，分别代入公式 得：n测＝1.781*10-1ng/μL，N测＝1.572*10-3mg。
验证方法：在测试水样DNA的模板中加入等体积的标准品，观察CT值变化情况，并根据以上公式 进行计算验证。(其中N测试：水样中海地瓜干重；n标+测；加入标准品后的混合浓度；CT测：水样测试CT值；CT标+测：水样DNA与标准品混合后为模板测试所对应的CT值；V测：测试水样DNA模板体积为2μL)
加入等体积的标准品后，CT值变化情况如图6，水样与标准品混合后的扩增图谱(CT值：21.040)、水样扩增图谱(CT值：23.505)，则ΔCT验证＝23.505–21.040＝2.465。故：n测/n测+标＝10ΔCT/-3.956*1，代入得：n测＝10.0444ng/μL，N测＝8.865*10-2mg。则误差为ΔN/N*100％＝55.393(ΔN为验证得到的水样目标DNA浓度值与实际测得的水样目标DNA浓度值的差值)即：约为55.393％。
虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是本领域的技术人员应当理解，这些仅是举例说明，本发明的保护范围是由所附权利要求书限定的。本领域的技术人员在不背离本发明的原理和实质的前提下，可以对这些实施方式做出多种变更或修改，但这些变更和修改均落入本发明的保护范围。
Claims (1)
1.一种用于福建省晴川湾海域海水中海地瓜幼体生物量检测统计的荧光定量PCR特异性引物，其特征在于，所述引物为：
上游引物：GAGGTGTGGGTACAGGATGA；
下游引物：CTTAGTAAGAGGAGGAAGGCGG。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010370366.3A CN111593096B (zh) | 2020-05-06 | 2020-05-06 | 一种海水中海地瓜幼体生物量的检测统计方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010370366.3A CN111593096B (zh) | 2020-05-06 | 2020-05-06 | 一种海水中海地瓜幼体生物量的检测统计方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111593096A CN111593096A (zh) | 2020-08-28 |
| CN111593096B true CN111593096B (zh) | 2024-04-02 |
Family
ID=72189674
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010370366.3A Active CN111593096B (zh) | 2020-05-06 | 2020-05-06 | 一种海水中海地瓜幼体生物量的检测统计方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111593096B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103014175A (zh) * | 2013-01-22 | 2013-04-03 | 中国海洋大学 | 一种鉴定七种海参种类的pcr-rflp方法 |
| CN108486227A (zh) * | 2018-05-24 | 2018-09-04 | 广东省生物资源应用研究所 | 基于环境dna技术对红耳龟生物量评估的引物及其方法 |
-
2020
- 2020-05-06 CN CN202010370366.3A patent/CN111593096B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103014175A (zh) * | 2013-01-22 | 2013-04-03 | 中国海洋大学 | 一种鉴定七种海参种类的pcr-rflp方法 |
| CN108486227A (zh) * | 2018-05-24 | 2018-09-04 | 广东省生物资源应用研究所 | 基于环境dna技术对红耳龟生物量评估的引物及其方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Jason R. Doyle等.Quantifying larvae of the coralivorous seastar Acanthaster cf. solaris on the Great Barrier Reef using qPCR.Mar Biol.2017,第1-10页. * |
| 孙晶莹等.环境DNA(eDNA)宏条形码技术对枝角类浮游动物物种鉴定及其生物量监测研究.生态毒理学报.2018,13(05),第76-86. * |
| 李慧等.海地瓜的分子分类学研究.水产科学.2009,28(12),第733-736页. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111593096A (zh) | 2020-08-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Coyne et al. | Improved quantitative real‐time PCR assays for enumeration of harmful algal species in field samples using an exogenous DNA reference standard | |
| Grisolia et al. | Variability in micronucleus induction with different mutagens applied to several species of fish | |
| Spies et al. | DNA‐based identification of Alaska skates (Amblyraja, Bathyraja and Raja: Rajidae) using cytochrome c oxidase subunit I (coI) variation | |
| CN103045723B (zh) | 一种检测活动性肺结核病的试剂盒 | |
| Baker-Austin et al. | pilF polymorphism-based real-time PCR to distinguish Vibrio vulnificus strains of human health relevance | |
| CN106676189A (zh) | 一种基于微滴式数字pcr的牛、猪源性成分定量检测方法、引物和探针及试剂盒 | |
| CN107541566A (zh) | 哺乳纲和鸟纲动物源性成分的检测方法及试剂盒 | |
| CN108118087A (zh) | 一种用于检测松材线虫的等温扩增试剂盒及其检测方法 | |
| CN111593096B (zh) | 一种海水中海地瓜幼体生物量的检测统计方法 | |
| CN105316418A (zh) | 用于检测肉制品中鸭源性成分的特异性引物、探针、试剂盒及其检测方法 | |
| Funk et al. | Development and validation of an RNA-and DNA-based quantitative PCR assay for determination of Kudoa thyrsites infection levels in Atlantic salmon Salmo salar | |
| CN104109711B (zh) | 一种用于检测腐败酵母菌核苷酸片段的引物、探针及检测方法和试剂盒 | |
| Almashhadany et al. | Determination of heavy metals and selenium contents in fish meat sold at Erbil City, Kurdistan Region, Iraq | |
| Tucker | Pigment extraction as a method of quantitative analysis of phytoplankton | |
| CN106048038A (zh) | 一种基于线粒体dna序列的中国大鲵群体划分方法 | |
| Kršinić et al. | Spatial distribution of copepod abundance in the epipelagic layer of the south Adriatic Sea | |
| CN103014164B (zh) | 贝类包拉米虫和派琴虫的二重荧光定量rt-pcr检测试剂盒 | |
| Dhinakaran et al. | Assessment of morphometric and genetic variation in three freshwater fish species of the genus Garra (Osteichthyes: Cyprinidae) | |
| Mackie et al. | Experimental parameters affecting quantitative PCR of Artemia franciscana: a model for a marine zooplanktonic target in natural plankton samples | |
| Guo et al. | A quantitative polymerase chain reaction assay for the enumeration of brown tide algae Aureococcus anophagefferens in coastal waters of Qinhuangdao | |
| CN111926090A (zh) | 用于检测淡水环境中沼蛤的特异性引物、探针及试剂盒 | |
| CN106834451A (zh) | 基于金钱鱼卵黄蛋白原基因在水域环境激素检测的应用 | |
| CN114350823B (zh) | 一种快速检测三疣梭子蟹资源量动态变化的方法 | |
| CN112210609A (zh) | 鉴定河鲀鱼的实时荧光pcr引物、探针、试剂盒、方法及在烤鱼片中的应用 | |
| Sivaganensan et al. | Comparison of Enterococcus quantitative polymerase chain reaction analysis results from fresh and marine waters on two real-time instruments |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |