CN111568892A

CN111568892A - Aitc的用途

Info

Publication number: CN111568892A
Application number: CN202010454911.7A
Authority: CN
Inventors: 徐迅迪
Original assignee: Second Xiangya Hospital of Central South University
Current assignee: Second Xiangya Hospital of Central South University
Priority date: 2020-05-26
Filing date: 2020-05-26
Publication date: 2020-08-25
Also published as: WO2021237879A1

Abstract

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及AITC的用途。本发明通过实验证明，AITC能够显著降低荷瘤小鼠的肿瘤体积、抑制肿瘤细胞的增殖，对癌症的治疗存在积极意义。因此，本发明提供了AITC在制备治疗抗肿瘤的药物中的应用，并提供了一种含有AITC的抗肿瘤药物。具体的，提供了AITC在制备治疗肝癌的药物中的应用。研究表明，对于荷瘤动物而言，AITC干预的皮下瘤体积明显小于NC组，差异有统计学意义(p＜0.01)。

Description

AITC的用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及AITC的用途。

背景技术

癌症是恶性肿瘤的统称。特点为不正常细胞失控分裂、无限增殖、侵入并破坏周围正常组织。按其组织来源可分为癌、肉瘤、母细胞瘤、恶性瘤等。来自上皮组织的称做癌；起源于脂肪组织、纤维组织、肌肉组织(统称间叶组织)及淋巴网状组织的称为肉瘤；来源于胚胎组织的称母细胞瘤；不宜用以上名称的叫恶性瘤，如恶性神经鞘瘤；还有些特殊称呼的癌症，如血液细胞的恶性肿瘤也称做白血病。癌症细胞经血液和淋巴液转移，也可直接蔓延。癌症的病因复杂，主要诱发因素有化学致癌物、特殊的病毒、射线、激素、自由基等；遗传、饮食、心理状态是重要的促进因素。

原发性肝癌在世界卫生组织公布的恶性肿瘤排名前十，在癌致死疾病中高居第三位。每年新发肝癌病例数超过70万，且其发病率及死亡率呈现上升趋势。肝癌治疗的秉承综合治疗的基本原则，其包括肝切除术、肝移植手术的外科手术，射频消融、微波治疗及经动脉化学栓塞治疗的介入治疗等。一些靶向药物也应用于临床，如索拉菲尼等。尽管相关的诊治取得了很大的进步，但是由于复发率及转移率非常高，使它仍是一种高致死性疾病。新肝癌治疗药物的发现有望为肝癌的治疗提供新的途径和手段。

异硫氰酸烯丙酯，(Allyl isothiocyanate)，别名AITC，CAS NO.57-06-7，其结构式：

AITC为TRPA1离子通道的激动剂，瞬时受体电位(TRP)通道是细胞膜上一类重要的阳离子通道超家族。TRP通道分布广泛，具有不同的调节机制。通过感知各种内外刺激细胞，它们参与许多生命活动如痛觉、味觉、机械的感觉，维持细胞的内部和外部环境的离子动态平衡，调节肌肉收缩的功能，细胞增殖，细胞分化，基因转录，细胞凋亡和细胞死亡等。TRPA1是TRP家族中的一员，其特点是其N端存在14个以上与锚蛋白结合的重复序列，而其他成员含有3至4个锚蛋白结合重复序列。TRPA1主要分布于背根神经、三叉神经和迷走神经的初级感觉神经元上。但TRPA1在原发性肝细胞癌中的作用尚无人研究。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供AITC的用途，研究表明，AITC能够降低荷瘤小鼠的肿瘤体积、抑制肿瘤细胞的增殖，对癌症的治疗存在积极意义。

本发明提供了AITC或其类似物在制备抑制肿瘤细胞增殖的药物中的应用。

在本发明实施例中，所述抑制肿瘤细胞增殖包括：抑制细胞数量的增加和/或抑制克隆的形成。

本发明还提供了AITC或其类似物在制备抑制肿瘤体积增长的药物中的应用。

本发明还提供了AITC或其类似物在制备治疗肿瘤的药物中的应用。

一些实施例中，所述肿瘤为恶性肿瘤，选自癌、肉瘤和/或母细胞瘤。

一些实施例中，所述肿瘤发生的部位包括头颈部、脑部、甲状腺、食管、胰腺、肝脏、胃、肾脏、胆囊、结肠、直肠、卵巢、子宫颈、子宫、前列腺、膀胱、睾丸中的一种或多种。

一些具体实施例中，所述肿瘤为肝癌。

一些具体实施例中，所述肝癌为肝细胞肝癌或肝母细胞瘤。

在具体实施例中，以Huh7细胞验证AITC对肝细胞肝癌的治疗作用。以HepG2细胞验证AITC对肝母细胞瘤的治疗作用。

在本发明中，对于细胞实验，AITC或其类似物的处理浓度为50μmol/L～100μmol/L。对于动物实验，Pyr3或其类似物的剂量为5mg/kg·d^-1。给予方式为腹腔注射，注射的溶剂为DMSO。

本发明还提供了一种治疗肿瘤的药物，其包括AITC或其类似物。

本发明所述的药物中，还包括药学上可接受的辅料。

本发明所述的药物中，还可以包括其他具有抗肿瘤功能的药物。

在本发明提供的一些实施例中，药学上可接受的辅料为矫味剂、渗透压调节剂、填充剂、润滑剂、防腐剂、助悬剂、食用色素、稀释剂、乳化剂、崩解剂或增塑剂中的一种或两者以上的混合物。

作为优选，所述药物为口服制剂或注射用剂。其中口服制剂的剂型为片剂、丸剂、口服液剂、胶囊剂、糖浆剂、滴丸剂或颗粒剂。优选的，胶囊剂为硬胶囊剂或软胶囊剂。片剂为口服片剂或口腔片剂。所述口服片剂指供口服的片剂，多数此类片剂中的药物是经胃肠道吸收而发挥作用，也有的片剂中的药物是在胃肠道局部发挥作用。在本发明提供的一些实施例中，口服片剂为普通压制片、分散片、泡腾片、咀嚼片、包衣片或缓控释片。所述注射用剂包括注射粉针剂或注射液。

本发明还提供了一种治疗肿瘤的方法，其包括给予AITC或其类似物。

本发明中，所述AITC的类似物为AITC的可药用的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体或包合物。

本发明所述的药物可在联合治疗中使用，即与一种或多种其它药剂联合应用，其中所述联合应用包括AITC与其它药剂一起施用，或者依次施用。例如，所述其它药剂可在施用AITC或其类似物之前、期间或之后施用。施用的方式可相同也可不同，例如AITC与其它药剂可皆以注射形式给予，也可皆通过口服形式给予，也可一者通过注射形式给予另一者通过口服形式给予。

本发明通过实验证明，AITC能够显著降低荷瘤小鼠的肿瘤体积、抑制肿瘤细胞的增殖，对癌症的治疗存在积极意义。因此，本发明提供了AITC在制备治疗抗肿瘤的药物中的应用，并提供了一种含有AITC的抗肿瘤药物。具体的，提供了AITC在制备治疗肝癌的药物中的应用。研究表明，对于荷瘤动物而言，AITC干预的皮下瘤体积明显小于NC组，差异有统计学意义(p＜0.01)。

附图说明

图1示平板克隆实验结果；其中，A示各组HepG2细胞的克隆形成情况；B示各组HepG2细胞的克隆形成率；C示各组Huh7细胞的克隆形成情况；D示各组Huh7细胞的克隆形成率；

图2示AITC干预肝癌细胞的增殖能力，其中A示AITC干预HepG2细胞；B示AITC干预Huh7细胞；

图3示小鼠皮下瘤实验结果，其中，A示两组小鼠的形态，上面4只为对照组小鼠，下面四只为AITC受试小鼠；B示对照组组(上)和给予AITC干预(下)的瘤体；C示以时间为横坐标两组小鼠瘤体积变化的曲线。

具体实施方式

本发明提供了AITC的用途，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。

雌性四周龄NOD/SCID(非肥胖型糖尿病/重症联合免疫缺陷小鼠)，购自于北京维通利华公司，所有小鼠均喂养在中南大学湘雅二医院实验动物中心SPF级别小鼠饲养间内，环境温度稳定于18～22℃之间，湿度控制在50％～60％之间。NOD/SCID小鼠喂养于无毒无特异病原体的塑料鼠盒内，用标准颗粒饲料以及纯净水饲养并保持其昼夜12小时节律，所需环境都满足国家实验动物管理和使用指南要求，所有操作都得到中南大学湘雅二医院动物伦理委员会批准及监督；

肝癌细胞株HepG2，Huh7购自中国科学院上海生命科学院细胞库；

TRPA1激动剂AITC：异硫氰酸烯丙酯(货号：36682)购自Sigma公司，；

DMSO，购自Sigma公司；V900090-500ML；纯度99％；

游标卡尺，广陆量具厂生产，0-150mm电子数显；

Varioskan Flash多功能酶标仪，Thermo。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1平板细胞克隆形成实验

I.克隆形成率试验

1、第1天分别取对数生长期的HepG2、Huh7肝癌细胞，用0.25％胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，完成细胞计数；

2、将细胞悬液于10％胎牛血清的DMEM完全培养基中混匀，调整细胞密度，将每组细胞分别以每孔2ml培养基、1500个细胞/孔密度分别接种于6孔板中，并轻轻转动，使细胞分散均匀，置于含5％CO₂的37℃培养箱中培养过夜；

3、第2上午根据实验设计用含10％胎牛血清的DMEM完全培养基配制所需不同浓度梯度的药物，每组浓度3个复孔，激动剂AITC浓度分别50μM、100μM。轻柔地将6孔板上层培养基吸出，加入相应浓度药物，置于37℃，5％CO₂及饱和湿度的细胞培养箱中培养1～2周；

4、经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次，加4％多聚甲醛2mL固定细胞15分钟。然后去固定液，加适量0.5％结晶紫染色液染10～15分钟，然后用清水缓慢洗去染色液，空气干燥，计数拍照。

5、将6孔板底部叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数克隆，计数大于50个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。

克隆形成率＝(克隆数/接种细胞数)×100％

结果如图1。图1中A、B显示，相比于对照组，AITC可以显著抑制HepG2肝癌细胞的克隆形成率，其中P＜0.01。图1中C、D，AITC可以显著抑制Huh7肝癌细胞的克隆形成率，其中P＜0.01。

实施例2：MTT实验

肝癌细胞HepG2和Huh7以5×10³细胞/孔种板于96孔板,用不同浓度的AITC干预24、48、72h。接下来,20μLMTT添加到每个孔,继续孵育4h后置换成150μLDMSO，振荡10分钟。以490nm波长进行吸光度测量。

如图2A、2B所示，分别以50uM和100uM的AITC干预肝癌细胞HepG2和Huh7，肝癌细胞的增殖能力与对照组比较明显降低，差异有统计学意义(**代表P＜0.001，***代表P＜0.0001)。

实施例3皮下瘤模型试验

将5×10⁶个肝癌细胞株HepG2细胞分别注射至NOD/SCID(共8只)的右侧颈背部，按照所述标准进行饲养。游标卡尺分别测量皮下肿瘤的长短径，以公式1/2×长度×宽度²确定肿瘤大小，当肿瘤形成至体积约100mm³时将小鼠随机分为对照组和治疗干预组，每组各4只。

治疗干预组：

将50mg AITC溶解于50mL DMSO中,以形成注射药物，浓度为1μg/μL，用该组小鼠进行腹腔内注射，剂量为5mg/(kg体重)，1次/天。

对照组：

于腹腔内注射DMSO溶剂，剂量5μl/(kg体重)，1次/天。

肿瘤大小以体积＝1/2×长度×宽度²检测。在第32天将小鼠处死，比较生存率和肿瘤体积大小。

结果如图3：如图可见，相对于对照组而言，AITC干预可以显著抑制皮下瘤生长，P＜0.01。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.AITC或其类似物在制备抑制肿瘤细胞增殖的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抑制肿瘤细胞增殖包括：抑制细胞数量的增加和/或抑制克隆的形成。

3.AITC或其类似物在制备抑制肿瘤体积增长的药物中的应用。

4.AITC或其类似物在制备治疗肿瘤的药物中的应用。

5.根据权利要求1～4任一项所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为恶性肿瘤，选自癌、肉瘤和/或母细胞瘤。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述肿瘤发生的部位包括头颈部、脑部、甲状腺、食管、胰腺、肝脏、胃、肾脏、胆囊、结肠、直肠、卵巢、子宫颈、子宫、前列腺、膀胱、睾丸中的一种或多种。

7.根据权利要求1～7任一项所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为肝癌。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述肝癌为肝细胞肝癌或肝母细胞瘤。

9.根据权利要求1～8任一项所述的应用，其特征在于，AITC或其类似物的剂量为5mg/kg·d^-1。

10.一种治疗肿瘤的药物，其特征在于，包括AITC或其类似物。