CN111565749A - 治疗方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及治疗受试者的淋巴瘤的方法，并且更具体地涉及用于治疗霍奇金淋巴瘤(HL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)的方法。该方法包括向受试者施用有效量的CD83结合蛋白。本发明还涉及用于对受试者的淋巴瘤进行诊断和评估的方法。

Description

治疗方法
本申请要求澳大利亚临时申请No.2017903726的优先权，该申请的全部内容通过参引并入本文。
技术领域
本发明涉及用于治疗受试者的淋巴瘤的方法，并且更具体地涉及用于治疗霍奇金淋巴瘤(HL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)比如弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)和套细胞淋巴瘤(MCL)的方法。
背景技术
淋巴瘤是从淋巴细胞发展而来的一组血细胞肿瘤。淋巴瘤的两个主要类别是HL和NHL。
HL是由霍奇金和里德-斯特恩伯格细胞(HRS)引起的血液恶性肿瘤。NHL包括除HL外的所有淋巴瘤。当前，患有HL的患者用多制剂化学疗法和放射疗法进行治疗。尽管当前针对HL的疗法具有显著的成功率，但是当25％的患者对原发性化疗或继发性化疗变得难治时，这些患者就会经历疾病复发，并且存活率基本上保持较低，尤其是不能忍受这种疗法的老年患者尤为如此。针对NHL的疗法的成功率比针对HL的疗法的成功率低。每2例患有NHL的患者中就有近1例将患有DLBCL形式的淋巴瘤，另外5％-10％的患者将患有MCL。
仍需要新的靶向疗法来治疗淋巴瘤，特别是针对风险特征较差的患者尤为如此。
发明内容
本发明的第一方面提供了一种治疗受试者的淋巴瘤的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的CD83结合蛋白。
本发明的替代性第一方面提供了CD83结合蛋白在制备用于治疗受试者的淋巴瘤的药物中的用途，或者CD83结合蛋白在用于治疗或预防受试者的淋巴瘤中的用途。
本发明的第二方面提供了一种治疗受试者的HL的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的CD83结合蛋白。
本发明的替代性第二方面提供了CD83结合蛋白在制备用于治疗受试者的HL的药物中的用途，或者CD83结合蛋白在用于治疗受试者的HL中的用途。
本发明的第三方面提供了一种治疗受试者的NHL的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的CD83结合蛋白。
本发明的替代性第三方面提供了CD83结合蛋白在制备用于治疗受试者的NHL的药物中的用途，或者CD83结合蛋白在用于治疗受试者的NHL中的用途。
第四方面提供了一种治疗受试者的套细胞淋巴瘤(MCL)的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的CD83结合蛋白。
替代性第四方面提供了CD83结合蛋白在制备用于治疗受试者的MCL的药物中的用途，或者CD83结合蛋白在用于治疗受试者的MCL中的用途。
第五方面提供了一种治疗受试者的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的CD83结合蛋白。
替代性第五方面提供了CD83结合蛋白在制备用于治疗受试者的DLBCL的药物中的用途，或者CD83结合蛋白在用于治疗受试者的DLBCL中的用途。
第六方面提供了一种治疗受试者的DLBCL、MCL或HL的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的CD83抗体缀合物。
替代性第六方面提供了CD83抗体缀合物在制备用于治疗受试者的DLBCL、MCL或HL的药物中的用途，或者CD83抗体缀合物在用于治疗受试者的DLBCL、MCL或HL中的用途。
第七方面提供了一种治疗受试者的DLBCL、MCL或HL的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的CD83结合蛋白，其中，所述CD83结合蛋白是双特异性T细胞衔接物。
替代性第七方面提供了CD83结合蛋白在制备用于治疗受试者的DLBCL、MCL或HL的药物中的用途，其中，所述CD83结合蛋白是双特异性T细胞衔接物(BiTE)，或者CD83结合蛋白在用于治疗受试者的DLBCL、MCL或HL中的用途，其中，所述CD83结合蛋白是双特异性T细胞衔接物(BiTE)。
第八方面提供了一种治疗受试者的DLBCL、MCL或HL的方法，该方法包括施用有效量的CAR T细胞，其中，所述CAR T细胞包含CD83结合蛋白。
替代性第八方面提供了包含CD83结合蛋白的CAR T细胞在制备用于治疗受试者的DLBCL、MCL或HL的药物中的用途，或者包含CD83结合蛋白的CAR-T细胞在用于治疗受试者的DLBCL、MCL或HL中的用途。
本发明的第九方面提供了一种诊断受试者的淋巴瘤的方法，该方法包括确定CD83是否由所述受试者的淋巴细胞表达。
第十方面提供了一种对受试者的淋巴瘤的严重程度或阶段进行评估的方法，该方法包括确定所述受试者的血清中的可溶性CD83(sCD83)的水平。
第十一方面提供了一种用于治疗受试者的淋巴瘤的试剂盒，该试剂盒包含CD83结合蛋白和使用CD83结合蛋白治疗淋巴瘤的说明书。
附图说明
图1示出了CD83在HL细胞系上表达。
图1(A)是示出了通过流式细胞术对CD83在KM-H2淋巴瘤细胞系、L428淋巴瘤细胞系和HDLM-2淋巴瘤细胞系上的表达进行分析的结果的直方图，KM-H2淋巴瘤细胞系、L428淋巴瘤细胞系和HDLM-2淋巴瘤细胞系分别用HB15a-FITC抗CD83 mAb、HB15e-FITC抗CD83 mAb或3C12C-FITC抗CD83 mAb进行染色。灰色直方图，同种型对照；空直方图，抗CD83抗体。CD30染色用作阳性对照。这些数据代表了三个具有比较结果的独立实验。图1(B)是示出了通过流式细胞术对CD15、CD25、CD40和CD274(PD-L1)在KM-H2细胞上的表达进行分析的结果的直方图。
图2示出了CD83在HL患者和患有DLBCL的相当一部分患者的HRS细胞上表达。
图2(A)是示出了用抗CD83抗体和抗CD30抗体(深色部分)对HL的石蜡包埋的淋巴结活检样品进行染色的显微镜图像(放大200倍)。示出了一个代表性样品。图2(B)是示出了用抗CD20抗体、抗CD83抗体和抗CD3抗体(深色区域)对来自弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者的石蜡包埋的淋巴结活检样品进行染色的显微镜图像(放大200倍)。图2(C)是示出了HL患者(n＝35)的HRS细胞中CD83表达水平的分析结果的饼图。高：>90％的HRS细胞中CD83呈阳性；中度：HRS细胞中10％-90％CD83+；低：HRS细胞中10％CD83+。图2(D)为图2(C)中提及的每个表达组的一个代表性样品的以高放大倍数显示的图像(放大200倍)。箭头指示表达CD83的HRS细胞。
图3示出了CD83分子从HRS到T细胞的胞啃作用。
图3(A)是示出了在将来自健康供体PBMC的T细胞与KM-H2细胞以1:5的比例共培养4小时后CD83在CD3+T细胞上的表达的百分比的图。通过流式细胞术分析CD83在CD3+T细胞上的表达，数据来自5个实验。图3(B)是示出了T细胞和KM-H2细胞在具有或不具有transwell的情况下共培养4小时后CD83在CD3+T细胞上的表达的图。通过流式细胞术分析CD83在T细胞上的表达，示出了三个代表性实验中的一个。图3(C)是示出了用CellVue Claret标记KM-H2细胞且将KM-H2细胞与纯化的CD3+T细胞以5:1的比例共培养4小时后CellVue Claret(Claret)在CD3+T细胞上的表达的图。通过流式细胞术分析CellVue Claret在T细胞上的表达。数据代表3个实验的数据。图3(D)是示出了PD-1(CD279)在与KM-H2细胞共培养4小时的CD83+经胞啃的T细胞上的表达的水平的图。通过流式细胞术确定表达(n＝4)。示出了单因素方差分析的p值。图3(E)是示出了PD-1在与KM-H2细胞共培养4小时后的经胞啃的CD4+T或CD8+T细胞上的表达的水平的图。通过流式细胞术分析表达(n＝4)。示出了单因素方差分析的p值。图3(F)是根据使用流式细胞术分析PD-1在T细胞上的表达获得的代表性图。
图4示出了HL细胞分泌的可溶性CD83(sCD83)抑制了T细胞增殖，并且通过加入3C12C消除了sCD83活性。
图4(A)是示出了在来自KM-H2细胞系、L428细胞系的上清液(SN)中和来自HL患者的诊断血清中通过ELISA检测到的sCD83浓度的图。示出了Mann-Whitney t检验的P值。图4(B)是示出了纯化的T细胞的增殖指数(PI)的图，该T细胞用CFSE标记并在存在25％KM-H2的SN或加3C12C(抗CD83 mAb)(5μg/ml)的情况下用CD2/CD3/CD28微珠(3:1)刺激5天。通过流式细胞术对细胞进行分析，并使用Flow Jo(n＝6)计算总CD3+T细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞的增殖指数(PI)。示出了单因素方差分析的P值。图4(C)是示出了当将不同体积(v/v)的KM-H2上清液添加到CD2/CD3CD28微珠刺激的CFSE标记的人T细胞中时的流式细胞术分析结果的直方图。在第5天，收集T细胞并通过流式细胞术分析CFSE。计算PI和分裂指数(DI)作为增殖的指标。示出了来自3个相似实验中的一个的代表性数据。图4(D)是示出了用CD2/CD3/CD28微珠刺激且然后在有或没有抗体3C12C(5μg/ml和10μg/ml)的情况下在25％(v/v)KM-H2 SN中培养的CFSE标记的T细胞的流式细胞术分析结果的直方图。在第5天分析T细胞增殖。图4(E)是示出了用CD2/CD3/CD28微珠刺激且然后仅用不同浓度的3C12C培养的CFSE标记的T细胞的流式细胞术分析结果的直方图。单独的3C12C对CD2/CD3/CD28微珠刺激后的CFSE标记的T细胞增殖没有影响。
图5示出了在化疗期间HL患者的sCD83的时程。
图5是示出了在通过ELISA检查的不同化疗周期期间六例HL患者血清中sCD83水平的图。箭头指示何时进行PET扫描，并且记录完全应答(CR)、部分应答(PR)或进行性疾病(PD)的结果。
图6示出了3C12C和3C12C-单甲基-澳瑞他汀E(MMAE)在体外杀死HL细胞系。
图6(A)是示出了当用钙黄绿素-AM标记的靶细胞KM-H2或L428与效应细胞(人PBMC)以25:1的E:T比例随着3C12C浓度从0μg/ml增加到1μg/ml在37℃共培养3小时的细胞毒性的百分比的图。收集上清液用于释放的钙黄绿素的荧光读数(激发485nM，发射538nM)。计算ADCC活性(n＝3)。图6(B)是示出了用不同浓度的3C12C-MMAE培养KM-H2细胞或HL-60细胞3天后的活细胞数量的图。通过流式细胞术用7AAD染色对活细胞进行分析。示出了半数最大抑制浓度(IC50)。
图7示出了3C12C减少了非人灵长类动物中的B细胞。
在第0天、7天、14天和21天向五个非人灵长类动物注射3C12C(1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、10mg/kg，n＝4)或人IgG(10mg/kg，n＝1)。在第28天从3C12C(10mg/kg)和对照处理的动物中进行淋巴结活检。图7(A)是示出了通过流式细胞术的来自5只动物的PBMC的CD19+B细胞的数量的图。虚线表示第0天的基本细胞数。*表示该动物中WBC极高的一个时间点。图7(B)是示出了在石蜡包埋的淋巴结活检样品上用抗人CD20 mAb进行染色的细胞的图像。示出了来自接受10mg/kg的3C12C或人IgG的动物的图像，前者示出了B细胞减少。
图8是示出了通过RT-PCR扩增CD83和GAPDH mRNA之后HL细胞系mRNA的电泳结果的图。
图9示出了来自与KM-H2细胞共培养的T细胞的Treg细胞。
将纯化的T细胞与KM-H2细胞以1:5的比例共培养4小时，通过流式细胞术对CD83+T细胞中CD25+CD127低Treg细胞的比例进行分析。仅将T细胞的培养条件用作对照。来自三个实验中的一个实验的数据示出了Treg细胞没有增加。
图10是示出了HL系上清液中IL-10水平的图。
收集KM-H2、L428和HDLM2的上清液，以便用CBA IL-10珠测定来测量IL-10水平。证明了低水平。PHA活化的T细胞的上清液用作阳性对照。
图11是示出了HL60细胞系上CD83表达的图。
通过流式细胞术用小鼠抗人CD83 mAb HB15a、HB15e、或人抗人CD83 mAb 3C12C对CD83在HL60上的表达进行分析。灰色填充的直方图是CD83抗体的同种型对照。
图12是示出了3C12C在非人灵长类动物中是安全的图。
在第0天、7天、14天和21天向五个非人灵长类动物(狒狒)注射3C12C(1[TA1]mg/kg、5[TA2]mg/kg、10[TA3]mg/kg、10[TA4]mg/kg，n＝4)或人IgG(10[CTR]mg/kg，n＝1)。收集血液和血清样品以进行血细胞计数(红细胞(RBC)、白细胞(WBC)和血小板)、肝(ALP、AST水平)和肾功能(肌酐水平)分析。示出了来自接受10mg/kg的3C12C或人IgG的动物的数据。TA1＝接受1mg/kg的动物，TA2＝接受5mg/kg的动物，TA3＝接受10mg/kg的动物，TA4＝接受10mg/kg的动物，CTR＝接受10mg/kg人IgG的对照动物。
图13是示出了来自患者的MCL和FL中CD83表达的显微镜图像。来自MCL患者和滤泡性淋巴瘤(FL)患者的石蜡包埋的淋巴结活检样品上CD83表达(深色区)的显微镜图像(放大200倍)。
图14示出了3C12C-MMAE杀死DLBCL细胞系和MCL细胞系。
将DLBCL系KARPASS-1106P或MCL系Mino细胞与不同浓度的3C12C-MMAE孵育72小时，然后通过流式细胞术计数活细胞。KM-K2细胞用作对照。示出了半数最大抑制浓度(IC50)。
具体实施方式
本公开涉及一种用于治疗受试者的淋巴瘤的方法。
淋巴瘤是从淋巴细胞发展而来的一组血细胞肿瘤。淋巴瘤可以是HL或NHL。
在一个实施方式中，所述淋巴瘤是HL。霍奇金淋巴瘤是特征在于存在霍奇金和里德-斯特恩伯格细胞(HRS细胞)的淋巴瘤。HRS细胞通常被鉴定为具有明显核仁和CD45-、CD30+、CD15++/-免疫表型的大型双核细胞。HRS细胞的典型特征包括大尺寸(20微米-50微米)、丰富、两亲、细粒状/均质的细胞质，并且包括两个镜像核(猫眼)，每个镜像核均具有嗜酸性核仁和厚核膜(染色质分布在核膜附近)。
在另一实施方式中，所述淋巴瘤是NHL。NHL是不涉及HRS细胞的淋巴瘤。
在一个实施方式中，所述NHL是MCL。由于CD5阳性抗原未致敏前生发中心B细胞在围绕正常生发中心滤泡的套区内，因此套细胞淋巴瘤是B细胞淋巴瘤的亚型。套细胞淋巴瘤细胞通常过量表达细胞周期蛋白D1。
在一个实施方式中，所述NHL是弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
在另一实施方式中，所述NHL亚型是来自对CD83染色呈阳性的细胞系的滤泡性淋巴瘤(FL)。通常，所述滤泡性淋巴瘤来自对CD83染色呈阳性且包含细胞膜上的诱导的RNA蛋白的细胞系。
治疗淋巴瘤的方法包括向受试者施用有效量的CD83结合蛋白。
CD83是单通I型膜蛋白且是免疫球蛋白超家族的成员。已经鉴定出对CD83的不同亚型进行编码的三种人转录物变体。出于命名而非限制的目的，人CD83(hCD83)亚型的氨基酸序列示出在SEQ ID NO：1(NP_004224.1；亚型a)、SEQ ID NO：2(NP_001035370.1；亚型b)和SEQ ID NO：3(NP_001238830.1；亚型c)中。因此，在一个实例中，人CD83的氨基酸序列包含如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。CD83的同源物可以在黑猩猩(Pan troglodytes)(XP_518248.2)、猕猴(Macaca mulatta)(XP_001093591.1)、家犬(Canis lupus familiaris)(XP_852647.1)、家牛(Bos Taurus)(NP_001040055.1)、小家鼠(Mus musculus)(NP_033986.1)、褐家鼠(Rattus norvegicus)(NP_001101880.1)和原鸡(Gallus gallus)(XP_418929.1)中找到。
CD83是活化的树突状细胞(DC)的标志物，并且也可以在活化的B细胞、T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等上表达。存在膜结合形式的CD83和可溶形式的CD83(sCD83)。
CD83结合蛋白
CD83结合蛋白是能够与CD83特异性结合的蛋白。术语“CD83结合蛋白”包括能够与CD83特异性结合的单个多肽链(即，通过肽键连接的一系列连续氨基酸)、或彼此共价或非共价连接的一系列多肽链(即，多肽复合物或蛋白质)。例如，可以使用合适的化学键或二硫键将一系列多肽链共价连接。非共价键的实例包括氢键、离子键、范德华力和疏水相互作用。
CD83结合蛋白通常包含抗原结合结构域。“抗原结合结构域”是能够与抗原特异性结合的抗体区域。CD83结合蛋白的抗原结合结构域与CD83特异性结合。抗原结合结构域通常包含抗体的重链可变区的互补决定区(CDR)1、2和/或3、和/或轻链可变区的CDR1、CDR2和/或CDR3。更典型地，抗原结合结构域包含抗体的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3、以及轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3。更典型地，抗原结合结构域包含抗体的重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)。抗原结合结构域不必在完整抗体的情形中，例如，其可以是分离的形式(例如，结构域抗体)或呈另一种形式(例如，scFv)。
“抗体”是指能够通过抗体的Fv区域内包含的抗原结合结构域与一种或几种紧密相关的抗原(例如，CD83)特异性结合的蛋白质。抗体包含四链抗体(例如，两条轻(L)链和两条重(H)链)、重组或修饰的抗体(例如，嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、CDR移植抗体、灵长类源化抗体、去免疫化抗体、合人源化抗体(synhumanized antibody)、半抗体和双特异性抗体)。抗体通常包含恒定结构域，该恒定结构域可以排列成恒定区或恒定片段或可结晶片段(Fc)。抗体的示例性形式包含四链结构作为其基本单位。全长抗体包含两条共价连接的重链(各约50kDa至70kDa)和两条轻链(各约23kDa)。轻链通常包含可变区(如果存在的话)和恒定结构域，并且在哺乳动物中是κ轻链或λ轻链。重链通常包含可变区、和一个或两个通过铰链区与另外的恒定结构域连接的恒定结构域。哺乳动物的重链具有以下类型中的一种：α、δ、ε、γ或μ。每条轻链也共价连接至重链中的一个重链。例如，两条重链以及重链和轻链通过链间二硫键和非共价相互作用而保持在一起。链间二硫键的数量在不同类型的抗体之间可以不同。每条链均具有N末端可变区(VH或VL，其中，每个长约110个氨基酸)并具有在C末端处的一个或更多个恒定结构域。轻链的恒定结构域(长度为约110个氨基酸的CL)与重链的第一恒定结构域(长度为330个至440个氨基酸的CH1)对齐并通过二硫键相连。轻链可变区与重链可变区对齐。抗体重链可以包含2个或更多个另外的CH结构域(比如，CH2、CH3等)，并且可以包含在CH1恒定结构域与CH2恒定结构域之间的铰链区。抗体可以是任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。在一个实例中，抗体是鼠(小鼠或大鼠)抗体或灵长类动物(比如，人)抗体。在各种实施方式中，抗体是人源化的、合人源化的、嵌合的、CDR移植的或去免疫的。
如本文中所使用的，“可变区”是指如本文所定义的抗体的轻链和/或重链的能够与抗原特异性结合的部分，并且“可变区”包含互补决定区(CDR)和框架区(FR)的氨基酸序列，所述互补决定区即为CDR1、CDR2和CDR3。例如，可变区包含三个或四个FR(例如，FR1、FR2、FR3和可选地FR4)以及三个CDR。VH是指重链可变区。VL是指轻链可变区。
如本文中所使用的，术语“互补决定区”(即，CDR1、CDR2和CDR3)是指抗体可变区的氨基酸残基，该氨基酸残基的存在是特异性抗原结合的主要贡献者。每个可变区结构域(VH或VL)通常具有三个CDR区，所述三个CDR区分别被标识为CDR1、CDR2和CDR3。在一个实例中，分配给CDR和FR的氨基酸位置根据美国马里兰州贝塞斯达的国立卫生研究院于1987年和1991年发布的免疫学目的蛋白质的Kabat序列(在本文中也称为“Kabat编号系统”)来定义。在另一实例中，分配给CDR和FR的氨基酸位置根据提高的Chothia编号方案(http://www.bioinfo.org.uk)来定义。根据Kabat的编号系统，VH FR和CDR的位置如下：残基1至30(FR1)、31至35(CDR1)、36至49(FR2)、50至65(CDR2)、66至94(FR3)、95至102(CDR3)、以及103至113(FR4)。根据Kabat的编号系统，VL FR和CDR的位置如下：残基1至23(FR1)、24至34(CDR1)、35至49(FR2)、50至56(CDR2)、57至88(FR3)、89至97(CDR3)、以及98至107(FR4)。本公开不限于由Kabat编号系统定义的FR和CDR，而是包括所有编号系统，所述所有编号系统包括规范编号系统或者Chothia和Lesk的J.Mol.Biol.196:901页-917页,1987年的规范编号系统；Chothia等的Nature 342:877页-883页,1989年的规范编号系统；和/或Al-Lazikani等的J.Mol.Biol.273:927页-948页,1997年的规范编号系统；Honnegher和Plükthun的J.Mol.Biol.309:657页-670页,2001年的编号系统；或者Giudicelli等在NucleicAcids Res.25:206页-211页,1997年中论述的IMGT系统。在一个实例中，CDR根据Kabat编号系统来定义。
“框架区”(FR)是除CDR残基外的那些可变区残基。
如本文中所使用的，术语“Fv”是指无论是由多个多肽还是单个多肽组成的任何蛋白质，其中VL和VH缔合并形成具有能够与抗原特异性结合的抗原结合结构域的复合物。形成抗原结合结构域的VH和VL可以在单个多肽链中或在不同的多肽链中。此外，本公开的Fv(以及本公开的任何蛋白质)可以具有多个抗原结合结构域，所述多个抗原结合结构域可以结合或可以不结合相同的抗原。该术语应当理解为涵盖直接源自抗体的片段并涵盖与使用重组方式产生的这种片段相对应的蛋白质。示例性的含有Fv的多肽或蛋白质包含与其恒定区或结构域例如CH2或CH3结构域相连接的Fab片段、Fab'片段、F(ab')片段、scFv、双抗体、三抗体、四抗体或更高级的复合物、或前述各者中的任意一者，例如包含其他蛋白质如CAR T细胞构建体的微抗体。
“Fab片段”由免疫球蛋白的单价抗原结合片段组成，并且“Fab片段”可以通过用木瓜蛋白酶消化完整抗体以产生由完整轻链和重链的一部分组成的片段来生成，或者可以使用重组方式来生成。
抗体的“Fab'片段”可以通过用胃蛋白酶处理整个抗体然后还原以产生由完整轻链和重链的一部分组成的分子来获得，重链包含VH和单个恒定结构域。以这种方式处理的每个抗体获得两个Fab'片段。Fab'片段也可以通过重组方式产生。
抗体的“F(ab')2片段”由通过两个二硫键保持在一起的两个Fab'片段的二聚体组成，并且是通过用胃蛋白酶处理整个抗体分子而无需随后还原而获得的。
“Fab2”片段是包含两个Fab片段的重组片段，两个Fab片段使用例如亮氨酸拉链或CH3结构域连接。
“单链Fv”或“scFv”是包含抗体的可变区片段(Fv)的重组分子，其中，轻链可变区和重链可变区通过合适的柔性多肽接头共价连接。
如本文中所使用的，关于CD83结合蛋白或其抗原结合结构域与抗原的相互作用的术语“结合”是指该相互作用依赖于抗原上特定结构(例如，抗原决定簇或表位)的存在。例如，抗体识别并结合特定的蛋白质结构而不是一般的蛋白质。如果抗体与表位“A”结合，则在含有标记“A”和抗体的反应中，含有表位“A”(或游离的，未标记的“A”)的分子的存在将减少与抗体结合的标记的“A”的量。
与特定抗原“特异性结合”的蛋白质是与替代性抗原反应或缔合相比，与特定抗原反应或缔合的频率更高、更快、持续时间更长和/或亲和力更大的蛋白质。例如，特异性结合CD83的蛋白质以比其结合其他抗原更大的亲和力、亲合力、更容易和/或更长的持续时间来结合CD83。在一个实例中，CD83结合蛋白与抗原的“特异性结合”是指该蛋白以100nM或更小的平衡常数(KD)与抗原结合，所述100nM或更小比如为50nM或更小，例如20nM或更小，比如15nM或更小或者10nM或更小或者5nM或更小或者1nM或更小或者500pM或更小或者400pM或更小或者300pM或更小或者200pM或更小或者100pM或更小。
如本文中所使用的，术语“表位”(同“抗原决定簇”)是指抗原的区域，包含抗体的抗原结合结构域的蛋白质与该区域结合。该术语不必限于蛋白质所接触的特定残基或结构。例如，该术语包括跨越蛋白质所接触的氨基酸的区域和/或该区域之外的至少5个至10个或者2个至5个或者1个至3个氨基酸。在一些实例中，表位是氨基酸的线性系列。表位也可以包含一系列不连续的氨基酸，所述一系列不连续的氨基酸在抗原被折叠时彼此靠近定位，即，“构象表位”。本领域技术人员还将意识到，术语“表位”不限于肽或多肽。例如，术语“表位”包括分子的化学活性表面分组比如糖侧链、磷酰基侧链或磺酰基侧链，并且在某些实例中，术语“表位”可以具有特定的三维结构特征和/或特定的电荷特征。表位或包含表位的肽或多肽可以施用于动物以产生针对该表位的抗体。
该方法可以使用受试者耐受的且对CD83具有高亲和力的任何CD83结合蛋白。适用于本发明的方法的CD83结合蛋白可以通过对包含抗原结合结构域(例如，包含抗体的可变区)的抗体或蛋白质的文库进行筛选以鉴定CD83结合蛋白来鉴定。对包含与CD83特异性结合的抗原结合结构域的蛋白质的文库进行筛选的方法在例如WO 2014/117220和WO 2016/061617中有描述。
在一个实施方式中，CD83结合蛋白是抗体。
在一个实施方式中，所述抗体是多克隆抗体。多克隆抗体可以使用本领域已知的方法来制备。多克隆抗体可以例如通过将用于使哺乳动物免疫的抗原性组合物进行一次或多次注射而在哺乳动物中产生。通常，通过多次静脉内注射、皮下注射或腹膜内注射来施用抗原性组合物。本领域技术人员可以容易选择免疫方案。用于多克隆抗体的免疫和分离的方法在例如E.Harlow和D.Lane的《抗体：实验室手册》(Antibodies:a LaboratoryManual).纽约.冷泉港:冷泉港实验室出版社,1988年,第5章中有描述。
在一个实施方式中，所述CD83结合蛋白是单克隆抗体或单克隆抗体的抗原结合片段。单克隆抗体可以使用本领域已知的方法来制备，并且单克隆抗体在例如E.Harlow和D.Lane的《抗体：实验室手册》.纽约.冷泉港:冷泉港实验室出版社,1988年,第5-7章中有描述。单克隆抗体可以例如通过用抗原对小鼠、仓鼠或其他合适的宿主动物进行免疫以引发产生或能够产生与抗原特异性结合的抗体的淋巴细胞来制备。抗原通常将通过施用抗原性组合物来施用，该抗原性组合物包括例如CD83蛋白，如在WO 2016/061617中所描述的CD83蛋白。通常，如果需要人类来源的细胞，则使用外周血淋巴细胞(“PBL”)，或者如果需要非人哺乳动物来源，则使用脾细胞或淋巴结细胞。然后使用合适的融合剂比如聚乙二醇将淋巴细胞与永生化细胞系融合，以形成杂交瘤细胞。永生化细胞系通常是转化的哺乳动物细胞，尤其是啮齿动物、牛和人来源的骨髓瘤细胞。通常使用大鼠或小鼠骨髓瘤细胞系。杂交瘤细胞可以在合适的培养基中培养，该培养基优选地包含一种或多种抑制未融合的永生化细胞的生长或存活的物质。例如，如果亲代细胞缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT或HPRT)，则杂交瘤的培养基通常将包括次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷(“HAT培养基”)，这些物质会阻止HGPRT缺陷细胞的生长。
在最初产生抗CD83蛋白的抗体后，可以对抗体进行测序，然后通过重组技术进行制备以产生嵌合抗体比如人源化抗体。鼠抗体和抗体片段的嵌合是本领域技术人员已知的。衍生自嵌合单克隆抗体的抗体组分的使用减少了与鼠序列的免疫原性相关的潜在问题。
可以使用本领域已知且在例如Sambrook和Russell,Eds的《分子克隆：实验室手册》(Molecular Cloning:A Laboratory Manual).冷泉港实验室出版社,2001年，第3版，第1-3卷中描述的常规技术来克隆来自鼠抗体的可变结构域。通常，鼠抗体的可变轻链序列和可变重链序列可以通过多种分子克隆程序获得，所述多种分子克隆程序比如为RT-PCR、5'-RACE和cDNA文库筛选。嵌合抗体是包含可变区的抗体蛋白，该可变区包含衍生自一种物种的抗体(通常为小鼠抗体)的互补决定区(CDR)，而抗体分子的恒定结构域则衍生自另一物种(比如人)。
在一些实施方式中，所述CD83结合蛋白是人源化抗体。人源化抗体呈嵌合抗体的形式，在该嵌合抗体中，来自一个物种的抗体(例如，小鼠抗体)的CDR被从小鼠抗体的重链可变链和轻链可变链转移至人重链可变结构域和轻链可变结构域(例如，框架区序列)。抗体分子的恒定结构域衍生自人抗体的恒定结构域。
CD83结合蛋白可以是嵌合抗体。用于本文中所描述的方法的嵌合抗体包含特异性结合CD83蛋白的鼠mAb的互补决定区(CDR)和通常框架区(FR)。嵌合抗体可以包含人抗体的轻链恒定区和重链恒定区。衍生自嵌合单克隆抗体的抗体组分的使用减少了与鼠恒定区的免疫原性相关的潜在问题。鼠抗体和抗体片段的人源化是本领域技术人员已知的并且在例如US5225539、US6054297和US7566771中进行描述。例如，人源化单克隆抗体可以通过将小鼠互补决定区从小鼠免疫球蛋白的重链可变链和轻链可变链转移到人可变结构域中，并且然后在鼠对应物的框架区中置换人残基来产生。除人恒定区序列外，人框架区序列的使用进一步减少了诱导HAMA反应的机会。抗体可以通过多种公认的技术从血清和杂交瘤培养物中分离和纯化。这样的分离技术包括用蛋白A琼脂糖凝胶的亲和色谱、尺寸排阻色谱和离子交换色谱。参见例如Coligan的第2.7.1页-2.7.12页和2.9.1页-2.9.3页。此外参见Baines等的《分子生物学方法中的“免疫球蛋白G(IgG)的纯化”》(“Purification ofImmunoglobulin G(lgG),”in Methods in Molecular Biology),第10卷,第79页-104页(胡玛出版社，1992)。
在一些实施方式中，CD83结合蛋白是全人源化单克隆抗体。然而，人源化抗体呈嵌合抗体的形式，在该嵌合抗体中，来自一个物种的抗体(例如，小鼠抗体)的CDR被从小鼠抗体的重链可变链和轻链可变链转移至人的重链可变结构域和轻链可变结构域(例如框架区序列)。抗体分子的恒定结构域衍生自人抗体的恒定结构域。
靶向CD83的抗体可以通过本领域技术人员众所周知的多种技术来表征。例如，抗体特异性结合CD83的能力可以使用例如间接酶免疫测定、流式细胞术分析、ELISA或Western blot分析来验证。
CD83结合蛋白通常包含特异性结合CD83的抗体重链可变区和/或轻链可变区。可变重链和/或轻链的部分可以在分开的多肽链比如Fv片段上或者在其中轻链可变区和重链可变区通过肽接头连接的单个多肽链(“scFv蛋白”)中。在一个实施方式中，所述CD83结合蛋白是抗体的抗原结合片段。抗体的抗原结合片段包含抗体的抗原结合结构域。抗原结合片段的实例包括F(ab')2、Fab'、Fab、Fv、sFv、scFv等。通常，抗原结合片段包含可变重链和/或可变轻链的CDR1区域、CDR2区域和/或CDR3区域。更典型地，抗原结合片段包含可变重链和/或可变轻链的CDR1区域、CDR2区域和CDR3区域。更典型地，抗原结合片段包含可变重链的CDR1区域、CDR2区域和CDR3区域以及可变轻链的CDR1、CDR2和CDR3。对特异性表位进行识别的抗原结合片段可以通过已知技术来产生。例如，F(ab')2片段可以通过胃蛋白酶消化抗体分子来生产。这些方法和其他方法在例如Coligan的第2.8.1页-2.8.10页和第2.10.页-2.10.4页中进行描述。或者，可以构建Fab'表达文库以允许快速和容易地鉴定具有所需特异性的Fab'片段。
在一些实施方式中，CD83结合蛋白是单链Fv分子(scFv)。单链Fv分子(scFv)包含VL结构域和VH结构域。VL结构域和VH结构域通常通过肽接头(L)共价连接并折叠以形成抗原结合位点。尽管VH区和VL区可以直接连结在一起，但是本领域技术人员将理解的是，这些区可以被由一个或多个氨基酸组成的肽接头隔开。肽接头及其用途在本领域中是已知的。通常，肽接头除了将区域连结或者保持VH与VL之间的某些最小距离或其他空间关系外将不具有特异性的生物活性。然而，可以选择肽接头的组成氨基酸以影响分子的某些性质，比如折叠、净电荷或疏水性。单链Fv(scFv)抗体可选地包括长度不超过50个氨基酸、通常不超过40个氨基酸、优选地不超过30个氨基酸、更优选地不超过20个氨基酸的肽接头。
制备scFv抗体的方法在本领域中是已知的，并且已经在例如US 5260203中进行了描述。例如，对来自免疫动物的B细胞的mRNA或者获自从一组人类供体中纯化的B淋巴细胞的mRNA进行分离，并且制备cDNA。使用对免疫球蛋白的重链可变区和轻链可变区具有特异性的引物来扩增cDNA。纯化PCR产物，并且连结核酸序列。如果需要接头肽，则将编码该肽的核酸序列插入重链核酸序列与轻链核酸序列之间。将编码scFv的核酸插入载体并且在适当的宿主细胞中表达。特异性结合所需抗原的scFv通常通过对噬菌体展示文库的淘选来发现。可以通过几种方法中的任一方法来进行淘选。可以使用在其表面上表达所需抗原的细胞或者使用涂覆有所需抗原的固体表面来方便地进行淘选。便利地，所述表面可以是磁珠。将未结合的噬菌体从固体表面洗去，并且洗脱结合的噬菌体。
制备其他抗原结合片段的方法在本领域中是已知的。例如，抗原结合片段也可以通过全长抗体的蛋白水解或者通过在编码该片段的DNA的大肠杆菌或另一宿主中表达而制备。抗体片段可以通过常规方法用胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化全长抗体来获得。例如，可以通过用胃蛋白酶酶促切割抗体来生产抗体片段，以提供表示为F(ab')2的大约100Kd片段。该片段可以使用硫醇还原剂和可选地由二硫键的切割产生的巯基的保护基进行进一步切割，以生成约50Kd Fab'单价片段。或者，使用木瓜蛋白酶的酶促切割直接生成两个单价Fab片段和Fc片段。
也可以使用裂解抗体的其他方法，比如分离重链以形成单价轻-重链片段、进一步裂解片段、或者其他酶促、化学或遗传技术，只要这些片段结合被完整抗体识别的表位即可。
在一个实施方式中，所述CD83结合蛋白是双特异性抗体。双特异性抗体是对至少两种不同抗原具有结合特异性或者对同一抗原的两个表位具有结合特异性的单克隆抗体，优选人抗体或人源化抗体。
在一些实施方式中，所述双特异性抗体是双特异性T细胞衔接物。双特异性T细胞衔接物(BiTE)是一类人工双特异性单克隆抗体。BiTE是融合蛋白，其通常在单个肽链上包含不同抗体的两个单链可变片段(scFvs)或者包含来自四个不同基因的氨基酸序列。scFv中的一个与肿瘤抗原(例如，本文中所描述的CD83靶标)结合，另一个通常通过CD3受体与效应细胞比如T细胞结合。一种用于制备双特异性抗体的方法在例如Laszlo等.Blood.2014年1月23日；123(4)：第554页–561页和Loffler.Blood(2000),95：第2098页-103页中进行描述。
在另一实施方式中，CD83结合蛋白是用于嵌合抗原受体T细胞(CAR T细胞)的嵌合抗原受体。在这方面，编码包含抗原结合结构域的多肽比如scFv的核酸与信号传导分子结合可以用于转导T细胞以生成CAR T细胞。CAR T细胞中表达的抗原结合结构域可以以非MHC限制的方式识别抗原。因此，在T细胞的表面上表达例如编码本文中所描述的抗CD83抗体的抗原结合结构域的scFv可以有效地靶向淋巴瘤细胞上的CD83。用于制备CAR T细胞的方法在本领域中是已知的，并且在例如Shannon等.Blood，2015年6月25日第125卷，第26期：第4017-4023页和O’Hear等.(2015)Haematologica；100(3)：第336-344页中进行描述。
在一个实施方式中，CD83结合蛋白可以是人单克隆抗体。人单克隆抗体可以通过使携带来自人免疫系统的基因的转基因小鼠免疫来产生，或者可以衍生自噬菌体人scFv文库。例如，可以使含有编码未重排的人重链和轻链免疫球蛋白序列的人免疫球蛋白基因座的小鼠免疫以生成人单克隆抗体。用于生成人抗体的转基因小鼠的实例在本领域中是已知的，并且在例如Lonberg等.(1994)Nature 368：第856-859页、Kellermann等.(2002)Curr.Opin.Biotechnol.13：第593-597页、以及Tomizuka等(2000)PNAS 97：第722-727页中进行描述。
在一个实施方式中，CD83结合蛋白是全人抗体。这样的抗体可以从人scFv产生，并且被重新构建为具有来自人抗体的恒定结构域的抗体。例如，获自从一组人供体中纯化的B淋巴细胞的mRNA可以用于生成如本文中所描述的人scFv。人抗体可以通过将重链和轻链恒定区添加到scFv序列中所包含的重链可变区和轻链可变区来制备。
本文中所描述的抗体可以用于通过对表位的交叉竞争进行评估来分离其他CD83结合蛋白，比如结合相同表位或重叠表位的抗体。与本文中所描述的抗体或抗原结合片段的交叉竞争可以使用本领域已知的方法比如BIAcore分析、流式细胞术、ELISA分析来评估。
适用于本发明的方法的CD83结合蛋白的实例包括抗CD83抗体HB15a(可从Beckmanand Coulter获得)、HB15e(可从STEMCELL Technologies获得)、WO2014/117220中所描述的单克隆抗体3C12、3C12B、3C12C、3C12D和3C12E、以及WO2016/061617中所描述的单克隆抗体1F7或其衍生物。
在一个实施方式中，CD83结合蛋白包含重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含：
(i)与SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列有至少90％同一性的序列；或者
(ii)SEQ ID NO:10所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)。
在一个实施方式中，所述CD83结合蛋白包含：
(a)重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含：
(i)与SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列有至少90％同一性的序列；或者
(ii)SEQ ID NO:10所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)轻链可变区(VL)，该轻链可变区(VL)包含：
(i)与SEQ ID NO:12、13、11、14或15所示的氨基酸序列中的任一氨基序列有至少90％同一性的序列；或者
(ii)SEQ ID NO:12、13、11、14或15所示的氨基酸序列中的任一氨基序列的三个互补决定区(CDR)；或者
(iii)SEQ ID NO:40所示的共有序列；或者
(iii)三个CDR，其中，CDR1、CDR2或CDR3的氨基酸序列是SEQ ID NO:37、38或39所示的共有序列。
在一个实施方式中，CD83结合蛋白包含抗原结合结构域，该抗原结合结构域包含：
(a)重链可变区(VH)，该重链可变区(VH)包含：
(i)与SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列有至少90％同一性的序列；或者
(ii)SEQ ID NO:10所示氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)轻链可变区，该轻链可变区包含：
(i)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR1序列、包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2序列和包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的CDR3序列。
在一个实施方式中，所述CD83结合蛋白包含抗原结合结构域，该抗原结合结构域包含：
(a)重链可变区，该重链可变区含有包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR1序列、包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的CDR2序列和包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的CDR3序列；以及
(b)轻链可变区，该轻链可变区含有包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的CDR1序列、包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的CDR2序列和包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的CDR3序列。
在一个实施方式中，所述CD83结合蛋白包含抗原结合结构域，该抗原结合结构域含有包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的可变重链以及包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的可变轻链。
在一个实施方式中，所述CD83结合蛋白是如WO 2014/117220中所描述的单克隆抗体3C12C。
在各种其他实施方式中，所述CD83结合蛋白包含抗原结合结构域，该抗原结合结构域包含：
(i)SEQ ID NO:10所示的VH序列和SEQ ID NO:12所示的VL序列；或者
(ii)SEQ ID NO:10所示的VH序列和SEQ ID NO:13所示的VL序列；或者
(iii)SEQ ID NO:10所示的VH序列和SEQ ID NO:14所示的VL序列；或者
(iv)SEQ ID NO:10所示的VH序列和SEQ ID NO:15所示的VL序列；或者
(v)SEQ ID NO:21所示的重链序列和SEQ ID NO:16所示的轻链序列；或者
(vi)SEQ ID NO:21所示的重链序列和SEQ ID NO:17所示的轻链序列；或者
(vi)SEQ ID NO:21所示的重链序列和SEQ ID NO:18所示的轻链序列；或者
(vii)SEQ ID NO:21所示的重链序列和SEQ ID NO:19所示的轻链序列；或者
(viii)SEQ ID NO:21所示的重链序列和SEQ ID NO:20所示的轻链序列；或者
(ix)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:23所示的VL序列；或者
(x)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:24所示的VL序列；或者
(xi)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:25所示的VL序列；
(xii)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:26所示的VL序列；
(viii)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:27所示的VL序列；
(viii)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:28所示的VL序列；
(viii)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:29所示的VL序列；
(viii)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:30所示的VL序列；
(viii)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:31所示的VL序列；
(viii)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:32所示的VL序列；
(viii)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:33所示的VL序列；或者
(viii)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:34所示的VL序列；或者
(vix)SEQ ID NO:35所示的重链序列和SEQ ID NO:36所示的轻链序列。
一方面，提供了一种治疗受试者的淋巴瘤的方法，该方法包括施用有效量的CD83结合蛋白，所述CD83结合蛋白含有包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的可变重链以及包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的可变轻链。
另一方面提供了一种治疗受试者的HL的方法，该方法包括施用有效量的CD83结合蛋白，该CD83结合蛋白含有包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的可变重链以及包含SEQ IDNO:11的氨基酸序列的可变轻链。
另一方面提供了一种治疗受试者的套细胞淋巴瘤的方法，该方法包括施用有效量的CD83结合蛋白，该CD83结合蛋白含有包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的可变重链以及包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的可变轻链。
另一方面提供了一种治疗受试者的DLBCL的方法，该方法包括施用有效量的CD83结合蛋白，该CD83结合蛋白含有包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的可变重链以及包含SEQID NO:11的氨基酸序列的可变轻链。
编码本文中所描述的抗体的轻链和重链的核苷酸序列的实例示出在SEQ ID NO:41-SEQ ID NO:59中。
序列表的概述如下：
Figure BDA0002455061000000141
Figure BDA0002455061000000151
如实施例中进一步描述的，发明人还分析了抗人CD83单克隆抗体及其毒素缀合物的杀伤作用，并且在非人灵长类动物试验中测试了其安全性。
效应子功能
在一个实施方式中，CD83结合蛋白可以诱导效应子功能。
如本文中所描述的，“效应子功能”是指抗体的导致将抗体所结合的细胞杀死的那些生物学活性(例如，由与Fc区结合的细胞或蛋白质介导的生物学活性)。抗体诱导的效应子功能的实例包括：补体依赖性细胞毒性(CDC)、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)和B细胞活化。
“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”是指具有对结合抗体的Fc区进行识别的Fc受体的效应细胞(例如，自然杀伤(“NK”)细胞、中性粒细胞和/或巨噬细胞)对抗体结合的靶细胞的裂解。为了评估感兴趣的分子的ADCC活性，可以进行体外ADCC测定。用于此类测定的有用的效应细胞包括外周血单核细胞(“PBMC”)和NK细胞。
在一个实施方式中，所述CD83结合蛋白以其可以诱导效应子功能比如ADCC和/或CDC的方式与细胞表面上的CD83结合。
在另一实施方式中，已经通过改变抗体的重链的特定氨基酸或者通过改变抗体重链的碳水化合物部分对CD83结合蛋白进行了工程改造，以改善效应子功能的诱导。
用于确定效应子功能的方法在本领域中是已知的，并且例如在Hellstrom等.ProcNatl Acad.Sci.美国.83：第7059页-7063页,1986年、Bruggemann等.J.Exp.Med.166：第1351页-1361页,1987、US7317091和Gazzano-Santoro等.J.Immunol.Methods.202：163,1996中进行描述。用于对由免疫球蛋白诱导的ADCC的水平进行评估的其他测定方法包括用于流式细胞术的ACTITM非放射性细胞毒性测定法(美国，加利福尼亚州，CellTechnology公司)或
Figure BDA0002455061000000161
非放射性细胞毒性测定法(美国，威斯康星州，Promega)。
免疫缀合物
在一个实施方式中，所述CD83结合蛋白是免疫缀合物。如本文中所使用的，免疫缀合物是缀合至诸如治疗部分和/或诊断部分之类的部分的抗体或其抗原结合片段。
在一个实施方式中，所述CD83结合蛋白是包含治疗部分的免疫缀合物。治疗部分是可用于治疗疾病的化合物、分子或原子。治疗部分的实例包括药物比如诸如化学治疗剂的细胞毒性剂、促凋亡剂、放射性同位素、免疫毒素。细胞毒性剂是对细胞有毒性的化合物。细胞毒性剂的实例包括多柔比星、环磷酰胺、甲氨蝶呤、氮芥、长春新碱、丙卡巴嗪(procarbzine)、泼尼松龙、博来霉素、长春碱、达卡巴嗪、环磷酰胺、丙卡巴肼、紫杉醇、伊立替康、吉西他滨、氟尿嘧啶、阿糖胞苷、奥佐霉素(ozogamicin)、阿霉素、依托泊苷、美法仑、丝裂霉素C、chloramuil、柔红霉素。放射性同位素的实例包括磷-32、铜-67、砷-77、铑-105、钯-109、银-111、锡-1221、碘-125、碘-131、钬-166、镥-177、铼-186、铱-194、金-199、砹-211、钇-90和铋-212。免疫毒素的实例在例如Wayne等.(2016)Blood.123：第2470-2477页中进行描述，并且免疫毒素的实例包括例如白喉毒素A、蓖麻毒素-dgA、假单胞菌外毒素A、Glonin、脂质体、颗粒或实际上任何毒素递送。
在一个实施方式中，所述CD83结合蛋白是包含诊断部分的免疫缀合物。诊断部分是用于对抗体或抗原结合片段与其靶抗原的结合进行检测的化合物、分子或原子。诊断部分可以包含放射性核素或非放射性核素、造影剂(比如，用于磁共振成像、计算机断层扫描或超声检查)。诊断部分包括例如放射性同位素、染料(比如，用生物素-链霉亲和素复合物)，造影剂、荧光化合物或分子、以及用于磁共振成像(MRI)或正电子发射断层扫描(PET)的增强剂(例如，顺磁性离子)。在一个实施方式中，诊断部分选自由放射性同位素、用于磁共振成像的增强剂和荧光化合物组成的组。为了用放射性金属或顺磁性离子加载抗体成分，可能需要使其与具有长尾巴的试剂反应，在该长尾巴上连接有多个用于结合离子的螯合基团。这种尾可以是聚合物比如聚赖氨酸、多糖或其他具有侧基的衍生的或可衍生的链，螯合基团可以结合到该侧基上，所述螯合基团为例如乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、DOTA、NOTA、NETA、卟啉、多胺、冠醚、双-硫代缩氨基脲、多肟和类似的已知可用于此目的的基团。使用标准化学方法将螯合物与抗体偶联。螯合物通常通过使得能够与分子形成键的基团而与抗体连接，同时免疫反应性损失最小、聚集和/或内部交联最小。
将治疗部分和诊断部分与抗体或抗原结合片段缀合的方法在本领域中是已知的。
本文中所描述的CD83结合蛋白通常被配制成用于施用给受试者的药物组合物。通常，药物组合物包含与药学上可接受的载体一起配制的CD83结合蛋白。“药学上可接受的载体”是指其与组合物的其他成分相容并且对受试者无害。组合物可以包含如下所述的其他治疗剂，并且可以根据比如药物制剂领域中众所周知的技术(例如，参见Remington:TheScience and Practice of Pharmacy，第21版，2005年，Lippincott Williams&Wilkins)例如通过使用常规的液体载体或稀释剂以及适合于所需给药方式的类型的药物添加剂(例如，赋形剂、粘合剂、防腐剂、稳定剂、调味剂等)进行配制。
包含CD83结合蛋白的药物组合物通常呈无菌注射水性悬浮液的形式。该悬浮液可以根据已知技术配制，并且包含与适合于制备水性悬浮液的赋形剂混合的活性物质。这种赋形剂可以包括悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶；分散剂或湿润剂可以是天然存在的磷脂例如卵磷脂、或烯化氧与脂肪酸的缩合产物例如聚氧乙烯硬脂酸酯、或环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物例如十七碳乙烯氧基鲸蜡醇、或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物比如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯、或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物例如聚乙烯山梨糖醇酐单油酸酯。水性悬浮液还可以包含一个或多个防腐剂例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯、一个或多个着色剂、一个或多个调味剂以及一个或多个甜味剂比如蔗糖或糖精。
无菌注射制剂也可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或悬浮液，例如1,3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的载体和溶剂是水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌的不挥发性油通常用作溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任何温和的不挥发性油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。另外，发现脂肪酸如油酸可用于制备可注射制剂。
药物组合物可以通过任何合适的方式以含有无毒的药学上可接受的载体或稀释剂的剂量单位制剂的形式给药，通常是肠胃外给药，比如通过皮下、静脉内、肌内、(透)皮内或脑池内注射或输注技术(例如，作为无菌可注射水溶液或混悬液)。CD83结合蛋白可以例如以适于速释或缓释的形式施用。通过使用包含化合物的合适的药物组合物，或者特别是在缓释的情况下通过使用诸如皮下植入物或渗透泵之类的装置来实现速释或缓释。
用于施用于受试者的药物组合物可以方便地以剂量单位形式存在，并且可以通过药学领域公知的任何方法制备。通常，药物组合物通过使化合物与液体载体均匀且紧密地结合来制备。在药物组合物中，活性化合物的含量足以对疾病的过程或病症产生期望的效果。如本文中所使用的，术语“组合物”旨在涵盖包含指定量的指定成分的产品、以及由指定量的指定成分的组合直接或间接产生的任何产品。
通常，术语“治疗”是指影响受试者、组织或细胞以获得期望的药理学和/或生理学效果，并且包括：(a)预防该疾病在可能易患该疾病但尚未被诊断为患有该疾病的受试者中发生；(b)抑制疾病，即，阻止其发展；或者(c)减轻或改善疾病的影响，即，引起疾病的影响消退。在一个实施方式中，治疗实现减少受体受试者的恶性淋巴细胞的数量的结果。
术语“受试者”是指患有需要通过本方法治疗的疾病的任何动物。除了灵长类动物例如人以外，还可以使用本发明的方法治疗多种其他哺乳动物。例如，可以治疗包括但不限于牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、豚鼠、大鼠或其他牛科、羊科、马科、犬科、猫科、啮齿动物科或鼠科物种的哺乳动物。
术语“有效量”是指将引起由研究者、兽医、医生或其他临床医生寻求的组织、系统、动物或人的生物学或医学反应的CD83结合蛋白的量。
在治疗或预防淋巴瘤中，合适的剂量水平通常为每kg患者体重每剂量约0.01mg至50mg。优选地，剂量水平为每剂量约0.1mg/kg至约25mg/kg，更优选地为每剂量约0.5mg/kg至约10mg/kg。合适的剂量水平可以是每剂量约0.01mg/kg至25mg/kg、每剂量约0.05mg/kg至10mg/kg、或每剂量约0.1mg/kg至5mg/kg。在该范围内，剂量可以是每剂量0.05mg/kg至0.5mg/kg、0.5mg/kg至5mg/kg、或5mg/kg至5mg/kg。剂量可以施用一次或多次。
应当理解的是，对于任何特定患者而言，具体的剂量水平和剂量频率可以变化，并且将取决于多种因素，所述多种因素包括所采用的具体化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用时长、年龄、体重、总体健康状况、性别、饮食、给药方式和时间、排泄率、药物组合、特定疾病的严重程度以及接受治疗的宿主。
在一些实例中，使用剂量递增方案，在该方案中，最初以比后续剂量中使用的剂量更低的剂量来施用CD83结合蛋白或其他活性成分。该剂量方案在受试者最初遭受不良事件的情况下是有用的。
在受试者对治疗没有充分反应的情况下，可以在一周内多次给药。或者或另外，可以施用增加的剂量。
可以通过适当的途径将一个或多个CD83结合蛋白单独或与另一药物或试剂组合(在与另一药物或试剂组合之前、同时或之后)施用于受试者。例如，本公开的CD83结合蛋白可以与例如一个或多个试剂比如通常用于治疗淋巴瘤的一个或多个化学治疗剂组合施用。适于治疗淋巴瘤的化学治疗剂的实例包括阿霉素、博来霉素、长春碱、去卡巴嗪(decarbazine)、依托泊苷、环磷酰胺、长春新碱、甲基苄肼、卡莫司汀、依托泊苷、阿糖胞苷、美法仑、苯丁酸氮芥、吉西他比(gemcitabibe)、顺铂或其组合。用于治疗淋巴瘤的化学治疗药物组合包括ABVD(阿霉素、博来霉素、长春碱和达卡巴嗪)、ChlVPP(苯丁酸氮芥、长春碱、甲基苄肼和泼尼松)、ESHAP(依托泊苷、甲基强的松龙、阿糖胞苷和顺铂)、BEAMP(卡莫司汀、依托泊苷、阿糖胞苷和美法仑)、BEACOPP(博来霉素、依托泊苷、阿霉素、环磷酰胺、长春新碱、甲基苄肼和泼尼松龙)。
在一些实施方式中，CD83结合蛋白可以与一个或多个可以有效治疗淋巴瘤的其他结合蛋白组合施用。例如，CD83结合蛋白可以与PD-1和/或PD-L1结合蛋白比如抗PD1和/或抗PD-L1抗体组合(组合之前、同时或之后)施用。抗PD1或抗PD-L1抗体的实例在本领域中是已知的，并且包括例如纳武单抗(Nivolumab)(Bristol-Myers Squibb)、派姆单抗(Pembrolizumab)(Merck)和阿特珠单抗(Atezolizumab)(Roche)。
诊断和评估
CD83结合蛋白可以用于诊断或评估淋巴瘤。
一方面，本发明提供了一种诊断受试者的淋巴瘤的方法，该方法包括确定受试者的血清中的sCD83的水平。相对于未患有淋巴瘤的受试者的CD83的水平，患有淋巴瘤的受试者的血清中的sCD83的水平升高。
另一方面提供了一种对淋巴瘤的严重程度或阶段进行诊断或评估的方法，该方法包括确定受试者的血清中的sCD83的水平，以及将受试者的血清中的sCD83的水平与未患有淋巴瘤或患有已知严重程度的淋巴瘤的受试者的sCD83的水平进行比较。
另一方面提供了一种确定受试者是否对淋巴瘤的治疗有反应的方法，该方法包括在治疗之前、期间和/或之后确定受试者的血清中的sCD83的水平，以及将治疗期间和/或之后的sCD83的水平与治疗之前的sCD83的水平进行比较，其中，当治疗期间和/或之后的sCD83的水平相对于治疗之前的sCD83的水平降低时受试者对治疗有反应。
如实例中所描述的：
-CD83抗体结合HL淋巴结活检样品中的肿瘤细胞；
-HL患者的血清含有分泌的CD83(sCD83)；并且
-患者血清中sCD83的水平与临床反应相对应。
发明人已经发现，患者的血清中分泌的CD83的水平与淋巴瘤的严重程度相关。如实例中所描述的，与未患有淋巴瘤的受试者相比，患有霍奇金淋巴瘤的受试者表现出升高的sCD83水平。此外，与治疗之后的sCD83血清水平相比，患有霍奇金淋巴瘤的受试者在化疗治疗以减少淋巴瘤之前在其血清中具有较高的sCD83水平，这表明血清中sCD83的降低与疾病的严重程度相关。
可以用本公开的CD83结合蛋白例如缀合至本文所论述的可检测标记的CD83结合蛋白进行以下测定。用本文中所描述的测定法来检测CD83可用于诊断或预测病症。
免疫测定是用于诊断受试者的病症或者检测样品中的CD83的示例性测定形式。本公开内容设想任何形式的免疫测定，包括Western blotting、酶联免疫吸附测定(ELISA)、荧光联免疫吸附测定(FLISA)、竞争测定、放射免疫测定、侧向流免疫测定、流通式免疫测定、电化学发光测定、基于比浊法的测定、基于浊度分析的测定和基于荧光活化细胞分选(FACS)的测定。
合适的免疫测定的一种形式是例如ELISA。
在一种形式中，这种测定法涉及将CD83结合蛋白固定到固体基质上，所述固体基质例如聚苯乙烯或聚碳酸酯微孔或量油尺、膜或玻璃载体(例如，载玻片)。然后使测试样品与CD83结合蛋白直接接触，并且结合或捕获样品中的CD83。接下来洗涤以除去样品中的任何未结合的蛋白质后，使在不同表位上与CD83结合的蛋白质与捕获的CD83直接接触。这种检测蛋白通常用可检测的报告分子标记，例如在ELISA的情况下用酶(例如辣根过氧化物酶(HRP))、碱性磷酸酶(AP)或β-半乳糖苷酶标记。或者，可以使用与检测蛋白结合的第二标记蛋白。接下来洗涤除去任何未结合的蛋白质，在ELISA的情况下通过添加底物(例如过氧化氢、TMB或甲苯胺、或5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷(x-gal))来检测可检测的报告分子。当然，固定化(捕获)蛋白和检测蛋白可以以相反的方式使用。
然后，使用标准曲线确定样品中抗原的水平，该标准曲线是使用已知量的标记物或者通过与对照样品进行比较而生成的。
以上所描述的测定法很容易修改以使用化学发光或电化学发光作为检测的基础。
对本领域技术人员而言明显的是，基于免疫吸附测定的其他检测方法可用于本公开的实施。例如，基于上文描述的免疫吸附方法，其使用放射性标记物用于检测、或使用金标记物(例如胶体金)用于检测、或使用脂质体例如包封NAD+用于检测、或使用吖啶连接的免疫吸附测定。在本公开的一些实例中，使用表面等离子体共振检测器或生物发光法(例如，BIAcoreTM、GE Healthcare、Piscataway、NJ)、流通装置(例如，如US7205159中所描述的)、微纳米免疫测定装置(例如，如US7271007中所描述的)、侧向流动装置(例如，如US20040228761或US20040265926中所描述的)、荧光偏振免疫测定(FPIA，例如如US4593089或US4751190中所描述的)、或免疫比浊测定法(例如，如US5571728或US6248597中所描述的)来确定CD83的水平。
诊断或评估淋巴瘤的方法还可以包括治疗淋巴瘤的步骤。在一个实施方式中，使用本文中所描述的治疗淋巴瘤的方法来治疗淋巴瘤。
本文还公开了一种包含本文中所描述的CD83结合蛋白的试剂盒，该试剂盒通常包含用于治疗或诊断淋巴瘤的说明书。在一个实施方式中，所述试剂盒在一个或多个容器中包含CD83结合蛋白。在另一实施方式中，所述试剂盒在一个或多个容器中包含本文中所描述的CD83结合蛋白并包含一种或多种可用于治疗淋巴瘤的其他治疗剂。在另一实施方式中，所述试剂盒在一个或多个容器中包含本文中所描述的CD83结合蛋白并包含一种或多种其他诊断部分。
在整个说明书中，除非另有明确说明或上下文另有要求，否则对单个步骤、物质组成、步骤组或物质组成组的引用应当视为包含一个或多个(即，一个或多个)那些步骤、物质组成、步骤组或物质组成组。因此，除非上下文另外明确指出，否则如本文所使用的单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数。例如，对“一个”的引用包括单个以及两个或多个；对“一种”的引用包括单种以及两种或多种；对“该”的引用包括单个(种)以及两个(种)或多个(种)等等。
在整个说明书中，除非上下文由于表达语言或必要暗示而另外需要，否则词语“包含(comprise)”或者诸如“包含(comprises)”或“包含(comprising)”之类的变型以包含性含义使用，即，指定所陈述的特征的存在但不排除在本发明的多种实施方式中的另外特征的存在或增加。
除非另外具体说明，否则本文中所描述的本公开的每个实例将作必要的修正后适用于每个其他实例。
本领域技术人员将理解的是，本文的公开易于进行除具体描述的那些以外的变化和修改。应当理解的是，本公开包括所有这样的变化和修改。本公开还包括本说明书中单独或共同地提及或指出的所有步骤、特征、组合物和化合物、以及所述步骤或特征的任何和所有组合或者所述步骤或特征中的任何两个或更多个步骤或特征。
本公开不限于本文中所描述的具体实例的范围，所述具体实例仅旨在示例的目的。功能等效的产品、组合物和方法显然在本公开的范围内，如本文中所描述的那样。
实施例
材料和方法
淋巴瘤组织切片和血浆样品
根据赫尔辛基宣言，经悉尼地方卫生区(SLHD)人类研究伦理委员会(HREC)批准后，对从初始诊断的35例HL、20例DLBCL和21例MCL患者获得的存档石蜡包埋的淋巴结活检进行分析。在WHO/REAL分类下，35例HL患者的组织学诊断为结节性硬化、混合细胞性、富含淋巴细胞的经典、未指明的经典或结节性淋巴细胞为主的HL(Swerdlow等.Blood.2016；127(20)：第2375-2390页)。SLHD HREC批准了在诊断时和化疗期间从6例HL和3例DLBCL患者中收集的血浆样品。在HL患者治疗2-3个周期后进行正电子发射断层扫描(PET)。MCL细胞系Mino(
Figure BDA0002455061000000211
CRL3000TM)购自ATCC。DLBCL系Karpass-1106p购自Cellbank澳大利亚。
人血细胞和细胞系培养
经SLHD HREC批准，从健康供体(HD)收集静脉血。通过在Ficoll-Paque-PLUS(GEHealthcare)上离心来分离人PBMC。根据供应商的说明，使用EasySep人T细胞分离试剂盒(STEMCELL Technologies)从PBMC中分离出T细胞。这项研究中使用的细胞系是HL细胞系KM-H2、L428和HDLM-2(来自德国科隆大学的Volker Diehl教授的礼物)。HL-60细胞系获自克赖斯特彻奇血液学研究组。在整个实验过程中，将含有10％胎牛血清、2mM glutaMAXTM、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素、1mM丙酮酸钠、10mM HEPES、10μMβ-巯基乙醇(ThermoFisher Scientific)的完全RPMI培养基用于细胞培养。
流式细胞术
使用了以下抗体：CD3-Alexa Fluor(AF)700、CD4-藻红蛋白(PE)-CF594、CD15-紫罗兰(V)450、CD19-V450、CD20-V421、CD30-PE、CD40-PE-Cy7、CD279(PD-1)-亮紫(BV)786、CD274(PD-L1)-PE-Cy7(均来自BD Biosciences)、CD25-BV421和CD107-PE-Cy7(Biolegend)。小鼠抗人CD83单克隆抗体(mAb)、HB15a-异硫氰酸荧光素(FITC)获自Beckmanand Coulter，HB15e-FITC获自BD Biosciences。3C12C是选自噬菌体展示文库并通过轻链改组被进一步工程改造以改善亲和力的人IgG1抗人CD83mAb(在WO2014/117220中描述)。亚型对照抗体包括小鼠IgG1κ-FITC、小鼠IgG2b-FITC(BD Biosciences)和人IgG1κ(SigmaAldrich)。在Fortessa X20流式细胞术(BD Biosciences)上收集数据，并且使用FlowJoV9&10软件(TreeStar)进行分析。
免疫荧光染色
将KM-H2、L428或HDLM-2细胞(105个细胞)细胞离心到赖氨酸包被的显微镜载玻片上。将细胞固定并用丙酮在-20℃下透化过夜。随后在PBS/1％BSA中再水合，并且用10％山羊血清(Sigma Aldrich)封闭。用一级抗体：HB15a(Beckman and Coulter)抗体、HB15e(STEMCELL Technologies)抗体或3C12C抗CD83抗体对细胞进行染色，然后用山羊抗小鼠IgG-AF647(对于HB15a、HB15e)或山羊抗人IgG-AF488(对于3C12C)(Thermo FisherScientific)进行染色。用4'，6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐(DAPI，Thermo FisherScientific)对细胞核进行染色。使用激光扫描共聚焦显微镜(Leica SP8)观察细胞，并使用Image J(美国国立卫生研究院)产生合成图像。
免疫组织化学
对来自HL、MCL或BLBCL患者或非人类灵长类动物的人淋巴结的福尔马林固定石蜡包埋的活检组织的3μm切片进行免疫组织化学双重染色。所使用的一级抗体是小鼠抗人类CD20(Dako)、CD83 mAb(F5，圣克鲁斯生物技术)、CD30(Dako)，并且使用邦德聚合物精细检测试剂盒(Bond Polymer Refine Detection kit)在Leica Bond III Autostainer(LeicaBiosystems)上进行染色以用于用3,3'-二氨基联苯胺(DAB)进行可视化。使用OlympuslabSens软件(Olympus)并用具有Olympus PP71相机的Olympus BX51显微镜拍摄图像。
吞噬作用分析
KM-H2细胞与来自人PBMC的纯化的CD3+T细胞按1:5的比例培养4小时。使用HB15amAb通过流式细胞术分析了CD83在T细胞上的表达。对于荧光成像，KM-H2细胞用CellVueClaret远红外荧光细胞接头试剂盒(Sigma-Aldrich)标记，并与CD3+T细胞以5:1的比例共培养4小时。然后将细胞用生物素化的小鼠抗人CD3 mAb(BD Bioscience)和链霉亲和素-AF488(Thermo Fisher Scientific)进行染色。在一些实验中，0.4μm的transwell小室(Corning)用于在培养期间将T细胞与KM-H2细胞分离。培养4小时后，通过流式细胞术分析CD83在T细胞上的表达。
T细胞增殖分析
从人PBMC分离的T细胞用5nM羧基荧光素N-羟基琥珀酰亚胺酯(CFSE；Sigma-Aldrich)来标记，并且在来自KM-H2细胞的上清液存在的情况下用抗CD2/CD3/CD28T细胞活化/扩增试剂盒(Miltenyi Biotec)刺激5天。在Fortessa(BD Bioscience)上通过流式细胞术对细胞进行分析。使用FlowJo V9(TreeStar)对增殖指数(PI)和分裂指数(DI)进行分析。
sCD83和IL-10分析
根据制造商的说明，通过ELISA(Sino Biological Inc)对KM-H2、L428的培养上清液中或者HL患者的血清中的人sCD83进行分析，其检测限为3.9pg/ml。简要地，将96孔板用所提供的CD83捕获mAb包被过夜。将培养上清液、患者血浆或重组CD83-Fc标准品(来自sCD83 ELISA试剂盒)孵育2小时，并且使用小鼠抗人CD83-HRP和四甲基联苯胺(Sigma-Aldrich)底物溶液对sCD83进行检测，其在酶标仪(PerkinElmer)上以450nM读取。通过流式微珠阵列(CBA；BD Bioscience)对细胞系上清液中的IL-10水平进行分析。
抗体依赖性细胞毒性(ADCC)测定
将KM-H2细胞、L428细胞或HDLM-2细胞用作靶细胞，用25μM钙黄绿素-AM(LifeTechnologies)在37℃下标记30分钟，并且将人PBMC用作效应细胞。将效应细胞和靶细胞(5x103/孔)(E:T比例为25:1)与各种浓度的3C12C或对照抗CD20抗体利妥昔单抗(Roche)在37℃一式三份共孵育3小时。收集上清液以使用ELISA读数器(Perkin Elmer)测量释放的钙黄绿素(激发485nM，发射538nM)。使用下式计算特异性细胞裂解的百分比：特异性裂解百分比＝[E/T(样品)-E/T(自发)]/[T(总)-T(自发)]x 100，其中，T(自发)＝仅靶标，E/T(自发)＝效应子+靶标，T(总)＝靶标+裂解。
3C12C与单甲基澳瑞他汀E的缀合(3C12C-MMAE)以及对CD83+细胞系的细胞毒性
为了生产3C12C-MMAE，使用与Brentuximab Vedotin28相似的方法，从澳瑞他汀E制备溶酶体组织蛋白酶B可裂解的自解离性(self-emolative)二肽(ValCit)马来酰亚胺接头，以用于缀合至部分还原的3C12C。通过将各种浓度的缀合物与CD83+淋巴瘤细胞或CD83-(对于特异性)HL-60细胞系孵育3天，在体外分析3C12C-MMAE对HL细胞的细胞毒性活性。使用流式细胞术通过7-氨基放线菌素D(7AAD，Thermo Fisher Scientific)染色评估生存力。
PCR分析
用TRIzol(Life Technologies)提取RNA，并且使用SuperScript
Figure BDA0002455061000000231
First-Strand Synthesis试剂盒和随机六聚体引物(Thermo Fisher Scientific)按照制造商的方案从100ng RNA转录cDNA。使用人CD83外显子2正向引物5'-AGGTTCCCTACACGGTCTCC-3'和外显子5反向引物5'-AAGATACTCTGTAGCCGTGCAAAC-3'通过PCR来扩增指定免疫群体的cDNA。针对GAPDH管家基因的引物5'-ATGGGGAAGGTGAAGGTCGGA-3'(正向)和5'-AGGGGCCATCCACAGTCTTCTG-3'(反向)用作内源对照。在2％琼脂糖(Thermo FisherScientific)凝胶上分离扩增的片段。
3C12C在非人类灵长类动物中的试验
SLHD动物研究伦理委员会批准了对5种非人类灵长类动物(Papio Hamadryas狒狒)的研究，这些灵长类动物在第0天、7天、14天和21天接受了静脉注射人-IgG(Intragam，CSL)(10mg/kg)或3C12C mAb(1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、10mg/kg)。使用CELL-DYN蓝宝石自动血液计数器(Abbott)进行血细胞计数。在Fortessa X20流式细胞分析仪(BDBiosciences)上分析PBMC的免疫细胞群，所述免疫细胞群包括DC细胞、T细胞和B细胞。通过使用Cobas 8000(Roche)对每周收集直至第56天的血清样品中的ALP、AST和肌酐(Cr)进行测量来评估肝功能和肾功能。在第28天从3C12C(10mg/kg)或人IgG(10mg/kg)处理的动物取出淋巴结以进行免疫组织学染色。
统计分析
使用Prism 6.0(GraphPad软件)进行统计分析。除非另有说明，否则显示平均值的标准误差。如所描述的，使用Mann-Whitney t-检验或具有Greenhouse-Geisser校正的单因素ANOVA检验进行多次比较。其中p<0.05的差异被认为是显著的。
结果
1.CD83在HL细胞系和HL患者的淋巴结活检中的HRS上表达
使用小鼠抗人抗体HB15a、HB15e和潜在的治疗性人抗人CD83抗体3C12C对CD83的表达进行分析。通过流式细胞术对分别用HB15a-FITC抗CD83 mAb、HB15e-FITC抗CD83 mAb或3C12C-FITC抗CD83 mAb进行染色的KM-H2淋巴瘤细胞系、L428淋巴瘤细胞系和HDLM-2淋巴瘤细胞系上的CD83的表达进行分析，其中，KM-H2细胞表达用所有抗体染色的最多的细胞表面CD83，而L428和HDLM-2系表达较少的CD83。所有三个系都表达CD30(图1A)。CD15、CD25、CD40和CD274(PD-L1)在KM-H2细胞上表达(图1B)。借助于KM-H2细胞上的共焦CD83染色并借助于三个HL系中通过RT-PCR检测CD83mRNA转录物而证实了该数据(图8)。。
接下来，针对35例HL患者的石蜡包埋的淋巴结活检对CD83表达进行分析。HRS细胞被鉴定为CD30+(图2A)。应当指出的是，HL患者在HRS细胞上的活检显示：8/35(22.9％)表达高水平的CD83(>90％呈阳性)、21/26(60％)表达中度水平的CD83(10％-90％呈阳性)、并且6/35(17.1％)表达低水平的CD83(<10％呈阳性)(图2C)。亚型分析显示，结节性硬化症(NS)HL中81％的HRS细胞为CD83高或中度，而混合细胞性(MC)HL中85.7％为CD83高或中度。在I-II阶段大多数(90％)HL为CD83高或中度，在III-IV阶段61.5％HL为CD83高或中度。
还针对MCL患者和DLBCL患者的石蜡包埋的淋巴结活检对CD83表达进行分析。来自DLBCL患者的活检显示CD83和CD20高水平表达以及CD3的低水平表达(图2B)。来自套细胞淋巴瘤患者的活检也显示出高水平的CD83表达(图13)。
CD83从HL细胞胞啃到T细胞
先前发现CD83能够通过胞啃作用从DC的膜转移至T细胞(Ju X等人，Journal ofimmunology 2016；197(12)：第4613-4625页)。观察到在HL细胞系与T细胞之间发生类似的胞啃作用。当将这两种细胞类型共培养4小时时，T细胞上的CD83表面表达增加至5％-12％(图3A；p＝0.004)，而在没有KM-H2细胞的情况下在T细胞上未检测到CD83。此外，在培养期间用0.4μm的transwell过滤器将T细胞和KM-H2细胞分离防止了胞啃作用(图3B)。为了证实胞啃作用涉及膜转移，用荧光染料(CellVue Claret)标记KM-H2细胞并与CD3+T细胞共培养。通过流式细胞术(图3C)和共聚焦显微镜确认细胞膜从KM-H2细胞转移到T细胞。在4小时内KMH2细胞和T细胞共培养期间，CD4+和CD8+T细胞比例没有差异。然而，与CD83-T细胞(p＝0.048)和在没有KM-H2的情况下培养的T细胞(p＝0.005)相比，CD83+T细胞表达显著更高水平的PD-1(图3D)。在胞啃CD83+CD4+T细胞上PD-1的增加显著高于非胞啃CD83-T细胞(p＝0.049)。相比之下，在CD83+T细胞与CD83-CD8+T细胞之间没有观察到PD-1表达的差异(p＝0.185)，尽管KM-H2共培养的CD4+T细胞和CD8+T细胞都具有比单独培养的T细胞更高的PD-1表达(图3E、图3F)。CD83+CD4+T细胞具有与非胞啃CD4+T细胞相同比例的Treg(图9)。
HL细胞系的上清液抑制T细胞增殖
在KM-H2的上清液中(460.6±11.8pg/ml)和L428的上清液中(200.8±53.2pg/ml)发现高水平的sCD83，与其高水平表面CD83相一致(图4A)。HL患者在诊断时血清sCD83(360.5±54.82pg/ml，n＝10)显著高于健康供体(HD)的血清sCD83(52.6±9.5pg/ml，图4A)。有趣的是，所有三种HL细胞系的上清液中都存在非常低的IL-10水平(图10)。
然后，测试了KM-H2细胞上清液对T细胞功能的影响。含有sCD83的KM-H2上清液以剂量依赖的方式抑制T细胞增殖(图4B-图4E)。看起来KM-H2上清液仅抑制CD8+T细胞的增殖(p＝0.09)，而未抑制CD4+T细胞的增殖(p＝0.732)(图4B)。抗CD83抗体，即，3C12C的施用部分地消除了KM-H2上清液的抑制作用(图4B、图4C和图4D)。单独的3C12C对T细胞增殖没有影响(图4E)。
HL患者血清sCD83降至正常水平且与PET扫描的完全或部分反应相关
监测了六例患者在连续化疗期间HL患者的循环sCD83的变化。所有患者都接受3个-6个周期的化疗，并且通过PET-扫描五个患者实现完全应答(CR)且一个患者实现部分应答(PR)(图5)。血清sCD83下降，当患者具有通过PET-扫描在患者#1和患者#2中记录的对化疗的CR时，血清sCD83恢复到正常水平。在患者#3和患者#6中，当PET-扫描显示CR时，血清sCD83水平仍然升高，但在一个另外的化疗周期后正常化。患者#4在周期5之前通过PET扫描显示PR，然而血清sCD83水平仅在周期#5期间开始降低，在周期6中达到正常范围，与CR相一致。患者#5中的PET扫描在周期2后显示进行性疾病(PD)，但在另2个化疗周期后显示PR，此时对应的sCD83降低至正常。
3C12C通过ADCC杀死HL细胞系
在三个HL系KM-H2、L428和HDLM-2上测试了抗CD83 mAb，即，3C12C的ADCC活性。尽管3C12C有效杀死了KM-H2和L428，但HDLM-2对其具有相对抗性(图6A)。为了研究进一步潜在的治疗应用，生成了3C12C毒素缀合物(3C12C-MMAE)。在体外，与CD83-HL-60细胞相比，3C12C-MMAE更有效地杀死CD83+KM-H2细胞(图6B)。
3C12C的施用在小鼠和非人类灵长类动物(NHP)中是安全的
在非人类灵长类动物中进行了3C12C的剂量递增研究。五个狒狒被静脉注射3C12C(在第0天、7天、14天和21天分别为1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg)。注射后84天的随访期间未发现不良临床事件。每周评估血液计数和生化指标，并通过流式细胞术或免疫组织学方法监测不同的免疫细胞群。施用3C12C不会影响血细胞计数(WBC、RBC和血小板)、肝(ALP和AST)或肾(肌酐)功能(图12)。直至第84天，总T细胞数、CD4+/CD8+T细胞的比例均保持正常(数据未显示)。然而，有证据表明3C12C的功效在于其他CD83+靶细胞(活化的DC和活化的B细胞)减少。如通过流式细胞术确定的，对小鼠静脉内施用3C12C导致血液和淋巴结B细胞减少(图7A)。另外，与对照人IgG动物(10mg/kg；图7B)相比，在3C12C处理的动物(10mg/kg)中淋巴结中的B细胞面积减少。
MCL和FL CD83染色
MCL的抗CD83抗体染色显示强烈的弥漫性膜和细胞质染色。另外，就像DLBCL一样，斑点状染色很强(图13[MCL])。52.2％的MCL活检样品表达高或中等水平的CD83(n＝21)。FL示出了滤泡周围和滤泡内的反应性B细胞的抗CD83染色。没有FL的弥漫性染色(图13[FL])。
3C12C-MMAE杀死DLBCL细胞系和MCL细胞系
为了确定3C12C-MMAE缀合物对DLBCL细胞系和MCL细胞系的影响，将DLBCL系KARPASS-1106P或MCL系Mino细胞与不同浓度的3C12C-MMAE一起孵育72小时，通过流式细胞术计数活细胞。KM-K2细胞用作对照。图14示出了细胞系Mino、KM-H2和Karlasss中的每一者的活细胞数随抗体缀合物浓度增加、以及计算出的半数最大抑制浓度(IC50)的图。与HL系KM-H2类似，DLBCL系和MCL系在培养72小时后被3C12C-MMAE有效杀死(图14)。
概述：
·CD83在HL细胞系和原发性HL组织、DLBCL组织和MCL组织上的高表达表明CD83是良好的治疗靶标。
·HL肿瘤细胞表达CD83以及一些周围的T细胞可以从肿瘤细胞获取表面CD83分子。80％的CD83+T细胞是具有高表达的共抑制分子例如PD-1的CD4+T细胞。HL患者的浸润性T淋巴细胞对抗原反应低下。PD-1和PD-1配体的相互作用有助于霍奇金淋巴瘤的免疫抑制微环境。在体外从KM-H2细胞转移到T细胞的CD83与发现CD83在LN活检样品的淋巴细胞上的表达相一致，特别是在CD83高表达患者中尤为如此。此类CD83+T细胞可能变得衰竭或凋亡(如PD-1高)，这可能是KM-H2细胞通过CD83逃避免疫监视的另一种机制。这表明CD83靶标疗法与PD-1抑制剂的组合可能会进一步增强临床反应。
·HL细胞的上清液(SN)抑制T细胞增殖(KM-H2的SN不诱导Treg，数据未显示)，HL细胞向SN分泌高sCD83，并且在HL患者血清中检测到的sCD83高于健康供体；3C12C通过结合sCD83部分地消除了这种抑制。来自SN的sCD83在这种抑制作用中起主要作用，但在IL-10中则不起作用。3C12C在体外对Treg的抑制功能没有影响，尽管3C12C可能诱导瞬时Treg(来自NHP试验数据)，这可能是来自非活化DC的Treg诱导的间接作用，而3C12C在体外和体内缺失活化的DC。相比之下，PD-1抑制剂(纳武单抗(Nivolumab))在接受纳武单抗的小鼠中直接限制CD8+T细胞的Treg抑制功能，并增加CD8/Treg和CD4Teffs/Treg的比例。
·来自SN的其他细胞因子或可溶性因子例如sCD30也可能有助于抑制作用。已经显示CD30分子(sCD30)的85kDa可溶形式在体外和体内被CD30+细胞释放。活化的T细胞，尤其是CD4+T细胞也分泌sCD30。
·HL患者的sCD83水平与疾病状况和治疗反应相关。因此，sCD83水平可能是诊断和预后的生物标志物。
·抗CD83抗体3C12C(及CD83mAb药物复合物)在体外杀死HRS细胞、DLBCL细胞和MCL细胞。在NHP试验中，人抗CD83 mAb 3C12C是安全的，而对血细胞计数、肝功能和肾功能无副作用，其功效和安全性使得CD83抗体成为HL的有效治疗抗体的另一候选物。
序列表
<110> 基拉生物科技私人有限公司
<120> 治疗方法
<130> FSP1V200259XN
<160> 59
<170> PatentIn version 3.5
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<223> 轻链
<400> 18
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu His Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Asp Arg Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 19
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 轻链
<400> 19
Glu Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Leu Ser Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 20
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 轻链
<400> 20
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr His Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Cys Asn Ser Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 21
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 重链
<400> 21
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg His Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 22
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 1F7的VH氨基酸序列
<400> 22
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Ala Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Val Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Gly Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Ala Ala Ala
210 215 220
<210> 23
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 1F7的轻链VL氨基酸序列
<400> 23
Leu Thr Gln Pro Pro Pro Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr
1 5 10 15
Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn
20 25 30
Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly
35 40 45
Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ala Ser Lys
50 55 60
Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp
65 70 75 80
Glu Ala His Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu Asn Gly Gly
85 90 95
Val Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Leu Gly
100 105
<210> 24
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> hFab4.1的轻链VL氨基酸序列
<400> 24
Val Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr
1 5 10 15
Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Thr Asn Pro Val Asn
20 25 30
Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Thr
35 40 45
Thr Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys
50 55 60
Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp
65 70 75 80
Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Leu
85 90 95
Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105
<210> 25
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> hFab4.2的轻链VL氨基酸序列
<400> 25
Met Thr His Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala
1 5 10 15
Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Lys
20 25 30
Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Gln Pro
35 40 45
Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser Leu Gln Leu
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 26
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> hFab4.3的轻链VL氨基酸序列
<400> 26
Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala
1 5 10 15
Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ile His Ser Asp Gly Asn
20 25 30
Thr Tyr Leu Asp Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg
35 40 45
Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Ile Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala Thr His Trp
85 90 95
Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
<210> 27
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> hFab4.4的轻链VL氨基酸序列
<400> 27
Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala
1 5 10 15
Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Asp Ser Ala Gly Asn
20 25 30
Thr Phe Leu His Trp Phe His Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg
35 40 45
Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly Thr His Trp
85 90 95
Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
<210> 28
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> hFab4.5的轻链VL氨基酸序列
<400> 28
Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala
1 5 10 15
Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val Asp Ser Asp Gly Asn
20 25 30
Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg
35 40 45
Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly Thr His Trp
85 90 95
Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
<210> 29
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> hFab4.7的轻链VL氨基酸序列
<400> 29
Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala
1 5 10 15
Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn
20 25 30
Met Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg
35 40 45
Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala Thr Gln Pro
85 90 95
Thr Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
<210> 30
<211> 105
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> hFab4.8的轻链VL氨基酸序列
<400> 30
Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val
1 5 10 15
Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp
20 25 30
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala
35 40 45
Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe
65 70 75 80
Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr Ser Trp Pro Arg Thr Phe Gly
85 90 95
Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 31
<211> 105
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> hFab4.9的轻链VL氨基酸序列
<400> 31
Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly His Pro Val
1 5 10 15
Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Ile Ser Tyr Leu Asn Trp
20 25 30
Tyr His Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala
35 40 45
Ser Ile Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asn Phe
65 70 75 80
Ala Ser Tyr Tyr Cys Gln His Thr Asp Ser Phe Pro Arg Thr Phe Gly
85 90 95
His Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 32
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> hFab4.10的轻链VL氨基酸序列
<400> 32
Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Gly Val Thr
1 5 10 15
Ile Ser Cys Arg Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Asn Asn Val Val Asn
20 25 30
Trp Tyr Gln His Val Pro Gly Ser Ala Pro Lys Leu Leu Ile Trp Ser
35 40 45
Asn Ile Gln Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys
50 55 60
Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp
65 70 75 80
Glu Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Val Trp Asp Asp Gly Leu Ala Gly Trp
85 90 95
Val Phe Gly Gly Gly Thr Thr Val Thr Val Leu Ser
100 105
<210> 33
<211> 105
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> hFab4.12的轻链VL氨基酸序列
<400> 33
Met Thr Gln Ala Pro Val Val Ser Val Ala Leu Glu Gln Thr Val Arg
1 5 10 15
Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Ala Ile Tyr Tyr Asp Phe Trp Tyr
20 25 30
Gln His Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly Lys Asn
35 40 45
Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro His Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Asn
50 55 60
Thr Asp Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp
65 70 75 80
Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Trp Val Phe Gly
85 90 95
Gly Gly Thr Asn Leu Thr Val Leu Gly
100 105
<210> 34
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> hFab4.18的轻链VL氨基酸序列
<400> 34
Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala
1 5 10 15
Ser Ile Ser Cys Lys Ser Asn Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn
20 25 30
Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Arg Arg
35 40 45
Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Asn Arg Val
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly Thr Gln Trp
85 90 95
Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys Arg
100 105 110
<210> 35
<211> 237
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> IF7重链氨基酸序列
<400> 35
Gln Pro Ala Met Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Ala Val
1 5 10 15
Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
20 25 30
Thr Phe Ser Thr Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
35 40 45
Gly Leu Glu Trp Val Ala Ala Val Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr
50 55 60
Tyr Ala Asp Phe Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro
65 70 75 80
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr
85 90 95
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Gly Leu Asp Ile Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Ala
210 215 220
Ala Ala His His His His His His Gly Pro Gln Ile Arg
225 230 235
<210> 36
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> IF7轻链的氨基酸序列
<400> 36
Leu Thr Gln Pro Pro Pro Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr
1 5 10 15
Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn
20 25 30
Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly
35 40 45
Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ala Ser Lys
50 55 60
Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp
65 70 75 80
Glu Ala His Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu Asn Gly Gly
85 90 95
Val Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln
115 120 125
Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly
130 135 140
Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly
145 150 155 160
Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala
165 170 175
Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser
180 185 190
Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val
195 200 205
Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 37
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 3C12的CDR1的共有序列
<220>
<221> X
<222> (2)..(2)
<223> A 或 T
<220>
<221> X
<222> (7)..(7)
<223> K 或 S 或 R
<220>
<221> X
<222> (8)..(8)
<223> N 或 S
<220>
<221> X
<222> (9)..(9)
<223> Y 或 H 或 W
<220>
<221> X
<222> (10)..(10)
<223> F 或 L
<400> 37
Arg Xaa Ser Gln Gly Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Ala
1 5 10
<210> 38
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 3C12的CDR2的VL共有序列
<220>
<221> X
<222> (2)..(2)
<223> T 或 A
<220>
<221> X
<222> (4)..(4)
<223> N 或 S 或 T
<400> 38
Ala Xaa Ser Xaa Leu Gln Ser
1 5
<210> 39
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 3C12的CDR3的VL共有序列
<220>
<221> X
<222> (2)..(2)
<223> Q 或 K
<220>
<221> X
<222> (3)..(3)
<223> L 或 V 或 C
<220>
<221> X
<222> (4)..(4)
<223> G 或 N 或 D 或 S
<220>
<221> X
<222> (5)..(5)
<223> A 或 S 或 R
<220>
<221> X
<222> (6)..(6)
<223> Y 或 F 或 A
<220>
<221> X
<222> (8)..(8)
<223> Y 或 L
<400> 39
Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Thr
1 5
<210> 40
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 3C12的VL共有序列
<220>
<221> X
<222> (2)..(2)
<223> I 或 V
<220>
<221> X
<222> (3)..(3)
<223> V 或 Q
<220>
<221> X
<222> (4)..(4)
<223> M 或 L
<220>
<221> X
<222> (10)..(10)
<223> L 或 F 或 S
<220>
<221> X
<222> (15)..(15)
<223> L 或 I 或 V
<220>
<221> X
<222> (20)..(20)
<223> T 或 S
<220>
<221> X
<222> (25)..(25)
<223> A 或 T
<220>
<221> X
<222> (30)..(30)
<223> K 或 S 或 R
<220>
<221> X
<222> (31)..(31)
<223> N 或 S
<220>
<221> X
<222> (32)..(32)
<223> Y 或 H 或 W
<220>
<221> X
<222> (33)..(33)
<223> F 或 L
<220>
<221> X
<222> (39)..(39)
<223> R 或 K
<220>
<221> X
<222> (43)..(43)
<223> A 或 V
<220>
<221> X
<222> (51)..(51)
<223> T 或 A
<220>
<221> X
<222> (53)..(53)
<223> N 或 S 或 T
<220>
<221> X
<222> (66)..(66)
<223> G 或 R
<220>
<221> X
<222> (70)..(70)
<223> E 或 D 或 H
<220>
<221> X
<222> (79)..(79)
<223> Q 或 H
<220>
<221> X
<222> (81)..(81)
<223> E 或 D
<220>
<221> X
<222> (83)..(83)
<223> F 或 I 或 V
<220>
<221> X
<222> (90)..(90)
<223> Q 或 K
<220>
<221> X
<222> (91)..(91)
<223> L 或 V 或 C
<220>
<221> X
<222> (92)..(92)
<223> G 或 N 或 D 或 S
<220>
<221> X
<222> (93)..(93)
<223> A 或 S 或 R
<220>
<221> X
<222> (94)..(94)
<223> Y 或 F 或 A
<220>
<221> X
<222> (96)..(96)
<223> L 或 Y
<220>
<221> X
<222> (100)..(100)
<223> G 或 Q
<220>
<221> X
<222> (103)..(103)
<223> K 或 R
<220>
<221> X
<222> (104)..(104)
<223> L 或 V
<400> 40
Glu Xaa Xaa Xaa Thr Gln Ser Pro Ser Xaa Leu Ser Ala Ser Xaa Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Xaa Ile Thr Cys Arg Xaa Ser Gln Gly Ile Xaa Xaa Xaa
20 25 30
Xaa Ala Trp Tyr Gln Gln Xaa Pro Gly Lys Xaa Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Xaa Ser Xaa Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Xaa Ser Gly Thr Xaa Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Xaa Pro
65 70 75 80
Xaa Asp Xaa Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa
85 90 95
Thr Phe Gly Xaa Gly Thr Xaa Xaa Glu Leu Lys
100 105
<210> 41
<211> 1401
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 3C12重链
<400> 41
atgggatgga gctgtatcat cctcttcttg gtagcaacag ctacaggtgt ccactccgag 60
gtgcagctgc aggagtcggg gggaggcgtg gtccagcctg ggaggtccct gagactctcc 120
tgtgcagcct ctggattcac cttcagtagc tatgctatgc actgggtccg ccaggctcca 180
ggcaaggggc tggagtgggt ggcagttata tcatatgatg gaagcaataa atactacgca 240
gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctg 300
caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gctatgtatt actgtgcgag acactactac 360
tacggtatgg acgtctgggg ccaagggacc acgctcaccg tgtcctccgc ctccaccaag 420
ggcccttccg tgttccctct ggccccttcc tccaagtcca cctccggcgg caccgccgct 480
ctgggctgcc tggtgaagga ctacttccct gagcctgtga ccgtgtcctg gaactctggc 540
gccctgacct ctggcgtgca cacctttcct gctgtcctgc agtcctccgg cctgtactcc 600
ctgtcctccg tggtgaccgt gccttcctcc tccctgggca cccagaccta catctgcaac 660
gtgaaccaca agccttccaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcctaa gtcctgcgac 720
aagacccaca cctgccctcc ctgccctgcc cctgagctgc tgggcggacc ctccgtgttc 780
ctgttccctc ctaagcctaa ggacaccctg atgatctccc ggacccctga ggtgacctgc 840
gtggtggtgg acgtgtccca cgaggatcct gaggtgaagt tcaattggta cgtggacggc 900
gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagcct cgggaagagc agtacaactc cacctaccgg 960
gtggtgtctg tgctgaccgt gctgcaccag gactggctga acggcaagga atacaagtgc 1020
aaggtgtcca acaaggccct gcctgctccc atcgagaaga ccatctccaa ggccaagggc 1080
cagcctcgcg agcctcaggt gtataccctg cctccctccc gggacgagct gaccaagaac 1140
caggtgtccc tgacctgtct ggtgaagggc ttctaccctt ccgatatcgc cgtggagtgg 1200
gagtccaacg gccagcctga gaacaactac aagaccaccc ctcctgtgct ggactccgac 1260
ggctccttct tcctgtactc caagctgacc gtggacaagt cccggtggca gcagggcaac 1320
gtgttctcct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg 1380
tccctgtctc ctggcaagtg a 1401
<210> 42
<211> 702
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 3C12轻链
<400> 42
atgggctggt cctgcatcat cctgtttctg gtggccaccg ccaccggcgt gcactccgag 60
atcgtgatga cccagtctcc atccctcctg tctgcttctt taggagacag agtcaccatc 120
acttgtcggg ccagtcaggg cattaagaat tattttgcct ggtatcagca aagaccaggg 180
aaagccccta agctcctgat ctatgctaca tccaatttgc aaagtggggt cccatcacga 240
ttcagcggca gtggatctgg gacagaattc actctgacaa tcagcagcct gcagcctgaa 300
gattttgcaa cttactattg tcaacaactt ggcgcttacc cactcacttt cggcgggggg 360
accaagctgg aactcaagcg gaccgtggcc gctccttccg tgttcatctt ccctccctcc 420
gacgagcagc tgaagtccgg caccgcctcc gtggtgtgcc tgctgaacaa cttctaccct 480
cgggaggcca aggtgcagtg gaaggtggac aacgccctgc agtccggcaa ctcccaggaa 540
tccgtcaccg agcaggactc caaggactct acctactccc tgtcctccac cctgaccctg 600
tccaaggccg actacgagaa gcacaaggtg tacgcctgcg aagtgaccca ccagggcctg 660
tcctctcccg tgaccaagtc cttcaaccgg ggcgagtgct ga 702
<210> 43
<211> 702
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 3C12.B轻链
<400> 43
atgggctggt cctgcatcat cctgtttctg gtggccaccg ccaccggcgt gcactccgag 60
gttgtgatga cccagtcccc cagcttcctg tccgcctcta tcggcgaccg ggtgtccatc 120
acctgtcgga cctcccaggg catctccaac cacctggcct ggtatcagca gaagcccggc 180
aaggccccca agctgctgat ctacgccgcc tccagcctgc agtccggcgt gccatccaga 240
ttctccggct ccggcagcgg caccgacttc accctgacca tcagctccct gcagcccgag 300
gatatcgcca cctactactg ccagcaggtg aactcctacc cctacacctt cggccagggg 360
acacgactgg agctcaagcg gaccgtggcc gctccttccg tgttcatctt ccctccctcc 420
gacgagcagc tgaagtccgg caccgcctcc gtggtgtgcc tgctgaacaa cttctaccct 480
cgggaggcca aggtgcagtg gaaggtggac aacgccctgc agtccggcaa ctcccaggaa 540
tccgtcaccg agcaggactc caaggactct acctactccc tgtcctccac cctgaccctg 600
tccaaggccg actacgagaa gcacaaggtg tacgcctgcg aagtgaccca ccagggcctg 660
tcctctcccg tgaccaagtc cttcaaccgg ggcgagtgct ga 702
<210> 44
<211> 702
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 3C12C轻链
<400> 44
atgggctggt cctgcatcat cctgtttctg gtggccaccg ccaccggcgt gcactccgag 60
attgtgctga ctcagtcccc ctccagcctg tccgcctccg tgggcgacag agtgaccatc 120
acctgtcggg cctcccaggg catccggaac tacctggcct ggtatcagca gaaacccggc 180
aaggtgccca agctgctgat ctacgccacc tccaccctgc agtccggcgt gccctcccgg 240
ttctctggct ccagatccgg caccgagttc accctgacca tctccagcct gcaccccgag 300
gacttcgcca cctactactg ccagcaggtg gaccggttcc cctacacctt cggccagggg 360
accaaggtgg aactcaagcg gaccgtggcc gctccttccg tgttcatctt ccctccctcc 420
gacgagcagc tgaagtccgg caccgcctcc gtggtgtgcc tgctgaacaa cttctaccct 480
cgggaggcca aggtgcagtg gaaggtggac aacgccctgc agtccggcaa ctcccaggaa 540
tccgtcaccg agcaggactc caaggactct acctactccc tgtcctccac cctgaccctg 600
tccaaggccg actacgagaa gcacaaggtg tacgcctgcg aagtgaccca ccagggcctg 660
tcctctcccg tgaccaagtc cttcaaccgg ggcgagtgct ga 702
<210> 45
<211> 702
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 3C12D轻链
<400> 45
atgggctggt cctgcatcat cctgtttctg gtggccaccg ccaccggcgt gcactccgag 60
atccagatga cccagtcccc ctccagcctg tccgcctctg tgggcgacag agtgaccatc 120
acctgtcggg cctcccaggg catctccagc tggctggcct ggtatcagca gaagcccggc 180
aaggccccca agctgctgat ctacgccgcc agctccctgc agtccggcgt gccatccaga 240
ttctccggct ccggcagcgg caccgagttc accctgacca tctccagcct gcagcccgac 300
gacttcgcca cctactactg ccagaagctg tcctcctacc cctacacctt cggcggaggg 360
accaaggtgg aactcaagcg gaccgtggcc gctccttccg tgttcatctt ccctccctcc 420
gacgagcagc tgaagtccgg caccgcctcc gtggtgtgcc tgctgaacaa cttctaccct 480
cgggaggcca aggtgcagtg gaaggtggac aacgccctgc agtccggcaa ctcccaggaa 540
tccgtcaccg agcaggactc caaggactct acctactccc tgtcctccac cctgaccctg 600
tccaaggccg actacgagaa gcacaaggtg tacgcctgcg aagtgaccca ccagggcctg 660
tcctctcccg tgaccaagtc cttcaaccgg ggcgagtgct ga 702
<210> 46
<211> 702
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 3C12E轻链
<400> 46
atgggctggt cctgcatcat cctgtttctg gtggccaccg ccaccggcgt gcactccgag 60
attgtgctga ctcagtcccc ctccagcctg tccgcctccg tgggcgacag agtgaccatc 120
acctgtcggg cctcccaggg catctccaac tacctggcct ggtatcagca gaaacccggc 180
aaggtgccca agctgctgat ctacgccgcc tccaccctgc agtccggcgt gccatccaga 240
ttctccggct ccggcagcgg cacccacttc accctgacca tctccagcct gcagcccgag 300
gacgtggcca cctactactg ccagaagtgc aactccgccc cctacacctt cggccagggg 360
accaaggtgg aactcaagcg gaccgtggcc gctccttccg tgttcatctt ccctccctcc 420
gacgagcagc tgaagtccgg caccgcctcc gtggtgtgcc tgctgaacaa cttctaccct 480
cgggaggcca aggtgcagtg gaaggtggac aacgccctgc agtccggcaa ctcccaggaa 540
tccgtcaccg agcaggactc caaggactct acctactccc tgtcctccac cctgaccctg 600
tccaaggccg actacgagaa gcacaaggtg tacgcctgcg aagtgaccca ccagggcctg 660
tcctctcccg tgaccaagtc cttcaaccgg ggcgagtgct ga 702
<210> 47
<211> 663
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 1F7的重链Vh区
<400> 47
gaggtccagc tggtacagtc tggtggagcc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt acctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagct gtatcatatg atggaagtaa taaatactat 180
gcagacttcg tgaaggggcg attcaccatc tccagagaca atcccaagaa caccctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgatgac acggccgtat attactgtgc ccgcagaggt 300
ggtcttgata tctggggcca agggaccacg gtcaccgtct caagcgcctc caccaagggc 360
ccatcggtct tccccctggc accctcctcc aagagcacct ctgggggcac agcggccctg 420
ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc 480
ctgaccagcg gcgtccacac cttcccggct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 540
agcagcgtag tgaccgtgcc ctccagcagc ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 600
aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaaagttg agcccaaatc ttgtgcggcc 660
gca 663
<210> 48
<211> 648
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> 1F7轻链
<400> 48
ctgactcagc cacccccagc gtctgggacc cccgggcaga gggtcaccat ctcttgttct 60
ggaagcagct ccaacatcgg aagtaatact gtaaactggt accagcaact cccaggaacg 120
gcccccaaac tcctcattta tggtaatgat cagcggccct caggggtccc tgaccgattc 180
tctgcctcca agtctggcac ctcagcctcc ctggccatca gtgggctcca gtctgaggat 240
gaggctcatt attattgtgc agcatgggat ggcagtctga atggtggtgt gatattcggc 300
ggagggacca aggtgaccgt cctgggtcag cccaaggctg ccccctcggt cactctgttc 360
ccaccctcct ctgaggagct tcaagccaac aaggccacac tggtgtgtct cataagtgac 420
ttctacccgg gagccgtgac agtggcctgg aaggcagata gcagccccgt caaggcggga 480
gtggagacca ccaaaccctc caaacagagc aacaacaagt acgcggccag cagctacctg 540
agcctgacgc ccgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 600
gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt cataataa 648
<210> 49
<211> 648
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> hFab4.1轻链
<400> 49
gtgacgcagc cgccctcagc gtctgggacc cccgggcaga gggtcaccat ctcttgttct 60
gggagcagct ccaacatcgg aactaatcct gtaaactggt accagcagct cccaggaacg 120
gcccccaaac tcctcatcta tactactgat cagcggccct caggggtccc tgaccgcttc 180
tctggctcca agtctggcac ctcagcctcc ctggccatca gtgggctcca gtctgaggat 240
gaggctgatt attactgtgc agcatgggat gacagcctga gtggccttta tgtcttcggg 300
actgggacca aggtcaccgt cctcggtcag cccaaggcca accccactgt cactctgttc 360
ccgccctcct ctgaggagct ccaagccaac aaggccacac tagtgtgtct gatcagtgac 420
ttctacccgg gagctgtgac agtggcctgg aaggcagatg gcagccccgt caaggcggga 480
gtggagacca ccaaaccctc caaacagagc aacaacaagt acgcggccag cagctacctg 540
agcctgacgc ccgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 600
gggagcaccg tggagaagac agtggcccct gcagaatgct cttaataa 648
<210> 50
<211> 651
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> hFab4.2轻链
<400> 50
atgacccaca ctccattgtc tctgtccgtc acccctggac agccggcctc catctcctgc 60
aagtctagtc agagtctctt gcatagtgat ggaaagacct atttgtattg gtacctgcag 120
aggccaggcc agtctccaca gcccctgatc tatgaagttt ccaaccggtt ctctggagtg 180
ccagataggt tcagtggcag cgggtcaggg acagatttca cactgaaaat cagccgggtg 240
gaggctgagg atgtcggggt ttattactgc atgcaaagtc tacaactctg gacgttcggc 300
caagggacca aggtggaaat caaacgaact gtggctgcac catctgtctt catcttcccg 360
ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc 420
tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc 480
caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 540
acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 600
ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgttaata a 651
<210> 51
<211> 654
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> hFab4.3轻链
<400> 51
atgactcagt ctccactctc cctgcccgtc acccttggac agccggcctc catctcctgc 60
aggtctagtc aaagcctcat acacagtgat ggaaacacgt acttggattg gtttcagcag 120
aggccaggcc aatctccaag gcgcctaatt tataaggttt ctaaccggga ctctggggtc 180
ccagacagat tcagcggcag tgggtccggc actgatttca cactgagaat cagcagggtg 240
gaggctgagg atattggggt gtattactgc atgcaagcta cacactggcc tcggacgttc 300
ggccagggga ccaaggtgga aatcaaacga actgtggctg caccatctgt cttcatcttc 360
ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac 420
ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 480
tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 540
ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat 600
cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgtta ataa 654
<210> 52
<211> 654
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> hFab4.4轻链
<400> 52
atgactcagt ctccactctc cctgcccgtc acccttggac agccggcctc catctcctgc 60
aggtctagtc aaagcctcgt agacagtgct ggaaacacct tcttgcattg gtttcaccag 120
aggccaggcc aatctccaag gcgcctaatt tataaggttt ctaaccggga ctctggggtc 180
ccagacagat tcagcggcag tgggtcaggc actgatttca cactgaaaat cagcagggtg 240
gaggctgagg atgttggggt ttattactgt atgcaaggta cacactggcc ccggacgttc 300
ggccaaggga ccaaggtgga aatcaaacga actgtggctg caccatctgt cttcatcttc 360
ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac 420
ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 480
tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 540
ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat 600
cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgtta ataa 654
<210> 53
<211> 654
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> hFab4.5轻链
<400> 53
ctgactcagt ctccactctc cctgcccgtc acccttggac agccggcctc catctcctgc 60
aagtctagtc aaagcctcgt agacagtgat ggaaacacct acttgaattg gtttcagcag 120
aggccaggcc aatctccaag gcgcctaatt tataaggttt ctaaccggga ctctggggtc 180
ccagacagat tcagcggcag tgggtcaggc actgatttca cactgaaaat cagcagggtg 240
gaggctgagg atgttggggt ttattactgc atgcaaggta cacactggcc tcggacgttc 300
ggccaaggga ccaaggtgga aatcaaacga actgtggctg caccatctgt cttcatcttc 360
ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac 420
ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 480
tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 540
ctgacgctga gcaaagcaga ctacgagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat 600
cagggcctga gctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaggg gagagtgtta ataa 654
<210> 54
<211> 693
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> hFab4.7轻链
<400> 54
atgactcagt ctccactctc cctgcccgtc acccttggac agccggcctc catctcctgc 60
aggtctagtc aaagcctcgt acacagtgat ggaaacatgt acttgaattg gtttcagcag 120
aggccaggcc aatctccaag gcgcctaatt tataaggttt ctaaccggga ctctggggtc 180
ccagacagat tcagcggcag tgggtcaggc acagatttta cactgaaaat cagcagagtg 240
gaggctgagg atgttggggt ttattactgc atgcaagcta cacagcccac gtggacgttc 300
ggccaaggga ccaagctgga gatcaaacga actgtggctg caccatctgt cttcatcttc 360
ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac 420
ttctatccca gagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 480
tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 540
ctgacgctga gcaaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca 600
tcagggcctg agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgtt aataaggcgc 660
gccaattcta tttcaaggag acagtcataa tga 693
<210> 55
<211> 677
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> hFab4.8轻链
<400> 55
atgacccagt ctccatcctc cctgtctgca tctgtaggag acagagtcac catcacttgc 60
caggcgagtc aggacattag caactattta aattggtatc agcagaaacc agggaaagcc 120
cctaagctcc tgatctacga tgcatccaat ttggaaacag gggtcccatc aaggttcagt 180
ggaagtggat ctgggacaga ttttactttc accatcagca gcctgcaacc tgacgatttt 240
gcaacttact actgtcaaca gacttacagt tggcctcgga cttttggcca ggggaccaag 300
ctggagatca aacgaactgt ggctgcacca tctgtcttca tcttcccgcc atctgatgag 360
cagttgaaat ctggaactgc ctctgttgtg tgcctgctga ataacttcta tcccagagag 420
gccaaagtac agtggaaggt ggataacgcc ctccaatcgg gtaactccca ggagagtgtc 480
acagagcagg acagcaagga cagcacctac agcctcagca gcaccctgac gctgagcaaa 540
gcagactacg agaaacacaa agtctacgcc tgcgaagtca cccatcaggg cctgagctcg 600
cccgtcacaa agagcttcaa caggggagag tgttaataag gcgcgccaat tctatttcaa 660
ggagacagtc ataatga 677
<210> 56
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> hFab4.9轻链
<400> 56
atgacccagt ctccatcctc cctgtccgca tctgtaggac acccagtcac catcacttgc 60
cgggcaagtc aaagccttat cagctattta aattggtatc accagaaacc agggaaagcc 120
cctaagctcc tgatctatgc ggcatccatt ttgcaaagtg gggtcccatc aaggttcagt 180
ggcagtggat ctgggacaga tttcactctc accatcagca gtctgcaacc tgaaaatttt 240
gcaagttact actgtcaaca taccgacagt ttccctcgga cgttcggcca cgggaccaag 300
gtggaaatca aacgaactgt ggctgcacca tctgtcttca tcttcccgcc atctgatgac 360
cagttgaaat ctggaactgc ctccgttgtg tgcctgctga ataacttcta tcccaaaaag 420
gccaaagtac aatggaaggt ggataacgcc ctcgagtcgg gtaactccca ggagagtgtc 480
acagagcagg acgtcaagga cagcacctac agcctcagca gcaccctgac gctgagcaaa 540
gccggactac gagaaaccaa agtctacgcc tgcgaagtca cccatctgcg aactgagctc 600
tcccgtcaca aagagcttca caggggagag tgttaataa 639
<210> 57
<211> 645
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> hFab4.10轻链
<400> 57
ctgactcagc ccccctcagc gtctgggacc cccgggcagg gtgtcaccat ctcctgtcgt 60
ggaagcacct ccaacatcgg aaataatgtt gttaattggt atcaacatgt cccgggatcg 120
gcccccaaac tcctcatctg gagtaatatt cagcggccct cagggattcc tgaccgattc 180
tctggctcca agtctggcac ctcagcctcc ctggccatca gtggacttca gtctgaagat 240
gaggctgttt attactgtgc agtctgggat gacggcctgg ctggttgggt gttcggcgga 300
gggaccacgg tgaccgtcct aagtcagccc aaggctgccc cctcggtcac tctgttcccg 360
ccctcctctg aggagcttca agccaacaag gccacactgg tgtgtctcat aagtgacttc 420
tacccgggag ccgtgacagt ggcctggaag gcagatagca gccccgtcaa ggcgggagtg 480
gagaccacca caccctccaa acaaagcaac aacaagtacg cggccagcag ctacctgagc 540
ctgacgcctg agcagtggaa gtcccacaaa agctacagct gccaggtcac gcatgaaggg 600
agcaccgtgg agaagacagt ggcccctaca gaatgttcat aataa 645
<210> 58
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> hFab4.12轻链
<400> 58
atgactcagg cccctgttgt gtcggtggcc ttggaacaaa cagtcaggat cacatgccaa 60
ggagacagcc tagcaatcta ttatgatttc tggtaccagc acaagccagg acaggcccct 120
gtacttgtca tctatggtaa aaacaaccgg ccctcaggga tcccccaccg attctctggc 180
tccagctcat gaaacacaga ttccttgacc atcactgggg ctcaggcgga agatgaggct 240
gactattact gtaactcccg ggacagcagt ggtaaccatt gggtgttcgg cggagggacc 300
aacctgaccg tcctaggtca acccaaggct gccccctcgg ccattctgtt cccgccctcc 360
tctgaggagc ttcaaactaa cacggctaca tgggtgtgtc tcatatttga cttctacccg 420
ggagctgtaa cagtggccgg gaatgcagat ggcaaccccg tcaacgccgg agtggatacc 480
accaaaccct actgccagaa caacaactac tacgcggcca gcacctacct gatcatgacg 540
cctgaccagt ggaaatccca cttcagctac agctaactcg tcacgcatga agggagctcc 600
gtggacaaga aaatggcccc tgcagaatgc tcttaataa 639
<210> 59
<211> 654
<212> DNA
<213> 人工的
<220>
<223> hFab4.18轻链
<400> 59
ctgactcagt ctccactctc cctgcccgtc acccttggac agccggcctc catctcctgc 60
aagtctaatc aaagcctcgt acacagtgat ggaaacacct acttgaattg gtttcagcag 120
aggccaggcc aatctccaag gcgcctaatc tataaggttt ctaaccggga ctctggggtc 180
ccagacagat tcagcggcag tgggtcaggc actgatttca cactgaaaat caacagggtg 240
gaggctgagg atgttggggt ttattactgc atgcaaggta cacagtggcc tcggactttt 300
ggccagggga ccaagctgga catcaaacga actgtggctg caccatctgt cttcatcttc 360
ccgccatctg atgagcagtt gaaatctgga actgcctctg ttgtgtgcct gctgaataac 420
ttctatccca cagaggccaa agtacagtgg aaggtggata acgccctcca atcgggtaac 480
tcccaggaga gtgtcacaga gcaggacagc aaggacagca cctacagcct cagcagcacc 540
ctgacgctga gcaaagcaaa ctacaagaaa cacaaagtct acgcctgcga agtcacccat 600
cagggcctga cctcgcccgt cacaaagagc ttcaacaagg gagagtgtta ataa 654

Claims (23)

1.一种治疗受试者的淋巴瘤的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的CD83结合蛋白。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述淋巴瘤是HL。
3.根据权利要求1的方法，其中，所述淋巴瘤是NHL。
4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述NHL是MCL。
5.根据权利要求3所述的方法，其中，所述NHL是DLBCL。
6.根据权利要求3所述的方法，其中，所述NHL是FL。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，所述CD83结合蛋白包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含：
(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区(VH)包含：
(i)与SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列有至少90％同一性的序列；或者
(ii)SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列的三个互补决定区(CDR)；以及
(b)轻链可变区，所述轻链可变区包含：
(ii)包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的CDR1序列、包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的CDR2序列和包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的CDR3序列。
8.根据权利要求1至7任一项所述的方法，其中，所述CD83结合蛋白包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含：
(a)重链可变区，所述重链可变区含有包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的CDR1序列、包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的CDR2序列和包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的CDR3序列；以及
(b)轻链可变区，所述轻链可变区含有包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的CDR1序列、包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的CDR2序列和包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的CDR3序列。
9.根据权利要求1至8任一项所述的方法，其中，所述CD83结合蛋白包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域含有包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的可变重链和包含SEQ IDNO:11的氨基酸序列的可变轻链。
10.根据权利要求1至7任一项所述的方法，其中，所述CD83结合蛋白包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含：
(i)SEQ ID NO:10所示的VH序列和SEQ ID NO:12所示的VL序列；或者
(ii)SEQ ID NO:10所示的VH序列和SEQ ID NO:13所示的VL序列；或者
(iii)SEQ ID NO:10所示的VH序列和SEQ ID NO:14所示的VL序列；或者
(iv)SEQ ID NO:10所示的VH序列和SEQ ID NO:15所示的VL序列；或者
(v)SEQ ID NO:21所示的重链序列和SEQ ID NO:16所示的轻链序列；或者
(vi)SEQ ID NO:21所示的重链序列和SEQ ID NO:17所示的轻链序列；或者
(vi)SEQ ID NO:21所示的重链序列和SEQ ID NO:18所示的轻链序列；或者
(vii)SEQ ID NO:21所示的重链序列和SEQ ID NO:19所示的轻链序列；或者
(viii)SEQ ID NO:21所示的重链序列和SEQ ID NO:20所示的轻链序列；或者
(ix)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:23所示的VL序列；或者
(x)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:24所示的VL序列；或者
(xi)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:25所示的VL序列；
(xii)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:26所示的VL序列；
(viii)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:27所示的VL序列；
(viii)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:28所示的VL序列；
(viii)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:29所示的VL序列；
(viii)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:30所示的VL序列；
(viii)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:31所示的VL序列；
(viii)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:32所示的VL序列；
(viii)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:33所示的VL序列；或者
(viii)SEQ ID NO:22所示的VH序列和SEQ ID NO:34所示的VL序列；或者
(vix)SEQ ID NO:35所示的重链序列和SEQ ID NO:36所示的轻链序列。
11.根据权利要求1至10任一项的方法，其中，所述CD83结合蛋白是抗体。
12.根据权利要求1至11任一项的方法，其中，所述CD83结合蛋白是单克隆抗体或所述单克隆抗体的抗原结合片段。
13.根据权利要求1至10任一项所述的方法，其中，所述CD83结合蛋白选自由Fab、Fab’、F(ab’)2、Fab2和scFv组成的组。
14.根据权利要求12的方法，其中，所述单克隆抗体是3C12C。
15.根据权利要求1至14任一项的方法，其中，所述CD83结合蛋白缀合至部分。
16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述部分是治疗或诊断部分。
17.一种对淋巴瘤的严重程度或阶段进行诊断或评估的方法，所述方法包括将所述受试者的血清中的sCD83的水平与未患有淋巴瘤或患有已知严重程度的淋巴瘤的受试者的sCD83的水平进行比较。
18.一种确定受试者是否对淋巴瘤的治疗有反应的方法，所述方法包括在治疗之前、期间和/或之后确定所述受试者的血清中的sCD83的水平，以及将治疗期间和/或之后的sCD83的水平与治疗之前的sCD83的水平进行比较，其中，当治疗期间和/或之后的sCD83的水平相对于治疗之前的sCD83的水平降低时所述受试者对治疗有反应。
19.根据权利要求17或18所述的方法，其中，所述淋巴瘤是HL。
20.根据权利要求17或18所述的方法，其中，所述淋巴瘤是NHL。
21.根据权利要求20所述的方法，其中，所述NHL是DLBCL。
22.根据权利要求20所述的方法，其中，所述NHL是MCL。
23.一种用于治疗受试者的淋巴瘤的试剂盒，所述试剂盒包含CD83结合蛋白和使用所述CD83结合蛋白治疗淋巴瘤的说明书。
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