CN111562334A - 一种植物性中药材及提取物中多环芳烃残留量的检测方法 - Google Patents

一种植物性中药材及提取物中多环芳烃残留量的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种植物性中药材及提取物中多环芳烃残留量的检测方法，包括：将待测样品与多环芳烃同位素内标物、无水乙醇和超纯水混合，再用有机溶剂进行提取，提取液使用Florisil硅土柱净化、氢氧化钾‑乙醇溶液皂化后，再使用多环芳烃分子印迹柱去除影响检测结果的杂质，得到供试样品溶液；采用气相色谱‑质谱联用仪进行检测，以多环芳烃同位素作为内标物，基于标准曲线法计算获得多环芳烃的含量。本发明的方法能够同时检测植物性中药材及提取物中多种多环芳烃的含量，检出限为0.3μg/kg～2.0μg/kg，具有适用范围广、检测限低、准确度高的优点。

Description

一种植物性中药材及提取物中多环芳烃残留量的检测方法
技术领域
本发明属于植物性中药材及提取物检测分析领域，具体涉及一种植物性中药材及提取物中一种或多种多环芳烃残留量的检测方法。
背景技术
多环芳烃指分子中含有两个以上苯环的碳氢化合物，包括萘、蒽、菲、芘等150余种化合物，是一类已知的致癌、致畸、致突变的物质，致癌性随着苯环数的增加而增加，常见的具有致癌作用的多环芳烃多为四到六环的稠环化合物。国际癌症研究中心(IARC)1976年列出的94种对实验动物致癌的化合物，其中15种属于多环芳烃，由于苯并[a]芘是第一个被发现的环境化学致癌物，而且致癌性很强，故常以苯并[a]芘作为多环芳烃的代表。
多环芳烃是一类持久性环境污染物和食品加工污染物，广泛分布于环境中，可以在我们生活的每一个角落发现，任何有有机物加工，废弃，燃烧或使用的地方都有可能产生多环芳烃。并且随着工业社会的不断发展，由煤炭、石油、汽油、木柴等燃烧产生的气体排放量不断增加，多环芳烃对大气、土壤、水等的污染问题也日趋严重。
植物性中药材多数种植期较长，环境暴露风险大，容易吸附空气、土壤、水中的多环芳烃，并在体内富集；而提取物在经提取、浓缩等工艺制备后，可进一步吸收、富集多环芳烃。据相关文献公开报道，植物性中药材及提取物中多环芳烃污染情况较为严峻，尤其是暴露接触期较长的品种，如荷叶、菊花等。
目前国家针对植物性中药材及提取物缺乏多环芳烃检测方法，由于中药材基质干扰大，采用《GB 5009.265-2016食品安全国家标准食品中多环芳烃的测定》方法检测植物性中药材及提取物中多环芳烃时，净化效果较差，供试样品在质谱图中本底干扰大、检出限高，无法满足多环芳烃痕量残留分析的要求。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种植物性中药材及提取物中一种或多种多环芳烃残留量的检测方法，该方法能够检测植物性中药材及提取物中包括苯并[a]芘在内16种多环芳烃，并且具有检测重复性好、灵敏度高、结果准确的特点。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供一种植物性中药材及提取物中多环芳烃残留量的检测方法，包括下述步骤：
3)将待测样品与多环芳烃同位素内标物、无水乙醇、超纯水按0.5～2.0g:10μL:10～20mL:10～20mL的比例混合，涡旋1min，超声提取5min，形成样液；
4)向所述步骤1)得到的样液中加入10～20mL正已烷，涡旋5min、超声5min，以8000r/min离心4min，收集上层清液；
3)将所述步骤2)得到的上层清液用Florisil硅土固相萃取柱净化，用5～10mL二氯甲烷-正己烷溶液洗脱，收集洗脱液；
4)将所述步骤3)得到的洗脱液于40℃水浴下氮气缓慢吹干得残留物；
5)将所述步骤4)得到的残留物用3～5mL氢氧化钾-乙醇溶液超声溶解，加入3～5mL超纯水，5～10mL正已烷，涡旋1min，以8000r/min离心3min，得上清液；所述氢氧化钾-乙醇溶液为0.3～1.5mol/L；
6)取分子印迹固相萃取小柱，向柱中加入1～2g无水硫酸钠，再用3～5mL二氯甲烷、3～5mL正己烷淋洗；所述分子印迹固相萃取小柱规格为250mg/6mL、500mg/6mL。
7)将所述步骤5)得到的上清液加入所述步骤6)分子印迹固相萃取小柱中，用5～10mL正己烷淋洗，淋洗液丢弃；再用5～10mL二氯甲烷-乙酸乙酯溶液洗脱，收集洗脱液；所述二氯甲烷-乙酸乙酯溶液体积比为1:1；
8)将所述步骤7)得到的洗脱液于40℃水浴下氮气缓慢吹干，准确加入0.2～0.5mL丙酮-异辛烷溶液，得试样溶液，所述丙酮-异辛烷溶液体积比为1:1；
9)将所述步骤8)得到的试样溶液进行GC/MS分析。
优选的，所述步骤1)中待测样品为植物性中药材时，样品质量与多环芳烃同位素内标物、无水乙醇、超纯水的体积按照2.0g:10μL:10mL:10mL；待测样品为提取物时，样品质量与多环芳烃同位素内标物、无水乙醇、超纯水的体积按照0.5g:10μL:10mL:10mL；
优选的，所述步骤2)中加入10mL正已烷；
优选的，所述步骤3)中加入5mL二氯甲烷-正己烷溶液洗脱；Florisil硅土固相萃取柱为2g/12mL。
优选的，所述步骤5)中氢氧化钾-乙醇溶液、超纯水、正已烷的体积比为3mL:3mL:5mL；残留物颜色较浅时氢氧化钾-乙醇溶液为0.3mol/L，残留物颜色较深时氢氧化钾-乙醇溶液为1.5mol/L；
优选的，所述步骤6)中无水硫酸钠、二氯甲烷、正己烷的质量体积比为1g:3mL:3mL；分子印迹固相萃取小柱为500mg/6mL；
优选的，所述步骤7)中正己烷、二氯甲烷-乙酸乙酯的体积比为5mL:5mL；
优选的，所述步骤8)中加入0.2mL丙酮-异辛烷；
优选的，所述步骤9)中气相色谱条件包括进样口温度为280℃，脉冲不分流模式，脉冲压力为39psi持续1min，以50mL/min恒流吹扫直到0.75min后开启分流阀，载气为高纯氦气(纯度≥99.999％)，进样体积为2μL；阶梯流速程序：初始流速为0.8mL/min，保持32min，然后以5mL/min升至1.5mL/min保持至程序升温结束；柱温箱升温程序：初温为80℃，保持2min，以10℃/min升至250℃，保持2min，以8℃/min升至315℃，保持5min，最后以20℃/min升至320℃，保持5min。
优选的，所述质谱条件包括电离源为EI源，电子能量为70eV，离子源温度为230℃，四级杆温度为150℃，扫描范围为30～500amu；先采用全扫描模式(SCAN)进行定性分组，再采用选择离子模式(SIM)扫描。
优选的，所述多环芳烃包括苯并[c]芴、苯并[a]蒽、环戊并[c,d]芘、
Figure BDA0002530963090000041
5-甲基
Figure BDA0002530963090000042
苯并[b]荧蒽、苯并[k]荧蒽、苯并[j]荧蒽、苯并[a]芘、茚并[1,2,3-cd]芘、二苯并[a,h]蒽、苯并[ghi]苝、二苯并[a,l]芘、二苯并[a,e]芘、二苯并[a,i]芘、二苯并[a,h]芘；所述多环芳烃同位素内标包括D12-苯并[a]蒽、D12-
Figure BDA0002530963090000043
D12-苯并[b]荧蒽、D12-苯并[a]芘、D12-茚并[1,2,3-cd]芘、D14-二苯并[a,h]蒽、D12-苯并[ghi]芘。
相对于现有技术，本发明通过使用Florisil硅土柱、氢氧化钾-乙醇溶液净化，再使用多环芳烃分子印迹柱进一步净化，使待检测的样品中去除影响检测结果的杂质，保证检测结果的准确性。所述检测方法可以检测一种或多种多环芳烃，16种多环芳烃的检测定量限为0.8μg/kg～7.0μg/kg，检测限为0.3μg/kg～2.0μg/kg。所述检测方法具有检测范围广，检测限低，定量准确的优点。
附图说明
图1为实施例1中16种多环芳烃混合标准及内标溶液的选择离子流图；
图2为实施例2中淫羊藿药材样品检测的选择离子流图；
图3为实施例3中淫羊藿药材样品加标检测的选择离子流图；
图4为实施例4中丹参提取物样品检测的选择离子流图；
图5为实施例5中丹提取物样品加标检测的选择离子流图；
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。
本发明提供一种植物性中药材及提取物中多环芳烃的检测方法，包括以下步骤：
1)将待测样品与多环芳烃同位素内标物、无水乙醇、超纯水按0.5～2.0(g):10μL:10～20mL:10～20mL的比例混合，涡旋1～5min，超声提取5～10min，形成样液；
2)向所述步骤1)得到的样液中加入10～20mL正已烷，涡旋5min、超声5～10min，以8000～10000r/min，离心4～10min，收集上层清液；
3)将所述步骤2)得到的上层清液用Florisil硅土固相萃取柱净化，用5～10mL二氯甲烷-正己烷溶液洗脱，收集洗脱液；所述二氯甲烷-正己烷溶液体积比为1:4；所述Florisil硅土固相萃取柱规格为1g/12mL、2g/12mL。
4)将所述步骤3)得到的洗脱液于40℃水浴下氮气缓慢吹干得残留物；
5)将所述步骤4)得到的残留物用3～5mL氢氧化钾-乙醇溶液超声溶解，加入3～5mL超纯水，5～10mL正已烷，涡旋1～5min，以8000～10000r/min离心3～10min，得上清液；所述氢氧化钾-乙醇溶液为0.3～1.5mol/L；
6)取分子印迹固相萃取小柱，向柱中加入1～2g无水硫酸钠，再用3～5mL二氯甲烷、3～5mL正己烷淋洗；所述分子印迹固相萃取小柱规格为250mg/6mL、500mg/6mL。
7)将所述步骤5)得到的上清液加入所述步骤6)分子印迹固相萃取小柱中，用5～10mL正己烷淋洗，淋洗液丢弃；再用5～10mL二氯甲烷-乙酸乙酯溶液洗脱，收集洗脱液；所述二氯甲烷-乙酸乙酯溶液体积比为1:1；
8)将所述步骤7)得到的洗脱液于40℃水浴下氮气缓慢吹干，准确加入0.2～0.5mL丙酮-异辛烷溶液，得试样溶液，所述丙酮-异辛烷溶液体积比为1:1；
9)将所述步骤8)得到的试样溶液进行GC/MS分析。
本发明所述步骤1)中待测样品为植物性中药材时，样品质量与多环芳烃同位素内标物、无水乙醇、超纯水的体积按照2.0g:10μL:10mL:10mL；待测样品为提取物时，样品质量与多环芳烃同位素内标物、无水乙醇、超纯水的体积按照0.5g:10μL:10mL:10mL；
本发明优选的，所述步骤2)中加入10mL正已烷；
优选的，所述步骤3)中加入5mL二氯甲烷-正己烷溶液洗脱；
本发明优选的Florisil硅土固相萃取柱为2g/12mL；
优选的，所述步骤5)中氢氧化钾-乙醇溶液、超纯水、正已烷的体积比为3mL:3mL:5mL；残留物颜色较浅时氢氧化钾-乙醇溶液为0.3mol/L，残留物颜色较深时氢氧化钾-乙醇溶液为1.5mol/L；
优选的，所述步骤6)中无水硫酸钠、二氯甲烷、正己烷的质量体积比为1g:3mL:3mL；
本发明优选的分子印迹固相萃取小柱规格为500mg/6mL；
优选的，所述步骤7)中正己烷、二氯甲烷-乙酸乙酯体积比为5mL:5mL；
优选的，所述步骤8)中加入0.2mL丙酮-异辛烷；
本发明优选的，所述步骤9)中气相色谱条件包括进样口温度为280℃，脉冲不分流模式，脉冲压力为39psi持续1min，以50mL/min恒流吹扫直到0.75min后开启分流阀，载气为高纯氦气(纯度≥99.999％)，进样体积为2μL；阶梯流速程序：初始流速为0.8mL/min，保持32min，然后以5mL/min升至1.5mL/min保持至程序升温结束；柱温箱升温程序：初温为80℃，保持2min，以10℃/min升至250℃，保持2min，以8℃/min升至315℃，保持5min，最后以20℃/min升至320℃，保持5min。
优选的，所述质谱条件包括电离源为EI源，电子能量为70eV，离子源温度为230℃，四级杆温度为150℃，扫描范围为30～500amu；先采用全扫描模式(SCAN)进行定性分组，再采用选择离子模式(SIM)扫描。
实施例1
1试剂配制
0.3mol/L氢氧化钾-乙醇溶液：称取1.68g氢氧化钾，用无水乙醇超声溶解，定容到100mL，现配现用。
二氯甲烷-乙酸乙酯溶液(1+1)：将二氯甲烷和乙酸乙酯按体积比1:1混合均匀。
丙酮-异辛烷溶液(1+1)：将丙酮和异辛烷按体积比1:1混合均匀。
二氯甲烷-正己烷溶液(1+4)：将二氯甲烷和正已烷按体积比1:4混合均匀。
2标准品
苯并[c]芴、苯并[a]蒽、环戊并[c,d]芘、
Figure BDA0002530963090000071
5-甲基
Figure BDA0002530963090000072
苯并[b]荧蒽、苯并[k]荧蒽、苯并[j]荧蒽、苯并[a]芘、茚并[1,2,3-cd]芘、二苯并[a,h]蒽、苯并[ghi]苝、二苯并[a,l]芘、二苯并[a,e]芘、二苯并[a,i]芘、二苯并[a,h]芘，10μg/mL，1mL/支，购自德国Dr.Ehrenstorfer。
D12-苯并[a]蒽、D12-
Figure BDA0002530963090000073
D12-苯并[b]荧蒽、D12-苯并[a]芘、D12-茚并[1,2,3-cd]芘、D14-二苯并[a,h]蒽、D12-苯并[ghi]芘，100μg/mL，1mL/支，购自英国LGC。
3标准溶液的配制
3.1多环芳烃标准使用液的配制
吸取0.5mL多环芳烃标准溶液(10μg/mL)于10mL容量瓶中，用丙酮-异辛烷溶液(1+1)定容至刻度，混匀，得到浓度为0.5μg/mL的标准使用液，将溶液转移至棕色玻璃容器中，于4℃下避光密封保存3个月。
3.2多环芳烃内标使用液的配制
吸取1mL多环芳烃内标溶液(100μg/mL)于25mL容量瓶中，用丙酮-异辛烷溶液(1+1)定容至刻度，混匀，得到4μg/mL多环芳烃内标使用液，将溶液转移至棕色玻璃容器中，于4℃下避光密封保存3个月。
4样品处理及分析
4.1待测样品的制备
中药材样品：取样品约200～500g，粉碎、混合均匀后四分法缩分至100g左右，分装于洁净样品袋或储样瓶中，密封后贴上标签，保存于干燥器中供检测用。
提取物样品：取样品约200～500g，直接用四分法缩分至100g左右，分装于洁净样品袋或储样瓶中，密封后贴上标签，保存于干燥器中供检测用。
4.2提取
准确称取中药材粉末2.0g(精确至0.001g，下同)，提取物粉末0.5g，于50mL离心管中，向样品中加入10μL内标使用液(4μg/mL)，随后加入10mL无水乙醇、10mL超纯水，涡旋1min，超声提取5min，加入10mL正己烷，涡旋5min、超声5min，以8000r/min离心4min，将上清液加入装有约1g无水硫酸钠并用5mL正己烷活化的Florisil硅土柱上，随后用5mL二氯甲烷-正己烷溶液(1+4)洗脱，收集洗脱液，于40℃水浴下氮气缓慢吹干，残留物待皂化。
4.3净化
向残留物中加入3mL氢氧化钾-乙醇溶液(0.3mol/L或者1.5mol/L)超声溶解，室温放置3min或者于70±2℃下水浴3min，取出用自来水冷却至室温，随后加入4mL超纯水、5mL正己烷，涡旋1min，以8000/min离心3min；将上层提取液转移至已加入约1g硫酸钠并用3mL二氯甲烷、3mL正己烷活化的多环芳烃分子印迹柱中，待提取液全部通过填料层，用正己烷2.5mL×2两次淋洗除杂，淋洗液丢弃，再用5mL二氯甲烷-乙酸乙酯溶液(1+1)洗脱，流速控制在1.0mL/min左右，收集洗脱液。洗脱液在40℃水浴中氮气缓慢吹干后，用0.2mL丙酮-异辛烷溶液(1+1)涡旋溶解并转移至进样瓶中，供GC-MS测定。
5仪器条件
5.1气相色谱条件
DB-EUPAH毛细管色谱柱(20m×0.18mm×0.14μm)或相当色谱柱，进样口温度为280℃，脉冲不分流模式，脉冲压力为39psi持续1min，以50mL/min恒流吹扫直到0.75min后开启分流阀，载气为高纯氦气(99.999％)，进样体积为2μL；阶梯流速程序：初始流速为0.8mL/min，保持32min，然后以5mL/min升至1.5mL/min保持至程序升温结束；柱温箱升温程序：初温为80℃，保持2min，以10℃/min升至250℃，保持2min，以8℃/min升至315℃，保持5min，最后以20℃/min升至320℃，保持5min。
5.2质谱条件
电离源为EI源，电子能量为70eV，离子源温度为230℃，四级杆温度为150℃，扫描范围为30～500amu；扫描方式：先采用全扫描模式(SCAN)进行定性分析，并对仪器参数进行优化，确定16种多环芳烃及对应内标物的保留时间及特征离子(见附录B)，然后对化合物进行分组，采用选择离子模式(SIM)扫描；监测离子见表1。
表1 16种多环芳烃及内标物气相色谱-质谱参数
Figure BDA0002530963090000091
Figure BDA0002530963090000101
备注：表中*指定量离子。
6标准曲线的制作
取6个带内插管棕色进样瓶，分别加入8μL、15μL、30μL、50μL、60μL、100μL多环芳烃标准使用液(0.5μg/mL)，各加10μL多环芳烃内标使用液(4μg/mL)，最后用丙酮-异辛烷溶液(1+1)补充体积至0.2mL，相当于各瓶含4.0ng、7.5ng、15.0ng、25.0ng、30.0ng、50.0ng多环芳烃，内标为40ng，临用时配制，供GC/MS分析后绘制标准曲线。
7测定
将试样溶液与标准溶液一起进行测定，根据测定液中多环芳烃的含量Ai计算试样中相应多环芳烃的含量Xi。
8计算
试样中多环芳烃含量按式(1)计算
Figure BDA0002530963090000102
式(1)中：
Xi------试样中多环芳烃i的含量，单位为微克每千克(μg/kg)；
Ai------由仪器标准曲线得到的试样溶液中多环芳烃i的质量，单位为纳克(ng)；
Ai0------由仪器标准曲线得到的空白溶液中多环芳烃i的质量，单位为纳克(ng)；
m------样品质量，单位为克(g)；
1000------换算系数。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留至小数点后3位。
9精密度实验
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20％。
10检测限(LOD)和定量限(LOQ)
检测限(LOD)为信号强度(S)/基线噪声(N)＝3:1时对应的样品浓度；
定量限(LOQ)为信号强度(S)/基线噪声(N)＝10:1时对应的样品浓度。
通过表2可知中药材样品称样量为2g，提取物样品称样量为0.5g，16种多环芳烃的检测定量限为0.8μg/kg～7.0μg/kg，检测限为0.3μg/kg～2.0μg/kg。
表2 16种多环芳烃信噪比(S/N)及回收率(N＝3)
Figure BDA0002530963090000111
实施例2
淫羊藿药材中16种多环芳烃的提取：称取2.0g样品于50mL离心管中，向样品中加入10μL内标使用液(4μg/mL)，随后加入10mL无水乙醇、10mL超纯水，涡旋1min，超声提取5min，加入10mL正己烷，涡旋5min、超声5min，以8000r/min离心4min，上清液待皂化、净化。按照实施例1的方法进行皂化与净化处理和GC/MS分析，结果如图2所示。
表3为淫羊藿药材中多环芳烃检测结果，淫羊藿药材中二苯并[a,h]蒽、环戊并[c,d]芘、4种二苯并芘未检出，其余均有检出。
表3淫羊藿药材中多环芳烃检测结果(单位：μg/kg)
Figure BDA0002530963090000121
实施例3
淫羊藿药材中加入2.5μg/kg 16种多环芳烃的提取：称取2.0g样品于50mL离心管中，向样品中分别加入10μL多环芳烃使用液(0.5μg/mL)、内标使用液(4μg/mL)，随后加入10mL无水乙醇、10mL超纯水，涡旋1min，超声提取5min，加入10mL正己烷，涡旋5min、超声5min，以8000r/min离心4min，上清液待皂化、净化。按照实施例1的方法进行皂化与净化处理和GC/MS分析，结果如图3所示。
图3为淫羊藿药材加标2.5μg/kg检测总离子流图，苯并[c]芴加标回收率为45.20％，4种二苯并芘加标回收率为97.20％，其余11种多环芳烃加标回收率70.40～113.20％。
实施例4
丹参提取物中16种多环芳烃的提取：称取0.5g样品于50mL离心管中，向样品中加入10μL内标使用液(4μg/mL)，随后加入10mL无水乙醇、10mL超纯水，涡旋1min，超声提取5min，加入10mL正己烷，涡旋5min、超声5min，以8000r/min离心4min，上清液待皂化、净化。按照实施例1的方法进行皂化与净化处理和GC/MS分析，结果如图4所示。
图4为丹参提取物中多环芳烃检测结果，丹参提取物中检出苯并[a]蒽、
Figure BDA0002530963090000131
苯并[ghi]苝，含量分别为1.960μg/kg、4.280μg/kg、0.840μg/kg，其余多环芳烃未检出。
实施例5
丹参提取物中加入20μg/kg 16种多环芳烃的提取：称取0.5g样品于50mL离心管中，向样品中分别加入20μL多环芳烃使用液(0.5μg/mL)、内标使用液(4μg/mL)，随后加入10mL无水乙醇、10mL超纯水，涡旋1min，超声提取5min，加入10mL正己烷，涡旋5min、超声5min，以8000r/min离心4min，上清液待皂化、净化。按照实施例1的方法进行皂化与净化处理和GC/MS分析，结果如图5所示。
图5为丹参提取物加标20μg/kg检测总离子流图，苯并[c]芴加标回收率为53.40％，4种二苯并芘加标回收率为83.85％，其余11种多环芳烃加标回收率87.87～97.47％。
样品中苯并[c]芴加标回收率结果偏低，与其本身性质有关，尤其遇碱不稳定，因此样品中苯并[c]芴检测结果仅供参考。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种植物性中药材及提取物中多环芳烃残留量的检测方法，其特征在于，包括下述步骤：
1)将待测样品与多环芳烃同位素内标物、无水乙醇、超纯水按0.5～2.0g:10μL:10～20mL:10～20mL的比例混合，涡旋1min，超声提取5min，形成样液；
2)向所述步骤1)得到的样液中加入10～20mL正已烷，涡旋5min、超声5min，以8000r/min离心4min，收集上层清液；
3)将所述步骤2)得到的上层清液用Florisil硅土固相萃取柱净化，用5～10mL二氯甲烷-正己烷溶液洗脱，收集洗脱液；
4)将所述步骤3)得到的洗脱液于40℃水浴下氮气缓慢吹干得残留物；
5)将所述步骤4)得到的残留物用3～5mL氢氧化钾-乙醇溶液超声溶解，加入3～5mL超纯水，5～10mL正已烷，涡旋1min，以8000r/min离心3min，得上清液；所述氢氧化钾-乙醇溶液为0.3～1.5mol/L；
6)取分子印迹固相萃取小柱，向柱中加入1～2g无水硫酸钠，再用3～5mL二氯甲烷、3～5mL正己烷淋洗；所述分子印迹固相萃取小柱规格为250mg/6mL、500mg/6mL。
7)将所述步骤5)得到的上清液加入所述步骤6)分子印迹固相萃取小柱中，用5～10mL正己烷淋洗，淋洗液丢弃；再用5～10mL二氯甲烷-乙酸乙酯溶液洗脱，收集洗脱液；所述二氯甲烷-乙酸乙酯溶液体积比为1:1；
8)将所述步骤7)得到的洗脱液于40℃水浴下氮气缓慢吹干，准确加入0.2～0.5mL丙酮-异辛烷溶液，得试样溶液，所述丙酮-异辛烷溶液体积比为1:1；
9)将所述步骤8)得到的试样溶液进行GC/MS分析。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤1)中待测样品为植物性中药材时，样品质量与多环芳烃同位素内标物、无水乙醇、超纯水的体积按照2.0g:10μL:10mL:10mL；待测样品为提取物时，样品质量与多环芳烃同位素内标物、无水乙醇、超纯水的体积按照0.5g:10μL:10mL:10mL。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤2)中加入10mL正已烷。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤3)中加入5mL二氯甲烷-正己烷溶液洗脱；Florisil硅土固相萃取柱为2g/12mL。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤5)中氢氧化钾-乙醇溶液、超纯水、正已烷的体积比为3mL:3mL:5mL；残留物颜色较浅时氢氧化钾-乙醇溶液为0.3mol/L，残留物颜色较深时氢氧化钾-乙醇溶液为1.5mol/L。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤6)中无水硫酸钠、二氯甲烷、正己烷的质量体积比为1g:3mL:3mL；分子印迹固相萃取小柱为500mg/6mL。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤7)中正己烷、二氯甲烷-乙酸乙酯的体积比为5mL:5mL；所述步骤8)中加入0.2mL丙酮-异辛烷。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤9)中气相色谱条件包括进样口温度为280℃，脉冲不分流模式，脉冲压力为39psi持续1min，以50mL/min恒流吹扫直到0.75min后开启分流阀，载气为高纯氦气(纯度≥99.999％)，进样体积为2μL；阶梯流速程序：初始流速为0.8mL/min，保持32min，然后以5mL/min升至1.5mL/min保持至程序升温结束；柱温箱升温程序：初温为80℃，保持2min，以10℃/min升至250℃，保持2min，以8℃/min升至315℃，保持5min，最后以20℃/min升至320℃，保持5min。
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述质谱条件包括电离源为EI源，电子能量为70eV，离子源温度为230℃，四级杆温度为150℃，扫描范围为30～500amu；先采用全扫描模式(SCAN)进行定性分组，再采用选择离子模式(SIM)扫描。
10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述多环芳烃包括苯并[c]芴、苯并[a]蒽、环戊并[c,d]芘、
Figure FDA0002530963080000032
5-甲基
Figure FDA0002530963080000031
苯并[b]荧蒽、苯并[k]荧蒽、苯并[j]荧蒽、苯并[a]芘、茚并[1,2,3-cd]芘、二苯并[a,h]蒽、苯并[ghi]苝、二苯并[a,l]芘、二苯并[a,e]芘、二苯并[a,i]芘、二苯并[a,h]芘；所述多环芳烃同位素内标包括D12-苯并[a]蒽、D12-
Figure FDA0002530963080000033
D12-苯并[b]荧蒽、D12-苯并[a]芘、D12-茚并[1,2,3-cd]芘、D14-二苯并[a,h]蒽、D12-苯并[ghi]芘。
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