CN111559991A - 一种萘胺类化合物及其盐的制备方法和应用 - Google Patents

一种萘胺类化合物及其盐的制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111559991A
CN111559991A CN202010482556.4A CN202010482556A CN111559991A CN 111559991 A CN111559991 A CN 111559991A CN 202010482556 A CN202010482556 A CN 202010482556A CN 111559991 A CN111559991 A CN 111559991A
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
naphthylamine
hydrochloride
drying
phosphate
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010482556.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111559991B (zh
Inventor
徐学军
杨争艳
徐红运
杨玉坡
张韶华
张尊
段超群
徐凯
刘瑞
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Henan Radio Medical Technology Co ltd
Original Assignee
Henan Radio Medical Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Henan Radio Medical Technology Co ltd filed Critical Henan Radio Medical Technology Co ltd
Priority to CN202010482556.4A priority Critical patent/CN111559991B/zh
Publication of CN111559991A publication Critical patent/CN111559991A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111559991B publication Critical patent/CN111559991B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/04—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms
    • C07D295/08—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms
    • C07D295/084—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms with the ring nitrogen atoms and the oxygen or sulfur atoms attached to the same carbon chain, which is not interrupted by carbocyclic rings
    • C07D295/088—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms with the ring nitrogen atoms and the oxygen or sulfur atoms attached to the same carbon chain, which is not interrupted by carbocyclic rings to an acyclic saturated chain
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种萘胺类化合物及其盐的制备方法和应用，以4‑甲酰基苯酚为底物来合成一种萘胺类化合物的方法，同时提供了其盐酸盐和磷酸盐的制备方法，合成路线短，原料廉价易得，后处理纯化简单，总体收率较高等特点。对于拓展萘胺类衍生物的种类，对其在生物学和医药方面的研究具有重要的意义。同时本申请对制得的萘胺类化合物及其盐酸盐和磷酸盐的抗肿瘤效应及机制做了进一步研究，结果表明萘胺类化合物及其盐酸盐和磷酸盐具有：（1）抑制癌细胞增殖、生长或迁移；（2）促进癌细胞凋亡或降低癌细胞迁移能力或侵袭能力，同时还可作为STAT3的酪氨酸磷酸化的抑制剂。

Description

一种萘胺类化合物及其盐的制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及一种萘胺类化合物及其盐的制备方法和应用。
背景技术
信号转导及转录激活因子3 (Signal Transducer and Activator ofTranscription 3, 简称STAT3)是细胞信号转导的核心调节因子之一。在正常细胞中STAT3的活性受到严格控制，而在多种肿瘤细胞中STAT3常呈异常表达和组成性激活。STAT3信号活化可以促进细胞周期蛋白 D1（Cyclin D1）、原癌基因（Myc）、生存素（Survivin）和基质金属蛋白酶（MMPs）等诸多癌基因的表达（Bournazou E, Bromberg J. Targeting the tumormicroenvironment: JAK-STAT3 signaling. JAKSTAT, 2013, (2):e23828.Yu H,Pardoll D, Jove R, et al. STATs in cancer inflammation and immunity: aleading role for STAT3. Nat. Rev. Cancer, 2009, (9):798–809.Yu H, Jove R. TheSTATs of cancer-new molecular targets come of age. Nat. Rev. Cancer, 2004,(4):97–105.）。STAT3已成为肿瘤靶向治疗研究的热点。然而，设计直接靶向转录因子的药物非常困难，目前尚无靶向STAT3的药物成功上市。
萘胺类化合物具有广泛的生物活性、药理作用和癌症临床治疗方面的应用前景。韩国国立釜山大学的Kwon,Jungwoo教授的最新研究还发现其还可以利用单介质系统结合氧化还原循环快速、灵敏地检测黑曲霉。此外，萘胺类化合物还能显著下调人体内与癌症相关的STAT3等细胞信号传导通路，在亚微摩尔浓度下，显著抑制人源三阴性乳腺癌细胞株（MBA-MD-231）、人源结肠癌细胞株（HT-29）、非小细胞肺癌母本细胞株（PC9）以及耐药株（PC9-AR和PC9-GR）的生长和增殖。乳腺癌细胞MBA-MD-231的划痕实验和trans-well实验结果证明了此类萘胺类化合物能有效抑制肿瘤细胞的侵袭和转移。乳腺癌细胞MBA-MD-231和4T1的QPCR实验结果证明了该类化合物能有效抑制与肿瘤生长、繁殖和侵袭转移相关的基因-Survivin、BCL-2、BCL-XL、CCND1、MMP-9等的表达。但目前有关萘胺类化合物的衍生物种类和合成方法的报道都很有限。目前已有报道的有关合成方法主要有合成过程中收率偏低和纯化困难的问题。导致这两种问题的原因主要是硝基还原杂质比较多，溶解性很差。这也直接限制了此类化合物衍生物的种类拓展。因此，进一步深入研究对此类化合物的合成方法，拓展其衍生物种类对其在生物学和医药方面的研究具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种萘胺类化合物及其盐的制备方法和应用。
基于上述目的，本发明采取如下技术方案：
一种萘胺类化合物的制备方法，合成路线如下：
Figure 792172DEST_PATH_IMAGE001
合成步骤如下：
（1）将化合物a和1,2-二溴乙烷溶解到乙腈中，依次加入碳酸钾、碘化钾，升温回流，TLC监测反应完毕后，经过滤，收集滤液并旋干，柱层析纯化得到化合物b；
（2）将化合物b溶于四氢呋喃，室温加入硼氢化钠，室温反应一段时间，TLC检测原料反应完毕后，将反应液倒入水中，用盐酸调节 pH = 1，经后处理得化合物c；
（3）将4-硝基萘酚、化合物c和三苯基膦溶解于四氢呋喃中，氮气保护冷却到-5~5℃，滴加偶氮二甲酸二异丙酯，升至室温，TLC监测反应完毕后，倒入水中，用乙酸乙酯萃取，将有机相合并，用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干溶剂，柱层析得到化合物e；
（4）将化合物e溶解于乙醇和饱和氯化铵水溶液的混合溶液中，升温至40~50℃，分批加入铁粉，升温至50~60℃反应，TLC监测反应完毕后，过滤，滤液经萃取、干燥，过滤，旋干溶剂，柱层析得到化合物f；
（5）将化合物f和哌啶溶于1,4-二氧六环中，加入KI, 95~105℃反应，TLC监测反应完毕后，直接旋干，柱层析得到化合物g。
进一步地，步骤（1）中，化合物a、1,2-二溴乙烷、碳酸钾和碘化钾的摩尔比为1:2.5:1.2:0.01,步骤（2）中，化合物b和硼氢化钠的摩尔比为1:1.2，步骤（3）中，4-硝基萘酚、化合物c、三苯基膦和偶氮二甲酸二异丙酯的摩尔比为1:1:1.2:1.2，步骤（4）中，化合物化合物e和铁粉的摩尔比为1:5，步骤（5）中，化合物f、哌啶和KI的摩尔比为1:2.5:0.01。
进一步地，步骤（4）中乙醇和饱和氯化铵水溶液的体积比为1:1。
进一步地，将化合物g溶于无水甲醇，室温下加入浓盐酸，室温继续反应1~3小时，直接将溶液旋干得到化合物g的盐酸盐h；
或者将化合物g溶于无水甲醇，室温下加入75~85wt%的磷酸水溶液，45~55℃反应10~15小时，直接将溶液旋干得到化合物g的磷酸盐i。
进一步地，化合物g和盐酸的摩尔比为1:2，化合物g和磷酸的摩尔比为1:2 。
上述萘胺类化合物或其盐酸盐或其磷酸盐在制备乳腺癌、结肠癌和非小细胞肺癌药物中的应用。
上述萘胺类化合物或其盐酸盐或其磷酸盐在制备乳腺癌、结肠癌和非小细胞肺癌药物中的应用，所述萘胺类化合物的盐酸盐或磷酸盐具有下述作用：（1）抑制癌细胞增殖、生长或迁移；（2）促进癌细胞凋亡或降低癌细胞迁移能力或侵袭能力。
上述萘胺类化合物或其盐酸盐或其磷酸盐作为STAT3的酪氨酸磷酸化的抑制剂。
本发明涉及的萘胺类化合物的合成路线，具有步骤短，原料廉价易得，后处理纯化简单，总体收率较高等特点。对于拓展萘胺类衍生物的种类，对其在生物学和医药方面的研究具有重要的意义。同时，此类化合物对抑制三阴性乳腺癌细胞侵袭和转移均有显著作用；SMY002（h）和SMY002-P（i）的水溶性好，SMY006（g）在小鼠体内未见明显不良反应；作用机制明确，可以与STAT3的SH2结构域靶向结合，抑制STAT3信号活化。
附图说明
图1 是SMY006（g）的萘胺基与STAT3蛋白的SH2结构域的相互作用的计算机虚拟结构（docking）分析结果；
图2是通过蛋白免疫印迹法检测化合物SMY002（h）和SMY006（g）对白介素-6（IL-6）诱导的STAT3蛋白磷酸化的抑制作用；
图3是通过免疫荧光法检测化合物SMY002（h）处理对STAT3蛋白入核的影响；
图4是Q-PCR法检测化合物SMY002（h）和SMY006（g）对STAT3下游的细胞增殖、侵袭、生存、凋亡和肿瘤干细胞（CSC）相关靶基因的mRNA表达水平的作用；
图5是CCK-8法检测化合物SMY002（h），SMY006（g）和SMY002-P（i）对三阴性乳腺癌细胞、结肠癌细胞和非小细胞肺癌细胞的增殖抑制作用，实验结果以IC50 (μmol/L)值进行表征；
图6是通过划痕实验检测SMY002（h）和SMY006（g）对乳腺癌细胞迁移能力的影响；
图7是通过Transwell实验检测SMY002（h）和SMY006（g）对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响；
图8是通过细胞微球形成实验检测SMY006（g）对结肠癌细胞的致瘤性的影响；
图9是SMY002（h）和SMY006（g）在小鼠体内的抑瘤活性评价。
具体实施方式
以下结合具体实施例和附图对本发明的技术方案做进一步详细说明，但本发明的保护范围并不局限于此。
实施例1
一种萘胺类化合物的制备方法，合成路线如下：
Figure 709312DEST_PATH_IMAGE001
（1）化合物b的制备
将化合物a（1.0 g, 8.19 mmol, 1.0 eq）和1,2-二溴乙烷（3.85 g, 20.47 mmol,2.50 eq）溶解到30毫升无水乙腈中，依次加入碳酸钾（1.36 g, 9.83 mmol, 1.2 eq）, 碘化钾（13.59 mg, 81.88 μmol, 0.01 eq）。升温至回流反应16小时，TLC监测反应完毕，用硅藻土过滤，旋干，柱层析纯化（体积比，乙酸乙酯：石油醚=15～5:1）得到1.50 g 化合物b，白色固体，收率79.8%。
（2）化合物c的制备
将化合物b (1.0 g, 4.37 mmol, 1.0 eq)溶于40 mL无水四氢呋喃，室温加入硼氢化钠 (198 mg, 5.24 mmol, 1.2 eq)，室温反应 1 小时。TLC(石油醚：乙酸乙酯 = 3:1, Rf/化合物 b = 0.75, Rf/化合物 c = 0.30) 显示原料反应完毕，并有新点产生。将反应液缓慢倒入 50 mL 水中，用稀盐酸（15wt%）调节 pH = 1，用 150 mL 乙酸乙酯萃取 3 次 (50mL*3)， 将有机相合并，用无水硫酸钠干燥，过一层硅胶，滤液旋干得到 980 mg 化合物c，无色油状液体，收率 97.1%。
（3）化合物e的制备
将4-硝基萘酚（500 mg, 2.64 mmol, 1.0 eq），化合物c（611 mg, 2.64 mmol, 1.0eq）和三苯基膦（641 mg, 3.17 mmol, 1.2 eq）溶解于30 毫升无水四氢呋喃中，氮气保护冷却到0℃，慢慢滴加偶氮二甲酸二异丙酯（832 mg, 3.17 mmol, 1.2 eq），缓慢升至室温反应12小时，TLC监测反应完毕，倒入100毫升水中，用乙酸乙酯萃取3次(100 mL*3)，将有机相合并，用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干过柱（乙酸乙酯：石油醚=15:1～3:1）得到900 mg 化合物e, 黄色固体，收率84.9%。
（4）化合物f的制备
将化合物e（900 mg, 2.24 mmol, 1.0 eq）溶解于25毫升乙醇和25毫升饱和氯化铵水溶液中，升温至45℃，分批缓慢加入铁粉（625 mg, 11.19 mmol, 5.0 eq），升温至55度反应2小时，TLC监测反应完毕，硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯萃取3次（100 mL*3），将有机相合并，用无水硫酸钠干燥，过滤，有机相旋干过柱（乙酸乙酯：石油醚=15:1～1:1）得到780 mg化合物f, 黄色固体，收率93.6%。
（5）化合物g的制备
将化合物f（700 mg, 1.88 mmol, 1.0 eq）和哌啶（400 mg, 4.70 mmol, 2.5 eq）溶于25毫升无水1,4-二氧六环中，加入KI（3.12 mg, 18.80 μmol, 0.01eq）, 100℃反应12小时，TLC监测反应完毕，直接旋干过柱（二氯甲烷：甲醇=50:1～15:1）得到680 mg化合物g,棕色固体，收率96.1%。
实施例2：化合物h的制备
Figure DEST_PATH_IMAGE002
将化合物g（100 mg, 265 μmol, 1.0 eq）溶于10毫升无水甲醇，室温下加入37wt%的浓盐酸（52.3 mg, 531 umol, 2.0 eq）, 室温继续反应2小时，直接将溶液旋干得到化合物h，棕色固体，119 mg, 收率100%。
实施例3：化合物i的制备
将化合物g（100 mg, 265 μmol, 1.0 eq）溶于10毫升无水甲醇，室温下加入80%的磷酸水溶液（52 mg, 531 umol, 2.0 eq），50℃反应12小时，直接将溶液旋干得到化合物i，棕黑色固体，152 mg, 收率100%。
一、对STAT3的靶向抑制作用
1、萘胺基与STAT3蛋白的SH2结构域的相互作用的计算机虚拟分析
所有的计算机配位模拟（docking）的实验均在sybyl X2.1.1的操作平台上完成，所用的计算机配位模拟（docking）的工具为SUEFLEX DOCK。依据所选的位点（主要包括STAT3SH2结构域的磷酸化酪氨酸作用位点赖氨酸（LYS）591、精氨酸（ARG）595和精氨酸（ARG）609以及疏水相互作用位点谷氨酸（GLU）638进行计算，选取SMY006（g）的SH2结构域为对接配体。确定势能面（potential gradient）并作计算机配位模拟（docking）的实验。依据模拟（docking）的分数（Score）和构象及相互作用进行分析。
虚拟对接结果（图1）显示配体分子中与萘环相连的氧原子与SER613 支链氨基氢原子形成氢键。配体分子中乙氧基氧原子与ARG609 支链氨基氢原子形成氢键。因此，配体的萘胺基既是此种萘胺类化合物的公共基团，也是参与STAT3蛋白分子相互作用的关键基团。由此推断，具有此种基团的萘胺类化合物SMY002（h）和SMY002-P（i）等，亦可以与STAT3蛋白的SH2功能域有较强的相互作用，影响STAT3的酪氨酸磷酸化。此种萘胺类化合物均可以做为作用于STAT3的酪氨酸磷酸化的抑制剂；此种萘胺类化合物及其生物学可接受的盐均可能阻断JAK/STAT3信号传导，抑制STAT3信号下游促癌靶基因的表达，从而发挥控制肿瘤生长的作用。
2、SMY002（h）和SMY006（g）抑制STAT3蛋白的磷酸化
取对数生长期的MCF-7细胞，以胰酶消化后，用含10%胎牛血清的DMEM培养基制成密度为3×105个/mL的单细胞悬液，以每孔加入2mL细胞悬液接种至6孔细胞培养板中。37℃、5%CO2培养箱孵育，待细胞贴壁后，实验组加入浓度梯度分别为0、12.5、25、50和100 μM 的SMY002（h）或0、10、20、40 μM 的SMY006（g）处理1h后，除对照孔外，各孔加入终浓度为30ng/mL的IL-6刺激细胞。继续培养0.5 h后，用RIPA裂解液裂解细胞收集蛋白，进行Westernblot分析。分别通过抗STAT3、p-STAT3、β-actin抗体检测相应蛋白表达量。结果如图2 A，B显示，与溶剂对照孔相比，IL-6 30 ng/mL处理0.5 h后，可以显著上调MCF-7中p-STAT3的表达水平，而不影响STAT3和β-actin蛋白的表达。SMY002（h）和SMY006（g）预处理可以显著抑制IL-6诱导的STAT3磷酸化，并具有剂量依赖性。表明化合物SMY002（h）和SMY006（g）均可以靶向抑制STAT3蛋白的705 位酪氨酸磷酸化。
3、SMY002（h）抑制STAT3蛋白入核
将1×105个小鼠乳腺癌细胞4T1接种于小皿，分为对照组和IL-6（50 ng/ml）刺激组，IL-6（50 ng/ml）刺激与化合物SMY002（h）梯度剂量（0、10和20 µM）预处理组。SMY002（h）预处理1h后，加IL-6（50 ng/ml）刺激，继续培养1h；吸尽培养液，用4℃预冷的PBS洗涤细胞2次。用-20℃储存过夜的冷甲醇室温固定和透化10 min。PBS洗涤3次，每次5 min。4%多聚甲醛固定10 min。PBS洗3次后，加入山羊血清100 μl，室温封闭45 min。加入一抗（1% BSA-PBS稀释），4℃孵育过夜。PBS洗3次，每次5 min。加入1：2000稀释的Alexafluor 549标记的二抗，室温避光孵育30 min。PBS洗3次，每次5 min。DAPI（1 μg/ml）染核5 min。PBS洗3次，每次2 min。激光扫描共聚焦显微镜下观察并拍照。
图3是化合物SMY002（h）处理对IL-6刺激的小鼠乳腺癌细胞4T1的免疫荧光染色的结果。结果显示，与对照组相比，无论Il-6刺激与否4T1细胞核内的STAT3染色都很强，表明该细胞的STAT3本底活性很强，这可能与该细胞的恶性表型相关。而加化合物SMY002（h）处理后，细胞核内的STAT3染色显著减弱。表明化合物SMY002（h）可以明显抑制STAT3的核转位。
4、SMY002（h）和SMY006（g）抑制STAT3下游靶基因的表达
将小鼠乳腺癌细胞4T1接种于6孔板，每孔1×106个细胞。加化合物SMY002（h）（浓度为0，5，10，20 µM）或化合物SMY006（g）（浓度为20 µM）处理1h。按照TRIzol一步法提取细胞总RNA，测定RNA浓度和纯度。以总RNA为模板，按Promega公司反转录试剂盒说明书合成cDNA。半定量RT-PCR和实时定量RT-PCR扩增检测CCNB1、PD-L1、Bcl2、Bcl-xl和Survivin，以β-actin为内参照。所用引物见表1。
表1:
Figure 613683DEST_PATH_IMAGE003
半定量RT-PCR
反应体系：
cDNA　　 2 μl
引物　　 1 μl
2×EASY Mix　 10 μl
高压水　　　 7 μl
反应条件：
95℃预变性5 min
变性　　94℃　30 sec
退火　　60℃　30 sec
延伸　　72℃　30 sec
重复28个循环，最后72℃延伸7 min。产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定。
实时定量RT-PCR
反应体系:
cDNA 2 μl
2 X SYBR Green Supermix 10 μl
上下游引物对 1 μl
Reference Dye 0.3 μl
水 6.7 μl
每组样品设3个复孔。
反应条件：
95℃预变性5 min。
变性　　95℃ 　15 sec
退火　 60℃　 15 sec
延伸　　72℃　 30 sec
扩增40个循环，以β-actin的CT值作为初始值进行数据分析。
图4A，B是Q-PCR法检测化合物SMY002（h）和SMY006（g）梯度剂量处理对小鼠乳腺癌细胞4T1中STAT3下游靶基因的mRNA表达水平的影响。通过Two-way ANOVA进行统计学分析，结果显示，与溶剂对照相比，化合物SMY002（h）处理可以显著下调靶基因CCNB1、PD-L1、Bcl2和Survivin的mRNA表达水平（“***”表示P<0.001，“****”表示P<0.0001），并呈良好的剂量依赖性。SMY006（g）处理可以显著下调CCNB1、Bcl-xl、Bcl2和MMP9的mRNA表达水平（“****”表示P<0.0001）。表明化合物SMY002（h）和SMY006（g）可以下调STAT3下游与肿瘤细胞的生长、生存和转移相关靶基因的mRNA水平。
二、体外抑瘤作用
1、SMY002（h），SMY006（g）和SMY002-P（i）对乳腺癌、结肠癌、肺癌和肝癌细胞的增殖抑制作用
分别收集对数生长期的MCF-7，MDA-MB-231，4T1，HT-29，CT-26，HCT-116，PC9-AR，PC9-GR，PC9，HCC827，HCC827AR和HCC827ER细胞，计数，调整细胞悬液浓度为5×104个/mL，加入96孔细胞培养板，每孔100ul。以DMSO为溶剂对照，WP1066为阳性对照，将本发明所述的萘胺类化合物SMY002（h）, SMY006（g）和SMY002-P（i）用DMSO稀释后加入培养孔，使体系中萘胺类化合物的终浓度分别为0、0.01、0.03、0.1、0.3、1、3、10、30和100 μM，并继续培养48 h。每孔加入CCK-8试剂10 μL，37℃孵育4 h，酶标仪读值，测定在吸收波长为450nm下的OD值，记录结果。化合物的加入浓度和细胞生存率的曲线图如图5 A至K所示，所述的SMY002（h），SMY006（g）和SMY002-P（i）对肿瘤细胞的半数抑制率（IC50值）的统计结果如下表所示：
Figure 8892DEST_PATH_IMAGE004
表中显示：SMY002（h），SMY006（g）和SMY002-P（i）对乳腺癌细胞株（MCF-7，4T1和MDA-MB-231）、人结肠癌细胞株（HT-29，CT-26和HCT-116）和肺癌细胞株（PC9，PC9AR，PC9GR，HCC827，HCC827AR 和HCC827ER）均有良好的增殖抑制作用，特别是在结肠癌细胞的抑瘤活性更强。
2、SMY002（h）和SMY006（g）抑制细胞划痕修复
取对数生长期的小鼠乳腺癌细胞4T1，接种于6孔板，每孔1×106个细胞。约24 h后细胞呈单层均匀铺满孔底。以200 μl枪尖垂直均匀划痕。生理盐水洗2次后，用含0.5 % 胎牛血清的DMEM培养，同时加入SMY002（h）（浓度为0、1和2 µM）或SMY006（g）（浓度为0、10和20 µM）分别于0、15、30和48h在显微镜下观察拍照。实验重复3次。
图6A,B是划痕修复实验检测化合物SMY002（h）或SMY006（g）是否处理对小鼠乳腺癌细胞4T1迁移能力的影响。结果显示，溶剂对照组在划痕30 h后，划痕面积明显减少，细胞融合度增大；而化合物SMY002（h）或SMY006（g）处理组的划痕没有明显修复。表明化合物SMY002（h）或SMY006（g）可以显著抑制4T1细胞迁移。
3、SMY002（h）和SMY006（g）抑制细胞迁移和侵袭
取对数生长期的细胞，常规消化离心后重悬计数。取适量细胞铺板，用基础培养基培养使细胞饥饿过夜。次日，将用血清饥饿处理后的细胞再次用胰酶消化，结束消化后用含0.1%FBS的培养基终止消化。离心（500 g，5 min）后用基础培养基重悬。上室加30 µl 4℃预冷过夜的Matrigel，下室加600 µl含10%~20%血清的培养基做诱饵。再按1×105个细胞/孔的量取细胞悬液滴加至各Transwell上层小室。接种细胞后，用浓度为0.1%的DMSO溶剂和化合物SMY002（h）（浓度为5 µM）或SMY006（g）（浓度为10 µM）分别处理细胞，置37℃,5% CO2的孵箱继续培养。约48 h后，待细胞穿过小室且在小室背面膜上贴壁贴牢后即可用结晶紫染色。
结晶紫染色步骤：1）弃培养液，用1×PBS洗小室3遍；2）弃PBS，用75%的乙醇固定小室15 min；3）固定完成后弃尽乙醇，用1×PBS再洗小室3遍；4）弃PBS，用0.2%的结晶紫对小室进行染色，染色时间为30 min；5）自来水冲洗小室至水流清澈看不出紫色；6）用棉棒沾水小心擦去上室未能迁移的细胞然后将上室放回24孔板中显微镜下拍照记录细胞迁移和侵袭情况。
图7A-C是Transwell实验检测化合物SMY002（h）或SMY006（g）对小鼠乳腺癌细胞4T1迁移和侵袭能力的影响。结果显示，对照组有较多的细胞（紫红色颗粒代表）穿过上室的底膜或Matrigel，而化合物SMY002（h）或SMY006（g）处理后染色阳性的细胞明显减少。表明化合物SMY002（h）或SMY006（g）可以显著抑制4T1迁移和侵袭。
3、SMY006（g）抑制结肠癌细胞微球形成
细胞微球形成能力是衡量肿瘤CSC转化能力的重要指标。
收集对数生长期的HT-29和CT-26细胞，分别用无血清的DMEM培养基洗1次，1000rpm/min离心5 min。用无血清培养基（含2% B-27，1% N-2，20 µg/ml人碱性成纤维细胞生长因子（FGF-2）和100 ng/ml (EGF）重悬细胞，调整细胞密度为1000个/ml，种入低黏附24孔细胞培养板，每孔1 ml，分为DMSO对照组和SMY006（g）10 µM加药组。置37℃下5% CO2孵箱培养，每天观察细胞状态。约14 天后，用Olympus CKX41显微镜系统拍照并计数细胞微球数。结果如图8显示，HT-29和CT-26细胞的对照组均可以形成明显的大而规则的细胞微球，而SMY006（g） 10 µM加药组细胞仅有少量细胞散在分布，没有明显的微球形成。表明SMY006（g）可以在体外有效抑制结肠癌细胞的成瘤性。
三、动物实验
实验用动物为4周龄的雌性Balb/c小鼠，购自郑州大学实验动物中心，饲养在本公司SPF级动物实验室。将1×105个4T1细胞接种在小鼠腋下脂肪垫。约7天后，小鼠腋下均出现明显乳白色结节，将小鼠按体重随机分为PBS对照组和实验组，每组3只。实验组小鼠每日分别灌胃给化合物SMY002（h）或腹腔注射SMY006（g） 60 mg/kg。隔日监测各组小鼠体重及肿瘤大小。23天后，处死各组小鼠，取肿瘤及小鼠的肺、肝等重要脏器，通过组织固定和染色观察肿瘤抑制和转移情况。
图9-A,B 结果显示SMY006（g） 60 mg/kg可以显著抑制肿瘤的体积大小。图9C的结果显示溶媒对照组小鼠的肺脏均有多个肿瘤转移灶，平均每肺约35.2个瘤灶，而化合物SMY002（h） 60 mg/kg处理后，小鼠肺脏的肿瘤转移灶显著减少，平均约为9.5个。这些结果证明化合物SMY002（h）和SMY006（g）可以在体内显著抑制小鼠乳腺癌细胞的生长和转移。
综上结果表明，化合物SMY002（h），SMY006（g）和SMY002-P（i）具有良好的STAT3靶向性，可以与STAT3的SH2功能域特异结合，抑制STAT3的磷酸化、入核和多种靶基因的表达；可以抑制乳腺癌、结肠癌和非小细胞肺癌等肿瘤的增殖、耐药和转移等，显示了很强的抗癌作用。
按照药物开发的一般途径（先进行常规的抗肿瘤体外筛选，然后进行针对性的研究），本发明的化合物可以应用到与STAT3细胞信号传导异常相关的癌症治疗药物中，可通过与人体可接受的酸成盐或与药用载体混合制备抗肿瘤药物。
最后所应说明的是：上述实施例仅用于说明而非限制本发明的技术方案，任何对本发明进行的等同替换及不脱离本发明精神和范围的修改或局部替换，其均应涵盖在本发明权利要求保护的范围之内。

Claims (10)

1.一种萘胺类化合物的制备方法，其特征在于，合成路线如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
合成步骤如下：
（1）将化合物a和1,2-二溴乙烷溶解到乙腈中，依次加入碳酸钾、碘化钾，升温回流，TLC监测反应完毕后，经过滤，收集滤液并旋干，柱层析纯化得到化合物b；
（2）将化合物b溶于四氢呋喃，室温加入硼氢化钠，室温反应一段时间，TLC检测原料反应完毕后，将反应液倒入水中，用盐酸调节 pH = 1，经后处理得化合物c；
（3）将4-硝基萘酚、化合物c和三苯基膦溶解于四氢呋喃中，氮气保护冷却到-5~5℃，滴加偶氮二甲酸二异丙酯，升至室温，TLC监测反应完毕后，倒入水中，用乙酸乙酯萃取，将有机相合并，用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干溶剂，柱层析得到化合物e；
（4）将化合物e溶解于乙醇和饱和氯化铵水溶液的混合溶液中，升温至40~50℃，分批加入铁粉，升温至50~60℃反应，TLC监测反应完毕后，过滤，滤液经萃取、干燥，过滤，旋干溶剂，柱层析得到化合物f；
（5）将化合物f和哌啶溶于1,4-二氧六环中，加入KI, 95~105℃反应，TLC监测反应完毕后，直接旋干，柱层析得到化合物g。
2.根据权利要求1所述萘胺类化合物的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，化合物a、1,2-二溴乙烷、碳酸钾和碘化钾的摩尔比为1:2.5:1.2:0.01,步骤（2）中，化合物b和硼氢化钠的摩尔比为1:1.2，步骤（3）中，4-硝基萘酚、化合物c、三苯基膦和偶氮二甲酸二异丙酯的摩尔比为1:1:1.2:1.2，步骤（4）中，化合物化合物e和铁粉的摩尔比为1:5，步骤（5）中，化合物f、哌啶和KI的摩尔比为1:2.5:0.01。
3.根据权利要求1所述萘胺类化合物的制备方法，其特征在于，步骤（4）中乙醇和饱和氯化铵水溶液的体积比为1:1。
4.根据权利要求1所述萘胺类化合物的盐酸盐或磷酸盐的制备方法，其特征在于，过程如下：
将化合物g溶于无水甲醇，室温下加入浓盐酸，室温继续反应1~3小时，直接将溶液旋干得到化合物g的盐酸盐，
或者将化合物g溶于无水甲醇，室温下加入75~85wt%的磷酸水溶液，45~55℃反应10~15小时，直接将溶液旋干得到化合物g的磷酸盐。
5.根据权利要求4所述萘胺类化合物的盐酸盐或磷酸盐的制备方法，其特征在于，化合物g和盐酸的摩尔比为1:2，化合物g和磷酸的摩尔比为1:2 。
6.权利要求4或5所述萘胺类化合物的盐酸盐或磷酸盐在制备乳腺癌、结肠癌和非小细胞肺癌药物中的应用。
7.根据权利要求6所述萘胺类化合物的盐酸盐或磷酸盐在制备乳腺癌、结肠癌和非小细胞肺癌药物中的应用，其特征在于，所述萘胺类化合物的盐酸盐或磷酸盐具有下述作用：（1）抑制癌细胞增殖、生长或迁移；（2）促进癌细胞凋亡或降低癌细胞迁移能力或侵袭能力。
8.根据权利要求6所述萘胺类化合物的盐酸盐或磷酸盐作为STAT3的酪氨酸磷酸化的抑制剂。
9.根据权利要求1所述萘胺类化合物在制备乳腺癌、结肠癌和非小细胞肺癌药物中的应用，其特征在于，所述萘胺类化合物具有下述作用：（1）抑制癌细胞增殖、生长或迁移；（2）促进癌细胞凋亡或降低癌细胞迁移能力或侵袭能力。
10.根据权利要求1所述萘胺类化合物作为STAT3的酪氨酸磷酸化的抑制剂。
CN202010482556.4A 2020-06-01 2020-06-01 一种萘胺类化合物及其盐的制备方法和应用 Active CN111559991B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010482556.4A CN111559991B (zh) 2020-06-01 2020-06-01 一种萘胺类化合物及其盐的制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010482556.4A CN111559991B (zh) 2020-06-01 2020-06-01 一种萘胺类化合物及其盐的制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111559991A true CN111559991A (zh) 2020-08-21
CN111559991B CN111559991B (zh) 2022-01-25

Family

ID=72072554

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010482556.4A Active CN111559991B (zh) 2020-06-01 2020-06-01 一种萘胺类化合物及其盐的制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111559991B (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021037090A1 (zh) * 2019-08-27 2021-03-04 河南省锐达医药科技有限公司 一种萘胺类化合物及其生物学可接受的盐，其制备方法和应用
CN113444035A (zh) * 2021-04-08 2021-09-28 河南省锐达医药科技有限公司 一类具有全新化学结构的萘基脲类化合物及其制备方法和应用
CN114702439A (zh) * 2021-12-13 2022-07-05 河南省锐达医药科技有限公司 一类萘基脲-哌嗪类化合物及其制备方法和应用
WO2022166994A1 (zh) * 2021-02-06 2022-08-11 河南省锐达医药科技有限公司 一种萘基脲类化合物、其制备方法及应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1676834A1 (en) * 2004-12-30 2006-07-05 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH Fused bicyclic carboxamide derivates for use as CXCR2 inhibitors in the treatment of inflammation
CN103724207A (zh) * 2013-12-20 2014-04-16 北京智博高科生物技术有限公司 苯基苄基醚类衍生物及其制备方法和应用
CN106103417A (zh) * 2013-12-30 2016-11-09 Kt&G生命科学公司 1,2‑萘醌的衍生物及其制备方法
CN110526881A (zh) * 2019-08-27 2019-12-03 河南省锐达医药科技有限公司 一种萘胺类化合物及其生物学可接受的盐，其制备方法和应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1676834A1 (en) * 2004-12-30 2006-07-05 Sanofi-Aventis Deutschland GmbH Fused bicyclic carboxamide derivates for use as CXCR2 inhibitors in the treatment of inflammation
CN103724207A (zh) * 2013-12-20 2014-04-16 北京智博高科生物技术有限公司 苯基苄基醚类衍生物及其制备方法和应用
CN106103417A (zh) * 2013-12-30 2016-11-09 Kt&G生命科学公司 1,2‑萘醌的衍生物及其制备方法
CN110526881A (zh) * 2019-08-27 2019-12-03 河南省锐达医药科技有限公司 一种萘胺类化合物及其生物学可接受的盐，其制备方法和应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BAIHUA HU ET AL.: "Carboxylic acid based quinolines as liver X receptor modulators that have LXRβ receptor binding selectivity", 《BIOORG. MED. CHEM. LETT.》 *
CHRISTIAN PAUL KONKEN ET AL.: "Development of symmetric O-BODIPYs with different optical properties as building blocks for the synthesis of ligands for multimodal imaging", 《DYES AND PIGMENTS》 *
LIANG YU ET AL.: "Synthesis of 4-[(diethylamino)methyl]-phenol derivatives as novel cholinesterase inhibitors with selectivity towards butyrylcholinesterase", 《BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS》 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021037090A1 (zh) * 2019-08-27 2021-03-04 河南省锐达医药科技有限公司 一种萘胺类化合物及其生物学可接受的盐，其制备方法和应用
WO2022166994A1 (zh) * 2021-02-06 2022-08-11 河南省锐达医药科技有限公司 一种萘基脲类化合物、其制备方法及应用
CN113444035A (zh) * 2021-04-08 2021-09-28 河南省锐达医药科技有限公司 一类具有全新化学结构的萘基脲类化合物及其制备方法和应用
CN113444035B (zh) * 2021-04-08 2022-05-27 河南省锐达医药科技有限公司 一类具有抗癌作用的萘基脲类化合物及其制备方法和应用
WO2022214106A1 (zh) * 2021-04-08 2022-10-13 河南省锐达医药科技有限公司 一类具有抗癌作用的萘基脲类化合物及其制备方法和应用
CN114702439A (zh) * 2021-12-13 2022-07-05 河南省锐达医药科技有限公司 一类萘基脲-哌嗪类化合物及其制备方法和应用
WO2023109004A1 (zh) * 2021-12-13 2023-06-22 河南省锐达医药科技有限公司 一类萘基脲-哌嗪类化合物及其制备方法和应用
CN114702439B (zh) * 2021-12-13 2023-11-10 河南省锐达医药科技有限公司 一类萘基脲-哌嗪类化合物及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN111559991B (zh) 2022-01-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111559991B (zh) 一种萘胺类化合物及其盐的制备方法和应用
EP3070089A1 (en) N-benzyl tryptanthrin derivative, and preparation method and application thereof
CN113444035B (zh) 一类具有抗癌作用的萘基脲类化合物及其制备方法和应用
CN113387892B (zh) 一种含氮芥的咪唑杂环衍生物及其制备方法和应用
CN101967142A (zh) 噻唑酰胺类化合物及其在治疗恶性肿瘤中的药物用途
CN109369620B (zh) 吡啶类化合物及其制备方法与抗胃癌应用
CN115466245B (zh) 一种嘧啶联吡啶的异羟肟酸类衍生物及其制备方法与应用
CN110464722A (zh) 一类小分子化合物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤转移药物中的应用
CN113444074B (zh) 一种具有EGFR和Wnt双重抑制作用的化合物及其制备方法和应用
CN111675919B (zh) Pcp及其在制备抗肿瘤药物中的应用
CN110590779B (zh) 3，10二对氯苯基6，12二氮杂四高立方烷类化合物及其合成方法、应用和药物组合物
CN115317493A (zh) 一种硼酸类小分子化合物在制备增强免疫检查点抑制剂疗效及治疗白血病药物中的应用
CN114907274A (zh) 5-氟尿嘧啶-1-烷基酸衍生物及制备方法及其应用
CN114262326A (zh) 小分子化合物wj644a及其在制备治疗前列腺癌疾病的药物中的应用
CN109438339A (zh) Rbp2酶抑制剂小分子化合物wxsa-072a及其制备方法与抗胃癌应用
CN104945414A (zh) 苯并硫杂蒽类衍生物及其制备方法与应用
CN115368277B (zh) 一种含异羟肟酸结构的联苯类化合物及其应用
CN111170943B (zh) 苯并[f]环戊烷并[c]喹啉衍生物及其应用
CN109232662B (zh) 抗肿瘤作用的化合物及其制备方法和应用
CN114751841B (zh) N-(3-(3-氯苯甲酰胺)苯基)-4-甲氧基-3-硝基苯甲酰胺及其制备方法与应用
CN113648294B (zh) β-双磺酰亚胺取代酮类化合物在治疗癌症中的应用
CN115286574B (zh) Blvrb酶功能抑制剂及其制备方法和用途
CN103130760B (zh) 一种新型靶向性抗肿瘤药物及其制备方法与应用
CN115197130B (zh) 一种芳基脲类衍生物及其制备方法与应用
CN105130896A (zh) 一类含硫脲取代基的萘酰亚胺衍生物，其制备方法及应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant