CN111558003A - 一种从麦冬须根中分离纯化总黄酮和总皂苷并同时去除多效唑的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及总黄酮、总皂苷的分离纯化技术领域,用于从川麦冬须根中分离纯化总黄酮和总皂苷并同时去除多效唑,具体涉及一种从麦冬须根中分离纯化总黄酮和总皂苷并同时去除多效唑的方法,具体包括麦冬须根提取、树脂预处理、大孔树脂吸附与洗脱,其中大孔树脂吸附与洗脱包括装柱、上样、清洗、洗脱、纯化;控制上液浓度、上液速度、上液PH等;解决了现有技术中操作工艺复杂、提纯的总皂苷和总黄酮的纯度低、皂苷和黄酮的回收率低、损失大的问题,本申请的方法,相较于提取浸膏,精制品中皂苷纯度由16%提高到47%,黄酮纯度由3.8%提高到12%;皂苷回收率为86.49%,黄酮回收率为87.89%,损失少;相比原药材,多效唑去除率为85%,该方法的工艺流程简单、操作快捷。
Description
技术领域
本发明涉及总黄酮、总皂苷的分离纯化技术领域,用于从川麦冬须根中分离纯化总黄酮和总皂苷并同时去除多效唑,具体涉及一种从麦冬须根中分离纯化总黄酮和总皂苷并同时去除多效唑的方法。
背景技术
麦冬为百合科植物Ophiopohonjaponicus(L.f)Ker-GawL.的干燥块根,始载于《神农本草经》,有养阴生津、润肺清心之功效,主要用于治疗肺燥干咳、阴虚劳嗽、喉痹咽痛和肠燥便秘等病症;麦冬含甾体皂苷、高异黄酮、甾醇和多糖等化学组分,其中前两者是其主要活性成分;现代药理研究发现,麦冬甾体皂苷具有抗心脑血管疾病、抗衰老、改善学习记忆障碍、抗肿瘤和抗炎等功效,而麦冬黄酮是一种强抗氧化剂,可有效清除机体产生的自由基,阻碍细胞的退化和衰老。
现药典中麦冬以块根入药,须根弃之不用,已有研究发现麦冬须根的营养成分、活性物质与块根近似,甚至总皂苷含量还更高,因此,以往废弃的须根逐渐受到科研和企业界的重视,2019年1月,四川省发布了《麦冬须根食品安全地方标准》,使川麦冬须根正式成为新食品资源,显示出极大的食药用开发价值和前景。
但是,无论是麦冬还是麦冬须根,近年均面对一个重要问题---多效唑严重超标,为提高中药材产量,植物生长调节剂在药材种植过程中被大量使用,四川绵阳市三台县作为川麦冬的主要道地产区,每年出口麦冬占全国70%以上,农户为提高麦冬产量,大量施加多效唑促进块根膨大,增加产量,在对四川省三台县麦冬产区生长调节剂的使用调查中发现,被调查农户中约97%使用多效唑,53%样品中多效唑残留量超过了GB 2763-2016《食品安全国家标准食品中农药最大残留量》和四川省DBS51/007-2019《食品安全地方标准麦冬须根》中规定的限值,多效唑的残留对药材销售,相应食品和药品的开发均带来重大隐患。
现有中药材制品农残降解方法包括:
(1)水处理,简单、经济,适用于植株表面和鲜品中药材中的水溶性农药,缺点:对易进入植物内部的大多数脂溶性农药效果差;
(2)物理法,如光照,依靠紫外线的作用,破坏农残化学结构,缺点:效率低、成本高,有可能破坏药材中的有效成分;
(3)化学法,降解彻底,缺点:容易造成二次污染;
(4)超临界流体萃取法,利用超临界CO2流体萃取技术,去除农残,脱除效果较好,缺点:设备安全性要求高,成本及运行能耗高,限制了其在工业上的应用。
发明内容
本发明的目的在于:提供一种从麦冬须根中分离纯化总黄酮和总皂苷并同时去除多效唑的方法,解决了现有技术中操作工艺复杂、提纯的总皂苷和总黄酮的纯度低、回收率低、损失大的问题,本申请中的从麦冬须根中分离纯化总黄酮和总皂苷并同时去除多效唑的方法,相较于提取浸膏,精制品中皂苷纯度由16%提高到47%,黄酮纯度由3.8%提高到12%;皂苷回收率为86.49%,黄酮回收率为87.89%,损失少;此外,相比原药材,多效唑去除率为85%,该方法的工艺流程简单、操作快捷。
本发明采用的技术方案如下:
一种从麦冬须根中分离纯化总黄酮和总皂苷并同时去除多效唑的方法,其特征在于,具体包括以下步骤:
(1)麦冬须根提取:
将干燥的麦冬须根粉碎后过筛后与无水乙醇混合,超声提取后将滤液减压浓缩,得到干燥的浸膏,浸膏经蒸馏水溶解后过滤制得麦冬须根提取液;
(1)树脂预处理:
将大孔树脂用无水乙醇至充分溶胀后湿法装柱,以无水乙醇洗脱至流出液与水混合不呈白色混浊,再用蒸馏水洗脱至无醇味,然后用浓度为5%的HCL冲通树脂,浸泡后用水冲洗至中性,再用浓度为2%的NaOH冲通树脂,浸泡后水洗至中性,备用;
(3)大孔树脂吸附与洗脱:
A.装柱:选择玻璃或不锈钢柱,填充步骤(2)处理后的大孔树脂;
B.上样:在25-45℃的温度条件下,将麦冬须根提取液的PH调制3-5,过滤后上柱;
C.清洗:用蒸馏水进行冲柱,冲柱量与上样量的体积之比为4∶1,上样流速与冲洗流速之比为1∶1.5;
D.洗脱:使用浓度为55%-75%的乙醇溶液作为洗脱剂进行洗脱,洗脱剂用量与上样量的体积之比为8∶1,洗脱流速与上样流速之比为1.5∶1;
E.纯化:将洗脱液减压浓缩后得到纯化精制品。
进一步的,步骤(2)中的大孔树脂包括D-101大孔吸附树脂、AB-8大孔吸附树脂、DM-301大孔吸附树脂、DA-201大孔吸附树脂、H-103大孔吸附树脂、HPD-100大孔吸附树脂、D-3250大孔吸附树脂、HP-20大孔吸附树脂。
更进一步的,步骤(2)中的大孔树脂为D-101大孔吸附树脂。
进一步的,步骤(1)中粉碎的麦冬须根与无水乙醇的固液比为1∶10。
进一步的,步骤(1)中超声提取三次,每次1h。
进一步的,步骤(2)中流出液与水混合的用量比为5∶1。
进一步的,步骤(2)中的浸泡时间均为3h。
进一步的,步骤(3)中的上样温度为25℃。
进一步的,步骤(3)中麦冬须根提取液的PH调制为5。
进一步的,步骤(3)中的洗脱剂是浓度为70%的乙醇溶液。
综上所述,本发明相较于现有技术的有益效果是:
(1)在本发明的工艺参数下,相比于提取浸膏,精制品中皂苷纯度由16%提高到47%,黄酮纯度由3.8%提高到12%;皂苷回收率为86.49%,黄酮回收率为87.89%,损失少;
(2)相比原药材,多效唑去除率为85%,低于《食品安全国家标准中农药最大残留量》和《四川省的食品安全地方标准》中对多效唑残留量的规定。
(3)本发明的工艺流程简单、操作快捷。
附图说明
图1是使用不同的树脂的总皂苷和总黄酮的解析率关系图;
图2是不同温度条件下D101树脂对麦冬须根中总皂苷、总黄酮的吸附等温曲线图;
图3是Langmuir等温吸附方程拟合曲线图;
图4是Freundlich等温吸附方程拟合曲线图;
图5是上液浓度与吸附率的关系图;
图6是上液流速与吸附率的关系图;
图7是上液PH与吸附率的关系图;
图8是洗脱剂浓度对动态解吸的影响曲线图;
图9是洗脱剂用量与总皂苷浓度的关系曲线图;
图10是洗脱剂用量与总黄酮浓度的关系曲线图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合附图及实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明,并不用于限定本发明,即所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。
因此,以下对在附图中提供的本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围,而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明的实施例,本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
下面结合附图1-10及实施例对本发明作进一步说明。
实施例1:
树脂筛选:取浸膏适量,用水溶解,分别称取各树脂(相当于干重0.1g)于锥形瓶中,加入30mL样品溶液,在25℃,150r/min恒温摇床中振荡24h后,抽滤,测定吸附剩余液中皂苷、黄酮含量,计算吸附率;再向各锥形瓶中加入30mL95%乙醇,25℃,150r/min恒温摇床中振荡12h,抽滤,测定解吸液中皂苷、黄酮含量,计算解吸率;计算结果如图1所示,根据图1显示的结果可知:D101大孔树脂为最优选的树脂。
实施例2:
确定最优选的吸附温度:分别取5份已处理好的最佳树脂相当于干重2g)置于500mL锥形瓶中,加入样品溶液200mL,在25℃、35℃、45℃下进行静态吸附,计算其吸附率,判断温度对静态吸附的影响,如图2-4和表1所示。
其中图2为不同温度条件下D101大孔树脂对麦冬须根中总皂苷、总黄酮的吸附等温曲线,根据曲线显示的结果可知:吸附温度为25℃时吸附量最高,45℃最低,表明低温有利于吸附。
其中图3为Langmuir等温吸附方程拟合曲线图,图4为Freundlich等温吸附方程拟合曲线图,Langmuir方程:式中Qe为树脂平衡吸附量(mg/g);Ce为溶液中总皂苷、总黄酮的平衡浓度(mg/mL),KL为Langmuir方程系数,代表树脂的吸附强度,Qm为树脂的最大饱和吸附量(mg/g),以Ce/Qe(Y轴)对Ce(X轴)进行作图拟合;Freundlich方程:式中n、KF为Freundlich方程系数,KF与吸附量有关,1/n为Freundlich吸附指数,以lnQe(Y轴)对lnCe(X轴)进行作图拟合。
表1为Langmuir模型与Freundlich模型的对比数据。
表1
由表1数据可知,各个温度下的相关系数都较高,相比之下,Langmuir等温吸附方程拟合的相关系数比Freundlich的相关系数高,说明Langmuir方程更能准确反映该吸附过程。
实施例3:
研究溶液浓度、上样流速、上样pH对动态吸附的影响,如图5-7所示,取已筛选出的最佳类型的树脂各5份(相当于干重8g),装柱;准备不同浓度麦冬须根样品溶液,上柱流速要求为2mL/min,各加入总黄酮和总皂苷浓度为(0.198,1.48mg/mL;0.396,2.96mg/mL;0.594,4.44mg/mL;0.792,5.92mg/mL;0.99,7.44mg/mL)的麦冬须根样品溶液做动态吸附实验,收集,测吸光度,计算吸附率,如图5所示;取5份预处理好的最佳类型的树脂(相当于干重8g),装柱,各加入总黄酮和总皂苷浓度为(0.198,1.48mg/mL)的麦冬须根样品溶液;分别以1mL/min、1.5mL/min、2mL/min、2.5mL/min、3mL/min的速度进行吸附,收集剩余液,测吸光度,计算吸附率,如如6所示;取5份预处理好的最佳类型的树脂(相当于干重8g)装柱,各加入总黄酮和总皂苷浓度为(0.198,1.48mg/mL)的样品溶液;上柱流速要求为2mL/min,调节pH分别为3、5、7、9、11,做动态吸附实验,收集剩余液,测吸光度,计算吸附率,如图7所示。
通过上述检测结果确定最优选的吸附条件为:样品液pH调制到5,过滤后上柱,上样体积为1个柱床体积,上样流速1.0mL/min。
实施例4:
如图8-10所示,研究洗脱剂浓度、洗脱流速、洗脱剂体积对动态解吸的影响:动态吸附后分别用水和10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%的乙醇进行动态解吸,找出不同浓度的解吸溶剂对麦冬须根总黄酮、总皂苷以及多效唑的动态解吸率的影响,计算解吸率,如图8所示;将吸附饱和后的树脂,样品溶液30mL,用浓度为70%乙醇分别在流速为1mL/min、1.5mL/min、2mL/min、2.5mL/min、3mL/min,洗脱剂体积0~10BV下洗脱,收集洗脱液,测吸光度,计算解吸率,如图9-10所示。
通过以上实验检测结果确定最优选的洗脱条件为:洗脱剂为70%的乙醇水溶液,流速1.5mL/min,洗脱八个柱床体积。
以上所述实施例仅表达了本申请的具体实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本申请保护范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本申请技术方案构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本申请的保护范围。
Claims (10)
1.一种从麦冬须根中分离纯化总黄酮和总皂苷并同时去除多效唑的方法,其特征在于,具体包括以下步骤:
(1)麦冬须根提取:
将干燥的麦冬须根粉碎后过筛后与无水乙醇混合,超声提取后将滤液减压浓缩,得到干燥的浸膏,浸膏经蒸馏水溶解后过滤制得麦冬须根提取液;
(2)树脂预处理:
将大孔树脂用无水乙醇至充分溶胀后湿法装柱,以无水乙醇洗脱至流出液与水混合不呈白色混浊,再用蒸馏水洗脱至无醇味,然后用浓度为5%的HCL冲通树脂,浸泡后用水冲洗至中性,再用浓度为2%的NaOH冲通树脂,浸泡后水洗至中性,备用;
(3)大孔树脂吸附与洗脱:
A.装柱:选择玻璃或不锈钢柱,填充步骤(2)处理后的大孔树脂;
B.上样:在25-45℃的温度条件下,将麦冬须根提取液的PH调制3-5,过滤后上柱;
C.清洗:用蒸馏水进行冲柱,冲柱量与上样量的体积之比为4∶1,上样流速与冲洗流速之比为1∶1.5;
D.洗脱:使用浓度为55%-75%的乙醇溶液作为洗脱剂进行洗脱,洗脱剂用量与上样量的体积之比为8∶1,洗脱流速与上样流速之比为1.5∶1;
E.纯化:将洗脱液减压浓缩后得到纯化精制品。
2.根据权利要求1所述的一种从麦冬须根中分离纯化总黄酮和总皂苷并同时去除多效唑的方法,其特征在于,步骤(2)中的大孔树脂包括D-101大孔吸附树脂、AB-8大孔吸附树脂、DM-301大孔吸附树脂、DA-201大孔吸附树脂、H-103大孔吸附树脂、HPD-100大孔吸附树脂、D-3250大孔吸附树脂、HP-20大孔吸附树脂。
3.根据权利要求2所述的一种从麦冬须根中分离纯化总黄酮和总皂苷并同时去除多效唑的方法,其特征在于,步骤(2)中的大孔树脂为D-101大孔吸附树脂。
4.根据权利要求1所述的一种从麦冬须根中分离纯化总黄酮和总皂苷并同时去除多效唑的方法,其特征在于,步骤(1)中粉碎的麦冬须根与无水乙醇的固液比为1∶10。
5.根据权利要求1所述的一种从麦冬须根中分离纯化总黄酮和总皂苷并同时去除多效唑的方法,其特征在于,步骤(1)中超声提取三次,每次1h。
6.根据权利要求1所述的一种从麦冬须根中分离纯化总黄酮和总皂苷并同时去除多效唑的方法,其特征在于,步骤(2)中流出液与水混合的用量比为5∶1。
7.根据权利要求1所述的一种从麦冬须根中分离纯化总黄酮和总皂苷并同时去除多效唑的方法,其特征在于,步骤(2)中的浸泡时间均为3h。
8.根据权利要求1所述的一种从麦冬须根中分离纯化总黄酮和总皂苷并同时去除多效唑的方法,其特征在于,步骤(3)中的上样温度为25℃。
9.根据权利要求1所述的一种从麦冬须根中分离纯化总黄酮和总皂苷并同时去除多效唑的方法,其特征在于,步骤(3)中麦冬须根提取液的PH调制为5。
10.根据权利要求1所述的一种从麦冬须根中分离纯化总黄酮和总皂苷并同时去除多效唑的方法,其特征在于,步骤(3)中的洗脱剂是浓度为70%的乙醇溶液。
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