CN111544577A - 一种女性生殖护理制剂以及制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种女性生殖护理制剂以及制备方法。女性生殖护理制剂由以下重量份的原料组成：脂肪间充质干细胞外泌体超滤液500‑700份，胶原蛋白20‑40份，甘油100‑180份，消炎组合物50‑150份，抑菌组合物80‑100份，紧缩组合物100‑120份，PH调节剂0.6‑1.2份；消炎组合物为月见草提取物、芦荟提取物和茶树精油的混合物；抑菌组合物为茴香提取物、马齿苋提取物和苦参提取物的混合物；紧缩组合物为明矾和石榴皮提取物的混合物。本发明的女性生殖护理制剂具有紧缩阴道、阴道抑菌、阴道消炎、增强阴道内细胞的活性及促进阴道内细胞再生的优点。

Description

一种女性生殖护理制剂以及制备方法
技术领域
本发明涉及女性生殖护理技术领域，更具体而言，它涉及一种女性生殖护理制剂以及制备方法。
背景技术
妇科疾病比如阴道炎等和痔疮通常是一些常见的多发病，通常且久治不愈，给正常的生活、工作带来极大的不便。因此，科学家根据上述情况开发了一些外用阴道护理凝胶对女性的阴道进行改善和护理。
例如，授权公布号为CN103272153B的专利公开了一种抑菌凝胶及其制备方法，每升抗菌凝胶由以下原料组成：苯扎氯铵1.7-1.9g、甘油30-50ml、薄荷醇0.1-1.3g、明矾1-1.8g、乳酸0.3-0.4g、卡波姆2.5-5g、中药提取物3-6g、纯化水余量。该发明含有多种抗炎、抗菌、镇痛成分，通过各原料间的协同作用。适用于各种阴道细菌性感染、滴虫性感染、白带和念珠菌性感染的护理。
该发明制备配方中含1.7-1.9g苯扎氯铵，苯扎氯铵(表面活性剂和杀菌剂)，使得上述配方的抑菌凝胶具有较好的抗菌性能。但是，由于苯扎氯铵等表面活性剂具有溶出性、渗入性和反应性对阴道皮肤刺激性大等特点，因此高含量的苯扎氯铵不利于人体健康。同时这种抑菌凝胶距具有较大的副作用，例如，薄荷醇使用在皮肤上可导致间质性肾炎和用药部位局部皮肤坏疽，或局部皮肤组织增生的现象；卡波姆容易皮肤出现不适，出疹子的症状，并且不具有缩阴及阴部清洁等附加效果。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明的第一个目的在于提供一种女性生殖护理制剂，其具有紧缩阴道、阴道抑菌、阴道消炎、增强阴道内细胞的活性，并且具有促进阴道内细胞再生的优点。
在第一方面，为实现上述第一个目的，本发明提供了如下技术方案：一种女性生殖护理制剂，所述生殖护理制剂由以下重量份的原料制得：
Figure BDA0002510382320000011
Figure BDA0002510382320000021
所述消炎组合物为月见草提取物、芦荟提取物和茶树精油的混合物；
所述抑菌组合物为茴香提取物、马齿苋提取物和苦参提取物的混合物；
所述紧缩组合物为明矾和石榴皮提取物的混合物。
通过采用上述技术方案，脂肪间充质干细胞外泌体超滤液中多种细胞因子间接的方式产生作用，对多种细胞生理功能和代谢活性发挥生物调节作用，直接，或间接地影响阴道内细胞再生，使得阴道皮肤更加紧密、有光泽；胶原蛋白含亲水性的天然保湿因子，具有较好的保湿性，从而赋予阴道皮肤较好的弹性，同时胶原蛋白可以调整肌肤的内分泌功能，增强皮肤的光滑程度；甘油作为吸湿剂、黏度改进剂和溶剂，将进一步加强该生殖护理制剂的保湿性；月见草、芦荟和茶树精油的混合组成对阴道内细胞具有较好的消炎作用；茴香、马齿苋和苦参提取物的混合组成对阴道皮肤具有极佳的抗菌作用，明矾和石榴皮酸涩且收敛，有利于阴道的收缩、增强皮肤的弹性和韧性；因此，通过上述物质组合起到的协合作用，使得制得的生殖护理制剂具有紧缩阴道、阴道抑菌、阴道消炎、增强阴道内细胞的活性以及促进阴道内细胞再生的优势。
进一步地，所述茴香提取物、马齿苋提取物和苦参的重量之比为：
茴香提取物：马齿苋提取物：苦参提取物＝(1-3):(1-3):(1-2)。
通过采用上述技术方案，使得生殖护理制剂的抗菌性能达到最优，且更容易与生殖护理制剂中的其他成分混合均匀。
进一步地，所述月见草提取物、芦荟提取物和茶树精油的重量之比为：月见草提取物：芦荟提取物：茶树精油＝(2-4):3:(1-3)。
进一步地，所述月见草提取物、芦荟提取物和茶树精油的重量之比为：月见草提取物：芦荟提取物：茶树精油＝3:3:2。
通过采用上述技术方案，使得生殖护理制剂的消炎性能达到最优，且更容易与生殖护理制剂的其他成分混合均匀。
进一步地，所述明矾和石榴皮提取物的重量之比为：
明矾：石榴皮提取物＝4:1。
通过采用上述技术方案，使得生殖护理制剂的紧缩阴道的性能达到最优，且更容易与生殖护理制剂的其他成分混合均匀。
进一步地，所述PH调节剂为乳酸PH调节剂。
通过采用上述技术方案，调节护理制剂的pH值，从而维持阴道微生态平衡的因素的雌激素。
本发明的第二个目的在于提供一种女性生殖护理制剂的制备方法，其制备方法简便，且能很好地提高外泌体超滤液的生物活性成分的效率，有利于促进阴道细胞的再生。
在第二方面，为实现上述第二个目的，本发明提供了如下技术方案：一种女性生殖护理制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)按前述第一方面中的重量份配比称取脂肪间充质干细胞外泌体超滤液、胶原蛋白、甘油、消炎组合物、抗菌组合物、紧缩组合物和PH调节剂；
(2)将步骤(1)称取的胶原蛋白添加到脂肪间充质干细胞外泌体超滤液中，混合搅拌5-20min得到第一混合物；
(3)将甘油、消炎组合物、抗菌组合物和紧缩组合物依次添加到步骤(2)中的第一混合物中，混合搅拌5-20min得到第二混合物；
(4)将pH调节剂加入到步骤(3)中的第二混合物中，搅拌15-20min，得到凝胶状的生殖护理制剂；
(5)将步骤(4)得到的凝胶状的生殖护理制剂进行分装，并利用环氧乙烷灭菌。
通过采用上述技术方案，本制备方法严格控制各个原料的添加顺序，能够保证胶原蛋白、甘油、消炎组合物、抗菌组合物、紧缩组合物和PH调节剂能够均匀的分散于脂肪间充质干细胞外泌体超滤液中，从而保证女性生殖护理制剂在阴道内壁释放速率一致；同时利用脂肪间充质干细胞外泌体超滤液中的生物活性成分，对阴道内壁细胞进行调节，从而直接，或间接地促进阴道内细胞再生，改善阴道内壁的光泽和润滑度。
进一步地，所述脂肪间充质干细胞外泌体超滤液经如下方法制得：
(1)将脂肪间充质干细胞从液氮罐中取出后35-40℃条件下解冻，离心，弃去上清液，得重悬细胞沉淀；往重悬细胞沉淀加入含4wt％血清替代物的基础培养基，得到细胞悬液，将细胞悬液接种到培养瓶中并将培养瓶放入CO2培养箱中培养72h；
(2)从步骤(1)中的培养瓶中取出脂肪间充质干细胞，用胰酶消化，并加入含4wt％血清替代物的培养液晃动均匀浸润脂肪间充质干细胞，终止消化；对将培养瓶中的细胞悬液进行离心处理，弃去上清液，得重悬细胞沉淀；往重悬细胞沉淀加入含4wt％血清替代物的基础培养基，将细胞悬液接种到培养瓶放入CO2培养箱中培养72h；
(3)从步骤(2)中的培养瓶中取细胞悬液，离心，收集上清液；对收集的上清液进行超滤，得到脂肪间充质干细胞外泌体超滤液。
通过采用上述技术方案，对收集到的含有间充质干细胞外泌体的上清液就超滤，可制得一定分子量的脂肪间充质干细胞外泌体超滤液，从而降低混有其它杂质的可能性，降低有其它杂质影响外泌体功效的可能性。
进一步地，将所述步骤(3)收集的上清液经过10KDa超滤柱中过滤，收集渗出液；对收集的渗出液用1KDa超滤柱中进行超滤，弃去渗出液，收集未渗出液，获得分子量为1KDa-10KDa脂肪间充质干细胞外泌体超滤液。
通过采用上述技术方案，使得生殖护理制剂中的超滤液能够快速被阴道内细胞吸收，从而能够快速恢复阴道内细胞的活力、刺激阴道内细胞再生，使得阴道内壁光泽有弹性。
综上所述，本发明具有以下有益效果：
第一、本发明中选用脂肪间充质干细胞的外泌体超滤液，提高阴道内细胞的活性，促进阴道细胞再生。
第二、本发明中优选茴香提取物：马齿苋提取物：苦参提取物＝(1-3):(1-3):(1-2)，使得生殖护理制剂的抗菌性能达到最优；
第三、本发明中优选月见草提取物：芦荟提取物：茶树精油＝3:3:2，使得生殖护理制剂的消炎性能达到最优；
第四、本发明中优选明矾：石榴皮提取物＝4:1，使得生殖护理制剂的紧缩阴道的性能达到最优。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细说明。
原料和仪器来源：见下表1和表2
表1女性生殖护理制剂的各原料来源和规格
Figure BDA0002510382320000051
表2女性生殖护理制剂的各仪器来源
Figure BDA0002510382320000052
Figure BDA0002510382320000061
实施例
各实施例中的组分和配比如表3所示。
表3各实施例中女性生殖护理制剂的组分和配比
Figure BDA0002510382320000062
Figure BDA0002510382320000071
实施例1至实施例13中的脂肪间充质干细胞外泌体超滤液均采用以下制备方法制得：
溶液配制：
溶液C：基础培养基+血清替代物，血清替代物含量为4wt％；
溶液D：20ml0.25％胰蛋白酶溶液中加入30ml生理盐水混匀，即得溶液D。
S1、脂肪间充质干细胞的复苏
(1)向5根15ml离心管A中分别倒入基础培养基10ml，预热到37℃，静置待用；
(2)从液氮罐中取出装有脂肪间充质干细胞的冻存管快速放入37℃水浴锅中，摇动冻存管使得冻存液快速融化；用5ml移液管将脂肪间充质干细胞全部转移到离心管A中，并用1ml基础培养基冲洗冻存管，冲洗液倒入离心管A中；
(3)重复步骤(2)操作，将离心管A放置于离心机中，300g离心5min，吸弃上清液，保留细胞沉淀；震散细胞沉淀后，向离心管A中加入基础培养基，定容至10ml，颠倒混匀；放入离心机，300g离心5min，吸弃上清液，震散细胞沉淀；
(4)向离心管A中加入5ml溶液C，颠倒混匀，用5ml移液管吸取0.5ml细胞悬液进行细胞计数；
(5)准备5个T-175培养瓶A，分别加入28ml溶液C；从(4)中的离心管A中取细胞悬液接种到T-175培养瓶A中，细胞接种量为1.2*106个/瓶；
(6)完成细胞接种后从5个T-175培养瓶A中分别吸取2ml细胞悬液，加入到5ml离心管B中，制成2ml检样，送至质检部以检查是否有微生物污染；
(7)将T-175培养瓶A放入CO2培养箱中培养72h。
S2、脂肪间充质干细胞的传代培养
(1)S1中T-175培养瓶A中的细胞汇合度达到80％以上时，从培养箱中取出S1中的T-175培养瓶A，转移至生物安全柜，平稳叠放；将T-175培养瓶A中的上清液移到无菌血清瓶A中，从无菌血清瓶A中吸取上清液4ml，加入到5ml离心管C中，制成4ml检样，送至质检部以检查是否有微生物污染；
(2)分别向5个T-175培养瓶A中加入10ml生理盐水，晃动瓶身，润洗瓶底，吸弃洗液；
(3)用25ml移液管吸取溶液D，按照5ml/瓶量将溶液D沿T-175培养瓶A内壁加入，再迅速晃动瓶身，充分浸润细胞后，平放瓶身；
(4)用显微镜下观察T-175培养瓶A中的细胞是否变圆；若变圆，竖立瓶身，用25ml移液管吸取溶液C，按照5ml/瓶量沿T-175培养瓶A的内壁加入，晃动瓶身，均匀浸润细胞，终止消化；
(5)用25ml移液管将5个T-175培养瓶A中的细胞悬液吸出，并分别平均汇集至5根50ml离心管D中；
(6)将(5)中的离心管D放入离心机，300g离心5min，吸弃上清液，震散细胞沉淀；向离心管D中倒入基础培养基，定容至50ml，颠倒混匀；放入离心机，300g离心5min，吸弃上清液，震散细胞沉淀；
(7)并管：取(6)中的其中一根离心管D，用25ml移液管加入20ml基础培养基，晃动管身，重悬细胞沉淀，转移至一根250ml的离心管E中，重复转移，直至将所有细胞并入离心管E中；
(8)洗管：重复(7)操作，将清洗液汇集至离心管E中；
(9)向离心管E中倒入溶液C，定容到200ml，颠倒混匀；吸取0.5ml细胞悬液进行细胞计数；可根据细胞计数结果，继续向离心管E中倒入溶液C，调整细胞密度为1*106个/ml；
(10)用25ml移液管吸取溶液C，按照28ml/瓶量加入5个T-175培养瓶B中，平稳叠放，待用；
(11)用5ml移液管吸取(9)中的细胞悬液，按照1.5ml/瓶量接种至(10)中的T-175培养瓶B中，细胞接种量为1.5*106个/瓶；
(12)完成细胞接种后随机选取(11)中的3个T-175培养瓶B，用5ml移液管从每个T-175培养瓶B中分别吸取0.5ml细胞悬液，分别加入离心管F中，制成1.5ml检样，送至质检部以检查是否有微生物污染；
(13)将(11)中的T-175培养瓶B放入CO2培养箱中培养72h。
S3、脂肪间充质干细胞外泌体的收获
(1)S2中T-175培养瓶B中的细胞汇合度达到80％以上时，从CO2培养箱中取出S2中的T-175培养瓶B，转移至生物安全柜，平稳叠放，用25ml移液管将T-175培养瓶B中的上清液移到无菌血清瓶B，从无菌血清瓶B中吸取上清液4ml；加入到5ml离心管G中，制成4ml检样，送至质检部以检查是否有微生物污染；
(2)用25ml移液管将T-175培养瓶B中的细胞悬液吸出分别汇集至5根50ml离心管H中；
(3)将(2)中的离心管H放入离心机，300g离心5min，收集上清液；
(4)将(3)获得的上清液经过定性滤纸抽滤后获得粗滤液，将粗滤液从10KD超滤柱进行超滤，收集渗出液，获得分子量小于10KDa的渗出液；
(5)对(4)中获得分子量小于10KDa的渗出液从1KDa超滤柱进行超滤，弃去渗出液，收集未渗出液，获得分子量在1KDa-10KDa的脂肪间充质干细胞外泌体超滤液。
注：除了离心操作，步骤S1、步骤S2和步骤S3均在生物安全柜内进行。
实施例1至实施例11中女性生殖护理制剂的制备方法均采用以下步骤：
S4、按表3重量配比称取脂肪间充质干细胞外泌体超滤液、胶原蛋白、甘油、月见草提取物、芦荟提取物、茶树精油、茴香提取物、马齿苋提取物、苦参提取物、明矾、石榴皮提取物和乳酸PH调节剂；
S5、将步骤S4称取的胶原蛋白添加到脂肪来源间充质干细胞外泌体超滤液中，完全溶解，混合搅拌10min得到第一混合物；
S6、将步骤S4称取的月见草提取物、芦荟提取物、茶树精油、茴香提取物、马齿苋提取物、苦参提取物、明矾和石榴皮提取物依次添加到步骤S5中的第一混合物中，完全溶解，混合搅拌10min得到第二混合物；
S7、将步骤S4称取的乳酸pH调节剂加入到步骤S6中的第二混合物中，得到凝胶状的生殖护理制剂；
S8、将步骤S7得到的凝胶状的生殖护理制剂以装入推进器的方式进行分装，并利用环氧乙烷灭菌。
实施例14:
一种女性生殖护理制剂，与实施例2的区别在于制备脂肪充质干细胞外泌体超滤液的制备方法中步骤S3中(5)将获得的上清液经过定性滤纸抽滤后获得粗滤液，该粗滤液作为脂肪间充质干细胞外泌体滤液；
女性生殖护理制剂的制备方法均采用以下步骤：
S4、按表3中实施例2重量配比称取脂肪间充质干细胞外泌体滤液、胶原蛋白、甘油、月见草提取物、芦荟提取物、茶树精油、茴香提取物、马齿苋提取物、苦参提取物、明矾、石榴皮提取和乳酸PH调节剂；
S5、将步骤S4称取的胶原蛋白添加到脂肪间充质干细胞外泌体超滤液中，完全溶解，混合搅拌10min得到第一混合物；
S6、将步骤S4称取的月见草提取物、芦荟提取物、茶树精油、茴香提取物、马齿苋提取物、苦参提取物、明矾和石榴皮提取物依次添加到步骤S5中的第一混合物中，完全溶解，混合搅拌10min得到第二混合物；
S7、将步骤S4称取的乳酸pH调节剂加入到步骤S6中的第二混合物中，得到凝胶状的生殖护理制剂；
S8、将步骤S7得到的凝胶状的生殖护理制剂以装入推进器的方式进行分装，环氧乙烷灭菌。
实施例15:
一种女性生殖护理制剂，与实施例2的区别在于制备脂肪充质干细胞外泌体超滤液的制备方法中步骤S3中(5)将获得的上清液经过定性滤纸抽滤后获得粗滤液，将粗滤液用1KDa超滤柱进行超滤，收集渗出液，获得分子量小于1KDa的脂肪间充质干细胞外泌体超滤液；
女性生殖护理制剂的制备方法均采用以下步骤：
S4、按表3中实施例2重量配比称取脂肪间充质干细胞外泌体超滤液、胶原蛋白、甘油、月见草提取物、芦荟提取物、茶树精油、茴香提取物、马齿苋提取物、苦参提取物、明矾、石榴皮提取和乳酸PH调节剂；
S5、将步骤S4称取的胶原蛋白添加到脂肪间充质干细胞外泌体超滤液中，完全溶解，混合搅拌10min得到第一混合物；
S6、将步骤S4称取的月见草提取物、芦荟提取物、茶树精油、茴香提取物、马齿苋提取物、苦参提取物、明矾和石榴皮提取物依次添加到步骤S5中的第一混合物中，完全溶解，混合搅拌10min得到第二混合物；
S7、将步骤S4称取的乳酸pH调节剂加入到步骤S6中的第二混合物中，得到凝胶状的生殖护理制剂；
S8、将步骤S7得到的凝胶状的生殖护理制剂以装入推进器的方式进行分装，利用环氧乙烷灭菌。
实施例16：
一种女性生殖护理制剂，与实施例2的区别在于制备脂肪充质干细胞外泌体超滤液的制备方法中步骤S3中(5)将获得的上清液经过定性滤纸抽滤后获得粗滤液，将粗滤液用10KDa超滤柱进行超滤，收集未渗透液，获得分子量大于10KDa的脂肪间充质干细胞外泌体超滤液；
女性生殖护理制剂的制备方法均采用以下步骤：
S4、按表3中实施例2重量配比称取脂肪间充质干细胞外泌体超滤液、胶原蛋白、甘油、月见草提取物、芦荟提取物、茶树精油、茴香提取物、马齿苋提取物、苦参提取物、明矾、石榴皮提取物和乳酸PH调节剂；
S5、将步骤S4称取的胶原蛋白添加到脂肪间充质干细胞外泌体超滤液中，完全溶解，混合搅拌10min得到第一混合物；
S6、将步骤S4称取的月见草提取物、芦荟提取物、茶树精油、茴香提取物、马齿苋提取物、苦参提取物、明矾和石榴皮提取物姆依次添加到步骤S5中的第一混合物中，完全溶解，混合搅拌15min得到第二混合物；
S7、将步骤S4称取的乳酸pH调节剂加入到步骤S6中的第二混合物中，得到凝胶状的生殖护理制剂；
S8、将步骤S7得到的凝胶状的生殖护理制剂以装入推进器的方式进行分装，并利用环氧乙烷进行灭菌。
对比例:1
从广州市尚恩美容仪器有限公司购买的菲维斯妇科抗菌消炎凝胶。
对比例2
从苏州美莱美容医院有限公司购买的卡兰卡诺女性私处紧致凝胶。
将实施例1至实施例16制备的护理制剂在阴道抑菌、阴道消炎和紧缩阴道领域中的应用，将实施例1至实施例16制备的护理制剂、对比例1和对比例2中的购买普通护理凝胶进行功效测试，试验过程如下：
一、本实施例1至16、对比例1至2制备的凝胶护理制剂对阴道常见感染菌的体外抗菌试验。
(1)实验材料
实验菌株
标准菌株共9株，菌株如下表4所述
菌株 型号
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) ATCC25923
大肠埃希氏菌(Escherichia coli) ATCC25922
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) ATCC27853
阴道加特纳菌(Gardnrella vaginallis) ATCC14018
白假丝酵母菌(Candida albicans) CMCC85021
表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermdis) ATCC26069
普通变形杆菌(Proteus vulgaris) CMCC49010
粪链球菌(Streptococcus faecalis) CMCC32221
藤黄微球菌(Micrococcus luteus) CMCC28006
阴道加特纳菌标准菌株购自中国疾病预防中心微生物流行病研究所。其余标准菌株冻干品均购自中国预防医学科学院北京生物制品药品检定所中国医学细菌保藏中心。所有细菌菌株于-80℃冷冻保存，实验前复苏传代培养。
(2)主要试剂、培养基以及测试仪器
米勒-海顿肉汤(Mueller-HintonBroth，MHB)，上海中科昆虫生物技术开发有限公司。
米勒-海顿琼脂(Mueller-HintonAgar，MHA)，上海中科昆虫生物技术开发有限公司。
按购买的培养基说明书配制培养基，进行灭菌处理，4℃冰箱保存备用。
主要仪器如下表5所述
Figure BDA0002510382320000131
(3)实验方法
1)阳性对照和阴性对照的制备
阳性对照为：
S1、取15ml的琼脂培养基放置于无菌培养皿中，铺匀，静置10min凝固；
S2、无菌培养皿中放入两个牛津杯，向无菌培养皿中加入含有上表5菌株的半固态培养基，牛津杯中不添加含有上表5菌株的半固态培养基，静置，等待凝固；
阴性对照为：培养基均无菌生长。
2)抑菌效果的测定
取多个由步骤(1)中制成的培养基，分别加入牛津杯由实施例1至13、对比例1至4制成的样品45μl，30℃培养24h、36h、48h，分别观察并测量抑菌圈的直径。
判断标准：抑菌圈直径大于或等于20mm为极敏，抑菌圈直径为15-20mm为高敏，抑菌圈直径为10-15mm为中敏，抑菌圈直径溶液10-15mm为中敏，抑菌圈直径小于或等于10mm为低敏。
具体结果如下表6所示：
表6为各个菌株分别在24h、36h、48h下的抑菌效果
Figure BDA0002510382320000141
Figure BDA0002510382320000151
Figure BDA0002510382320000161
根据上述表6表明，采用本发明实施例1至16的凝胶护理制剂对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、白假丝酵母菌、表皮葡萄球菌、普通变形杆菌、粪链球菌、藤黄微球菌的9株标准菌株抑菌圈直径均大于20mm，表明本发明公开的生殖护理制剂对阴道常见的感染菌具有较强的抑菌和杀菌作用；实施例2、实施例8至11制备的护理制剂在抗菌和抑菌性能相比，抑菌组合物中茴香提取物：马齿苋提取物：苦参提取物＝＝(1-3):(1-3):(1-2)重量比配制的女性生殖护理制剂的抗菌、抑菌性能较好；相比于实施例8和9可知，实施例2制备的护理制剂在抗菌和抑菌性能上明显优于实施例8和9，从而表明抑菌组合物中茴香提取物：马齿苋提取物：苦参提取物＝2：2：1重量比配制的女性生殖护理制剂的抗菌、抑菌性能达到最优；
相比于实施例4至13可知，实施例2制备的护理制剂在抗菌和抑菌性能上明显优于实施例4至11，表明本发明中消炎组合物、抑菌组合物和紧缩组合物之间相互协同配合使用，使得女性生殖护理制剂有效的对阴道中常见的感染菌起到较好的抑菌、抗菌作用；
相比于实施例14至16，实施例1至3制备的护理制剂在抗菌、抑菌性能上明显优于实施例14至16，表明本发明公开的女性生殖护理制剂中脂肪充质干细胞外泌体超滤液能对球菌有一定的抑菌性；
相比于对比例1相比，实施例1至16制备的护理制剂在抗菌、抑菌性能上明显优于对比例1，表明本发明的护理制剂对阴道常见的感染菌具有较强的抗菌、抑菌作用。
二、本实施例1至16、对比例1制备的凝胶护理制剂对兔霉性阴道炎的影响。
(1)实验材料
实验动物日本大耳白兔，一级，160只，重2.0-3.0kg，雌性。由人人实验(北京)科技有限公司提供，实验动物生产许可证：SCXK(陕)2006-001。全价兔颗粒饲料，自由饮用生活饮用水。
(2)实验方法
1)造模
将白色念珠菌于实验前2天接种于沙氏培养基中，37℃培养24小时后，并用菌落计数法测定其浓度，离心后用生理盐水调整浓度为5.0×1010CFU/ml，备用。
将190只家兔用5号头皮针硅胶管涂抹无菌石蜡油后，缓慢插入阴道内5-8cm，注入浓度为5.0×1010CFU/ml的白色念珠菌悬液0.25ml于阴道内造模，每天一次。造模后第6天，取阴道拭子涂片后染色镜检，阴道洁度分级，进行细菌学检测，确定模型成立。
2)给药方法
模型成立后，将造模的190家兔随机分成19组，每组10只，其中一组为空白对照组。实施例1至16制备得到的生殖护理制剂、对比例1中的护理凝胶分别对应的供兔品中，给药方法：将凝胶护理制剂利用推进器推入阴道5-8cm深处，每天一次连续给药7天。观察动物生长、活动和外阴洁净情况，检查阴道清洁度、进行细菌学检测及取阴道组织进行病理学检查。
3)判断标准肉眼观察，是否出现炎症反应：阴道外周充血、水肿、白色分泌物等症状。
阴道清洁度分级和阴道炎好转、治愈标准，参照《妇产科学》第5版统编教材；造模成功判断标准，参照《药理实验方法学》；治愈率及有效率的计算公式如下：
治愈率(％)＝痊愈的动物数/各组总动物数*100
有效率(％)＝好转的动物数/各组总动物数*100
4)实验结果
实施例1至13、对比例1至4对兔霉菌性阴道炎的影响
表7为各护理制剂对兔霉菌性阴道炎治疗后阴道清洁度变化和疗效结果
Figure BDA0002510382320000181
Figure BDA0002510382320000191
从上述表7可知，治疗之前各组阴道清洁度均为Ⅲ或Ⅳ度，使用本发明制备的实施例1至16后，与对照组比较，阴道清洁度和治愈率得到明显的改善；
与对比例1至3相比，实施例1至16制备的护理制剂在清洁度和治愈率明显优于对比例1至3，从而表明本发明公开的女性生殖护理制剂能够对阴道内细胞进行修复和激发细胞的活性；
与实施例4至7相比，实施例2制备的护理制剂在阴道清洁度和治愈率明显优于实施例4至7制备的凝胶护理制剂，因此，表明消炎组合物中月见草提取物：芦荟提取物：茶树精油＝3:3:2重量比配制的女性生殖护理制剂的消炎性能达到最优；
相比于实施例4至13可知，实施例2制备的护理制剂在抗菌和抑菌性能上明显优于实施例4至13，表明本发明中消炎组合物、抑菌组合物和紧缩组合物之间相互协同配合使用，使得女性生殖护理制剂明显的提高了阴道清洁度和治愈率；与对比例1相比，实施例1至16制备的护理制剂在阴道清洁度和治愈率中明显优于对比例1制备的凝胶护理制剂，因此，本发明制备的女性生殖护理制剂对阴道炎症有较好治疗效果；
实施例1至实施例3之间相互对比，实施例2中阴道清洁度和治愈率明显优于实施例1和实施例3，表明脂肪间充质干细胞外泌体超滤液、胶原蛋白、甘油、月见草提取物、芦荟提取物、茶树精油、茴香提取物、马齿苋提取物、苦参提取物、明矾、石榴皮提取物以及乳酸pH调节剂的配合使用能过提高强阴道内壁炎症的清洁度和治愈率，对阴道内细胞进行修复和激发细胞活性的功能。
三、本实施例1至16制备的凝胶护理制剂、对比例1购买的抗菌消炎凝胶和对比例2购买的的私处紧致凝胶进行人体临床试验。
(1)病例选择：
北京某医院妇科，选择320例试验对象均已顺产过一个或多个小孩，试验对象为产后生物反馈仪评估盆底松弛不达标者，年龄在26-49岁之间，且门诊均具有产后阴道松弛或咳嗽漏尿门诊就诊者；360例试验对象均随机均分为18组，每组20人，18组没有明显差异。
(2)诊断标准：
阴道松弛：阴道肌肉很薄弱或出现萎缩，部分患者在大笑、咳嗽、运动、跑跳、紧张等情况下经常出现尿失禁现象。
(3)药物配方、制备方法及治疗方法：
药物配方、制备方法见发明内容。治疗方法是，用实施例1至16制备的护理制剂、对比例1和对比例2购买的护理凝胶分别对应17组利用推进器推入患者阴道中，早晚各一次，每次使用凝胶20ml。其中剩余一组为空白对照组，治疗期间，忌食辛辣食物和饮酒。
(4)治疗判断标准：
治疗前后以生物反馈仪评估系统评估盆底肌肉组织状况，快肌评估参考值35～45uv、慢肌评估参考值30～40uv为达标，视为产后修复正常。
痊愈：症状完全消失。
有效：症状减轻。
无效：症状无任何改变。
5、治疗效果统计
表8每周症状以及结果统计
Figure BDA0002510382320000211
Figure BDA0002510382320000221
Figure BDA0002510382320000231
6、疗效分析：临床应用表明，
由表8可知，实施例2相对于对照组可知，使用者2-3天内阴道明显有收缩感，尿频等症状明显减轻，一般轻者6天即可痊愈，部分严重者2周内会痊愈；
与实施例14至16相比，实施例2制备的护理制剂在阴道松弛治愈率明显优于实施例14至16，从而表明本发明公开的女性生殖护理制剂能够对阴道内细胞进行修复和激发细胞的活性；
相比于实施例12和13相比，实施例2制备的护理制剂在阴道松弛治愈率明显优于实施例12和13制备的凝胶护理制剂，因此，表明紧缩组合物中明矾：石榴皮提取物＝4:1重量比配制的女性生殖护理制剂的紧缩性能达到最优；
相比于实施例4至13可知，实施例2制备的护理制剂在阴道松弛治愈率上明显优于实施例4至13，表明本发明中消炎组合物、抑菌组合物和紧缩组合物之间相互协同配合使用，使得女性生殖护理制剂明显的提高了阴道松弛的治愈率；与对比例2相比，实施例1至16制备的护理制剂在阴道松弛治愈率中明显优于对比例2制备的凝胶护理制剂，因此，本发明制备的女性生殖护理制剂对阴道松弛有较好治疗效果；
由此可知，本发明制备的女性生殖护理制剂对阴道炎和阴道松弛上具有较好的治疗效果，并且治疗时间短，见效快，无复发；表明本发明公开的女性生殖护理制剂中的各成分之间能够快速对阴道内细胞进行修复和激发细胞活性，促进阴道内细胞再生，提高阴道内壁表面光泽和弹性。
本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (9)

1.一种女性生殖护理制剂，其特征在于，所述生殖护理制剂由以下重量份的原料制得：
脂肪间充质干细胞外泌体超滤液 500-700份
胶原蛋白 20-40份
甘油 100-180份
消炎组合物 50-150份
抑菌组合物 80-100份
紧缩组合物 100-120份
PH调节剂 0.6-1.2份；
所述消炎组合物为月见草提取物、芦荟提取物和茶树精油的混合物；
所述抑菌组合物为茴香提取物、马齿苋提取物和苦参提取物的混合物；
所述紧缩组合物为明矾和石榴皮提取物的混合物。
2.根据权利要求1所述的一种女性生殖护理制剂，其特征在于，所述茴香提取物、马齿苋提取物和苦参的重量之比为：
茴香提取物：马齿苋提取物：苦参提取物=(1-3):(1-3):(1-2)。
3.根据权利要求1所述的一种女性生殖护理制剂，其特征在于，所述月见草提取物、芦荟提取物和茶树精油的重量之比为：
月见草提取物：芦荟提取物：茶树精油=（2-4）:3: (1-3)。
4.根据权利要求3所述的一种女性生殖护理制剂，其特征在于，所述月见草提取物、芦荟提取物和茶树精油的重量之比为：
月见草提取物：芦荟提取物：茶树精油=3:3:2。
5.根据权利要求1所述的一种女性生殖护理制剂，其特征在于，所述明矾和石榴皮提取物的重量之比为：
明矾：石榴皮提取物=4:1。
6.根据权利要求1所述的一种女性生殖护理制剂，其特征在于，所述PH调节剂为乳酸PH调节剂。
7.一种制备根据权利要求1-6中任一所述的一种女性生殖护理制剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）按重量份配比称取脂肪间充质干细胞外泌体超滤液、胶原蛋白、甘油、消炎组合物、抗菌组合物、紧缩组合物和PH调节剂；
（2）将步骤（1）称取的胶原蛋白添加到脂肪间充质干细胞外泌体超滤液中，混合搅拌5-20min得到第一混合物；
（3）将甘油、消炎组合物、抗菌组合物和紧缩组合物依次添加到步骤（2）中的第一混合物中，混合搅拌5-20min得到第二混合物；
（4）将pH调节剂加入到步骤（3）中的第二混合物中，搅拌15-20min，得到凝胶状的生殖护理制剂；
（5）将步骤（4）得到的凝胶状的生殖护理制剂分装，利用环氧乙烷灭菌。
8.根据权利要求7所述的一种女性生殖护理制剂的方法，其特征在于，所述脂肪间充质干细胞外泌体超滤液经如下方法制得：
（1）将脂肪间充质干细胞从液氮罐中取出后35-40℃条件下解冻，离心，弃去上清液，得重悬细胞沉淀；往重悬细胞沉淀加入含4wt%血清替代物的培养液，得到细胞悬液，将细胞悬液接种到培养瓶中并将培养瓶放入CO2培养箱中培养72h；
（2）从步骤（1）中的培养瓶中取出脂肪间充质干细胞，用胰酶消化，并加入含4wt%血清替代物的基础培养基晃动均匀浸润脂肪间充质干细胞，终止消化；对将培养瓶中的细胞悬液进行离心处理，弃去上清液，得重悬细胞沉淀；往重悬细胞沉淀加入含4wt%血清替代物的基础培养基，将细胞悬液接种到培养瓶放入CO2培养箱中培养72h；
（3）从步骤（2）中的培养瓶中取细胞悬液，离心，收集上清液；对收集的上清液进行超滤，得到脂肪间充质干细胞外泌体超滤液。
9.根据权利要求8所述的一种女性生殖护理制剂的方法，其特征在于，
所述步骤（3）收集的上清液经过10KDa超滤柱中过滤，收集渗出液；对收集的渗出液用1KDa超滤柱中进行超滤，弃去渗出液，收集未渗出液，获得分子量为1KDa-10KDa脂肪间充质干细胞外泌体超滤液。
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