CN109620749A - 含有脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物的干细胞组合物及提取物的制备方法及组合物的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于美容相关技术领域，主要涉及一种含有脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物的干细胞组合物及提取物的制备方法及组合物的应用；组合物组分包括：脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物、水飞蓟提取物、茶多酚、L‑肌肽、月见草提取物；组合物的制备方法，包括以下步骤：a)收集脂肪间充质干细胞培养上清液，通过超高速离心收集干细胞外泌蛋白；b)将水飞蓟提取物、茶多酚、L‑肌肽、月见草提取物与脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物混合得到；本发明的组合物成分简单，所用干细胞蛋白来源于自体脂肪间充质干细胞，取材不受限制且不存在排异反应，其抗糖化功效在抗衰老化妆品中具有广阔的应用前景。

Description

含有脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物的干细胞组合物及提 取物的制备方法及组合物的应用

技术领域

本发明属于美容相关技术领域，具体涉及到一种含有脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物的干细胞组合物及提取物的制备方法及组合物的应用。

背景技术

皮肤衰老通常被分为内源性衰老和外源性衰老。内源性衰老也称为自然衰老，相关理论假说有自由基理论、遗传理论、线粒体理论、端粒理论以及免疫衰退理论等；外源性衰老也称光老化，主要是由紫外光线引起的皮肤损伤，包括皮肤表皮细胞中核酸或蛋白的变性，其中透明质酸含量减少、胶原蛋白或弹性蛋白的变性等都将使皮肤松弛、出现下垂现象。随着研究人员对皮肤衰老机制的不断研究与探索，目前，除了抗氧化在抵御皮肤衰老方面一直被强调外，抗糖基化也被皮肤科专家称为“皮肤衰老的终极内因”。

糖基化最早是在食品科学研究中发现还原糖会使食物变成棕色(美拉德效应)，后续也在糖尿病患者体内发现相关的反应。目前，对于糖基化的化学过程研究较为清楚。糖基化也称为非酶糖基化(nonenzymatic glycation，NEG)，通过一个非酶催化的反应开始，最终导致糖基化终极产物的不可逆生成。首先，还原性糖的醛基或酮基部分与蛋白质游离氨基相结合形成Schiff碱，由于Schiff碱不稳定，将通过重排形成稳定的Amadori产物；其次，Amadori产物受到外界物质的刺激(如紫外、污染、氧化压力)或时间推移将进一步脱氨基，水解形成脱氧邻酮醛等不饱和醛酮类中间产物DMCs(二羧基化合物)；最后，由于这些二羧基化合物具有较强的反应活性，会进一步与蛋白或核酸的氨基共轭交联形成稳定、不可逆的产物——高级糖基化终产物(advanced glycosylation end，AGEs)。其中，紫外线或氧化压力将致使丙二醛的生成，丙二醛参与加速蛋白质与糖分子的交联过程，促使AGEs增多。

皮肤组织中含有大量的胶原蛋白和弹性蛋白，紫外线或氧化压力刺激产生的丙二醛，将促使这两种蛋白与细胞外液中的葡萄糖发生交联形成AGEs并堆积。这种交联反应使胶原蛋白和弹性蛋白的通透性降低、弹性下降、皮肤变薄、含水量减少等，进而导致皮肤失去饱满的外观和弹性而出现松弛和皱纹。此外，有些AGE如戊糖具有黄棕色，致使皮肤变黄，产生色斑，即所谓的“黄脸婆”。

干细胞是一类具有多向分化潜能和自我更新能力的原始的未分化细胞。对于干细胞的研究主要集中在其分化潜能和自我更新这两个特点，近几年的研究表明，干细胞旁分泌特点在组织细胞中的信号转导方面起着非常重要的作用。干细胞分泌的外泌蛋白起到了细胞间信息交流的信使作用，即干细胞外泌蛋白通过与组织细胞上的相应受体结合，再将信号传递给组织细胞，组织细胞接收信息后通过表达相应蛋白，对接收的信号做出相应的反应。

发明内容

由于糖基化在促进衰老方面起着重要的影响，因此，本发明旨在开发一种能够全方位抑制胶原蛋白或弹性蛋白糖基化的安全、有效的组合物，以降低糖基化对皮肤组织衰老的影响，并将该组合物应用于化妆品的产品中。

本发明的技术方案如下：

含有脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物的干细胞组合物，所述组合物包括脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物，水飞蓟提取物，茶多酚，L-肌肽，月见草提取物；其中，所述组分按照重量份数计，包括脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物1.5-6份、水飞蓟提取物0.2-2份、茶多酚0.25-1份、L-肌肽0.3-1.8份、月见草提取物0.5-4.5份。

进一步，所述组分按照重量份数计搅拌混匀，脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物1.5份、水飞蓟提取物0.8份、茶多酚0.5份、L-肌肽0.45份、月见草提取物3.5份。

进一步，所述组分按照重量份数计搅拌混匀，脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物4.5份、水飞蓟提取物1.7份、茶多酚0.8份、L-肌肽1.5份、月见草提取物1.5份。

进一步，所述组分按照重量份数计搅拌混匀，脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物6份、水飞蓟提取物0.5份、茶多酚0.25份、L-肌肽1.25份、月见草提取物0.5份。

进一步，组合物中的脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物的制备方法，包括以下步骤：

(1)将脂肪间充质干细胞以密度为1x10⁵-1x10⁶接种于T75培养瓶中，放置二氧化碳培养箱中培养至细胞密度达90％-100％时，弃去上清培养基，将脂肪间充质干细胞进行低氧饥饿诱导培养24h-36h，然后收集诱导培养的上清液。

(2)培养上清液先高速2000rpm-4000rpm低温离心弃去细胞碎片，收集上清液；上清液再进行超高速10000rpm-12000rpm低温离心，弃去上清液，收集脂肪间充质干细胞外泌蛋白；得到的外泌蛋白再利用BCA蛋白浓度测定试剂盒检测蛋白含量。

进一步，所述脂肪间充质干细胞来源于人体。

进一步，所述步骤(1)脂肪间充质干细胞为培养至第三代、第四代、第五代中的一种；所述步骤(1)低氧饥饿诱导条件为将生理盐水替换培养基，在37℃，1.0％O₂三气培养箱内培养细胞。

进一步，所述步骤(2)高速低温离心条件为3000rpm，4℃，离心10min；所述步骤(2)超高速低温离心条件为10000rpm，4℃，离心20min。

进一步，该组合物应用在皮肤抗糖化和抗衰老化妆品中制成如下产品；

一种含有干细胞组合物的抗糖化化妆水，由功效组分和载体混合组成，按照重量百分数计，其配方如下：

制作工艺：

(1)先将B相溶解好，备用；

(2)再将A相加热至50℃，搅拌溶解直至均匀一致；

(3)待A相冷却至40℃时，加入B相预混液，搅拌均匀后出料；

一种含有干细胞组合物的抗糖化精华液，由功效组分和载体混合组成，按照重量百分数计，其配方如下：

制作工艺：

(1)先将B相溶解好，备用；

(2)再将A相加热至50℃，搅拌溶解直至均匀一致；

(3)待A相冷却到40℃时，加入B相预混液，搅拌均匀后出料；

一种含有干细胞组合物的抗糖化面霜，由功效组分和载体混合组成，按照重量百分数计，其配方如下：

制作工艺：

(1)先将A相与B相分别搅拌溶解均匀，备用；

(2)再将C相组分加热至50℃，搅拌溶解直至均匀一致；

(3)将A相与B相混匀搅拌溶解，均质5min；

(4)待C相温度降至40℃时，加入A/B混匀相，搅拌均匀后出料；

一种含有干细胞组合物的抗糖化凝胶，由功效组分和载体混合组成，按照重量百分数计，其配方如下：

制作工艺：

(1)将A相混合溶解好，备用；

(2)再将B相加热至50℃，搅拌溶解至均匀一致，保温10min后开始降温；

(3)当温度降至40℃时加入A相预混液，搅拌均匀后出料。

采用上述技术方案，本发明主要涉及一种用于皮肤抗糖化的干细胞组合物，其组分包括：脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物、水飞蓟提取物、茶多酚、L-肌肽、月见草提取物。通过实验研究发现，脂肪间充质干细胞(Adipose tissue-derived stromal cells，ADSCs)可通过分泌外泌蛋白介导表皮细胞的糖基化反应。ADSCs可分泌包括SOD2在内的约112种外泌蛋白，这些外泌蛋白在表皮组织中不仅能够促使表皮细胞分泌抗氧化的细胞因子，且外泌蛋白本身便可发挥减缓紫外线或氧化压力对皮肤刺激的作用，进一步减少丙二醛含量，阻断蛋白质与糖分子的交联；此外，外泌蛋白还可与AGEs结合，促使AGEs分解，减少AGEs在皮肤组织内堆积结合更多细胞蛋白。水飞蓟提取物与茶多酚具有抑制脂质过氧化的作用，使脂质过氧化的产物—丙二醛的生成量减少，从而抑制蛋白质与糖分子的结合。L-肌肽是存在于人体内的二胜肽物质，在糖基化反应中扮演干扰素角色，通过与蛋白质竞争结合糖分子而防止胶原蛋白或弹性蛋白与葡萄糖进行交联。月见草提取物具有分解AGEs的功效，协同脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物可进一步消除AGEs，减少AGEs在皮肤组织中堆积。

由以上技术方案可知，本发明的组合物成分简单，所用外泌蛋白提取物来源于自体脂肪间充质干细胞，取材不受限制且不存在排异反应，其抗糖化功效在抗衰老化妆品中具有广阔的应用前景。本发明还公开具有抗糖化干细胞组合物在化妆水、精华液、面霜、凝胶等化妆品中的复配配方。

附图说明：

图1为功效试验一ROS清除能力曲线图；

图2为功效试验二RCS活性测定曲线图；

图3为功效试验三抑制MDA形成效能柱状图；

图4为临床试验一AGEs水平荧光测定柱状图；

图5为临床试验二皮肤紧致度测定柱状图；

图6为临床试验三皮肤色斑测定柱状图。

具体实施方式

以下通过附图1-6及具体实施方式对本发明做进一步解释说明，所描述的仅是本发明的部分实施实例，不对本发明的内容有所限制。本领域相关研究人员在没有做出任何创新性贡献的前提下所进行的其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明中所用试剂材料，若无特殊说明，均可通过商业渠道获得。

实施例1一种用于皮肤抗糖化的干细胞组合物的制备方法

将脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物、水飞蓟提取物、茶多酚、L-肌肽与月见草提取物混合得到。其中脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物为脂肪间充质干细胞培养上清液中提取得到。

实施例2脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物的制备方法

本实施例为脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物的制备方法，实验步骤如下：(1)按照接种密度1x10⁵于将脂肪间充质干细胞接种于T75培养瓶中，并放入37℃，5％二氧化碳培养箱中培养；

(2)待脂肪间充质干细胞生长增殖至密度为95％-100％时，弃去上清培养基，用5mL生理盐水润洗2遍，而后加入10mL生理盐水，并将细胞放入7℃，1.0％O₂三气培养箱内进行低氧饥饿诱导培养；

(3)脂肪间充质干细胞经过低氧饥饿诱导培养36h后，收集培养上清液；

(4)收集的培养上清液进行3000rpm，4℃，离心10min；

(5)步骤4离心后收集上清液，再进行超高速低温离心，离心条件为10000rpm，4℃，离心20min；

(6)步骤5离心后弃掉上清液，收集离心后的干细胞外泌蛋白。

实施例3一种含有干细胞组合物的抗糖化化妆水的制备方法

本实施例为一种含有干细胞组合物的抗糖化化妆水的制备方法，按照重量百分数计，其配方如下：

本实施例的制作工艺如下：

(1)先将B相溶解好，备用；

(2)再将A相加热至50℃，搅拌溶解直至均匀一致；

(3)待A相冷却至40℃时，加入B相预混液，搅拌均匀后出料。

实施例4一种含有干细胞组合物的抗糖化精华液的制备方法

本实施例为一种含有干细胞组合物的抗糖化精华液的制备方法，按照重量百分数计，其配方如下：

本实施例的制作工艺如下：

(1)先将B相溶解好，备用；

(2)再将A相加热至50℃，搅拌溶解直至均匀一致；

(3)待A相冷却到40℃时，加入B相预混液，搅拌均匀后出料。

实施例5一种含有干细胞组合物的抗糖化面霜的制备方法

本实施例为一种含有干细胞组合物的抗糖化面霜的制备方法，按照重量百分数计，其配方如下：

本实施例的制作工艺如下：

(1)先将A相与B相分别搅拌溶解均匀，备用；

(2)再将C相组分加热至50℃，搅拌溶解直至均匀一致；

(3)将A相与B相混匀搅拌溶解，均质5min；

(4)待C相温度降至40℃时，加入A/B混匀相，搅拌均匀后出料。

实施例6一种含有干细胞组合物的抗糖化凝胶的制备方法

本实施例为一种含有干细胞组合物的抗糖化凝胶的制备方法，按照重量百分数计，其配方如下：

本实施例的制作工艺如下：

(1)将A相混合溶解好，备用；

(2)再将B相加热至50℃，搅拌溶解至均匀一致，保温10min后开始降温；

(3)当温度降至40℃时加入A相预混液，搅拌均匀后出料。

功效试验一ROS清除能力测定

(1)试验方法：

a、试验所用试剂：干细胞组合物(stem cell composition，SCC)，β-藻红蛋白(β-phycoerythrin,β-PE)，二盐酸化合物(2,2-azobis(2-amidinopropane)dihydrochloride(AAPH))

b、试验检测原理：AAPH为自由基引发剂，在紫外线下进行一级分解形成离子型自由基；β-PE为从红藻中分离出来的新型荧光标记试剂，在被过氧化自由基氧化后，荧光减弱，可用于检测自由基的清除情况；利用荧光酶标仪检测β-PE蛋白荧光情况，激发光波长为566nm。

c、试验步骤：试验分为3组，分别为对照组(β-PE)、阴性对照组(Control)，实验组(5％SCC)；3个避光试验管中分别加入等量AAPH，经过500瓦UVA照射2h；再往对照组中加入β-PE，往实验组中加入等量β-PE及5％干细胞组合物；反应时间间隔30min进行一次荧光酶标仪检测，检测时长为5h，激发光波长为566nm；记录实验数据及分析。

(2)试验结果：由图1荧光度的曲线图可知，阴性对照组(Control)中分解的AAPH氧化β-PE后，荧光强度减弱；而实验组中加入5％干细胞组合物的曲线下降减缓，说明干细胞组合物能够清除自由基以减少自由基对β-PE的氧化。功效试验二RCS活性测定

(1)试验方法：

a、试验所用试剂：干细胞组合物，反式壬烯醛(Trans-2-nonenal)，反式已烯醛(Trans-2-hexenal)

b、试验检测原理：RCS(reactive carbonyl species)为羰基类物质，主要包括一些不饱和醛，如反式壬烯醛、反式已烯醛、丙烯醛、丙二醛等；细胞内醛类物质增多时会促进细胞糖基化，通过气相色谱仪检测醛类含量，用于指示干细胞组合物对醛类物质的清除功效。

c、试验步骤：试验分为4组，分别为阴性对照组(Control)与实验组(5％SCC)，并分别检测对反式壬烯醛以及反式已烯醛的清除情况；2个试验管中分别加有10mM反式壬烯醛与反式已烯醛溶液，标记阴性对照组，另2个试验管同样分别加有10mM反式壬烯醛与反式已烯醛溶液，标记实验组；然后，在实验组试管中加入5％干细胞组合物；反应时间间隔60min进行一次气相色谱检测；记录实验数据及分析。

(2)试验结果：由图2曲线图可知，阴性对照组中随反应时间延长，反式壬烯醛与反式已烯醛的含量变化不明显；而实验组中由于加入5％干细胞组合物，随反应时间的延长反式壬烯醛与反式已烯醛溶液中醛含量逐渐减少，说明干细胞组合物具有清除醛类物质的能力。

功效试验三抑制MDA形成效能

(1)试验方法：

a、试验所用试剂：干细胞组合物，0.6％硫代巴比妥酸，人表皮成纤维细胞

b、试验检测原理：丙二醛(MDA)是膜脂过氧化的检测指标；在紫外光照下，人表皮成纤维细胞的膜脂过氧化产生MDA，MDA在酸性及高温条件下会与0.6％硫代巴比妥酸反应形成红棕色的三甲川物质；通过酶标仪检测MDA的含量，激发光波长为532nm。

c、试验步骤：试验分为2组，分别为对照组(Control)与实验组(5％SCC)；先在细胞培养板(6孔板)中培养人表皮成纤维细胞至密度为95％-100％；将对照组与实验组的细胞培养液更换为新鲜的培养液，同时在实验组的培养液中加入5％干细胞组合物；培养12h后经过500瓦UVA照射2h；然后，分别往对照组与实验组中加入等量的0.6％硫代巴比妥酸溶液；避光反应30min后，利用酶标仪检测对照组与实验组中MDA的含量。

(2)试验结果：由图3柱状图可知，对照组中含有大量的MDA，而实验组中MDA的含量较对照组明显降低，说明干细胞组合物具有抑制由紫外线引起MDA生成的效能。

临床试验一AGEs水平荧光测定

(1)试验方法：临床试验分别征求20名自愿者对含有干细胞组合物的产品进行测试；测试产品为含有5％SCC面霜；志愿者20名女性(年龄25-65岁)；产品使用频率为2次/天；分别在产品使用0天、14天、28天利用皮肤AGE荧光光谱仪对志愿者脸部AGE含量进行检测。

(2)试验结果：由图4柱状图可知，与使用测试产品前相比较，使用14天后，志愿者脸部AGE含量出现降低法趋势，而在28天的测试结果中可看到志愿者脸部的AGE含量出现明显的降低，说明干细胞组合物能够有效分解AGEs在皮肤中的累积。

临床试验二皮肤紧致度测定

(1)试验方法：临床试验分别征求20名自愿者对含有干细胞组合物的产品进行测试；测试产品为含有5％SCC面霜；志愿者20名女性(年龄25-65岁)；产品使用频率为2次/天；分别在产品使用0天、14天、28天利用Visia皮肤检测仪对志愿者的脸部紧致度进行测定。

(2)试验结果：由图5柱状图可知，与使用测试产品前相比较，使用14天后，志愿者脸部紧致度得到提升，而在28天的测试结果中可看到志愿者脸部紧致度出现较为明显的升高，说明干细胞组合物能够通过抑制皮肤糖基化作用，释放皮肤组织中的胶原蛋白与弹性蛋白，提升皮肤紧致性。

临床试验三皮肤色斑测定

(1)试验方法：临床试验分别征求20名自愿者对含有干细胞组合物的产品进行测试；测试产品为含有5％SCC面霜；志愿者20名女性(年龄25-65岁)；产品使用频率为2次/天；分别在产品使用0天、14天、28天利用Visia皮肤检测仪对志愿者的脸部色斑进行测定。

(2)试验结果：由图6柱状图可知，与使用测试产品前相比较，使用14天后，志愿者脸部色斑变浅，而在28天的测试结果中可看到志愿者脸部色斑出现较为明显淡化现象，说明干细胞组合物能够通过抑制皮肤糖基化作用，减少AGEs的累积，从而改善皮肤色斑及肤色。

上述说明示出并描述了本发明的优选实施例，如前所述，应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。

Claims (9)

1.含有脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物的干细胞组合物，其特征在于，所述组合物包括脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物，水飞蓟提取物，茶多酚，L-肌肽，月见草提取物；其中，所述组分按照重量份数计，包括脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物0.15-6份、水飞蓟提取物0.02-2份、茶多酚0.01-1份、L-肌肽0.01-1.8份、月见草提取物0.05-4.5份。

2.根据权利要求1所述含有脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物的干细胞组合物，其特征在于，所述组分按照重量份数计搅拌混匀，脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物1.5份、水飞蓟提取物0.8份、茶多酚0.5份、L-肌肽0.45份、月见草提取物3.5份。

3.根据权利要求1所述含有脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物的干细胞组合物，其特征在于，所述组分按照重量份数计搅拌混匀，脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物4.5份、水飞蓟提取物1.7份、茶多酚0.8份、L-肌肽1.5份、月见草提取物1.5份。

4.根据权利要求1所述含有脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物的干细胞组合物，其特征在于，所述组分按照重量份数计搅拌混匀，脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物6份、水飞蓟提取物0.5份、茶多酚0.25份、L-肌肽1.25份、月见草提取物0.5份。

5.根据权利要求1-4任意一项所述含有脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物的干细胞组合物，其特征在于，组合物中的脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物的制备方法，包括以下步骤：

(1)将脂肪间充质干细胞以密度为1x10⁵-1x10⁶接种于T75培养瓶中，放置二氧化碳培养箱中培养至细胞密度达90％-100％时，弃去上清培养基，将脂肪间充质干细胞进行低氧饥饿诱导培养24h-36h，然后收集诱导培养的上清液。

(2)培养上清液先高速2000rpm-4000rpm低温离心弃去细胞碎片，收集上清液；上清液再进行超高速10000rpm-12000rpm低温离心，弃去上清液，收集脂肪间充质干细胞外泌蛋白；得到的外泌蛋白再利用BCA蛋白浓度测定试剂盒检测蛋白含量。

6.根据权利要求5所述含有脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物的干细胞组合物，其特征在于，所述脂肪间充质干细胞来源于人体。

7.根据权利要求5所述含有脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物的干细胞组合物，其特征在于，所述步骤(1)脂肪间充质干细胞为培养至第三代、第四代、第五代中的一种；所述步骤(1)低氧饥饿诱导条件为将生理盐水替换培养基，在37℃，1.0％O2三气培养箱内培养细胞。

8.根据权利要求5所述含有脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物的干细胞组合物，其特征在于，所述步骤(2)高速低温离心条件为3000rpm，4℃，离心10min；所述步骤(2)超高速低温离心条件为10000rpm，4℃，离心20min。

9.根据权利要求5所述含有脂肪间充质干细胞外泌蛋白提取物的干细胞组合物，其特征在于，该组合物应用在皮肤抗糖化和抗衰老化妆品中制成如下产品；

一种含有干细胞组合物的抗糖化化妆水，由功效组分和载体混合组成，按照重量百分数计，其配方如下：

制作工艺：

(1)先将B相溶解好，备用；

(2)再将A相加热至50℃，搅拌溶解直至均匀一致；

(3)待A相冷却至40℃时，加入B相预混液，搅拌均匀后出料；

一种含有干细胞组合物的抗糖化精华液，由功效组分和载体混合组成，按照重量百分数计，其配方如下：

制作工艺：

(1)先将B相溶解好，备用；

(2)再将A相加热至50℃，搅拌溶解直至均匀一致；

(3)待A相冷却到40℃时，加入B相预混液，搅拌均匀后出料；

一种含有干细胞组合物的抗糖化面霜，由功效组分和载体混合组成，按照重量百分数计，其配方如下：

制作工艺：

(1)先将A相与B相分别搅拌溶解均匀，备用；

(2)再将C相组分加热至50℃，搅拌溶解直至均匀一致；

(3)将A相与B相混匀搅拌溶解，均质5min；

(4)待C相温度降至40℃时，加入A/B混匀相，搅拌均匀后出料；

一种含有干细胞组合物的抗糖化凝胶，由功效组分和载体混合组成，按照重量百分数计，其配方如下：

制作工艺：

(1)将A相混合溶解好，备用；

(2)再将B相加热至50℃，搅拌溶解至均匀一致，保温10min后开始降温；

(3)当温度降至40℃时加入A相预混液，搅拌均匀后出料。