CN111542542A - 使用iap拮抗剂和抗pd-1分子的联合抗癌疗法 - Google Patents

Abstract

公开了一种IAP拮抗剂的使用，该IAP拮抗剂用于预治疗诊断患有癌症的人类受试者，以增强使用抗PD‑1分子的后续治疗产生抗癌应答的可能性、或增强受试者癌症对使用抗PD‑1分子的后续治疗的应答性。还包含治疗受试者癌症的方法，该方法包括用IAP拮抗剂对受试者的预治疗，和利用抗PD‑1分子对受试者的后续治疗。

Description

使用IAP拮抗剂和抗PD-1分子的联合抗癌疗法

技术领域

本发明涉及IAP拮抗剂在利用抗程序性死亡受体1(PD-1)分子治疗受试者之前，增强受试者癌症微环境的免疫原性(immunogenicity)的使用。

背景技术

许多癌症类型包括外源性(extrinsic)或内源性(intrinsic)细胞死亡途径的成分遗传性地情况。这可能涉及FAS相关死亡结构域(FAS-associated via death domain,FADD)或凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins,IAP)的过度表达、或者功能性半胱天冬酶(caspase)的表达缺乏。结果可能是对细胞死亡的抵抗，这是癌症的标志(hallmark)。霍德利(Hoadley)等.(2014)Cell 158:929-44；The Cancer Genome AtlasNetwork(2015)Nat 517:576-82；埃坦(Eytan)等(2016)Cancer Res 76:5442-54；哈纳罕(Hanahan)和温伯格(Weinberg)(2011)Cell 144:646-74中。

在德拉克尚(Derakhshan)等(2017)Clin Cancer Res 23:1379-87中，发现了外源性和内源性死亡途径的简要描述。简而言之，外源性途径始于细胞表面受体。外源性途径由诸如Fas配体(FasL)、肿瘤坏死因子(TNFα)或肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡配体与它们在细胞外侧上的各自受体(即Fas、TNFR1、TRAILR1/DR4、TRAIL2/DR5)的结合而触发。因此，FADD结合至细胞内侧上的受体，而半胱天冬酶原8(procaspase 8)结合至受体结合的FADD，从而构成死亡诱导信号复合物(death-inducing signaling complex,DISC)。随后激活半胱天冬酶8，然后激活半胱天冬酶3，从而导致凋亡(apoptosis)。外源性途径也可能引起坏死性死亡(necroptotic death)，涉及FADD、受体相互作用蛋白激酶(receptor interacting protein kinases,RIP kinases)和混合谱系激酶域样蛋白(mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)。

内源性途径始于对线粒体的损害(insult)，其导致促凋亡蛋白(proapoptoticprotein)释放到细胞质中，该促凋亡蛋白诸如细胞色素c和第二线粒体衍生的半胱天冬酶激活剂(second mitochondria-derived activator of caspase,SMAC)。细胞色素c结合凋亡蛋白酶激活因子(apoptotic protease activating factor)(APAF1)，形成凋亡体复合物(apoptosome complex)。该复合物结合至被激活的半胱天冬酶原9，进而激活半胱天冬酶原3。SMAC结合至IAP家族蛋白，并引起IAP家族蛋白的降解或抑制，IAP家族蛋白包括细胞IAP1(cIAP1)、细胞IAP2(cIAP2)和X连锁IAP(XIAP)。

IAP是由存在一到三个杆状病毒IAP重复序列(baculoviral IAP repeat,BIR)结构域定义的蛋白质。人细胞表达8种不同的IAP，其中XIAP、cIAP1和cIAP2被证明抑制半胱天冬酶诱导的凋亡和RIP激酶介导的坏死性凋亡(necroptosis)。萨尔维森(Salvesen)和杜克特(Duckett)(2002)Nat Rev Mol Cell Biol 3:401-10。在后者的IAP中，只有XIAP能够直接结合至半胱天冬酶并抑制半胱天冬酶的功能。德拉克尚等(Clin Cancer Res.2017年3月15日；23(6):1379-1387.doi:10.1158/1078-0432.CCR-16-2172.Epub 2016年12月30日)。cIAP1、cIAP2和XIAP包含具有E3泛素连接酶(ubiquitin ligase)活性的所谓的RING域。cIAP1和cIAP2的抗凋亡作用通过其泛素连接酶活性而介导。

SMAC是一种二聚体蛋白质，在其氨基端处包含肽序列Ala-Val-Pro-Ile(AVPI)，该序列介导蛋白质结合至IAP的BIR结构域。开发了模拟肽，该模拟肽模仿后一个肽序列、从而复制了SMAC结合XIAP、cIAP1和cIAP2的能力(在本文中称为“SMAC模拟物(mimetic)”)。SMAC模拟物防止XIAP与半胱天冬酶相互作用。关于cIAP1和cIAP2，SMAC模拟物激活这些IAP的E3泛素连接酶活性，导致通过蛋白酶体降解(proteasomal degradation)的这些IAP的自动泛素化(auto-ubiquitylation)和消除。

除了他们对凋亡的抑制作用外，IAP还影响众多其他细胞过程，诸如调节NF-κB转录因子的激活的泛素依赖性信号传导事件(ubiquitin-dependent signaling event)，该NF-κB转录因子驱动对炎症、免疫力、细胞迁移和细胞存活重要的基因的表达。吉德·汉森(Gyrd-Hansen)和迈尔(Meier)(2010)Nat Rev Cancer 10:561-74。细胞IAP在NF-κB激活的典型途径中至关重要。德拉克尚等(2017)。TNFα结合至TNFR1导致TNF受体1相关死亡结构域(TNF receptor1-associated via death domain,TRADD)和TNF受体相关因子2(TNFreceptor-associated factor 2,TRAF2)向TNFR1的募集(recruitment)。然后，RIP1和cIAP1/2被募集至活性复合物。细胞IAP介导的RIP1泛素化最终导致NF-κB激酶IKKβ抑制剂的磷酸化，这使得抑制性NF-kB亚基(subunit)Ikβ磷酸化。然后，Ikβ被降解，释放出NF-kB亚基p50和RELA，其结合形成了活性转录因子NF-κB。TNFR1的这种参与(engagement)防止了其凋亡或坏死性信号传导。NF-κB信号传导途径的IAP依赖性调节对免疫系统的功能具有重大影响，影响先天性免疫适应性免疫。博伊格(Beug)等(2012)Trends Immunol 33:535-45。因此，已经证明IAP调节与抗肿瘤免疫应答有关的几种免疫细胞类型的功能，包括抗原呈递细胞(antigen-presenting cell)、淋巴细胞和自然杀伤细胞(natural killer cell)。

细胞IAP也负责NF-κB诱导激酶NIK的泛素化，因而导致其蛋白酶体降解。德拉克尚等(2017)。在不存在IAP的情况下，即存在诸如SMAC模拟物的IAP拮抗剂的情况下，NIK会积聚并使IKKα磷酸化，IKKα使非活性NF-κB亚基p100磷酸化。该亚基裂解成活性亚基p52，其与RELB结合形成活性NF-kB转录因子。NF-kB的这种非典型性激活对于通过细胞因子产生来调节先天性和适应性免疫是至关重要的。切西(Chesi)等.(2016)Nat Med,22:1411-20，以及其中引用的参考文献。IAP抑制剂LBW242被证明在初级T细胞受体刺激的情况下，通过诱导T细胞增殖和共同刺激而增加抗肿瘤免疫应答，导致T细胞激活增加、以及在预防性癌症疫苗模型中的功效增强。杜根(Dougan)等.(2010)J Exp Med 207:2195-206。IAP抑制剂BV6和比瑞那帕(birinapant)已被证明例如通过诱导树突状细胞成熟、或通过将促肿瘤(pro-tumoral)II型巨噬细胞转化为促炎性I型巨噬细胞，来调节抗原呈递细胞的功能。穆勒-西纳斯(Muller-Sienerth)等.(2011)PLoS One 6：e21556；奈茨(Knights)等.(2013)CancerImmunol Immunother 62:321-35；莱西斯(Lecis)等.(2013)Cell Death Dis 4:e920。并且，IAP抑制增加了肿瘤细胞对自然杀伤细胞介导的、或T细胞介导的效应机制(effectormechanism)颗粒酶B(granzyme B)和穿孔素的敏感性。布林克曼(Brinkmann)等.(2014)Leuk Lymphoma 55:645-51；纳米亚斯(Nachmias)等.(2007)Eur J Immunol 37:3467-76。此外，IAP抑制剂也可以通过调节免疫细胞上的免疫检查点分子(immune checkpointmolecule)的表达来促成免疫系统调节。奈茨等.(2013)；平松-奥尔蒂斯(Pinzon-Ortiz)等.(2016)Cancer Res 76(14Suppl):摘要2343.。应注意的是，在不存在IAP的情况下，即存在诸如SMAC模拟物的IAP拮抗剂的情况下，TNFR1不再参与典型的NF-kB激活，致使细胞对TNFα介导的凋亡敏感。

通常，肿瘤细胞的免疫破坏效率低下。现在看来，这是因为癌症患者不具有能够破坏肿瘤的大量T细胞，和/或因为适应性免疫系统和先天性免疫系统的细胞受到抑制、或者被抑制其激活或其效应功能的途径中和。在这种抑制中起作用的是所谓的免疫检查点分子。在过去的二十年中，已经识别了几种这样的检查点分子。这种类型的原型分子是细胞毒性T淋巴细胞抗原4(cytotoxic T lymphocyte antigen 4,CTLA-4)。在鼠模型中发现阻断该分子导致肿瘤消退。利奇(Leach)等.(1996)Science 271:1734-36。CTLA-4在激活的T细胞上表达、主要在CD4细胞上表达，并通过干扰主T细胞共刺激物(master Tcell co-stimulator)CD28的活性来限制T细胞应答。CTLA-4和CD28共享配体CD80和CD86，借此CTLA-4由于其对后一个配体的更高的亲和力而胜过CD28。林斯利(Linsley)等.(1994)Immunity1:793-801。

像CTLA-4一样，免疫检查点分子PD-1在激活的T细胞上表达。帕里(Parry)等.(2005)Mol Cell Biol 25:9543-53。它还激活磷酸酯酶SHP2和PP2A。考虑PD-1的参与直接干扰TCR介导的效应器(effector)功能、并增加T细胞迁移。认为检查点分子主要在肿瘤微环境中发挥其功能，而CTLA-4主要在次级淋巴组织中起作用。温(Wing)等.(2008)Science322:271-5；佩格斯(Peggs)等.(2009)J Exp Med 206:1717-1725。PD-1的两个已知配体是PD-L1和PD-L2。董(Dong)等.(1999)Nat Med 5:1365-9；拉齐曼(Latchman)等.(2001)NatImmunol 261-8；茨奥(Tseng)等.(2001)J Exp Med 193:839-46。配体分子共享同源性，但是分开地调节。PD-L1通过IFNγ(由激活的T细胞和自然杀伤细胞产生)在激活的造血细胞和上皮细胞中被诱导。发现PD-L2在激活的树突状细胞和一些巨噬细胞中被诱导。诱导可能主要通过IL-4。PD-1基因敲除小鼠(knockout mice)表现出迟发性器官特异性炎症(late-onset organ-specific inflammation)。西村(Nishimura)等.(1999)Immunity 11:141-51；Science 291:319-22(2001)。这种表型不如在CTLA-4敲除小鼠中观察到的严重。相应地，抗PD-1疗法的临床免疫有关效应倾向于比与抗CTLA-4疗法相关的临床免疫有关效应轻。PD-L1在许多实体瘤中表达，而PD-L2在B细胞淋巴瘤的某些子集中表达。PD-1在肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocyte)中高度表达。董等.(2002)Nat Med 8:793-800；安塞尔(Ansell)等.(2015)N Engl J Med372:311-9；阿玛扎德(Amadzadeh)等.(2009)Blood 114:1537-44；斯凡诺斯(Sfanos)等.(2009)Prostate 69:1694-1703。

抗PD-1疗法的首次人类试验采用了单克隆抗体纳武单抗(Nivolumab)，单克隆抗体纳武单抗是一种来自百时美施贵宝/小野制药株式会社(Bristol-Myers Squibb/OnoPharmaceuticals)的全人IgG4抗体。记录了对于晚期治疗难治性NSCLC的客观应答率(objective resoponse rate)为17％、RCC的客观应答率为20％、对于黑素瘤(melanoma)的客观应答率为31％。这些应答中有许多是持久的。总生存期分别为9.9、22.4和16.8个月。托帕利安(Topalian)等.(2012)N Engl J Med 366:2443-54；J Clin Oncol 32:1020-30(2014)。迄今为止，纳武单抗(Nivolumab)已在美国、日本和欧洲获得批准，用于治疗不可切除或转移性黑素瘤、肾癌(RCC)、头颈部转移性或复发性鳞状细胞癌(SCCHN)、转移性非小细胞肺癌癌(NSCLC)和霍奇金淋巴瘤。岩井(Iwai)等.(2017)J Biomed Science 24:36；巴拉(Balar)和韦伯(Weber)(2017)Cancer Immunol Immunother 66：551-64。还已经获得了对尿路上皮癌(urothelial cancer)的食品及药物管理局(FDA)的批准。单克隆抗PD-1抗体派姆单抗(Pembrolizumab)、其为来自默克公司(Merch)的人源化IgG4抗体，也已被批准用于转移性黑素瘤、转移性NSCLC(美国、日本和欧洲)以及头颈癌和不可知原发位点(agnosticprimary site)的微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)高肿瘤(美国)。来自罗氏/基因泰克(Roche/Genentech)的另一种IgG1类型抗体阿特朱单抗(Atezolizumab)抑制配体PD-L1。它获得FDA批准用于尿路上皮癌(膀胱癌)和转移性NSCLC。最近市场上出现了另外两种PD-L1抗体。度伐单抗(Durvalumab)是来自医疗免疫/阿斯利康(Medimmune/AstraZeneca)的人IgG1k抗体，其被FDA批准用于局部晚期或转移性尿路上皮癌。阿维鲁单抗(Avelumab)是来自默克雪兰诺/辉瑞(Merck Serono/Pfizer)的人IgG1抗体，已被FDA批准用于治疗转移性梅克尔(Merkel)细胞癌和尿路上皮/膀胱癌。针对PD-1的其他分子正在进行临床试验中。这些包括来自诺华公司(Novartis)的人源化IgG4抗体PDR001、来自信达生物制药(Innovent Biologics)的单克隆抗体IBI-308、来自再生元(Regeneron)的全人源化单克隆抗体西米普利单抗(cemiplimab)(REGN-2810)、来自江苏恒瑞医药(JiangsuHengrui Medicine)的人源化IgG4单克隆抗体卡瑞利珠单抗(camrelizumab)(SHR-1210)、来自百济神州(BeiGene)的BGB-A317单克隆人源化抗体、来自百奥凯特(Biocad)的单克隆抗体BCD-100、来自上海君实生物科学(Shanghai Junshi Biosciences)的人源化IgG4K重组抗体JS-001、来自强生(Johnson&Johnson)的JNJ-3283(JNJ-63723283)单克隆抗体、来自扩增免疫(Amplimmune)(现为医学免疫(Medimmune)[阿斯利康(AstraZeneca)])的单克隆抗体AMP-514(现称为“MEDI0680”)、来自艾吉纳斯(Agenus)的AGEN-2034、来自伊纳普思百奥(AnaptysBio)和泰萨罗(Tesaro)的人源化单克隆抗体TSR-042、来自塞芬基因(Symphogen)的人源化单克隆抗体Sym-021、来自辉瑞(Pfizer)的PF-06801591抗体、来自(Macrogenics)的双特异性四价人源化DART(双亲和性重靶向)分子MGD-013、来自迈考基因的MGA-012人源化单克隆抗体、来自丽珠医药(Livzon Pharmaceutical)的重组人源化抗体LZM-009、来自誉衡药业(Gloria Pharmaceuticals)的人重组单克隆抗体GLS-010(AB-122)、来自沃森生物技术(Walvax Biotechnology)的IgG4人源化单克隆抗体热那利木单抗(CBT-501)、来自勃林格殷格翰(Boehringer Ingelheim)的单克隆抗体BI 754091和来自康方生物医药(Akeso Biopharma)的双特异性单克隆抗体AK-104。针对PD-L1的其他分子也正在进行临床试验中。这些包括来自塞特麦克斯医疗(CytomX Therapeutics)的单克隆抗体CX-072、来自基石药业(CStone Pharmaceuticals)的全人源化重组IgG单克隆抗体WBP3155(CS-1001)、来自阿蒂迪亚(Atridia)的人源化IgG4单克隆抗体SHR-1316、来自百时美施贵宝的PD-L1抑制剂米拉分子(millamolecule)、来自百时美施贵宝的人IgG4抗体BMS-936559(MDX1105)、来自默克集团(Merck KGaA)的靶向PD-L1单克隆抗体和TGFβM-7824的双功能融合蛋白(MSB0011359C)、来自礼来(Eli Lilly)的单克隆抗体LY-3300054、来自康宁杰瑞(Alphamab)的纳米抗体(nanobody)KN-035、来自诺华的单克隆抗体FAZ-053、来自TG医疗的IgG1抗体CK-301、来自奥瑞基因发现公司(Aurigene Discovery)的靶向PD-L1的口服小分子CA-170和T细胞活化的V域Ig抑制剂(VISTA)。截至2015年，据报道，抗PD-1/PD-L1疗法的客观应答率对黑素瘤为17-40％，对肺癌为10-30％，对肾癌为12-29％，对膀胱癌为25％，对卵巢癌为6-23％，对头颈癌为14-20％，对胃癌为22％，对结直肠癌为24％，对三阴性乳腺癌为18％，对间皮瘤为24％，以及对霍奇金氏淋巴瘤为87％。勒热纳(Lejeune)(2015)Melanoma Res 25:373-375.。对纳武单抗、派姆单抗、阿特朱单抗和度伐单抗的应答率的较新的更新，参见巴拉和韦伯(Weber)(2017)以及岩井等(2017)。

如以上引用的数据显示，抗PD-1/PD-L1疗法在大多数患者中并未产生令人瞩目的客观应答。通过将免疫调节(例如，共刺激分子的激活剂或免疫检查点分子的抑制剂)与第二药剂联合，已经提出了许多联合疗法，该第二药剂诸如IAP抑制剂、TOR激酶抑制剂、HDM2连接酶抑制剂、PIM激酶抑制剂、HER3激酶抑制剂、组蛋白去乙酰酶(HDAC)抑制剂、杰纳斯(Janus)激酶抑制剂、FGF受体抑制剂、EGF受体抑制剂、c-MET抑制剂、ALK抑制剂、CDK4/6抑制剂、PI3K抑制剂、BRAF抑制剂、CAR T细胞(例如靶向CD19的CAR T细胞)、MEK抑制剂或BCR-ABL抑制剂(WO 2016/054555)。最近的报道表明，IAP抑制剂在免疫活性小鼠同基因癌症模型中增强了免疫检查点抑制剂抗PD-1的作用，表明它们是针对癌症治疗与免疫疗法联合的良好候选者。切西等.(2016)；平松-奥尔蒂斯等.(2016)；博伊格等.(2017)Nat Commun.Feb15；8.doi:10.1038/ncomms14278。

类似地，已经提出了通过施用IAP拮抗剂来治疗癌症，但是单独施用这种IAP拮抗剂似乎不足以治疗某些癌症。已经提出了联合SMAC模拟物化合物与免疫刺激剂或免疫调节剂的原理(WO 2017/143449)，其目的在于增强SMAC模拟复合物(compound)在治疗癌症中的功效。

目前正在进行涉及蒂柏奥(Debio)1143与阿维鲁单抗联合(ClinicalTrials.gov标识符：NCT03270176)、比瑞那帕与派姆单抗联合(ClinicalTrials.gov标识符：NCT02587962)以及LCL-161与PDR001联合(ClinicalTrials.gov标识符：NCT02890069)的临床试验。此外，博(Bo)(2017)“Role of Smac in Lung Carcinogenesis and Therapy”doi：10.1371/journal.pone.0107165公开了同时施用蒂柏奥1143和抗PD-1抗体。然而，现有技术中提供的治疗方法均未公开如本文所述的诱导疗法的使用。

为了增强癌症治疗的功效或使一些癌症患者有这种癌症治疗的资格，仍然需要改进联合疗法。

发明内容

本发明人提出，可以用诸如SMAC模拟物的IAP拮抗剂来预治疗具有肿瘤的患者，以增强患者肿瘤微环境的免疫原性。该预治疗增强了抗PD-1分子治疗的有效性，以产生对肿瘤的免疫应答。

因此，一方面，本发明提供了一种治疗人类受试者中的癌症的方法，该方法包括：(i)在诱导期期间施用IAP拮抗剂；随后(ii)在诱导期结束后施用抗PD-1分子。

另一方面，本发明提供了一种在治疗人类受试者癌症的方法中使用的IAP拮抗剂，该方法包括：(i)在诱导期期间施用IAP拮抗剂；随后(ii)在诱导期结束后施用抗PD-1分子。

再一方面，本发明提供了一种在治疗人类受试者癌症的方法中使用的抗PD-1分子，该方法包括：(i)在诱导期期间施用IAP拮抗剂；随后(ii)在诱导期结束后施用抗PD-1分子。

又一方面，本发明提供了一种在治疗人类受试者癌症的方法中使用的IAP拮抗剂和抗PD-1分子，该方法包括(i)在诱导期期间施用IAP拮抗剂；随后(ii)在诱导期结束后施用抗PD-1分子。

以下描述的本公开、实施方案和方面可应用于以上方面中的任何一个。

用IAP拮抗剂预治疗有望比用抗PD-1分子同时施用具有多个明显的优势。预治疗改变了肿瘤微环境，使肿瘤甚至在首次施用抗PD-1分子之前就易受抗PD-1分子的影响。当与使用IAP拮抗剂和抗PD-1分子的同时治疗相比时，这可以增加抗PD-1分子治疗的功效。预治疗还可以减少观察到抗PD-1分子治疗有关应答所需的时间。因为可以通过预治疗来增加抗PD-1分子的有效性，所以可以只需在较短时间内给患者施用较少的抗PD-1分子。

因此，本公开涉及由IAP拮抗剂组成(使用IAP拮抗剂)的诱导疗法，所述IAP拮抗剂用于预治疗被诊断患有癌症的受试者，以增强使用抗PD-1分子的后续治疗导致抗癌应答的可能性。另外或替代地，IAP拮抗剂的使用、即诱导疗法，旨在增强受试者的癌症对使用抗PD-1分子的后续治疗的应答性。尽管申请人不希望受到任何理论的束缚，但是IAP拮抗剂的增强作用可能是由于分子增加受试者肿瘤微环境的免疫原性的能力所致。

在特定实施方案中，在1至48天、优选1至28天、更优选5至28天的诱导期或预治疗期期间，用IAP拮抗剂预治疗罹患癌症的受试者，然后开始后续抗PD-1分子治疗。当然，这意味着在诱导期期间未施用抗PD-1分子。诱导期可以包括不施用IAP拮抗剂的一天或多天(休息日)。例如，在诱导期期间IAP拮抗剂的最后一次施用、与抗PD-1分子的第一次施用之间可以有一个或多个休息日。如果使用IAP拮抗剂、每天施用IAP拮抗剂，则诱导期可以包括不施用IAP拮抗剂的一天或多天。

原则上，任何IAP拮抗剂可用于诱导疗法。然而，优选的IAP拮抗剂包括蒂柏奥1143、GDC-917/CUDC-427、LCL161、GDC-0152、TL-32711/比瑞那帕、HGS-1029/AEG-40826、BI891065、ASTX-660和APG-1387。优选地，IAP拮抗剂是SMAC模拟物，最优选的一种是蒂柏奥1143。

在诱导期中，各种剂量和方案(schedule)用于所选的IAP拮抗剂。所选的剂量和方案可取决于各种因素，诸如癌症类型、患者的特征和受试者可能正在接收的其他疗法，并且所选的剂量和方案可能要经过临床医生的评估和经验。例如，每周一次介于500和1800mg之间的口服剂量可以用于LCL-161，包括每周一次500mg口服(per os)、每周一次1200mg口服、每周一次1500mg口服、每周一次1800mg口服。比瑞那帕可以以在28天周期的第1、8和15天以13和47mg/m²之间、例如47mg/m²的剂量使用(第2-7天、第9-14天和第16-28天是比瑞那帕休息日)，或者可以在4周中的3周内每周两次以13mg/m²的剂量使用。蒂柏奥1143以日剂量约100至约1000mg、优选约100至约500mg，最优选约100至约250mg口服施用，在长达28天的时期内每天施用，或者在包括5到14个之间的连续施用日、然后16到5个蒂柏奥1143休息日的周期中，诸如每21天5个连续施用日、每21天14个连续施用日或者每14天7-10个连续施用日施用。

在另一实施方案中，不仅在用抗PD-1分子治疗之前向癌症患者施用IAP拮抗剂，还与用抗PD-1分子治疗同时地向癌症患者施用IAP拮抗剂。可以在施用抗PD-1分子的整个时期中继续进行IAP拮抗剂治疗。可替代地，可以在完成抗PD-1分子治疗之前结束IAP拮抗剂的联合施用，或者可以迟于完成抗PD-1分子治疗而继续IAP拮抗剂的施用。

诱导疗法、即在用抗PD-1分子治疗之前使用IAP拮抗剂来预治疗癌症患者，不受患者罹患癌症的类型限制。在特定实施方案中，癌症是已知在相当一部分治疗的患者中对用抗PD-1分子的治疗有应答的类型。这包括但不限于针对治疗选择的抗PD-1分子被许可或推荐用于的癌症类型。在其具体实施方案中，癌症是头颈癌、黑素瘤、尿路上皮癌、非小细胞肺癌、不可知原发位点的微卫星不稳定性(MSI)高肿瘤、或肾癌。在一些实施方案中，癌症是对用抗PD-1分子的治疗的应答者(responder)比例为10％以上、优选20％以上、且更优选30％以上的癌症。在另一实施方案中，癌症是低百分比的患者(例如5％以下)已经显示出对用抗PD-1分子的治疗有应答并且根据本发明的诱导疗法将改进该应答率的类型。这包括但不限于针对治疗所选的抗PD-1分子未被(尚未)许可或推荐用于的癌症类型。在其具体实施方案中，癌症是胰腺癌、结直肠癌、多发性骨髓瘤、小细胞肺癌、肝癌或卵巢癌。

原则上，可使用任何IAP拮抗剂。然而，优选的IAP拮抗剂包括蒂柏奥1143、GDC-917/CUDC-427、LCL161、GDC-0152、TL-32711/比瑞那帕、HGS-1029/AEG-40826、BI 891065、ASTX-660和APG-1387。优选地，IAP拮抗剂是SMAC模拟物，最优选的一种是蒂柏奥1143。

在抗PD-1分子治疗期间继续IAP拮抗剂的情况下，可以使用与诱导期中相同或不同的IAP拮抗剂，优选相同的。IAP拮抗剂的优选实施例包括蒂柏奥1143、GDC-917/CUDC-427、LCL161、GDC-0152、TL-32711/比瑞那帕、HGS-1029/AEG-40826、BI 891065、ASTX-660和APG-1387。优选地，IAP拮抗剂是SMAC模拟物，最优选的一种是蒂柏奥1143。根据临床医生的评估和经验，剂量和方案(周期)也可与诱导期中的相同或不同。只要观察到临床获益，没有症状恶化、没有如通过RECIST/iRECIST指南客观评价的疾病进展、并且没有不可接受的毒性，或者直到存在改变治疗方法的临床需要为止，就可以重复周期。

诱导期之后施用的抗PD-1分子可以是任何抗PD-1分子。可以使用的具体抗PD-1分子包括纳武单抗、派姆单抗、阿特朱单抗、度伐单抗、阿维鲁单抗、PDR001、IBI-308、西米普利单抗、卡瑞利珠单抗、BGB-A317、BCD-100、JS-001、JNJ-3283、MEDI0680、AGEN-2034、TSR-042、Sym-021、PF-06801591、MGD-013、MGA-012、LZM-009、GLS-010、热那利木单抗、BI754091、AK-104、CX-072、WBP3155、SHR-1316、PD-L1抑制剂米拉分子、BMS-936559、M-7824、LY-3300054、KN-035、FAZ-053、CK-301和CA-170。优选的分子是针对PD-1或PD-L1的抗体。在诱导期之后针对治疗所选的抗PD-1分子以临床实践中通用的量和剂量方案施用。在特定实施方案中，在诱导期之后施用的抗PD-1分子可以与一种或多种其他癌症疗法联合，该一种或多种其他癌症疗法包括但不限于其他免疫疗法(诸如其他免疫检查点抑制剂，其包括但不限于抗CTLA4抗体、IDO抑制剂、细胞疗法、癌症疫苗、其他免疫调节剂)、放射疗法、化学疗法、化学放射疗法、溶瘤病毒(oncolytic viruse)、抗血管生成疗法(anti-angiogenictherapy)(诸如VEGFR抑制剂)和/或靶向癌症疗法。

在特定实施方案中，本发明的诱导疗法以癌症微环境弱免疫原性的评估为条件或仅在该评估之后才被推荐。因此，在一些实施方案中，在患者的癌症已被评估为弱免疫原性之后，认为该患者有诱导疗法的资格。在一些实施方案中，癌症已被评估为弱免疫原性。例如，在一些实施方案中，根据本文下面提供的定义之一，癌症可能已被评估为具有低免疫原性。该评估通常涉及在IAP拮抗剂预治疗之前获取的患者生物样品中的免疫原性标志物的分析，患者生物样品诸如癌症活检(包括液体活检)；以及该标志物的存在、表达水平或衍生评分没有达到预定阈值的发现。优选的标志物是在癌细胞和/或免疫细胞上表达的PD-L1。其他优选的标志物包括肿瘤浸润淋巴细胞和/或肿瘤突变负荷(tumor mutation burden)。

在另一特定实施方案中，用抗PD-1分子治疗患者以癌症在诱导期、即用IAP拮抗剂预治疗结束时是免疫原性的评估为条件，或仅在该评估之后才被推荐。在一些实施方案中，根据本文下面提供的定义之一，诱导期结束时癌症可能已被评估为具有高的免疫原性。该评估通常涉及在用IAP拮抗剂预治疗患者之后获取的患者生物样品中免疫原性标志物的分析，患者生物样品诸如；以及该标志物的存在、表达水平或衍生评分超过预定的阈值的发现。优选的标志物是在癌细胞和/或免疫细胞上表达的PD-L1。其他优选的标志物包括肿瘤浸润淋巴细胞和/或肿瘤突变负荷。

在又一特定实施方案中，在诱导治疗期间，可以使用一种或多种其他癌症疗法，诸如放射疗法、化学疗法、溶瘤病毒、靶向癌症疗法、癌症疫苗、细胞疗法和/或抗血管生成疗法。除抗PD-1分子疗法外，在诱导期期间可以使用任何癌症联合疗法。因此，在诱导期期间不施用抗PD-1分子。

本发明还涉及一种治疗受试者的癌症的方法，该方法包括用IAP拮抗剂对受试者进行的预治疗，以及使用抗PD-1分子对受试者进行的后续治疗。

在诱导期中，各种剂量和方案用于所选的IAP拮抗剂。所选的剂量和方案可取决于各种因素，诸如癌症类型、患者的特征和受试者可能正在接收的其他疗法，并且所选的剂量和方案可能要经过临床医生的评估和经验。例如，每周一次介于500和1800mg之间的口服剂量可以用于LCL-161，包括每周一次500mg口服、每周一次1200mg口服、每周一次1500mg口服、每周一次1800mg口服。比瑞那帕可以以在28天周期的第1、8和15天以13和47mg/m²之间、例如47mg/m²的剂量使用(第2-7天、第9-14天和第16-28天是比瑞那帕休息日)，或者可以在4周中的3周内每周两次以13mg/m²的剂量使用。蒂柏奥1143以日剂量约100至约1000mg、优选约100至约500mg，最优选约100至约250mg口服施用，在长达28天的时期内每天施用，或者在包括5到14个之间的连续施用日、然后16到5个蒂柏奥1143休息日的周期中，诸如每21天5个连续施用日、每21天14个连续施用日或者每14天7-10个连续施用日施用。

在抗PD-1分子治疗期间继续IAP拮抗剂的情况下，可以使用与在预治疗期中相同或不同的IAP拮抗剂，优选相同的。IAP拮抗剂的优选实施例包括蒂柏奥1143、GDC-917/CUDC-427、LCL161、GDC-0152、TL-32711/比瑞那帕、HGS-1029/AEG-40826、BI 891065、ASTX-660和APG-1387。优选地，IAP拮抗剂是SMAC模拟物，最优选的一种是蒂柏奥1143。根据临床医生的评估和经验，剂量和方案也可与诱导期中的相同或不同。只要观察到临床获益，没有症状恶化、没有如通过RECIST/iRECIST指南客观评价的疾病进展、并且没有不可接受的毒性、或者直到存在改变治疗方法的临床需要为止，就可以重复周期。

施用的抗PD-1分子可以是任何抗PD-1分子。可以使用的具体抗PD-1分子包括纳武单抗、派姆单抗、阿特朱单抗、度伐单抗、阿维鲁单抗、PDR001、IBI-308、西米普利单抗、卡瑞利珠单抗、BGB-A317、BCD-100、JS-001、JNJ-3283、MEDI0680、AGEN-2034、TSR-042、Sym-021、PF-06801591、MGD-013、MGA-012、LZM-009、GLS-010、热那利木单抗、BI 754091、AK-104、CX-072、WBP3155、SHR-1316、PD-L1抑制剂米拉分子、BMS-936559、M-7824、LY-3300054、KN-035、FAZ-053、CK-301和CA-170。优选的分子是针对PD-1或PD-L1的抗体。抗PD-1分子以临床实践中通用的量和剂量方案施用。在特定实施方案中，抗PD-1分子可以与一种或多种其他癌症疗法联合，该一种或多种其他癌症疗包括但不限于其他免疫疗法(诸如其他免疫检查点抑制剂，其包括但不限于抗CTLA4抗体、IDO抑制剂、细胞疗法、癌症疫苗、其他免疫调节剂)、放射疗法、化学疗法、化学放射疗法、溶瘤病毒、抗血管生成疗法(诸如VEGFR抑制剂)和/或靶向癌症疗法。

在本发明的优选实施方案中，蒂柏奥1143在诱导期(或作为预治疗)中使用以及后续抗PD-1分子治疗期间使用。在所述后续治疗期间，优选的抗PD-1分子是纳武单抗、派姆单抗、阿特朱单抗、度伐单抗、阿维鲁单抗、PDR001或BI-754091。在本发明的特别优选实施方案中，蒂柏奥1143在持续5-28天的诱导期(或作为预治疗)中以及在后续抗PD-1分子治疗期间，用于治疗头颈癌、黑素瘤、尿路上皮癌、非小细胞肺癌、不可知原发位点的微卫星不稳定性(MSI)高肿瘤、肾癌、胰腺癌、结直肠癌、多发性骨髓瘤、小细胞肺癌、肝癌或卵巢癌。在所述后续治疗期间，优选的抗PD-1分子是纳武单抗、派姆单抗、阿特朱单抗、度伐单抗、阿维鲁单抗、PDR 001或BI-754091。

附图说明

图1是示出了根据实施例1蒂柏奥1143治疗诱导人头颈癌患者(n＝12名患者)的肿瘤中cIAP1降解的图。统计分析使用了配对t检验，且P值＝0.045。

图2是示出了根据实施例1蒂柏奥1143治疗增加头颈癌患者(n＝12名患者)的肿瘤中CD4+(A)和CD8+(B)T淋巴细胞数量的图。统计分析使用了配对t检验。图2(A)的P值＝0.511，且图2(B)的P值＝0.020。

图3是示出了根据实施例1蒂柏奥1143增加头颈癌患者(n＝12名患者)的肿瘤中PD-1+免疫细胞(A)、和PD-L1+免疫细胞(B)、以及肿瘤(C)的数量的图。统计分析使用了配对t检验。图3(A)的P值＝0.002，图3(B)的P值＝0.004，且图3(C)的P值＝0.129。

图4是示出了如通过中值肿瘤体积测量的、用蒂柏奥1143预治疗使MC38肿瘤对使用抗PD-L1抗体后续治疗敏感的图。如通过学者t检验确定的(双尾、非配对、等方差)，在最佳的T/C天(第18天)时：对于仅蒂柏奥1143预治疗与媒介物(vehicle)相比，p<0.05(*)；对于蒂柏奥1143预治疗然后PD-L1、与媒介物相比，p<0.0001(**)；对于蒂柏奥1143预治疗然后联合物(combo)、与媒介物相比，p<0.0001(**)。除第18天的媒介物为n＝6，每组N＝8只小鼠。注意：联合物＝蒂柏奥1143+抗PD-L1。

图5是示出了如通过中值肿瘤体积测量的、用比瑞那帕预治疗使MC38肿瘤对使用抗PD-L1抗体后续治疗敏感的图。如通过学者t检验确定的(双尾、非配对、等方差)，在最佳的T/C天(第15天)时：对于仅比瑞那帕预治疗与媒介物相比，p>0.05；对于比瑞那帕预治疗然后PD-L1、与媒介物相比，p<0.05(*)；对于比瑞那帕预治疗然后联合物、与媒介物相比，p<0.001(**)。每组N＝8只小鼠。注意：联合物＝比瑞那帕+抗PD-L1。

图6是示出了如通过中值肿瘤体积测量的、用LCL161预治疗使MC38肿瘤对使用抗PD-L1抗体后续治疗敏感的图。如通过学者t检验确定的(双尾、非配对、等方差)，在最佳的T/C天(第15天)时：对于仅LCL161预治疗与媒介物相比，p<0.05(*)；对于LCL161预治疗然后PD-L1、与媒介物相比，p<0.05(*)；对于LCL161预治疗然后联合物、与媒介物相比，p<0.001(**)。每组N＝8只小鼠。注意：联合物＝LCL161+抗PD-L1。

图7是示出了如通过中值肿瘤体积测量的、用蒂柏奥1143预治疗使CT26肿瘤对使用抗PD-1抗体后续治疗敏感的图。如通过学者t检验确定的(双尾、非配对、等方差)，在最佳的T/C天(第17天)时：对于仅蒂柏奥1143预治疗与媒介物相比，p>0.05；对于蒂柏奥1143预治疗然后PD-1、与媒介物相比，p<0.05(*)；对于蒂柏奥1143预治疗然后联合物、与媒介物相比，p<0.0001(**)。除第17天的媒介物为n＝7外，每组N＝8只小鼠。注意：联合物＝蒂柏奥1143+抗PD-1。

具体实施方式

定义

术语“拮抗剂”和“抑制剂”可互换使用，并且是指干扰或抑制另一种物质的生理作用的物质。在一些实施方案中，术语“拮抗剂”和“抑制剂”具有与牢记第一优先权日时的技术人员公知常识的本领域技术人员在第一优先权日、即2017年12月21日时所理解的相同的含义。

术语“抗体”是指包括至少一个免疫球蛋白结构域的分子，该免疫球蛋白结构域结合至特定抗原或对特定抗原具有免疫反应性。该术语包括完整抗体及其任何抗原结合部分或其单链、及其组合。术语“抗体”尤其包括双特异性抗体。

典型类型的抗体至少包含通过二硫键互连的两条重链(“HC”)和两条轻链(“LC”)。

各“重链”包含“重链可变结构域(heavy chain variable domain)”(在本文中缩写为“VH”)和“重链恒定结构域(heavy chain constant domain)”(在本文中缩写为“CH”)。重链恒定结构域通常包含三个恒定结构域CH1、CH2和CH3。

各“轻链”包含“轻链可变结构域”(在本文中缩写为“VL”)和“轻链恒定结构域”(“CL”)。轻链恒定结构域(CL)可以是κ型或λ型。VH和VL结构域可进一步细分为高可变性(hypervariability)的区域，称为互补决定区(Complementarity Determining Region，“CDR”)，其间穿插着更保守的区域，称为“构架区(framework region)”(“FW”)。

各VH和VL由三个CDR和四个FW组成，从氨基端到羧基端按以下顺序排列：FW1、CDR1、FW2、CDR2、FW3、CDR3、FW4。本公开尤其呈现了VH和VL序列、以及对应于CDR1、CDR2和CDR3的子序列。

因此，本领域技术人员将理解的是，FW1、FW2、FW3和FW4的序列是同等公开的。对于特定的VH，FW1是VH的N端和H-CDR1的N端之间的子序列，FW2是H-CDR1的C端和H-CDR2的N端之间的子序列，FW3是H-CDR2的C端和H-CDR3的N端之间的子序列，FW4是H-CDR3的C端和VH的C端之间的子序列。类似地，对于特定的VL，FW1是VL的N端和L-CDR1的N端之间的子序列，FW2是L-CDR1的C端和L-CDR2的N端之间的子序列。FW3是L-CDR2的C端和L-CDR3的N端之间的子序列，FW4是L-CDR3的C端和VL的C端之间的子序列。

重链和轻链的可变结构域含有与抗原相互作用的区域，并且与抗原相互作用的该区域在本文中也称为“抗原结合位点(antigen-binding site)”或“抗原结合位点(antigenbinding site)”。抗体的恒定结构域可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，宿主组织或因子包括免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统(classicalcomplement system)的第一组分(C1q)。本公开的示例性抗体包括典型的抗体，还包括其片段和变体、诸如scFv，及其组合，其中例如，scFv(例如，通过肽键或通过化学接头)共价链接至典型抗体的重链和/或轻链的N端、或者插入典型抗体的重链和/或轻链中。此外，本公开的示例性抗体包括双特异性抗体。

如本文所用，术语“抗体”包括完整的多克隆抗体、完整的单克隆抗体、抗体片段(诸如Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段)、单链可变片段(scFv)、二硫键稳定的scFv、诸如双特异性抗体的多特异性抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、包含抗体的抗原决定部分的融合蛋白、以及包含抗原结合位点的任何其他修饰的免疫球蛋白分子。

基于分别被称为α、δ、ε、γ和μ的免疫球蛋白的重链恒定结构域的同一性(identity)，抗体可以是五种主要类别(同种型)的免疫球蛋白中的任何一种：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，或其亚类(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)。不同类别的免疫球蛋白具有不同且众所周知的亚基结构和三维构型。抗体可以是无饰的(naked)，或与诸如治疗剂或诊断剂的其他分子缀合以形成免疫缀合物(immunoconjugate)。在一些实施方案中，术语“抗体”具有与牢记第一优先权日时的技术人员公知常识的本领域技术人员在第一优先权日、即2017年12月21日时所理解的相同的含义。

术语“抗癌应答”、“应答”或“应答性”涉及使用RECIST v1.1标准评估的客观放射学和临床改进(Eur.J.Cancer 45；2009:228-247)。RECIST是一组已发布的规则，这些规则客观地定义了癌症患者在治疗期间何时改进(“应答”)、保持不变(“稳定”)或恶化(“进展(progression)”)。RECIST 1.1最近已适用于免疫治疗剂iRECIST 1.1的评价。(西摩(Seymour),L.等，iRECIST：Guidelines for response criteria for use in trialstesting immunotherapeutics.Lancet Oncol,2017.18(3):p.e143-e152)。在本发明中，如果根据RECIST v 1.1对患者有任何临床益处，被评估为完全应答(CR)、部分应答(PR)或稳定疾病(SD)，或评估为具有如通过无进展生存期(progression free survival)或总体生存状态测量的、增加的应答或疾病稳定持续时间，则患者被认为对给定的治疗有应答。

术语“抗PD-1分子”是指PD-1抑制剂和PD-L1抑制剂。这些抑制剂包括但不限于靶向PD-1或PD-L1的抗体。抗PD-1分子可以是小分子，诸如CA-170(例如在J.J.Lee等,Journalof Clinical Oncology 35,no.15_suppl,DOI:10.1200/JCO.2017.35.15_suppl.TPS3099中描述的AUPM-170、Curis、Aurigene)。在WO 2018/195321A中描述了可用于本发明的PD-1/PD-L1相互作用的其他小分子抑制剂。

“癌症”通常是指可能是转移性或非转移性的恶性肿瘤。例如，从诸如胃肠道和皮肤的上皮组织发展的癌症的非限制性实施例包括非黑素瘤皮肤癌(non-melanoma skincancer)、头颈癌、食道癌、肺癌、胃癌、十二指肠癌、乳腺癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫内膜子宫体癌(cancer of endometrial uterine body)、胰腺癌、肝癌、胆管癌、胆囊癌、结直肠癌、结肠癌、膀胱癌和卵巢癌。从非上皮组织发展的肉瘤的非限制性实施例包括骨肉瘤、软骨肉瘤、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、胃肠道间质瘤(GIST)和血管肉瘤，非上皮组织具有诸如肌肉的胚层来源(基质)。来自外胚层(神经嵴个体发生(neural crestontogeny))的肿瘤的非限制性实施例包括脑瘤、神经内分泌肿瘤等。此外，衍生自造血器官的血液学癌症的非限制性实施例包括：恶性淋巴瘤，其包括霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤；白血病，其包括急性髓细胞白血病、慢性髓细胞白血病、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病；和多发性骨髓瘤。癌症的后一种实施例在本文中也称为癌症的类型。

术语“癌症”和“肿瘤”(意味着恶性肿瘤)在本文中可互换使用。

术语“同时疗法”、“同时治疗”或“联合疗法”是指IAP拮抗剂和抗PD-1分子的同期(contemporaneous)或同时(simultaneous)施用。在一些实施方案中，术语“同时疗法”或“同时治疗”是指其中在施用抗PD-1分子之前，没有给予IAP拮抗剂足够的时间以增强肿瘤微环境的免疫原性效能的治疗。在一些实施方案中，术语“同时治疗”、“联合疗法”和“同时疗法”具有与第一优先权日时的技术人员公知常识的本领域技术人员在第一优先权日、即2017年12月21日时所理解的相同的含义。

IAP拮抗剂或抗PD-1分子的“有效量”意味着临床医生寻求的将引起生物学或医学抗癌应答的复合物的量。

短语“以增强肿瘤微环境的免疫原性效能”是指肿瘤微环境中免疫系统的刺激，与未刺激的免疫系统相比，其导致增加的免疫应答。在当前情况下，IAP拮抗剂可以刺激免疫系统。该刺激可以增加癌症的免疫原性，该刺激可以增加肿瘤微环境中效应细胞的量，和/或该刺激可以增加肿瘤微环境中存在的免疫效应细胞对癌细胞的敏感性。在一些实施方案中，短语“以增强肿瘤微环境的免疫原性效能”具有与牢记第一优先权日时的技术人员公知常识的本领域技术人员在第一优先权日、即2017年12月21日时所理解的相同的含义。

如本文所使用的，术语“首次施用”抗PD-1分子特指抗PD-1分子首次施用给患者。在一些实施方案中，患者先前从未用抗PD-1分子治疗过。在一些实施方案中，患者已经用抗PD-1分子治疗过，但是患者已经复发或抗PD-1分子疗法无效。在这些实施方案中，在开始本发明的诱导疗法之前，血清中先前施用的抗PD-1分子水平已经充分降低了例如95％。在一些实施方案中，先前施用的抗PD-1分子的最后一次施用、与本发明诱导疗法开始之间的时间代表了至少一个或两个给药间隔(重复施用之间的时间)，该给药间隔由监管机构批准、或被医学界接受。在一些实施方案中，在诱导期开始之前至少1、2、3、4或甚至6周，受试者未施用抗PD-1分子。

如本文所使用的关于肿瘤微环境的术语“免疫原性的”和“免疫原性”，意味着引起或产生免疫应答。在一些实施方案中，通过确定在患者癌细胞上免疫染色显示的PD-L1表达水平来评估免疫原性。

在一些实施方案中，通过考虑癌症样品中CD8+细胞的水平作为标志物来评估免疫原性。该评估可以使用以下实施例1的材料和方法进行。

在一些实施方案中，可以通过组合考虑上述标志物来将癌症样品评估为低免疫原性和高免疫原性。因此，在一些实施方案中，通过考虑PD-L1标志物表达水平连同癌症样品中CD8+细胞水平的组合来评估免疫原性。在一些实施方案中，在使用合适抗体、诸如抗体22c3 pharmDx(达科公司(Dako，Inc.))的免疫组织化学试验中显示出对PD-L1染色(在任何强度下)的癌症样品细胞比例(fraction)而言，如果在诱导期期间IAP拮抗剂治疗增加了PD-L1在患者癌细胞上的表达水平增加了例如至少1％、2％、3％或4％，则认为用IAP拮抗剂治疗增强了肿瘤微环境的免疫原性效能。类似地，在一些实施方案中，可以通过当使用以下实施例1的材料和方法确定时、癌症样品中CD8+细胞水平增加至少1％、2％、3％或4％，来鉴定免疫原性效能的增强。

如本文所用，IAP拮抗剂或抑制剂意味着对凋亡抑制蛋白(简称IAP)具有亲和力的复合物。该复合物是IAP的抑制剂或拮抗剂。在一些实施方案中，IAP拮抗剂表现出IAP拮抗剂与cIAP1和/或cIAP2之间相互作用而导致这些蛋白质的降解和随后NF-κB调节的特性。在一些实施方案中，该作用可用于测试化合物的IAP抑制活性：当使潜在的IAP拮抗剂与cIAP1和/或cIAP2在体外接触，并用包括但不限于蛋白质印迹分析(western blot analysis)的合适技术分析该作用时，对于IAP抑制剂，应在低于10μM、优选<1μM的浓度下观察对cIAP1的作用。在一些实施方案中，术语IAP抑制剂和“IAP拮抗剂”具有与牢记第一优先权日时的技术人员公知常识的本领域技术人员在第一优先权日、即2017年12月21日时所理解的相同的含义。

通常，术语“诱导疗法”是指一种治疗类型，其中向患者施用药物以诱导患者的应答，该应答加强了随后施用的另一种药物的有效性。在本发明的上下文中，诱导疗法涉及“预治疗”。“预治疗”或“诱导”是指在首次施用抗PD-1分子之前，施用IAP拮抗剂一定时间量。施用IAP拮抗剂的时期被称为“诱导期”或“预治疗期”。不特别限制诱导期，只要肿瘤微环境的免疫原性效能被增强即可。在一些实施方案中，诱导期具有选自1至48天、优选1至28天、更优选5至28天的持续时间。在一些实施方案中，诱导期足够长以增强肿瘤微环境的免疫原性效能。在一些实施方案中，与不具有使用IAP拮抗剂诱导治疗的同时治疗相比，抗PD-1分子治疗的功效增加。然后在诱导期之后，即在已增强肿瘤微环境的免疫原性效能后，施用抗PD-1分子。这会导致抗PD-1分子的效能增加，因为IAP拮抗剂已启动(prime)了免疫系统。在一些实施方案中，术语“诱导疗法”、“预治疗”、“诱导”、“诱导期”和“预治疗期”具有与牢记第一优先权日时的技术人员公知常识的本领域技术人员在第一优先权日、即2017年12月21日时所理解的相同的含义。

“SMAC模拟物”意味着用于IAP治疗性抑制的小分子抑制剂，该小分子抑制剂模拟内源性SMAC序列的N端四个氨基酸，并且至少部分地由非肽类(non-peptidic)元素组成。内源性SMAC的N端序列是Ala-Val-Pro-Ile(AVPI)，并且是与IAP结合所必需的。

术语“受试者”涉及哺乳动物，并且优选地，涉及人类。人类受试者也被称为“患者”。

诱导疗法

发明人提出，可以用诸如SMAC模拟物的IAP拮抗剂来预治疗具有肿瘤的患者，以增强患者肿瘤微环境的免疫原性。随后，用抗PD-1分子治疗患者。预治疗增加了患者肿瘤将对使用抗PD-1分子治疗产生应答的可能性、和/或增强了肿瘤对抗PD-1分子的应答的有效性。IAP拮抗剂可以在已批准(截至2017年12月21日)或正在临床开发中的那些IAP拮抗剂之间选择，尤其是在以下各项中选择：蒂柏奥1143(德彪集团(Debiopharm),CAS RN:1071992-99-8)、GDC-917/CUDC-427(库里斯/基因泰克(Curis/Genentech),CAS RN:1446182-94-0)、LCL161(诺华公司,CAS RN:1005342-46-0)、GDC-0152(基因泰克,CAS RN:873652-48-3)、TL-32711/比瑞那帕(麦地韦(Medivir),CAS RN:1260251-31-7)、HGS-1029/AEG-408268(埃泽拉(Aegera),CAS RN:1107664-44-7)、BI 891065(勃林格殷格翰)、ASTX-660(阿斯特克斯/大冢(Astex/Otsuka),CAS RN:1605584-14-2)、APG-1387(盛亚药业(Ascentage),CASRN:1802293-83-9)、或任何一种它们的药学可接受盐。优选地，IAP拮抗剂是SMAC模拟物，最优选的一种是蒂柏奥1143。

使用IAP拮抗剂预治疗可根据患者的肿瘤微环境弱免疫原性的发现而进行。可以在患者的生物学样品中评估免疫原性，诸如在预治疗之前进行的肿瘤活检(包括液体活检)。可采用的免疫原性标准包括在癌细胞或在癌症活检中存在的所有细胞中表达的PD-L1的水平。该标准也可以是表达可检测量的PD-L1的肿瘤细胞和/或免疫细胞的百分比。免疫原性的阈值可以由医学界、待用于分析的抗PD-1分子的生产商/分销商、或治疗医师来界定。例如，制造商(默克公司)已将派姆单抗治疗的阈值水平界定为：在使用抗体22c3pharmDx(达科公司)对一线疗法的免疫组织化学分析中，超过50％的PD-L1(以任意强度)染色癌症细胞，并且对二线疗法，超过1％的PD-L1染色细胞。因此，在该实施例中，将认为患有较低的PD-L1表达细胞频率的癌症患者有接受IAP拮抗剂预治疗的资格。在一些实施方案中，可以进行使用IAP拮抗剂的预治疗，直至PD-L1表达细胞和/或CD8+细胞的频率超过上述高免疫原性的阈值水平为止。额外的标准可包括基线活检或样品中存在的淋巴细胞、或CD8+T细胞、或CD4+T细胞的百分比。其他合适的免疫原性标准可获得医学界的接受(例如，树突状细胞的数量/百分比、CD8+T细胞与调节性T细胞的比率、肿瘤突变负荷等)。还可以基于多个标准评估资格(Eligibility)。

不受特定理论的束缚，诱导期之后，PD-L1标志物在癌细胞上的表达增加，被认为是已增强肿瘤微环境的免疫原性效能的信号。这是因为增加的免疫原性效能应与癌细胞绕过(circumvent)免疫系统而存活的需求增加相关联。PD-L1的过表达被认为是癌细胞可以躲避免疫系统的一种机制。因此，增加的PD-L1表达水平是肿瘤细胞在肿瘤微环境中对抗(confront)增强的免疫系统的信号。

该方法还可适用于基于在使用IAP拮抗剂预治疗结束时患者的癌症微环境的免疫原性，来选择用抗PD-1分子治疗的患者。免疫原性可在患者的生物学样品中进行评估、诸如在预治疗结束时进行的肿瘤活检(包括液体活检)。用于评估免疫原性的标准和用于定义阈值的标准可与上一部分中描述的标准相似。所选的免疫原性标志物超过预定阈值的患者可被选择使用抗PD-1分子进行治疗。

在癌症活检中评估免疫原性的方法

原则上，可以采用任何合适的方法。最经常使用的是基于免疫组织化学和流式细胞术的程序。

免疫组织化学：免疫组织化学(IHC)是一种能够证明在组织切片(section)中蛋白质的存在和位置的方法。免疫组织化学能够观察完整组织中的过程。IHC方案的基本步骤如下：固定并包埋组织，切割并安装切片，切片脱蜡并再水化(rehydrating)，应用抗原修复过程，免疫组织化学染色并在显微镜下观察染色。在一个示例性方案中，对4μm石蜡包埋的组织切片执行免疫染色。简单地说，将切片(slide)在二甲苯中脱蜡并利用分级乙醇系列脱水，并用3％过氧化氢封闭内源性过氧化物酶。表位修复(epitope retrieval)后，将切片用具有0.1％(体积)吐温(Tween)20/5％(体积)正常山羊血清的TRIS缓冲盐水洗涤并封闭。执行与一级抗体(primary antibody)在4℃下温育过夜，然后与二级抗体(secondaryantibody)在室温下温育30分钟。用具有0.1％(体积)Tween20的TRIS缓冲盐水洗涤3次，用二氨基联苯胺(DAB)染色并用苏木精(hematoxylin)复染。固安乔里(Guancial)等(2014年)；Redler,A.等(2013)PLoS One.8:e72224。这些程序可以手动进行，或者可以部分或完全自动化地进行。在下面的实施例部分中还描述了一种特定的IHC方法。

流式细胞术：流式细胞术是一种基于激光的生物物理技术，其用于细胞计数、细胞分选、生物标志物检测和蛋白质工程，流式细胞术涉及将细胞悬浮在流体流中并使细胞通过电子检测装置。它允许同时对高达每秒数千个粒子的物理化学特性进行多参数分析。使用蛋白质特异性抗体，流式细胞术可以提供有关细胞表面表达的信息，在某些情况下还可以提供有关用于理解复杂细胞种群或过程的细胞质标志物或细胞核标志物的信息。燕(Yan),D.等(2011)Arthritis Res.Ther.13:R130。

包括IAP拮抗剂的药物组合物及其施用

包含IAP拮抗剂的药物组合物可以口服、肠胃外、通过吸入喷雾、局部、经直肠、经鼻、经颊、经阴道或经植入的储存器(reservoir)来施用，优选通过口服施用或通过注射施用。然而，应注意的是，二聚体SMAC模拟物通常静脉内施用。药物组合物可以含有任何常规的无毒药学可接受载体、佐剂或媒介物。在一些情况下，可以用药学可接受酸、碱或缓冲剂来调节制剂的pH，以增强活性剂或其递送形式的稳定性。在宾夕法尼亚州伊斯顿市马克出版公司的《雷明顿药物科学》(Remington's Pharmaceutical Sciences)，第19版，1995中以非限制性方式描述了标准药物载体及其制剂。如本文所用，术语肠胃外包括皮下、皮内、静脉内、肌肉内、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内(intrathecal)、病灶内和颅内注射或输注技术。

用于口服施用的液体剂型包括药学可接受的乳剂、微乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除活性剂(如SMAC模拟剂的IAP拮抗剂)外，液体剂型可以含有本领域常用惰性稀释剂、诸如水或其他乳化剂，增溶剂，和溶剂、诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇(tetrahydrofurfuryl alcohol)、聚乙二醇、山梨聚糖(sorbitan)的脂肪酸酯、及其混合物。除惰性稀释剂外，口服组合物还可包括佐剂，诸如润湿剂、乳化和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。

可以根据已知技术使用合适的分散或湿润剂、和悬浮剂来配制可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性混悬剂。无菌可注射制剂还可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、混悬剂或乳剂，例如在1,3-丁二醇中的溶液。在可接受媒介物和溶剂中，可以使用的是水、林格氏溶液(Ringer's solution)、U.S.P.和等渗氯化钠和葡萄糖溶液。此外，无菌的不挥发油(fixed oil)常规用作溶剂或混悬介质。为此，可以使用任何温和的不挥发油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，诸如油酸的脂肪酸用于注射剂的制备。

例如通过经由细菌保留过滤器过滤、电离辐射、或以无菌固体组合物形式掺入可在使用前溶解或分散在无菌水或其他无菌可注射介质中的活性剂，可以对可注射制剂灭菌。根据所使用的特定IAP拮抗剂的化学性质，灭菌也可以是通过高压灭菌或干热的。

为了延长活性剂的作用，通常需要减慢皮下或肌内注射对活性剂的吸收。这可以通过使用具有水溶性差的结晶或无定形材料的液体混悬剂来完成。则活性剂的吸收速率取决于其溶解速率，而反过来溶解速率可以取决于晶体大小和晶型。可替代地，通过将活性剂溶解或混悬在油性媒介物来完成肠胃外施用的药物形式的延迟吸收。通过将活性剂微囊封装(microencapsulate)在诸如聚丙交酯-聚乙交酯的可生物降解聚合物中，来制备可注射储库形式(injectable depot form)。根据活性剂与聚合物的比率和所用的特定聚合物的性质，可以控制活性剂的释放速率。其他可生物降解聚合物的实施例包括聚原酸酯(poly(orthoesters))和聚酸酐(poly(anhydrides))。也可以通过将活性剂包埋(entrapping)在与身体组织相容的脂质体或微乳剂中来制备储库可注射制剂。

用于口服施用的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性剂与诸如柠檬酸钠或磷酸二钙的至少一种惰性的药学可接受赋形剂或载体、和/或以下物质混合：a)填充剂或增量剂(extender)，诸如淀粉、乳糖、纤维素、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；c)保湿剂(humectant)，诸如甘油；d)崩解剂，诸如琼脂、碳酸钙、交联羧甲基纤维素、交聚维酮、羧甲基纤维素、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液缓凝剂(solution-retarding agent)，诸如石蜡；f)吸收加速剂，诸如季铵化合物；g)润湿剂(wetting agent)，诸如鲸蜡醇、十二烷基硫酸钠和单硬脂酸甘油酯；h)吸收剂，诸如高岭土和膨润土；和/或i)润滑剂，诸如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠及其混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，剂型还可包含缓冲剂。

相似类型的固体组合物也可以用作软填充和硬填充的明胶胶囊中的填充剂，该明胶胶囊使用诸如乳糖(lactose)或奶糖(milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等赋形剂。

片剂、糖衣丸剂、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以制备有包衣和外壳，诸如肠溶包衣和药物配制领域中众所周知的其他包衣。它们可以任选地含有遮光剂(opacifying agent)，并且也可以具有仅在或优先在肠道的某一部分、任选地以延迟方式释放活性剂的组成。可以使用的包埋组合物的实施例包括聚合物质和蜡。

可以与药学可接受赋形剂或载体结合以产生单一剂型的活性剂的量，将根据所选择的特定IAP拮抗剂、特定的施用方式以及可能的所治疗的受试者而变化。典型的制剂将含有从1％至95％的活性剂(w/w)。可替代地，此类制剂可以含有从20％至80％的活性剂。可能需要比以上陈述的剂量更低或更高的剂量。任何特定受试者的具体剂量和治疗方案(regimen)将取决于各种因素，包括年龄；体重；体表面积；总体健康状况；性别；饮食；施用时间；排泄率；IAP拮抗剂；药物组合；疾病的严重程度和病程；状况或症状；受试者对疾病、状况或症状的处置；以及治疗医师的判断。

包括抗PD-1分子的药物组合物及其施用

通常通过静脉内输注施用抗PD-1分子。

纳武单抗以“OPDIVO”商标发行。纳武单抗以10mg/ml的溶液形式存在，该溶液包括纳武单抗抗体、甘露醇、三胺五乙酸(oebtetuc acid)、聚山梨酯80、氯化钠、柠檬酸钠二水合物、和水。为了施用，将其稀释到0.9％氯化钠或5％右旋糖中。派姆单抗以“KEYTRUDA”商标发行。派姆单抗作为固体组合物供应，该固体组合物包括50mg抗体和非活性成分L-组氨酸、聚山梨酯80和蔗糖。为了施用，将该组合物混悬于0.9％氯化钠中。阿特朱单抗(商标名：“TECENTRIQ”)提供为IV溶液(1200mg活性成分/20ml)，该IV溶液包含冰醋酸、组氨酸、蔗糖和聚山梨酯20的IV溶液。为了施用，用0.9％NaCl稀释该溶液。度伐单抗(“IMFINZI”)以在L-组氨酸、L-组氨酸盐酸盐一水合物、α,α-海藻糖二水合物、聚山梨酯80和注射用水中的500mg/10ml或120mg/2.4ml溶液形式存在，美国药典(USP)。阿维鲁单抗(“BAVENCIO”)作为200mg(活性成分)/10ml注射用溶液进行销售，该注射用溶液包含甘露醇、乙酸、聚山梨酯20、氢氧化钠和水。在0.45％或0.9％NaCl中稀释后，在60分钟内通过输注施用适当剂量。

检查点抑制剂的合适剂量是临床使用的剂量。纳武单抗的合适剂量为3mg/kg体重。该剂量在60分钟时期内通过静脉内输注施用。派姆单抗的合适剂量为2mg/kg体重。该剂量在30分钟内时期通过静脉内输注施用。阿特朱单抗的成人剂量为60分钟时期内输注的1200mg。度伐单抗的推荐剂量为在60分钟内通过静脉内输注施用的10mg/kg体重。阿维鲁单抗的合适剂量为10mg/kg体重。这些剂量可以与临床实践中接受的适应措施(adaptation)并行地适应。纳武单抗的给药通常每两周重复一次，派姆单抗每三周重复一次，阿特朱单抗每三周重复一次，度伐单抗每两周重复一次，而velumab每两周一次。

抗PD-1分子的施用剂量和方案(包括给药间隔)将由监管机构批准。医学界接受的任何剂量和方案的修改也将适用于目前描述的疗法。

在一方面，本发明包括以下所列项目。这些项目可以与以上方面或实施方案中的任何一个相结合。

1.一种IAP拮抗剂，其用于预治疗罹患癌症的人类受试者，以增强使用抗PD-1分子的后续治疗产生抗癌应答的可能性、或增强受试者癌症对使用抗PD-1分子的后续治疗的应答性。

2.根据项目1的IAP拮抗剂，其中在1至28天、优选5至28天的预治疗期期间，用所述IAP拮抗剂预治疗人类受试者，在所述预治疗期之后，所述随后开始所述抗PD-1分子的后续治疗。

3.根据项目2的IAP拮抗剂，其中所述预治疗期包括不施用所述IAP拮抗剂的一天或多天。

4.根据前述项目中任一项的IAP拮抗剂，其中在所述抗PD-1分子的后续治疗期间，还施用所述IAP拮抗剂或不同的IAP拮抗剂。

5.根据项目4的IAP拮抗剂，其中在所述使用抗PD-1分子的后续治疗的整个期间内继续所述IAP拮抗剂的施用、或在完成所述使用抗PD-1分子的后续治疗之前终止所述IAP拮抗剂的施用、或迟于完成所述使用抗PD-1分子的后续治疗而继续所述拮抗剂的使用。

6.根据前述项目中任一项的IAP拮抗剂，其中所述癌症是已知在相当一部分治疗的患者中对使用抗PD-1分子治疗有应答的类型。

7.根据项目6的IAP拮抗剂，其中所述癌症是头颈癌、黑素瘤、尿路上皮癌、非小细胞肺癌、不可知原发位点的微卫星不稳定性(MSI)高肿瘤、或肾癌。

8.根据项目1至5中任一项的IAP拮抗剂，其中所述癌症是低百分比的患者(例如5％或更少)已经显示出对用抗PD-1分子的治疗有应答的类型。

9.根据项目8的IAP拮抗剂，其中所述癌症是胰腺癌、结直肠癌、多发性骨髓瘤、小细胞肺癌、肝癌或卵巢癌。

10.根据前述项目中任一项的IAP拮抗剂，其中所述预治疗的条件在于癌症为弱免疫原性的评估。

11.根据项目10的IAP拮抗剂，其中所述评估由以下组成：在预治疗前获取的患者生物样品中免疫原性标志物的分析；和所述标志物的存在、表达水平或衍生评分未达到预定阈值的发现。

12.根据项目11的IAP拮抗剂，其中所述标志物是在癌细胞和/或免疫细胞上表达的PD-L1。

13.根据项目11的IAP拮抗剂，其中所述标志物是肿瘤浸润淋巴细胞或肿瘤突变负荷。

14.根据前述项目中任一项的IAP拮抗剂，其中所述使用抗PD-1分子的后续治疗开始的条件在于，所述癌症在所述预治疗结束时是免疫原性的评估。

15.根据项目14的IAP拮抗剂，其中所述评估由以下组成：在使用IAP抑制剂预治疗之后获取的患者生物样品中免疫原性标志物的分析；和所述标志物的存在、表达水平或衍生评分超过预定阈值的发现。

16.根据项目15的IAP拮抗剂，其中所述标志物是在癌细胞和/或免疫细胞上表达的PD-L1。

17.根据项目15的IAP拮抗剂，其中所述标志物是肿瘤浸润淋巴细胞或肿瘤突变负荷。

18.根据项目11-13和15至17中任一项的IAP拮抗剂，其中所述患者的生物样品是肿瘤或液体活检。

19.根据前述项目中任一项的IAP拮抗剂，其中所述抗PD-1分子是纳武单抗、派姆单抗、阿特朱单抗、度伐单抗、阿维鲁单抗、PDR001、IBI-308、西米普利单抗、卡瑞利珠单抗、BGB-A317、BCD-100、JS-001、JNJ-3283、MEDI0680、AGEN-2034、TSR-042、Sym-021、PF-06801591、MGD-013、MGA-012、LZM-009、GLS-010、热那利木单抗、BI 754091、AK-104、CX-072、WBP3155、SHR-1316、PD-L1抑制剂米拉分子、BMS-936559、M-7824、LY-3300054、KN-035、FAZ-053、CK-301、或CA-170。

20.根据项目19的IAP拮抗剂，其中所述抗PD-1分子是纳武单抗、派姆单抗、阿特朱单抗、度伐单抗、阿维鲁单抗、PDR001、或BI 754091。

21.根据项目1-19中任一项的IAP拮抗剂，其中所述抗PD-1分子是针对PD-1或PD-L1的抗体。

22.根据前述项目中任一项的IAP拮抗剂，其中所述使用抗PD-1分子的后续治疗与一种或多种其他癌症疗法联合，所述其他癌症疗法包括另一种免疫疗法、放射疗法、化学疗法、放化疗、溶瘤病毒、抗血管生成疗法、靶向癌症疗法。

23.根据前述项目中任一项的IAP拮抗剂，其中在所述预治疗期期间使用一种或多种其他癌症疗法，以排除使用抗PD-1分子的治疗。

24.根据前述项目中任一项的IAP拮抗剂，其中所述IAP拮抗剂是蒂柏奥1143、GDC-917/CUDC-427、LCL161、GDC-0152、TL-32711/比瑞那帕、HGS-1029/AEG-40826、BI 891065、ASTX-660或APG-1387。

25.根据项目24的IAP拮抗剂，其中所述IAP拮抗剂是SMAC模拟物。

26.根据项目25的IAP拮抗剂，其中所述IAP拮抗剂是蒂柏奥1143。

实施例

实施例1：在患有可切除的头颈部鳞状细胞癌的患者中使用或不使用顺铂(CDDP)的蒂柏奥1143的术前机会窗(pre-operative window-of-opportunity)研究(EUDRACT2014-004655-31)

对于该临床试验，蒂柏奥1143在其游离碱状态下使用，并与淀粉一起配制，并填充在硬明胶胶囊内。

该临床试验的主要目的是研究在患有头颈部鳞状细胞癌患者中，蒂柏奥1143单独或与顺铂联合的药效学活性(pharmacodynamic activity)。在众多次要目标中，还检查了对免疫信号传导的潜在作用。

该研究招募了患有新诊断的组织学证实的口腔、口咽(oropharynx)、下咽(hypopharynx)或喉(larynx)的鳞状细胞癌的成年患者。在两周的筛查期内(第-14天到第-1天)，进行了肿瘤活检并对其进行分析。治疗是从第1天到第15天(+/-2天)，且由每天口服(p.o.)施用200mg蒂柏奥1143而组成(一次性(in one arm))。在该治疗期结束时，进行了第二次肿瘤活检并对其进行分析，并对患者进行了手术。

通过免疫组织化学方法分析活检。使用迪科自动染色机自动机(安捷伦(Agilent))对cIAP1进行染色。以1/100的稀释度利用EPR4673小鼠mAb(Abcam)，并将组织切片暴露于抗体20分钟。是使用低pH的EnVision FLEX目标修复溶液对切片进行预治疗；EnVision FLEX系统(色原：DAB)用于信号的可视化。EnVision Flex系统和试剂来自安捷伦。将相同的方案应用于PD-L1染色。E1L3N兔mAb(细胞信号传导技术)以1/500的稀释度使用。

使用来自文塔纳罗氏(Ventana Roche)的CD3兔mAb 2GV6(作为即用型溶液提供)来鉴定T细胞。在Ventana Benchmark Ultra自动机上处理切片。暴露于抗体20分钟。用细胞调节液CC1(文塔纳)对切片进行预治疗(64分钟)；采用Optiview系统(文塔纳)(色原：DAB)进行信号的可视化。CD8和CD4T细胞的染色是通过相同的方案。CD8抗体是SP57兔mAb，而CD4抗体是SP35兔mAb。两种抗体来自文塔纳罗氏，并作为即用型溶液提供。针对PD-1检测所选择的抗体是NAT105小鼠mAb，它也作为即用型溶液(Cell Marque)提供。用于PD-1检测的方案与用于CD3染色的方案相同，除了抗体暴露时间和预治疗时间各为16分钟。

讨论了从12位可评价患者获得的数据。如在图1中可见的，在，蒂柏奥1143治疗降低了大多数患者的肿瘤中cIAP1的水平(使用配对t检验，p值为0.045)，表明已经达到了SMAC模拟物的有效肿瘤浓度。如通过作为治疗的结果、肿瘤微环境中CD4+和CD8+T细胞的数量提高(图2)的发现证明的，该治疗还导致肿瘤浸润淋巴细胞的大量增加。数据的统计分析显示，平均CD8+和CD4+T细胞数量都有所增加，CD8+T细胞数量增加显著(配对t检验的p值为0.020)(图2(B))。表达PD-1或PD-L1的免疫细胞的百分比在治疗的肿瘤中显著增加(图3(A)，p值为0.002；图3(B)，p值为0.004)。在大多数肿瘤中，表达PD-L1的细胞的频率也增加(图3(C))。总体而言，该数据强烈表明使用蒂柏奥1143治疗增强了人类患者中肿瘤微环境的免疫原性。

实施例2：使用IAP抑制剂蒂柏奥1143的动物研究

五组(n＝8)成年雌性C57BL/6J小鼠(从上海灵昌生物技术有限公司获得)在右下侧腹接种同基因结肠癌细胞系MC381×10⁶个细胞。当平均肿瘤大小达到约50mm³(第1天)时，如表1所示，动物接受的由100mg/kg剂量的口服SMAC模拟物蒂柏奥1143(德彪公司)组成的预治疗、或媒介物。7天内(第1-7天)，每天重复给药。在随后一天(第8天)，对媒介物治疗组和蒂柏奥1143预治疗组的动物腹腔(i.p.)内给予10mg/kg的对照抗体rIgG2b(克隆：LTF-2，BioXcell)。每周两次施用对照抗体，直到研究结束。另一两组集合(媒介物预治疗动物和蒂柏奥1143预治疗动物)腹腔内接受10mg/kg的抗PD-L1抗体(小鼠替代抗体，抗小鼠PD-L1，克隆：10F.9G2，BioXcell)。对于对照抗体，每周两次重复施用。最后一组蒂柏奥1143预治疗的动物接受了抗PD-L1抗体，以及在继续每天使用蒂柏奥1143。每周三次评估肿瘤体积(Tumorvolume)和体重。使用卡尺以二维方式测量肿瘤大小，并使用以下公式以mm³表达该体积：V＝0.5a×b²，其中a和b分别是肿瘤的长径和短径。

该实验的结果显示在图4中。单独用蒂柏奥1143预治疗(即随后施用对照抗体)具有些许(modest)抗癌作用(第2组)。在没有蒂柏奥1143预治疗的使用PD-L1抗体的治疗基本上无法延迟肿瘤的生长(第3组)。使用蒂柏奥1143预治疗、随后使用PD-L1抗体治疗的联合具有深远的抗癌作用(第4组)。在治疗期期间继续蒂柏奥1143似乎提供了小的额外益处(第5组)。

表1：实验设计

p.o.：口服；i.p.：腹腔内；QD：每天；BIW：每周两次

这些动物研究提供了使用IAP拮抗剂预治疗增强对使用抗PD-1分子后续治疗的抗肿瘤应答可能性和/或强度的有效性的直接证据。

实施例3：IAP抑制剂比瑞那帕和LCL161预治疗增强MC38模型中抗PD-L1的功效

72只成年雌性C57BL/6J小鼠(从上海灵昌生物技术有限公司获得)在右下侧腹处皮下接种了0.1ml PBS中的同基因结肠癌细胞系MC-381×10⁶个细胞。使用卡尺以二维方式每周三次测量肿瘤体积，并使用以下公式以mm³表示该体积：V＝(L×W×W)/2，其中V是肿瘤体积，L是肿瘤长度(最长的肿瘤尺寸)，W是肿瘤宽度(垂直于L的最长肿瘤尺寸)。基于“匹配分布”随机方法(StudyDirectorTM软件，版本3.1.399.19)，将所有动物随机分配到9个不同的研究组中，平均肿瘤大小为52mm³，并开始治疗(表示为第1天)。在层流柜(Laminar FlowCabinet)中进行给药以及肿瘤和体重测量。

在第1天，如表2所示的双周方案中，部分动物接受了由剂量为30mg/kg的腹膜内SMAC模拟物比瑞那帕组成的1周预治疗或其媒介物。如表2所示的双周方案中，其他部分的动物接受了由剂量为75mg/kg的口服SMAC模拟物LCL161组成的1周预治疗、或其媒介物。

然后，在第8天，直至研究结束，将媒介物或SMAC模拟物预治疗的动物用双周腹腔内10mg/kg的对照抗体rIgG2b(克隆：LTF-2，BioXcell)或双周腹腔内10mg/kg的抗PD-L1抗体(小鼠替代抗体，抗小鼠PD-L1，克隆：10F.9G2，BioXcell)进行进一步治疗。在抗PD-L1治疗期内，直至研究结束，一组接受了1周比瑞那帕预治疗的动物和一组接受了1周LCL161预治疗的动物各自继续各自的SMAC模拟物。

比瑞那帕的实验结果如图5所示，LCL161的实验结果如图6所示。

单独用比瑞那帕预治疗(即随后施用对照抗体)具有些许抗癌作用(第2组)。在没有比瑞那帕预治疗的情况下，用抗PD-L1抗体治疗基本上无法延缓肿瘤生长(第3组)。用比瑞那帕预治疗、随后用PD-L1抗体治疗的联合具有显著的抗癌作用(第4组)。在治疗期期间继续比瑞那帕似乎提供了小的额外益处(第5组)。

单独用LCL161预治疗(即随后施用对照抗体)具有些许抗癌作用(第7组)。用LCL161预治疗、随后用抗PD-L1抗体治疗的联合似乎为单独用LCL161预治疗提供了小的额外益处(第8组)，而在治疗期期间继续LCL161可提供显著的额外益处(第9组)。

这些动物研究提供了用IAP拮抗剂预治疗增强了对使用抗PD-1分子后续治疗的抗肿瘤应答可能性和/或强度的有效性的直接证据。

表2：实验设计

p.o.：口服；i.p.：腹腔内；QD：每天；BIW：每周两次；wks：周。

实施例4：3.蒂柏奥1143诱导增强CT26模型中抗PD-1的功效

五组(n＝8)成年雌性BALB/c小鼠(从上海灵昌生物技术有限公司获得)在右下侧腹接种同基因结肠癌细胞系CT260.5×10⁶个细胞。当平均肿瘤大小达到约50mm³(第1天)时，如表3a所示，动物接受由100mg/kg剂量的口服SMAC模拟物蒂柏奥1143(德彪公司)组成的预治疗、或媒介物。7天内(第1-7天)，每天重复给药。如表3b所示，在后续一天(第8天)，直至研究结束，每天给予媒介物治疗组和蒂柏奥1143预治疗组的动物口服的媒介物。两组的另一集合(媒介物预治疗动物和蒂柏奥1143预治疗动物)每两周腹腔内接受10mg/kg抗PD-1抗体(小鼠替代抗体，抗小鼠PD-1，克隆：RMP1-14，BioXcell)。最后一组蒂柏奥1143预治疗动物接受抗PD-1抗体，以及继续每天使用蒂柏奥1143。每周三次评估肿瘤体积和体重。使用卡尺以二维方式测量肿瘤大小，并使用以下公式以mm³表达该体积：V＝0.5a×b²，其中a和b分别是肿瘤的长径和短径。

该实验的结果显示在图7中。在没有蒂柏奥1143预治疗的情况下，用抗PD-1抗体治疗基本上无法延缓肿瘤生长(第2组)。单独用蒂柏奥1143预治疗(即随后施用口服媒介物)具有些许抗癌作用(第3组)。用蒂柏奥1143预治疗、随后用抗PD-1抗体治疗的联合似乎为单独用蒂柏奥1143预治疗提供了小的额外益处(第4组)。在治疗期间继续蒂柏奥1143可提供显著的额外益处(第5组)。

这些动物研究提供了用IAP拮抗剂预治疗增强对使用抗PD-1分子后续治疗的抗肿瘤应答可能性和/或强度的有效性的直接证据。

这些动物研究提供了使用任何IAP拮抗剂预治疗增强了对使用任何ICI分子、尤其是抗PD-1分子或抗PD-L1分子后续治疗的抗肿瘤应答可能性和/或强度的有效性的直接证据。

表3a.磁性BALB/c小鼠的皮下CT26结肠癌同基因模型的预治疗计划

p.o.：口服；i.p.：腹腔内；QD：每天；BIW：每周两次；wks：周。

表3b.雌性BALB/c小鼠的皮下CT26结肠癌同基因模型的继续治疗计划

p.o.：口服；i.p.：腹腔内；QD：每天；BIW：每周两次；wks：周。

范围和等效

除非本文中另外指出，否则本文中对数值范围的叙述仅旨在用作分别指代落入该范围内的各单独值的简写方法，并且各单独值被并入到本说明书中，就如同其在本文中被单独叙述一样。除非另有说明，否则本文中提供的所有精确值都代表相应的近似值(例如，关于特定因子或测量提供的所有精确示例性值可以被认为还提供了相应的近似测量，在适当情况下用“约”修饰)。

除非另外指出，否则本文中提供的任何和所有实施例或示例性语言(例如，“诸如”)的使用仅旨在更好地阐明本发明，并且不构成关于本发明范围的限制。

本文中对专利文件的引用和合并只是为了方便起见，并不反映对此类专利文件的有效性、可专利性和/或可执行性的任何看法。除非上下文另有说明或与上下文明显矛盾，否则使用诸如涉及一个或多个元素的术语在本文中描述的对本发明任何方面或实施方案，旨在为本发明的相似方面或实施方案提供支持，本发明的相似方面或实施方案“由……组成”、“基本上由……组成”或“基本包括”该特定一个或多个元素(例如，除非上下文另有说明或与上下文明显矛盾，否则被描述为包括特定元素的组合物应理解为也描述了由该元素组成的组合物)。

在适用法律允许的最大范围内，本发明包括本文中呈现的方面或权利要求中叙述的主题的所有修改和等同物。

在本说明书中引用的所有出版物和专利文件都通过引用以其整体并入本文，就好像各单独出版物或专利文件都被具体地和单独地指出通过引用并入。

Claims (25)

1.一种凋亡蛋白抑制剂(IAP)拮抗剂，其在治疗人类受试者中的癌症的方法中使用，所述方法包括：

(i)在诱导期期间施用所述IAP拮抗剂，其中所述诱导期的持续时间选自在第一次施用抗PD-1分子之前的1至48天的范围；然后

(ii)在诱导期结束后施用抗PD-1分子。

2.根据权利要求1所述的所使用的IAP拮抗剂，其中，在1至28天的诱导期期间，向所述人类受试者施用所述IAP拮抗剂，然后施用所述抗PD-1分子。

3.根据权利要求1或2所述的所使用的IAP拮抗剂，其中，在5至28天的诱导期期间，向所述人类受试者施用所述IAP拮抗剂，然后施用所述抗PD-1分子。

4.根据前述权利要求中任一项所述的所使用的IAP拮抗剂，其中，在所述诱导期期间的一天或多天，不施用所述IAP拮抗剂。

5.根据前述权利要求中任一项所述的所使用的IAP拮抗剂，其中，在已经开始施用所述抗PD-1分子之后，继续施用所述IAP拮抗剂；或者

与所述抗PD-1分子同时施用另一种IAP拮抗剂。

6.根据前述权利要求中任一项所述的所使用的IAP拮抗剂，其中，所述癌症是已知在10％以上的治疗患者中对利用抗PD-1分子的治疗有应答的癌症。

7.根据权利要求1至5中任一项所述的所使用的IAP拮抗剂，其中，所述癌症是头颈癌、黑素瘤、尿路上皮癌、非小细胞肺癌、不可知原发位点的微卫星不稳定性(MSI)高肿瘤、或肾癌。

8.根据权利要求1至5中任一项所述的所使用的IAP拮抗剂，其中，所述癌症是具有对用抗PD-1分子的治疗的应答率为10％以下、优选5％以下的癌症。

9.根据权利要求1至5中任一项所述的所使用的IAP拮抗剂，其中，所述癌症是胰腺癌、结直肠癌、多发性骨髓瘤、小细胞肺癌、肝癌或卵巢癌。

10.根据前述权利要求中任一项所述的所使用的IAP拮抗剂，其中，所述癌症已经被评估为弱免疫原性。

11.根据权利要求10所述的所使用的IAP拮抗剂，其中，所述评估由以下组成：在所述诱导期之前获取的患者生物样品中免疫原性标志物的分析；和所述标志物的存在、表达水平或衍生评分未达到预定阈值的发现。

12.根据权利要求11所述的所使用的IAP拮抗剂，其中，所述标志物是在癌细胞和/或免疫细胞上表达的PD-L1。

13.根据权利要求11所述的所使用的IAP拮抗剂，其中，所述标志物是肿瘤浸润淋巴细胞、优选CD8+细胞，或肿瘤突变负荷。

14.根据前述权利要求中任一项所述的所使用的IAP拮抗剂，其中，继续在诱导期期间施用所述IAP拮抗剂，直到所述癌症被评估为具有高免疫原性。

15.根据权利要求14所述的所使用的IAP拮抗剂，其中，所述评估由以下组成：在所述诱导期之后获取的患者生物样品中免疫原性标志物的分析；和所述标志物的存在、表达水平或衍生评分超过预定阈值的发现。

16.根据权利要求15所述的所使用的IAP拮抗剂，其中，所述标志物是在癌细胞和/或免疫细胞上表达的PD-L1。

17.根据权利要求15所述的所使用的IAP拮抗剂，其中，所述标志物是肿瘤浸润淋巴细胞、优选CD8+细胞，或肿瘤突变负荷。

18.根据权利要求11-13和15至17中任一项所述的所使用的IAP拮抗剂，其中，所述生物样品是肿瘤或液体活检。

19.根据前述权利要求中任一项所述的所使用的IAP拮抗剂，其中所述抗PD-1分子是纳武单抗、派姆单抗、阿特朱单抗、度伐单抗、阿维鲁单抗、PDR001、IBI-308、西米普利单抗、卡瑞利珠单抗、BGB-A317、BCD-100、JS-001、JNJ-3283、MEDI0680、AGEN-2034、TSR-042、Sym-021、PF-06801591、MGD-013、MGA-012、LZM-009、GLS-010、热那利木单抗、BI 754091、AK-104、CX-072、WBP3155、SHR-1316、PD-L1抑制剂米拉分子、BMS-936559、M-7824、LY-3300054、KN-035、FAZ-053、CK-301、或CA-170。

20.根据权利要求19所述的所使用的IAP拮抗剂，其中所述抗PD-1分子是纳武单抗、派姆单抗、阿特朱单抗、度伐单抗、阿维鲁单抗、PDR001、或BI 754091。

21.根据权利要求1-19中任一项所述的所使用的IAP拮抗剂，其中，所述抗PD-1分子是针对PD-1或PD-L1的抗体。

22.根据前述权利要求中任一项所述的所使用的IAP拮抗剂，其中，所述抗PD-1分子的施用与一种或多种其他癌症疗法联合，所述其他癌症疗法包括另一种免疫疗法、放射疗法、化学疗法、放化疗、溶瘤病毒、抗血管生成疗法和/或靶向癌症疗法。

23.根据前述权利要求中任一项所述的所使用的IAP拮抗剂，其中所述IAP拮抗剂是第二线粒体衍生的半胱天冬酶激活剂(SMAC)模拟物。

24.根据前述权利要求中任一项所述的所使用的IAP拮抗剂，其中，在所述诱导期期间施用的所述IAP拮抗剂是蒂柏奥1143、GDC-917/CUDC-427、LCL161、GDC-0152、TL-32711/比瑞那帕、HGS-1029/AEG-40826、BI 891065、ASTX-660或APG-1387；优选地，所述IAP拮抗剂为蒂柏奥1143、LCL161或比瑞那帕。

25.根据权利要求24所述的IAP拮抗剂，其中，所述IAP拮抗剂是蒂柏奥1143。

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