CN111534526A

CN111534526A - 一种DSF降解酶编码基因fadY及其应用

Info

Publication number: CN111534526A
Application number: CN202010258857.9A
Authority: CN
Inventors: 陈少华; 叶田; 周田; 许旭丹; 范兴辉; 张炼辉
Original assignee: South China Agricultural University
Current assignee: South China Agricultural University
Priority date: 2020-04-03
Filing date: 2020-04-03
Publication date: 2020-08-14
Anticipated expiration: 2040-04-03
Also published as: CN111534526B; WO2021196615A1

Abstract

本发明公开了一种DSF降解酶编码基因fadY及其应用。本发明从不动杆菌(Acinetobacter lactucae)菌株QL‑1中克隆得到了一种新的负责脂肪酸降解的基因‑DSF降解酶编码基因fadY，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。该编码基因fadY在寄主植物中表达后，能够显著提高寄主植物对QS信号分子DSF介导的致病菌的抗病性，能够为QS信号分子DSF的降解提供有效的生物技术手段；因此，所述编码基因fadY、编码蛋白、重组质粒或重组微生物在降解QS信号分子DSF、制备降解QS信号分子DSF的产品、防治QS信号分子DSF介导的致病菌或制备QS信号分子DSF介导的致病菌的防治产品中均具有广泛的应用前景。

Description

一种DSF降解酶编码基因fadY及其应用

技术领域

本发明属于生物技术及酶基因工程技术领域。更具体地，涉及一种DSF降解酶编码基因fadY及其应用。

背景技术

野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xanthomonas campestris pv.campestris，简写Xcc)通过一种可扩散的信号分子(Diffusible Signal Factor，DSF)的积累来表达致病性基因，可感染所有十字花科蔬菜引起黑腐病，被认为是十字花科植物中危害最大的一种植物病害。DSF是一种脂肪酸分子，其化学结构为顺11-甲基-2-十二烯酸。DSF不仅存在于所有的黄单胞菌(Xanthomonas sp.)中，还广泛存在于伯克霍尔德菌(Burkholderia sp.)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)和各种海洋细菌中。目前，对于由Xcc引起的黑腐病的防治措施主要为：使用化学农药和抗生素，这些措施不仅引发了环境污染、生态平衡破坏和食品安全等一系列的严重问题，而且也会导致越来越多的致病菌产生耐药性，甚至出现多重耐药性。因此，研究开发一种无污染、无残留、不会使致病菌产生耐药性的有效防控由Xcc引起的黑腐病的策略具有重要意义。

群体感应(Quorum Sensing，QS)是近年来微生物学领域的重大发现之一，其核心内容是以单细胞形式存在的微生物个体，通过产生和感应小分子化学信号进行广泛的信息交流，从而以群体形式对寄主和外部环境做出协同反应，包括建立侵染和产生抗生素等。目前，研究较多的QS信号包括N-酰基高丝氨酸内酯(N-Acyl Homoserine Lactone，AHL)和DSF。QS系统的发现为明确病原菌致病调控机理和发展新的病害防控策略提供了一个全新的切入点-群体淬灭(Quorum Quenching，QQ)，即通过淬灭病原菌的信号分子以防止信号分子有效积累，当信号分子浓度降低后就不能激活病原致病基因的表达，从而破坏细胞间的交流，破坏其群体感应系统。群体淬灭策略作用于致病菌产生的信号分子，不作用于致病菌本身，因而不会使致病菌产生抗药性，且这种方式对外界没有副作用，目前其应用研究已经涉及到各个领域如医疗、水产养殖、作物生产和生物淤积，具有操作简便、经济实用、环境友好、效率高且周期短等优点。因此，群体淬灭策略作为一种新型绿色安全病害防控策略，拥有广阔的应用前景，是国际上微生物病害防治技术研究的前沿和热点。

群体感应淬灭酶降解微生物信号分子，是目前毒性最小、最为有效的群体感应淬灭途径，应用前景广阔。目前，群体感应淬灭酶的应用研究集中在以下四个方面：(1)将群体感应淬灭酶转入植物，获得转基因植物；例如，Dong等(2000)将芽孢杆菌(Bacillussp.240B1)AiiA内酯酶基因转入马铃薯和烟草，能够控制感染、减轻植物软腐病的症状，首次证明了转基因植物通过其表达的淬灭酶降解QS信号分子AHL，阻断植物病原细胞间的通信来防治病害(AiiA,an enzyme that inactivates the acylhomoserine lactonequorum-sensing signal and attenuates the virulence of Erwinia carotovora)。Ban等(2009)后续将AiiA内酯酶基因转入魔芋，极大程度减弱了马铃薯黑胫病病原菌(Pectobacterium carotovorum)的致病性(Transgenic Amorphophallus konjacexpressing synthesized acyl-homoserine lactonase(aiiA)gene exhibit enhancedresistance to soft rot disease)。(2)将群体感应淬灭酶基因转入微生物，获得转基因淬灭菌；例如，Cho等(2007)将AiiA内酯酶基因转入伯克霍尔德菌(Burkholderiasp.KJ006)降解QS信号分子AHL，防治水稻细菌性谷枯病菌(Burkholderia glumae)，减轻了稻烂秧病(Interference of quorum sensing and virulence of the rice pathogenBurkholderia glumae by an engineered endophytic bacterium)。(3)从自然界中筛选群体淬灭菌，作为生物降解剂；例如，Nhan等(2010)将来源于鲈鱼胃肠道的AHL降解菌培养物添加到巨型淡水虾(Macrobrachium rosenbergii)幼虫的饲养池中，或通过将其添加到虾幼体的食物中，增加了虾幼体抗哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的能力，提高了存活率(Quorum quenching bacteria protect Macrobrachium rosenbergii larvae fromVibrio harveyi infection)。(4)从自然界中筛选淬灭酶，纯化后直接用于防治人类和动物病原体；例如，Chen等(2010)的研究表明：纯化后的AHL降解酶(如酰基转移酶AhlM和PvdQ)能够减少铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)毒力因子的表达(High yieldexpression of an AHL-lactonase from Bacillus sp.B546 in Pichia pastoris andits application to reduce Aeromonas hydrophila mortality in aquaculture)。Cao等(2014)将AiiA内酯酶与病原菌嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)同时注射到鲤鱼或斑马鱼体内，也能够降低其感染(Effect of dietary N-acyl homoserin lactonase onthe immune response and the gut microbiota of zebrafish,Danio rerio,infectedwith Aeromonas hydrophila)。

可以看出，以上均是关于降解QS信号分子AHL的研究，而对于降解QS信号分子DSF的研究甚少而且存在较多问题。现有专利(申请号为201910731498.1)公开了DSF群体感应信号降解基因dig1、dig2、dig3和dig4，这些降解基因在降解DSF家族信号中能够广泛应用。但是，该专利中采用Tn5方法筛选菌株中可能的降解基因，耗时大、且很大可能有其他更有效的降解基因没有找到；筛选到的降解基因只是部分影响到菌株的降解能力，并不是十分有效的降解基因；且通过分子生物学手段在致病菌体内表达降解酶之后，接种到植物上仅仅只是部分减轻了发病症状。因此，亟需研发一种快速、能够有效降解QS信号分子DSF，以显著减轻QS信号分子DSF介导的致病菌对寄主植物的危害的方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有降解QS信号分子DSF的方法的缺陷和不足，提供一种DSF降解酶编码基因fadY及其应用。本发明采用全基因组测序方法，通过对不动杆菌(Acinetobacter lactucae)菌株QL-1基因组特征分析及功能基因注释的结果，寻找菌株QL-1中可能的降解基因；再通过构建可能的降解酶基因突变体进行验证，找到高效的降解酶。

本发明的目的是提供一种DSF降解酶编码基因fadY。

本发明另一目的是提供所述编码基因fadY的编码蛋白。

本发明又一目的是提供一种重组质粒。

本发明又一目的是提供一种重组微生物。

本发明再一目的是提供所述的编码基因fadY、所述的编码蛋白、所述的重组质粒或所述的重组微生物的应用。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明提供了一种DSF降解酶编码基因fadY，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述编码基因fadY的编码蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供了一种重组质粒，包含所述的编码基因fadY或其片段，或能够表达出所述的编码蛋白。

优选地，所述重组质粒为重组质粒pGEX-fadY。

本发明还提供了一种重组微生物，能够表达所述的编码基因fadY或其片段，或能够表达出所述的编码蛋白。

优选地，所述重组微生物为重组菌Escherichia coil BL21/pGEX-fadY。

本发明从菌株QL-1中克隆得到了一种新的负责脂肪酸降解的基因-DSF降解酶编码基因fadY，该基因的编码蛋白为DSF降解酶；fadY基因在转入寄主植物后，得到的转基因植物能够抵抗由QS信号分子DSF介导的致病菌(如野油菜黄单胞菌Xcc)，降低其对寄主植物的致病力和危害，进行有效的生物防治。

因此，以下应用均应在本发明的保护范围之内：

所述的编码基因fadY、所述的编码蛋白、所述的重组质粒或所述的重组微生物在降解QS信号分子DSF中的应用、在制备降解QS信号分子DSF的产品中的应用、在防治QS信号分子DSF介导的致病菌中的应用或在制备QS信号分子DSF介导的致病菌的防治产品中的应用。

优选地，所述致病菌为野油菜黄单胞菌Xcc。

本发明具有以下有益效果：

本发明提供了一种DSF降解酶编码基因fadY及其应用。本发明从不动杆菌(Acinetobacter lactucae)菌株QL-1中克隆得到了一种新的负责脂肪酸降解的基因-DSF降解酶编码基因fadY，该编码基因fadY在寄主植物中表达后，能够显著提高寄主植物对QS信号分子DSF介导的致病菌的抗病性。

本发明体现了将DSF降解酶作为植物病害控制靶点的潜力，能够为QS信号分子DSF的降解提供有效的生物技术手段，对于QS信号分子DSF介导的致病菌的生物防治具有重要意义；因此，本发明提供的编码基因fadY、编码蛋白、重组质粒或重组微生物在降解QS信号分子DSF、制备降解QS信号分子DSF的产品、防治QS信号分子DSF介导的致病菌或制备QS信号分子DSF介导的致病菌的防治产品中均具有广泛的应用前景。

附图说明

图1是空白对照组CK、野生型QL-1组、突变体ΔfadY组、互补ΔfadY(fadY)组的DSF降解情况结果。

图2是DSF降解酶FadY的表达与纯化结果；其中，M代表Marker，1代表未加入IPTG诱导剂得到的重组蛋白FadY，2代表未加入IPTG诱导剂得到的沉淀，3代表未加入IPTG诱导剂得到的上清，4代表加入IPTG诱导剂得到的重组蛋白FadY，5代表加入IPTG诱导剂得到的沉淀，6代表加入IPTG诱导剂得到的上清。

图3是DSF降解酶FadY对萝卜黑腐病的生防效果测定结果；其中，(A)图为萝卜用野油菜黄单胞菌Xcc接种；(B)图为萝卜用转入了fadY基因的野油菜黄单胞菌Xcc接种；(C)图为萝卜用无菌水接种。

图4是DSF降解酶FadY对白菜黑腐病的生防效果测定结果其中，(A)图为白菜用野油菜黄单胞菌Xcc接种；(B)图为白菜用转入了fadY基因的野油菜黄单胞菌Xcc接种；(C)图为白菜用无菌水接种。

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

以下实施例中用到的不动杆菌(Acinetobacter lactucae)菌株QL-1于2017年9月11日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号为：CCTCCM2017487，保藏地址是中国武汉，武汉大学。该菌株的分类命名为不动杆菌(Acinetobacter lactucae)，并于2017年11月13日申请了中国发明专利，专利申请号为201711116059.7。

实施例1不动杆菌(Acinetobacter lactucae)菌株QL-1的全基因组测序分析

近年来，高通量测序技术迅速发展，生物信息学逐渐成为各领域辅助研究的重要工具，运用目前已经测序菌株的基因组信息和一些开放的数据库平台，进行功能基因注释和定位，寻找其可能参与底物降解代谢的基因，这是获得具有相关功能基因的一个有效策略。本实施例采用全基因组测序方法，通过对菌株QL-1基因组特征分析及功能基因注释的结果，寻找菌株QL-1中可能的降解基因。具体实验方法和结果如下：

(1)菌株QL-1的基因组特征

为了了解菌株QL-1的基因功能和结构，对菌株QL-1进行了全基因组测序。根据全基因组测序结果可以看出，菌株QL-1的总基因组大小为3973648bp，N50为9374bp，GC含量为40.04％，基因平均长度为940bp，有3707个编码基因，其总长度为3485109bp，占总基因组长度的87.71％。

(2)KEGG代谢通路分类

KEGG是系统分析基因产物和化合物在细胞中的代谢途径以及这些基因产物的功能的数据库，它整合了基因组、化学分子和生化系统等方面的数据，包括代谢通路(KEGGPATHWAY)、药物(KEGG DRUG)、疾病(KEGG DISEASE)、功能模型(KEGG MODULE)、基因序列(KEGG GENES)及基因组(KEGG GENOME)等。KO(KEGG ORTHOLOG)系统将各个KEGG注释系统联系在一起，KEGG已建立了一套完整KO注释的系统，可完成新测序物种的基因组或转录组的功能注释。

用KEGG对以上菌株QL-1的全基因组测序结果进行分析，根据分析结果可以看出，在近217种代谢通路中，有26个基因参与了脂肪酸的降解(ko00071)，而QS信号分子DSF是一种脂肪酸，证实了菌株QL-1具有潜在降解DSF的酶。

实施例2 DSF降解酶编码基因fadY的获得

本实施例根据实施例1菌株QL-1基因组特征分析及功能基因注释的结果，构建可能的降解酶基因突变体进行验证，以找到高效的降解酶。具体实验方法和结果如下：

(1)实验方法

据报道，野油菜黄单胞菌Xcc中位于DSF合成基因rpfF上游的rpfB基因被鉴定为脂酰辅酶A连接酶编码基因，参与DSF家族信号分子的降解，调控QS系统表达。

通过实施例1菌株QL-1的全基因组测序分析的结果，在菌株QL-1的全基因组中发现了与脂肪酸降解相关的基因，将这些基因与rpfB基因进行BLAST比对，其中，与脂肪酸降解相关的基因fadY与rpfB基因的序列同源性为52.25％。

然后，以野生型QL-1为亲本，构建野生型QL-1缺失fadY突变体，以及互补ΔfadY(fadY)用于进行互补实验进一步验证fadY是否影响DSF的降解，实验分为4组：空白对照组CK、野生型QL-1组、突变体ΔfadY组、互补ΔfadY(fadY)组；在MSM基础培养基中，加入5mM的DSF为唯一碳源，培养48h后，使用气质联用法分别测定空白对照组CK、野生型QL-1组、突变体ΔfadY组、互补ΔfadY(fadY)组的DSF降解情况。

(2)实验结果

DSF降解酶编码基因fadY的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

空白对照组CK、野生型QL-1组、突变体ΔfadY组、互补ΔfadY(fadY)组的DSF降解情况结果如图1所示，可以看出，野生型QL-1组48h后完全降解DSF，突变体ΔfadY组与空白对照组CK相同，不能在以DSF为唯一碳源的MSM培养基内生长，也完全不能降解DSF，但其互补ΔfadY(fadY)组在互补回基因fadY后恢复了表型，能够完全降解DSF；结果表明：基因fadY对DSF的降解有重要的影响。

实施例3 DSF降解酶FadY的优化、表达与纯化

(1)实验方法

根据实施例1不动杆菌(Acinetobacter lactucae)菌株QL-1的全基因组测序分析的结果，基因fadY被推测编码一个长链脂酰辅酶A连接酶，编码559个氨基酸(aa)蛋白，预测分子量为61.53kDa，等电点为8.03。

为了得到更高产量和更纯的降解酶，对基因fadY进行了密码子优化。通过PCR扩增密码子优化后的编码DSF降解酶FadY的DNA片段，并亚克隆到表达载体pGEX-6p-1上，得到重组质粒pGEX-fadY，将重组质粒转入大肠杆菌BL21中，得到重组菌E.coil BL21/pGEX-fadY。菌体接种于LB培养基中37℃培养，加入100mg/mL的氨苄西林，当OD₆₀₀达到约0.6时，加入IPTG诱导剂(1mM)，并设置未加入IPTG诱导剂的对照。18℃培养24h后，离心并倒掉上清，用磷酸盐缓冲液(PBS)重悬沉淀。超声破碎后，用0.45μm微孔过滤器(微孔)过滤，将滤液用蛋白纯化仪纯化，将得到的重组蛋白FadY、沉淀和上清分别进行SDS-PAGE电泳，分析重组蛋白FadY(DSF降解酶FadY)的大小及纯度。

(2)实验结果

编码基因fadY的编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

DSF降解酶FadY的表达与纯化结果如图2所示，可以看出，在加入IPTG诱导剂时，得到的重组蛋白FadY、沉淀和上清均能够扩增出单一、清晰、纯度高、大小为87kDa的重组蛋白fadY条带。

实施例4 DSF降解酶FadY对萝卜和白菜黑腐病的生防效果测定

(1)实验方法

将健康萝卜种子和白菜种子在大棚中的健康土壤里生长30天，并进行驯化，然后用浓度为6×10⁸CFU/mL的野油菜黄单胞菌Xcc的菌液分别处理萝卜和白菜叶片。实验包括3个处理：萝卜和白菜分别用无菌水接种作为对照、萝卜和白菜分别用野油菜黄单胞菌Xcc接种、萝卜和白菜分别用转入了fadY基因的野油菜黄单胞菌Xcc接种。所有处理均为多次重复，实验重复三次。萝卜和白菜分别生长在一个有透明屏障挡雨的温室里，每天记录症状，并在接种30天后分别收获萝卜和白菜并拍照。实验期间，昼夜温度、光周期和湿度与周围自然环境相同。

(2)实验结果

DSF降解酶FadY对萝卜黑腐病的生防效果测定结果如图3所示，可以看出，单独接种野油菜黄单胞菌Xcc的萝卜的叶片发病，叶缘多处产生黄色斑，后变"V"字形向内发展，萝卜黑腐病症状明显；而与单独接种野油菜黄单胞菌Xcc相比，转入了fadY基因的野油菜黄单胞菌Xcc的萝卜未能引起或只有轻微黑腐病症状，萝卜黑腐病病害程度明显减轻。

DSF降解酶FadY对白菜黑腐病的生防效果测定结果如图4所示，可以看出，单独接种野油菜黄单胞菌Xcc的白菜的叶片发病，叶缘多处产生黄色斑，后变"V"字形向内发展，白菜黑腐病症状明显；而与单独接种野油菜黄单胞菌Xcc相比，转入了fadY基因的野油菜黄单胞菌Xcc的白菜未能引起或只有轻微黑腐病症状，白菜黑腐病病害程度明显减轻。

以上结果表明：DSF降解酶FadY对野油菜黄单胞菌Xcc引起的黑腐病具有显著的生防效果。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 华南农业大学

<120> 一种DSF降解酶编码基因fadY及其应用

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1692

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

ggatccatgg agaagatctg gttcgccgaa taccagaaaa ccggcatccc agaaaccgtt 60

gccctcccag cggaaaacac gagtctggtt gatatcttcg aaagcaactt ccaaaagttc 120

ggcagccgcg acgccttcat cttcatggac aaggccatga gctttaacga actggagctc 180

gccagccgca agttcgcgac ctatctgcag aatctgggtc tggcgaaagg cacgcgcgtt 240

gccgtgatga tgccaaacgt gctgcagtat ccagttgttg ccctcgccgt tctgcgtgcc 300

ggtctggttc tcgtgaacgt gaatccactg tacaccgccc gcgagctgga acatcagctg 360

aacgatagcg gcgcggaggt gctggtgatc atcgagaact tcgccagcgt gtaccagagc 420

attctgggca aaacgccagt taaacacgtg gtggtggcga ccgtgggtga tatgctgggt 480

acgctgaaag gcaccctcgt gaactttgtg ctgcgcaaag tgcgcaaaca gatcccggcg 540

tggaacattc cgggctacgt gaaattcaac acggcgctga acaaagagag cccaagcaat 600

tataagcgcc cgagtctgac cctcagcgat accgcggttc tgcagtacac cggtggtacg 660

accggcgtta gcaagggcgc cgaactgacc catcgcaatc tggtggccaa tctgctgcag 720

tgcgatggta tcttccagag caagttcggt gcgaacgatg gtgcgaaagg cgaccgcatc 780

gtttgtgcgc tgccgctgta ccatatcttc gcgttcatgg tttgcgcgat gtacggcatg 840

tacaagggcc aagccaacat tctgattccg aacccgcgtg atctgccggc ggtgattaac 900

gagctgcgca agtaccaacc gagcttcttt ccggccgtga acaccctctt taacgcgctc 960

gtgaacaacg aggagttcaa gcaactggac cacagcaatc tgaaaatggc gatgggcggt 1020

ggcatggccg tgctgccgag taccgccgaa gcgtggaaaa agatcaccgg caccaccatc 1080

atcgaaggct acggtctgag tgaaaccagt ccggttgcga cggccaatcc accagcgagc 1140

accgagttta gcggcacgat tggtatccca ctgccactga ccgaagtggc gatcctcgat 1200

gatgatggta acgaggttgc gctgggtgaa caaggcgaga tcagcatccg cggcccacaa 1260

gttatgaagg gctactggaa tcgcccggat gagaccgcca aagtgatgac ggccgatggc 1320

ttcttccgta ccggcgatat cggtgttatg gatagccgcg gctacgtgaa gatcgtggac 1380

cgcaagaaag acatgatcct cgtgagcggc ttcaatgtgt acccgagtga gatcgaggag 1440

atcatcgcga agcacccgaa agttctggaa gtggcggcca ttggcgtgcc agacgagaag 1500

agcggcgaag ttccgaaact gttcattgtg aaaaaagacc agagtctgac caccgaagag 1560

gtgctgaact tcgccaagga gaatctgacc ggctacaaac gcccgcgcta tgtggagttt 1620

atggacgagc tgccgaaaag caacgtgggt aagattctgc gcaaagatct ccgcaagcca 1680

acctaagaat tc 1692

<210> 2

<211> 559

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Met Glu Lys Ile Trp Phe Ala Glu Tyr Gln Lys Thr Gly Ile Pro Glu

1 5 10 15

Thr Val Ala Leu Pro Ala Glu Asn Thr Ser Leu Val Asp Ile Phe Glu

20 25 30

Ser Asn Phe Gln Lys Phe Gly Ser Arg Asp Ala Phe Ile Phe Met Asp

35 40 45

Lys Ala Met Ser Phe Asn Glu Leu Glu Leu Ala Ser Arg Lys Phe Ala

50 55 60

Thr Tyr Leu Gln Asn Leu Gly Leu Ala Lys Gly Thr Arg Val Ala Val

65 70 75 80

Met Met Pro Asn Val Leu Gln Tyr Pro Val Val Ala Leu Ala Val Leu

85 90 95

Arg Ala Gly Leu Val Leu Val Asn Val Asn Pro Leu Tyr Thr Ala Arg

100 105 110

Glu Leu Glu His Gln Leu Asn Asp Ser Gly Ala Glu Val Leu Val Ile

115 120 125

Ile Glu Asn Phe Ala Ser Val Tyr Gln Ser Ile Leu Gly Lys Thr Pro

130 135 140

Val Lys His Val Val Val Ala Thr Val Gly Asp Met Leu Gly Thr Leu

145 150 155 160

Lys Gly Thr Leu Val Asn Phe Val Leu Arg Lys Val Arg Lys Gln Ile

165 170 175

Pro Ala Trp Asn Ile Pro Gly Tyr Val Lys Phe Asn Thr Ala Leu Asn

180 185 190

Lys Glu Ser Pro Ser Asn Tyr Lys Arg Pro Ser Leu Thr Leu Ser Asp

195 200 205

Thr Ala Val Leu Gln Tyr Thr Gly Gly Thr Thr Gly Val Ser Lys Gly

210 215 220

Ala Glu Leu Thr His Arg Asn Leu Val Ala Asn Leu Leu Gln Cys Asp

225 230 235 240

Gly Ile Phe Gln Ser Lys Phe Gly Ala Asn Asp Gly Ala Lys Gly Asp

245 250 255

Arg Ile Val Cys Ala Leu Pro Leu Tyr His Ile Phe Ala Phe Met Val

260 265 270

Cys Ala Met Tyr Gly Met Tyr Lys Gly Gln Ala Asn Ile Leu Ile Pro

275 280 285

Asn Pro Arg Asp Leu Pro Ala Val Ile Asn Glu Leu Arg Lys Tyr Gln

290 295 300

Pro Ser Phe Phe Pro Ala Val Asn Thr Leu Phe Asn Ala Leu Val Asn

305 310 315 320

Asn Glu Glu Phe Lys Gln Leu Asp His Ser Asn Leu Lys Met Ala Met

325 330 335

Gly Gly Gly Met Ala Val Leu Pro Ser Thr Ala Glu Ala Trp Lys Lys

340 345 350

Ile Thr Gly Thr Thr Ile Ile Glu Gly Tyr Gly Leu Ser Glu Thr Ser

355 360 365

Pro Val Ala Thr Ala Asn Pro Pro Ala Ser Thr Glu Phe Ser Gly Thr

370 375 380

Ile Gly Ile Pro Leu Pro Leu Thr Glu Val Ala Ile Leu Asp Asp Asp

385 390 395 400

Gly Asn Glu Val Ala Leu Gly Glu Gln Gly Glu Ile Ser Ile Arg Gly

405 410 415

Pro Gln Val Met Lys Gly Tyr Trp Asn Arg Pro Asp Glu Thr Ala Lys

420 425 430

Val Met Thr Ala Asp Gly Phe Phe Arg Thr Gly Asp Ile Gly Val Met

435 440 445

Asp Ser Arg Gly Tyr Val Lys Ile Val Asp Arg Lys Lys Asp Met Ile

450 455 460

Leu Val Ser Gly Phe Asn Val Tyr Pro Ser Glu Ile Glu Glu Ile Ile

465 470 475 480

Ala Lys His Pro Lys Val Leu Glu Val Ala Ala Ile Gly Val Pro Asp

485 490 495

Glu Lys Ser Gly Glu Val Pro Lys Leu Phe Ile Val Lys Lys Asp Gln

500 505 510

Ser Leu Thr Thr Glu Glu Val Leu Asn Phe Ala Lys Glu Asn Leu Thr

515 520 525

Gly Tyr Lys Arg Pro Arg Tyr Val Glu Phe Met Asp Glu Leu Pro Lys

530 535 540

Ser Asn Val Gly Lys Ile Leu Arg Lys Asp Leu Arg Lys Pro Thr

545 550 555

Claims

1.一种DSF降解酶编码基因fadY，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.权利要求1所述编码基因fadY的编码蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。

3.一种重组质粒，其特征在于，包含权利要求1所述的编码基因fadY或其片段。

4.一种重组质粒，其特征在于，能够表达出权利要求2所述的编码蛋白。

5.一种重组微生物，其特征在于，能够表达权利要求1所述的编码基因fadY或其片段。

6.一种重组微生物，其特征在于，能够表达出权利要求2所述的编码蛋白。

7.权利要求1所述的编码基因fadY、权利要求2所述的编码蛋白、权利要求3或4所述的重组质粒或权利要求5或6所述的重组微生物在降解QS信号分子DSF中的应用。

8.权利要求1所述的编码基因fadY、权利要求2所述的编码蛋白、权利要求3或4所述的重组质粒或权利要求5或6所述的重组微生物在制备降解QS信号分子DSF的产品中的应用。

9.权利要求1所述的编码基因fadY、权利要求2所述的编码蛋白、权利要求3或4所述的重组质粒或权利要求5或6所述的重组微生物在防治QS信号分子DSF介导的致病菌中的应用。

10.权利要求1所述的编码基因fadY、权利要求2所述的编码蛋白、权利要求3或4所述的重组质粒或权利要求5或6所述的重组微生物在制备QS信号分子DSF介导的致病菌的防治产品中的应用。