CN111534489A - 一种基于3d打印的t淋巴细胞扩增方法 - Google Patents

一种基于3d打印的t淋巴细胞扩增方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及T淋巴细胞扩增方法，尤其涉及一种基于3D打印的T淋巴细胞扩增方法。该方法包括提供功能化处理的生物墨水；所述功能化处理的生物墨水包括生物墨水本体，以及结合了IL‑2、CD3抗体和CD28抗体的微载体；将T淋巴细胞与所述功能化处理的生物墨水混合，进行3D打印；将3D打印所得含T淋巴细胞的3D结构进行培养。本发明方法可以解决传统的T淋巴细胞扩增方法细胞增殖空间受限及无法对细胞的增殖形成持续、可控的刺激的技术问题，从而实现快速扩增T淋巴细胞。

Description

一种基于3D打印的T淋巴细胞扩增方法
技术领域
本发明涉及T淋巴细胞扩增方法，尤其涉及一种基于3D打印的T淋巴细胞扩增方法。
背景技术
T淋巴细胞的体内活化和增殖，需要第一信号、第二信号、第三信号的共同参与，其中第一信号指的是T淋巴细胞表面受体(TCR)与靶细胞表面组织相容性抗原(MHC)结合引发的刺激信号，第二信号指的是共刺激分子(例如，CD28-B7分子对，B7表达于抗原递呈细胞(APC)表面，CD28表达于T淋巴细胞表面)结合引发的刺激信号，第三信号指的是参与此过程调节的细胞因子。
随着过继性T淋巴细胞免疫疗法(例如，经基因工程改造的CAR-T和TCR-T细胞疗法)在临床前和临床研究中不断创造巨大的成功案例，细胞免疫疗法也为肿瘤患者提供了更大范围的治疗选择，而这些疗法都依赖于对免疫细胞的离体大量扩增，以获取足够的治疗剂量，因此，对有效的、临床相关的T淋巴细胞活化和扩增方法的需求也在不断增长。
传统的体外T淋巴细胞活化和扩增方法，主要在二维(2D)平面进行，即T淋巴细胞自然沉降在培养瓶/板/袋底部；此外，用于刺激T淋巴细胞活化和增殖的CD3抗体、CD28抗体、细胞因子(IL-2)，直接加入到培养液中；其原理为：CD3与CD28抗体模拟体内抗原递呈细胞(APC)的作用，与T淋巴细胞表面的CD3、CD28分子结合，提供第一、第二信号，IL-2因子提供第三信号。其中，细胞的增殖空间取决于培养瓶/板/袋底部面积，当细胞增殖到一定密度(例如，≥2.5×106/mL)，细胞活力降低，增殖受到抑制，因此，每2～3天需进行一次密度调整，方可进行后续扩增培养。近年来，为了提升单位空间内T淋巴细胞的增殖能力，在培养系统的设计上进行了一些改进。例如，G-Rex悬浮细胞透气培养系统，通过增加培养液液面高度，底面透气膜设计，从而增加单位空间内的细胞养分，良好的对流环境，使得溶液中的溶质(例如，CD3和CD28抗体、IL-2)通过自然对流与细胞更充分地接触，氧气交换更充分，二氧化碳及时排出。
发明内容
本发明提供一种T淋巴细胞扩增方法，可以解决传统的T淋巴细胞扩增方法细胞增殖空间受限及无法对细胞的增殖形成持续、可控的刺激的技术问题，从而实现快速扩增T淋巴细胞。
一种基于3D打印的T淋巴细胞扩增方法，包括：
提供功能化处理的生物墨水；所述功能化处理的生物墨水包括生物墨水本体，以及结合了IL-2、CD3抗体和CD28抗体的微载体；
将T淋巴细胞与所述功能化处理的生物墨水混合，进行3D打印；及
将3D打印所得含T淋巴细胞的3D结构进行培养。
本发明中，所述生物墨水是指可用于3D打印的墨水。本发明可采用本领域常规生物墨水。
在本发明一些实施例中，所述生物墨水选自甲基丙烯酰化明胶(GelMA)、透明质酸(HA)、壳聚糖、琼脂糖、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇(PVA)或丝素蛋白。
本发明采用的功能化处理的生物墨水，至少具有如下技术效果：
(1)使T淋巴细胞在3D结构中生长，增加了T淋巴细胞垂直方向上的增殖空间；
(2)将T淋巴细胞、结合了IL-2、CD3抗体和CD28抗体的微载体，同时装载于所述生物墨水中，微载体为T淋巴细胞提供更为稳定、持续、可控的第一、第二和第三信号；
(3)3D打印成型后的支架结构，有利于细胞获得充分的氧气和养分；从而极大促进T淋巴细胞在生物墨水中的快速扩增。
本发明中，IL-2即Interleukin-2，是一种白介素，是免疫系统中促进T淋巴细胞存活、增殖和活化的一类细胞生长因子。
在本发明一些实施例中，所述结合了IL-2、CD3抗体和CD28抗体的微载体，该微载体为纳米-微米级的微球，其原料可选自甲基丙烯酰化明胶(GelMA)、透明质酸(HA)、壳聚糖、琼脂糖、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇(PVA)或丝素蛋白等，可用这些原料通过乳化法制备；或市售购得。
在本发明一些实施例中，所述结合了IL-2、CD3抗体和CD28抗体的微载体，该微载体的直径在1微米左右。
在本发明一些实施例中，所述功能化处理的生物墨水中，CD3抗体和CD28抗体的浓度比例为1:1。
在本发明一些实施例中，所述功能化处理的生物墨水中，IL-2的浓度为30-500U/mL，优选浓度为100-300U/mL。
在本发明一些实施例中，所述功能化处理的生物墨水中，CD3抗体和CD28抗体浓度分别为1-30ng/mL，优选浓度分别为10-20ng/mL。
在本发明一些实施例中，所述结合了IL-2、CD3抗体和CD28抗体的微载体与T淋巴细胞的数量比为3:1-1:3，优选比例为1:1。
在本发明一些实施例中，选用以上浓度或比例范围，培养7-12天后，3D培养扩增得到的T淋巴细胞数量是2D培养的2-10倍，显著优于2D培养。
在本发明一些实施例中，将生物墨水与所述结合了IL-2、CD3抗体和CD28抗体的微载体混合均匀即可制得所述功能化处理的生物墨水。
在本发明一些实施例中，将T淋巴细胞与所述功能化处理的生物墨水混合后，控制混合体系中T淋巴细胞的浓度范围为0.5-2.5×106/mL，例如0.5×106/mL、1×106/mL、1.5×106/mL或2.5×106/mL。
研究表明，细胞密度对于T淋巴细胞扩增能力具有重要意义。将T淋巴细胞维持在上述较低的密度有利于维持细胞的生长、存活和增殖。
在本发明一些实施例中，T淋巴细胞来源包括：小鼠脾淋巴细胞、小鼠淋巴结淋巴细胞、正常人外周血单个核细胞(PBMC)、工程化修饰后的T淋巴细胞(CAR-T、TCR-T)，通过常规的分离、分选方案(例如，机械研磨、酶消化、非连续梯度离心、流氏分选)获得T淋巴细胞。
在本发明一些实施例中，所述T淋巴细胞为小鼠脾脏来源的T淋巴细胞，其为机体适应性免疫中负责杀伤肿瘤细胞的主要免疫细胞。
在本发明一些实施例中，是将T淋巴细胞与已功能化处理的生物墨水混合，通过挤出式打印进行3D打印。关于所用3D打印设备及打印方法可参考现有技术，本发明不做特别限制。
在本发明一些实施例中，将3D打印所得含T淋巴细胞的3D结构置于G-Rex透气型培养系统中培养，其优点在于为结构中不断扩增的T淋巴细胞，提供充足的养分，充分的氧气交换，代谢产生的二氧化碳及时排出。
在本发明一些实施例中，培养T淋巴细胞所使用的培养基为淋巴细胞培养专用培养基。本领域技术人员可根据需要选择这些培养基，例如市售购得。
在本发明一些实施例中，将3D打印所得含T淋巴细胞的3D结构培养7～12天。
研究发现，采用本发明T淋巴细胞扩增方法，在保证T淋巴细胞表型和功能的前提下，细胞扩增速度显著优于2D(二维)层面培养的扩增速度。
研究发现，经上述方法所得3D打印结构可以为T淋巴细胞扩增提供充分的增殖空间、氧气和养分供给。并且该3D打印结构经过功能化处理，使T淋巴细胞与信号分子稳定接触，可以为结构中T淋巴细胞的增殖提供持续、可控的刺激信号，从而有利于显著提高细胞扩增速度。
本发明还包括上述方法培养所得T淋巴细胞。
有益效果
本发明方法可以快速扩增得到大量T淋巴细胞。快速扩增得到大量T淋巴细胞，是细胞免疫治疗中亟待解决的一个问题。现有的T淋巴细胞扩增方法主要在2D层面进行，T淋巴细胞自然沉降在培养容器底部，细胞增殖空间受限；信号刺激分子(抗体和因子)直接加入培养液中，或预包被于培养器皿底面，信号分子的释放不可控。而本发明通过T淋巴细胞3D打印扩增得到的T淋巴细胞，耗时短，7～12天内获得的细胞量显著高于传统T淋巴细胞扩增方法得到的细胞量。本发明方法为过继细胞免疫治疗，提供一种更为快速、有效的T淋巴细胞扩增途径。
附图说明
图1表示本发明实施例结合了IL-2、CD3抗体和CD28抗体的微载体及功能化处理的生物墨水的制备流程示意图；
图2表示本发明实施例基于3D打印的T淋巴细胞扩增方法示意图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。
以下所用3D打印设备为SUNP BioMaker(上普博源生物科技有限公司)。
以下所用T淋巴细胞为小鼠脾淋巴细胞，其获取方法：小鼠脾脏组织取材，机械研磨法结合密度梯度离心法，流氏细胞分选仪分选出T淋巴细胞群。
以下实施例中，结合了IL-2、CD3抗体和CD28抗体的微载体及功能化处理的生物墨水的制备流程参见示意图1。
以下实施例中，基于3D打印的T淋巴细胞扩增方法参见示意图2。
实施例1
1.制备功能化处理的生物墨水
如图1所示，乳化法制备GelMA(w/v，10％)微球，选取直径1微米左右的GelMA微球，表面偶联CD3抗体和CD28抗体，内部负载IL-2分子，其中IL-2浓度为300U/mL，CD3抗体和CD28抗体浓度分别为10ng/mL。
生物墨水中微载体的数量，依据T淋巴细胞数量进行调整，微载体与T淋巴细胞数量比保持1:1。
2.将T淋巴细胞与所述功能化处理的生物墨水混合，控制混合体系中T淋巴细胞的浓度为1×106/mL；
进行3D打印，边打印边固化交联，之后在G-Rex透气型培养系统中培养12天；所使用的培养基为淋巴细胞培养专用培养基。
实施例2
与实施例1相比，区别仅在于生物墨水中T淋巴细胞初始浓度为2.5×106/mL。
实施例3
与实施例1相比，区别仅在于生物墨水中T淋巴细胞初始浓度为0.5×106/mL。
对比例1
与实施例1的区别仅在于：所用生物墨水中不含结合了IL-2、CD3和CD28抗体的微载体，仅含生物墨水本体和T淋巴细胞。
对比例2
与实施例1的区别仅在于：将IL-2、CD3和CD28抗体直接加入到生物墨水中进行3D打印，而非结合在微载体上。
对比例3 2D培养
与实施例1的区别仅在于：不采用生物墨水进行3D打印，而是仅将T淋巴细胞直接悬浮培养于培养液中(T淋巴细胞的初始浓度为1×106/mL)；不将IL-2、CD3和CD28抗体结合在微载体上，而是直接加入到培养液中。
实验结果
以上实施例1-3及对比例1-3方法T淋巴细胞扩增倍数及细胞存活率(％)见下表1。
表1
Figure BDA0002474423930000071
注：扩增倍数指培养12天后的细胞数目除以初始细胞数目。
结果表明，对比例1中的T淋巴细胞，当培养2-3天时，T淋巴细胞发生皱缩、死亡，无法进行后续培养；培养12天后，细胞存活率为10％，T淋巴细胞几乎全部凋亡。对比例2中的T淋巴细胞，当培养5-7天时，T淋巴细胞增殖速度减慢，且细胞存活率下降。对比例3中的T淋巴细胞，当培养2-3天时，T淋巴细胞增殖空间受限，增殖速度减慢，且细胞存活率下降。实施例1-3的扩增倍数及细胞存活率显著优于对比例2和3。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种基于3D打印的T淋巴细胞扩增方法，包括：
提供功能化处理的生物墨水；所述功能化处理的生物墨水包括生物墨水本体，以及结合了IL-2、CD3抗体和CD28抗体的微载体；
将T淋巴细胞与所述功能化处理的生物墨水混合，进行3D打印；及
将3D打印所得含T淋巴细胞的3D结构进行培养。
2.根据权利要求1所述的基于3D打印的T淋巴细胞扩增方法，其中，所述生物墨水选自甲基丙烯酰化明胶、透明质酸、壳聚糖、琼脂糖、聚乙二醇、聚乙烯醇或丝素蛋白。
3.根据权利要求1或2所述的基于3D打印的T淋巴细胞扩增方法，其中，所述结合了IL-2、CD3抗体和CD28抗体的微载体为纳米-微米级的微球；
可选地，所述结合了IL-2、CD3抗体和CD28抗体的微载体的直径在1微米左右。
4.根据权利要求1或2所述的基于3D打印的T淋巴细胞扩增方法，其中，所述结合了IL-2、CD3抗体和CD28抗体的微载体的原料可选自甲基丙烯酰化明胶、透明质酸、壳聚糖、琼脂糖、聚乙二醇、聚乙烯醇或丝素蛋白。
5.根据权利要求1或2所述的基于3D打印的T淋巴细胞扩增方法，其中，所述功能化处理的生物墨水中，CD3抗体和CD28抗体的浓度比例为1:1。
6.根据权利要求1或2所述的基于3D打印的T淋巴细胞扩增方法，其中，所述功能化处理的生物墨水中，IL-2的浓度为30-500U/mL，优选浓度为100-300U/mL；和/或，
所述功能化处理的生物墨水中，CD3抗体和CD28抗体浓度分别为1-30ng/mL，优选浓度分别为10-20ng/mL。
7.根据权利要求1或2所述的基于3D打印的T淋巴细胞扩增方法，其中，所述结合了IL-2、CD3抗体和CD28抗体的微载体与T淋巴细胞的数量比为3:1-1:3，优选比例为1:1。
8.根据权利要求1或2所述的基于3D打印的T淋巴细胞扩增方法，其中，将T淋巴细胞与所述功能化处理的生物墨水混合后，控制混合体系中T淋巴细胞的浓度范围为0.5-2.5×106/mL，例如0.5×106/mL、1×106/mL、1.5×106/mL或2.5×106/mL。
9.根据权利要求1或2所述的基于3D打印的T淋巴细胞扩增方法，其中，将3D打印所得含T淋巴细胞的3D结构置于G-Rex透气型培养系统中培养。
10.根据权利要求1或2所述的基于3D打印的T淋巴细胞扩增方法，其中，将3D打印所得含T淋巴细胞的3D结构培养7～12天。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111925987A (zh) * 2020-09-24 2020-11-13 深圳市一五零生命科技有限公司 Nk细胞无血清培养液及nk细胞的培养方法

Citations (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1556854A (zh) * 2001-09-20 2004-12-22 �Ƹ��� 细胞的活化及扩增
CN1699558A (zh) * 2005-06-09 2005-11-23 郑丽琴 使用生物反应器对造血干细胞来源的细胞因子诱导的杀伤细胞的大规模培养技术
CN101092606A (zh) * 2006-06-23 2007-12-26 中日友好医院 神经干细胞三维立体培养体外扩增的方法
CN103305453A (zh) * 2013-05-23 2013-09-18 侯亚义 一种脐带间充质干细胞的微载体培养系统
CN104152410A (zh) * 2014-02-27 2014-11-19 赵树铭 一种构建三维培养体系诱导脐血干细胞向血小板分化的方法
CN105039245A (zh) * 2015-07-01 2015-11-11 浙江大学 一种利用3d打印技术促进人未成熟卵母细胞体外成熟的方法
CN105861419A (zh) * 2016-04-22 2016-08-17 毛雷 基于细胞三维打印的生物型人工肝脏及其制备方法和应用
CN106867963A (zh) * 2017-01-24 2017-06-20 四川大学 射线修饰脐带成体干细胞3d微球活制剂及其制备与应用
CN106978384A (zh) * 2017-03-24 2017-07-25 清华大学 多孔微冰胶细胞三维培养载体及其制备方法和制备系统
WO2018089515A1 (en) * 2016-11-09 2018-05-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services 3d vascularized human ocular tissue for cell therapy and drug discovery
CN108753718A (zh) * 2018-06-20 2018-11-06 淮安诺康生物科技有限公司 肿瘤浸润淋巴细胞til的体外扩增方法
CN108977405A (zh) * 2018-08-09 2018-12-11 西南大学 一种即用型3d细胞生长支架及其制备方法
CN109837235A (zh) * 2019-01-15 2019-06-04 浙江大学 水凝胶微载体在细胞的黏附、扩增、冻存和消化中的应用
CN109897195A (zh) * 2019-02-15 2019-06-18 清华大学 一种3d打印可降解微球的制备方法及其在构建功能性体外微组织中的应用
CN110129256A (zh) * 2019-06-05 2019-08-16 中国科学院亚热带农业生态研究所 一种猪源3d胎盘类器官模型的建立方法
CN110195041A (zh) * 2019-06-20 2019-09-03 威海正生生物科技有限公司 利用ASC三维培养体系获得高活性Tregs细胞的方法
CN110283777A (zh) * 2019-07-10 2019-09-27 中国海洋大学 一种对虾细胞连续培养方法
CN110747166A (zh) * 2019-10-11 2020-02-04 厦门大学 一种外周血t细胞的体外扩增培养方法
US20200071678A1 (en) * 2018-09-05 2020-03-05 National Taiwan University Method of preparing mimicking angiogenic co-spheroids and application thereof
CN111040995A (zh) * 2019-12-06 2020-04-21 北京科途医学科技有限公司 一种扩增肿瘤浸润淋巴细胞中肿瘤杀伤t细胞的方法
AU2019310647A1 (en) * 2018-07-24 2021-02-04 Newsouth Innovations Pty Limited Bio-ink for 3D printing

Patent Citations (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1556854A (zh) * 2001-09-20 2004-12-22 �Ƹ��� 细胞的活化及扩增
CN1699558A (zh) * 2005-06-09 2005-11-23 郑丽琴 使用生物反应器对造血干细胞来源的细胞因子诱导的杀伤细胞的大规模培养技术
CN101092606A (zh) * 2006-06-23 2007-12-26 中日友好医院 神经干细胞三维立体培养体外扩增的方法
CN103305453A (zh) * 2013-05-23 2013-09-18 侯亚义 一种脐带间充质干细胞的微载体培养系统
CN104152410A (zh) * 2014-02-27 2014-11-19 赵树铭 一种构建三维培养体系诱导脐血干细胞向血小板分化的方法
CN105039245A (zh) * 2015-07-01 2015-11-11 浙江大学 一种利用3d打印技术促进人未成熟卵母细胞体外成熟的方法
CN105861419A (zh) * 2016-04-22 2016-08-17 毛雷 基于细胞三维打印的生物型人工肝脏及其制备方法和应用
WO2018089515A1 (en) * 2016-11-09 2018-05-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services 3d vascularized human ocular tissue for cell therapy and drug discovery
CN106867963A (zh) * 2017-01-24 2017-06-20 四川大学 射线修饰脐带成体干细胞3d微球活制剂及其制备与应用
CN106978384A (zh) * 2017-03-24 2017-07-25 清华大学 多孔微冰胶细胞三维培养载体及其制备方法和制备系统
CN108753718A (zh) * 2018-06-20 2018-11-06 淮安诺康生物科技有限公司 肿瘤浸润淋巴细胞til的体外扩增方法
AU2019310647A1 (en) * 2018-07-24 2021-02-04 Newsouth Innovations Pty Limited Bio-ink for 3D printing
CN108977405A (zh) * 2018-08-09 2018-12-11 西南大学 一种即用型3d细胞生长支架及其制备方法
US20200071678A1 (en) * 2018-09-05 2020-03-05 National Taiwan University Method of preparing mimicking angiogenic co-spheroids and application thereof
CN109837235A (zh) * 2019-01-15 2019-06-04 浙江大学 水凝胶微载体在细胞的黏附、扩增、冻存和消化中的应用
CN109897195A (zh) * 2019-02-15 2019-06-18 清华大学 一种3d打印可降解微球的制备方法及其在构建功能性体外微组织中的应用
CN110129256A (zh) * 2019-06-05 2019-08-16 中国科学院亚热带农业生态研究所 一种猪源3d胎盘类器官模型的建立方法
CN110195041A (zh) * 2019-06-20 2019-09-03 威海正生生物科技有限公司 利用ASC三维培养体系获得高活性Tregs细胞的方法
CN110283777A (zh) * 2019-07-10 2019-09-27 中国海洋大学 一种对虾细胞连续培养方法
CN110747166A (zh) * 2019-10-11 2020-02-04 厦门大学 一种外周血t细胞的体外扩增培养方法
CN111040995A (zh) * 2019-12-06 2020-04-21 北京科途医学科技有限公司 一种扩增肿瘤浸润淋巴细胞中肿瘤杀伤t细胞的方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BAHMAN DELALAT等: "3D printed lattices as an activation and expansion platform for T cell therapy", 《BIOMATERIALS》 *
JUEWAN KIM等: "Encapsulation of Human Natural and Induced Regulatory T-Cells in IL-2 and CCL1 Supplemented Alginate-GelMA Hydrogel for 3D Bioprinting", 《ADV. FUNCT. MATER》 *
JUN YIN等: "3D bioprinting of low concentration cell-laden gelatin methacrylate (GelMA) bioinks with two-step crosslinking strategy", 《ACS APPLIED MATERIALS & INTERFACES》 *
KATHLEEN S. CARSWELL等: "Culture of Human T Cells in Stirred Bioreactors for Cellular Immunotherapy Applications: Shear, Proliferation, and the IL-2 Receptor", 《BIOTECHNOLOGY AND BIOENGINEERING》 *
RICCARDO LEVATO等: "Biofabrication of tissue constructs by 3D bioprinting of cell-laden microcarriers", 《BIOFABRICATION》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111925987A (zh) * 2020-09-24 2020-11-13 深圳市一五零生命科技有限公司 Nk细胞无血清培养液及nk细胞的培养方法

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