CN111529543A - 抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物、制备方法及其应用 - Google Patents

抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物、制备方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种抗痤疮的岩藻黄质‑琼胶寡糖组合物、制备方法及其应用。所述抗痤疮的岩藻黄质‑琼胶寡糖组合物包含琼胶寡糖、岩藻黄质、植物苷、表面活性剂、稳定剂和水。本发明提供的组合物可以抑制痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌这两种痤疮致病菌的生长，有效控制痤疮病情发展。

Description

抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物、制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及人体护理技术领域，尤其涉及一种抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物、制备方法及其应用。
背景技术
痤疮，别名粉刺、暗疮、青春痘，是一种发生于毛囊皮脂腺的慢性皮肤病，多出现于面、颈、胸、背、臀部等皮脂腺粗大分泌旺盛的部位。在痤疮发生炎症的过程中，皮脂腺毛囊中的细菌扮演着重要角色。当皮脂腺分泌旺盛时，过多的分泌物会将毛孔堵塞，在毛囊处形成无氧环境，使得厌氧的痤疮丙酸杆菌大量繁殖。而其分泌的脂酶可分解人体皮脂生成游离脂肪酸，同时趋化炎症细胞和介质，最终诱导并加重炎症反应。金黄色葡萄球菌是人类的一种常见病原菌，可引起许多严重感染。研究表明，从寻常痤疮部位分离痤疮丙酸杆菌的同时，往往也能分离到金黄色葡萄球菌。这表明金黄色葡萄球菌在痤疮炎症性损害的发生过程中也可能起着一定的作用。
目前市面上的宣称有祛痘功效的产品主要有祛痘化妆品和祛痘药膏。祛痘化妆品大多使用植物提取物、中草药成分，效果参差不齐；而祛痘类药膏的主要成分是抗生素，使用抗生素治疗的最大问题是耐药菌的产生，目前看来几乎所有的抗生素均能引起痤疮致病菌不同程度的耐药。因此，找到一种安全有效的祛痘原料具有重要意义和广阔的市场前景。
卢旭公开了复方褐藻素软膏抗实验性痤疮及THP-1细胞炎症机制的研究，其选用褐藻素、丹参酮ⅡA、小檗碱和黄岑苷进行实验，研究了对痤疮的影响(卢旭.复方褐藻素软膏抗实验性痤疮及THP-1细胞炎症机制的研究[D].福建中医药大学2017)。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供一种抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物、制备方法及其应用。本发明具体技术方案如下：
本发明提供了一种抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物，所述组合物包含琼胶寡糖、岩藻黄质、植物苷、表面活性剂、稳定剂和水。
优选的，对于上述所述的组合物，其中，以组合物为100总重量份计，所述琼胶寡糖为0.5-1.5份，优选为0.5-1份，较优选为0.8-1份；所述岩藻黄质为0.01-1.5份，优选为0.05-1.5份，较优选为0.05-1份；所述植物苷为0.01-1份，优选为0.5-1份，较优选为0.5-0.8份；所述表面活性剂为0.5-5份，优选为2-5份，较优选为3-5份；所述稳定剂为5-15份，优选为5-10份，较优选为5-8份；以及余量的水。
优选的，对于上述所述的组合物，其中，所述琼胶寡糖为琼寡糖或新琼寡糖，优选为新琼寡糖。
优选的，对于上述所述的组合物，其中，所述新琼寡糖选自新琼二糖、新琼四糖、新琼六糖、新琼八糖、新琼十糖或新琼十二糖中的一种或两种以上，优选为新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖的组合物。
优选的，对于上述所述的组合物，其中，以新琼寡糖总重量计，所述新琼二糖为60-80％，所述新琼四糖为5-15％，所述新琼六糖为10-30％。
优选的，对于上述所述的组合物，其中，以新琼寡糖总重量计，所述新琼二糖为75-80％，所述新琼四糖为10-15％，所述新琼六糖为10-15％。
优选的，对于上述所述的组合物，其中，所述植物苷选自黄芩苷、黄芪苷、芦荟苷、红景天苷、橙皮苷和三七苷中的一种或两种以上。
优选的，对于上述所述的组合物，其中，所述表面活性剂为氨基酸表面活性剂，优选为椰油酰基甘氨酸钠、肉豆蔻酰谷氨酸钠、月桂酰谷氨酸钠或甲基椰油酰基牛磺酸钠。
优选的，对于上述所述的组合物，其中，所述稳定剂选自乙基己基甘油、泛醇、甘油、丙二醇、戊二醇和异丙醇中的一种或两种以上。
本发明提供了一种抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物的制备方法，其包括下述步骤：
将琼胶寡糖和植物苷加入水中得到A相；
将岩藻黄质和表面活性剂加入剩余的水中得到B相；
将所述B相加入到所述A相中搅拌，加入稳定剂，陈化得到所述组合物。
优选的，对于上述所述的制备方法，其中，在得到所述组合物的步骤中，所述搅拌的转速为60-300rpm，优选为100-300rpm；优选的，所述搅拌温度为20-60℃，优选为40-60℃。
优选的，对于上述所述的制备方法，其中，以100总重量份计，所述琼胶寡糖为0.5-1.5份，优选为0.5-1份，较优选为0.8-1份；所述岩藻黄质为0.01-1.5份，优选为0.05-1.5份，较优选为0.05-1份；所述植物苷为0.01-1份，优选为0.5-1份，较优选为0.5-0.8份；所述表面活性剂为0.5-5份，优选为2-5份，较优选为3-5份；所述稳定剂为5-15份，优选为5-10份，较优选为5-8份；以及余量的水。
优选的，对于上述所述的制备方法，其中，所述琼胶寡糖为琼寡糖或新琼寡糖，优选为新琼寡糖。
优选的，对于上述所述的制备方法，其中，所述新琼寡糖选自新琼二糖、新琼四糖、新琼六糖、新琼八糖、新琼十糖或新琼十二糖中的一种或两种以上，优选为新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖的组合物。
优选的，对于上述所述的制备方法，其中，以新琼寡糖总重量计，所述新琼二糖为60-80％，所述新琼四糖为5-15％，所述新琼六糖为10-30％。
优选的，对于上述所述的制备方法，其中，以新琼寡糖总重量计，所述新琼二糖为75-80％，所述新琼四糖为10-15％，所述新琼六糖为10-15％。
优选的，对于上述所述的制备方法，其中，所述植物苷选自黄芩苷、黄芪苷、芦荟苷、红景天苷、橙皮苷和三七苷中的一种或两种以上。
优选的，对于上述所述的制备方法，其中，所述表面活性剂为氨基酸表面活性剂，优选为椰油酰基甘氨酸钠、肉豆蔻酰谷氨酸钠、月桂酰谷氨酸钠或甲基椰油酰基牛磺酸钠。
优选的，对于上述所述的制备方法，其中，所述稳定剂选自乙基己基甘油、泛醇、甘油、丙二醇、戊二醇和异丙醇中的一种或两种以上。
本发明提供了上述所述的抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物或者上述所述的制备方法制备得到的抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物在人体护理领域中的应用，优选在化妆品领域中的应用，更优选在抗痤疮化妆品领域中的应用。
本发明提供了一种人体护理品组合物，包括上述所述的抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物或者上述所述的制备方法制备得到的抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物，其中，以人体护理品组合物的总重量计，所述琼胶寡糖的浓度为0.01-0.5％。
发明的效果
本发明提供的组合物可以抑制痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌这两种痤疮致病菌的生长，有效控制痤疮病情发展。
附图说明
图1是实验例1中细胞活力变化趋势示意图。
图2-1是实验例1中溶剂对照组的成纤维细胞形态学检测结果示意图。
图2-2是实验例1中给药组成浓度为125ppm时成纤维细胞形态学检测结果示意图。
图2-3是实验例1中给药组成浓度为500ppm时成纤维细胞形态学检测结果示意图。
图2-4是实验例1中给药组成浓度为1000ppm时成纤维细胞形态学检测结果示意图。
图3是实验例3中对照样品组和空白组中的菌落生长示意图，其中，左侧为对照样品组，右侧为空白组。
具体实施方式
下面结合附图所描述的实施方式对本发明做以详细说明，其中所有附图中相同的数字表示相同的特征。虽然附图中显示了本发明的具体实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。
需要说明的是，在说明书及权利要求当中使用了某些词汇来指称特定组件。本领域技术人员应可以理解，技术人员可能会用不同名词来称呼同一个组件。本说明书及权利要求并不以名词的差异作为区分组件的方式，而是以组件在功能上的差异作为区分的准则。如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本发明的较佳实施方式，然而所述描述乃以说明书的一般原则为目的，并非用以限定本发明的范围。本发明的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。
本发明提供了一种抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物，所述组合物包括琼胶寡糖、岩藻黄质、植物苷、表面活性剂、稳定剂和水。
琼胶寡糖是一类聚合度为2-10的低聚糖，常见来源于大型红藻龙须菜，是一种新型的海洋功能性低聚糖。近年来的研究发现，琼胶寡糖具有良好的抗肿瘤、抗炎、增强免疫等药理作用，同时也有研究表明琼胶寡糖具有抗氧化性及美白、保湿功效，是一种优良的化妆品原料。
所述琼胶寡糖包括琼寡糖和新琼寡糖，根据聚合度不同，所述琼寡糖可包括琼二糖、琼四糖、琼六糖和琼八糖，所述新琼寡糖可包括新琼二糖、新琼四糖、新琼六糖、新琼八糖、新琼十糖和新琼十二糖。
所述的岩藻黄质(fucoxanthin)也被称为褐藻黄素、岩藻黄素，是类胡萝卜素中叶黄素类的一种天然色素，占大约700种天然出现的类胡萝卜素总量的10％以上，颜色呈淡黄至褐色，为褐藻、硅藻、金藻及黄绿藻所含有的色素。广泛存在于各种藻类、海洋浮游植物、水生贝壳类等动植物中。已有科学报道其具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、减肥、神经细胞保护的作用，而在抑痤疮产生菌方面的相关研究仍是空白。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，以组合物为100总重量份计，所述琼胶寡糖为0.5-1.5份，优选为0.5-1份，较优选为0.8-1份；所述岩藻黄质为0.01-1.5份，优选为0.05-1.5份，较优选为0.05-1份；所述植物苷为0.01-1份，优选为0.5-1份，较优选为0.5-0.8份；所述表面活性剂为0.5-5份，优选为2-5份，较优选为3-5份；所述稳定剂为5-15份，优选为5-10份，较优选为5-8份；以及余量的水。
例如，以组合物为100总重量份计，所述琼胶寡糖可以为0.5份、0.6份、0.7份、0.8份、0.9份、1份、1.1份、1.2份、1.3份、1.4份、1.5份或其之间的任意范围；
所述岩藻黄质可以为0.01份、0.02份、0.03份、0.04份、0.05份、0.06份、0.07份、0.08份、0.09份、0.1份、0.2份、0.3份、0.4份、0.5份、0.6份、0.7份、0.8份、0.9份、1.0份、1.1份、1.2份、1.3份、1.4份、1.5份或其之间的任意范围；
所述植物苷可以为0.01份、0.02份、0.03份、0.04份、0.05份、0.06份、0.07份、0.08份、0.09份、0.1份、0.2份、0.3份、0.4份、0.5份、0.6份、0.7份、0.8份、0.9份、1.0份或其之间的任意范围；
所述表面活性剂可以为0.5份、0.6份、0.7份、0.8份、0.9份、1.0份、1.5份、2.0份、2.5份、3.0份、3.5份、4.0份、4.5份、5.0份或其之间的任意范围；
所述稳定剂可以为5份、6份、7份、8份、9份、10份、11份、12份、13份、14份、15份或其之间的任意范围。
在本发明优选的一种具体实施方式中，所述琼胶寡糖为琼寡糖或新琼寡糖，优选为新琼寡糖。
优选的，所述新琼寡糖选自新琼二糖、新琼四糖、新琼六糖、新琼八糖、新琼十糖或新琼十二糖中的一种或两种以上，优选为新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖的组合物；较优选的，以新琼寡糖总重量计，所述新琼二糖为60-80％，所述新琼四糖为5-15％，所述新琼六糖为10-30％。
优选的，以新琼寡糖总重量计，所述新琼二糖为75-80％，所述新琼四糖为10-15％，所述新琼六糖为10-15％。
例如以新琼寡糖总重量计，所述新琼二糖可以为60％、65％、70％、75％、80％或其之间的任意范围；
所述新琼四糖可以为5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％或其之间的任意范围；
所述新琼四糖可以为10％、15％、20％、25％、30％或其之间的任意范围。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述植物苷选自黄芩苷、黄芪苷、芦荟苷、红景天苷、橙皮苷和三七苷中的一种或两种以上。
所述的植物苷指的是存在于天然植物中苷类的总称。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述表面活性剂为氨基酸表面活性剂，优选为椰油酰基甘氨酸钠、肉豆蔻酰谷氨酸钠、月桂酰谷氨酸钠或甲基椰油酰基牛磺酸钠。
所述的氨基酸表面活性剂指的是一种温和的且可降解的阴离子表面活性剂，所述的氨基酸表面活性剂是具有发泡去污能力的椰子油(或者月桂油或者棕榈油)的氨基酸(比如谷氨酸、甘氨酸等)盐(钠盐、钾盐、三乙醇胺盐)。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述稳定剂选自乙基己基甘油、泛醇、甘油、丙二醇、戊二醇和异丙醇中的一种或两种以上。
本发明提供了一种抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物的制备方法，其包括下述步骤：
将琼胶寡糖和植物苷加入水中得到A相；
将岩藻黄质和表面活性剂加入剩余的水中得到B相；
将所述B相加入到所述A相中搅拌，加入稳定剂，陈化得到所述的组合物。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述方法包括下述步骤：
将所述琼胶寡糖和所述植物苷加入水中，搅拌溶解得到A相；
将所述岩藻黄质和所述表面活性剂加入剩余的水中，搅拌溶解得到B相；
在60-300rpm转速，20-60℃温度下，将所述B相加入到A相中搅拌，接着加入稳定剂，陈化过夜得到所述的组合物。
优选的，在得到所述组合物的步骤中，转速为100-300rpm；优选的，温度为40-60℃。
优选的，在加入稳定剂之前，搅拌10-30min；优选的，在加入稳定剂之后，搅拌30-60min。
对于得到A相的步骤和得到B相的步骤中使用的水的比例并无严格的限制，将分成A相和B相溶解的目的在于避免直接投料时，某些成分的瞬时浓度过高造成有效物析出，例如A相的步骤和得到B相的步骤中使用的水的比例可以为3:7或者4:6。
本发明提供了上述所述的组合物或上述所述的制备方法制备得到的组合物在人体护理领域中的应用，优选在化妆品领域中的应用，更优选在抗痤疮化妆品领域中的应用。
本发明提供了一种人体护理品组合物，其包括上述所述的组合物或者上述所述的制备方法制备得到的组合物，其中，以人体护理品组合物的总重量计，所述琼胶寡糖的浓度为0.01-0.5％。
所述的人体护理品组合物除了上述所述的组合物之外，还包括本领域技术人员公知的辅料，所述的人体护理品组合物可以为淋洗产品、护肤产品、美妆产品、防晒产品等，所述琼胶寡糖在所述人体护理品组合物中的浓度为0.01-0.5％。
本发明对试验中所用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述，在下面的实施例中，如果无其他特别的说明，％表示wt％，即重量百分数。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
表1实施例所使用的原料来源
原料 纯度 生产厂家
新琼二糖 95％ 蓝脑科技(厦门)有限公司
新琼四糖 90％ 蓝脑科技(厦门)有限公司
新琼六糖 90％ 蓝脑科技(厦门)有限公司
岩藻黄质 一等品 西安瑞盈生物科技有限公司
黄芩苷 一等品 西安绿腾生物科技有限公司
椰油酰基甘氨酸钠GCS-11 一等品 广州朋远化工有限公司
肉豆蔻酰谷氨酸钠 一等品 长沙普济生物科技股份有限公司
月桂酰谷氨酸钠 一等品 广州市诺源化工科技有限公司
甲基椰油酰基牛磺酸钠 一等品 苏州源泰润化工有限公司
实施例1抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物的制备(以100g总重量计)
(1)将1g琼胶寡糖和0.5g植物苷加入水中，搅拌溶解得到A相；
(2)将0.05g岩藻黄质和3g表面活性剂加入剩余的水中，搅拌溶解得到B相；
(3)在300rpm转速，40℃温度下，将所述B相加入到A相中搅拌，搅拌20min后，加入5μl稳定剂，继续搅拌40min，陈化过夜得到所述的组合物。
其中，琼胶寡糖为新琼寡糖，其包括新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，以新琼寡糖的总重量计，新琼二糖占80％，新琼四糖占10％，新琼六糖占10％；
植物苷为黄岑苷；
表面活性剂为椰油酰基甘氨酸钠GCS-11；
稳定剂为丙二醇；
步骤(1)和步骤(2)中的水的质量比例为3:7。
实施例2抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物的制备(以100g总重量计)
(1)将0.8g琼胶寡糖和0.8g植物苷加入水中，搅拌溶解得到A相；
(2)将0.1g岩藻黄质和5g表面活性剂加入剩余的水中，搅拌溶解得到B相；
(3)在200rpm转速，50℃温度下，将所述B相加入到A相中搅拌，接着加入8μl稳定剂，陈化过夜得到所述的组合物。
其中，琼胶寡糖为新琼寡糖，其包括新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，以新琼寡糖的总重量计，新琼二糖占75％，新琼四糖占15％，新琼六糖占15％；
植物苷为黄岑苷；
表面活性剂为椰油酰基甘氨酸钠GCS-11；
稳定剂为丙二醇；
步骤(1)和步骤(2)中的水的质量比例为3:7。
实施例3抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物的制备(以100g总重量计)
(1)将1g琼胶寡糖和0.5g植物苷加入水中，搅拌溶解得到A相；
(2)将0.05g岩藻黄质和3g表面活性剂加入剩余的水中，搅拌溶解得到B相；
(3)在300rpm转速，40℃温度下，将所述B相加入到A相中搅拌，搅拌20min后，加入5μl稳定剂，继续搅拌40min，陈化过夜得到所述的组合物。
其中，琼胶寡糖为新琼寡糖，其包括新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，以新琼寡糖的总重量计，新琼二糖占70％，新琼四糖占10％，新琼六糖占20％；
植物苷为黄岑苷；
表面活性剂为椰油酰基甘氨酸钠GCS-11；
稳定剂为丙二醇；
步骤(1)和步骤(2)中的水的质量比例为3:7。
实施例4抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物的制备(以100g总重量计)
(1)将0.8g琼胶寡糖和0.8g植物苷加入水中，搅拌溶解得到A相；
(2)将0.1g岩藻黄质和5g表面活性剂加入剩余的水中，搅拌溶解得到B相；
(3)在200rpm转速，50℃温度下，将所述B相加入到A相中搅拌，接着加入8μl稳定剂，陈化过夜得到所述的组合物。
其中，琼胶寡糖为新琼寡糖，其包括新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，以新琼寡糖的总重量计，新琼二糖占70％，新琼四糖占10％，新琼六糖占20％；
植物苷为黄芪苷；
表面活性剂为肉豆蔻酰谷氨酸钠；
稳定剂为甘油；
步骤(1)和步骤(2)中的水的质量比例为3:7。
实施例5抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物的制备(以100g总重量计)
(1)将0.9g琼胶寡糖和0.6g植物苷加入水中，搅拌溶解得到A相；
(2)将1g岩藻黄质和4g表面活性剂加入剩余的水中，搅拌溶解得到B相；
(3)在100rpm转速，60℃温度下，将所述B相加入到A相中搅拌，搅拌10min后，加入7μl稳定剂，继续搅拌60nin，陈化过夜得到所述的组合物。
其中，琼胶寡糖为新琼寡糖，其包括新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，以新琼寡糖的总重量计，新琼二糖占70％，新琼四糖占10％，新琼六糖占20％；
植物苷为芦荟苷；
表面活性剂为月桂酰谷氨酸钠；
稳定剂为泛醇；
步骤(1)和步骤(2)中的水的质量比例为4:6。
实施例6抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物的制备(以100g总重量计)
(1)将1g琼胶寡糖和0.5g植物苷加入水中，搅拌溶解得到A相；
(2)将0.5g岩藻黄质和5g表面活性剂加入剩余的水中，搅拌溶解得到B相；
(3)在300rpm转速，40℃温度下，将所述B相加入到A相中搅拌，搅拌30min后，加入5μl稳定剂，继续搅拌30min，陈化过夜得到所述的组合物。
其中，琼胶寡糖为新琼寡糖，其包括新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，以新琼寡糖的总重量计，新琼二糖占65％，新琼四糖占5％，新琼六糖占30％；
植物苷为黄岑苷；
表面活性剂为椰油酰基甘氨酸钠GCS-11；
稳定剂为丙二醇；
步骤(1)和步骤(2)中的水的质量比例为4:6。
实施例7抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物的制备(以100g总重量计)
(1)将0.5g琼胶寡糖和1g植物苷加入水中，搅拌溶解得到A相；
(2)将1.5g岩藻黄质和2g表面活性剂加入剩余的水中，搅拌溶解得到B相；
(3)在100rpm转速，40℃温度下，将所述B相加入到A相中搅拌，搅拌15min后，加入10μl稳定剂，继续搅拌40min，陈化过夜得到所述的组合物。
其中，琼胶寡糖为新琼寡糖，其包括新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，以新琼寡糖的总重量计，新琼二糖占60％，新琼四糖占15％，新琼六糖占25％；
植物苷为黄岑苷；
表面活性剂为甲基椰油酰基牛磺酸钠；
稳定剂为乙基己基甘油；
步骤(1)和步骤(2)中的水的质量比例为3:7。
实施例8抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物的制备(以100g总重量计)
(1)将1.2g琼胶寡糖和0.1g植物苷加入水中，搅拌溶解得到A相；
(2)将0.03g岩藻黄质和1g表面活性剂加入剩余的水中，搅拌溶解得到B相；
(3)在90rpm转速，20℃温度下，将所述B相加入到A相中搅拌，搅拌20min后，加入15μl稳定剂，继续搅拌50min，陈化过夜得到所述的组合物。
其中，琼胶寡糖为新琼寡糖，其包括新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，以新琼寡糖的总重量计，新琼二糖占80％，新琼四糖占5％，新琼六糖占15％；
植物苷为三七苷；
表面活性剂为椰油酰基甘氨酸钠GCS-11；
稳定剂为甘油；
步骤(1)和步骤(2)中的水的质量比例为4:7。
实施例9抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物的制备(以100g总重量计)
(1)将1.5g琼胶寡糖和0.01g植物苷加入水中，搅拌溶解得到A相；
(2)将0.01g岩藻黄质和0.5g表面活性剂加入剩余的水中，搅拌溶解得到B相；
(3)在60rpm转速，30℃温度下，将所述B相加入到A相中搅拌，搅拌30min后，加入12μl稳定剂，继续搅拌60min，陈化过夜得到所述的组合物。
其中，琼胶寡糖为新琼寡糖，其包括新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，以新琼寡糖的总重量计，新琼二糖占80％，新琼四糖占10％，新琼六糖占10％；
植物苷为黄岑苷；
表面活性剂为椰油酰基甘氨酸钠GCS-11；
稳定剂为丙二醇；
步骤(1)和步骤(2)中的水的质量比例为3:7。
对比例1普通抗痤疮的岩藻黄质组合物的制备(以100g总重量计)
(1)将1g植物苷加入水中，搅拌溶解得到A相；
(2)将1.5g岩藻黄质和2g表面活性剂加入剩余的水中，搅拌溶解得到B相；
(3)在100rpm转速，40℃温度下，将所述B相加入到A相中搅拌，搅拌15min后，加入10μl稳定剂，继续搅拌40min，陈化过夜得到所述的组合物。
其中，琼胶寡糖为新琼寡糖，其包括新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，以新琼寡糖的总重量计，新琼二糖占60％，新琼四糖占15％，新琼六糖占25％；
植物苷为黄岑苷；
表面活性剂为甲基椰油酰基牛磺酸钠；
稳定剂为乙基己基甘油；
步骤(1)和步骤(2)中的水的质量比例为3:7。
表2实施例1-9以及对比例1所述的原料用量表
琼胶寡糖(g) 岩藻黄质(g) 植物苷(g) 表面活性剂(g) 稳定剂(μl)
实施例1 1 0.05 0.5 3 5
实施例2 0.8 0.1 0.8 5 8
实施例3 1 0.05 0.5 3 5
实施例4 0.8 0.1 0.8 5 8
实施例5 0.9 1 0.6 4 7
实施例6 1 0.5 0.5 5 5
实施例7 0.5 1.5 1 2 10
实施例8 1.2 0.03 0.1 1 15
实施例9 1.5 0.01 0.01 0.5 12
对比例1 - 1.5 1 2 10
其中，表中的“-”指的不使用该原料。
实验例1成纤维细胞安全性评价
使用成纤维细胞，对实施例3所述组合物的细胞毒性进行评价。
本实施例中人成纤维细胞购自广东博溪生物有限公司，通过细胞原代、传代培养获得。
DMEM培养基购于Gibco，
新生牛血清购于青岛四季青生物科技有限公司，
MTT购于Sigma。
本实验例所述浓度均以琼胶寡糖浓度计。
设置8个浓度梯度，每个浓度梯度下设置3个重复孔，同时，实验设置溶剂对照孔、调零孔(含10％新生牛血清的DMEM)和阳性对照孔(PC，8％DMSO)。
本实验例采用MTT细胞活性检测方法，筛选细胞给药的最大安全浓度。
具体操作步骤如下：
①制备细胞悬液：取对数生长期细胞消化后接种至96孔板。
②用细胞培养基将给药组成稀释成8个浓度梯度，分别为7.81ppm、15.63ppm、31.3ppm、62.5ppm、125ppm、250ppm、500ppm、1000ppm。
③待细胞铺板率达到40％时进行给药，给药完成后将培养板放置在37℃、5％的CO2培养箱中培养。
④检测：细胞孵育培养24h，弃掉上清，加入200μL浓度为0.5mg/mL的MTT溶液，37℃避光孵育。4h后弃掉上清，每孔加150μL的DMSO，用酶标仪(SpectraMax，美国MD公司)于490nm读取OD值。
⑤计算公式：
Figure BDA0002506716440000141
试验结果如表3，根据表3的毒性试验数据绘制的细胞活力变化趋势示意图如图1。
表3实施例3所述组合物的细胞毒性试验
Figure BDA0002506716440000142
从表3和图1可以看出：与溶剂对照相比，本实验例中所述组合物在所设置的8个浓度内对人成纤维细胞无明显细胞毒性，当浓度为1000ppm时，细胞的相对活力值为94.54％。
根据MTT检测结果，确定检测样品的形态学观察浓度为125ppm、500ppm、1000ppm。
设立样品组与溶剂对照组，每组设两个重复孔，按相应的接种密度接种细胞至24孔板中，37℃、5％的CO2培养箱中孵育培养过夜。待24孔板细胞铺板率达到40％时，进行给药，样品组加入不同浓度(即125ppm、500ppm和1000ppm)的实施例3所述组合物的给药组成，溶剂对照组加入含10％新生牛血清的DMEM，37℃、5％的CO2培养箱中孵育培养24h。孵育结束后，显微镜下观察细胞形态并拍照，见图2-1至2-4。
从图2-1至2-4可以看出，实施例3所述组合物在所测试的浓度下，细胞边缘轮廓清晰，形态规则，胞内无明显颗粒物，与溶剂对照组细胞状态无明显差异，证明实施例3所述组合物对细胞无毒性。
实验例2实施例1-2、实施例4-9以及对比例1所述组合物的细胞毒性研究
按照实验例1所述的方法，对实施例1-2、实施例4-9以及对比例1所述组合物的细胞毒性进行评价，其结果如表4所示。
表4实施例1-2实施例4-9以及对比例1所述组合物的细胞毒性试验
Figure BDA0002506716440000151
Figure BDA0002506716440000161
Figure BDA0002506716440000171
从表4可以看出，与溶剂对照相比，本实验例中所述组合物在所设置的8个浓度内对人成纤维细胞无明显细胞毒性。
实验例3抑痤疮致病菌试验
使用金黄色葡萄杆菌(SA)和痤疮丙酸杆菌(PA)对实施例3所述组合物的抑菌效果进行评价。
选定琼胶寡糖浓度为100ppm、500ppm、1000ppm作为本实验例的给药组成，进行考察。
本实验例中痤疮丙酸杆菌模式菌株(ATCC6919)和金黄色葡萄球菌菌株(ATCC6538)，均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)。
根据QB/T 2738-2012日化产品抗菌抑菌效果的评价方法，对实施例3所述组合物的抑菌效果进行定量测定。以下操作在超净工作台中进行。
①取5ml给药组成于灭菌试管中，20℃恒温5min，向试管中加入0.1mL菌液，迅速混匀并开始计时。
②作用至设定时间后，即QB/T 2738-2012中所述作用时间，取上述试验菌与样品的混合液0.5mL，加入到4.5mL经灭菌的PBS试管中，充分混匀。
③将样液进行适当稀释，取其中3个稀释度的稀释液1mL，置于灭菌平皿中，每个稀释度接种3个平皿。用凉至40℃左右的固体培养基倾注平皿，并充分混匀，待琼脂凝固后将平板转移至相应条件下进行培养，48h后进行活菌菌落计数，计算平均值，其中，SA培养的条件是(35±2)℃，培养(20±2)h。PA培养的条件是30℃，培养(20±2)h。
④以PBS代替实验样品进行上述操作，作为对照样品。以1mL PBS直接接种平皿并倾注培养基作为空白。
⑤抑菌率(％)＝(Ia-Ib)/Ia×100％
式中：Ia—对照样品的平均菌落数
Ib—试验样品的平均菌落数
⑥抑菌效果评价：当抑菌率≥90％时，样品有较强抑菌作用，当抑菌率在50％-90％之间时，样品有抑菌作用，当抑菌率＜50％时，样品无抑菌作用。
由试验结果如图3所示，从图3可以看到：根据悬液定量法的实验结果，从空白组平板上未观察到菌落生长，这说明试剂和培养基没有被污染，对照样品组平板上的菌落数与推算的数值大致相当，说明实验结果有效。
获得数据整理如表5。
表5对痤疮致病菌的抑菌率
Figure BDA0002506716440000181
从表5可以看出，实施例3所述组合物对PA和SA具有不同程度的抑制作用，且抑菌效果表现出时间和浓度依赖性。当琼胶寡糖浓度为100ppm时，其对PA和SA的抑菌率均小于50％，判定无抑菌作用；当琼胶寡糖浓度为500ppm时，其抑菌效果随作用时间的延长而加大，作用时间为20min和30min时，对PA的抑菌率分别为57.9％和77.4％，表现出对PA的抑制作用，对SA作用30min时，抑菌率为61.3％，有抑菌效果；当琼胶寡糖浓度为1000ppm时，其对PA和SA的抑菌率均在50％以上，且当其作用时间为30min时，对PA的表现出较强的抑菌作用，抑菌率达到94.7％。
实验例4实施例1-2、实施例4-9以及对比例1所述组合物的抑痤疮致病菌试验
按照实验例3所述的方法对实施例1-2、实施例4-9以及对比例1所述的组合物进行抑痤疮致病菌试验，其结果如表6所示。
表6实施例1-2、实施例4-9以及对比例1所述组合物对痤疮致病菌的抑菌率
Figure BDA0002506716440000182
Figure BDA0002506716440000191
从表6可以看出，实施例1-2以及实施例4-9所述的组合物对PA和SA具有不同程度的抑制作用，且抑菌效果表现出时间和浓度依赖性，其抑菌效果随着时间的延长和浓度的增加而增大，例如，当浓度为1000ppm时，在作用时间为30min时，实施例1-2所述的组合物对PA的抑菌率分别为97.5％和96.4％，对SA的抑菌率分别为82.0％和92.5％，实施例4-9所述的组合物对PA的抑菌率分别为94.5％、95.5％、86.2％、84.1％、66.3％和57.3％，对SA的抑菌率分别为74.3％、77.9％、74.8％、71.1％、55.6％和53.4％，这说明了本发明所述的组合物对PA和SA均有抑菌作用。
将对比例1和实施例5进行对比，其区别仅在于，对比例1所得到的组合物中不含有琼胶寡糖，而实施例5所述的组合物中含有琼胶寡糖，从表6的实验数据可以看出，实施例5所述的组合物在500ppm并作用20min以上以及在1000ppm并作用20min以上时，对PA有一定的抑菌作用，在500pmm并作用30min以及在1000ppm并作用20min以上时，对SA有一定的抑菌作用，而对比例1所得到的组合物对PA和SA均无抑菌作用。
综上所述，在所测试的浓度范围内，本发明所述组合物对人成纤维细胞的细胞活力以及细胞形态几乎没有影响，表现出一定的安全性。并且本发明所述的组合物对PA和SA具有一定的抑菌作用，即本发明所述的组合物具有优良的抗痤疮功效。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (10)

1.一种抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物，所述组合物包含琼胶寡糖、岩藻黄质、植物苷、表面活性剂、稳定剂和水。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中，以组合物为100总重量份计，所述琼胶寡糖为0.5-1.5份，优选为0.5-1份，较优选为0.8-1份；所述岩藻黄质为0.01-1.5份，优选为0.05-1.5份，较优选为0.05-1份；所述植物苷为0.01-1份，优选为0.5-1份，较优选为0.5-0.8份；所述表面活性剂为0.5-5份，优选为2-5份，较优选为3-5份；所述稳定剂为5-15份，优选为5-10份，较优选为5-8份；以及余量的水。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中，所述琼胶寡糖为琼寡糖或新琼寡糖，优选为新琼寡糖。
4.根据权利要求3所述的组合物，其中，所述新琼寡糖选自新琼二糖、新琼四糖、新琼六糖、新琼八糖、新琼十糖或新琼十二糖中的一种或两种以上，优选为新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖的组合物。
5.根据权利要求4所述的组合物，其中，以新琼寡糖总重量计，所述新琼二糖为60-80％，所述新琼四糖为5-15％，所述新琼六糖为10-30％。
6.根据权利要求1-5任一项所述的组合物，其中，所述植物苷选自黄芩苷、黄芪苷、芦荟苷、红景天苷、橙皮苷和三七苷中的一种或两种以上。
7.一种抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物的制备方法，其包括下述步骤：
将琼胶寡糖和植物苷加入水中得到A相；
将岩藻黄质和表面活性剂加入剩余的水中得到B相；
将所述B相加入到所述A相中搅拌，加入稳定剂，陈化得到所述组合物。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其中，在得到所述组合物的步骤中，所述搅拌的转速为60-300rpm，优选为100-300rpm；优选的，所述搅拌温度为20-60℃，优选为40-60℃。
9.权利要求1-6任一项所述的抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物或者权利要求7-8任一项所述的制备方法制备得到的抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物在人体护理领域中的应用，优选在化妆品领域中的应用，更优选在抗痤疮化妆品领域中的应用。
10.一种人体护理品组合物，包括权利要求1-6任一项所述的抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物或者权利要求7-8任一项所述的制备方法制备得到的抗痤疮的岩藻黄质-琼胶寡糖组合物，其中，以人体护理品组合物的总重量计，所述琼胶寡糖的浓度为0.01-0.5％。
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