CN111527065A - 油酰基-溶血磷脂酰肌醇(油酰基-lpi)的合成衍生物及其用途 - Google Patents

油酰基-溶血磷脂酰肌醇(油酰基-lpi)的合成衍生物及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及油酰基‑溶血磷脂酰肌醇(油酰基‑LPI)及其新的合成衍生物和用途，并且涉及包含这类化合物的药物组合物。本发明提供了糖调节性激素如胰高血糖素样肽‑1(GLP‑1)的活化剂和/或向上调节剂，更具体是GPR119的激动剂、部分激动剂和逆拮抗剂或者GLP‑1活性和/或合成和/或分泌的活化剂，包含它们的药物组合物，它们在治疗糖尿病、肥胖和其它代谢疾病中的用途。

Description

油酰基-溶血磷脂酰肌醇(油酰基-LPI)的合成衍生物及其 用途
技术领域
本发明涉及油酰基-溶血磷脂酰肌醇(油酰基-LPI)及其新的合成衍生物和用 途的领域，并且涉及包含这类化合物的药物组合物。在一个实例中，本发明还 涉及如下领域：糖调节性激素如胰高血糖素样肽-1(GLP-1)的活化剂和/或向上调 节剂，更特别是GPR119的激动剂、部分激动剂和逆拮抗剂或者GLP-1活性和/ 或合成和/或分泌的活化剂，以及包含它们的药物组合物和它们在治疗糖尿病、 肥胖和其它代谢疾病中的用途。
背景技术
以下背景技术的讨论仅意欲帮助理解本发明。所述讨论不是承认或认可任 意所述资料在本申请优先权日时是或已经是一般通用知识或公知常识的一部分。
代谢疾病如糖尿病和肥胖可以伴有长期高血糖和高脂血，它们一起可诱导 胰β-细胞中的代谢应激和可触发β-细胞凋亡途径的活化。例如，2型糖尿病的 特征在于胰岛素分泌和胰岛素敏感性两者的缺陷，伴有长期高血糖和高脂血， 它们最终导致上述的应激和β-细胞凋亡途径活化。
虽然胰脏已经是胰岛素分泌和葡萄糖内稳态的焦点以避免代谢疾病的发作， 但是，由于胃肠(GI)道在递送葡萄糖至循环中的作用和由于GI道在分泌多种糖 调节性激素中的作用，近来已经日益增多地将GI道视为葡萄糖代谢的重要器官。 这类由GI道分泌的糖调节性激素的实例包括胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和葡萄 糖依赖性促胰岛素肽(GIP)，它们各自有助于调节葡萄糖代谢，可以在胰岛素分 泌和葡萄糖内稳态中发挥重要作用，因此可以在避免、例如预防代谢疾病的发 作或在治疗代谢疾病如糖尿病(如2型糖尿病)和肥胖中发挥重要作用。
GLP-1激素在餐后从肠释放，其以葡萄糖依赖性方式刺激胰β-细胞分泌胰 岛素。迄今，代谢疾病如糖尿病(如2型糖尿病)和肥胖的基于GLP-1的预防性和 /或治疗性策略已经聚焦于施用外源性GLP-1或聚焦于靶向于导致内源性GLP-1 分泌增加(而不是施用外源性GLP-1)的选项。聚焦于增加内源性GLP-1分泌的早 期方法包括已经用于治疗2型糖尿病患者的GLP-1模拟物。但是，这类模拟物 的使用已经增加了多个重要的公共健康问题，因为它们的使用已经伴有胰腺炎 和/或甲状腺髓样癌的发作(Drucker,D.J.,等人(2010),Diabetes Care,第33(2)卷, 第428–433页)。
GLP-1的葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)还可以受到某些氨基酸、某些脂肪 酸和某些脂质的调节。但是，大部分内源性GLP-1分泌可能通过G-蛋白偶联受 体(GPCR)如G-蛋白偶联受体119(GPR119)和G-蛋白偶联受体120(GPR120)来 介导。
GPR119是GPCR的A类家族的成员。该受体与长链脂肪酸、包括油酰基 乙醇酰胺(OEA)和溶血磷脂酰胆碱(LPC)结合。已经在多种组织中报道了GPR119 mRNA的表达，包括脑、心脏、胰脏、脾脏和胃。最高水平的GPR119表达发 生在朗格汉斯岛(islets ofLangerhans)、β-细胞系(如胰岛β-细胞)和肠L-细胞中。 而且，已经证明GPR119的激活正性调节在大鼠中引起食物摄入减少和体重增 加减少的肠降血糖素和胰岛素激素分泌(Overton,H.A.,等人(2006)Cell Metabolism,第3(3)卷,第167–75页；Reimer,R.A.等人(2001)Endocrinology,第 142(10)卷,第4522–8页)。该激活被证明与GLP-1、GIP的分泌增加和葡萄糖刺 激的胰岛素释放增加相关。
现在，在本领域需要用于治疗代谢疾病如糖尿病(如2型糖尿病)和/或肥胖 的供选的和/或改善的策略。例如，在本领域需要基于增加内源性GLP-1分泌而 不是施用外源性GLP-1的用于治疗和/或预防这类代谢疾病的供选的和/或改善 的策略。
在本领域还需要鉴别新的糖调节性激素如GLP-1的活化剂和/或向上调节剂 和需要包含这类GLP-1活化剂和/或向上调节剂的药物组合物。例如，在本领域 仍然需要鉴别能够体外和体内诱导和/或增加GLP-1活性和/或合成和/或分泌的 GPR119激动剂、部分激动剂和逆拮抗剂和需要包含这类激动剂、部分激动剂和 逆拮抗剂的药物组合物。这些GLP-1活化剂和/或向上调节剂以及包含这些 GLP-1活化剂和/或向上调节剂的药物组合物具有用于代谢疾病如糖尿病(如2型 糖尿病)和/或肥胖的非常需要的疗法中的潜能。
针对此背景，已经开发了本发明。更特别地，本发明寻求克服或至少是改 善上述现有技术的一种或多种缺陷或者给消费者提供有用的或商业的选择。
发明概述
本发明提供了涉及具有油酸的单价羰基基团的溶血磷脂(溶血磷脂酰肌醇(LPI))的通常应用的成分、包括其衍生物和类似物以及它们作为G-蛋白偶联受体 119(GPR119)活性和特别是GLP-1分泌的介导剂的用途。本发明来自发明人的 如下发现：GI道的肠内分泌L细胞的油酰基-LPI分泌和/或合成诱导和/或增加 了GPR119活性，并且该活性可通过油酰基-LPI、本文制备和/或鉴别的其衍生 物或类似物化合物和/或其组合物进行调节。
本文给出的研究的另一个预料不到的和出人意料的发现是，油酰基-LPI诱 导GLP-1分泌的效率高于已鉴别的GPR119配体OEA。这些数据显示与其他研 究组进行的早期研究不同，所述早期研究做出如下结论：当在相同浓度测试时， OEA诱导强得多的GLP-1分泌。而且，发明人已经发现，油酰基-LPI诱导的 GLP-1分泌以非葡萄糖依赖的方式发生。
另外，发明人已经发现：当用油酰基-LPI刺激时，采用siRNA技术进行的 GPR119向下调节损害了GLP-1分泌，表明GPR119牵涉在LPI介导的GLP-1 分泌中。
总之，本文给出的工作的结果尤其证明：油酰基-LPI牵涉在LPI分泌、例 如肠内分泌L-细胞的LPI分泌中。所述结果进一步证明：如本文通篇所述的本 发明的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI可用于促进GLP-1分泌、例如 肠内分泌L-细胞的GLP-1分泌。
本文显示的工作提示：油酰基-LPI和如本文所述的本发明的化合物或其盐 或溶剂合物诱导和/或增加(提高)了例如肠内分泌细胞的内源性GLP-1合成和/或 分泌，在改善葡萄糖内稳态、例如在其中葡萄糖内稳态不合格的代谢疾病、例 如肥胖和/或糖尿病如2型糖尿病中具有作用。
因此，在一个宽的和概括的形式中，本发明提供了用于激活和/或向上调节 糖调节性激素的化合物(包括其可药用盐)、组合物(包括其治疗组合物或药物组 合物)和方法。特别地，其提供了用于治疗GPR119相关性疾病、障碍或病症的 方法。更特别地，本发明在于具有油酸的单价羰基基团的溶血磷脂(溶血磷脂酰 肌醇(LPI))、包括其衍生物和类似物(如油酰基-LPI及其衍生物或类似物化合物) 在体外和/或体内、例如在胰腺细胞和/或GI道细胞如L细胞中作为GPR119激 动剂、部分激动剂或逆拮抗剂以治疗代谢疾病的用途。
如本文所讨论的“GPR119相关性疾病、障碍或病症”或“代谢疾病”可以包括 (作为解释而非限制性)：高脂血、肥胖、1型糖尿病、2型糖尿病、特发性1型 糖尿病(Ib型)、成人隐匿性自身免疫性糖尿病(LADA)、早发性2型糖尿病(EOD)、 青年起病非典型糖尿病(YOAD)、青年成熟期发病型糖尿病(MODY)、营养不良 相关性糖尿病、妊娠糖尿病、动脉粥样硬化、动脉硬化、心血管疾病、中风、 脑血管缺血、心脏疾病、冠心病、缺血性心脏病、绞痛和心脏病发作、非酒精 性脂肪肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、脂肪肝、肝纤维化、肝硬化、肝癌(HCC)、与铁超负荷障碍相关的肝疾病和酒精性肝疾病、冠心病、缺 血性中风、血管成形术后再狭窄、外周血管病、间歇性跛行、心肌梗塞(例如坏 死和凋亡)、血脂异常症、餐后脂血症、葡萄糖耐量受损病症(IGT)、禁食血浆葡 萄糖受损病症、代谢性酸中毒、酮病、关节炎、肥胖、骨质疏松症、高血压、 充血性心力衰竭、左心室肥大、外周动脉疾病、糖尿病性视网膜病、黄斑变性、 白内障、糖尿病性肾病、肾小球硬化、慢性肾衰竭、糖尿病性神经病、代谢综 合征、X综合征、经前期综合征、冠心病、心绞痛、血栓形成、动脉粥样硬化、 心肌梗塞、短暂缺血发作、中风、血管再狭窄、高血糖、高胰岛素血症、高脂 血、高甘油三酯血症(hypertrygliceridemia)、抗胰岛素性、葡萄糖代谢受损、葡 萄糖耐量受损病症、空腹血浆葡萄糖受损病症、肥胖、勃起功能障碍、皮肤和 结缔组织疾病、足溃疡和溃疡性结肠炎、内皮功能障碍和血管顺应性受损。
在一个优选的形式中，本发明涉及用于制备药剂或用于提供疗法以改善或 治疗代谢疾病如糖尿病(如2型糖尿病)和/或肥胖的治疗(或药物)有效量的油酰基 -LPI、本文制备和/或鉴别的其衍生物或类似物化合物和/或其组合物。
在另一个优选的形式中，本发明涉及在代谢疾病如糖尿病(如2型糖尿病) 和/或肥胖的预防和/或治疗中施用治疗或药物有效量的油酰基-LPI或本文制备 和/或鉴别的其衍生物或类似物化合物和/或其组合物的方法。
另外或供选地，本发明提供了预防、抑制或改善GPR119相关性疾病、障 碍或病症的病状和/或症状的方法，该方法包括给动物施用治疗或药物有效量的 本发明的化合物或其可药用盐。
根据本发明，油酰基-LPI衍生化合物具有亲水性头单元、连接基和亲脂性 尾，其为GPR119的配体内源性油酰基-LPI的直接或间接衍生物，它们有效地 调节GPR119活性。例如，发明人已经制备和/或鉴别了油酰基-LPI的包含亲水 性头单元、简化连接基(例如但不限于苯基酰胺)和亲脂性尾的合成衍生物，并且 发现它们特别有效地调节GPR119活性。在此方面，发明人已经制备和/或鉴别 了调节GPR119活性的直接或间接衍生自油酰基-LPI的新的合成油酰基-LPI衍 生化合物和/或组合物。
另外，发明人已经发现：本文产生的合成化合物可以以比油酰基-LPI少的 步骤进行化学合成，并且一旦产生，这些化合物可以比化学合成的油酰基-LPI 更稳定。例如，本发明的化合物可以以克规模量、以相对于油酰基-LPI更少的 步骤进行合成。在一些实例中，本发明的化合物可以以克规模量、由可市售获 得的原料以两个或三个步骤进行合成。因此，本发明的合成化合物相对于使用 任何GPR119内源性配体而言提供了显著的商业优点。
在本发明的特定实施方案中，油酰基-LPI或本文制备和/或鉴别的其衍生物 或类似物化合物和/或其组合物和/或本文制备和/或鉴别的组合物还可用于在罹 患代谢疾病如糖尿病(如2型糖尿病)和/或肥胖的患者中增加内源性GLP-1分泌 和/或合成和/或活性和改善葡萄糖内稳态。在此方面，发明人还已经发现：在体 外在鼠和人L-细胞中和在活体外混合结肠原代细胞制备物中，油酰基-LPI刺激 GLP-1的释放和/或合成和/或活性。因此，本发明的化合物能够诱导和/或增加 GI道细胞的GLP-1分泌和/或合成。因此，作为本文的举例，本发明的化合物还 用作能够在体外、体外和/或活体外诱导和/或增加GLP-1分泌和/或合成的化合 物。
不限于理论，发明人相信：GLP-1活性产生于作为GPR119激动剂、部分激 动剂或逆拮抗剂发挥作用的本发明的化合物，例如在胰腺细胞和/或GI道细胞中。 特别地，如本文所解释，发明人已经采用了siRNA技术来向下调节GPR119和 GPR55，并且已经证明：当用油酰基-LPI刺激时，siRNA GPR119-转染细胞、而 不是siRNA GPR55的GLP-1分泌和/或合成受损。该发现证明：GPR119牵涉在 LPI介导的GLP-1分泌和/或合成中，提供了表明GPR119活化在GLP-1分泌和/ 或合成和/或活化、优选GLP-1分泌中的作用的显著优点。
另外，如本文所解释，发明人已经将油酰基-LPI鉴别为GPR119、而不是 GPR55的内源性配体。发明人已经证明：油酰基-LPI能够以高于已知的GPR119 配体油酰基乙醇酰胺(OEA)的效力诱导GLP-1分泌。如本文所解释，发明人已 经进一步证明：ERK的磷酸化、蛋白激酶A(PKA)的激活和环AMP-效应元件结 合蛋白(CREB)的刺激构成了涉及油酰基-LPI诱导的GLP-1分泌和/或合成的潜 在信号传导途径。优选地，PKA的激活和CREB的刺激构成了涉及油酰基-LPI 诱导的GLP-1分泌和/或合成的潜在信号传导途径。
因此，在本发明的实施方案中，上述油酰基-LPI衍生化合物当单独或组合 时可用于在体外和/或体内诱导和/或增加GLP-1分泌和/或合成和/或活性。例如， 本发明人已经制备和/或鉴别了诱导GLP-1分泌、例如GI道细胞如肠细胞如鼠 和/或人L细胞的GLP-1分泌的化合物和/或组合物。更特别地，发明人已经鉴别 和/或制备了在体外和/或体内、例如在胰腺细胞和/或在GI道细胞如L细胞中能 够通过激动、部分激动或逆拮抗GPR119活性来诱导和/或增加GLP-1分泌和/ 或合成和/或活性的化合物和组合物。
本发明的特定方面
本发明的范围由随本申请提交的在实施例之后的权利要求将是显而易见的。 随本申请提交的权利要求在此引入说明书中。本发明的范围由下述具体实施方 案的记载和/或优选实施方案的详述将是显而易见的。
在第一个方面，提供了式I化合物或其盐或溶剂合物：
(I)
Figure BDA0002472968040000061
其中:
(i)“间隔基”表示C5-8芳基、具有1至2个杂原子的C3杂环、具有1至3个杂 原子的C4杂环、具有1至4个杂原子的C5杂环、具有1至5个杂原子的 C6杂环、C2-8烷基链、C2-8烯基链或C2-8炔基链；
(ii)“连接基”表示酰胺、酯、醚、硫醚、酮、亚砜、砜、氨甲酸酯、碳酸酯、 胺、亚胺或磺酰胺；
(iii)R1表示H、OH、CN、酯、醚、C1-8烷基链、C1-8烯基链、C1-8炔基链、醛、 卤素、羧酸、四唑、N(1)-烷基化四唑或其盐、N(2)-烷基化四唑或其盐、 C5-6芳基、具有1至2个杂原子的C3杂环、具有1至3个杂原子的C4杂 环、具有1至4个杂原子的C5杂环或具有1至5个杂原子的C6-8杂环；
(iv)R2表示H、OH、CN、酯、醚、C1-8烷基链、C1-8烯基链、C1-8炔基链、醛、 卤素、羧酸、四唑、N(1)-烷基化四唑或其盐、N(2)-烷基化四唑或其盐、 C5-6芳基、具有1至2个杂原子的C3杂环、具有1至3个杂原子的C4杂 环、具有1至4个杂原子的C5杂环或具有1至5个杂原子的C6-8杂环；和
(v)R3表示C4-24不饱和脂肪酸链或C3-38饱和脂肪酸链。
在研发本发明中，发明人生产了一系列式I化合物(如本文所述)，并且已经 证明那些化合物各自能够激活和/或向上调节糖调节性激素。特别地，它们能够 改善、更特别是诱导和/或增加GPR119活性，后者在体外在鼠和人L-细胞中刺 激GLP-1释放。该结果证明：如根据任意宽方面或其实施方案或实例或实施例 所述的式I化合物或其盐或溶剂合物能够诱导和/或增加GPR119活性和作为一 个结果能够诱导GLP-1分泌和生物合成，例如通过与内源性油酰基-LPI相似的 机制。该数据证实了油酰基-LPI和式I化合物或其盐或溶剂合物改善或治疗代谢 疾病如糖尿病(如2型糖尿病)和/或肥胖和特别是提供调节葡萄糖代谢和维持葡 萄糖内稳态的手段的作用。
在一些实例中，其中R3表示C4-24不饱和脂肪酸链，选自巴豆酸或其衍生物、 肉豆蔻脑酸或其衍生物、棕榈油酸或其衍生物、sapienic acid或其衍生物、油酸 或其衍生物、反油酸或其衍生物、异油酸或其衍生物、鳕烯酸(gadoleic acid)或 其衍生物、二十碳烯酸或其衍生物、芥酸或其衍生物、神经酸或其衍生物、亚 油酸或其衍生物、二十碳二烯酸或其衍生物、二十二碳二烯酸或其衍生物、亚 麻酸或其衍生物、松油酸(pinolenic acid)或其衍生物、桐酸或其衍生物、米德酸 (mead acid)或其衍生物、二高-γ-亚麻酸或其衍生物、二十碳三烯酸或其衍生物、 十八碳四烯酸或其衍生物、花生四烯酸或其衍生物、二十碳四烯酸或其衍生物、 肾上腺酸或其衍生物、十八碳五烯酸(bosseopentaenoic acid)或其衍生物、二十碳 五烯酸或其衍生物、ozubondo acid(还已知为osbond acid)或其衍生物、沙丁酸 (sardine acid)(还已知为鰶鱼酸)或其衍生物、二十四醇五烯酸(tetracosanolpentaenoic acid)或其衍生物、二十二碳六烯酸或其衍生物和鲱鱼酸(herring acid)或其衍生物。
在一些这类优选实例中，R3表示不饱和脂肪酸链，选自巴豆酸、肉豆蔻脑 酸、棕榈油酸、sapienic acid、油酸、反油酸、异油酸、鳕烯酸、二十碳烯酸、 芥酸、神经酸、亚油酸、二十碳二烯酸、二十二碳二烯酸、亚麻酸、松油酸、 桐酸、米德酸、二高-γ-亚麻酸、二十碳三烯酸、十八碳四烯酸、花生四烯酸、 二十碳四烯酸、肾上腺酸、十八碳五烯酸(bosseopentaenoic acid)、二十碳五烯酸、 ozubondo acid、沙丁酸、二十四醇五烯酸、二十二碳六烯酸和鲱鱼酸。
在其它实例中，R3表示C3-38饱和脂肪酸链，选自丙酸或其衍生物、丁酸或 其衍生物、戊酸或其衍生物、己酸或其衍生物、庚酸(还已知为庚烷酸)或其衍生 物、辛酸或其衍生物、壬酸(还已知为壬烷酸)或其衍生物、癸酸(还已知为癸烷 酸)或其衍生物、十一酸或其衍生物、月桂酸或其衍生物、十三酸或其衍生物、 肉豆蔻酸或其衍生物、十五酸或其衍生物、棕榈酸或其衍生物、十七烷酸或其 衍生物、硬脂酸或其衍生物、十九烷酸或其衍生物、二十烷酸(archidic acid)或其 衍生物、二十一烷酸(heneicosylic acid)或其衍生物、山嵛酸或其衍生物、二十三 烷酸(tricosylic acid)或其衍生物、二十四烷酸或其衍生物、二十五烷酸 (pentacosylic acid)或其衍生物、蜡酸或其衍生物、二十七烷酸(heptacosylicacid) 或其衍生物、褐煤酸或其衍生物、二十九烷酸(nonacosylic acid)或其衍生物、蜂花酸或其衍生物、三十一烷酸(henatriacontylic acid)或其衍生物、紫胶蜡酸或其 衍生物、叶虱酸(psyllic acid)或其衍生物、三十四烷酸(geddic acid)或其衍生物、 三十五烷酸(ceroplastic acid)或其衍生物、三十六烷酸(hexatriacontylic acid)或其 衍生物、三十七烷酸(heptatriacontanoic acid)或其衍生物和三十八烷酸 (octatriacontanoicacid)或其衍生物。
在一些这类优选实例中，R3表示饱和脂肪酸链，选自丙酸、丁酸、戊酸、 己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、十一酸、月桂酸、十三酸、肉豆蔻酸、十五 酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、十九烷酸、二十烷酸、二十一烷酸、山嵛酸、 二十三烷酸、二十四烷酸、二十五烷酸、蜡酸、二十七烷酸、褐煤酸、二十九 烷酸、蜂花酸、三十一烷酸、紫胶蜡酸、叶虱酸、三十四烷酸、三十五烷酸、 三十六烷酸、三十七烷酸和三十八烷酸。
在特别优选的实例中，R3表示棕榈酰基(palmityl)、油酰基或亚油酰基(linoleyl)。
在其它实例中，R1可以是选自苯并咪唑、苯并噻唑、吲唑的杂环。或者或 另外地，R1可以是选自苯并咪唑、苯并噻唑、吲唑的杂环。
在一些实例中，连接基可以优选是酰胺、酯、醚或氨甲酸酯连接基。
在根据其所述任意方面的化合物或盐或溶剂合物的一些示例性实施方案中， 化合物具有式II结构：
(II)
Figure BDA0002472968040000081
其中,
(i)“连接基”表示酰胺、酯、醚或氨甲酸酯；
(ii)R1表示H、卤素、C1-8烷基链；C1-8烯基链、C1-8炔基链、C5-6芳基、具有1 至4个杂原子的C5-8杂环；
(iii)R2表示OH、CN、OMe、CO2H、CO2Me、四唑、N(2)-甲基四唑、N(1)-甲 基四唑、四唑酸钠、三唑、咪唑、包含NH和1至4个杂原子的C5-6 N-杂 环；和 (iv)R3表示脂肪酸链，选自油酸或其衍生物、亚油酸或其衍生物、肉豆蔻脑酸 或其衍生物、棕榈油酸或其衍生物、sapienic acid或其衍生物、反油酸或其 衍生物、异油酸或其衍生物、反式亚油酸(linoelaidic acid)或其衍生物、α- 亚麻酸或其衍生物、芥酸或其衍生物、花生四烯酸或其衍生物、二十碳五 烯酸或其衍生物和二十二碳六烯酸或其衍生物。
优选地，R3可以表示脂肪酸链，选自油酸、亚油酸、肉豆蔻脑酸、棕榈油 酸、sapienic acid、反油酸、异油酸、反式亚油酸、α-亚麻酸、芥酸、花生四烯 酸、二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸。
在一个这类示例性实施方案中，化合物具有表示卤素、C1-8烷基链、C1-8烯 基链、C1-8炔基链、C5-6芳基、具有1至4个杂原子的C5-8杂环的R1和表示咪唑、 包含NH和1至4个杂原子的C5-6 N-杂环的R2。优选地，R1表示处于R2的杂环 的间位的卤素，和R2是包含NH和1至4个杂原子的C5-6 N-杂环。可以理解， 该示例性实施方案的化合物具有本发明人所示例的那些化合物的取代基的强化 学相似性，以具有强的诱导和/或增加GI道细胞的GLP-1分泌的活性。
在根据其所述任意方面的化合物或盐或溶剂合物的一些示例性实施方案中， 化合物具有式II结构：
(II)
Figure BDA0002472968040000091
其中,
(i)“连接基”表示酰胺、酯、醚或氨甲酸酯；
(ii)R1表示H、卤素、C1-8烷基链；
(iii)R2表示OH、CN、OMe、CO2H、CO2Me、四唑、N(2)-甲基四唑、N(1)-甲 基四唑、四唑酸钠或三唑；和 (iv)R3表示油酰基、亚油酰基(linoleoyl)或棕榈酰基(palmitoyl)。
在一个特定实例中，根据该实施方案，R1表示处于R2的三唑的间位的卤素 或表示C1-8烷基链，和R2表示包含具有NH的极性头基的三唑。而且，R3表示 油酰基或亚油酰基。可以理解，R1位置中的三唑享有与本文中被证明能够强烈 诱导和/或增加GI道细胞的GLP-1分泌的化合物中存在的四唑相似的化学特性。 例如，三唑和四唑均含有氢键受体和一个酸性氢键供体。
在根据其所述任意方面的化合物或盐或溶剂合物的其它示例性实施方案中， 化合物具有式II结构：
(II)
Figure BDA0002472968040000101
其中
(i)“连接基”表示酰胺、酯、醚或氨甲酸酯；
(ii)R1表示H、卤素、C1-8烷基链；
(iii)R2表示OH、CN、OMe、CO2H、CO2Me,四唑、N(2)-甲基四唑、N(1)-甲基 四唑或四唑酸钠；和
(iv)R3表示油酰基、亚油酰基或棕榈酰基。
在一个特定实例中，根据该实施方案，R1表示处于R2的四唑的间位的卤素 或表示C1-8烷基链。R2表示四唑。而且，R3表示油酰基或亚油酰基。可以理解， 这些取代基与本文中被证明强烈诱导和/或增加GI道细胞的GLP-1分泌的化合 物中存在的那些取代基相似或相同。
在根据其所述任意方面的化合物或盐或溶剂合物的其它示例性实施方案中， 化合物具有式II结构：
(II)
Figure BDA0002472968040000102
其中
(i)“连接基”是。
(ii)R1表示H或卤素，其中卤素是氟。
(iii)R2表示OH、CN、OMe、CO2H、CO2Me、四唑、N(2)-甲基四唑、N(1)-甲 基四唑或四唑酸钠。
(iv)R3表示油酰基、亚油酰基或棕榈酰基。
在化合物或其盐或溶剂合物的一个这类示例性实施方案中，化合物选自具 有如下式III至XXIII所示的结构的化合物：
Figure BDA0002472968040000111
Figure BDA0002472968040000121
Figure BDA0002472968040000131
在根据任意方面或其所述实施方案或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂 合物的一个优选实例中，化合物选自式VI、XII、XVI和XVIII的化合物：
Figure BDA0002472968040000132
在根据任意方面或其所述实施方案或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂 合物的一个实例中，化合物是式VI化合物：
Figure BDA0002472968040000133
在根据任意方面或其所述实施方案或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂 合物的另一个实例中，化合物是式XII化合物：
Figure BDA0002472968040000134
在根据任意方面或其所述实施方案或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂 合物的另一个实例中，化合物是式XVI化合物：
Figure BDA0002472968040000141
在根据任意方面或其所述实施方案或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂 合物的另一个实例中，化合物是式XVIII化合物：
Figure BDA0002472968040000142
在根据第一个宽方面的本发明的一个形式中，根据该方面的化合物或其盐 或溶剂合物是式I化合物的盐。
在一个示例性实施方案中，式I化合物具有作为四唑的R1和/或R2。在一个 这类示例性实施方案中，式I化合物具有作为四唑的R1和/或作为四唑的R2。例 如，当R1和/或R2独立地是N(1)-烷基化四唑或N(2)-烷基化四唑时，式I化合物 的盐可以是脱质子化四唑的盐。
在本发明的另一个示例性形式中，根据其任意宽方面、实施方案或实例或 实施例的化合物或其盐或溶剂合物是式I化合物的溶剂合物。
在一些示例性实施方案中，根据该方面的化合物或盐或溶剂合物是油酰基- 溶血磷脂酰肌醇(油酰基-LPI)的衍生物。例如，化合物或盐或溶剂合物直接或间 接地由油酰基-LPI合成产生。或者或另外地，根据该方面的化合物或盐或溶剂 合物是油酰基-LPI类似物，例如油酰基-LPI的合成类似物。
在一些实例中，根据该方面的化合物或盐或溶剂合物能够与GPR119结合。 例如，化合物或盐或溶剂合物结合GPR119。优选地，根据该方面的化合物或盐 或溶剂合物可以是GPR119的配体。
在一些示例性实施方案中，根据该方面或如本文所述的任意实施方案或任 意实例或实施例的化合物或盐或溶剂合物在活体外或体内、例如在GI道细胞中 是GPR119表达和/或活性的激动剂和/或部分激动剂和/或逆拮抗剂。在一些实例 中，化合物或盐或溶剂合物能够例如在GI道细胞如人和/或鼠L细胞和/或胰β 细胞中在体内和/或体外激动和/或部分激动和/或逆拮抗GPR119的表达和/或活 性。在其它实例中，化合物或盐或溶剂合物在体外或活体外、例如在GI道细胞 中激动和/或部分激动和/或逆拮抗GPR119的表达和/或活性。例如，化合物或盐 或溶剂合物在体内和/或体外在人和/或鼠L细胞和/或胰β细胞中激动和/或部分 激动和/或逆拮抗GPR119的表达和/或活性。
在一些示例性实施方案中，根据该方面或如本文所述的任意实施方案或任 意实例或实施例的化合物或盐或溶剂合物用于治疗GPR119相关性疾病、障碍 或病症的方法。在一个优选的形式中，本发明涉及用于制备药剂或用于提供疗 法以改善或治疗代谢疾病如糖尿病(如2型糖尿病)和/或肥胖的治疗(或药物)有效 量的油酰基-LPI、本文制备和/或鉴别的其衍生物或类似物化合物和/或其组合物。 在供选的优选形式中，本发明涉及在代谢疾病如糖尿病(如2型糖尿病)和/或肥 胖的预防和/或治疗中施用治疗或药物有效量的油酰基-LPI或本文制备和/或鉴 别的其衍生物或类似物化合物和/或其组合物的方法。
具体而言，本发明提供了预防、抑制或改善GPR119相关性疾病、障碍或 病症的病状和/或症状的方法，该方法包括给动物施用治疗或药物有效量的本发 明的化合物或其可药用盐。如本文所讨论的，作为非限制性的解释说明，GPR119 相关性疾病、障碍或病症可以包括：肥胖、1型糖尿病、2型糖尿病、高脂血、 特发性1型糖尿病、成人隐匿性自身免疫糖尿病、早发性2型糖尿病、青年起 病非典型糖尿病、青年成年发病型糖尿病、营养不良相关性糖尿病、妊娠糖尿 病、动脉粥样硬化、动脉硬化、心血管疾病、中风、脑血管缺血、心脏疾病、冠心病、缺血性心脏病、绞痛和心脏病发作、NAFLD、NASH、脂肪肝、肝纤 维化、肝硬化、HCC、与铁超负荷障碍相关的肝疾病和酒精性肝疾病，在受治 疗者中。
在一些更优选的示例性实施方案中，根据该方面或如本文所述的任意实施 方案或任意实例或实施例的化合物或盐或溶剂合物能够诱导和/或增加GLP-1的 分泌和/或合成和/或活性。例如，化合物或盐或溶剂合物能够例如在活体外和/ 或体内在GI道细胞、例如人和/或鼠L细胞和/或胰β细胞中诱导和/或增加GLP-1 分泌和/或合成和/或活性。在一个这类实例中，化合物或盐或溶剂合物能够在体 内和/或体外在人和/或鼠L细胞和/或胰β细胞中诱导和/或增加GLP-1分泌和/ 或合成和/或活性。在一个特别优选的实例中，化合物或盐或溶剂合物诱导和/或 增加GLP-1的分泌和/或合成和/或活性，如上文所述。在一个特别优选的实例中， 化合物或盐或溶剂合物在体内和/或体外在GI道细胞、例如在人和/或鼠L细胞 和/或胰β细胞中诱导和/或增加GLP-1分泌。
在第二个方面，提供了药物组合物，其包含至少一种根据第一个方面或其 任意其它宽方面或实施方案或实例或实施例的化合物或盐或溶剂合物。或者或 另外地，药物组合物还进一步包含油酰基-LPI或其可药用盐或溶剂合物。优选 地，根据该方面的药物组合物进一步包含可药用载体和/或赋形剂和/或稀释剂。
在根据该第二个方面的一个特别优选的实施方案中，药物组合物包含根据 第一个方面及其任意实施方案实例的化合物或盐或溶剂合物。优选地，盐或溶 剂合物是可药用的。还优选地，根据该实施方案的药物组合物还包含可药用载 体和/或赋形剂和/或稀释剂。
在第三个方面，提供了激动和/或部分激动和/或逆拮抗细胞中GPR119的方 法，该方法包括使能够表达GPR119的细胞与有效量的本文通篇所述的根据第 一个方面或其任意实施方案或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油 酰基-LPI或其盐或溶剂合物和/或根据第二个方面或实施方案或实例或实施例的 药物组合物接触。
接触可以在活体外和/或体内进行。而且，细胞可以是胰细胞或GI道细胞， 例如细胞是L-细胞或胰β细胞。
在一个实例中，该方法包括使细胞与根据第一个方面的化合物或盐或溶剂 合物接触。
在另一个实例中，该方法包括使细胞与有效量的油酰基-LPI或其盐或溶剂 合物接触。
在另一个实例中，该方法包括使细胞与有效量的根据第二个宽方面的药物 组合物接触。
在上述各实例中，该方法用于改善或治疗GPR119相关性疾病、障碍或病 症如糖尿病(如2型糖尿病)和/或肥胖。
在供选的优选形式中，本发明涉及在代谢疾病如糖尿病(如2型糖尿病)和/ 或肥胖的预防和/或治疗中施用治疗或药物有效量的油酰基-LPI或本文制备和/ 或鉴别的其衍生物或类似物化合物和/或其组合物的方法。特别地，本发明提供 了预防、抑制或改善GPR119相关性疾病、障碍或病症的病状和/或症状的方法， 该方法包括给动物施用治疗或药物有效量的本发明的化合物或其可药用盐。如 本文所讨论，作为非限制性的解释说明，GPR119相关性疾病、障碍或病症可以 包括：高脂血、肥胖、1型糖尿病、2型糖尿病、特发性1型糖尿病(Ib型)、成 人隐匿性自身免疫性糖尿病(LADA)、早发性2型糖尿病(EOD)、青年起病非典 型糖尿病(YOAD)、青年成熟期发病型糖尿病(MODY)、营养不良相关性糖尿病、 妊娠糖尿病、动脉粥样硬化、动脉硬化、心血管疾病、中风、脑血管缺血、心 脏疾病、冠心病、缺血性心脏病、绞痛和心脏病发作、非酒精性脂肪肝疾病 (NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、脂肪肝、肝纤维化、肝硬化、肝癌(HCC)、 与铁超负荷障碍相关的肝疾病和酒精性肝疾病、冠心病、缺血性中风、血管成 形术后再狭窄、外周血管病、间歇性跛行、心肌梗塞(例如坏死和凋亡)、血脂异 常症、餐后脂血症、葡萄糖耐量受损病症(IGT)、空腹血浆葡萄糖受损病症、代 谢性酸中毒、酮病、关节炎、肥胖、骨质疏松症、高血压、充血性心力衰竭、 左心室肥大、外周动脉疾病、糖尿病性视网膜病、黄斑变性、白内障、糖尿病 性肾病、肾小球硬化、慢性肾衰竭、糖尿病性神经病、代谢综合征、X综合征、 经前期综合征、冠心病、心绞痛、血栓形成、动脉粥样硬化、心肌梗塞、短暂 缺血发作、中风、血管再狭窄、高血糖、高胰岛素血症、高脂血、高甘油三酯 血症、抗胰岛素性、葡萄糖代谢受损、葡萄糖耐量受损病症、空腹血浆葡萄糖 受损病症、肥胖、勃起功能障碍、皮肤和结缔组织疾病、足溃疡和溃疡性结肠炎、内皮功能障碍和血管顺应性受损。
在第四个方面，提供了诱导和/或增加细胞中GLP-1分泌和/或合成和/或活 性的方法，该方法包括使能够分泌和/或表达GLP-1的细胞与有效量的根据第一 个方面或其任意实施方案或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰 基-LPI或其盐或溶剂合物和/或根据第二个宽方面或其任意实施方案或实例或实 施例的药物组合物接触。
在一个实例中，当细胞与化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或其盐 或溶剂合物和/或药物组合物接触时，从细胞中分泌出GLP-1。在另一个实例中， 通过所述接触，从细胞分泌的细胞GLP-1增加。在一个优选的实例中，细胞与 有效量的根据第一个方面的化合物或其盐或溶剂合物接触。在另一个实例中， 细胞与有效量的油酰基-LPI或其盐或溶剂合物接触。
例如，所述与细胞的接触在活体外和/或体内进行。或者或另外地，细胞是 胰细胞或GI道细胞，例如细胞是L-细胞或胰β细胞。
在第五个方面，提供了激动和/或部分激动和/或逆拮抗细胞中GPR119的方 法，该方法包括使包含GPR119或已经表达GPR119的细胞与有效量的本文通篇 所述的根据第一个方面、起实施方案或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂合 物和/或油酰基-LPI或其盐或溶剂合物和/或根据第二个方面或实施方案或实例 或实施例的药物组合物接触。例如，所述接触在活体外和/或体内进行。在一个 这类实例中，其中细胞是胰细胞或GI道细胞，例如细胞是L-细胞或胰β细胞。 在一个实例中，该方法包括使细胞与根据第一个宽方面的化合物或盐或溶剂合 物接触。在另一个实例中，该方法包括使细胞与有效量的油酰基-LPI或其盐或 溶剂合物接触。在另一个实例中，该方法包括使细胞与有效量的根据第二个宽 方面的药物组合物接触。
在本文所述的根据第三、第四和第五个方面的方法的一些实例中，所述方 法各自可以在患有或被怀疑患有代谢疾病或处于发生代谢疾病的风险中的受治 疗者中进行。例如，代谢疾病选自肥胖和糖尿病如2型糖尿病。
在本文所述的根据第三、第四和第五个方面的方法的其它实例中，所述方 法各自可以在患有或被怀疑患有动脉粥样硬化或处于发生动脉粥样硬化的风险 中的受治疗者中进行。
在第六个方面，提供了根据第一个宽方面或其任意实施方案或实例或实施 例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或其盐或溶剂合物和/或根据第 二个宽方面或其任意实施方案或实例或实施例的药物组合物在活体外或体内诱 导和/或增加细胞分泌GLP-1和/或诱导和/或增加细胞中GLP-1合成和/或活性的 用途。在一个这类实例中，细胞是胰细胞或GI道细胞，例如细胞是L-细胞或胰 β细胞。
在另外的第七个方面，提供了根据第一个宽方面或其任意实施方案或实例 或实施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或其盐或溶剂合物和/或 根据第二个宽方面或其任意实施方案或实例或实施例的药物组合物在细胞中、 例如在活体外或体内激动和/或部分激动和/或逆拮抗GPR119的用途。在一个这 类实例中，细胞是胰细胞或GI道细胞，例如细胞是L-细胞或胰β细胞。
在另外的第八个方面，提供了治疗有效量的根据第一个宽方面或其任意实 施方案或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或其盐或溶 剂合物在制备药剂中的用途，所述药剂用于在需要其的受治疗者的细胞中诱导 和/或增加细胞分泌GLP-1和/或诱导和/或增加细胞中GLP-1合成和/或活性。优 选地，所述受治疗者是患有或被怀疑患有代谢疾病或处于发生代谢疾病的风险 中的受治疗者。例如，代谢疾病选自肥胖和糖尿病，例如2型糖尿病。
在第九个方面，提供了治疗有效量的根据第一个宽方面或其任意实施方案 或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或其盐或溶剂合物 在制备药剂中的用途，所述药剂用于在需要其的受治疗者中激动和/或部分激动 和/或逆拮抗GPR119和/或用于在需要其的受治疗者中向上调节GLP-1的活性和 /或合成和/或分泌。优选地，所述受治疗者是患有或被怀疑患有代谢疾病或处于 发生代谢疾病的风险中的受治疗者。例如，代谢疾病选自肥胖和糖尿病，例如2 型糖尿病。
在第十个方面，提供了在需要其的受治疗者中治疗或预防代谢疾病的方法， 该方法包括给所述受治疗者施用治疗有效量的根据第一个宽方面或其任意实施 方案或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或盐或溶剂合 物和/或根据第二个方面或其任意实施方案或实例或实施例的药物组合物。
在一个实例中，所述施用诱导和/或增加了受治疗者的GI道细胞分泌GLP-1 和/或诱导和/或增加了受治疗者的细胞中的GLP-1合成和/或活性。或者或另外 地，所述施用在受治疗者中激动和/或部分激动和/或逆拮抗了GPR119。
在一个实例中，代谢疾病是糖尿病和/或肥胖。例如，代谢疾病是2型糖尿 病。例如，所述受治疗者患有一种或多种代谢疾病如肥胖和/或糖尿病(如2型糖 尿病)或处于发生一种或多种代谢疾病如肥胖和/或糖尿病(如2型糖尿病)的风险 中。
在第十一个方面，提供了治疗有效量的根据第一个宽方面或其任意实施方 案或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或盐或溶剂合物 和/或根据第二个方面或其任意实施方案或实例或实施例的药物组合物在需要其 的受治疗者中治疗或预防一种或多种代谢疾病的用途。
在第十二个方面，提供了有效量的根据第一个宽方面或其任意实施方案或 实例或实施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或盐或溶剂合物在制 备药剂中的用途，所述药剂用于在需要其的受治疗者中治疗或预防一种或多种 代谢疾病。
在其它方面，提供了治疗有效量的根据第一个宽方面或其任意实施方案或 实例或实施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或盐或溶剂合物和/ 或根据第二个方面或其任意实施方案或实例或实施例的药物组合物用于激动和/ 或部分激动和/或逆拮抗受治疗者的GPR119和/或用于诱导和/或增加受治疗者 的GLP-1分泌和/或合成的用途。
在进一步的宽方面，提供了根据第一个宽方面或其任意实施方案或实例或 实施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或盐或溶剂合物和/或根据 第二个方面或其任意实施方案或实例或实施例的药物组合物在制备药剂中的用 途，所述药剂用于激动和/或部分激动和/或逆拮抗受治疗者的GPR119和/或用于 诱导和/或增加受治疗者的GLP-1分泌和/或合成。
在一个实例中，根据本文任意宽方面所述的任意方法或用途或其实施方案 或实例或实施例，受治疗者正患有或罹患一种或多种代谢疾病或处于发生一种 或多种代谢疾病的风险中。例如，代谢疾病选自肥胖、糖尿病及其组合。在一 个优选的实例中，糖尿病是2型糖尿病。在一个优选的实例中，受治疗者是人。
在进一步的方面，本发明提供了功能性食品、营养制品、食品补充剂或膳 食补充剂，其包含治疗有效量的至少一种根据本发明的第一个宽方面或其任意 其它宽方面或实施方案或实例或实施例的化合物或盐或溶剂合物。在一个实施 方案中，功能性食品、营养制品、食品补充剂或膳食补充剂包含油酰基-LPI或 其可药用盐或溶剂合物。
在另一个实施方案中，本发明提供了包含式I化合物或其盐或溶剂合物的功 能性食品、营养制品、食品补充剂或膳食补充剂在需要其的受治疗者中治疗或 预防一种或多种代谢疾病中的用途，
(I)
Figure BDA0002472968040000201
其中“间隔基”是C5-8芳基、具有1至2个杂原子的C3杂环、具有1至3个 杂原子的C4杂环、具有1至4个杂原子的C5杂环、具有1至5个杂原子的C6杂环、C2-8烷基链、C2-8烯基链或C2-8炔基链；
“连接基”是酰胺、酯、醚、硫醚、酮、亚砜、砜、氨甲酸酯、碳酸酯、胺、 亚胺或磺酰胺；
R1是H、OH、CN、酯、醚、C1-8烷基链、C1-8烯基链、C1-8炔基链、醛、 卤素、羧酸、四唑、N(1)-烷基化四唑或其盐、N(2)-烷基化四唑或其盐、C5-6芳 基、具有1至2个杂原子的C3杂环、具有1至3个杂原子的C4杂环、具有1 至4个杂原子的C5杂环或具有1至5个杂原子的C6-8杂环；
R2是H、OH、CN、酯、醚、C1-8烷基链、C1-8烯基链、C1-8炔基链、醛、 卤素、羧酸、四唑、N(1)-烷基化四唑或其盐、N(2)-烷基化四唑或其盐、C5-6芳 基、具有1至2个杂原子的C3杂环、具有1至3个杂原子的C4杂环、具有1 至4个杂原子的C5杂环或具有1至5个杂原子的C6-8杂环；且
R3是C4-24不饱和脂肪酸链或C3-38饱和脂肪酸链。
在一个实施方案中，本发明提供了包含式I化合物或其盐或溶剂合物的功能 性食品、营养制品、食品补充剂或膳食补充剂，
(I)
Figure BDA0002472968040000211
其中“间隔基”是C5-8芳基、具有1至2个杂原子的C3杂环、具有1至3个 杂原子的C4杂环、具有1至4个杂原子的C5杂环、具有1至5个杂原子的C6杂环、C2-8烷基链、C2-8烯基链或C2-8炔基链；
“连接基”是酰胺、酯、醚、硫醚、酮、亚砜、砜、氨甲酸酯、碳酸酯、胺、 亚胺或磺酰胺；
R1是H、OH、CN、酯、醚、C1-8烷基链、C1-8烯基链、C1-8炔基链、醛、 卤素、羧酸、四唑、N(1)-烷基化四唑或其盐、N(2)-烷基化四唑或其盐、C5-6芳 基、具有1至2个杂原子的C3杂环、具有1至3个杂原子的C4杂环、具有1 至4个杂原子的C5杂环或具有1至5个杂原子的C6-8杂环；
R2是H、OH、CN、酯、醚、C1-8烷基链、C1-8烯基链、C1-8炔基链、醛、 卤素、羧酸、四唑、N(1)-烷基化四唑或其盐、N(2)-烷基化四唑或其盐、C5-6芳 基、具有1至2个杂原子的C3杂环、具有1至3个杂原子的C4杂环、具有1 至4个杂原子的C5杂环或具有1至5个杂原子的C6-8杂环；且
R3是C4-24不饱和脂肪酸链或C3-38饱和脂肪酸链。
特别地，本文所述的本发明的化合物可用作治疗性或预防性的抗动脉粥样 硬化剂用于动脉粥样硬化、动脉硬化、心血管疾病、中风、脑血管缺血、心脏 疾病、冠心病、缺血性心脏病、绞痛和心脏病发作。
在另一方面，提供了在需要其的受治疗者中治疗或预防非酒精性脂肪肝疾 病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、脂肪肝、肝纤维化、肝硬化、肝癌 (HCC)、与铁超负荷障碍相关的肝疾病、酒精性肝疾病的方法，该方法包括给所 述受治疗者施用治疗有效量的根据第一个宽方面或其任意实施方案或实例或实 施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或盐或溶剂合物和/或根据第 二个方面或其任意实施方案或实例或实施例的药物组合物。
在另一方面，提供了治疗有效量的根据第一个宽方面或其任意实施方案或 实例或实施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或盐或溶剂合物和/ 或根据第二个方面或其任意实施方案或实例或实施例的药物组合物用于在需要 其的受治疗者中治疗或预防动脉粥样硬化的用途。
在另一方面，提供了治疗有效量的根据第一个宽方面或其任意实施方案或 实例或实施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或盐或溶剂合物和/ 或根据第二个方面或其任意实施方案或实例或实施例的药物组合物在制备药剂 中的用途，所述药剂用于在需要其的受治疗者中治疗或预防动脉粥样硬化病症。
在其它方面，提供了制备药剂或根据第二个宽方面的药物组合物的方法。 该方法包括将(i)治疗有效量的油酰基-LPI或其可药用盐或溶剂合物和/或根据第 一个宽方面或其任意实施方案或实例或实施例的式I化合物或其盐或溶剂合物 和(ii)可药用载体、赋形剂和/或稀释剂合并和/或混合。
在进一步的方面，提供了制备根据第一个宽方面或其任意实施方案或实例 或实施例的化合物或其盐或溶剂合物的方法。在相关的进一步的宽方面，本发 明还提供了通过进行该方法产生的那些化合物或其盐或溶剂合物。
在另一方面，提供了在需要其的受治疗者中治疗或预防动脉粥样硬化的方 法，该方法包括给所述受治疗者施用治疗有效量的根据第一个宽方面或其任意 实施方案或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或盐或溶 剂合物和/或根据第二个方面或其任意实施方案或实例或实施例的药物组合物。
另外的目标、优点和新特征将在随后的描述中给出，或者通过检查附图和 随后的多个非限制性实施方案的随后详述而对于本领域技术人员而言是清楚的。
附图简述
本公开内容将参考如下附图在随后的优选实施方案的描述中提供细节。
图1的图示显示了油酰基-LPI在体外和活体外制备物中增加GLP-1的分泌。 OEA、LPC、油酰基-LPI、硬脂酰基-LPI、花生四烯基-LPI和十七烯酰基-LPI 对GLP-1分泌的作用。A)组显示了Glutag细胞与单独的溶媒、不同种类的LPI、 OEA、LPC和作为阳性对照的弗司扣林(10μM)一起孵育2小时的结果。B)组显 示了与A组相似、但是在NCI-H716细胞上用乙酸肉豆蔻佛波醇作为阳性对照 进行的实验的结果。C组和D)组显示了在Glutag细胞和NCI-H716-H716中不同 浓度的油酰基-LPI的剂量响应研究的结果。所有组中的结果标准化为用溶媒(对 照)处理的细胞的百分数。数据显示为平均值±SEM，n＝3，来自一式两份进行的独立实验。Student t-检验:*p<0.05。
图2的图示显示了油酰基-LPI以非葡萄糖依赖的方式诱导GLP-1分泌。A 组和B组显示了在不同葡萄糖浓度5mM(A组)和10mM(B组)下GLP-1释放的 剂量响应的结果。GLP-1释放的剂量响应对平行测定的细胞数量进行标准化。 将Glutag和NCI-H761细胞与单独的溶媒、油酰基-LPI、OEA、LPC、弗司扣林 (10μM)和PMA(1μM)(作为阳性对照)一起孵育2小时。结果标准化为用溶媒(对 照)处理的细胞的百分数。对于A组和B组，数据显示为平均值±SEM，n＝3，来 自一式两份进行的独立实验。Student t-检验:*p<0.05,**P<0.01。C组显示了在葡萄糖浓度为20mM时GLP-1释放的剂量响应的结果。
图3的图示显示了油酰基-LPI诱导的GLP-1分泌不受GPR55调控。A和 B)组显示的代表性Western印迹分析显示了在转染后48小时Glutag和 NCI-H716-H716细胞中GPR55的向下调节。微管蛋白用作上样对照。C和D) 组显示了蛋白质表达的光密度测定分析的结果。组E)显示了用siRNA转染的 Glutag细胞的mRNA水平。F和G)组显示了当用油酰基-LPI(20μM)处理时转染 细胞对释放GLP-1的作用。将Glutag和NCI-H761细胞与单独的溶媒和油酰基-LPI一起孵育2小时。GLP-1释放相对于在同一天平行测定的细胞数量进行标 准化。H和I)组显示了当用油酰基-LPI刺激时来自野生型小鼠和GPR55-/-的混合 原代结肠培养物的GLP-1分泌的结果。所有显示的结果标准化为用溶媒(对照) 处理的细胞的蛋白质浓度的百分数。数据显示为平均值±SEM，n＝3，来自一式 两份进行的独立实验。Student t-检验:*p<0.05。
图4的图示显示了GPR119介导油酰基-LPI诱导的来自L-细胞的GLP-1分 泌以及来自胰β-细胞的胰岛素分泌。A和B)组提供的代表性Western印迹分析 结果显示在转染后48小时在Glutag和NCI-H716中GPR119向下调节。微管蛋 白用作上样对照。C)组提供了GPR119蛋白质的向下调节的光密度测定分析的 结果。D)组显示了在Glutag细胞中GPR119的mRNA水平也向下调节。E和F) 组显示了当用油酰基-LPI(20μM)处理时转染细胞对GLP-1释放的作用。将 Glutag细胞(E组)和NCI-H761细胞(F组)与单独的溶媒和油酰基-LPI一起孵育2小时。GLP-1释放相对于在同一天平行测定的细胞数量进行标准化。数据表达 为未经处理的百分数，显示为平均值±SEM，n＝3，来自一式两份进行的独立实 验。Student t-检验:*p<0.05。G)组显示了油酰基-LPI对来自野生型和GPR119-/-小鼠的混合结肠制备物的原代培养物的作用，其中在GPR119-/-小鼠中与它们的 野生型(正常)对照相比，油酰基-LPI不能诱导GLP-1释放。H)组显示了从野生 型和GPR119-/-小鼠分离的胰岛细胞(即胰β细胞)在葡萄糖的存在下响应于油酰 基-LPI而分泌胰岛素的能力的评价。在分离后，将胰岛静置过夜。如下进行GSIS 实验：将胰岛在有或无油酰基-LPI(20μM)的存在下与16.7mM葡萄糖一起孵育 20分钟。数据表示为平均值±SEM；n＝3GPR119-/-和n＝4WT动物；**p<0.01。 H组的结果证明：在16.7mM葡萄糖的存在下，油酰基-LPI可以使急性胰岛素 分泌增加约50％。GPR119-/-胰岛完全失去了响应于油酰基-LPI刺激的能力，表 明胰岛中GPR119的表达是胰岛素分泌的油酰基-LPI刺激所必需的。
图5的图示显示了Arvanil是弱的GPR119拮抗剂，不能阻断肠内分泌L- 细胞中的GLP-1分泌。结果显示了在不同葡萄糖浓度下当用油酰基-LPI、OEA、 Arvanil和AR-231,453处理时Glutag细胞的GLP-1分泌的作用。将细胞与单独 的溶媒、油酰基-LPI、OEA、Arvanil、AR-231,453或与组合油酰基-LPI+Arvanil、 OEA+Arvanil或AR-231,453+Arvanil一起孵育2小时。GLP-1释放相对于在 同一天平行测定的细胞数量进行标准化。数据表达为未经处理的百分数，为平 均值±SEM，n＝3，来自一式两份进行的独立实验。Student t-检验:*p<0.05。
图6的图示显示了细胞内ERK激活牵涉在油酰基-LPI诱导的GLP-1分泌中。 A)组提供的代表性Western印迹结果显示了当用油酰基-LPI刺激时在Glutag细 胞中的时程实验中磷酸ERK的激活。B)组显示了时程实验中pERK激活的光密 度测定分析。C)组提供的代表性Western印迹显示了在Glutag细胞中通过转染 GPR119和GPR55产生的ERK磷酸化。D)组显示了转染GPR119和GPR55产 生的pERK的光密度测定分析。E)组显示的代表性Western印迹显示了时程实验 中siGPR119转染细胞的ERK磷酸化。F)组显示了时程实验的光密度测定分析。 G)组提供的代表性Western印迹分析显示了MEK抑制剂抑制pERK。H)组显示 了pERK的MEK抑制的光密度测定分析。I)组显示了MEK抑制剂对GLP-1分 泌的作用，其中Glutag细胞与油酰基-LPI或溶媒一起孵育了2小时。J)组提供 了在用MEK抑制剂处理的Glutag中pERK抑制的代表性Western印迹。K)组显 示了pERK抑制的光密度测定分析的结果。L)组显示了NCI-H716细胞的MEK 抑制在GLP-1分泌中的作用。M)组提供了NCI-H716-H716细胞中pERK抑制的 代表性Western印迹。N)组显示了pERK抑制的光密度测定分析的结果。对于所 有组，GLP-1释放相对于在同一天平行测定的细胞数量进行标准化。数据表达 为未经处理的百分数，为平均值±SEM，n＝3，来自一式两份进行的独立实验。 Student t-检验:*p<0.05。
图7的图示显示了油酰基-LPI刺激GPR119转染COS-7细胞中的cAMP产 生和激活肠内分泌L-细胞中cAMP效应元件结合蛋白(CREB)。A)组提供了油酰 基-LPI和OEA对稳定表达人GPR119细胞的COS7细胞中cAMP聚集的作用的 剂量响应分析的结果。B)组显示了PKA抑制对Glutag细胞的GLP-1分泌的作 用。C)组提供了磷酸-CREB抑制的Western印迹分析。D)组显示了Glutag细胞 中CREB磷酸化的PKA抑制的光密度测定分析的结果。E)组显示了PKA抑制 对NCI-H716细胞的GLP-1分泌的作用。F)组显示了NCI-H716细胞中CREB磷 酸化的PKA抑制的光密度测定分析的结果。H)组显示了油酰基-LPI和OEA对 稳定表达人GPR119细胞的COS7细胞中cAMP聚集的作用的剂量响应分析。 在所有组中，GLP-1释放相对于在同一天平行测定的细胞数量进行标准化。数 据表达为未经处理的百分数，为平均值±SEM，n＝3，来自一式两份进行的独立 实验。Student t-检验:*p<0.05,**p<0.01。
图8的图示显示了具有式I结构的本发明的化合物在活体外与获自豚鼠的 GI道细胞孵育2小时后在刺激GLP-1合成和分泌中的功效。将细胞与弗司扣林 和IBMX(各自20μM)、油酰基-LPI(20μM)、合成化合物ps297b(20μM)和ps316a (20μM)一起孵育2小时，一式四份。0.2％DMSO用作阴性对照，弗司扣林和 IBMX的组合用作阳性对照。测定GLP-1水平，相对于DMSO对照进行标准化。 结果显示为标准化输出读数，误差条表示一式四份进行的独立实验的平均值± SEM。
图9是本文用于产生具有通式(III)和本文称为化合物“ps292a”的油酰基-LPI 类似物和/或衍生物的化学方法的图示。
图10是本文用于产生具有通式(IV)和本文称为化合物“ps293a”的油酰基 -LPI类似物和/或衍生物的化学方法的图示。
图11是本文用于产生具有通式(V)和本文称为化合物“ps294a”的油酰基-LPI 类似物和/或衍生物的化学方法的图示。
图12是本文用于产生具有通式(VI)和本文称为化合物“ps297b”的油酰基 -LPI类似物和/或衍生物的化学方法的图示。
图13是本文用于产生分别具有通式(VII)和(VIII)和本文称为化合物“ps298a 和ps298b”的油酰基-LPI类似物和/或衍生化合物的化学方法的图示。
图14是本文用于产生具有通式(IX)和本文称为化合物“ps300b”的油酰基 -LPI类似物和/或衍生物的化学方法的图示。
图15是本文用于产生具有通式(X)和本文称为化合物“ps301a”的油酰基-LPI 类似物和/或衍生物的化学方法的图示。
图16是本文用于产生具有通式(XI)和本文称为化合物“ps306a”的油酰基 -LPI类似物和/或衍生物的化学方法的图示。
图17是本文用于产生具有通式(XII)和本文称为化合物“ps309a”的油酰基 -LPI类似物和/或衍生物的化学方法的图示。
图18是本文用于产生具有通式(XIII)和本文称为化合物“ps308c”的油酰基 -LPI类似物和/或衍生物的化学方法的图示。
图19是本文用于产生具有通式(XIV)和本文称为化合物“ps312a”的油酰基 -LPI类似物和/或衍生物的化学方法的图示。
图20是本文用于产生具有通式(XV)和本文称为化合物“ps314b”的油酰基 -LPI类似物和/或衍生物的化学方法的图示。
图21是本文用于产生具有通式(XVI)和本文称为化合物“ps316a”的油酰基 -LPI类似物和/或衍生物的化学方法的图示。
图22是本文用于产生具有通式(XVII)和本文称为化合物“ps315a”的油酰基 -LPI类似物和/或衍生物的化学方法的图示。
图23是本文用于产生具有通式(XVIII)和本文称为化合物“ps318a”的油酰基 -LPI类似物和/或衍生物的化学方法的图示。
图24是本文用于产生具有通式(XIX)和本文称为化合物“ps317b”的油酰基 -LPI类似物和/或衍生物的化学方法的图示。
图25是本文用于产生具有通式(XX)和本文称为化合物“ps320c”的油酰基 -LPI类似物和/或衍生物的化学方法的图示。
图26是本文用于产生具有通式(XXI)和本文称为化合物“ps319”的油酰基 -LPI类似物和/或衍生物的化学方法的图示。
图27是本文用于产生具有通式(XXII)和本文称为化合物“ps323b”的油酰基 -LPI类似物和/或衍生物的化学方法的图示。
图28是本文用于产生具有通式(XXIII)和本文称为化合物“ps321a”的油酰基 -LPI类似物和/或衍生物的化学方法的图示。
图29的图示显示了具有式I结构的本发明的化合物在体外人L细胞模型的 NCI-H716细胞中刺激GLP-1合成和分泌的功效。A-D组显示了测定与不同浓度 的油酰基-LPI、OEA、化合物ps297b和化合物ps316a一起孵育2小时的NCI-H716 的GLP-1分泌水平的EC50值的4个独立个体实验的结果，对最大浓度的油酰 基-LPI获得的GLP-1分泌的百分数进行标准化。E组显示了将来自A-D组中4 个个体实验的EC50数据组合获得的GLP-1分泌水平的EC50值的最终EC50平 均值(标准化为对最大浓度的油酰基-LPI而言)。E组的结果显示为标准化输出读 数，误差条表示4个独立实验的平均值±SEM。
图30的图示显示了具有式I结构的本发明的化合物在体外人L细胞模型的 NCI-H716细胞中刺激GLP-1合成和分泌中的功效。A和B组显示了对油酰基 -LPI、ps297b、ps316a、ps318a、ps319a、ps321a和ps323而言的EC50 GLP-1 分泌水平。EC50数据表示为对用DMSO溶媒对照处理的细胞标准化的分泌百分 数，变异性表示为95％置信区间，n＝4。B和C组还显示，三种显示出最强的 调控GLP-1生物合成和分泌的活性的化合物(ps297b、ps316a、ps318a)是具有不 饱和脂质链的那些(在脂质链中具有1或2条双键)。
图31的图示显示了具有式I结构的本发明的化合物在体外人L细胞模型的 NCI-H716细胞中刺激GLP-1合成和分泌的功效。A和B组显示了油酰基-LPI、 ps293a、ps294a、ps297b、ps298a、ps298b、ps300b(组A)和ps301a、ps306a、 ps308a、ps309a、ps312a、ps314b、ps315a、ps316a和ps297b(B组)的EC50 GLP-1 分泌水平。EC50数据表示为对用DMSO溶媒对照处理的细胞标准化的分泌百分 数，变异性表示为95％置信区间，n＝4。
图32的图示显示了在口服葡萄糖GLP-1分泌测试中给野生型小鼠口服管饲 施用20mg/kg剂量后式VI化合物(ps297b)对增加GLP-1释放的作用。测定在葡 萄糖负荷后2分钟收集的样品中的活性GLP-1水平。N＝3
优选实施方案详述
本发明基于发明人的如下发现：油酰基-LPI(包括其衍生物或类似物)可调控GPR119活性，并且这类激动剂(可被证明体外、例如在表达内源性GPR119的 胰β-细胞和GI道的L细胞中增加细胞内cAMP水平的化合物)能够改善、更特 别是激活和/或向上调节糖调节性激素。特别地，他们已经发现，这些化合物能 够以与GLP-1和GIP激素相似的方式增强葡萄糖刺激的胰岛素分泌。
特别地，发明人已经发现：GPR119作为潜在的油酰基-LPI受体发挥作用， 其中胰腺中的GPR119激活与葡萄糖刺激的胰岛素分泌增加相关，在肠中的该 受体激活导致肠降血糖素激素GLP-1和GIP的分泌增加。而且，发明人已经确 定：GPR119激活可通过作用于L-细胞以刺激GLP-1释放、转而刺激β-细胞以 促进葡萄糖刺激的胰岛素分泌而有助于降低血液葡萄糖水平。因此，发明人已 经发现：通过油酰基-LPI激活GPR119可提供代谢疾病如肥胖和/或糖尿病如2 型糖尿病的治疗性治疗。
基于这些结果，发明人研究了油酰基-LPI经由GPR119激活和该分泌过程 下的机制在GLP-1分泌、例如肠内分泌L细胞的GLP-1分泌中的潜在作用。他 们假定：虽然OEA可作为GPR119的配体发挥作用，但是其它磷脂如溶血磷脂 也可以是该受体的潜在配体。具体而言，发明人假定：最初被发现是GPR55配 体的溶血磷脂LPI可以显示出与激活GPR119相关的其它生理学和病理学作用。
如随后的实施例中所显示的那样，发明人观察到：在体外在鼠和人L-细胞 中和在活体外混合结肠原代细胞制备物中，油酰基-LPI刺激GLP-1的释放。令 人感兴趣的是，当用油酰基-LPI刺激时，通过siRNA GPR119-转染细胞、而不 是siRNA GPR55进行的GLP-1分泌受损，这提示了GPR119激活在GLP-1释放 中的作用。重要的是，如本文证明的那样，油酰基-LPI-诱导的GLP-1增加以及 胰β细胞的胰岛素释放在GPR119无效小鼠中是受损的。
发明人已经鉴别和生产了21种式I化合物(如本文所述)，并且证明了所生 产的化合物能够在鼠和人L-细胞中在体外刺激GLP-1的释放。该结果还提示了 如根据本文的任意宽方面或实施方案或实例或实施例所述的式I化合物或其盐 或溶剂合物在诱导GLP-1分泌和生物合成中的作用，例如通过与内源性油酰基 -LPI相似的机制。该数据提示了油酰基-LPI和如本文通篇所述的本发明的式I 化合物或其盐或溶剂合物两者在葡萄糖代谢和维持葡萄糖内稳态中的作用。
本发明的其它特征将在随后的数个非限制性的方面、其实施方案和实例和 实施例的描述中更充分地描述。包括该描述仅仅是为了示例本发明的目的。其 不应当理解为对如上文给出的本发明的宽的概述、公开内容或描述的限制。将 参考附图进行描述。
A.通用
本领域技术人员将理解，本文所述的发明可以进行除特定描述的那些之外 的改变和变通而不背离如本文所述的宗旨和范围。本发明包括所有这类改变和 变通。本发明还包括单独或联合的本说明书中提及或指出的步骤、特征、组合 物和组分以及所述步骤或特征的任意和所有组合或其任意两个或多个。功能上 等同的产品、物质组合物和方法清楚地落入如本文所述的发明的范围内。
本文(无论是上文还是下文)引用的所有出版物、参考资料、文献、专利和专 利申请通过引用整体并入本文，这意味着那些出版物、参考资料、文献、专利 和专利申请应当作为本文的一部分被阅读和考虑。在本文中没有重复本文中所 引用的任意出版物、参考资料、文献、专利和专利申请仅仅是出于简明的原因。 但是，引用本文提及的出版物、参考资料、文献、专利和专利申请来描述和公 开在出版物中报道和可能用于本发明的方案、试剂和产品。本文中没有任何内 容欲被解释为承认本发明由于已有的发明或出于任何其它原因不能预期该公开 内容。所有关于这些文献的日期的声称和关于这些文献的内容的表达是基于申 请人可获得的信息，不构成任何有关这些文献的日期或内容的正确性的认可。
对本文所述的任意产品而言或在本文通过引用而并入的任意文献中的任意 生产商指示、说明、产品说明书和产品页在此通过引用并入本文，并且在本发 明的实施中可以使用。
本文所用的所选术语的定义可以在发明概述和发明详述中找到，并且应用 于通篇。除非另有定义，否则本文所用的所有科学技术术语具有与本发明所属 领域的普通技术人员通常理解相同的含义。
B.定义
为方便起见，下文提供了说明书、实施例和所附权利要求书中使用的一些 术语和短语的含义。如果在本领域的术语的使用和本文提供的其定义之间存在 明显的不一致，则应当以说明书中提供的定义为准。
除了在进行实施例或当有另外指出时，本文所用的表达成分的量或反应条 件的所有数字在所有情况中应当理解为被术语“约”修饰。例如，术语“约”当用于 百分数时可表示±10％。
除非上下文另有要求或者说明书有具体的相反指示，本文中作为单个实体、 步骤或元件给出的本发明的实体、步骤或元件清楚地包括所述实体、步骤或元 件的单数和复数形式。在说明书通篇，除非另有指出或上下文另有要求，对单 个步骤、组合物或物质、步骤集合或物质组合物集合的称谓应当包括一个或多 个(即一个或多个)那些步骤、组合物或物质、步骤集合或物质组合物集合。因此， 如本文和所附权利要求书中所用的单数形式和“该”等包括复数称谓，上下文另有 清楚指示除外。因此，例如，称谓“油酰基-LPI的合成类似物和/或衍生物”包括 油酰基-LPI的多种这类合成类似物或油酰基-LPI的多种衍生物等。
如本文通篇所用的术语“油酰基-LPI”将理解为指具有肌醇头和油酰基酰基 链(18:1)的溶血磷脂。
如本文所用的术语“衍生自”或“的衍生物”应当指所述的实体可以从特定的 来源获得，虽然不是必须直接从该来源获得。因此，术语“油酰基-LPI的衍生物” 将用于指直接或间接地由油酰基-LPI获得的根据本文所述的本发明的任意方面 或实施方案或实例或实施例的式I化合物或其盐或溶剂合物或包含这类化合物 或盐或溶剂合物的任意物质组合物，并且可以包括由与油酰基-LPI的原料相同 的原料进行化学合成的那些化合物或组合物。
在说明书和权利要求书通篇中，除非上下文另有要求，否则用词“包含”或变 通形式如“含有”或“含”将理解为包括所述步骤或元件或实体或者步骤或元件或 实体的集合，但是不排除任意其它步骤或元件或实体或者步骤或元件或实体的 集合。
类似地，术语“包括”还将理解为不限于。
而且，诸如“元件”或“组分”的术语包括包含一个单元的元件和组分以及包含 多于一个亚单元的元件和组分，另有具体说明除外。而且，术语“份(portion)”的 使用可包括构造(moiety)的一部分或整个构造。
在本申请中，“或”的使用指“和/或”，另有指示除外。
本文所述的发明可以包括值(例如尺寸、移位和场强等)的一个或多个范围。 值的范围将理解为包括该范围内的所有值、包括限定该范围的值以及产生与紧 邻定义该范围边界的值的值相同或基本相同的结果的邻近该范围的值。例如， 相关领域的技术人员将理解，范围的上下限变化10％可以完全是适当的，并且 被本发明所囊括。更特别地，范围的上下限变化将为5％或者是本领域常规认可 的那样，无论其有多大。
如本文所用的术语“油酰基-LPI类似物”或“油酰基-LPI的类似物”将表示根 据本文所述的任意方面或实施方案或实例或实施例的式I化合物或其盐或溶剂 合物或包含这类化合物、盐或溶剂合物的任意物质组合物，其呈现出或能够呈 现出油酰基-LPI的在促进GI道细胞如肠内分泌L细胞和/或胰β细胞的GLP-1 分泌和/或合成中的活性。可以理解，本发明的油酰基-LPI类似物呈现出或能够 呈现出任意水平的导致诱导和/或增加GI道细胞如肠内分泌L细胞和/或胰β细 胞的GLP-1分泌和/或合成的活性。例如，油酰基-LPI类似物包括这样的任意式 I化合物或其盐或溶剂合物或包含这类化合物、盐或溶剂合物的任意组合物：当 与GI道细胞接触时，其呈现出或能够呈现出的诱导和/或增加细胞中GLP-1分 泌和/或合成的活性水平为油酰基-LPI或其盐或溶剂合物在相同或相当的条件下 诱导和/或增加细胞中GLP-1分泌和/或合成所呈现的活性水平的约5％至约 100％或更高。在一个实例中，油酰基-LPI类似物呈现出或能够呈现出的活性水 平为油酰基-LPI或其盐或溶剂合物呈现的活性水平的至少约5％至约100％或至 少约5％或至少约10％或至少约15％或至少约20％或至少约25％或至少约30％ 或至少约35％或至少约40％或至少约45％或至少约50％或至少约55％或至少约 60％或至少约65％或至少约70％或至少约75％或至少约80％或至少约85％或至 少约90％或至少约95％或至少约100％。在另一个实例中，油酰基-LPI类似物呈 现出或能够呈现出的活性水平为油酰基-LPI或其盐或溶剂合物在相同或相当条件下呈现的活性水平的约至少1.1倍至10倍或更高。例如，油酰基-LPI类似物 呈现出或能够呈现出的活性水平与油酰基-LPI或其盐或溶剂合物在相同或相当 条件下呈现的活性水平相比为至少约1.1倍或至少约1.2倍或至少约1.3倍或至 少约1.4倍或至少约1.5倍或至少约1.6倍或至少约1.7倍或至少约1.8倍或至少 约1.9倍或至少约2倍或至少约2.5倍或至少约3倍或至少约3.5倍或至少约4 倍或至少约4.5倍或至少约5倍或至少约5.5倍或至少约6倍或至少约6.5倍或 至少约7倍或至少约7.5倍或至少约8倍或至少约8.5倍或至少约9倍或至少约 9.5倍或至少约10倍或高于10倍。
或者或另外地，术语“油酰基-LPI类似物”或“油酰基-LPI的类似物”将表示 根据本文所述的任意方面或实施方案或实例或实施例的式I化合物或其盐或溶 剂合物或包含这类化合物、盐或溶剂合物的任意物质组合物，其呈现出或能够 呈现出油酰基-LPI的在激动GI道细胞如肠内分泌L细胞和/或胰β细胞的 GPR119表达和/或活性中的活性。可以理解，本发明的油酰基-LPI类似物呈现 出或能够呈现出任意水平的导致激动GI道细胞中GPR119表达和/或活性的活性。 例如，油酰基-LPI类似物包括这样的任意式I化合物或其盐或溶剂合物或包含这 类化合物、盐或溶剂合物的任意组合物：当与GI道细胞接触时，其呈现出或能 够呈现出的激动GI道细胞中GPR119表达和/或活性的活性水平为油酰基-LPI 或其盐或溶剂合物在相同或相当的条件下激动GI道细胞中GPR119表达和/或活 性所呈现的活性水平的约5％至约100％或更高。在一个实例中，油酰基-LPI类 似物呈现出或能够呈现出的活性水平为油酰基-LPI或其盐或溶剂合物呈现的活 性水平的至少约5％至约100％或至少约5％或至少约10％或至少约15％或至少约 20％或至少约25％或至少约30％或至少约35％或至少约40％或至少约45％或至 少约50％或至少约55％或至少约60％或至少约65％或至少约70％或至少约75％ 或至少约80％或至少约85％或至少约90％或至少约95％或至少约100％。在另一 个实例中，油酰基-LPI类似物呈现出或能够呈现出的活性水平为油酰基-LPI或 其盐或溶剂合物在相同或相当条件下呈现的活性水平的约至少1.1倍至10倍或 更高。例如，油酰基-LPI类似物呈现出或能够呈现出的活性水平与油酰基-LPI 或其盐或溶剂合物在相同或相当条件下呈现的活性水平相比为至少约1.1倍或 至少约1.2倍或至少约1.3倍或至少约1.4倍或至少约1.5倍或至少约1.6倍或至 少约1.7倍或至少约1.8倍或至少约1.9倍或至少约2倍或至少约2.5倍或至少 约3倍或至少约3.5倍或至少约4倍或至少约4.5倍或至少约5倍或至少约5.5 倍或至少约6倍或至少约6.5倍或至少约7倍或至少约7.5倍或至少约8倍或至 少约8.5倍或至少约9倍或至少约9.5倍或至少约10倍或高于10倍。
短语“GPR119相关性疾病、障碍或病症”或“代谢疾病”可以解释说明性地包 括但不限于：高脂血、肥胖、1型糖尿病、2型糖尿病、特发性1型糖尿病(Ib 型)、成人隐匿性自身免疫性糖尿病(LADA)、早发性2型糖尿病(EOD)、青年起 病非典型糖尿病(YOAD)、青年成熟期发病型糖尿病(MODY)、营养不良相关性 糖尿病、妊娠糖尿病、动脉粥样硬化、动脉硬化、心血管疾病、中风、脑血管 缺血、心脏疾病、冠心病、缺血性心脏病、绞痛和心脏病发作、非酒精性脂肪 肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、脂肪肝、肝纤维化、肝硬化、 肝癌(HCC)、与铁超负荷障碍相关的肝疾病和酒精性肝疾病、冠心病、缺血性中 风、血管成形术后再狭窄、外周血管病、间歇性跛行、心肌梗塞(例如坏死和凋 亡)、血脂异常症、餐后脂血症、葡萄糖耐量受损病症(IGT)、空腹血浆葡萄糖受 损病症、代谢性酸中毒、酮病、关节炎、肥胖、骨质疏松症、高血压、充血性 心力衰竭、左心室肥大、外周动脉疾病、糖尿病性视网膜病、黄斑变性、白内 障、糖尿病性肾病、肾小球硬化、慢性肾衰竭、糖尿病性神经病、代谢综合征、 X综合征、经前期综合征、冠心病、心绞痛、血栓形成、动脉粥样硬化、心肌 梗塞、短暂缺血发作、中风、血管再狭窄、高血糖、高胰岛素血症、高脂血、 高甘油三酯血症、抗胰岛素性、葡萄糖代谢受损、葡萄糖耐量受损病症、空腹 血浆葡萄糖受损病症、肥胖、勃起功能障碍、皮肤和结缔组织疾病、足溃疡和 溃疡性结肠炎、内皮功能障碍和血管顺应性受损。
术语“降低”、“减少”、“减轻”或“抑制”在本文中均用于指统计学显著量的减 少。但是，为避免疑惑，“降低”、“减少”、“减轻”或“抑制”指与参比水平、例如 在没有活性剂的存在下相比减少至少10％，例如减少至少约20％或至少约30％ 或至少约40％或至少约50％或至少约60％或至少约70％或至少约80％。
术语“增加”、“增高”或“提高”或“激活”或“诱导”在本文中均用于指统计学显 著量的增加；为避免任何疑惑，术语“增加”、“增高”或“提高”或“激活”或“诱导” 指与参比水平、例如在没有活性剂的存在下相比增加至少10％，例如增加至少 约20％或至少约30％或至少约40％或至少约50％)或至少约60％或至少约70％或 增加至少约80％或至少约2倍或至少约3倍或至少约4倍或至少约5倍或至少 约10倍，或者与参比水平相比2倍至10倍之间的任意增加或更高。
如本文所用的术语“施用”指通过使得组合物在预期位置至少部分定位以便 产生预期作用的方法或途径将组合物放置在受治疗者中。本文所述的化合物或 组合物可以通过本领域已知的任意适当途径进行施用，包括但不限于口服或胃 肠道外途径，包括静脉内、肌内、皮下、透皮、气道(气雾剂)、经肺、经鼻、经 直肠和局部(包括颊和舌下)施用。在一些实施方案中，化合物包括本发明的化合 物或其可药用盐或包含它们的任意组合物如治疗性或治疗性组合物通过胃肠道 外或其它允许递送至目标位置的方法进行施用。一些示例性的施用方法包括但 不限于注射、输注、点滴、吸入或摄入。
如本文所用的术语“注射”包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、心室 内、囊内、眶内、心内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、 包囊下(sub capsular)、蛛网膜下、椎管内、脑脊髓内和胸骨内注射和输注。在优 选的实施方案中，组合物通过静脉内输注或注射进行施用。
如本文所用的，在表述的上下文中，术语“治疗”等在涉及本文所述的任意病 症或疾病的本发明的上下文中指减轻、缓和、改善、抑制、减慢、逆转或终止 与该病症或疾病相关的至少一种症状或并发症的进程、进展、恶化、进程、预 期进程或严重性。在一个实施方案中，病症或疾病的症状被缓和至少5％、至少 10％、至少20％、至少30％、至少40％或至少50％。
在本说明书的上下文中，短语“有效量”、“治疗有效量”或“有效剂量”(在本 文中互换使用)在其含义内包括本发明的化合物或组合物的足以提供预期作用、 但是是无毒的量。所要求的精确量将根据诸如预期作用、所治疗种属、受治疗 者的年龄和一般情况、所治疗病症的严重性、所施用的活性剂、施用模式等而 在不同受治疗者之间是不同的。因此，具体说明精确的“有效量”是不可能的。但 是，对于任意给定的病例，适当的有效量(剂量)可通过本领域技术人员仅采用常 规实验来确定。通常，治疗有效量可根据受治疗者的医疗史、年龄、情况、性 别以及受治疗者中医学病症的严重度和类型以及其它药物活性剂的施用而不同。
应当指出，本文有关在治疗性应用中的用途的称谓将理解为等同地可应用 于人和非人、例如兽用应用。因此，可以理解，除了另有指出，对“患者”、“受 治疗者”或“个体”(在本文中可互换使用)的称谓指人或非人，例如具有社会、经 济或研究重要性的任意种属的个体，包括但不限于哺乳动物、鸟类、兔类、羊、 牛、马、猪、猫科动物、犬、灵长类和啮齿动物种属。更优选的患者、受治疗 者或个体是属于哺乳动物种属的动物。哺乳动物种属可期望地是人或非人灵长 类动物或伴侣动物如驯养的狗、猫、马、猴、小鼠、大鼠、兔子、绵羊、山羊、 牛或猪。在一个特别优选的实例中，患者、受治疗者或个体是人。
术语“功能性食品”包括包含本发明的化合物的任意可食用或可饮用的食物 或膳食组分。功能性食品可以例如是固体、液体、半固体、粉末或其组合。
术语“营养制品”指除了产品的营养价值外还提供了额外的健康益处的衍生 自食物来源的任意产品。营养制品的非限制性实例包括酸乳、早餐谷物和液体 如奶和果汁。
对于本文所用的所选术语的其它定义可以从发明详述中找到，并且应用于 通篇。除非另有定义，否则本文使用的所有其它科学术语和技术术语具有与本 发明所属领域的普通技术人员所通常理解相同的含义。
C.本发明的说明性实施方案
1.油酰基-LPI化合物
在一个宽方面，本发明涉及式I化合物或其盐或溶剂合物：
(I)
Figure BDA0002472968040000341
其中：
(i)“间隔基”表示C5-8芳基、具有1至2个杂原子的C3杂环、具有1至3个杂 原子的C4杂环、具有1至4个杂原子的C5杂环、具有1至5个杂原子的 C6杂环、C2-8烷基链、C2-8烯基链或C2-8炔基链；
(ii)“连接基”表示酰胺、酯、醚、硫醚、酮、亚砜、砜、氨甲酸酯、碳酸酯、胺、 亚胺或磺酰胺；
(iii)R1表示H、OH、CN、酯、醚、C1-8烷基链、C1-8烯基链、C1-8炔基链、醛、 卤素、羧酸、四唑、N(1)-烷基化四唑或其盐、N(2)-烷基化四唑或其盐、C5-6芳基、具有1至2个杂原子的C3杂环、具有1至3个杂原子的C4杂环、具 有1至4个杂原子的C5杂环或具有1至5个杂原子的C6-8杂环；
(iv)R2表示H、OH、CN、酯、醚、C1-8烷基链、C1-8烯基链、C1-8炔基链、醛、 卤素、羧酸、四唑、N(1)-烷基化四唑或其盐、N(2)-烷基化四唑或其盐、C5-6芳基、具有1至2个杂原子的C3杂环、具有1至3个杂原子的C4杂环、具 有1至4个杂原子的C5杂环或具有1至5个杂原子的C6-8杂环；和
(v)R3表示C4-24不饱和脂肪酸链或C3-38饱和脂肪酸链。
在研发本发明中，发明人生产了一系列式I化合物(如本文所述)，并且已经 证明那些化合物各自能够诱导和/或增加GPR119活性，后者在体外在鼠和人L- 细胞中刺激GLP-1释放。该结果证明：如根据任意宽方面或其实施方案或实例 或实施例所述的式I化合物或其盐或溶剂合物能够诱导和/或增加GPR119活性 和作为一个结果能够诱导GLP-1分泌和生物合成，例如通过与内源性油酰基-LPI 相似的机制。该数据证实了油酰基-LPI和式I化合物或其盐或溶剂合物改善或治 疗代谢疾病如糖尿病(如2型糖尿病)和/或肥胖和特别是提供调节葡萄糖代谢和 维持葡萄糖内稳态的手段的作用。
因此，在一个宽的和通用的形式中，本发明提供了用于治疗GPR119相关 性疾病、障碍或病症的化合物(包括其可药用盐)、组合物(包括其治疗组合物或 药物组合物)和方法。更具体地，本发明涉及具有油酸的单价羰基基团的溶血磷 脂(溶血磷脂酰肌醇(LPI))、包括其衍生物和类似物(例如油酰基-LPI及其衍生物 或类似物化合物)的用途，所述用途是作为GPR119活性的激动剂、部分激动剂 或逆拮抗剂和或用于在体外和/或体内(例如在胰腺细胞和/或在GI道细胞如L细 胞中)诱导和/或增加(提高)内源性GLP-1合成和/或分泌以治疗代谢疾病(例如其 中葡萄糖内稳态受损的代谢疾病，例如肥胖和/或糖尿病如2型糖尿病)。
如本文所讨论的“GPR119相关性疾病、障碍或病症”或“代谢疾病”作为解释 说明可以非限制性地包括：肥胖、1型糖尿病、2型糖尿病、特发性1型糖尿病 (Ib型)、成人隐匿性自身免疫性糖尿病(LADA)、早发性2型糖尿病(EOD)、青年 起病非典型糖尿病(YOAD)、青年成熟期发病型糖尿病(MODY)、营养不良相关 性糖尿病、妊娠糖尿病、动脉粥样硬化、动脉硬化、心血管疾病、中风、脑血 管缺血、心脏疾病、冠心病、缺血性心脏病、绞痛和心脏病发作、非酒精性脂 肪肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、脂肪肝、肝纤维化、肝硬化、肝癌(HCC)、与铁超负荷障碍相关的肝疾病和酒精性肝疾病、冠心病、缺血性中 风、血管成形术后再狭窄、外周血管病、间歇性跛行、心肌梗塞(例如坏死和凋 亡)、血脂异常症、餐后脂血症、葡萄糖耐量受损病症(IGT)、空腹血浆葡萄糖受 损病症、代谢性酸中毒、酮病、关节炎、肥胖、骨质疏松症、高血压、充血性 心力衰竭、左心室肥大、外周动脉疾病、糖尿病性视网膜病、黄斑变性、白内 障、糖尿病性肾病、肾小球硬化、慢性肾衰竭、糖尿病性神经病、代谢综合征、 X综合征、经前期综合征、冠心病、心绞痛、血栓形成、动脉粥样硬化、心肌 梗塞、短暂缺血发作、中风、血管再狭窄、高血糖、高胰岛素血症、高脂血、 高甘油三酯血症、抗胰岛素性、葡萄糖代谢受损、葡萄糖耐量受损病症、空腹 血浆葡萄糖受损病症、肥胖、勃起功能障碍、皮肤和结缔组织疾病、足溃疡和 溃疡性结肠炎、内皮功能障碍和血管顺应性受损。
在一些实例中，其中R3表示C4-24不饱和脂肪酸链，选自巴豆酸或其衍生物、 肉豆蔻脑酸或其衍生物、棕榈油酸或其衍生物、sapienic acid或其衍生物、油酸 或其衍生物、反油酸或其衍生物、异油酸或其衍生物、鳕烯酸或其衍生物、二 十碳烯酸或其衍生物、芥酸或其衍生物、神经酸或其衍生物、亚油酸或其衍生 物、二十碳二烯酸或其衍生物、二十二碳二烯酸或其衍生物、亚麻酸或其衍生 物、松油酸或其衍生物、桐酸或其衍生物、米德酸或其衍生物、二高-γ-亚麻酸 或其衍生物、二十碳三烯酸或其衍生物、十八碳四烯酸或其衍生物、花生四烯 酸或其衍生物、二十碳四烯酸或其衍生物、肾上腺酸或其衍生物、十八碳五烯 酸(bosseopentaenoic acid)或其衍生物、二十碳五烯酸或其衍生物、ozubondo acid(还已知为osbond acid)或其衍生物、沙丁酸(还已知为鰶鱼酸)或其衍生物、 二十四醇五烯酸或其衍生物、二十二碳六烯酸或其衍生物和鲱鱼酸或其衍生 物。
在一些这类优选实例中，R3表示不饱和脂肪酸链，选自巴豆酸、肉豆蔻脑 酸、棕榈油酸、sapienic acid、油酸、反油酸、异油酸、鳕烯酸、二十碳烯酸、 芥酸、神经酸、亚油酸、二十碳二烯酸、二十二碳二烯酸、亚麻酸、松油酸、 桐酸、米德酸、二高-γ-亚麻酸、二十碳三烯酸、十八碳四烯酸、花生四烯酸、 二十碳四烯酸、肾上腺酸、十八碳五烯酸(bosseopentaenoic acid)、二十碳五烯 酸、ozubondo acid、沙丁酸、二十四醇五烯酸、二十二碳六烯酸和鲱鱼酸。
在其它实例中，R3表示C3-38饱和脂肪酸链，选自丙酸或其衍生物、丁酸或 其衍生物、戊酸或其衍生物、己酸或其衍生物、庚酸(还已知为庚烷酸)或其衍生 物、辛酸或其衍生物、壬酸(还已知为壬烷酸)或其衍生物、癸酸(还已知为癸烷 酸)或其衍生物、十一酸或其衍生物、月桂酸或其衍生物、十三酸或其衍生物、 肉豆蔻酸或其衍生物、十五酸或其衍生物、棕榈酸或其衍生物、十七烷酸或其 衍生物、硬脂酸或其衍生物、十九烷酸或其衍生物、二十烷酸或其衍生物、二 十一烷酸或其衍生物、山嵛酸或其衍生物、二十三烷酸或其衍生物、二十四烷 酸或其衍生物、二十五烷酸或其衍生物、蜡酸或其衍生物、二十七烷酸或其衍生物、褐煤酸或其衍生物、二十九烷酸或其衍生物、蜂花酸或其衍生物、三十 一烷酸或其衍生物、紫胶蜡酸或其衍生物、叶虱酸或其衍生物、三十四烷酸或 其衍生物、三十五烷酸或其衍生物、三十六烷酸或其衍生物、三十七烷酸或其 衍生物和三十八烷酸或其衍生物。
在一些这类优选实例中，R3表示饱和脂肪酸链，选自丙酸、丁酸、戊酸、 己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、十一酸、月桂酸、十三酸、肉豆蔻酸、十五 酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、十九烷酸、二十烷酸、二十一烷酸、山嵛酸、 二十三烷酸、二十四烷酸、二十五烷酸、蜡酸、二十七烷酸、褐煤酸、二十九 烷酸、蜂花酸、三十一烷酸、紫胶蜡酸、叶虱酸、三十四烷酸、三十五烷酸、 三十六烷酸、三十七烷酸和三十八烷酸。
在特别优选的实例中，R3表示棕榈酰基、油酰基或亚油酰基。
在其它实例中，R1可以是选自苯并咪唑、苯并噻唑、吲唑的杂环。或者或 另外地，R1可以是选自苯并咪唑、苯并噻唑、吲唑的杂环。
在一些实例中，连接基可以优选是酰胺、酯、醚或氨甲酸酯连接基。
在根据其所述任意方面的化合物或盐或溶剂合物的一些示例性实施方案中， 化合物具有式II结构：
(II)
Figure BDA0002472968040000381
其中，
(i)“连接基”表示酰胺、酯、醚或氨甲酸酯；
(ii)R1表示H、卤素、C1-8烷基链；C1-8烯基链、C1-8炔基链、C5-6芳基、具有1 至4个杂原子的C5-8杂环；
(iii)R2表示OH、CN、OMe、CO2H、CO2Me、四唑、N(2)-甲基四唑、N(1)-甲 基四唑、四唑酸钠、三唑、咪唑、包含NH和1至4个杂原子的C5-6 N-杂 环；和
(iv)R3表示脂肪酸链，选自油酸或其衍生物、亚油酸或其衍生物、肉豆蔻脑酸 或其衍生物、棕榈油酸或其衍生物、sapienic acid或其衍生物、反油酸或其 衍生物、异油酸或其衍生物、反式亚油酸(linoelaidic acid)或其衍生物、α- 亚麻酸或其衍生物、芥酸或其衍生物、花生四烯酸或其衍生物、二十碳五 烯酸或其衍生物和二十二碳六烯酸或其衍生物。
优选地，R3可以表示脂肪酸链，选自油酸、亚油酸、肉豆蔻脑酸、棕榈油 酸、sapienic acid、反油酸、异油酸、反式亚油酸、α-亚麻酸、芥酸、花生四烯 酸、二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸。
在一个这类示例性实施方案中，化合物具有表示卤素、C1-8烷基链、C1-8烯 基链、C1-8炔基链、C5-6芳基、具有1至4个杂原子的C5-8杂环的R1和表示咪唑、 包含NH和1至4个杂原子的C5-6 N-杂环的R2。优选地，R1表示处于R2的杂环 的间位的卤素，和R2是包含NH和1至4个杂原子的C5-6 N-杂环。可以理解， 该示例性实施方案的化合物具有随后实施例中被证明具有强的诱导和/或增加 GI道细胞的GLP-1分泌的活性的式IV、XII、XVI和XVIII化合物(即化合物 ps297b、ps309a、ps316a和ps318a)的取代基的强化学相似性。
在根据其所述任意方面的化合物或盐或溶剂合物的一些示例性实施方案中， 化合物具有式II结构：
(II)
Figure BDA0002472968040000382
其中，
(i)“连接基”表示酰胺、酯、醚或氨甲酸酯；
(ii)R1表示H、卤素、C1-8烷基链；
(iii)R2表示OH、CN、OMe、CO2H、CO2Me、四唑、N(2)-甲基四唑、N(1)-甲 基四唑、四唑酸钠或三唑；
(iv)R3表示油酰基、亚油酰基或棕榈酰基。
在一个特定实例中，根据该实施方案，R1表示处于R2的三唑的间位的卤素 或表示C1-8烷基链，和R2表示包含具有NH的极性头基的三唑。而且，R3表示 油酰基或亚油酰基。可以理解，R2位置中的三唑享有与随后实施例中被证明具 有强的诱导和/或增加GI道细胞的GLP-1分泌的活性的式IV、XII、XVI和XVIII 化合物(即化合物ps297b、ps309a、ps316a和ps318a)中存在的四唑相似的化学特 性。例如，三唑和四唑均含有氢键受体和一个酸性氢键供体。
在根据其所述任意方面的化合物或盐或溶剂合物的其它示例性实施方案中， 化合物具有式II结构：
(II)
Figure BDA0002472968040000391
其中，
(i)“连接基”表示酰胺、酯、醚或氨甲酸酯；
(ii)R1表示H、卤素、C1-8烷基链；
(iii)R2表示OH、CN、OMe、CO2H、CO2Me、四唑、N(2)-甲基四唑、
N(1)-甲基四唑或四唑酸钠；和
(iv)R3表示油酰基、亚油酰基或棕榈酰基。
在一个特定实例中，根据该实施方案，R1表示处于R2的四唑的间位的卤素 或表示C1-8烷基链。R2表示四唑。而且，R3表示油酰基或亚油酰基。可以理解， 这些取代基与随后实施例中被证明具有强的诱导和/或增加GI道细胞的GLP-1 分泌的活性的式IV、XII、XVI和XVIII化合物(即化合物ps297b、ps309a、ps316a 和ps318a)的那些取代基非常相似或相同。
在根据其所述任意方面的化合物或盐或溶剂合物的其它示例性实施方案中， 化合物具有式II结构：
(II)
Figure BDA0002472968040000401
其中，
(i)“连接基”是。
(ii)R1表示H或卤素，其中卤素是氟。
(iii)R2表示OH、CN、OMe、CO2H、CO2Me、四唑、N(2)-甲基四唑、 N(1)-甲基四唑或四唑酸钠。
(iv)R3表示油酰基、亚油酰基或棕榈酰基。
在化合物或其盐或溶剂合物的一个这类示例性实施方案中，化合物选自具 有如下式III至XXIII所示的结构的化合物：
Figure BDA0002472968040000402
Figure BDA0002472968040000411
Figure BDA0002472968040000421
在根据任意方面或其所述实施方案或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂 合物的一个优选实例中，化合物选自式VI、XII、XVI和XVIII的化合物：
Figure BDA0002472968040000422
在根据任意方面或其所述实施方案或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂 合物的一个实例中，化合物是式VI化合物：
Figure BDA0002472968040000431
在根据任意方面或其所述实施方案或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂 合物的另一个实例中，化合物是式XVI化合物：
Figure BDA0002472968040000432
在根据任意方面或其所述实施方案或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂 合物的另一个实例中，化合物是式XVI化合物：
Figure BDA0002472968040000433
在根据任意方面或其所述实施方案或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂 合物的另一实例中，化合物是式XVIII化合物：
Figure BDA0002472968040000434
在一个特别优选的实例中，化合物选自具有如式III至XXIII所示结构的化 合物(即化合物ps292a、ps293a、ps294a、ps297b、ps298a、ps298b、ps300a、 ps301a、ps306a、ps309a、ps308c、ps312a、ps314b、ps316a、ps315a、ps318a、 ps317b、ps320c、ps319、ps323b和ps321a)。优选地，化合物选自式VI、XII、 XVI和XVIII化合物(即化合物ps297b、ps309a、ps316a和ps318a)。甚至更优选 地，化合物是式VI化合物(化合物ps297b)。或者，化合物是式XII化合物(化合 物ps309a)。或者，化合物是式XVI化合物(化合物ps316a)。或者，化合物是式 XVIII化合物(化合物ps318a)。
在本发明的一个形式中，本文通篇所述的根据任意宽方面或实施方案或实 例或实施例的化合物或其盐或溶剂合物，化合物或盐或溶剂合物是式I化合物的 盐。在一个实例中，式I化合物具有作为四唑的R1和/或作为四唑的R2。例如， 当R1和/或R2独立地是N(1)-烷基化四唑或N(2)-烷基化四唑时，式I化合物的盐 可以是脱质子化四唑的盐。
在本发明的另一个形式中，本文通篇所述的根据任意宽方面、实施方案或 实例或实施例的化合物或其盐或溶剂合物是式I化合物的溶剂合物。
在一些实例中，式I化合物或其盐或溶剂合物是油酰基-LPI的衍生物。例如， 化合物或盐或溶剂合物直接或间接地由油酰基-LPI合成产生。或者或另外地， 根据该方面的化合物或盐或溶剂合物是油酰基-LPI类似物，例如油酰基-LPI的 合成类似物。
在一些实例中，式I化合物或其盐或溶剂合物能够与GPR119结合。例如， 化合物或盐或溶剂合物结合GPR119。优选地，根据该方面的化合物或盐或溶剂 合物可以是GPR119的配体。
在一些实施方案中，式I化合物或盐或溶剂合物在活体外或体内、例如在 GI道细胞中是GPR119表达和/或活性的激动剂和/或部分激动剂和/或逆拮抗剂。 在一些实例中，化合物或盐或溶剂合物能够例如在GI道细胞如人和/或鼠L细 胞和/或胰β细胞中在体内和/或体外激动和/或部分激动和/或逆拮抗GPR119的 表达和/或活性。在其它实例中，化合物或盐或溶剂合物在体外或活体外、例如 在GI道细胞中激动和/或部分激动和/或逆拮抗GPR119的表达和/或活性。例如， 化合物或盐或溶剂合物在体内和/或体外在人和/或鼠L细胞和/或胰β细胞中激 动和/或部分激动和/或逆拮抗GPR119的表达和/或活性。
在其它实例中，式I化合物或其盐或溶剂合物能够诱导和/或增加GLP-1的 分泌和/或合成和/或活性。例如，化合物或其盐或溶剂合物能够例如在活体外和 /或体内诱导和/或增加GI道细胞如人和/或鼠L细胞和/或胰β细胞中GLP-1的 分泌和/或合成和/或活性。在一个这类实例中，化合物或其盐或溶剂合物能够在 体内和/或体外诱导和/或增加人和/或鼠L细胞和/或胰β细胞中GLP-1的分泌和 /或合成和/或活性。在一个特别优选的实例中，化合物或其盐或溶剂合物诱导和 /或增加GLP-1的分泌和/或合成和/或活性，如上所述。在一个特别优选的实例 中，化合物或盐或溶剂合物在体内和/或体外诱导和/或增加GI道细胞如人和/或 鼠L细胞和/或胰β细胞的GLP-1分泌。
基于本文给出的结果，发明人鉴别出了油酰基-LPI和如本文通篇所述的式I 的化合物或其盐或溶剂合物在GLP-1生物合成和/或分泌中的作用，发明人理解 该作用是通过GPR119介导的，例如在肠内分泌L-细胞和原代细胞制备物中。 对油酰基-LPI诱导的细胞中GLP-1合成和/或分泌的机制进行的研究揭示， GPR119激活通过ERK磷酸化和CREB刺激来调节GLP-1分泌。
更具体地，本申请中概述的工作显示：用特定种类的LPI、油酰基-LPI和/ 或用如本文通篇所述的式I化合物或其盐或溶剂合物(其例如可以是油酰基-LPI 的衍生物和/或类似物)刺激肠内分泌L-细胞能够在GI道细胞的体外和活体内制 备物中刺激、例如诱导和/或增加GLP-1分泌。
2.油酰基-LPI化合物的合成
本文通篇所述的式I化合物或其盐或溶剂合物当与油酰基-LPI比较时保留 了亲水头单元，但是具有简化的连接基(如苯基酰胺)和包含亲脂性尾。
发明人出人意料地发现，当与油酰基-LPI或其盐或溶剂合物比较时，式I 化合物的结构导致式I化合物或其盐或溶剂合物的合成改善。例如，发明人出人 意料地发现，根据本发明的任意宽方面或实施方案或实例或实施例的式I的合成 化合物或其盐或溶剂合物比油酰基-LPI或合成产生的任意油酰基-LPI更稳定。
而且，发明人出人意料地发现，本文所述的式I化合物或其盐或溶剂合物可 以以仅少数步骤(如仅两或三个步骤)由可购买获得的原料以克数量级进行化学 合成。出人意料地，发明人还发现：式I化合物或其盐或溶剂合物可以以比合成 油酰基-LPI或其它未落入式I范围内、但是基于油酰基-LPI骨架的化合物中所 牵涉的方法更少和更简单的步骤进行化学合成。
而且，在式I化合物中用亲水性极性头单元代替油酰基-LPI的肌醇基团可以 使式I化合物(或它们的盐或溶剂合物)的合成相对于油酰基-LPI的化学合成而言 容易。
而且，在式1化合物中用C5-8芳基或C3-6杂环或C2-8烷基或链烯基或炔基链 代替油酰基-LPI的酯链接可以使式I化合物相对于油酰基-LPI而言对肠或其它 生物系统中的酶促分解更不敏感，因此这种改变可促进本发明的合成化合物相 对于油酰基-LPI而言稳定性增加。
如本文所示例，式I化合物能够促进肠内分泌L-细胞的GLP-1分泌和/或合 成。出人意料地，一些化合物如式IV、XII、XVI和XVIII化合物(即化合物ps297b、 ps309a、ps316a和ps318a)被证明具有强的诱导和/或增加GI道细胞的GLP-1分 泌的活性，其等于或高于油酰基-LPI。
因此，本发明显示，如本文通篇所述的式I化合物或其盐或溶剂合物的生产 可以比油酰基-LPI简单。本发明的式I化合物可含有亲水性头单元、简化的连接 基和亲脂性，其提供了在生产中和在促进GLP-1分泌和/或合成中的益处。除去 式I化合物的亲水性头和/或使用完全饱和的尾还可导致损失在促进GLP-1分泌 和/或合成中的活性。
(i)制备本发明的合成化合物的方法
本发明的化合物可以通过本领域已知的任意适宜方法或通过构成本发明的 一部分并且在随后的工作实施例和附图中进一步详细示例的方法来制备。
因此，制备式(III)化合物(即化合物ps292a)的方法包括用草酰氯和DMF处 理油酸，方便地过夜，由此形成酰氯。该方法可以进一步包括用胺处理酰氯以 形成酰胺。
式(IV)化合物(即化合物ps293a)可以方便地通过包括如下的方法制备：用草 酰氯和DMF处理油酸，方便地过夜和优选于室温进行，由此形成酰氯。该方法 可以进一步包括用胺处理酰氯以形成酰胺。
式(V)化合物(即化合物ps294a)可以方便地通过包括如下的方法制备：用碱 使式(IV)化合物水解，方便地于约60℃和优选过夜。
式(VI)化合物(即化合物ps297b)可以方便地通过包括如下的方法制备：使式(III)化合物(即化合物ps292a)四唑基化。
式(VII)和式(VIII)化合物(即化合物ps298a和ps298b)可以方便地通过包括如下的方法制备：使式(VI)化合物(即化合物ps297b)烷基化。
式(IX)化合物(即化合物ps300b)可以方便地通过包括如下的方法制备：用草 酰氯、DMF、HBTU(即2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐) 处理油酸，方便地进行约45分钟，由此形成酰氯。该方法可以进一步包括用胺 处理酰氯以形成酰胺。
式(X)化合物(即化合物ps301a)可以方便地通过包括如下的方法制备：使式 (IX)化合物(即化合物ps300b)烷基化。
式(XI)化合物(即化合物ps306a)可以方便地通过包括如下的方法制备：用草 酰氯和DMF处理油酸，方便地过夜和优选于室温进行，由此形成酰氯。该方法 可以进一步包括用胺处理酰氯以形成酰胺。
式(XII)化合物(即化合物ps309a)可以方便地通过包括如下的方法制备：使式(XI)化合物(即化合物ps306a)四唑基化。
式(XIII)化合物(即化合物ps308c)可以方便地通过包括如下的方法制备：用 草酰氯和DMF处理油酸，方便地过夜和优选于室温进行，由此形成酰氯。该方 法可以进一步包括用胺处理酰氯以形成酰胺。
式(XIV)化合物(即化合物ps312a)可以方便地通过包括如下的方法制备：使 式(XIII)化合物(即化合物ps308c)四唑基化。
式(XV)化合物(即化合物ps314b)可以方便地通过包括如下的方法制备：用草 酰氯和DMF处理亚油酸，方便地过夜和优选于室温进行，由此形成酰氯。该方 法可以进一步包括用胺处理酰氯以形成酰胺。
式(XVI)化合物(即化合物ps316a)可以方便地通过包括如下的方法制备：使 式(XV)化合物(即化合物ps314b)四唑基化。
式(XVII)化合物(即化合物ps315a)可以方便地通过包括如下的方法制备：用 草酰氯和DMF处理油酸，方便地过夜和优选于室温进行，由此形成酰氯。该方 法可以进一步包括用胺处理酰氯以形成酰胺。
式(XVIII)化合物(即化合物ps318a)可以方便地通过包括如下的方法制备：使 式(XVII)化合物(即化合物ps315a)四唑基化。
式(XIX)化合物(即化合物ps317b)可以方便地通过包括如下的方法制备：用 草酰氯和DMF处理棕榈酸，方便地过夜和优选于室温进行，由此形成酰氯。该 方法可以进一步包括用胺处理酰氯以形成酰胺。
式(XXI)化合物(即化合物ps320)可以方便地通过包括如下的方法制备：使式(XIX)化合物(即化合物ps317b)四唑基化。
式(XXI)化合物(即化合物ps319)可以方便地通过包括如下的方法制备：用草 酰氯和DMF处理亚油酸，方便地过夜和优选于室温进行，由此形成酰氯。该方 法可以进一步包括用胺处理酰氯以形成酰胺。
式(XXII)化合物(即化合物ps323b)可以方便地通过包括如下的方法制备：使 式(VI)化合物(即化合物ps297b)脱质子化。
式(XXIII)化合物(即化合物ps321a)可以方便地通过包括如下的方法制备：使 式(XXI)化合物(即化合物ps319)四唑基化。
下表概括了本文生产和描述的以及在随后工作实施例中示例的合成化合物 的化学结果。
Figure BDA0002472968040000481
Figure BDA0002472968040000491
Figure BDA0002472968040000501
(ii)测试式I合成化合物的毒性
根据其任意方面、实施方案或实例或实施例的具有本文所述的式I所示结构 的本发明的化合物的毒性可以通过本领域已知的任意适宜方法或通过测试对斑 马鱼的毒性、例如通过按照本文所述的方法进行测试。
可以将约2天龄Danio rerio幼体去绒毛膜，用渐增量的本发明的任意式I 合成化合物或其盐或溶剂合物处理约3天。化合物或盐或溶剂合物的心脏毒性 可以通过测定心搏、运动和致畸性(孵化率、死亡率(LD50)来评价。实验可以重 复三次或更多次，例如每个测试浓度使用约10条幼体。
在供选的方法中，将AB野生型品系的斑马鱼胚胎(最初获自ZebrafishInternational Resource Center,Eugene,俄勒冈,USA)于28℃生长。如Westerfield M(1994)The Zebrafish book:a guide for laboratory use of Zebrafish(Brachydaniorerio).俄勒冈:俄勒冈大学出版社.第385页和Nüsslein-Volhard C,Dahm R (2002)Zebrafish:a practical approach.纽约:牛津大学出版社USA.第303页中 所述进行斑马鱼养殖、胚胎收集以及胚胎和幼体维持。在24-孔微量滴定板(包裹 有Parafilm以限制溶剂蒸发)中采用每孔10个胚胎在1ml 0.3×Danieau's培养基(17 mM NaCl、2mM KCl、0.12mMMgSO4、1.8mM Ca(NO3)2和1.5mM HEPES,pH 7.6)中标准地进行毒性分析。每个实验重复3次，对于每个所测试发展阶段、每 种本发明的化合物而言分析总共30个胚胎或幼体。仅记录其中对照组中正常胚 胎或幼体的百分数为至少90％的实验的数据。将胚胎和幼体暴露于本发明的化 合物，2–4个细胞，4hpf和1、2、3、4和7dpf，24小时后评价毒性迹象。在确 定对于每种本发明的化合物而言的最大耐受浓度(MTC)时，使所有接触后胚胎和 幼体在幼体培养基中发展至9dpf，以便检测在该24小时窗口后出现的任何有害 作用。该方法还记载于如下文献中：Ducharme NA,等人Reprod Toxicol.2015 55: 3-10；Zhang C等人.Curr Protoc Toxicol.2003；第1章:第1.7单元；Maes J等 人,PLoS One.2012；7(10):e43850；和Panzica-Kelly JM,等人.Res B Dev Reprod Toxicol.2010；89(5):382-95，其公开内容通过交叉引用整体并入本文。
(iii)在小鼠中确定GLP-1测定
根据其任意方面、实施方案或实例或实施例所述的具有式I所示结构的本发 明的化合物或其盐或溶剂合物在体内对葡萄糖代谢和/或维持葡萄糖内稳态的功 效可以通过本领域已知的任意适宜方法、例如采用本领域已知的任意已知的葡 萄糖代谢模型来测试。
例如，在葡萄糖负荷后约0、20和90分钟，在含K3-EDTA和KR-62436 的试管中取20μl动脉血样以收集血浆，将样品快速于-80℃储存。将4至6只动 物的血浆样品汇集在一起，采用可购买获得的ELISA试剂盒进行分析以定量活 性GLP-1(如GLP-1(7-36)酰胺)的水平。
对上述方法进行略微改变，通过在C57bl/6J小鼠中外周GLP-1刺激和测定 可以进行小鼠中的GLP-1测定。禁食6小时后，将小鼠称重，计算药物体积。 通过口服管饲给予20mg/kg剂量的本发明的化合物，体积小于5μl/克体重。30 分钟后，给小鼠管饲溶于自来水中的50％D-葡萄糖溶液以递送2mg/g，体积小 于5μl/g。葡萄糖管饲后2分钟，从下颌下静脉取血样，放入含有一组蛋白酶抑 制剂的EDTA包涂预冷试管中。在4℃于1,500g旋转20分钟分离血浆。然后收 集血浆，在干冰上速冻，在进行激素定量之前于-20℃储存。对于激素定量，将 样品熔融，用来自Millipore EZGLP1T-36K的市售ELISA试剂盒在20μL血浆中 对总GLP-1水平进行定量(GLP1(7-36)酰胺+GLP-1(9-36)酰胺)。该方法还记载于 在如下文献中：
Figure BDA0002472968040000521
JA等人Diabetologia.201760(10):2066-2075和Panaro BL等人Diabetes.2017；66(6):1626-1635，其公开内容通过交叉引用整体并入本文。
(iv)确定式I化合物对体内葡萄糖代谢的作用
根据其任意方面、实施方案或实例或实施例所述的具有式I所示结构的本发 明的化合物或其盐或溶剂合物在体内对葡萄糖代谢和/或维持葡萄糖内稳态的功 效可以通过本领域已知的任意适宜方法、例如短期的口服葡萄糖耐量试验 (OGTT)在小鼠中测试。
例如，可以如下进行在小鼠中的OGTT试验：给禁食约6小时的约10周龄 野生型和糖尿病型db/db小鼠口服管饲10mg/kg的各个式I合成化合物或其盐或 溶剂合物。例如，如果使用化合物或盐形式，则将它们溶于适当的溶剂中。30 分钟后，测定血糖(0时间)，管饲在水中的2mg/g葡萄糖。可以通过尾静脉取血 在各时间、例如葡萄糖负荷后10、20、30、60、90和120分钟监测血糖。
在供选的方法中，在早晨将葡萄糖耐量试验小鼠转移至有淡水、但是没有 食物的笼中。禁食6小时后，每只动物称重，计算药物体积。通过口服管饲给 予20mg/kg剂量的实验药物，体积小于5μl/克体重。30分钟后，将尾巴用70％ 乙醇擦拭干净，用无菌解剖刀刺破尾动脉，以便用手持血糖仪测定0时间的动 脉血血糖。2分钟内，给动物管饲溶于自来水中的50％D-葡萄糖溶液以递送 2mg/g，体积小于5μl/g。在葡萄糖管饲后10'、20'、30'、60'和90分钟，通过刺 破尾动脉重复葡萄糖的测定，每次更接近动物身体。监测动物行为以确定不存 在任何可能的尾出血。OGTT操作记载于
Figure BDA0002472968040000522
JA等人Diabetologia.2017 60(10):2066-2075；Panaro BL等人Diabetes.201766(6):1626-1635和 Andrikopoulos S等人Am JPhysiol Endocrinol Metab.2008295(6):E1323-32中， 这些文献的公开内容通过交叉引用整体并入本文。
(v)测试式I化合物的长时间的长期抗糖尿病和抗动脉粥样硬化体内作用
对于长期研究，历经14周给动物如小鼠每天管饲10mg/kg，在处理之前、 期间和之后可以监测体重、血糖以及GLP-1和胰岛素水平。野生型和db/db小 鼠均可以使用。
对于确定式I合成化合物或其盐或溶剂合物在动脉粥样硬化背景中的可能 的抗动脉粥样硬化功效，可以使用喂予高脂肪饮食的LDL-R缺陷小鼠。在一个 实例中，可以每天用约10mg/kg合成化合物处理这类小鼠达约14周，可以由动 脉血样监测血浆标志物如甘油三酯、总胆固醇。然后在动物的正常受影响的区 域如主动脉根和主动脉弓中经由IHC半定量评价验尸动脉粥样硬化病损。抗动 脉粥样硬化操作记载于如下文献中：Narasimhulu CA等人J Med Food.2015； 18(1):11-20；Xu RX等人Chronic Dis Transl Med.2017；4(2):117-126；Zhang TT 等人Med Chem Comm.2017；9(2):254-263；Baker EJ等人Mol Aspects Med.2018； Karagiannis AD等人Curr Atheroscler Rep.2018；20(4):20；
Figure BDA0002472968040000531
A等人Int J Mol Sci.2017年8月4日；18(8)，这些文献的公开内容通过交叉引用整体并入本文。
(vi)测试式I化合物与GPR119的结合
根据其任意方面、实施方案或实例或实施例所述的具有式I所示结构的本发 明的化合物或其盐或溶剂合物与GPR119的结合可以通过本领域已知的任意方 法或通过测定化合物或盐或溶剂合物与GPR119的平衡解离常数KD来测定，如 Christoffer Norn等人,Structure,2015年12月,第1卷；23(12),第2377-86页， 其公开内容通过交叉引用整体并入本文。
(vii)测试式I化合物的NASH/NAFLD活性
在体外模型中针对NAFLD/NASH优选测试本发明的化合物：根据 Gómez-Lechón,M.J.等人,2007.Chemico-biological interactions,165(2),第106-16 页，使肝祖细胞在富含油酸盐和棕榈酸盐的培养基中生长以模拟NAFLD病症。 然后将本发明的化合物引入到那些细胞上以测定化合物治疗NAFLD病症的能 力。
在供选的测试中，小鼠是喂予Surwit饮食的动物(代谢综合征和 NAFLD/NASH的工业标准鼠模型是Surwit饮食(高脂肪、高碳水化合物、高果 糖)饲喂的C57bl/6小鼠，如Kohli R等人:Hepatology 2010；52:934-944中所述， 其通过引用并入本文)。根据该方法，每日管饲本发明的化合物达4周。然后将 动物处死，评价NAFLD/NASH病理状态并与载体处理的对照动物进行比较。作 为C57bl/6小鼠的供选方案，可以测试Db/db糖尿病小鼠的对本发明的化合物的 葡萄糖响应。每天给动物管饲本发明的化合物达4周。然后将动物处死，采用 免疫组织化学法评价NAFLD/NASH病理状态并与载体处理的对照动物进行比 较。
3.药物组合物或治疗组合物
在第二个方面，本发明还涉及治疗组合物或药物组合物，其包含至少一种 根据第一个方面或任意其它宽方面或其实施方案或实例或实施例的化合物或盐 或溶剂合物。或者或另外地，药物组合物可以进一步包含油酰基-LPI或其可药 用盐或溶剂合物。优选地，根据该方面的药物组合物进一步包含可药用载体和/ 或赋形剂和/或稀释剂。
在本发明的该方面的一些实施方案中，式I化合物或其盐或溶剂合物以包含 至少一种该化合物或其可药用盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或其可药用盐或溶 剂合物的治疗组合物来提供。
在本发明的任意宽方面的一些供选实施方案中，式I化合物或其盐或溶剂合 物作为包含至少一种式I化合物或其可药用盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或其 可药用盐或溶剂合物和可药用载体、赋形剂和/或稀释剂的药物组合物来提供。
优选地，对于施用于受治疗者，治疗组合物或药物组合物作为药学上可接 受的组合物被提供。当为这种形式时，组合物将为与一种或多种可药用载体(如 添加剂)和/或稀释剂和/或赋形剂一起配制的药物。
如本文所用的术语“可药用”或“药学上可接受”指那些化合物、材料、组合物 和/或剂型在合理的医学判断范围内适用于与人类和动物的组织接触并且不引起 过度的毒性、刺激性、过敏反应或其它问题或并发症，相称有合理的利益/风险 比。
制备可施用的组合物的方法对于本领域技术人员而言是清楚的，并且更详 细地记载在例如Remington's Pharmaceutical Science,第15版,Mack出版公司, Easton,Pa.中，其在此通过引用整体并入本文。
如本文所用的术语“可药用载体”或“可药用赋形剂”或“可药用稀释剂”指可 药用的物质、组合物或载体，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、生产 助剂(如润滑剂、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸锌或硬脂酸)或溶剂封囊 物质，其牵涉在负载或传输主题化合物从身体的一个器官或部分到身体的另一 个器官或部分中。每种载体、稀释剂和赋形剂必须是“可接受的”，其意指与制剂 的其它成分是相容的并且对患者无害。它是既非生物学、也非其它方面不希望 的，即，该物质可以与活性剂一起用于个体并且没有引起不可接受的生物作用 或以有害的方式与含有其的组合物的任意一种或多种组分相互作用。可以用作 可药用载体、稀释剂和赋形剂的物质的一些实例包括但不限于：(1)糖，例如乳 糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生 物，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、乙基纤维素、微晶纤维素和醋酸纤维 素；(4)粉末状西黄蓍胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)润滑剂，例如硬脂酸镁、月桂硫 酸钠和滑石粉；(8)赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；(9)油，例如花生油、棉籽油、 红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二元醇，例如丙二醇；(11)多 元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇(PEG)；(12)酯，例如油酸乙酯和 月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16) 无热原水；(17)等渗盐水；(18)Ringer's溶液；(19)乙醇；(20)pH缓冲溶液；(21) 聚酯、聚碳酸酯和/或聚酐；(22)增量剂，例如多肽和氨基酸；(23)血清组分，例 如血清白蛋白、HDL和LDL；(22)C2-C12醇，例如乙醇；和(23)药物制剂中采用 的其它无毒的相容性物质。润湿剂、结合剂、填充剂、润滑剂、着色剂、崩解 剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、矫味剂、芳香剂、防腐剂、水、盐溶液、醇、 抗氧化剂、聚乙二醇、明胶、乳糖、直链淀粉、硬脂酸镁、滑石粉、硅酸、粘 性石蜡、羟基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等也可以存在于制剂中。术语如“赋 形剂”、“载体”、“稀释剂”和“可药用载体”等在本文中可互换使用。
可药用载体、赋形剂或稀释剂的实例有脱矿物质水或蒸馏水；盐水溶液； 基于植物的油，例如花生油、红花油、橄榄油、棉籽油、玉米油、芝麻油如花 生油、红花油、橄榄油、棉籽油、玉米油、芝麻油、落花生油或椰子油；硅油， 包括聚硅氧烷，例如甲基聚硅氧烷、苯基聚硅氧烷和甲基苯基polysolpoxane； 挥发性硅酮；矿物油，如液体石蜡、软石蜡或角鲨烷；纤维素衍生物，如甲基 纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或羟丙基甲基纤维素； 低级链烷醇，例如乙醇或异丙醇；低级芳烷醇；低级聚亚烷基二醇或低级亚烷基二醇，例如聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇、丙二醇、1,3-丁二醇或甘油；脂肪 酸酯，如棕榈酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯或油酸乙酯；聚乙烯吡咯烷酮；琼脂； 角叉菜胶；西黄蓍胶或阿拉伯胶和矿酯。通常，载体(一种或多种)将构成组合物 重量的10％至99.9％。
本文所述的组合物可以另外地含有在药物组合物中常用的其它附加组分， 其使用水平是本领域已经建立的。因此，例如，组合物可含有另外的可相容的 药用活性物质，例如止痒药、收敛药、局麻药或抗炎剂。但是，当加入这类物 质时，它们应当不会过度地干扰本文所述组合物的组分的生物活性。
如下文详述，本文所述的可药用组合物可以被具体配制成以固体或液体形 式施用，包括适于如下的那些：(1)口服施用，例如顿服剂(水性或非水性溶液或 混悬液)、锭剂、糖衣丸、胶囊剂、小丸、片剂(如靶向于颊、舌下和全身吸收的 那些)、大丸剂、散剂、颗粒剂、应用于舌的糊剂；(2)胃肠外施用，例如通过皮 下、肌内、静脉内或硬膜外注射，例如无菌溶液或混悬液，或者缓释制剂；(3) 直接进入需要治疗的器官的注射，例如通过脑实质(进入脑)、鞘内、心室内或肝 内施用；(4)局部应用，例如作为乳膏剂、乳液、凝胶、软膏剂或控释贴剂或喷 雾应用于皮肤；(5)适于通过吸入施用的气雾剂形式，例如通过鼻内吸入或经口吸入，(6)阴道内或直肠内，例如作为阴道栓、乳膏剂、栓剂或泡沫；(7)舌下； (8)经眼，作为滴眼剂；(9)透皮；(10)透粘膜；或(11)经鼻。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物通过注射施用，例如通过胃肠外 注射(例如皮下、肌内或静脉内注射)或局部至组织和器官如通过鞘内、心室内或 肝内施用。
适用于注射的药物组合物包括无菌水溶液(当可溶于水时)或分散液和用于 临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。理想地，该组合物在生产和储 存条件下是稳定的，可以包含防腐剂以使组合物稳定，免于微生物如细菌和真 菌的污染作用。
无菌可注射溶液可以通过将本发明的药物组合物与上文列举的一种成分或 其组合一起加入需要量的适当溶剂中、然后进行过滤灭菌来制备。作为解释说 明，单剂量可以溶于1ml等渗NaCl溶液中，加入1000ml皮下输液中或在输注 的建议位置注射(参见例如"Remington's Pharmaceutical Sciences",第15版,第 1035-1038和1570-1580页)。
对于可注射溶液，载体可以是含有例如水、Ringer's溶液、等渗盐水、磷酸 盐缓冲盐水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇(例如1,2-丙二醇)和液体聚乙二醇 等)、其适宜的混合物和植物油的溶剂或分散介质。
可以维持适当的流动性，例如采用涂层如卵磷脂、在分散液的情况下通过 维持需要的粒度和采用表面活性剂来进行。阻止微生物的作用可以通过包含各 种抗细菌剂和或抗真菌剂来实现。适宜的物质是本领域技术人员熟知的，包括 例如尼泊金类、氯代丁醇、苯酚、苄醇、抗坏血酸、硫柳汞等。在多种情况中， 组合物中可以优选包括等渗剂，例如糖、多元醇如甘露醇、山梨醇、氯化钠。 可注射组合物的延长吸收可以通过在组合物中包含延迟吸收的物质、例如单硬 脂酸铝和明胶来产生。
在第二个实施方案中，本发明的药物组合物经口服施用，例如与惰性稀释 剂或可同化的可食用载体一起。对于口服治疗施用，药物组合物可以掺入赋形 剂，以可摄入片剂、颊服片剂、药片、胶囊、酏剂、混悬剂、糖浆剂、糯米纸 囊剂等的形式使用。
适用于口服使用的载体、稀释剂、赋形剂和佐剂的一些实例包括花生油、 液体石蜡、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、海藻酸钠、阿拉伯胶、西黄蓍胶、 右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、明胶和卵磷脂。另外地，这些口服制剂可以 含有适宜的矫味剂和着色剂。
当以胶囊形式使用时，胶囊可以包涂有诸如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘 油酯的物质延迟崩解。片剂、药片、丸剂、胶囊剂等也可以含有如下物质：粘 合剂，如西黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，如磷酸二钙；另外 的崩解剂，如玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸等；润滑剂，如硬脂酸镁；和甜 味剂，如蔗糖、乳糖或糖精，或矫味剂如薄荷、冬青油或樱桃矫味剂。
当剂量单位形式是胶囊时，其除了上述类型的物质外还可以含有液体载体。 还可以存在各种其它物质作为包衣或另外修饰剂量单位的物理形式。例如，片 剂、丸剂或胶囊剂可以用虫胶、糖或两者进行包衣。
用于口服施用的液体形式(如糖浆或酏剂)除了上述物质外还可以含有液体 载体、甜味剂(如蔗糖)、防腐剂(如尼泊金甲酯和丙酯)、染料和矫味剂如樱桃或 橙矫味剂。适宜的液体载体包括水、油如橄榄油、花生油、芝麻油、葵花油、 红花油、落花生油、椰子油、液体石蜡、乙二醇、丙二醇、聚乙二醇、乙醇、 丙醇、异丙醇、甘油、脂肪醇、甘油三酯或其混合物。
用于口服施用的混悬剂可以进一步包含分散剂和/或助悬剂。适宜的助悬剂 包括羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、海 藻酸钠或乙酰醇。适宜的分散剂包括卵磷脂、脂肪酸如硬脂酸的聚氧化乙烯酯、 聚氧乙烯山梨醇单或二-油酸酯、-硬脂酸酯或-月桂酸酯、聚氧乙烯山梨坦单或 二-油酸酯、-硬脂酸酯或-月桂酸酯等。适于口服施用的乳剂可以进一步包含一 种或多种乳化剂。适宜的乳化剂包括上文举例的分散剂或天然树胶如瓜尔胶、 阿拉伯胶或西黄蓍胶。
在第三个示例性实施方案中，本发明的药物组合物以气雾剂的形式或通过 喷雾直接施用至受治疗者的气道。对于用作气雾剂，可以将本发明的可药用组 合物的溶液或混悬液与适宜的抛射剂如烃抛射剂如丙烷、丁烷或异丁烷一起以 及和常规佐剂一起包装在压力气雾剂容器中。这类组合物还可以在非压力形式 如喷雾器或雾化器中进行施用。
用于递送至呼吸道的气雾剂是本领域已知的：参见例如Adjei,A.和Garren,J.Pharm.Res.,1:565-569(1990)；Zanen,P.和Lamm,J-W.J.Int.J.Pharm.,114: 111-115(1995)；Gonda,I."Aerosols for delivery of therapeutic and diagnostic agents tothe respiratory tract,",Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems,6:273-313(1990)；Anderson等人,Am.Rev.Respir.Dis.,140:1317-1324 (1989))。
在第四个示例性实施方案中，药物组合物可以以脂质体的形式进行施用。 脂质体通常来自磷脂或其它脂质物质，由分散在水性介质或者的单或多层水合 液体结晶形成。可以使用能够形成脂质体的无毒的、生理学上可接受的和可代 谢的任意脂质。脂质体形式的组合物可以含有稳定剂、防腐剂、赋形剂等。优 选的脂质是天然的和合成的磷脂、天然的和合成的磷脂酰胆碱(卵磷脂)。形成脂 质体的方法是本领域已知的，在此方面的具体参见：Prescott编辑,Methods in Cell Biology,第XIV卷,学术出版社,纽约,N.Y.(1976),第33页起,其内容通过引 用并入本文。
另外，根据所述任意方面、实施方案或实例或实施例的本发明的治疗或药 学可接受的组合物可以并入缓释制剂和配制物中。这类治疗组合物或药物组合 物可以进一步包含适宜的缓冲剂以使得酸水解最少。适宜的缓冲剂是本领域技 术人员熟知的，包括但不限于磷酸盐、柠檬酸盐、碳酸盐及其混合物。
本发明的化合物还可以以“前药”的形式进行施用。前药是化合物的非活 性形式，其在体内转化为活性形式。适宜的前药包括化合物的活性形式的酯、 膦酸酯等。
另外，可药用组合物可以被植入患者中或采用药物递送系统进行注入。包 衣递送装置也可以是有用的。参见例如Urquhart等人,Ann.Rev.Pharmacol. Toxicol.24:199-236(1984)；Lewis编辑,"Controlled Release of Pesticides and Pharmaceuticals"(Plenum Press,纽约,1981)；美国专利号3,773,919；美国专利号 6,747,014；和美国专利号35 3,270,960。
在进一步的实施方案中，本发明的化合物在功能性食品、营养制品、食品 补充剂或膳食增补剂中提供。例如，可以生产包含治疗有效量的式I化合物或其 盐或溶剂合物或油酰基-LPI或其盐或溶剂合物的功能性食品、营养制品、食品 补充剂或膳食增补剂。
用于任意特定受治疗者的本文公开的药物组合物的治疗有效量将取决于多 种因素，包括：药物组合物的毒性和治疗功效；疾病的严重性；患者的年龄、 体重、一般健康、性别和饮食；施用时间；施用途径；组合物的隔离速率；治 疗持续时间；与治疗组合或同时使用的药物，以及药物领域中熟知的其它相关 因素。
毒性和治疗功效可以在细胞培养物或实验动物中通过标准药物操作来确定， 例如用于测定LD50(50％群体致死的剂量)、ED50(在50％群体中治疗有效的剂量)。 毒性和治疗功效之间的剂量比是治疗指数，其可以表达为LD50/ED50比例。呈现 出大的治疗指数的组合物是优选的。
从本文所述的细胞培养物分析和动物模型获得的数据可用于制定用于人的 治疗有效剂量的范围。这类化合物的剂量优选落在具有很少毒性或没有毒性的 包括ED50在内的循环浓度范围内。剂量可以在该范围内变化，这取决于所用的 剂型和所采用的施用途径。
可以与载体物质组合以产生剂型的本文所述的本发明的化合物的量将通常 是产生治疗作用的化合物量。通常，在100％中，该量将为约0.1％至99％的化 合物，优选约5％至约70％、最优选10％至约30％。
剂量可以由医师来确定，并且可以酌情调节以适应观察到的治疗效果。仅 作为解释，可以施用组合物以便可药用组合物以如下剂量给予：1μg/kg至 150mg/kg、1μg/kg至100mg/kg、1μg/kg至50mg/kg、1μg/kg至20mg/kg、1μg/kg 至10mg/kg、1μg/kg至1mg/kg、100μg/kg至100mg/kg、100μg/kg至50mg/kg、 100μg/kg至20mg/kg、100μg/kg至10mg/kg、100μg/kg至1mg/kg、1mg/kg至 100mg/kg、1mg/kg至50mg/kg、1mg/kg至20mg/kg、1mg/kg至10mg/kg、10mg/kg 至100mg/kg、10mg/kg至50mg/kg或10mg/kg至20mg/kg。可以理解，本文给 出的范围包括所有中间范围，例如范围1mg/kg至10mg/kg包括1mg/kg至2mg/kg、 1mg/kg至3mg/kg、1mg/kg至4mg/kg、1mg/kg至5mg/kg、1mg/kg至6mg/kg、 1mg/kg至7mg/kg、1mg/kg至8mg/kg、1mg/kg至9mg/kg、2mg/kg至10mg/kg、 3mg/kg至10mg/kg、4mg/kg至10mg/kg、5mg/kg至10mg/kg、6mg/kg至10mg/kg、 7mg/kg至10mg/kg、8mg/kg至10mg/kg、9mg/kg至10mg/kg等。还可以理解， 上文给定范围的中间范围也落入本文所述的方法和组合物的范畴内，例如在范 围1mg/kg至10mg/kg中，剂量范围如2mg/kg至8mg/kg、3mg/kg至7mg/kg、 4mg/kg至6mg/kg等。
在本发明的一些实例中，式I化合物或其可药用盐或溶剂合物和/或油酰基 -LPI或其可药用盐或溶剂合物的有效量作为单个施用剂量给予。在一些实例中， 重复给予剂量。即，治疗方案将根据疾病的严重性和类型、患者的综合健康和 年龄以及治疗医生将考虑的各种其它情况而不同。关于治疗持续时间和频率， 这对于临床医师监测受治疗者以确定治疗何时提供治疗益处和确定是否增加或 降低剂量、增加或降低施用频率、中断治疗、恢复治疗或对治疗方案作出其它 改变而言是典型的。
根据本文所述的任意方面、实施方案或实例或实施例的本发明的治疗性或 可药用组合物可以作为单次推注施用或者以多个剂量或治疗来提供，还可以通 过其中历经延长时间段连续提供小量的治疗性组合物的“连续”疗法来应用。
当在治疗(包括连续疗法)中使用多次给药时，治疗或药物组合物将通过从每 周一次至每天一次不等的剂量方案来施用，这取决于多种临床因素，例如受治 疗者对治疗或药物组合物中所用的本发明的化合物的敏感性。在这类方案中将 施用的预期剂量可以作为一次的单剂量递送，或者分成亚剂量、例如2-4个亚剂 量并历经一段时间进行施用，例如在一天以适当的间隔或其它适当的安排。这 类亚剂量可以作为单位剂型施用。
在一些实施方案中，施用是长期的，例如一个或多个剂量、每天一次、历 经数周或数个月。剂量方案的实例有历经1周、2周、3周、4周、1个月、2个 月、3个月、4个月、5个月或6个月或更长时间每天一次、每天两次、每天三 次或每天四次或更多次施用。
预期剂量可采用连输输注或经由控释制剂的递送来施用。在该情况中，以 每个亚剂量包含的药物组合物必须相应地较低以获得总日剂量。
剂型还可以配置成历经数天的递送，例如采用常规缓释制剂，其提供了药 物组合物的历经数天的缓释。缓释制剂是本领域熟知的，可特别用于在位置处 递送活性剂，例如可以与本文所述的活性剂一起使用。在该实施方案中，剂型 含有相应的多个日剂量。
(i)组合方案
可以通过组合方案实现治疗优点。在涉及治疗方法的本发明的方面的一些 实施方案中，所述方法可进一步包括如下步骤：给受治疗者施用式I化合物或其 可药用盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或其可药用盐或溶剂合物连同第二种活性 剂，所述第二种活性剂是用于代谢障碍或与受损的GPR119和/或受损的GLP-1 生物合成和/或分泌有关的其它障碍的辅助治疗，其中所述代谢障碍或其它障碍 是患者正患有或罹患的或者当预防性地递送时是处于患有或罹患其的风险中的。
在一个实例中，第二种活性剂在受治疗者中提供了用于代谢疾病或与受损 的GPR119和/或受损的GLP-1生物合成和/或分泌有关的其它障碍的辅助治疗。
在一些实例中，所施用的额外的活性剂是抗炎剂，例如类固醇、皮质类固 醇、COX-2抑制剂、非甾体抗炎剂(NSAIDs)、阿司匹林或其任意组合。更特别 地，所施用的额外的活性剂可以是选自如下的抗炎剂：阿氯芬酸；二丙酸阿氯 米松；阿孕奈德；阿法淀粉酶；安西法尔；安西非特；安芬酸钠；盐酸氨普立 糖；阿那白滞素；阿尼罗酸；阿尼扎芬；阿扎丙宗；巴柳氮二钠；苄达酸；苯 噁洛芬；盐酸苄达明；菠萝蛋白酶；溴哌莫；布地奈德；卡洛芬；环洛芬；辛 喷他宗；克利洛芬；丙酸氯倍他索；丁酸氯倍他松；氯吡酸；丙酸氯硫卡松； 醋酸可米松(Cormethasone Acetate)；可托多松；地夫可特；地奈德；去羟米松； 二丙酸地塞米松；双氯芬酸钾；双氯芬酸钠；双醋二氟拉松；二氟米酮钠；二 氟尼柳；二氟泼尼酯；地弗他酮、二甲基亚砜；羟西奈德；恩甲羟松；恩莫单 抗；依诺利康钠；依匹唑；依托度酸；依托芬那酯；联苯乙酸；非那莫；芬布 芬；芬氯酸；苯克洛酸；芬度柳；苯吡帕酮；芬替酸；夫拉扎酮；氟扎可特； 氟芬那酸；氟鲁咪唑；醋酸氟尼缩松；氟尼辛；氟尼辛葡甲胺；氟可丁酯；醋 酸氟米龙；氟喹宗；氟比洛芬；氟瑞托芬；丙酸氟替卡松；呋喃洛芬；呋罗布 芬；哈西奈德；丙酸卤倍他索；醋酸卤泼尼松；异丁芬酸；布洛芬；布洛芬铝； 布洛芬吡啶甲醇；伊洛达普；吲哚美辛；吲哚美辛钠；吲哚洛芬；吲哚克索； 吲四唑；醋酸异氟泼尼龙；伊索克酸；伊索昔康；酮洛芬；盐酸洛非咪唑；氯 诺昔康(Lomoxicam)；氯替泼诺碳酸乙酯；甲氯芬那酸钠；甲氯芬那酸；二丁酸 甲氯松；甲芬那酸；美沙拉嗪；美西拉宗；磺庚甲泼尼龙；吗尼氟酯；萘丁美 酮；萘普生；萘普生钠；萘普索；尼马宗；奥沙拉嗪钠；奥古蛋白；奥帕诺辛； 奥沙普秦；羟布宗；盐酸瑞尼托林；戊聚糖多聚硫酸酯；保泰松甘油酸钠；吡 非尼酮；吡罗昔康；肉桂酸吡罗昔康；吡罗昔康乙醇胺；吡洛芬；泼那扎特； 普立非酮；普罗度酸；普罗喹宗；普罗沙唑；柠檬酸普罗沙唑；利美索龙；氯 马扎利；柳胆来司；沙那西定；双水杨酯；水杨酸酯(Salycilates)；血根氯铵；司克拉宗；丝美辛；舒多昔康；舒林酸；舒洛芬；他美辛；他尼氟酯；他洛柳 酯；特丁非隆；替尼达普；替尼达普钠；替诺昔康；替昔康；替昔米德；四氢 甲吲胺(Tetrydamine)；硫平酸；替可的松匹伐酯；托美丁；托美丁钠；三氯奈德； 三氟米酯；齐多美辛；糖皮质激素；佐美酸钠；及其组合。
在一些实例中，所施用的额外的活性剂是治疗糖尿病的活性剂。这类活性 剂包括本领域已知用于治疗糖尿病和或具有抗高血糖活性的那些活性剂，例如， 二肽基肽酶4(DPP-4)抑制剂(如阿格列汀(Alogliptin)、利拉利汀(Linagliptin)、沙 格列汀、西他列汀(Sitagliptin)、维格列汀和小檗碱)、双胍类(如二甲双胍、丁双 胍和苯乙双胍)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)调节剂如噻唑烷二酮类 (TZDs)(如吡格列酮、利格列酮(Rivoglitazone)、罗西格列酮和曲格列酮)、双重 PPAR激动剂(如Aleglitazar、莫格他唑(Muraglitazar)和替格他唑(Tesaglitazar))、 磺脲类(如醋磺己脲、氨磺丁脲、氯磺丙脲、格列齐特、甲苯磺丁脲、妥拉磺脲、 格列本脲(Glyburide)、格列吡嗪、格列喹酮、格列吡脲和格列美脲)、氯茴苯酸 类("格列奈类(glinides)")(如那格列奈、瑞格列奈和米格列奈)、胰高血糖素样肽 -1(GLP-1)和类似物(如Exendin-4、艾塞那肽(Exenatide)、Liraglutide(利拉格鲁肽)、 阿必鲁泰(Albiglutide))、胰岛素和胰岛素类似物(如赖脯胰岛素、门冬胰岛素、赖 谷胰岛素、甘精胰岛素、地特胰岛素、Exubera和NPH胰岛素)、α-葡萄糖苷酶 抑制剂(如阿卡波糖、米格列醇和伏格列波糖)、胰岛淀粉样多肽类似物(例如普 兰林肽)、钠依赖性葡萄糖协同转运蛋白T2(SGLT T2)抑制剂(如Dapgliflozin、 瑞格列净(Remogliflozin)和Sergliflozin)及其它(例如苯氟雷司和托瑞司他)。
在另一个实例中，第二种活性剂选自抗肥胖剂、减食欲药、食欲抑制剂和 相关活性剂。饮食和/或锻炼也可以具有协同作用。抗肥胖剂包括但不限于载脂 蛋白-B分泌/微粒体甘油三酯转运蛋白(apo-B/MTP)抑制剂、MCR-4激动剂、 cholescystokinin-A(CCK-A)激动剂、血清素和去甲肾上腺素重摄取抑制剂(例如 西布曲明)、交感神经药、β3肾上腺素能受体激动剂、多巴胺激动剂(例如溴隐 亭)、黑素细胞刺激素受体类似物、大麻素1受体拮抗剂[例如WO2006/047516 中所述的化合物)、黑色素聚集激素拮抗剂、雷普冬(leptons)(OB蛋白)、瘦蛋白 类似物、瘦蛋白受体激动剂、甘丙肽(galanin)拮抗剂、脂肪酶抑制剂(如四氢泥 泊司他汀(tetrahydrolipstatin)，即奥利司他)、减食欲药(如铃蟾肽激动剂)、神经肽-Y拮抗剂、拟甲状腺素药、脱氢表雄酮或其类似物、糖皮质激素受体激动剂 或拮抗剂、食欲肽受体拮抗剂、尿皮质素(urocortin)结合蛋白拮抗剂、胰高血糖 素样肽-1受体激动剂、睫状神经营养因子(如AxokineTM)、人刺鼠相关蛋白质 (AGRP)、生长素释放肽受体拮抗剂、组胺3受体拮抗剂或逆激动剂、神经调节 肽U受体激动剂、去甲肾上腺素能减食欲药(例如芬特明、吗吲哚等)和食欲抑制 剂(例如安非他酮)。
当本发明的化合物与其它治疗剂组合施用时，所共同施用的化合物的剂量 当然将根据所应有的共用药物的类型、所用具体药物、所治疗的病症等而不同。
组合制剂或药物组合物可包含如上文所定义的本发明的化合物或其可药用 盐和至少一种选自如下的活性成分：
a.抗糖尿病剂，例如胰岛素、胰岛素衍生物和模拟物；胰岛素促分泌素如磺脲 类、如格列吡嗪、格列本脲和亚莫利阿玛尔；促胰岛素磺脲受体配体如氯茴 苯酸类、如那格列奈和瑞格列奈；胰岛素敏化剂如蛋白质酪氨酸磷酸酶-IB (PTP-IB)抑制剂如PTP-112；GSK3(糖原合酶激酶-3)抑制剂如SB-517955、 SB-4195052、SB-216763、NN-57-05441和NN-57-05445；RXR配体如GW-0791 和AGN-194204；钠依赖性葡萄糖协同转运蛋白抑制剂如T-1095；糖原磷酸 化酶A抑制剂如BAY R3401；双胍如二甲双胍；α-葡萄糖苷酶抑制剂如阿卡 波糖；GLP-I(胰高血糖素样肽-1)、GLP-I类似物如Exendin-4和GLP-I模拟 物；DPPIV(二肽基肽酶IV)抑制剂如DPP728、LAF237(维格列汀-WO 00/34241的实施例1)、MK-0431、沙格列汀、GSK23A；AGE阻断剂；噻唑 烷酮衍生物(格列酮(glitazone))如吡格列酮、罗西格列酮或专利申请WO 03/043985中作为实施例4的化合物19所述的(R)-1-{4-[5-甲基-2-(4-三氟甲基-苯基)-噁唑-4-基甲氧基]-苯磺酰基}-2,3-二氢-1H-吲哚-2-甲酸，非格列酮型 PPARγ激动剂如GI-262570；二酰甘油转乙酰酶(DGAT)抑制剂如WO 2005044250、WO 2005013907、WO 2004094618和WO 2004047755中公开 的那些；
b.降血脂剂，例如3-羟基-3-甲基-戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂，如 洛伐他汀和相关化合物如美国专利号4,231,938中公开的那些、匹伐他汀、 辛伐他汀和相关化合物如美国专利号4,448,784和4,450,171中公开的那些、 普伐他汀和相关化合物如美国专利号4,346,227中公开的那些、西立伐他汀、 美伐他汀和相关化合物如美国专利号3,983,140中公开的那些、维洛他汀 (velostatin)、氟伐他汀、达伐他汀、阿托伐他汀、罗苏伐他汀和美国专利号 5,753,675中公开的相关他汀化合物、rivastatin(雷司他汀)、如美国专利号 4,613,610中公开的甲瓦龙酸内酯(mevalonolactone)衍生物的吡唑类似物、 PCT申请WO 86/03488中公开的甲瓦龙酸内酯衍生物的茚类似物、如美国专 利号4,647,576中公开的6-[2-(被取代的吡咯-1-基)-烷基)吡喃基-2-酮和其衍 生物、Searle's SC-45355(3-取代的戊二酸衍生物)二盐酸盐、如PCT申请WO 86/07054中公开的甲瓦龙酸内酯的咪唑类似物、如法国专利号2,596,393中 公开的3-羧基-2-羟基-丙烷-膦酸衍生物、如欧洲专利申请号0221025中公开 的2,3-双取代的吡咯、呋喃和噻吩衍生物、如美国专利号4,686,237中公开的 甲瓦龙酸内酯的萘基类似物、如美国专利号4,499,289中公开的八氢萘、如 欧洲专利申请0,142,146A2中公开的mevinolin(洛伐他汀)的酮基类似物和美 国专利号5,506,219和5,691,322公开的喹啉和吡啶衍生物。另外地，适于本 文的用途的可用于抑制HMGCoA还原酶的膦酸化合物在GB 2205837中公 开；角鲨烯合酶抑制剂；FXR(法尼醇X受体)和LXR(肝X受体)配体；考 来烯胺；贝特类(fibrates)药物；烟酸和阿司匹林；
c.抗肥胖剂或食欲调节剂，例如CB 1活性调节剂、黑皮质素受体(MC4R)激动 剂、黑色素聚集素受体(MCHR)拮抗剂、生长激素促分泌素受体(GHSR)拮抗 剂、甘丙肽(galanin)受体调节剂、食欲肽拮抗剂、CCK激动剂、GLP-I激动 剂和其它前胰高血糖素衍生肽；NPYl或NPY5拮抗剂、NPY2和NPY4调节 剂、促肾上腺皮质激素释放因子激动剂、组胺受体-3(H3)调节剂、aP2抑制 剂、PPARγ调节剂、PPARδ调节剂、乙酰基-CoA羧化酶(ACC)抑制剂、 11-β-HSD-l抑制剂、adinopectin受体调节剂；β3肾上腺素能激动剂，如AJ9677(Takeda/Dainippon)、L750355(Merck)或CP331648(Pfizer)或其它已知的β3 激动剂如美国专利号5,541,204、5,770,615、5,491,134、5,776,983和5,488,064 中所公开、甲状腺受体β调节剂，例如如WO 97/21993(U.CaI SF)、WO 99/00353(KaroBio)和GB98/284425(KaroBio)中公开的甲状腺受体配体、如 WO2005011655中公开的SCD-I抑制剂、脂肪酶抑制剂，如奥利司他或 ATL-962(Alizyme)、血清素受体激动剂(如BVT-933(Biovitrum))、单胺重摄 取抑制剂或释放剂如氟苯丙胺、右芬氟拉明、氟伏沙明、氟西汀、帕罗西汀、 舍曲林、对氯苯丁胺、氯福雷司、氯特胺、匹西雷司、西布曲明、右旋苯丙 胺、芬特明、苯丙胺醇或吗吲哚、减食欲药如托吡酯(Johnson&Johnson)、 CNTF(睫状神经营养因子)/
Figure BDA0002472968040000651
(Regeneron)、BDNF(脑源性神经营养 因子)、瘦蛋白和瘦蛋白受体调节剂、芬特明、瘦蛋白、溴隐亭、右旋苯丙胺、 苯丙胺、氟苯丙胺、右芬氟拉明、西布曲明、奥利司他、右芬氟拉明、吗吲 哚、芬特明、苯甲曲秦、安非拉酮、氟西汀、安非他酮、托吡酯、安非泼拉 酮、苄非他明、苯丙胺醇或依考匹泮、麻黄碱、伪麻黄碱；
d.抗高血压剂，例如袢利尿剂如依他尼酸、呋塞米和托塞米；利尿药如噻嗪衍 生物、chlorithiazide、氢氯噻嗪、阿米洛利；血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂 如贝那普利、卡托普利、依那普利、福辛普利、赖诺普利、莫昔普利、培哚 普利、喹那普利、雷米普利和群多普利；Na-K-ATP酶膜泵抑制剂如地高辛； 中性内肽酶(NEP)抑制剂如thiorphan、terteo-thiorphan、SQ29072；ECE抑制 剂如SLV306；ACE/NEP抑制剂如奥马曲拉、山帕曲拉和法西多曲；血管紧 张素II拮抗剂如坎地沙坦、依普罗沙坦、厄贝沙坦、氯沙坦、替米沙坦和 缬沙坦，特别是缬沙坦；肾素抑制剂如阿利吉仑、特拉吉仑、地替吉仑、RO 66-1132、RO-66-1168；β-肾上腺素能受体阻断剂如醋丁洛尔、阿替洛尔、倍 他洛尔、比索洛尔、美托洛尔、纳多洛尔、普萘洛尔、索他洛尔和噻吗洛尔； 影响收缩力的药物如地高辛、多巴酚丁胺和米力农；钙通道阻断剂如氨氯地 平、苄普地尔、地尔硫卓、非洛地平、尼卡地平、尼莫地平、硝苯地平、尼 索地平和维拉帕米；醛固酮受体拮抗剂；醛固酮合酶抑制剂；和ET/All双重 拮抗剂如WO 00/01389中公开的那些。
e.增加HDL的化合物；
f.胆固醇吸收调节剂如
Figure BDA0002472968040000652
和KT6-971；
g.Apo-Al类似物和模拟物；
h.凝血酶抑制剂如希美加群；
i.醛固酮抑制剂如阿那曲唑(anastrazole)、法倔唑(fadrazole)、依普利酮；
j.血小板聚集抑制剂，如阿司匹林、氯吡格雷硫酸氢盐；
k.雌激素、睾酮、选择性雌激素受体调节剂、选择性雄激素受体调节剂；[0056] 1)化疗剂，如芳香酶抑制剂如弗隆、抗雌激素剂、拓扑异构酶I抑制剂、拓 扑异构酶II抑制剂、微管活性剂、烷化剂、抗肿瘤抗代谢物、铂化合物、增 加蛋白激酶活性的化合物如PDGF受体酪氨酸激酶抑制剂、优选欧洲专利申 请EP-A-O 564 409的实施例21中所述的伊马替尼({N-{5-[4-(4-甲基-哌嗪子 基-甲基)-苯甲酰胺基]-2-甲基苯基}-4-(3-吡啶)-2-嘧啶-胺})或专利申请WO 04/005281的实施例92中所述的4-甲基-N-[3-(4-甲基-咪唑-1-基)-5-三氟甲基- 苯基]-3-(4-吡啶-3-基-嘧啶-2-基氨基)-苯甲酰胺；和
l.与5-HT3受体相互作用的活性剂和/或与5-HT4受体相互作用的活性剂，例如 美国专利号5510353的实施例13中所述的替加色罗、替加色罗马来酸氢盐、 西沙必利、西兰司琼；
m.用于治疗烟草滥用的活性剂，例如尼古丁受体部分激动剂、盐酸安非他酮(还已知商标为
Figure BDA0002472968040000661
)和尼古丁替代疗法；
n.用于治疗勃起功能障碍的活性剂，例如多巴胺能药，如阿扑吗啡)、ADD/ ADHD活性剂(如
Figure BDA0002472968040000662
和
Figure BDA0002472968040000663
)；
o.用于治疗醇中毒的活性剂，如阿片类拮抗剂(如纳曲酮(还已知商标为Re
Figure BDA0002472968040000667
) 和纳美芬)、戒酒硫(disulfiram)(还已知商标为
Figure BDA0002472968040000664
)和阿坎酸(还已知商 标为
Figure BDA0002472968040000665
)).另外地，还可以共同施用用于减轻酒精戒断症状的活性剂， 例如苯二氮杂卓、β-阻断剂、可乐定、卡马西平、普加巴林和加巴喷丁
Figure BDA0002472968040000666
本领域技术人将理解，根据本文所述的任意方面、实施方案或实例或实施 例的药物组合物可以作为受治疗者的代谢疾病或与受损的GPR119和/或受损的 GLP-1生物合成和/或分泌相关的其它障碍的组合治疗途径的一部分进行施用。 在组合疗法中，各活性剂可以同时或以任意次序依次施用。当依次施用时，可 以优选通过相同途径施用组分。
在其中两种活性剂分别应用的一些实例中，人们通常将确保显著的时间期 在每次递送时间之间未到期，以便两种活性剂将仍然能够发挥有利的组合作用。 在这类实例中，关注的是，人们将通常在相互12-24小时内施用两种治疗，更优 选在相互约6-12小时内，最优选仅约12小时的延迟时间；在一些情况中，可以 期望显著延长治疗时间，但是，其中在各施用之间度过数天(2、3、4、5、6或 7)至数周(1、2、3、4、5、6、7或8)。还可以想到，多于一次的药物施用将是 期望的。
当本发明的可药用组合物和第二种活性剂在不同的药物组合物中施用时， 施用途径可以不同。例如，本发明的可药用组合物通过本领域已知的任意适当 途径进行施用，所述途径包括但不限于口服或胃肠道外途径，包括静脉内、肌 内、皮下、透皮、气道(气雾剂)、经肺、经鼻、经直肠和局部(包括颊服和舌下) 施用，第二种药物活性剂通过不同的途径、例如本领域用于施用所述药物活性 剂常用的途径进行施用。在非限制性的实例中，本发明的可药用组合物可以经 口服施用，而第二种药物活性剂可以经注射施用。
在其它实施方案中，本发明涉及制备药物组合物的方法，该方法包括将治 疗有效量的式I化合物或其可药用盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或其可药用盐 或溶剂合物与至少一种可药用载体、赋形剂和/或稀释剂联合和/或混合。
4.激动细胞中G PR119的方法
在第三个宽方面，提供了激动和/或部分激动和/或逆拮抗细胞中GPR119的 方法，该方法包括使能够表达GPR119的细胞与有效量的本文通篇所述的根据 第一个方面或其任意实施方案或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或 油酰基-LPI或其盐或溶剂合物和/或根据第二个方面或实施方案或实例或实施例 的药物组合物接触。例如，所述接触在活体外和/或体内进行。细胞可以是胰细 胞或GI道细胞，例如细胞是L-细胞或胰β细胞。
在第四个宽方面，提供了激动和/或部分激动和/或逆拮抗细胞中GPR119的 方法，该方法包括使包含或已经表达GPR119的细胞与有效量的有效量的本文 通篇所述的根据第一个方面或其任意实施方案或实例或实施例的化合物或其盐 或溶剂合物和/或油酰基-LPI或其盐或溶剂合物和/或根据第二个方面或实施方 案或实例或实施例的药物组合物接触。例如，所述接触在活体外和/或体内进行。 细胞可以是胰细胞或GI道细胞，例如细胞是L-细胞或胰β细胞。
本发明的化合物调节GPR119的活性，照此可用于治疗其中GPR119活性促 成该疾病的病状和/或症状的疾病或障碍。本发明还提供了用于制备药剂的本发 明的化合物，所述药剂用于治疗其中GPR119活性促成该疾病的病状和/或症状 的疾病或障碍。
II型糖尿病所产生的的病状是其靶组织处的胰岛素信号传导受损和胰腺的 产生胰岛素的细胞不能响应高血糖信号而分泌适当程度的胰岛素。治疗后者的 现有疗法包括β-细胞ATP-敏感性钾通道的抑制剂以激发内源性胰岛素储备的释 放或者施用外源性胰岛素。这些无一实现精确的血液葡萄糖水平标准化，并且 均有诱导低血糖的风险。出于这些原因，已经对开发以葡萄糖依赖性作用发挥 功能的药物、即葡萄糖信号传导增强剂存在极大兴趣。以这种方式发挥功能的 生理学信号传导系统是充分表征的，包括肠肽GLP-I、GIP和PACAP。这些激 素经由它们的同源G-蛋白偶联受体发挥作用以刺激胰β-细胞中cAMP的生成。 因此，本发明的激动剂(类似地发挥功能，β-细胞GPCRs、包括GPR119)刺激内 源性胰岛素的释放和因此促进II型糖尿病中的血糖量正常。还已经确立，增加 的cAMP(例如作为GLP-I刺激的结果)促进了β-细胞增殖、抑制β-细胞死亡和 因此增加胰岛量。对β-细胞量的这种积极作用预期既有利于其中胰岛素产生不 足的II型糖尿病，也有利于其中β-细胞被不适当的自身免疫应答破坏的I型糖 尿病。
一些β-细胞GPCRs、包括GPR119还存在于下丘脑中，在那里它们调控饥 饿、饱腹、减少食物摄入，从而控制或减轻体重和能量消耗。因此，鉴于它们 在下丘脑循环内的功能，这些受体的激动剂或逆激动剂缓和了饥饿，促进了饱 腹，因此调控了体重。
还已经充分确定，代谢疾病对其它生理系统产生负面影响。因此，经常共 同发生多种疾病状态(例如I型糖尿病、II型糖尿病、葡萄糖耐量不足、抗胰岛 素性、高血糖、高脂血、高甘油三酯血症、高胆固醇血症、血脂异常症、肥胖 或"X综合征"中的心血管疾病)或存在清楚地继发于糖尿病的继发性疾病(例如肾 脏疾病、周围神经病)。因此，预期糖尿病的有效治疗又将有利于这些相互关联 的疾病状态。
在一个实施方案中，本发明提供了治疗方法，该方法包括使能够表达 GPR119的细胞与有效量的本发明的化合物接触以增加葡萄糖依赖性促胰岛素 多肽(GIP)和胰多肽(PPY)的水平。例如，神经保护、学习和记忆、癫痫发作和周 围神经病。已经证明GLP-I和GLP-I受体激动剂有效治疗神经变性疾病和其它 神经学障碍。已经证明GLP-I和exendin-4在PC 12细胞中在撤回生长因子后刺 激神经突生长和增加细胞存活。在神经变性啮齿动物模型中，GLP-I和exendin-4 恢复基底前脑中的胆碱能标记物活性。中心输注GLP-I和exendin-4还降低小鼠 中淀粉样-β肽的水平和降低培养的PC 12细胞中淀粉样前体蛋白质量。已经证 明GLP-I受体激动剂增加大鼠的学习，GLP-I受体敲除小鼠显示出学习行为缺陷。 敲除小鼠还呈现出对红藻氨酸诱导的癫痫发作的敏感性增加，其可以通过施用 GLP-I受体激动剂来阻止。还已经证明GLP-I和exendin-4有效治疗吡哆醇诱导 的周围神经变性(其为外周感觉神经病的实验模型)。
在一个实施方案中，本发明提供了治疗方法，该方法包括使能够表达 GPR119的细胞与有效量的本发明的化合物接触以调控GIP以增加感觉运动协 调和记忆认知。还已经证明GIP具有对海马祖细胞的增殖的作用和在增加感觉 运动协调和记忆认知中的作用。
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗方法，该方法包括使能够表达 GPR119的细胞与有效量的本发明的化合物接触以调控GLP-2和治疗短肠综合 征(SBS)。在动物中和来自临床试验的数项研究已经证明，GLP-2是在肠吸收中 发挥重要作用的营养激素。其在调控细胞增殖、凋亡和营养吸收中的作用已经 有充分的文献记载。短肠综合征的特征是由于疾病或外科手术除去一部分小肠 (例如克罗恩病)而引起营养物、水和维生素吸收不良。改善肠吸收的疗法被认为 在该疾病的治疗中是有益的。实际上，在SBS患者中的II期研究已经证明，GLP-2 类似物替度鲁肽适度地增加流体和营养物吸收。
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗方法，该方法包括使能够表达 GPR119的细胞与有效量的本发明的化合物接触以增加GIP和GLP-I水平以治疗 骨质疏松症。已经证明GLP-I在鼠C-细胞系(CA-77)中增加降钙素和降钙素相关 基因肽(CGRP)分泌和表达。降钙素通过破骨细胞抑制骨吸收和促进骨骼矿化。 骨质疏松症是以骨矿物质密度降低为特征的疾病，因此GLP-I诱导的降钙素增 加可能是有治疗益处的。
已经报道了GIP在成骨细胞的新骨形成的标记物、包括I型胶原mRNA的 上调中以及在增加骨矿物质密度中有牵涉。和GLP-I一样，也已经证明GIP抑 制骨吸收。
在进一步的实施方案中，本发明提供了治疗方法，该方法包括使能够表达 GPR119的细胞与有效量的本发明的化合物接触以增加GIP和PPY水平以治疗 胃排空。位于胰岛胰多肽(PP)细胞上的GPR119已经牵涉在PPY的分泌中。已 经报道了PPY在各种生理过程中具有深远作用，包括调节胃排空和胃肠动力。 这些作用下调了消化过程和营养摄取，由此阻止了餐后血糖升高。PPY可通过 改变下丘脑进食调节肽的表达来抑制食物摄入。PP过表达小鼠呈现出瘦表型， 并且食物摄入和胃排空速率降低。
根据前述，本发明还提供了在需要其的受治疗者中预防或改善上述任一疾 病或障碍的症状的方法，该方法包括给所述受治疗者施用治疗有效量(参见下文 “施用和药物组合物”)的式I化合物或其可药用盐。对于任意上述用途，所要 求的剂量将根据施用模式、所治疗的具体病症和预期作用而不同。
5.诱导细胞中GLP-1分泌和/或合成的方法
在第五个方面，还提供了诱导和/或增加细胞中GLP-1分泌和/或合成和/或 活性的方法，该方法包括使能够分泌和/或表达GLP-1的细胞与有效量的根据第 一个方面或其任意实施方案或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油 酰基-LPI或其盐或溶剂合物和/或根据第二个方面或其任意实施方案或实例或实 施例的药物组合物接触。
在根据本文所述的第三、第四和第五个宽方面的一些实例中，所述方法各 自可以在患有或被怀疑患有代谢疾病如肥胖和/或糖尿病(如2型糖尿病)或处于 发生代谢疾病如肥胖和/或糖尿病(如2型糖尿病)的风险中的受治疗者中进行。
6.油酰基-LPI化合物的用途
在第六个方面，提供了根据第一个方面或其任意实施方案或实例或实施例 的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或其盐或溶剂合物和/或根据第二 个方面或其任意实施方案或实例或实施例的药物组合物在激动和/或部分激动和 /或逆拮抗细胞中GPR119中的用途，例如在活体外或体内。这类用途包括但不 限于上文第4部分和以下部分中所识别的那些用途。
在一个优选的实例中，细胞是胰细胞或GI道细胞，例如细胞是L-细胞或胰 β细胞。
在本发明的特定形式中，本文所述的本发明的化合物可用作治疗性或预防 性抗动脉粥样硬化剂用于动脉粥样硬化、动脉硬化、心血管疾病、中风、脑血 管缺血、心脏疾病、冠心病、缺血性心脏病、绞痛和心脏病发作。
在另一方面，提供了在需要其的受治疗者中治疗或预防非酒精性脂肪肝疾 病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、脂肪肝、肝纤维化、肝硬化、肝癌 (HCC)、与铁超负荷障碍相关的肝疾病、酒精性肝疾病的方法，该方法包括给所 述受治疗者施用治疗有效量的根据第一个宽方面或其任意实施方案或实例或实 施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或盐或溶剂合物和/或根据第 二个方面或其任意实施方案或或实例或实施例的药物组合物。
NAFLD是当脂肪由于除过度应用酒精以外的原因在肝脏中沉积(脂肪变性) 时发生的一种脂肪肝类型。NASH是NAFLD的最极端的和快速发展的亚型。 NAFLD是发达国家中最常见的肝脏障碍。
NAFLD与抗胰岛素性和代谢综合征相关；改善饮食与锻炼联合显示是管理 NAFLD和降低抗胰岛素性的最有效的途径。其可响应于最初针对其它抗胰岛素 性状态(例如2型糖尿病)开发的治疗，如二甲双胍和噻唑烷二酮类。一直到80％ 的肥胖人患有该疾病，一直到20％的正常体重的人可能发展该疾病。
NAFLD可引起肝功能障碍相关症状。在常规验血期间肝功能异常检测后或 在通过活组织检查检测到肝硬化后可偶然地诊断出NAFLD。确实，在可归属于 肝脏疾病的症状或征兆时或当测试显示异常肝化学时，应当怀疑并研究NAFLD。
代谢综合征是影响日益增长的受治疗者群体的慢性疾病，在世界范围内增 加了发达国家和发展中国家的社会经济成分。NAFLD和NASH被认为是该代谢 应激物的直接肝脏后果，与2型糖尿病有密切关系，如Yach D,等人:Nature Medicine 2006；12:62-66；Marchesini G等人:Hepatology 2003；37:917-923和 Sanyal AJ:Gastroenterology2002；123:1705-1725中所述，其内容各自通过引用 整体并入本文。
在第七个方面，提供了根据第一个方面或其任意实施方案或实例或实施例 的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或其盐或溶剂合物和/或根据第二 个方面或其任意实施方案或实例或实施例的药物组合物在活体外或体内诱导和/ 或增加细胞的GLP-1分泌和/或诱导和/或增加细胞中GLP-1合成和/或活性的用 途。在一个这类实例中，细胞是胰细胞或GI道细胞，例如细胞是L-细胞或胰β 细胞。
7.治疗或预防代谢疾病的方法
由于本发明的化合物或盐或溶剂合物和包含所述化合物或盐或溶剂合物的 治疗组合物或药物组合物可以改善或阻止代谢疾病如与受损的葡萄糖内稳态有 关的那些、例如受GPR119激活和/或GLP-1生物合成和/或分泌介导的那些障碍， 本发明提供了这类障碍的治疗或预防，包括预治疗(在医疗程序的情况中)和在已 经发作代谢疾病或病症的症状后的治疗。
在第八个方面，提供了在需要其的受治疗者中治疗或预防代谢疾病的方法， 该方法包括给所述受治疗者施用治疗有效量的根据第一个宽方面或其任意实施 方案或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或盐或溶剂合 物和/或根据第二个方面或其任意实施方案或实例或实施例的药物组合物。
在一个实例中，施用诱导和/或增加了受治疗者GI道细胞的GLP-1分泌和/ 或诱导和/或增加了受治疗者细胞中的GLP-1合成和/或活性。
在一个实例中，代谢疾病是糖尿病和/或肥胖(如2型糖尿病)。受治疗者可 罹患一种或多种这类代谢疾病或处于发生一种或多种这类代谢疾病的风险中。
在第九个方面，提供了治疗有效量的根据第一个宽方面或其任意实施方案 或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或盐或溶剂合物和 /或根据第二个方面或其任意实施方案或实例或实施例的药物组合物在需要其的 受治疗者中治疗或预防一种或多种代谢疾病的用途。
在第十个方面，提供了有效量的根据第一个宽方面或其任意实施方案或实 例或实施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或盐或溶剂合物在制备 药剂中的用途，所述药剂用于在需要其的受治疗者中治疗或预防一种或多种代 谢疾病。
在其它方面，提供了治疗有效量的根据第一个宽方面或其任意实施方案或 实例或实施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或盐或溶剂合物和/ 或根据第二个方面或其任意实施方案或实例或实施例的药物组合物在激动和/或 部分激动和/或逆拮抗受治疗者的GPR119和/或用于诱导和/或增加受治疗者的 GLP-1分泌和/或合成中的用途。
在进一步的方面，提供了根据第一个宽方面或其任意实施方案或实例或实 施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或盐或溶剂合物和/或根据第 二个方面或其任意实施方案或实例或实施例的药物组合物在制备药剂中的用途， 所述药剂用于激动和/或部分激动和/或逆拮抗受治疗者的GPR119和/或用于诱 导和/或增加受治疗者的GLP-1分泌和/或合成。
在一个实例中，根据其任意宽方面或其实施方案或实例或实施例中所述的 任意方法或用途，受治疗者患有或罹患一种或多种代谢疾病或处于发生一种或 多种代谢疾病的风险中。例如，代谢疾病选自肥胖、糖尿病及其组合。在一个 优选的实例中，糖尿病是2型糖尿病。在一个优选的实例中，受治疗者是人。
在本发明的实施方案中是在个体中治疗代谢疾病和/或代谢相关疾病的方法， 该方法包括给需要这类治疗的个体施用治疗有效量的本发明的化合物或其药物 组合物。
代谢疾病和代谢相关疾病非限制性地选自高脂血、肥胖、1型糖尿病、2型 糖尿病、特发性1型糖尿病(Ib型)、成人隐匿性自身免疫性糖尿病(LADA)、早 发性2型糖尿病(EOD)、青年起病非典型糖尿病(YOAD)、青年成熟期发病型糖 尿病(MODY)、营养不良相关性糖尿病、妊娠糖尿病、动脉粥样硬化、动脉硬化、 心血管疾病、中风、脑血管缺血、心脏疾病、冠心病、缺血性心脏病、绞痛和 心脏病发作、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、脂 肪肝、肝纤维化、肝硬化、肝癌(HCC)、与铁超负荷障碍相关的肝疾病和酒精性肝疾病、冠心病、缺血性中风、血管成形术后再狭窄、外周血管病、间歇性跛 行、心肌梗塞(例如坏死和凋亡)、血脂异常症、餐后脂血症、葡萄糖耐量受损病 症(IGT)、空腹血浆葡萄糖受损病症、代谢性酸中毒、酮病、关节炎、肥胖、骨 质疏松症、高血压、充血性心力衰竭、左心室肥大、外周动脉疾病、糖尿病性 视网膜病、黄斑变性、白内障、糖尿病性肾病、肾小球硬化、慢性肾衰竭、糖 尿病性神经病、代谢综合征、X综合征、经前期综合征、冠心病、心绞痛、血 栓形成、动脉粥样硬化、心肌梗塞、短暂缺血发作、中风、血管再狭窄、高血 糖、高胰岛素血症、高脂血、高甘油三酯血症、抗胰岛素性、葡萄糖代谢受损、 葡萄糖耐量受损病症、空腹血浆葡萄糖受损病症、肥胖、勃起功能障碍、皮肤 和结缔组织疾病、足溃疡和溃疡性结肠炎、内皮功能障碍和血管顺应性受损。
8.药剂的制备
在其它方面，提供了制备药剂或根据第二个方面的药物组合物的方法。该 方法包括将(i)治疗有效量的油酰基-LPI或其可药用盐或溶剂合物和/或根据第一 个宽方面或其任意实施方案或实例或实施例的式I化合物或其盐或溶剂合物和 (ii)可药用载体、赋形剂和/或稀释剂组合和/或混合。
在进一步的方面，提供了制备根据第一个宽方面或其任意实施方案或实例 或实施例的化合物或其盐或溶剂合物的方法。在相关的进一步宽方面，本发明 还提供了通过进行该方法产生的那些化合物或其盐或溶剂合物。
在其它方面，提供了治疗有效量的根据第一个宽方面或其任意实施方案或 实例或实施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或其盐或溶剂合物在 制备药剂中的用途，所述药剂用于在需要其的受治疗者中激动和/或部分激动和/ 或逆拮抗GPR119和/或用于在需要其的受治疗者中向上调节GLP-1的活性和/ 或合成和/或分泌。优选地，受治疗者是患有或被怀疑患有代谢疾病或处于发生 代谢疾病的风险中的受治疗者。例如，代谢疾病选自肥胖和糖尿病如2型糖尿 病。
在进一步的方面，提供了治疗有效量的根据第一个方面或其任意实施方案 或实例或实施例的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或其盐或溶剂合物 在制备药剂中的用途，所述药剂用于在需要其的受治疗者中诱导和/或增加细胞 的GLP-1分泌和/或诱导和/或增加细胞的GLP-1合成和/或活性。优选地，受治 疗者是患有或被怀疑患有代谢疾病或者处于发生代谢疾病的风险中的受治疗者。 例如，代谢疾病选自肥胖和糖尿病如2型糖尿病。
实施例
实施例1：材料和方法
(i)所用材料
脂质(油酰基、花生四烯基、硬脂酰基和十七烯酰基)购自Avanti Lipids。将 贮备液溶于甲醇:氯仿中，于-20℃储存。油酰基乙醇酰胺(OEA)、溶血磷脂酰胆 碱(LPC)和DPP-IV抑制剂(KR-62436)、PD98059购自Sigma，溶于DMSO中。 将从Cayman Chemicals,AnnHarbour,US获得的OEA溶于1％DMSO中，用于 cAMP实验。AR-231,453和Arvanil获自Abcam，H89获自Santa Cruz。GeneJET RNA纯化试剂盒、Maxima逆转录试剂盒和Maxima SYBRGreen/ROX qPCR主 混合试剂盒均购自Thermo Scientific。
(ii)NCI-H716和Glutag的培养
将NCI-H716细胞在75cm2组织培养瓶(Corning)中在RPMI 1640培养基中于 37℃和5％CO2中维持，所述培养基含有2.0mM L-谷氨酰胺、1.5g/L碳酸氢钠、10mM HEPES缓冲剂、1.0mM丙酮酸钠和4.5g/L葡萄糖并补充有10％FBS。 当铺板进行实验时，通过使细胞在包涂有生长因子减少的Matrigel的皿中生长 而引发细胞黏附和内分泌分化，所述Matrigel(Becton Dickinson,Bedford,MA) 以1:2比例稀释于高葡萄糖DMEM、10％FBS、2mM谷氨酰胺、100IU/ml青霉 素和100μg/ml链霉素中，如以前De Bruine,P.,Dinjens,W.N.,van der Linden,E. P.,Pijls,M.M.,Moerkerk,P.T.,&Bosman,F.T.(1993)The AmericanJournal of Pathology,第142(3)卷，第773–782页中所公开，其公开内容通过引用整体并入 本文。
将Glutag细胞于37℃和5％CO2维持在含有2.0mM L-谷氨酰胺、1.0mM丙 酮酸钠并补充有10％FBS、100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素的低葡萄糖 DMEM(Sigma)(1g/L)中。
将COS-7细胞于37℃和10％CO2在补充有10％FBS、26mg/ml L-谷氨酰 胺和180IU/ml青霉素+45μg/L链霉素的Dulbecco′s改良Eagle培养基(DMEM) 1885(Pen Strep)(LifeTechnologies,CA,USA)中培养。将COS-7细胞于37℃、 10％CO2中用GPR119或pcDNA通过磷酸钙转染方法进行瞬时转染5小时，如 Kissow H、Hartmann B,Holst JJ,Viby NE,HansenLS,Rosenkilde MM,Hare KJ, Poulsen SS.Regul Pept.2012.第179(1-3)卷,第91-100页中所述；其公开内容通 过引用整体并入本文。
(iii)siRNA转染
(a)粘附细胞(Glutag)的转染
根据“Lipofectamine转染方案”(Invitrogen,Life Technologies)进行转染，对于 6-孔板模式进行优化。简言之，将细胞以3.0x 105/孔的密度在6-孔板中铺在完 全生长培养基中，于37℃/5％CO2孵育。24小时后，当细胞为～60％汇合时，在 没有RNAse的条件下进行转染。将300nM总siRNA汇集物和4.0μl Lipofectamine转染试剂在分别的试管中在Optimem中进行稀释，于室温(RT)孵 育5分钟。将试管内容物小心混合，再次于RT孵育20分钟。将细胞用无菌1X PBS洗涤两次，在300μL Optimem中孵育。20分钟后，将转染复合物滴加至细 胞中。然后将细胞孵育4小时，然后加入不含抗生素的含30％血清的Optimem。 在分泌实验之前将细胞于37℃/5％CO2进一步孵育48小时。在适当的时间点收 集转染细胞用于蛋白质表达分析(转染后2和4天之间)。
(b)混悬细胞(NCI-H716)的转染
根据“Lipofectamine 2000转染方案”(Invitrogen,Life Technologies)进行转染， 对于6-孔板模式进行优化。简言之，将约300,000个细胞在包涂有生长因子减少 的Matrigel的6-孔板中转染，于37℃,5％CO2孵育。通过在分别的试管中将 300nM siRNA稀释于150μL Optimem中和将4.5μL Lipofectamine 2000 (Invitrogen,Life Technologies)稀释于150μL Optimem中制备了转染复合物。然后 将稀释的siRNA和转染试剂于RT孵育5分钟。将试管内容物小心混合，于RT 再次孵育25分钟以允许在加至细胞中之前形成Lipofectamine-siRNA复合物。 在进行实验之前，将板于37℃在5％CO2孵育器中孵育48小时。孵育12小时 后，收集转染细胞，以2.5X 104/孔的密度在24-孔板中铺在生长因子减少的 Matrigel上，于37℃,5％CO2孵育。
(c)所用的转染siRNA序列
在所有转染实验中使用表1中所示的人和鼠siRNA序列。
表1:在转染实验中所用的对抗GPR119和GPR55的人(H)和鼠(M)siRNA的序 列
Figure BDA0002472968040000761
通过实时RT-PCR对转染有效性进行了定量。简言之，采用GeneJET RNA 纯化试剂盒、根据生产商的指导从GLUTag和NCI-H716细胞提取了总RNA， 采用Maxima逆转录试剂盒进行逆转录，然后采用Maxima SYBR Green/ROX qPCR主混合试剂盒进行实时PCR。GAPDH用作标准化对照。
(iv)通过Western印迹技术进行的蛋白质分析
(a)细胞提取
当细胞培养物达到80-90％时，除去培养基，将细胞用1x PBS洗涤两次。 将细胞在150μl(对于6孔板的一个孔而言)含有磷酸酶抑制剂混合物(1:1000) (Sigma Aldrich,UK)和蛋白酶抑制剂(1:1000,Sigma Aldrich,UK)的Triton X-100 溶解缓冲液中溶解。将细胞用刮铲分离，收集溶解物，于10,000rpm,4℃离心 5分钟。然后将混合物转移至1.5ml微量离心管中，用于蛋白质定量。将细胞溶 解物于-20℃储存用于长期存储。所有溶解物在冰上制备。
(b)蛋白质印迹和显影
在旋转板上通过将硝基纤维素膜在奶在PBS-0.05％吐温-20(v/v)中的5％制 备物中孵育30分钟阻止了非特异性抗体结合。然后将膜在PBS-0.05％吐温-20 (v/v)中洗涤，然后在旋转板上用稀释于PBS-0.05％吐温-20(v/v)中的原代抗体于 4℃孵育过夜。24小时后，将膜用PBS-0.05％吐温-20(v/v)洗涤5次5分钟，然 后在旋转板上用适当的二级抗体于室温孵育1小时。所用原代抗体为：来自Santa Cruz Biotechnology的GPR119抗山羊(1:500)，来自Cayman Chemical的GPR55 抗兔，来自Sigma-Aldrich的Tubulin抗鼠(1:10000)，来自Cell Signaling的磷酸 -ERK,活性β-连环蛋白，和来自R&D System Inc的磷酸-CREB。然后将膜用 PBST洗涤，在滤纸上干燥，然后用ECL Prime溶液(Amersham Bioscience,UK)或Immobillon Western化学发光HRP底物(Merck Millipore,UK)孵育5分钟，放 在夹套中，暴露于化学发光膜。
(v)总RNA提取
采用GeneJET RNA纯化试剂盒、根据生产商的指示从细胞中提取总RNA。 简言之，将细胞沉淀物重新混悬于600μl补充有β-巯基乙醇的溶解缓冲液中， 涡旋至少10秒，向细胞中加入360μl 100％乙醇，通过吸取进行混合。将700μl 细胞溶解物转移至插入收集试管中的GeneJET RNA纯化柱中，于12,000rpm离 心1分钟，弃去流出物。然后在纯化柱中加入700μl补充有乙醇的洗涤缓冲液1， 于12,000rpm离心1分钟，弃去流出物。在纯化柱中加入600μl补充有乙醇的 洗涤缓冲液2，于12,000rpm离心1分钟，然后在纯化柱中加入另外的200μl 洗涤缓冲液2，于12,000rpm离心2分钟。最后，在纯化柱中加入100μl不含核 酸酶的水，于12,000rpm离心1分钟以洗脱出RNA。然后将RNA产物用于cDNA 合成或于-80℃储存备用。根据生产商的指示，在冰上进行cDNA合成。
(vi)实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)
根据生产商的指示进行RT-qPCR(目录号K0222,Fermentas)。简言之，将约 100ngcDNA与7.5μl 2X Maxima SYBR green/Fluorescein qPCR混合物、1μl正向 和反向引物(10μM贮备液)混合，最终体积为15μl。还将GADPH cDNAs进行扩 增作为内部对照。所有实验一式三份进行。在延展步骤收集数据。采用ABI 7500 实时PCR系统软件的相关ddCT分析模式计算了基因表达定量的相关变化。
所用的引物对基于对人和鼠GPR119公开的序列(Lauffer,L.M.,Iakoubov, R.,&Brubaker,P.L.(2009).Diabetes,第58卷(5月),第1058–1066页；Soga,T., Ohishi,T.,Matsui,T.,Saito,T.,Matsumoto,M.,Takasaki,J.,Furuichi,K.(2005), Biochemicaland Biophysical Research Communications,第326(4)卷,第744–751 页，其公开内容通过引用整体并入本文)。
(Ryberg等人,2007)记载了对人和动物GPR55而言的序列，从5’至3’为：
a.GPR119(人)正向:TCTGGTCAGCCCAACTCTCT(SEQ ID NO:5)；
b.GPR119(人)反向:CACGTGGGCATCCTCTTTTA(SEQ ID NO:6)；
c.GPR119(鼠)正向:TGATGGTGTTGGCCTTTGCTTCAC(SEQ ID NO:7)；
d.GPR119(鼠)反向:TGGTAAAGGCAGCATTTGTGG CAG(SEQ ID NO:8)；
e.GPR55(人)正向:GTTTCCATGGGAAAGTGGAA(SEQ ID NO:9)；
f.GPR55(人)反向:GGAAGGAGACCACGAAGACA(SEQ ID NO:10)；
g.GPR55(鼠)正向:CTATCTACATGATCAACTTGGCTGTTT(SEQ ID NO:11)；
h.GPR55(鼠)反向:TGTGGCAGGACCATCTTGAA(SEQ ID NO:12)；
i.GAPDH(人)正向:AGGGCTGCTTTTAACTCTGGT(SEQ ID NO:13)；
j.GAPDH(人)反向:CCCCACTTGATTTTGGAGGGA(SEQ ID NO:14)；
k.GAPDH(鼠)正向:GCACAGTCAAGGCCGAGAAT(SEQ ID NO:15)；和
l.GAPDH(鼠)反向:GCCTTCTCCATGGTGGTGAA(SEQ ID NO:16)。
所用的其它siRNA人和鼠序列包括：
a.siRNA人GPR119#1:CTCCCTCATCATTGCTACTAA(SEQ ID NO:17)。
b.siRNA人GPR119#2:CGGGCTGTGGTTAGTGTCTTA(SEQ ID NO:18)。
c.siRNA人GPR119#3:CAGTCTCTGCTTCACCTTGAA(SEQ ID NO:19)。
d.siRNA人GPR119#4:CAGGAGTGTCACCTCTACCTA(SEQ ID NO:20)。
e.siRNA鼠GPR119#5:CCGTTACTTCCAGATCATGAA(SEQ ID NO:21)。
f.siRNA鼠GPR119#6:CTGAGCCTATAGCACATCTAA(SEQ ID NO:22)。
g.siRNA鼠GPR119#7:TGGCCTTTGCTTCACCTTGAA(SEQ ID NO:23)。
h.siRNA鼠GPR119#8:TTCTCCCTAGATGAAGTATTA(SEQ ID NO:24)。
(vii)原代细胞研究
将小鼠处以安乐死，按照以前Reimann,F.,Habib,A.M.,Tolhurst,G.,Parker,H.E.,Rogers,G.J.,&Gribble,F.M.(2008),Cell Metabolism,第8(6)卷,第532– 539页中所述用5cm结肠分离上皮细胞，该文献的公开内容通过引用整体并入 本文。简言之，从10周龄C57BL/6雄性小鼠切割结肠片段。将片段纵向切割， 在DMEM(无血清)中快速洗涤以除去肠腔内容物。将结肠切成约1-2mm的片， 用约0.5mg/ml胶原酶-P进行消化15分钟。将所得细胞混悬液经70μm尼龙细 胞滤过器(BD Falcon,UK)过滤，于300g离心5分钟，将沉淀物重新溶于补充有 10％FBS的DMEM中。收集纯化细胞，于37℃在包涂Matrigel的24-孔板上在DMEM(25mM葡萄糖)、10％FBS、2mM L-谷氨酰胺、1％青霉素/链霉素中进 行孵育。在GLP-1分析的当天，将细胞用PBS洗涤两次，然后于37℃用LPI 或溶媒甲醇:氯仿(M:C),v/v处理2小时。收集上清液，用于采用来自Millipore 的活性GLP-1ELISA试剂盒进行GLP-1定量。
在处以安乐死后，如其它文献中详述的那样分离胰岛(Carter,J.D.,S.B.Dula,K.L.Corbin,R.P.Wu和C.S.Nunemaker(2009),Biological Procedures Online, 第11(1)卷,第3-31页)。在纯化后，将胰岛于37℃在95％空气和5％CO2的湿 润气氛中在补充有10％FBS、100个单位/ml青霉素和0.1mg/ml链霉素的RPMI 1640培养基中放置过夜。
(viii)分泌研究
将约80,000个Glutag细胞铺在聚-L-赖氨酸包涂的24-孔培养板中，生长至 约80％汇合。在试验前一天将NCI-H716细胞接种在补充有10％FBS的DMEM 培养基中的生长因子减少的MatrigelTM(Becton Dickinson,Bedford,MA)上。对于 NCI-H716细胞，需要约25,000个细胞用于该分泌试验以具有良好的刺激和较低 的基线GLP-1分泌。简言之，将Glutag和NCI-H716细胞洗涤两次，然后用不 含FBS的DMEM孵育2小时，所述DMEM含有单独的1％(M:C)(阴性对照)、 作为阳性对照的10μM弗司扣林(Sigma-Aldrich)或具有不同浓度的油酰基-LPI。 M:C用作溶剂以制备脂肪酸衍生物和抑制剂的储备液。对于分泌试验，分别收 集培养基和细胞。
在单独研究中，将GLUTag或NCI-H716细胞用单独的培养基(1％DMSO, 阴性对照)、PD98059(50μM；Sigma Chemical Co.)、H89(10μM；Santa Cruz)预 处理1小时，然后酌情在抑制剂的存在下用油酰基-LPI(20μM)、OEA(10μM)、 AR231453(1μM)、PMA(10μM)或弗司扣林(10μM,阳性对照)处理约2小时。将 培养基GLP-1分泌计算为对于对照的基线分泌标准化的培养基的总GLP-1含量。
将分离的小鼠胰岛在补充的RPMI 1640培养基中于37℃在95％空气和5％ CO2湿润气氛中放置过夜后，在其上进行葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)。简言 之，精心挑选出胰岛，5个一组放入单独的微量离心管中。将胰岛洗涤两次，然 后与补充有1.1mM葡萄糖的Krebs缓冲液(KRB,115mM NaCl；4.7mM KCl； 1.28mM CaCl2.2H2O；1.2mM KH2PO4；1.2mMMgSO4.7H2O；10mM NaHCO3； 10mM HEPES；0.5％BSA；pH 7.4)一起于37℃孵育40分钟。弃去上清液，然 后将胰岛与补充有16.7mM葡萄糖的KRB一起孵育20分钟。收集上清液用于 采用鼠超敏胰岛素ELISA(Mercodia,Uppsala,瑞典)根据生产商的指导测定胰 岛素，数据记录为20分钟中每个胰岛的胰岛素皮克数(pg/胰岛/20min)。
(ix)cAMP分析
在每个175m2烧瓶中将COS-7细胞用约40μg GPR119 DNA或pcDNA3转 染。在转染后一天，将细胞接种(约35,000个细胞/孔)在96孔白色板(Perkin Elmer, Massachusetts,USA)中。在接下来一天将细胞洗涤两次，于37℃用HBS和1mM IBMX(Sigma Aldrich,USA)孵育30分钟。在分析介质中加入激动剂30分钟。按 照生产商的指示进行
Figure BDA0002472968040000801
cAMP XS+(DiscoveRx,Fremont,USA)。
实施例2:在体外和活体外制备物中油酰基-LPI增加GLP-1的分泌
为了研究不同LPI种类在肠内分泌细胞中的作用，用如下不同的LIP种类 以及用OEA和LPC刺激了鼠(Glutag)和人(NCI-H716)L-细胞：花生四烯基-LPI、 硬脂酰基-LPI、十七烯酰基-LPI和油酰基-LPI。一式两份进行实验，n＝4，总 GLP-1水平通过ELISA测定。结果显示在图1A和图1B中。
在本实验中，使用OEA和LPC与LPI比较，因为提出它们在GLP-1分泌 中具有作用。已经报道了弗司扣林和PMA有效增加Glutag细胞和NCI-H716中 的GLP-1释放，因此选择它们作为本实验中的阳性对照。
如图1A和1B中所示，油酰基-LPI显著刺激GLP-1分泌，在Glutag细胞中 至126±5％，在NCI-H716细胞中至124±7.4％。令人感兴趣的是，本文获得的 结果显示，油酰基-LPI刺激的Glutag和NCI-H716细胞的GLP-1释放高于OEA， 以前已经报道了OEA能够诱导这些细胞中释放的GLP-1。
接下来，发明人在Glutag和NCI-H716两种细胞系中研究了不同的油酰基 -LPI浓度对GLP-1分泌的作用。如图1C和图1D中所示的剂量响应实验的结果 证明：当例如以浓度10μM和20μM使用时，油酰基-LPI能够刺激GLP-1释放(参 见图1C和D)。
总之，这些数据证明，油酰基-LPI是负责增加从L-细胞分泌GLP-1的特定 种类的LPI。
实施例3:油酰基-LPI以非葡萄糖依赖的方式诱导GLP-1分泌
早期的研究提示，葡萄糖可以以剂量依赖的方式刺激GLP-1分泌。但是， 在上述实施例中没有观察到OEA诱导的任何GLP-1分泌促使发明人研究了在分 泌中不同的葡萄糖浓度是否对OEA或油酰基-LPI诱导的GLP-1释放具有作用。
为了测定葡萄糖在油酰基-LPI诱导的GLP-1分泌中的作用，发明人在5mM 和10mM葡萄糖的存在下在分泌培养基中进行了剂量响应实验，结果概括在图 2A和图2B中。所得结果证明:在5mM葡萄糖时，OEA仅能够在较高浓度(50μM) 时刺激GLP-1分泌(178±15％)。与之不同，油酰基-LPI剂量依赖性地增加培养 基中的GLP-1分泌，10μM(126±8％)、20μM(223±23％)和50μM(333±45％)， 参见图2A。而且，在10mM葡萄糖时，OEA以与油酰基-LPI相似的方式剂量 依赖性地刺激GLP-1分泌，参见图2B。
总之，这些数据表明，油酰基-LPI以非葡萄糖依赖的方式诱导GLP-1分泌。
实施例4：油酰基-LPI诱导的GLP-1分泌不受GPR55调控。
以前的研究已经将LPI鉴别为GPR55的内源性配体，其可以在肠能动性和 饱腹感中发挥作用。虽然GPR55丰富地位于GI道，但是以前从未研究过GPR55 在GLP-1调控中的作用。发明人在上述实施例中有关油酰基-LPI诱导GLP-1分 泌的发现还促使了发明人研究LPI的这种特定种类(即油酰基-LPI)是否能够激活 GPR55以刺激GLP-1释放。
为了研究GLP-1分泌中油酰基-LPI和GPR55之间的关系，将GLUTag和 NCI-H716细胞用特异性GPR55 siRNA或scrambled siRNA(对照)转染。通过 Western印迹分析在蛋白质水平评价了GPR55的向下调节的作用(图3A和B)， 在Glutag细胞中产生了80％GPR55 mRNA的显著敲减(图3E)，如通过实时 RT-PCR测定。光密度测定分析结果清楚地证明了GPR55蛋白质的向下调节(图 3C和D)。
然后将转染细胞用油酰基-LPI处理，以评价GPR55的向下调节对GLP-1分 泌的作用，结果显示在图3F和图3G中。在该分泌试验中，当用油酰基-LPI处 理2小时时，转染细胞仍然能够释放显著水平的GLP-1。在scrambled和siGPR55 转染细胞中的GLP-1分泌之间没有差异。这些结果证明，当用油酰基-LPI处理 时，Glutag和NCI-H761细胞中的GPR55的向下调节对GLP-1分泌没有作用。
为了进一步证实当用油酰基-LPI处理时GPR55对GLP-1分泌没有作用，发 明人研究了油酰基-LPI对来自野生型和GPR55-/-小鼠的混合结肠制备物的原代 培养物的作用。采用了如以前以下文献中所述的用于GLP-1分泌的混合结肠制 备方法：Diakogiannaki,E.,Pais,R.,Tolhurst,G.,Parker,H.E.,Horscroft,J., Rauscher,B.,Reimann,F.(2013),Diabetologia,第56(12)卷,第2688–96页；Psichas, A.,Sleeth,M.L.,Murphy,K.G.,Brooks,L.,Bewick,G.A.,Hanyaloglu,a C.,Frost, G,International Journal ofObesity(2015)39(3):424-9；和Tolhurst,G.,Zheng,Y., Parker,H.E.,Habib,A.M.,Reimann,F.,&Gribble,F.M.(2011),Endocrinology, 第152(2)卷,第405–13页；这些文献各自的公开内容通过引用整体并入本文。结 果提供在图3H和图3I中。如所示那样，在野生型小鼠中，用油酰基-LPI处理 混合结肠制备物2小时使GLP-1水平从基线分泌显著增加至131±32％(图3H)。 当使用来自GPR55-/-小鼠的原代细胞时获得了相似的结果(图3I)。
总之，这些数据证实，油酰基-LPI诱导的GLP-1分泌不受GPR55调控。
实施例5：GPR119调节油酰基-LPI诱导的来自L-细胞的GLP-1分泌以及来自 胰β-细胞的胰岛素分泌。
为了证明GPR119在油酰基-LPI刺激的GLP-1释放中的潜在作用，将Glutag 和NCI-H716细胞用指向GPR119的siRNA’s瞬时转染，进行分泌分析，如实施 例1中所概括的那样。
然后将转染细胞用油酰基-LPI处理以评价向下调节对GLP-1分泌的作用(图 4E,4F,4G和4H)。
用油酰基-LPI处理siGPR119-转染细胞显著减少了GLP-1分泌至基线水平。
具体而言，Western印迹分析显示了在这些细胞中GPR119的向下调节(参见 图4A和图4B)。类似地，相应的光密度测定分析也证明了在Glutag细胞中 GPR119蛋白质的向下调节(参见图4C)，这还通过mRNA分析得以证实(参见图 4D)。在Glutag细胞中孵育48小时后，siRNA能够使GPR119 mRNA水平减少 80％(参见图4D)。
然后研究了油酰基-LPI对来自野生型和GPR119-/-小鼠的混合结肠混合物的 原代培养物的作用。令人感兴趣的是，与它们的野生型对照相比，在GPR119-/-小鼠中油酰基-LPI不能诱导GLP-1释放(图4G)。
这些数据一起证明，Glutag和NCI-H716细胞中GPR119的向下调节和小鼠 中不存在GPR119表达能够损害油酰基-LPI-诱导的GLP-1分泌。
LPI以前被证明直接刺激来自胰β-细胞的胰岛素分泌(Metz,S.a.(1986),Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics,第238(3)卷,第819–32卷)，最近已经报道这种LPI作用是GPR55-依赖性的(Liu B,Song S, Ruz-Maldonado I,Pingitore A,Huang GC,Baker D,Jones PM,Persaud SJ.Diabetes Obes Metab.2016年12月,第18(12)卷,第1263-1273页)。该实施例还评价了从 野生型和GPR119-/-小鼠分离的胰岛(即胰β细胞)在葡萄糖的存在下响应于油酰 基-LPI而分泌胰岛素的能力。结果显示，在16.7mM葡萄糖的存在下，油酰基-LPI 能够增加急性胰岛素分泌大约50％。令人感兴趣的是，GPR119-/-胰岛完全失去 了响应于油酰基-LPI刺激的能力(参见图4H)，表明胰岛中GPR119的表达是胰 岛素分泌的油酰基-LPI刺激所必需的。
总之，这些数据证明，Glutag和NCI-H716细胞中GPR119的向下调节能够 损害油酰基-LPI-诱导的GLP-1分泌。结果还证明，GPR119介导油酰基-LPI诱 导的来自L-细胞的GLP-1分泌以及来自胰β-细胞的胰岛素分泌。
实施例6：弱的GPR119拮抗剂不能阻断肠内分泌L-细胞中的GLP-1分泌
瞬时受体电位香草素1(TRPV1)激动剂Arvanil(还已知其化学名为N-花生 四烯酰-香草基-酰胺)还已知是GPR119拮抗剂，以前已经证明其能够阻断Glutag 细胞中OEA诱导的GLP-1分泌。而且，已经报道了OEA可激活TRVP1。因此， 该实施例研究了Arvanil是否能够阻断油酰基-LPI诱导的GLP-1分泌。
为此作用，将Glutag细胞用OEA、油酰基-LPI或AR-231,453(已知的GPR119 激动剂，具有式C21H24FN7O5S)和与Arvanil组合进行处理。用AR-231,453处理 Glutag细胞2小时显著增加了GLP-1分泌，虽然该增加不像以前当与OEA比较 时所报道的那样强。在另一方面，Arvanil与AR-231,453的组合治疗显著减少了 GLP-1分泌，证明了Arvanil的阻断活性(参见图5)。
以前已经证明，AR-231,453和葡萄糖可以叠加发挥作用以刺激GLP-1。令 人感兴趣的是，本文提供的结果证明，Arvanil与OEA或LPI的组合治疗显著增 加了GLP-1分泌(图5)。该数据证明Arvanil不完全抑制GPR119活性，并且指 示Arvanil可通过不同机制刺激GLP-1分泌。基于本文的结果，发明人得出如下 结论：Arvanil是GPR119的弱拮抗剂，不能阻断肠内分泌L-细胞中的GLP-1分 泌。
实施例7：细胞内ERK激活在油酰基-LPI诱导的GLP-1分泌中有牵涉。
已经确定了经由数种配体的胞外调节激酶(ERK)磷酸化在GLP-1分泌中有 牵涉。在该实施例中，发明人着手确定油酰基-LPI是否能够激活肠内分泌L-细 胞中的pERK。为此目的，如在GLP-1分泌分析中历经2小时运行了时程实验， 结果显示在图6中。
具体而言，如图6A中所证明的那样，油酰基-LPI刺激在10分钟内增加了 p-ERK和保持了高水平达120分钟。而且，图6B显示的光密度测定分析结果显 示了ERK磷酸化与对照相比的比例。为了使GPR119和GPR55的向下调节的作 用与ERK磷酸化相关，将转染细胞用油酰基-LPI进行刺激，通过Western印迹 评价蛋白质表达。结果显示在图6C和图6D中，其证明了当与scramble相比两 种转染细胞均显示出非常低的pERK。
图6E和图6F显示了用油酰基-LPI刺激siGPR119转染细胞的进一步时程实 验的结果，揭示在10分钟后没有ERK磷酸化并且ERK磷酸化在30分钟后完 全减少。
为了进一步研究ERK信号传导通路在油酰基-LPI诱导的GLP-1分泌中的作 用，将Glutag和NCI-H716细胞在油酰基-LPI刺激之前用PD98059(甲基乙基酮 (MEK)的强效抑制剂)预处理1小时。在整个分泌实验过程中将PD98059抑制剂 保持在培养基中以避免可逆作用。用PD98059预处理NCI-H716-H716细胞显示 显著减少ERK磷酸化(参见图6G)。光密度测定分析显示pERK完全减少(参见 图6H)。而且，用PD98058处理Glutag和NCI-H716显著减少了油酰基-LPI诱 导的GLP-1分泌(参见图6I和J)。
这些结果一起证明，油酰基-LPI诱导的GLP-1分泌可涉及细胞内ERK激活。
实施例8：油酰基-LPI刺激GPR119转染COS-7细胞中cAMP产生和激活肠内 分泌L-细胞中cAMP效应元件结合蛋白(CREB)。
PKA的激活能够在Glutag细胞和原代胎鼠肠培养物中刺激促胰高血糖素基 因转录和GLP-1合成。还认为与GPR119结合的配体起到激活经由腺苷酸环化 酶传导信号的受体的亚基的作用，以增加cAMP和蛋白激酶A。早期研究还已 经显示，L细胞中促胰高血糖素基因转录的增加可通过基因的5’-侧翼序列中的 cAMP-效应元件(CRE)进行介导。环AMP-效应元件结合蛋白(CREB)是与CRE 结合的细胞转录因子，在减少或增加下游基因的转录中发挥作用。上述实施例 中提供的发现证明，GPR119激活是油酰基-LPI诱导的GLP-1分泌所要求的。 然而，不确定GLP-1合成和分泌是否受到GPR119的调控。
因此，该实施例中概括的工作通过监测CREB活性评价了肠内分泌L细胞 中通过油酰基-LPI产生的GPR119激活是否影响促胰高血糖素基因表达。为了 实现该评价，使用COS7细胞来检查对油酰基-LPI的cAMP响应，与在高表达 GPR119细胞中的OEA(如实施例1中所概括的那样)相比较，结果显示在图7 中。
具体而言，如图7A和7H中所示，用油酰基-LPI处理能够以与OEA相似 的方式和更高的效力(油酰基-LPI EC50为239nM，对OEA而言为422nM)增加 cAMP的产生。
为了确定cAMP增加是否还将导致GLP-1分泌，将Glutag和NCI-H716细 胞在用油酰基-LPI刺激之前用PKA抑制剂H89(10μM)进行预处理。如图7B和 图7C中所示，用PKA抑制剂进行预处理显示出了可观察到的GLP-1分泌减少。 进一步的Western印迹分析证明，通过H89预处理确实抑制了在两个Ser133处 的CREB磷酸化(参见图7D)。令人感兴趣的是，Western印迹评价还揭示，油酰 基-LPI能够刺激对照细胞中的CREB磷酸化(参见图7C)。因此，这些数据表明， 油酰基-LPI能够刺激cAMP产生，其通过GPR119激发PKA和CREB磷酸化。
本文证明的所观察到的GLP-1分泌减少显示，CREB磷酸化的PKA刺激还 可能增加促胰高血糖素基因表达和可介导GLP-1合成和最终介导GLP-1分泌。
实施例9：在GI道动物细胞中测试油酰基-LPI和具有式I结构的化合物在刺激GLP-1生物合成和分泌的活体外活性。
该实施例在暴露于GPR115的油酰基-LPI配体和两种式I化合物的豚鼠GI 道细胞中证明了这些化合物在活体外刺激GLP-1生物合成和分泌的功效。
上文较早的实施例中提供的结果在人和鼠L细胞中和在原代结肠细胞制备 物中证明了内源性GPR119配体油酰基-LPI在刺激GLP-1生物合成和分泌中的 功效。
接着，发明人继续制备了具有随后实施例中所概括的式I结构的化合物。
给出该实施例以评价本发明的式I化合物在刺激GLP-1生物合成和分泌中 的功效和评价这类化合物是否具有与油酰基-LPI相似的活体外介导GLP-1生物 合成和分泌的活性。
为了测试这一点，将怀孕的豚鼠用异氟烷麻醉，经心内注射戊巴比妥处死。 快速收集结肠和直肠，用冰冷的HBSS洗净腔内容物。在完全清理排泄物并温 和刮去内粘膜后，将组织切碎成3至5-毫米小片，重新混悬于50ml冰冷的HBSS 中。旋转下沉淀物，再次用50ml冰冷的HBSS洗涤。小心除去上清液，然后将 上皮片段于37℃重新混悬30分钟进入5mlHEPES 25mM、胶原酶-P 1mg/ml在 HBSS(pH 7.4)中的37℃溶液中。
然后将组织沉淀，于37℃在10ml 1mg/ml如上所述的胶原酶-P溶液中进一 步重新混悬另外约30至40分钟。
在消化后，加入约40ml预温DMEM完全培养基(FBS 10％,葡萄糖4.5g/L, 谷氨酰胺4mM,丙酮酸钠1mM,HEPES 25mM,碳酸氢钠3.7g/L,Pen/Strep 1x和 环丙沙星10μg/ml pH7.4,37℃)。用100μM尼龙过滤器分离隐窝和单独细胞，于 200g旋转5分钟，重新混悬于10mlDMEM完全培养基中，置于包涂有3mg/ml Matrigel的3D凝胶(BD,Biosciences,Oxford,UK)的24孔板的20个孔中。于37℃ 5％CO2在湿润孵育器中孵育1天后，将细胞用500μl温HBSS洗涤，用添加了 KR-62436 10μg/ml的250μl无血清DMEM(不含FBS的完全培养基)处理，单独的如下药物或化合物均于20μM一式四份进行测试：弗司扣林和IBMX(各20μM)、油酰基-LPI、两种油酰基-LPI类似物和/或衍生物ps297b(如实施例13 中所述制备)和ps316a(如实施例22中所述制备)。
于37C 5％CO2进行2小时长孵育后，在冰上收集上清液，迅速于-80℃储存。 在50μl上清液上用ELISA市售试剂盒(EMD Millipore)对活性GLP-1水平(7-37 酰胺和7-36)进行定量。DMSO用作阴性对照，弗司扣林与IBMX的组合被包括 在内作为阳性对照活化剂GLP-1。所测定的GLP-1水平针对DMSO对照进行标 准化。结果显示在图8中。
如图8所示，油酰基-LPI和化合物ps297b和ps316a刺激来自豚鼠GI道细 胞的活体外生物合成和分泌。令人感兴趣的是，ps316化合物能够以高于对内源 性GRP119配体油酰基-LPI所观察到的那些刺激GLP-1水平。
在2小时孵育结束后还一式四份测定了油酰基-LPI、化合物ps297b和化合 物ps316a各自的EC50水平。将如上所述获得的豚鼠细胞一式四份与20μM OEA 一起孵育，如上所述于37C 5％CO2进行2-小时长孵育，测定EC50水平。下表2 提供了油酰基-LPI、化合物ps297b、化合物ps316a和OEA获得的EC50结果。
表2：与获自豚鼠的GI道的结肠细胞进行活体外孵育后的EC50结果
受试化合物 EC<sub>50</sub>
油酰基-LPI 32.68μM
OEA 30.73μM
297b 30.04μM
316a 22.35μM
表2所示的结果指出：在所观察的低于采用内源性油酰基-LPI获得的那些 的浓度，化合物ps297b和ps316a两者均能够刺激GI道细胞的GPL-1生物合成 和分泌。这些结果还证明，ps297b和ps316a化合物在2小时活体外孵育后均保 持了稳定。
总之，这些数据证明：所测试的式I化合物(ps297b和ps316a)均有效刺激了 动物细胞中GLP-1生物合成和分泌，其如果不是更好也是与内源性GPR119配 体油酰基-LPI的功效相当。这些数据还证明了令人惊奇的和出人意料的结果： 本发明的式I化合物可保持稳定，并且在低于内源性GPR119配体油酰基-LPI 所获得的那些的浓度下能够获得对GLP-1生物合成和分泌的活体外刺激作用。 这些结果说明了本发明的式I化合物在刺激GLP-1生物合成和分泌中的作用和 它们在维持葡萄糖内稳态和在治疗代谢疾病如糖尿病和肥胖中的用途。
实施例10:式I化合物的合成：ps292a
该实施例显示了如下式I合成化合物的产生：发明人命名为“ps292a”和具有 通式III：
(III)
Figure BDA0002472968040000881
图9显示了产生式(III)化合物的该方法的通用示意图。
具体而言，于0℃历经10分钟将草酰氯(0.71mL,8.24mmol)添加至油酸(2mL,6.34mmol)和二甲基甲酰胺(还已知为DMF)(3滴)在二氯甲烷(DCM)(10mL)中的 溶液中，将溶液于室温搅拌过夜。真空除去溶剂和过量草酰氯，残余物重新溶 于DCM(10mL)中。将该溶液滴加至4-氨基苄腈(0.61g,5.14mmol)在DCM(10mL) 和Et3N(1mL)中的已经在冰浴中冷却的溶液中。添加完成后，将溶液于室温搅 拌过夜。溶液用饱和Na2CO3溶液(3×20mL)、H2O(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经 MgSO4干燥。所得残余物采用EtOAc/石油精梯度洗脱进行柱色谱法，得到产物， 为浅黄色油，冷却时固化。
产量:1.50g(76％)。
傅立叶变换红外光谱(FT-IR)(ATR)V max /cm-1 :3258br w,2920m,2851m, 2220m,1673s,1595s,1535s.1H-NMRδ/ppm(CDCl3):7.66(2H,d,3JH,H＝8.6Hz, Ar CH),7.60(2H,d,3JH,H＝8.6Hz,Ar CH),7.39(1H,s,NH),5.29–5.40(2×1H, 2×m,2×烯CH),2.38(2H,m,NHCOCH2),1.95–2.05(2×2H,2×m,2×CH2),1.73 (2H,m,CH2),1.24–1.42(10×2H,10×m,10×CH2),0.87(3H,m,CH3).13C-NMR δ/ppm(CDCl3):172.0(CONH),142.3(Ar C),130.2(烯CH),129.8(烯CH),133.4 (Ar CH),119.5(Ar CH),119.0(Ar C),106.9(CN),37.9(NHCOCH2),32.0(CH2), 29.9(CH2),29.8(CH2),29.6(CH2),29.45(CH2),29.44(CH2),29.38(CH2),29.3 (CH2),29.2(CH2),27.4(CH2),27.3(CH2),25.5(CH2),22.8(CH2),14.3(CH3)。
实施例11:式I化合物的合成：ps293a
该实施例显示了如下式I合成化合物的产生：发明人命名为“ps293a”和具有 通式IV：
(IV)
Figure BDA0002472968040000891
图10显示了产生式(IV)合成化合物的该方法的通用示意图。
具体而言，于0℃历经10分钟将草酰氯(0.53mL,6.18mmol)添加至油酸 (1.5mL,4.75mmol)和DMF(3滴)在DCM(10mL)中的溶液中，将溶液于室温搅拌 过夜，真空除去溶剂和过量草酰氯，残余物重新溶于DCM(10mL)中。将该溶液 滴加至4-氨基苯甲酸甲基酯(0.58g,3.85mmol)在DCM(10mL)和Et3N(1mL)中的 已经在冰浴中冷却的溶液中。添加完成后，将溶液于室温搅拌过夜。溶液用饱 和Na2CO3溶液(3×20mL)、H2O(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经MgSO4干燥。所 得残余物采用EtOAc/石油精梯度洗脱进行柱色谱法，得到浅黄色固体。将固体 用冷石油精研制，得到产物，为白色固体。
产量:1.12g(70％)。
FT-I(ATR)Vmax/cm-1 :3279br w,2917m,2849m,1716s,1655s,1607m, 1540m,1465w.1H-NMRδ/ppm(d6-DMSO):10.22(1H,s,NH),7.93(2H,d,3JH,H＝ 8.8Hz,Ar CH),7.76(2H,d,3JH,H＝8.8Hz,Ar CH),5.31–5.40(2×1H,2×m,2×烯 CH),3.85(3H,s,CO2CH3),2.37(2H,m,NHCOCH2),1.96–2.06(2×2H,2×m, 2×CH2),1.62(2H,m,CH2),1.21–1.39(10×2H,10×m,10×CH2),0.88(3H,m,CH3). 13C-NMRδ/ppm(d6-DMSO):171.8(CONH),165.8(CO2Me),143.7(Ar C),130.2 (Ar CH),129.62(烯CH),129.57(烯CH),123.6(Ar C),118.3(Ar CH),51.8 (CO2CH3),36.5(NHCOCH2),31.2(CH2),29.1(CH2),29.0(CH2),28.8(CH2),28.7 (CH2),28.62(CH2),28.60(CH2),28.56(CH2),28.5(CH2),26.5(CH2),24.9(CH2), 22.1(CH2),13.9(CH3)。
实施例12:式I化合物的合成：ps294a
该实施例显示了如下式I合成化合物的产生：发明人命名为“ps294a”和具有 通式V：
(V)
Figure BDA0002472968040000892
图11显示了产生式(V)合成化合物的该方法的通用示意图。
具体而言，将1M NaOH(0.55mL)溶液加入ps293a(0.19g,0.45mmol)在 MeOH/THF(1:1,2mL)中的溶液中，于60℃加热过夜。将溶液用1M HCl酸化， 使得白色固体沉淀。将混合物搅拌5分钟，收集固体，用H2O(4×5mL)、 MeOH/THF(1:1,2×5mL)和石油精(2×5mL)洗涤，干燥，得到产物，为白色固体。
产量:0.15g(85％)。
FT-I(ATR)V max /cm-1 :3317br w,2921m,2852m,1655s,1608w,1510m, 1467w.1H-NMRδ/ppm(d6-DMSO):10.18(1H,s,NH),7.90(2H,d,3JH,H＝8.6Hz, Ar CH),7.73(2H,d,3JH,H＝8.6Hz,Ar CH),5.30–5.40(2×1H,2×m,2×烯CH), 2.36(2H,m,NHCOCH2),1.95–2.08(2×2H,2×m,2×CH2),1.62(2H,m,CH2),1.21 –1.38(10×2H,10×m,10×CH2),0.88(3H,m,CH3).13C-NMRδ/ppm(d6-DMSO): 171.8(CONH),167.0(CO2H),143.3(Ar C),130.3(Ar CH),129.67(烯CH),129.60 (烯CH),125.1(Ar C),118.2(Ar CH),36.5(NHCOCH2),31.3(CH2),29.1(CH2), 29.08(CH2),28.83(CH2),28.68(CH2),28.64(CH2),28.63(CH2),28.60(CH2),28.5 (CH2),26.6(CH2),25.0(CH2),22.1(CH2),13.9(CH3)。
实施例13:式I化合物的合成：ps297b。
该实施例显示了如下式I合成化合物的产生：发明人命名为“ps297b”和具有 通式VI：
(VI)
Figure BDA0002472968040000901
图12显示了产生式(VI)合成化合物的该方法的通用示意图。
具体而言，将浓HCl(0.81mL,8.29mmol,32％)加入Et3N(1.16mL,8.29mmol) 在甲苯(20mL)中的已经在冰浴中冷却的溶液中，将混合物搅拌直至不再观察到 发烟。加入NaN3(0.56g,8.29mmol)和ps292(0.63g,1.66mmol)，混合物于回流加 热2天。除去甲苯，将所得残余物重新混悬于H2O中，用浓HCl(～1mL)酸化。 将所得固体搅拌5分钟，然后收集，用H2O(5×10mL)洗涤，干燥，然后用DCM (3×10mL)洗涤，干燥，得到产物，为白色固体。
产量:219mg(36％)。
FT-I(ATR)V max /cm-1 :3308br w,2919m,2850m,1669s,1600s,1539s. 1H-NMRδ/ppm(d6-DMSO):10.20(1H,s,NH),8.00(2H,m,Ar CH),7.84(2H,m, Ar CH),5.30–5.42(2×1H,2×m,2×烯CH),2.38(2H,m,NHCOCH2),1.96–2.08 (2×2H,2×m,2×CH2),1.64(2H,m,CH2),1.20–1.39(10×2H,10×m,10×CH2),0.87 (3H,m,CH3).13C-NMRδ/ppm(d6-DMSO):171.7(CONH),154.9(四唑基C),141.8 (Ar C),129.63(烯CH),129.59(烯CH),127.6(Ar CH),119.2(Ar CH),118.4(Ar C), 36.4(NHCOCH2),31.2(CH2),29.1(CH2),28.8(CH2),28.65(CH2),28.63(CH2), 28.56(CH2),28.5(CH2),26.5(CH2),25.0(CH2),22.1(CH2),13.9(CH3)。
实施例14:式I化合物的合成：ps298a和ps298b。
该实施例显示了如下式I合成化合物的产生：发明人分别命名为“ps298a和ps298b”和分别具有通式VII和VIII：
Figure BDA0002472968040000911
图13显示了产生作为通式(VII)和(VIII)的N2-和N1-甲基化异构体化合物的 合成化合物的该方法的通用示意图。
具体而言，将甲基碘(16μL,0.26mmol)加入ps297b(100mg,0.23mmol)和 K2CO3(65mg,0.47mmol)在丙酮(5mL)中的混悬液中，于回流加热过夜。将混合 物真空浓缩，然后重新溶于EtOAc(10mL)中，用H2O(3×10mL)、盐水(1×10mL) 洗涤，经MgSO4干燥。所得残余物采用EtOAc/石油精梯度洗脱进行柱色谱法， 得到N2-和N1-甲基化化合物两者，为白色固体。
产量:N2异构体,54.9mg(54％)；N1异构体,18.3mg(18％)。
N2异构体(ps298a):FT-I(ATR)Vmax/cm-1:3282br w,2918m,2850m,1655s, 1598w,1548m.1H-NMRδ/ppm(d6-DMSO):10.13(1H,s,NH),8.01(2H,d,3JH,H＝ 8.7Hz,Ar CH),7.81(2H,d,3JH,H＝8.7Hz,Ar CH),5.32–5.41(2×1H,2×m,2×烯 CH),4.44(3H,s,NCH3),2.37(2H,m,NHCOCH2),1.97–2.06(2×2H,2×m, 2×CH2),1.63(2H,m,CH2),1.22–1.40(10×2H,10×m,10×CH2),0.88(3H,m,CH3). 13C-NMR δ/ppm(d6-DMSO):171.6(CONH),164.0(四唑基C),141.2(Ar C), 129.65(烯CH),129.60(烯CH),126.9(Ar CH),121.3(Ar C),119.2(ArCH),39.5 (NCH3),36.4(NHCOCH2),31.2(CH2),29.1(CH2),28.8(CH2),28.7(CH2),28.65(CH2),28.6(CH2),28.5(CH2),26.5(CH2),25.0(CH2),22.1(CH2),13.9(CH3)。
N1异构体(ps298b):FT-I(ATR)V max /cm-1 :3300br w,2920s,2851m,1659s, 1595w,1524m.1H-NMRδ/ppm(d6-DMSO):10.20(1H,s,NH),7.87(2H,m,Ar CH),7.84(2H,m,Ar CH),5.32–5.41(2×1H,2×m,2×烯CH),4.20(3H,s,NCH3), 2.39(2H,m,NHCOCH2),1.98–2.07(2×2H,2×m,2×CH2),1.64(2H,m,CH2),1.22 –1.40(10×2H,10×m,10×CH2),0.88(3H,m,CH3).13C-NMRδ/ppm(d6-DMSO): 171.8(CONH),153.7(四唑基C),141.8(Ar C),129.65(烯CH),129.60(烯CH), 126.3(Ar CH),119.0(Ar CH),117.7(Ar C),36.5(NHCOCH2),35.1(NCH3),31.2 (CH2),29.1(CH2),28.8(CH2),28.65(CH2),28.63(CH2),28.61(CH2),28.6(CH2), 28.5(CH2),26.5(CH2),25.0(CH2),22.1(CH2),13.9(CH3)。
实施例15:式I化合物的合成：ps300b
该实施例显示了如下式I合成化合物的产生：发明人命名为“ps300b”和具有 通式IX：
(IX)
Figure BDA0002472968040000921
图14显示了产生式(IX)合成化合物的该方法的通用示意图。
具体而言，将iPr2EtN(0.49mL,2.84mmol)加入油酸(0.50mL,1.42mmol)和 HBTU(0.59g,1.56mmol)在DMF(4mL)中的溶液中，于室温搅拌45分钟。加入 4-氨基苯酚(0.16g,1.42mmol)，溶液于室温搅拌过夜。加入EtOAc(50mL)，溶液 用H2O(3×20mL)、饱和Na2CO3(2×20mL)和盐水(1×20mL)洗涤，经MgSO4干燥。 所得残余物采用EtOAc/石油精梯度洗脱进行柱色谱法，得到灰白色固体。将固 体用冷石油精研制，得到产物，为白色固体。
产量:0.30g(56％)。
FT-I(ATR)V max /cm- 1:3278br w,2917m,2850m,1648s,1615w,1558m, 1516m.1H-NMRδ/ppm(d6-DMSO):9.59(1H,s,NH),9.14(1H,s,OH),7.38(2H, d,3JH,H＝8.9Hz,Ar CH),6.70(2H,d,3JH,H＝8.9Hz,Ar CH),5.31–5.41(2×1H, 2×m,2×烯CH),2.25(2H,m,NHCOCH2),1.95–2.08(2×2H,2×m,2×CH2),1.59 (2H,m,CH2),1.21–1.39(10×2H,10×m,10×CH2),0.88(3H,m,CH3).13C-NMR δ/ppm(d6-DMSO):170.4(CONH),153.0(Ar C),131.0(Ar C),129.64(烯CH), 129.61(烯CH),120.8(Ar CH),114.9(Ar CH),36.3(NHCOCH2),31.3(CH2),29.1 (CH2),29.08(CH2),29.0(CH2),28.81(CH2),28.68(CH2),28.66(CH2),28.60(CH2),28.5(CH2),26.6(CH2),26.5(CH2),25.2(CH2),22.1(CH2),13.9(CH3)。
实施例16:式I化合物的合成：ps301a
该实施例显示了如下式I合成化合物的产生：发明人命名为“ps301a”和具有 通式X：
(X)
Figure BDA0002472968040000931
图15显示了产生式(X)合成化合物的该方法的通用示意图。
具体而言，将甲基碘(20μL,0.29mmol)加入ps300b(100mg,0.27mmol)和 K2CO3(74mg,0.54mmol)在丙酮(5mL)中的混悬液中，于回流加热过夜。加入另 外部分的甲基碘(20μL,0.29mmol)，将混合物于回流加热过夜。将混合物真空浓 缩，然后重新溶于EtOAc(10mL)中，用H2O(3×10mL)、盐水(1×10mL)洗涤，经 MgSO4干燥。加入石油精(4mL)，收集所得固体,用石油精(3×5mL)洗涤，干燥， 得到产物，为白色固体。
产量:63.2mg(60％)。
FT-I(ATR)Vmax/cm-1:3284br w,2917m,2849m,1649s,1605w,1549m, 1514m.1H-NMRδ/ppm(d6-DMSO):9.71(1H,s,NH),7.51(2H,d,3JH,H＝9.0Hz, Ar CH),6.89(2H,d,3JH,H＝9.0Hz,Ar CH),5.31–5.42(2×1H,2×m,2×烯CH), 3.74(1H,s,OCH3),2.28(2H,m,NHCOCH2),1.97–2.07(2×2H,2×m,2×CH2), 1.60(2H,m,CH2),1.21–1.39(10×2H,10×m,10×CH2),0.88(3H,m,CH3). 13C-NMRδ/ppm(d6-DMSO):170.7(CONH),155.0(Ar C),132.5(ArC),129.65(烯 CH),129.61(烯CH),120.5(Ar CH),113.7(Ar CH),55.1(OCH3),36.3(NHCOCH2),31.3(CH2),29.1(CH2),29.01(CH2),29.0(CH2),28.8(CH2),28.67 (CH2),28.66(CH2),28.60(CH2),28.5(CH2),26.57(CH2),26.55(CH2),25.2(CH2), 22.1(CH2),13.9(CH3)。
实施例17:式I化合物的合成：ps306a
该实施例显示了如下式I合成化合物的产生：发明人命名为“ps306a”和具有 通式XI：
(XI)
Figure BDA0002472968040000932
图16显示了产生式(XI)合成化合物的该方法的通用示意图。
具体而言，于0℃历经10分钟将草酰氯(0.71mL,8.24mmol)添加至油酸(2mL,6.34mmol)和DMF(3滴)在DCM(10mL)中的混悬液中，将混悬液于室温搅拌过 夜。真空除去溶剂和过量草酰氯，残余物重新溶于DCM(10mL)中。将该溶液滴 加至3-氟-4-氨基苄腈(0.70g,5.14mmol)在DCM(10mL)和Et3N(1mL)中的已经在 冰浴中冷却的溶液中。添加完成后，将溶液于室温搅拌过夜。溶液用饱和Na2CO3溶液(3×20mL)、H2O(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经MgSO4干燥。所得残余物采 用EtOAc/石油精梯度洗脱进行柱色谱法，得到产物，为白色。
产量:1.59g(61％)。
FT-I(ATR)Vmax/cm-1 :3319br w,2919m,2850m,2236w,1681s,1616w, 1589m,1519s.1H-NMRδ/ppm(d6-DMSO):10.07(1H,s,NH),8.33(1H,dd,3JH,H＝8.5Hz,4JH,F＝7.9Hz,Ar CH),7.89(1H,dd,3JH,F＝11.0Hz,4JH,H＝2.0Hz,Ar CH),7.66(1H,ddd,3JH,H＝8.5Hz,4JH,H＝2.0Hz,5JH,F＝0.9Hz,Ar CH),5.29– 5.40(2×1H,2×m,2×烯CH),2.47(2H,m,NHCOCH2),1.96–2.04(2×2H,2×m, 2×CH2),1.61(2H,m,CH2),1.23–1.37(10×2H,10×m,10×CH2),0.87(3H,m,CH3). 13C-NMRδ/ppm(d6-DMSO):172.4(CONH),151.6(d,1JC,F＝247Hz,Ar CF),131.7 (d,2JC,F＝11.1Hz,Ar C),129.6(烯CH),129.5(烯CH),129.3(d,3JC,F＝3.4Hz,ArCH),122.9(d,4JC,F＝2.7Hz,Ar CH),119.2(d,2JC,F＝23.3Hz,Ar CH),117.9(d, 4JC,F＝2.7Hz,CN),105.7(d,3JC,F＝9.4Hz,Ar C),35.9(NHCOCH2),31.3(CH2), 29.09(CH2),29.08(CH2),28.8(CH2),28.7(CH2),28.62(CH2),28.59(CH2),28.55 (CH2),28.5(CH2),26.6(CH2),24.9(CH2),22.1(CH2),13.9(CH3)。
实施例18:式I化合物的合成：ps309a
该实施例显示了发明人命名为“ps309a”和具有通式XII的如下式I合成化合 物的产生：
(XII)
Figure BDA0002472968040000941
图17显示了产生式(XII)合成化合物的该方法的通用示意图。
具体而言，将浓HCl(0.65mL,6.61mmol,32％)加入Et3N(0.92mL,6.61mmol) 在甲苯(20mL)中的已经在冰浴中冷却的溶液中，将混合物搅拌直至不再观察到 发烟。加入NaN3(0.45g,6.61mmol)和ps306a(0.53g,1.32mmol)，混合物于回流 加热2天。除去甲苯，将所得残余物重新混悬于H2O中，用浓HCl(～1mL)酸化。 将所得固体搅拌5分钟，然后收集，用H2O(5×10mL)洗涤，干燥，然后用DCM (3×10mL)洗涤，干燥，得到产物，为白色固体。
产量:379mg(65％)。
FT-I(ATR)Vmax/cm-1 :3271br w,2921m,2851m,1669m,1650m,1602m, 1582m,1527s.1H-NMRδ/ppm(d6-DMSO):9.95(1H,s,NH),8.27(1H,t,3JH,H＝ 8.2Hz,Ar CH),7.83–7.93(2×1H,2×m,2×Ar CH),5.29–5.41(2×1H,2×m,2×烯 CH),2.46(2H,m,NHCOCH2),1.96–2.06(2×2H,2×m,2×CH2),1.63(2H,m,CH2), 1.20–1.39(10×2H,10×m,10×CH2),0.87(3H,m,CH3).13C-NMRδ/ppm (d6-DMSO):172.0(CONH),154.5(四唑基C),152.8(d,1JC,F＝246Hz,Ar CF), 129.57(烯CH),129.62(烯CH),129.1(d,2JC,F＝11.4Hz,Ar C),123.9(ArCH), 123.2(d,3JC,F＝3.4Hz,Ar CH),120.2(d,3JC,F＝8.4Hz,Ar C),113.9(d,2JC,F＝22.3Hz,Ar CH),35.9(NHCOCH2),31.3(CH2),29.1(CH2),28.8(CH2),28.7(CH2), 28.62(CH2),28.57(CH2),28.49(CH2),26.6(CH2),25.0(CH2),22.1(CH2),13.9 (CH3)。
实施例19:式I化合物的合成：ps308c
该实施例显示了发明人命名为“ps308c”和具有通式XIII的如下式I合成化合 物的产生：
(XIII)
Figure BDA0002472968040000951
图18显示了产生式(XIII)合成化合物的该方法的通用示意图。
具体而言，于0℃历经10分钟将草酰氯(0.71mL,8.24mmol)添加至油酸(2mL,6.34mmol)和DMF(3滴)在DCM(10mL)中的混悬液中，将混悬液于室温搅拌过 夜。真空除去溶剂和过量草酰氯，残余物重新溶于DCM(10mL)中。将该溶液滴 加至2-氟-4-氨基苄腈(0.70g,5.14mmol)在DCM(10mL)和Et3N(1mL)中的已经在 冰浴中冷却的溶液中。添加完成后，将溶液于室温搅拌过夜。溶液用饱和Na2CO3溶液(3×20mL)、H2O(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经MgSO4干燥。所得残余物采 用EtOAc/石油精梯度洗脱进行柱色谱法，得到产物，为白色。
产量:1.03g(50％)。
FT-I(ATR)Vmax/cm-1 :3350m,2920m,2850m,2229m,1700s,1620s,1593 m,1529s.1H-NMRδ/ppm(d6-DMSO):10.55(1H,s,NH),7.89(1H,dd,3JH,F＝12.6 Hz,4JH,H＝2.0Hz,Ar CH),7.85(1H,dd,3JH,H＝8.6Hz,4JH,F＝7.9Hz,Ar CH),7.46 (1H,dd,3JH,H＝8.6Hz,4JH,H＝2.0Hz,Ar CH),5.29–5.40(2×1H,2×m,2×烯CH), 2.39(2H,m,NHCOCH2),1.96–2.05(2×2H,2×m,2×CH2),1.61(2H,m,CH2),1.21 –1.38(10×2H,10×m,10×CH2),0.87(3H,m,CH3).13C-NMRδ/ppm(d6-DMSO): 172.4(CONH),163.0(d,1JC,F＝252Hz,Ar CF),145.6(d,3JC,F＝11.7Hz,CN), 134.2(d,3JC,F＝3.4Hz,Ar CH),129.6(烯CH),129.5(烯CH),115.1(d,4JC,F＝2.7 Hz,Ar CH),114.3(Ar C),105.5(d,2JC,F＝24.7Hz,Ar CH),93.1(d,2JC,F＝15.4Hz, ArC),36.5(NHCOCH2),31.3(CH2),29.07(CH2),29.04(CH2),28.8(CH2),28.7 (CH2),28.59(CH2),28.57(CH2),28.5(CH2),28.4(CH2),26.6(CH2),24.7(CH2), 22.1(CH2),13.9(CH3)。
实施例20:式I化合物的合成：ps312a
该实施例显示了发明人命名为“ps312a”和具有通式XIV的式I合成化合物的 产生：
(XIV)
Figure BDA0002472968040000961
图19显示了产生式(XIV)合成化合物的该方法的通用示意图。
具体而言，将浓HCl(0.60mL,6.12mmol,32％)加入Et3N(0.85mL,6.12mmol) 在甲苯(20mL)中的已经在冰浴中冷却的溶液中，将混合物搅拌直至不再观察到 发烟。加入NaN3(0.42g,6.12mmol)和ps308c(0.49g,1.22mmol)，将混合物于回 流加热2天。除去甲苯，将所得残余物重新混悬于H2O中，用浓HCl(～1mL)酸 化。将所得固体搅拌5分钟，然后收集，用H2O(5×10mL)洗涤，干燥，然后用 DCM(10×10mL)洗涤和干燥，得到产物，为白色固体。
产量:276mg(51％)。
FT-I(ATR)Vma x /cm-1 :3267br w,2951m,2852m,1669s,1630w,1606s, 1540s.1H-NMRδ/ppm(d6-DMSO):10.43(1H,s,NH),8.02(1H,m,Ar CH),7.92 (1H,dd,3JH,F＝13.5Hz,4JH,H＝2.0Hz,Ar CH),7.51(1H,dd,3JH,H＝8.6Hz,4JH,H＝ 2.0Hz,Ar CH),5.30–5.41(2×1H,2×m,2×烯CH),2.39(2H,m,NHCOCH2),1.96 –2.06(2×2H,2×m,2×CH2),1.63(2H,m,CH2),1.19–1.39(10×2H,10×m, 10×CH2),0.87(3H,m,CH3).13C-NMRδ/ppm(d6-DMSO):172.2(CONH),159.2(d, 1JC,F＝249Hz,Ar CF),143.6(d,2JC,F＝11.7Hz,Ar C),130.1(d,3JC,F＝3.6Hz,ArCH),129.7(烯CH),129.6(烯CH),127.8(Ar C),115.2(d,4JC,F＝2.8Hz,Ar CH), 106.0(d,2JC,F＝26.1Hz,Ar CH),36.5(NHCOCH2),31.3(CH2),29.09(CH2),29.07 (CH2),28.8(CH2),28.7(CH2),28.63(CH2),28.58(CH2),28.5(CH2),26.6(CH2), 24.8(CH2),22.1(CH2),13.9(CH3)。
实施例21:式I化合物的合成：ps314b
该实施例显示了发明人命名为“ps314b”和具有通式XV的式I合成化合物的 产生：
(XV)
Figure BDA0002472968040000971
图20显示了产生式(XV)合成化合物的该方法的通用示意图。
具体而言，于0℃历经10分钟将草酰氯(0.72mL,8.36mmol)添加至亚油酸 (2mL,6.43mmol)和DMF(3滴)在DCM(10mL)中的混悬液中，将混悬液于室温 搅拌过夜。真空除去溶剂和过量草酰氯，残余物重新溶于DCM(10mL)中。将该 溶液滴加至4-氨基苄腈(0.68g,5.79mmol)在DCM(10mL)和Et3N(1mL)中的已经 在冰浴中冷却的溶液中。添加完成后，将溶液于室温搅拌过夜。溶液用饱和 Na2CO3溶液(3×20mL)、H2O(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经MgSO4干燥。所得 残余物采用EtOAc/石油精梯度洗脱进行柱色谱法，得到产物，为浅黄色油。
产量:1.72g(70％)。
FT-I(ATR)Vmax/cm-1 :3329br w,2926m,2855m,2226m,1730w,1705w, 1676m,1593s,1512s.1H-NMRδ/ppm(d6-DMSO):10.33(1H,s,NH),7.74–7.83 (2×2H,2×m,2×Ar CH),5.26–5.45(4×1H,4×m,4×烯CH),2.78(2H,m,CH2),2.38 (2H,m,NHCOCH2),2.01–2.08(2×2H,2×m,2×CH2),1.62(2H,m,CH2),1.23– 1.41(7×2H,7×m,7×CH2),0.88(3H,m,CH3).13C-NMRδ/ppm(d6-DMSO):172.1 (CONH),143.5(Ar C),133.2(Ar CH),129.69(烯CH),129.67(烯CH),127.73(烯 CH),129.7(烯CH),119.1(Ar C),118.9(Ar CH),104.6(CN),36.5(NHCOCH2), 30.9(CH2),29.0(CH2),28.7(CH2),28.6(CH2),28.56(CH2),28.5(CH2),26.58 (CH2),26.57(CH2),25.2(CH2),24.8(CH2),21.9(CH2),13.9(CH3)。
实施例22:式I化合物的合成：ps316a
该实施例显示了发明人命名为“ps316a”和具有通式XVI的式I合成化合物的 产生：
(XVI)
Figure BDA0002472968040000981
图21显示了产生式(XVI)合成化合物的该方法的通用示意图。
具体而言，将浓HCl(0.78mL,7.93mmol,32％)加入Et3N(1.11mL,7.93mmol) 在甲苯(20mL)中的已经在冰浴中冷却的溶液中，将混合物搅拌直至不再观察到 发烟。加入NaN3(0.54g,7.93mmol)和ps314b(0.60g,1.59mmol)，将混合物于回 流加热2天。除去甲苯，将所得残余物重新混悬于H2O中，用浓HCl(～1mL)酸 化。将所得固体搅拌5分钟，然后收集，用H2O(5×10mL)洗涤，干燥，然后用 DCM(10×10mL)洗涤和干燥，得到产物，为白色固体。
产量:0.45g(66％)。
FT-I(ATR)Vmax/cm-1 :3306br w,2926m,2855m,1668s,1600s,1537s, 1500s.1H-NMRδ/ppm(d6-DMSO):10.20(1H,s,NH),8.00(2H,d,3JH,H＝8.7Hz, Ar CH),7.84(2H,d,3JH,H＝8.7Hz,Ar CH),5.28–5.42(4×1H,4×m,4×烯CH), 2.77(2H,m,CH2),2.38(2H,m,NHCOCH2),1.99–2.09(2×2H,2×m,2×CH2),1.63 (2H,m,CH2),1.22–1.40(7×2H,7×m,7×CH2),0.88(3H,m,CH3).13C-NMRδ/ppm (d6-DMSO):171.7(CONH),154.9(四唑基C),141.9(Ar C),129.71(烯CH),129.69 (烯CH),127.74(烯CH),129.71(烯CH),127.7(Ar CH),119.2(ArCH),118.4(Ar C),36.5(NHCOCH2),30.9(CH2),29.0(CH2),28.7(CH2),28.66(CH2),28.63(CH2), 28.5(CH2),26.61(CH2),26.59(CH2),25.2(CH2),25.0(CH2),21.9(CH2),13.9 (CH3)。
实施例23:式I化合物的合成：ps315a
该实施例显示了如下式I合成化合物的产生：发明人命名为“ps315a”和具有 通式XVII：
(XVII)
Figure BDA0002472968040000982
图22显示了产生式(XVII)合成化合物的该方法的通用示意图。
具体而言，于0℃历经10分钟将草酰氯(0.71mL,8.24mmol)添加至油酸(2mL,6.34mmol)和DMF(3滴)在DCM(10mL)中的溶液中，将溶液于室温搅拌过夜。 真空除去溶剂和过量草酰氯，残余物重新溶于DCM(10mL)中。将该溶液滴加至 3-氨基苄腈(0.61g,5.14mmol)在DCM(10mL)和Et3N(1mL)中的已经在冰浴中冷 却的溶液中。添加完成后，将溶液于室温搅拌过夜。溶液用饱和Na2CO3溶液 (3×20mL)、H2O(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经MgSO4干燥。所得残余物采用 EtOAc/石油精梯度洗脱进行柱色谱法，得到产物，为浅橙色油，在冷却时固化。
产量:1.89g(96％)
FT-I(ATR)Vmax/cm-1 :3314br w,2920m,2852m,2230w,1740w,1704w, 1671s,1586s,1545m.1H-NMRδ/ppm(d6-DMSO):10.23(1H,s,NH),8.14(1H,m, Ar CH),7.82(1H,m,Ar CH),7.49–7.57(2×1H,2×m,2×Ar CH),5.29–5.41 (2×1H,2×m,2×烯CH),2.35(2H,m,NHCOCH2),1.96–2.08(2×2H,2×m,2×CH2), 1.62(2H,m,CH2),1.21–1.39(10×2H,10×m,10×CH2),0.87(3H,m,CH3). 13C-NMRδ/ppm(d6-DMSO):171.8(CONH),140.1(Ar C),130.1(ArCH),129.6 (烯CH),129.5(烯CH),126.4(Ar CH),123.4(Ar CH),121.5(Ar CH),118.7(ArC), 111.5(CN),36.4(NHCOCH2),31.2(CH2),29.08(CH2),29.06(CH2),28.8(CH2), 28.7(CH2),28.63(CH2),28.58(CH2),28.5(CH2),26.6(CH2),24.9(CH2),22.1 (CH2),13.9(CH3)。
实施例24:式I化合物的合成：ps318a
该实施例显示了如下式I合成化合物的产生：发明人命名为“ps318a”和具有 通式XVIII：
(XVIII)
Figure BDA0002472968040000991
图23显示了产生式(XVIII)合成化合物的该方法的通用示意图。
具体而言，将浓HCl(0.73mL,7.48mmol,32％)加入Et3N(1.04mL,7.48mmol) 在甲苯(20mL)中的已经在冰浴中冷却的溶液中，将混合物搅拌直至不再观察到 发烟。加入NaN3(0.51g,7.48mmol)和ps315a(0.57g,1.50mmol)，将混合物于回 流加热2天。除去甲苯，将所得残余物重新混悬于H2O中，用浓HCl(～1mL)酸 化。将所得固体搅拌5分钟，然后收集，用H2O(5×10mL)洗涤，干燥，然后用 DCM(3×10mL)洗涤和干燥，得到产物，为白色固体。
产量:0.48g(76％)
FT-I(ATR)Vmax/cm-1 :3545br w,3278br w,2920m,2851m,1657s,1576m, 1535m.1H-NMRδ/ppm(d6-DMSO):10.20(1H,s,NH),8.44(1H,dd,3JH,H＝7.2Hz, 4JH,H＝1.6Hz,Ar CH),7.77(1H,ddd,3JH,H＝8.2Hz,4JH,H＝2.0Hz,4JH,H＝1.0Hz, Ar CH),7.70(1H,ddd,3JH,H＝7.7Hz,4JH,H＝1.6Hz,4JH,H＝1.0Hz,Ar CH),7.55 (1H,dd,3JH,H＝8.2Hz,3JH,H＝7.7Hz,ArCH),5.31–5.41(2×1H,2×m,2×烯CH), 2.37(2H,m,NHCOCH2),1.95–2.08(2×2H,2×m,2×CH2),1.64(2H,m,CH2),1.21 –1.39(10×2H,10×m,10×CH2),0.87(3H,m,CH3).13C-NMRδ/ppm(d6-DMSO): 171.6(CONH),155.6(四唑基C),140.2(Ar C),129.8(Ar CH),129.64(烯CH), 129.59(烯CH),124.8(Ar C),121.4(Ar CH),121.3(Ar CH),117.3(Ar CH),36.4(NHCOCH2),31.2(CH2),29.1(CH2),28.8(CH2),28.65(CH2),28.63(CH2),28.56 (CH2),28.49(CH2),26.56(CH2),26.55(CH2),25.0(CH2),22.1(CH2),13.9(CH3)。
实施例25:式I化合物的合成：ps317b
该实施例显示了如下式I合成化合物的产生：发明人命名为“ps317b”和具有 通式XIX：
(XIX)
Figure BDA0002472968040001001
图24显示了产生式(XIX)合成化合物的该方法的通用示意图。
具体而言，于室温历经10分钟将草酰氯(0.87mL,10.14mmol)添加至棕榈酸 (2g,7.80mmol)和DMF(3滴)在DCM(10mL)中的混悬液中，将混悬液于室温搅 拌过夜。真空除去溶剂和过量草酰氯，残余物重新溶于DCM(10mL)中。将该溶 液滴加至4-氨基苄腈(0.83g,7.02mmol)在DCM(10mL)和Et3N(1mL)中的已经在 冰浴中冷却的溶液中。添加完成后，将溶液于室温搅拌过夜。溶液用饱和Na2CO3溶液(3×20mL)、H2O(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经MgSO4干燥。所得残余物混 悬于甲醇(20mL)中，搅拌5分钟。收集固体,用甲醇(5×10mL)洗涤，干燥，得 到产物，为白色固体。
产量:1.71g(61％)。
FT-I(ATR)Vmax/cm-1 :3310br w,2915s,2849m,2224w,1674m,1605m, 1528m.1H-NMRδ/ppm(d6-DMSO):10.30(1H,s,NH),7.81(2H,d,3JH,H＝8.8Hz, Ar CH),7.78(2H,d,3JH,H＝8.8Hz,Ar CH),2.38(2H,m,NHCOCH2),1.62(2H,m, CH2),1.21–1.37(12×2H,12×m,12×CH2),0.89(3H,m,CH3).13C-NMRδ/ppm (d6-DMSO):172.1(CONH),143.5(Ar C),133.2(ArCH),119.1(Ar C),118.9(Ar CH),104.6(CN),36.5(NHCOCH2),31.3(CH2),29.02(CH2),29.00(CH2),28.98 (CH2),28.94(CH2),28.8(CH2),28.71(CH2),28.68(CH2),28.5(CH2),24.8(CH2), 22.1(CH2),13.9(CH3)。
实施例26:式I化合物的合成：ps320c
该实施例显示了如下式I合成化合物的产生：发明人命名为“ps320c”和具有 通式XX：
(XX)
Figure BDA0002472968040001011
图25显示了产生式(XX)合成化合物的该方法的通用示意图。
具体而言，将浓HCl(0.78mL,7.99mmol,32％)加入Et3N(1.11mL,7.99mmol) 在甲苯(20mL)中的已经在冰浴中冷却的溶液中，将混合物搅拌直至不再观察到 发烟。加入NaN3(0.54g,7.99mmol)和ps317b(0.57g,1.60mmol)，将混合物于回 流加热2天。除去甲苯，将所得残余物重新混悬于H2O中，用浓HCl(～1mL)酸 化。将所得固体搅拌5分钟，然后收集，用H2O(5×10mL)洗涤，干燥，然后用 DCM(10×10mL)洗涤和干燥，得到产物，为白色固体。
产量:0.41g(65％)。
FT-I(ATR)Vmax/cm- 1:3558br w,3290br w,2917s,2847m,1663s,1618w, 1597w,1534s.1H-NMRδ/ppm(d6-DMSO):10.23(1H,s,NH),8.01(2H,d,3JH,H＝ 8.6Hz,Ar CH),7.84(2H,d,3JH,H＝8.6Hz,Ar CH),2.38(2H,m,NHCOCH2),1.63 (2H,m,CH2),1.20–1.38(12×2H,12×m,12×CH2),0.88(3H,m,CH3).13C-NMR δ/ppm(d6-DMSO):171.7(CONH),155.1(四唑基C),141.7(Ar C),127.6(Ar CH), 119.2(Ar CH),118.8(Ar C),36.4(NHCOCH2),31.3(CH2),29.0(CH2),28.98(CH2), 28.96(CH2),28.9(CH2),28.74(CH2),28.7(CH2),28.6(CH2),25.0(CH2),22.1 (CH2),13.9(CH3)。
实施例27:式I化合物的合成：ps319
该实施例显示了发明人命名为“ps319”和具有通式XXI的如下式I合成化合 物的产生：
(XXI)
Figure BDA0002472968040001021
图26显示了产生式(XXI)合成化合物的该方法的通用示意图。
具体而言，于0℃历经10分钟将草酰氯(0.72mL,8.36mmol)添加至亚油酸 (2mL,6.43mmol)和DMF(3滴)在DCM(10mL)中的溶液中，将溶液于室温搅拌 过夜。真空除去溶剂和过量草酰氯，残余物重新溶于DCM(10mL)中。将该溶液 滴加至3-氟-4-氨基苄腈(0.79g,5.79mmol)在DCM(10mL)和Et3N(1mL)中的已经 在冰浴中冷却的溶液中。添加完成后，将溶液于室温搅拌过夜。溶液用饱和 Na2CO3溶液(3×20mL)、H2O(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经MgSO4干燥。所得 残余物采用EtOAc/石油精梯度洗脱进行柱色谱法，得到产物，为浅黄色油，在 冷却时固化。
产量:0.98g(39％)。
FT-I(ATR)Vmax/cm-1 :3328br w,2925m,2855m,2232w,1709m,1616m, 1594m,1517s.1H-NMRδ/ppm(d6-DMSO):10.07(1H,s,NH),8.32(1H,m,Ar CH),7.91(1H,dd,3JH,F＝11.1Hz,4JH,H＝1.9Hz,Ar CH),7.68(1H,ddd,3JH,H＝8.6 Hz,4JH,H＝1.9Hz,5JH,F＝0.9Hz ArCH),5.28–5.43(4×1H,4×m,4×烯CH),2.77 (2H,m,CH2),2.48(2H,m,NHCOCH2),2.00–2.10(2×2H,2×m,2×CH2),1.61(2H, m,CH2),1.24–1.40(7×2H,7×m,7×CH2),0.88(3H,m,CH3).13C-NMRδ/ppm (d6-DMSO):172.4(CONH),151.7(d,1JC,F＝247Hz,Ar CF),131.6(d,2JC,F＝11.2 Hz,Ar C),129.70(烯CH),129.68(烯CH),129.3(d,3JC,F＝3.5Hz,Ar CH),127.74(烯CH),127.71(烯CH),122.9(d,4JC,F＝2.9Hz,Ar CH),119.3(d,2JC,F＝23.4Hz, Ar CH),105.7(d,3JC,F＝9.3Hz,Ar C),117.9(d,3JC,F＝2.7Hz,CN),35.9 (NHCOCH2),30.9(CH2),29.0(CH2),28.7(CH2),28.6(CH2),28.52(CH2),28.5 (CH2),26.6(CH2),25.2(CH2),24.9(CH2),21.9(CH2),13.9(CH3)。
实施例28:式I化合物的合成：ps323b
该实施例显示了发明人命名为“ps323b”和具有通式XXII的合成化合物的制 备：
(XXII)
Figure BDA0002472968040001031
图27显示了产生式(XXII)合成化合物的该方法的通用示意图。
具体而言，将浓HCl(0.76mL,7.78mmol,32％)加入Et3N(1.08mL,7.78mmol) 在甲苯(20mL)中的已经在冰浴中冷却的溶液中，将混合物搅拌直至不再观察到 发烟。加入NaN3(0.53g,7.78mmol)和ps319(0.61g,1.56mmol)，将混合物于回流 加热2天。除去甲苯，将所得残余物重新混悬于H2O中，用浓HCl(～1mL)酸化。 将所得固体搅拌5分钟，然后收集，用H2O(5×10mL)洗涤。将固体溶于DCM (30mL)中，用H2O(3×30mL)洗涤，经MgSO4干燥。将所得残余物用DCM(2×3mL)、 石油精(3×10mL)研制，然后干燥，得到产物，为白色固体。
产量:0.39g(58％)。
FT-I(ATR)Vmax/cm-1 :2922w,2854w,1734s,1667w,1524w,1444w. 1H-NMRδ/ppm(d6-DMSO):9.92(1H,s,NH),8.20(1H,t,3JH,H＝8.2Hz,Ar CH), 7.86–7.95(2×1H,2×m,2×ArCH),5.28–5.44(4×1H,4×m,4×烯CH),2.77(2H,m, CH2),2.46(2H,m,NHCOCH2),2.00–2.09(2×2H,2×m,2×CH2),1.63(2H,m, CH2),1.23–1.40(7×2H,7×m,7×CH2),0.88(3H,m,CH3).13C-NMRδ/ppm (d6-DMSO):172.0(CONH),155.2(四唑基C),153.0(d,1JC,F＝245.5Hz,ArCF), 129.7(2×烯CH),128.4(d,2JC,F＝11.5Hz,Ar C),127.75(烯CH),127.72(烯CH),124.0(Ar CH),122.9(d,3JC,F＝3.2Hz,Ar CH),121.6(d,3JC,F＝8.0Hz,Ar C), 113.7(d,2JC,F＝22.2Hz,Ar CH),35.8(NHCOCH2),30.9(CH2),29.0(CH2),28.7 (CH2),28.63(CH2),28.57(CH2),28.53(CH2),26.61(CH2),26.59(CH2),25.2(CH2), 25.0(CH2),21.9(CH2),13.9(CH3)。
实施例29:式I化合物的合成：ps321a
该实施例显示了如下式I合成化合物的产生：发明人命名为“ps321a”和具有 通式XXIII：
(XXIII)
Figure BDA0002472968040001032
图28显示了产生式(XXIII)的合成类似物和/或衍生化合物的该方法的通用 示意图。
具体而言，将NaOH水溶液(11.95μL,6.33M,0.076mmol)加入ps297b (32.2mg,0.076mmol)在乙醇(2mL)中的溶液中，将溶液于室温搅拌30分钟。将溶 液干燥，所得残余物通过重复溶于乙醇和蒸发步骤进行共沸干燥。向干燥残余 物中加入DCM(2mL)和Et2O(5mL)，收集所得固体，用Et2O(2×5mL)洗涤，干 燥，得到产物，为白色固体。
产量:17.3mg(51％)。
FT-I(ATR)Vmax/cm-1 :3316br w,2922m,2852m,1662s,1603s,1541m. 1H-NMRδ/ppm(d6-DMSO):9.87(1H,s,NH),7.90(2H,d,3JH,H＝8.8Hz,Ar CH), 7.62(2H,d,3JH,H＝8.8Hz,ArCH),5.31–5.42(2×1H,2×m,2×烯CH),2.33(2H,m, NHCOCH2),1.97–2.09(2×2H,2×m,2×CH2),1.63(2H,m,CH2),1.22–1.40 (10×2H,10×m,10×CH2),0.88(3H,m,CH3).13C-NMRδ/ppm(d6-DMSO):171.0 (CONH),160.3(四唑酸化C),138.1(Ar C),129.64(烯CH),129.62(烯CH),127.6 (Ar C),126.0(Ar CH),118.9(Ar CH),36.4(NHCOCH2),31.2(CH2),29.09(CH2),29.07(CH2),28.8(CH2),28.68(CH2),28.67(CH2),28.66(CH2),28.56(CH2),28.5 (CH2),26.57(CH2),26.55(CH2),25.1(CH2),22.1(CH2),13.9(CH3)。
实施例30：在作为体外人L细胞模型的NCI-H716细胞中测试油酰基-LPI和具 有式I结构的化合物在刺激GLP-1生物合成和分泌中的活性–第I部分
本实施例证明了油酰基-LPI和各种式I化合物在暴露于这些化合物的 NCI-H716细胞中在刺激GLP-1生物合成和分泌中的功效。NCI-H716是最初由 33周岁高加索男性的结肠直肠腺癌的腹水分离的人源性细胞系。该细胞系是本 领域可获得的用于GLP-1体外研究的现有主要人模型。
上文较早的实施例中提供的结果证明了内源性GPR119配体油酰基-LPI在 人和鼠L细胞(包括NCI-H716)中和在原代结肠细胞制备物中在刺激GLP-1生物 合成和分泌中的功效。
发明人继续制备了如之前实施例中所概括的具有式I结构的化合物。
给出该实施例以评价本发明的式I化合物在本领域认可的GLP-1体外人L 细胞模型中在刺激GLP-1生物合成和分泌中的功效和评价这类化合物在这类体 外模型中是否具有与油酰基-LPI相似的介导GLP-1生物合成和分泌的活性。
为了采用人源性细胞系NCI-H716体外评价式I化合物的GLP-1生物合成和 分泌能力，将50,000个该细胞种在24孔板的每孔中，所述板预涂有在完全RPMI (RPMI另外加有FBS10％、葡萄糖2g/L、谷氨酰胺4mM、碳酸氢钠2g/L、Pen/Strep 1x pH 7.4，37℃)中的Matrigel(0.15mg/ml)薄层，于37℃在湿润5％CO2气氛中 孵育以诱导内分泌差异。
48小时后，弃去培养基，将细胞用温HBSS(Hank’s平衡盐溶液)洗涤一次， 然后于37℃在湿润5％CO2孵育器中一式两份用不同稀释的油酰基-LPI、OEA、 DMSO(作为阴性对照)、受试式I化合物和KR-62436 10μg/ml(均溶于不含血清 的RPMI(不含FBS的完全RPMI)中)孵育2小时。在冰上快速收集上清液，于 -80℃储存，然后用对活性-GLP-1种类特异性的市售ELISA(EMD Millipore)对 GLP-1进行定量。
最初测试的式I化合物为ps297b和ps316a。结果显示在图29中。
所呈现的图作为最大浓度的油酰基-LPI获得的GLP-1分泌的百分数给出。
采用GraphPad Prism 6软件(La Jolla California,USA)对于每个实验单独计算了EC50，指示实验数的所给最终平均值±SEM，对化合物297b和316a而言n＝ 4，对油酰基-LPI和OEA而言n＝2。
采用GraphPad Prism 6软件(La Joalla California,USA)计算了EC50。EC50 变异性表达为95％置信区间，n＝4。
结果证实了在实施例9进行的活体外GLP-1分泌分析期间获得的那些结果， 并且证明了所测试的式I化合物(ps297b和ps316a)在GLP-1体外人L细胞模型 中有效地刺激了GLP-1生物合成和分泌。
实施例31：在作为体外人L细胞模型的NCI-H716细胞中测试油酰基-LPI和具 有式I结构的化合物在刺激GLP-1生物合成和分泌中的活性–第II部分
本实施例证明了各种式I化合物在NCI-H716细胞(GLP-1分泌体外人L细 胞模型)中在刺激GLP-1生物合成和分泌中的功效。
给出该实施例以评价另外(之前未测试)的本发明的式I化合物在本领域认可 的GLP-1体外人L细胞模型中在刺激GLP-1生物合成和分泌中的功效。
为了采用人源性细胞系NCI-H716体外评价式I化合物的GLP-1生物合成和 分泌能力，将50,000个该细胞种在24孔板的每孔中，所述板预涂有在完全RPMI (RPMI另外加有FBS10％、葡萄糖2g/L、谷氨酰胺4mM、碳酸氢钠2g/L、Pen/Strep 1x pH 7.4，37℃)中的Matrigel(0.15mg/ml)薄层，于37℃在湿润5％CO2气氛孵 育以诱导内分泌差异。
48小时后，弃去培养基，将细胞用预温HBSS(Hank’s平衡盐溶液)洗涤两 次，然后于37℃在湿润5％CO2孵育器中一式两份用250μl 20μM的油酰基-LPI、 DMSO(作为阴性对照)或受试式I化合物和KR-62436 10μg/ml(均溶于不含血清 的RPMI(不含FBS的完全RPMI)中)孵育2小时。受试式I化合物为ps297b、 ps316a、ps318a、ps319a、ps321a和ps323。
在冰上快速收集上清液，于-80℃储存，然后用对活性-GLP-1种类(如GLP-1 (7-36)酰胺)和GLP-1(9-36)酰胺)特异性的市售ELISA(EMD Millipore)对GLP-1 进行定量。
采用GraphPad Prism 6软件(La Jolla California,USA)对于每个实验单独计算了EC50，指示实验数的所给最终平均值±SEM，对化合物297b和316a而言n＝ 4，对油酰基-LPI和OEA而言n＝2。
采用GraphPad Prism 6软件(La Joalla California,USA)计算了EC50。EC50 变异性表达为95％置信区间，n＝4。
EC50数据表示为针对DMSO溶媒对照处理的细胞进行标准化的分泌的百 分数。结果显示在图30中。
所得结果(参见图30A)证明：所有所测试的式I化合物ps297b、ps316a、ps318a、ps319a、ps321a和ps323能够介导NCI-H716 L细胞的GLP-1生物合成和分泌。 化合物ps297b能够以与油酰基-LPI相当的水平诱导NCI-H716细胞的GLP-1生 物合成和分泌，ps316a和ps318显示出能够以比由油酰基-LPI获得的水平高的 水平诱导NCI-H716细胞的GLP-1生物合成和分泌。这些结果出人意料地证明： ps297b、ps316a和ps318a是GLP-1生物合成和分泌的非常有效的调节剂，其中 ps316a和ps318a甚至比内源性油酰基-LPI更有效地在体外人L细胞中诱导了 GLP-1生物合成和分泌。
而且，如图30B和30C中所示，结果令人感兴趣地证明，在调控GLP-1生 物合成和分泌中显示出最强活性的三种化合物(ps297b、ps316a、ps318a)是具有 不饱和脂质链(在脂质链中具有1或2条双键)的那些。
实施例32：在作为体外人L细胞模型的NCI-H716细胞中测试油酰基-LPI和具 有式I结构的化合物在刺激GLP-1生物合成和分泌中的活性–第III部分
本实施例还证明了各种式I化合物在NCI-H716细胞(GLP-1分泌体外人L 细胞模型)中在刺激GLP-1生物合成和分泌中的功效。
给出该实施例以评价另外(之前未测试)的本发明的式I化合物在本领域认可 的GLP-1体外人L细胞模型中在刺激GLP-1生物合成和分泌中的功效。
基本如上文实施例30和31中所述针对NCI-H716细胞的GLP-1分泌测试 了如下式I化合物：ps297b、ps293a、ps294a、ps298a、ps300b、ps301、ps306a、 ps308c、ps309a、ps312a、ps314b、ps315a、ps316a。图31A和图31B中提供了 EC50分泌读数。
实施例33：在作为体外人L细胞模型的NCI-H716细胞中测试油酰基-LPI和具 有式I结构的化合物在刺激GLP-1生物合成和分泌中的活性–第IV部分。
本实施例还证明了各种式I化合物在NCI-H716细胞(GLP-1分泌体外人L 细胞模型)中在刺激GLP-1生物合成和分泌中的功效。
给出该实施例以评价21种式I合成化合物在本领域认可的GLP-1体外人L 细胞模型中在刺激GLP-1生物合成和分泌中的功效。
基本如上文实施例30和31中所述针对NCI-H716细胞的GLP-1分泌测试 了式I化合物。EC50 GLP-1分泌读数结果相对于用油酰基-LPI获得的最大GLP-1 分泌进行标准化。EC50读数结果分为低GLP-1分泌活性(用油酰基-LPI获得的 最大GLP-1分泌的0-20％)、中(用油酰基-LPI获得的最大GLP-1分泌的21-79％) 和高GLP-1活性(用油酰基-LPI获得的最大GLP-1分泌的80％和更高)。结果显 示在下表3中。表3还概括了式I化合物的R1、R2和R3取代基。
表3：相对于最大GLP-1分泌作为最大、用21个式I化合物获得的GLP-1分泌 活性结果，还指示了式I化合物的R1、R2和R3取代基。
Figure BDA0002472968040001071
Figure BDA0002472968040001081
实施例34：测试具有式I结构的化合物对斑马鱼的毒性
将2天龄Danio rerio幼体去绒毛膜，用渐增量的式I合成化合物如ps297b 处理3天。通过测定心搏、运动和致畸性(孵化率,死亡率(LD50)评价了合成化 合物的心脏毒性。每个测试浓度用约10条幼体重复至少三次。用ps297b进行的 初级实验显示直至200微摩尔该化合物也没有毒性的迹象(结果未显示)。
实施例35：在小鼠中测试刺激GLP-1生物合成和分泌
在葡萄糖负荷后2分钟时对小鼠取样，在含K3-EDTA和KR-62436的试管 中取20μl动脉血样以收集血浆，将样品于-80℃快速储存。将4至6只动物的血 浆样品汇集在一起，采用可购买获得的ELISA试剂盒进行分析以定量活性 GLP-1(如GLP-1(7-36)酰胺)的水平。图32的图示证明了在口服葡萄糖GLP-1 分泌测试中在给野生型小鼠口服管饲20mg/kg剂量后式VI化合物(ps297b)对增 加GLP-1释放的功效。在葡萄糖负荷后2分钟收集的样品中测定了活性GLP-1 水平。N＝3
Figure BDA0002472968040001091
Figure BDA0002472968040001101
Figure BDA0002472968040001111
Figure BDA0002472968040001121
Figure BDA0002472968040001131
Figure BDA0002472968040001141
Figure IDA0002472968080000011
Figure IDA0002472968080000021
Figure IDA0002472968080000031
Figure IDA0002472968080000041
Figure IDA0002472968080000051

Claims (71)

1.式I化合物或其盐或溶剂合物：
(I)
Figure FDA0002472968030000011
其中：
a)“间隔基”表示C5-8芳基、具有1至2个杂原子的C3杂环、具有1至3个杂原子的C4杂环、具有1至4个杂原子的C5杂环、具有1至5个杂原子的C6杂环、C2-8烷基链、C2-8烯基链或C2-8炔基链；
b)“连接基”表示酰胺、酯、醚、硫醚、酮、亚砜、砜、氨甲酸酯、碳酸酯、胺、亚胺或磺酰胺；
c)R1表示H、OH、CN、酯、醚、C1-8烷基链、C1-8烯基链、C1-8炔基链、醛、卤素、羧酸、四唑、N(1)-烷基化四唑或其盐、N(2)-烷基化四唑或其盐、C5-6芳基、具有1至2个杂原子的C3杂环、具有1至3个杂原子的C4杂环、具有1至4个杂原子的C5杂环或具有1至5个杂原子的C6-8杂环；
d)R2表示H、OH、CN、酯、醚、C1-8烷基链、C1-8烯基链、C1-8炔基链、醛、卤素、羧酸、四唑、N(1)-烷基化四唑或其盐、N(2)-烷基化四唑或其盐、C5-6芳基、具有1至2个杂原子的C3杂环、具有1至3个杂原子的C4杂环、具有1至4个杂原子的C5杂环或具有1至5个杂原子的C6-8杂环；和
e)R3表示C4-24不饱和脂肪酸链或C3-38饱和脂肪酸链。
2.权利要求1的化合物或其盐或溶剂合物，其中R3表示
a)C4-24不饱和脂肪酸链，选自巴豆酸或其衍生物、肉豆蔻脑酸或其衍生物、棕榈油酸或其衍生物、sapienic acid或其衍生物、油酸或其衍生物、反油酸或其衍生物、异油酸或其衍生物、鳕烯酸或其衍生物、二十碳烯酸或其衍生物、芥酸或其衍生物、神经酸或其衍生物、亚油酸或其衍生物、二十碳二烯酸或其衍生物、二十二碳二烯酸或其衍生物、亚麻酸或其衍生物、松油酸或其衍生物、桐酸或其衍生物、米德酸或其衍生物、二高-γ-亚麻酸或其衍生物、二十碳三烯酸或其衍生物、十八碳四烯酸或其衍生物、花生四烯酸或其衍生物、二十碳四烯酸或其衍生物、肾上腺酸或其衍生物、十八碳五烯酸或其衍生物、二十碳五烯酸或其衍生物、ozubondo acid或其衍生物、沙丁酸或其衍生物、二十四醇五烯酸或其衍生物、二十二碳六烯酸或其衍生物和鲱鱼酸或其衍生物；或
b)C3-38饱和脂肪酸链，选自丙酸或其衍生物、丁酸或其衍生物、戊酸或其衍生物、己酸或其衍生物、庚酸或其衍生物、辛酸或其衍生物、壬酸或其衍生物、癸酸或其衍生物、十一酸或其衍生物、月桂酸或其衍生物、十三酸或其衍生物、肉豆蔻酸或其衍生物、十五酸或其衍生物、棕榈酸或其衍生物、十七烷酸或其衍生物、硬脂酸或其衍生物、十九烷酸或其衍生物、二十烷酸或其衍生物、二十一烷酸或其衍生物、山嵛酸或其衍生物、二十三烷酸或其衍生物、二十四烷酸或其衍生物、二十五烷酸或其衍生物、蜡酸或其衍生物、二十七烷酸或其衍生物、褐煤酸或其衍生物、二十九烷酸或其衍生物、蜂花酸或其衍生物、三十一烷酸或其衍生物、紫胶蜡酸或其衍生物、叶虱酸或其衍生物、三十四烷酸或其衍生物、三十五烷酸或其衍生物、三十六烷酸或其衍生物、三十七烷酸或其衍生物和三十八烷酸或其衍生物。
3.权利要求1或2的化合物或其盐或溶剂合物，其中R3表示：
不饱和脂肪酸链，选自巴豆酸、肉豆蔻脑酸、棕榈油酸、sapienic acid、油酸、反油酸、异油酸、鳕烯酸、二十碳烯酸、芥酸、神经酸、亚油酸、二十碳二烯酸、二十二碳二烯酸、亚麻酸、松油酸、桐酸、米德酸、二高-γ-亚麻酸、二十碳三烯酸、十八碳四烯酸、花生四烯酸、二十碳四烯酸、肾上腺酸、十八碳五烯酸、二十碳五烯酸、ozubondo acid、沙丁酸、二十四醇五烯酸、二十二碳六烯酸和鲱鱼酸；或
饱和脂肪酸链，选自丙酸、丁酸、戊酸、己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、十一酸、月桂酸、十三酸、肉豆蔻酸、十五酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、十九烷酸,二十烷酸、二十一烷酸、山嵛酸、二十三烷酸、二十四烷酸、二十五烷酸、蜡酸、二十七烷酸、褐煤酸、二十九烷酸、蜂花酸、三十一烷酸、紫胶蜡酸、叶虱酸、三十四烷酸、三十五烷酸、三十六烷酸、三十七烷酸和三十八烷酸。
4.权利要求1至3任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中R3表示棕榈基、油酰基或亚油酰基。
5.权利要求1至4任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中
R1是选自苯并咪唑、苯并噻唑、吲唑的杂环；和/或
R2是选自苯并咪唑、苯并噻唑、吲唑的杂环。
6.权利要求1至5任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中连接基是酰胺、酯、醚或氨甲酸酯连接基。
7.权利要求1至4或6任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中所述化合物具有式II结构：
(II)
Figure FDA0002472968030000031
其中：
a)“连接基”表示酰胺、酯、醚或氨甲酸酯；
b)R1表示H、卤素、C1-8烷基链；C1-8烯基链、C1-8炔基链、C5-6芳基、具有1至4个杂原子的C5-8杂环；
c)R2表示OH、CN、OMe、CO2H、CO2Me、四唑、N(2)-甲基四唑、N(1)-甲基四唑、四唑酸钠、三唑、咪唑、包含NH和1至4个杂原子的C5-6 N-杂环；和
d)R3表示脂肪酸链，选自油酸或其衍生物、亚油酸或其衍生物、肉豆蔻脑酸或其衍生物、棕榈油酸或其衍生物、sapienic acid或其衍生物、反油酸或其衍生物、异油酸或其衍生物、反式亚油酸或其衍生物、α-亚麻酸或其衍生物、芥酸或其衍生物、花生四烯酸或其衍生物、二十碳五烯酸或其衍生物和二十二碳六烯酸或其衍生物。
8.权利要求7的化合物或其盐或溶剂合物，其中R3表示脂肪酸链，选自油酸、亚油酸、肉豆蔻脑酸、棕榈油酸、sapienic acid、反油酸、异油酸、反式亚油酸、α-亚麻酸、芥酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸。
9.权利要求7或8的化合物或其盐或溶剂合物，其中
a)R1表示卤素、C1-8烷基链；C1-8烯基链、C1-8炔基链、C5-6芳基、具有1至4个杂原子的C5-8杂环；和
b)R2表示咪唑、包含NH和1至4个杂原子的C5-6 N-杂环。
10.权利要求7-9的化合物或其盐或溶剂合物，其中
a)R1表示处于R2的杂环的间位的卤素；和
b)R2表示包含NH和1至4个杂原子的C5-6 N-杂环。
11.权利要求1至8任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中所述化合物具有式II结构：
(II)
Figure FDA0002472968030000041
其中：
a)“连接基”表示酰胺、酯、醚或氨甲酸酯；
b)R1表示H、卤素、C1-8烷基链；
c)R2表示OH、CN、OMe、CO2H、CO2Me、四唑、N(2)-甲基四唑、N(1)-甲基四唑、四唑酸钠或三唑；和
d)R3表示油酰基、亚油酰基或棕榈酰基。
12.权利要求11的化合物或其盐或溶剂合物，其中
a.R1表示处于R2的三唑的间位的卤素或表示C1-8烷基链；
b.R2表示包含具有NH的极性头基的三唑；
c.R3表示油酰基或亚油酰基。
13.权利要求1至8或11任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中所述化合物具有式II结构：
(II)
Figure FDA0002472968030000042
其中：
a)“连接基”表示酰胺、酯、醚或氨甲酸酯；
b)R1表示H、卤素、C1-8烷基链；
c)R2表示OH、CN、OMe、CO2H、CO2Me、四唑、N(2)-甲基四唑、N(1)-甲基四唑或四唑酸钠；和
d)R3表示油酰基、亚油酰基或棕榈酰基。
14.权利要求13的化合物或其盐或溶剂合物，其中
a.R1表示处于R2的四唑的间位的卤素或表示C1-8烷基链；
b.R2表示四唑；和
c.R3表示油酰基或亚油酰基。
15.权利要求1至14任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中连接基是酰胺。
16.权利要求1至8或11或13任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中所述化合物具有式II结构:
(II)
Figure FDA0002472968030000051
其中：
a)“连接基”是；
b)R1表示H或卤素，其中卤素是氟；
c)R2表示OH、CN、OMe、CO2H、CO2Me、四唑、N(2)-甲基四唑、N(1)-甲基四唑或四唑酸钠；和
d)R3表示油酰基、亚油酰基或棕榈酰基。
17.权利要求1至8或11或13或16任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中所述化合物选自：
Figure FDA0002472968030000052
Figure FDA0002472968030000061
Figure FDA0002472968030000071
18.权利要求1至8或11或13或16或17任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中所述化合物选自：
Figure FDA0002472968030000072
Figure FDA0002472968030000081
19.权利要求1至8或11或13或16或17或18任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中所述化合物是：
Figure FDA0002472968030000082
20.权利要求1至8或11或13或16或17或18任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中所述化合物是：
Figure FDA0002472968030000083
21.权利要求1至8或11或13或16或17或18任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中所述化合物是：
Figure FDA0002472968030000084
22.权利要求1至21任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其为盐。
23.权利要求1至4或6至8或11或13或16或17任一项的化合物或盐或溶剂合物，其中R1和/或R2是N(1)-烷基化四唑或N(2)-烷基化四唑和其中所述化合物或盐或溶剂合物是脱质子化四唑的盐。
24.权利要求1至23任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其为油酰基-溶血磷脂酰肌醇(油酰基-LPI)的衍生物。
25.权利要求22的化合物或其盐或溶剂合物，当直接或间接地由油酰基-LPI合成产生时。
26.权利要求1至23任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其为油酰基-LPI类似物。
27.权利要求24的化合物或其盐或溶剂合物，其为油酰基-LPI的合成类似物。
28.权利要求1至25任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中所述化合物或其盐或溶剂合物能够与G-蛋白偶联受体119(GPR119)结合。
29.权利要求1至28任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其为GPR119的配体。
30.权利要求1至29任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其为GPR119表达和/或活性的激动剂和/或部分激动剂和/或逆拮抗剂。
31.权利要求1至30任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中所述化合物、盐或溶剂合物是GI道细胞中GPR119表达和/或活性的激动剂和/或部分激动剂和/或逆拮抗剂。
32.权利要求1至30任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中所述化合物、盐或溶剂合物能够诱导和/或增加胰高血糖素样肽-1(GLP-1)的分泌和/或合成和/或活性。
33.权利要求1至32任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中所述化合物或其盐或溶剂合物能够诱导和/或增加GI道细胞中GLP-1分泌和/或合成和/或活性。
34.权利要求1至33任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中所述化合物或其盐或溶剂合物能够在活体外和/或体内诱导和/或增加GI道细胞中GLP-1分泌和/或合成和/或活性。
35.权利要求1至34任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中所述化合物或其盐或溶剂合物能够在体内和/或体外诱导和/或增加人和/或鼠L细胞和/或胰β细胞中GLP-1分泌和/或合成和/或活性。
36.权利要求1至35任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中所述化合物或其盐或溶剂合物能够诱导和/或增加GLP-1分泌。
37.权利要求1至36任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中所述化合物或其盐或溶剂合物能够诱导和/或增加GI道细胞中GLP-1分泌。
38.权利要求1至37任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中所述化合物或其盐或溶剂合物能够在体内和/或体外诱导和/或增加鼠L细胞和/或胰β细胞中GLP-1分泌。
39.权利要求1至38任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中所述化合物或其盐或溶剂合物能够在活体外和/或体内激动和/或部分激动和/或逆拮抗GPR119的表达和/或活性。
40.权利要求1至39任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中所述化合物或其盐或溶剂合物能够在体内和/或体外激动和/或部分激动和/或逆拮抗人和/或鼠L细胞和/或胰β细胞中GPR119的表达和/或活性。
41.药物组合物，包含：
(i)至少一种权利要求1至40任一项的化合物或其盐或溶剂合物，其中所述盐或溶剂合物是可药用的；和/或
(ii)油酰基-LPI或其可药用盐或溶剂合物，
其中所述组合物还包含可药用载体和/或赋形剂。
42.权利要求41的药物组合物，其包含权利要求1至39任一项的化合物或其盐或溶剂合物和可药用载体和/或赋形剂，其中所述盐或溶剂合物是可药用的。
43.诱导和/或增加细胞中GLP-1分泌和/或合成和/或活性的方法，该方法包括使能够表达和/或分泌GLP-1的细胞与有效量的权利要求1至40任一项的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或其盐或溶剂合物和/或权利要求41或42的药物组合物接触。
44.权利要求43的方法，其中通过使细胞与所述化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或其盐或溶剂合物和/或药物组合物接触，从细胞中分泌GLP-1。
45.权利要求43至44任一项的方法，其中所述接触在活体外和/或体内进行。
46.权利要求43至45任一项的方法，其中细胞是胰细胞或GI道细胞。
47.权利要求46的方法，其中细胞是L-细胞或胰β细胞。
48.激动和/或部分激动和/或逆拮抗细胞中GPR119的方法，该方法包括使能够表达GPR119的细胞与有效量的权利要求1至40任一项的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或其盐或溶剂合物和/或权利要求41或42的药物组合物接触。
49.激动和/或部分激动和/或逆拮抗细胞中GPR119的方法，该方法包括使包含或已经表达GPR119的细胞与有效量的权利要求1至40任一项的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或其盐或溶剂合物和/或权利要求41或42的药物组合物接触，由此增加细胞中GPR119的活性。
50.权利要求48或49的方法，其中所述接触在活体外和/或体内进行。
51.权利要求48至50任一项的方法，其中所述细胞是胰细胞或GI道细胞。
52.权利要求51的方法，其中所述细胞是L-细胞或胰β细胞。
53.根据权利要求43至51任一项的方法，其在患有一种或多种代谢疾病或处于发生一种或多种代谢疾病的风险中的受治疗者中进行。
54.权利要求53的方法，其中所述代谢疾病选自肥胖和糖尿病。
55.权利要求54的方法，其中糖尿病是2型糖尿病。
56.根据权利要求23至28任一项的方法，其在患有或被怀疑患有代谢疾病或处于发生代谢疾病的风险中的受治疗者中进行。
57.权利要求56的方法，其中代谢疾病选自肥胖和糖尿病。
58.权利要求57的方法，其中糖尿病是2型糖尿病。
59.权利要求1至40任一项的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或其盐或溶剂合物和/或权利要求41或42的药物组合物在诱导和/或增加细胞的GLP-1分泌和/或诱导和/或增加细胞中GLP-1合成和/或活性中的用途。
60.权利要求1至40任一项的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或其盐或溶剂合物和/或权利要求41或42的药物组合物在活体外或体内激动和/或部分激动和/或逆拮抗细胞中GPR119的用途。
61.在需要其的受治疗者中治疗或预防代谢疾病的方法，该方法包括给所述受治疗者施用治疗有效量的其中所述盐或溶剂合物是可药用的权利要求1至40任一项的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或其可药用盐或溶剂合物和/或权利要求41或42的药物组合物。
62.权利要求61的方法，其中所述施用诱导和/或增加受治疗者GI道细胞的GLP-1分泌和/或诱导和/或增加受治疗者细胞中GLP-1合成和/或活性。
63.权利要求61或62的方法，其中所述施用激动和/或部分激动和/或逆拮抗受治疗者的GPR119。
64.根据权利要求61至63任一项的方法，其中所述代谢疾病是糖尿病和/或肥胖。
65.权利要求64的方法，其中所述代谢疾病是2型糖尿病。
66.权利要求61至65任一项的方法，其中所述受治疗者患有一种或多种代谢疾病或处于发生一种或多种代谢疾病的风险中。
67.权利要求66的方法，其中所述一种或多种代谢疾病选自肥胖、糖尿病及其组合。
68.权利要求67的方法，其中糖尿病是2型糖尿病。
69.治疗有效量的其中所述盐或溶剂合物是可药用的权利要求1至40任一项的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或可药用盐或溶剂合物和/或权利要求41或42的药物组合物在治疗或预防需要其的受治疗者的一种或多种代谢疾病中的用途。
70.治疗有效量的其中所述盐或溶剂合物是可药用的权利要求1至40任一项的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或可药用盐或溶剂合物在制备药剂中的用途，所述药剂用于在需要其的受治疗者中治疗或预防一种或多种代谢疾病。
71.其中所述盐或溶剂合物是可药用的权利要求1至40任一项的化合物或其盐或溶剂合物和/或油酰基-LPI或可药用盐或溶剂合物在制备药剂中的用途，所述药剂用于激动和/或部分激动和/或逆拮抗受治疗者的GPR119和/或用于诱导和/或增加受治疗者的GLP-1分泌和/或合成。
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