CN111514144A

CN111514144A - 具抑制细菌葡萄糖醛酸酶活性的吡唑并[4，3-c]喹啉衍生物

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Publication number: CN111514144A
Application number: CN202010389375.7A
Authority: CN
Inventors: 陈义龙; 郑添禄; 曾诚齐; 曾志华; 郑达骏; 郑凯文; 罗伟棻
Original assignee: Kaohsiung Medical University
Current assignee: Kaohsiung Medical University
Priority date: 2015-05-26
Filing date: 2016-05-26
Publication date: 2020-08-11
Anticipated expiration: 2036-05-26
Also published as: CN107708419B; CN111514144B; EP3302060B1; EP3662751A1; EP3662751B1; JP6607962B2; WO2016191576A1; US11052072B2; US20180214426A1; EP3302060A4; US20200113878A1; US11135206B2; TWI614251B; EP3302060A1; TW201712009A; CN107708419A; JP2018515593A

Abstract

本发明提供一种新颖的吡唑并[4,3‑c]喹啉衍生物，对微生物β‑葡萄糖醛酸酶展现专一地抑制活性，以提供有效的活性以预防癌症的化疗导致的腹泻(CID)。因此，本发明的化合物可作为(1)抑制化疗佐剂以预防化疗导致的腹泻(CID)并增加癌症的化疗效果；(2)预防致癌物质诱发的大肠癌之健康食品补充剂。

Description

具抑制细菌葡萄糖醛酸酶活性的吡唑并[4，3-c]喹啉衍生物

本申请是申请日为2016年5月26日、申请号为201680030136.4、发明名称为“具抑制细菌葡萄糖醛酸酶活性的吡唑并[4，3-c]喹啉衍生物”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明是关于抑制β-葡萄糖醛酸酶的新化合物，特别地，本发明提供吡唑并[4，3-c]喹啉(pyrazolo[4,3-c]quinoline)衍生物以抑制微生物β-葡萄糖醛酸酶。

背景技术

单离喜树碱(Camptothecin)，从喜树(Camptotheca acuminata)分离的生物碱(Wall,M.E.；Wani,M.C.；Cook,C.E.；Palmer,K.H.；McPhail,A.T.；Sim,G.A.J.Am.Chem.Soc.1966,88,3888-3890；Werbovetz,K.A.；Bhattacharjee,A.K.；Brendle,J.J.；Scovill,J.P.Bioorg.Med.Chem.2000,8,1741-1747)已发现具有显著的抗癌活性(Wall,M.E.Camptothecin and taxol:discovery to clinic.Med.Res.Rev.18,299-314(1998))。然而，喜树碱的毒性颇剧烈且生物利用率低(J.F.Pizzolato,L.B.Saltz,Lancet 361,2235(2003))，导致临床利用受限制。运用半合方式将喜树碱制成的癌康定(Topotecan)和抗癌妥(irinotecan，CPT-11)，目前在临床上以癌康定用于治疗卵巢癌和非小细胞肺癌，抗癌妥用于大肠癌的治疗(Mathijssen,R.H.,Loos,W.J.,Verweij,J.&Sparreboom,A.Pharmacology of topoisomerase I inhibitors irinotecan(CPT-11)andtopotecan.Curr.Cancer Drug Targets 2,103-123(2002))。CPT-11是一个前驱药(prodrug)，具有胺甲酸酯(carbamate)连结的双呱啶基(dipiperidino)基团，此基团于生物体内(in vivo)形成具活性的SN-38代谢物。SN-38在肝脏内经由二磷酸尿苷(uridinediphosphate)葡萄糖醛酸转移酶(glucuronosyltransferase)形成无活性的SN38-葡萄糖醛酸苷(SN38-glucuronide，SN-38G)后，从胆道排入肠胃道。一旦在肠道内，SN-38G作为微生物β-葡萄糖醛酸酶(microbiotaβ-glucuronidase，eβG)的底物(substrate)，于水解成具生物活性的SN-38后，担任着腹泻的主要角色(Takasuna,K.et al.Optimal antidiarrheatreatment for antitumor agent irinotecan(CPT-11)-induced delayeddiarrhea.Cancer Chemother.Pharmacol.58,494-503(2006)；Yong,W.P.,et al.Effectsof ketoconazole on glucuronidation by UDP-glucuronosyltransferaseenzymes.Clin.Cancer Res.11,6699-6704(2005))。

已发现eβG抑制剂可降低SN-38G的生物活性和减轻CPT-11导致的腹泻(Benson,A.B.,3rd et al.Recommended guidelines for the treatment of cancer treatment-induced diarrhea.J.Clin.Oncol.22,2918-2926(2004))。CPT-11在肝脏代谢成为SN-38G，随即分泌到胃肠(GI)道，并经eβG水解成为生物活性的SN-38G，然后导致肠道损伤和腹泻，以及CPT-11、SN-38及SN-38G的结构公开于Takasuna,K.et al.Optimal antidiarrheatreatment for antitumor agent irinotecan hydrochloride(CPT-11)-induceddelayed diarrhea.Cancer Chemother.Pharmacol.58,494-503(2006)。

葡萄糖醛酸化反应是人类药物排毒的主要途径。然而，在肠道菌群中经由β-葡萄糖醛酸酶(βG)降解的葡萄糖醛酸苷，在癌症化疗过程中引起严重的毒性反应，并发生促使大肠癌发展的癌变。目前使用的抗癌药物，如抗癌妥(CPT-11)(Kobayashi,K.Chemotherapy-induced diarrhea.Cancer&chemotherapy 30,765-771(2003))、5-氟尿嘧啶(5-FU)(Cascinu,S.et al.High-dose loperamide in the treatment of 5-fluorouracil-induced diarrhea in colorectal cancer patients.Supportive carein cancer,8,65-67(2000))、草酸铂(oxaliplatin)(Dranitsaris,G.,et al.Severechemotherapy-induced diarrhea in patients with colorectal cancer:a cost ofillness analysis.Supportive care in cancer,13,318-324(2005))会引发严重的化疗药物导致腹泻(chemotherapy-induced diarrhea，CID)副作用，因而可能导致的降低给药剂量或甚至化疗的中断(Viele,C.S.Overview of chemotherapy-induceddiarrhea.Semin.Oncol.Nurs.19,2-5(2003))。CID是一种常见的病症，尤其中晚期癌症病患更容易发生。因此，发现肠道内的特定βG抑制剂，即仅抑制如细菌的βG(E.coliβG；eβG)，而非人类βG(hβG)的化合物颇具迫切需要性。

已发现一些βG抑制剂可降低SN-38G的生物活性，减轻CPT-11导致的腹泻(Benson,A.B.,3rd et al.Recommended guidelines for the treatment of cancer treatment-induced diarrhea.J.Clin.Oncol.22,2918-2926(2004))。例如，发现葡萄糖-1,4-内酯(glucaro-1,4-lactone)可改善因投予CPT-11导致的CID症状(Takasuna,K.et al.Optimalantidiarrhea treatment for antitumor agent irinotecan hydrochloride(CPT-11)-induced delayed diarrhea.Cancer Chemother.Pharmacol.58,494-503(2006))。然而，投予葡萄糖-1,4-内酯(一种非选择性的βG抑制剂)，可能导致粘多糖症状副作用，因对hβG拥有强烈的抑制效应

(Fittkau,M.,et al.Saccharic acid 1,4-lactone protects against CPT-11-induced mucosa damage in rats.J.Cancer Res.Clin.130,388-394(2004)；Constantopoulos,G.,et al.Experimental animal model for mucopolysaccharidosis:suramin-induced glycosaminoglycan and sphingolipid accumulation in therat.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.77,3700-3704(1980))。另外，文献中揭示肠的eβG在葡萄糖醛酸苷共轭致癌剂的代谢活化过程中扮演重要的作用，从而导致结肠癌的形成(Kaderlik,K.R.et al.Metabolic activation pathway for the formation of DNA adducts ofthe carcinogen2-amino-1-methyl-6-phenylimidazo[4,5-b]pyridine(PhIP)in ratextrahepatic tissues.Carcinogenesis 15,1703-1709(1994)；Nalini,N.,et al.Effectof coconut cake on the bacterial enzyme activity in 1,2-dimethyl hydrazineinduced colon cancer.Clin.Chim.Acta.342,203-210(2004)；Nalini,N.,etal.Influence of spices on the bacterial(enzyme)activity in experimental coloncancer.J.Ethnopharmacol.62,15-24(1998))。Kim等公开抑制肠的eβG可降低结肠癌的发生，且在结肠癌患者中eβG的活性较正常对照组高达为12.1倍(Kim,D.H.&Jin,Y.H.Intestinal bacterial beta-glucuronidase activity of patients with coloncancer.Arch.Pharm.Res.24,564-567(2001))。Humblot,C.等证明肠的eβG和结肠的遗传毒性存在着正相关性(Humblot,C.et al.Beta-glucuronidase in human intestinalmicrobiota is necessary for the colonic genotoxicity of the food-bornecarcinogen 2-amino-3-methylimidazo[4,5-f]quinoline in rats.Carcinogenesis 28,2419-2425(2007))。最近，1-((6,8-二甲基-2-氧代-1,2-二氢基喹啉-3-基)甲基)-3-(4-乙氧苯基)-1-(2-羟乙基)硫脲(1-((6,8-Dimethyl-2-oxo-1,2-dihydroquinolin-3-yl)methyl)-3-(4-ethoxyphenyl)-1-(2-hydroxy-ethyl)thiourea)(βG-Inh，为为一公开的eβG专一抑制剂)为最有效且专一的eβG抑制剂(Wallace,B.D.et al.Alleviating cancerdrug toxicity by inhibiting a bacterial enzyme.Science 330,831-835(2010))。下列结构式为葡萄糖-1,4-内酯及βG-Inh的结构。

葡萄糖-1,4-內酯

美国专利第5447719号提供一β-葡萄糖醛酸酶抑制剂，至少包括选自黄芩苷(baicalin)、千层纸苷(oroxylin A-7-O-glucuronide)、木犀草素-3'-葡萄糖醛酸苷(luteolin-3'-glucuronide)的至少一化合物；黄芩根(scutellaria root)和荆芥穗(schizonepeta spike)萃取物；或含有作为生药的黄芩根及/或荆芥穗的中国或日本传统中药处方。美国公开专利第20130345235号涉及抑制细菌葡萄糖醛酸酶的苯氧基噻吩磺胺(phenoxythiophene sulfonamides)，和包括一个或多个此类化合物的组合物及运用一个或多个此类化合物作为与一喜树碱衍生抗癌药物的并用药物(co-drug)使用的方法。

然而，βG-Inh的疗效和特异性并不理想，因此，更有效力的和选择性的eβG抑制剂鉴定，成为关注焦点。

发明内容

本发明提供一种具有下列结构式I的化合物，

本发明的化合物可作为(1)化疗佐剂(chemotherapy-adjuvant)以预防化疗导致的腹泻(CID)并增加癌症的化疗效果；(2)预防致癌物质诱发的大肠癌的健康食品补充剂。因此，本发明的化合物以及组合物用作为在生物体内治疗或预防化疗导致的腹泻和诱发结肠癌之致癌物质的疗法。在又一实施例中，本发明提供用于减少/抑制经由在生物体中的葡萄糖醛酸化反应代谢的治疗剂再活化的方法，包括对生物体投予有效量的化合物或如上述的组合物。

图式简单说明

图1A及1B为吡唑并[4,3-c]喹啉衍生物的选择性抑制。(A)抑制eβG；(B)抑制hβG。

图2为吡唑并[4，3-c]喹啉衍生物在低浓度(10μM)或高浓度(50μM)时对内源性eβG活性的抑制功效。

图3A及3B为吡唑并[4，3-c]喹啉衍生物于人类胚胎肾细胞株(HEK293)(图3A)及人类正常肝细胞株(CNL)(图3B)的细胞存活试验。

图4为吡唑并[4，3-c]喹啉衍生物对大肠杆菌生长的影响。

图5A及5B为体内的光学影像系统，其展现化合物17(TCH-3511)及化合物32(THC-3510)可显着地抑制肠道的βG活性(图5A)。17(TCH-3511)的抑制性较32(THC-3510)好。

图6A及6B为17(TCH-3511)对腹泻的功效及与CPT-11的抗癌活性。小鼠接种CT26细胞至第7天。水或17(TCH-3511)在整个实验期间以3mg/kg/天的剂量每天以口服方式投药(第0天以后)。小鼠从第2天开始每天给予腹膜内的CPT-11治疗(50mg/kg/天)或生理盐水。每隔一天记录腹泻程度及肿瘤大小。(A)17(TCH-3511)可减少CPT-11导致的腹泻。(B)17(TCH-3511)对CPT-11治疗的抗肿瘤功效没有功效。

图7为17(TCH-3511)对DMH在肠中诱发癌变的功效。水或17(TCH-3511)在整个实验期间以3mg/kg/天的剂量每周以口服方式投药3次(～8周)。小鼠给予腹膜内DMH(30mg/kg/周)。17(TCH-3511)口服投药可减少DMH诱发的癌变。

实施方式

为了克服先前技术的缺点，本发明揭示一种新颖的吡唑并[4,3-c]喹啉(pyrazolo[4,3-c]quinoline)衍生物拥有专一地抑制微生物β-葡萄糖醛酸酶的活性，藉以提供有效的活性来预防癌症的化疗导致之腹泻(chemotherapy-induced diarrhea，CID)。因此，本发明的化合物可作为(1)化疗佐剂以预防癌症化疗导致之腹泻(CID)并增加癌症的化疗效果；(2)预防致癌物质诱发的大肠癌的健康食品补充剂。

定义

本文所用术语「一」或「一个」表示可能用于此处引用一个或多个(即至少一个)本文的语法对象。例如「类似物(analogue)」意味着一个类似物或多个类似物。

本文所用「包括(comprising)」表示各种组件可以共同从事于本发明的药物组合物。因此，用「实质上由…组成(consisting essentially of)」和「由…组成(consistingof)」是包含用语的具体话用词。

本文所用「取代」指一基团内的一个或多个氢原子可独立地替换为相同或不同的取代基(substituent(s))。

本文所用术语「烷基」表示是具有1至20个碳原子的直链或支链之脂肪烃基(aliphatic hydrocarbon)。较佳烷基具有1到8个碳原子，更佳为具有1到6个碳原子较低烷基，最佳具有1到4个碳原子。直链烷基团的实例包含甲基、乙基、正丙基及正丁基。支链表示是以一个或多个如甲基、乙基、丙基或丁基的较低烷基链接到一个直链烷基链，支链烷基团的实例包含异丙基、仲丁基、叔丁基及异戊基。

本文所用术语「烯基自由基」表示包含从2到10个碳原子和包括一个或多个双键的直链或分枝的不饱和烃基链。

本文所用术语「炔基自由基」表示包含从2到10个碳原子和包括一个或多个三键直链或分枝的不饱和烃基链。

本文所用术语「环烷基」表示具有3到大约10个碳原子之环烃基，并具有一个单环或多个的缩合环，包括融合和桥环系统，亦可选择地以1到3碳的烷基取代。此类环烷基包括如环丙基、环丁基、环戊基、环辛基、1-甲基环丙基、2-甲基环戊基、2-甲基环辛基和类似的单环结构，以及如金刚烷基(adamantanyl)和类似的多环结构。

本文所用术语「芳基」表示芳香烃基环或两个融合芳香烃基环，较佳的芳基为萘基、苯基。

本文所用术语「烷氧基」是指特定数目的碳原子(如C1-10烷氧基)或某数目范围内之碳原子(即甲氧基(MeO-)、乙氧基、异丙氧基等)的直链或支链烷氧基化合物。

本文所用术语「烷硫基」是指特定数目的碳原子(如C1-10烷硫基)或某数目范围内之碳原子(即甲硫基(MeS-)、乙硫基、异丙硫基等)的直链或支链烷硫基化合物。

本文所用术语「烷氨基」是指特定数目的碳原子(如C1-10烷氨基)或某数目范围内之碳原子(即甲氨基、乙氨基、异丙氨基、叔丁基氨基等)的直链或支链烷氨基化合物。

本文所用术语「杂芳基」是指具有5至14个环状原子的基团；在一个环状的数组内共享6、10或14π电子；和含有碳原子和1、2或3个的氧原子、氮原子及/或硫原子之杂原子。杂芳基的例子包括吲唑基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、恶二唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、四唑基、三嗪基、吖庚因基、氧杂

基、吗啉基、硫氮杂

基、二氮杂

基、噻唑啉基、苯并咪唑、苯并噁唑基、咪唑并吡啶基、苯并恶嗪基、苯并噻嗪基、苯并噻酚基、噁唑并吡啶基、苯并呋喃基、喹啉基、喹唑啉基、喔啉基、苯并噻唑基、酞酰亚胺基、苯并二吖庚因基、吲哚基、茚满基、含氮吲唑基(azaindazolyl)、去氮嘌呤基和异吲哚基。

本文所用术语「药学上可接受的盐类」是指本发明化合物的任何盐类，保留着所述化合物的生物学特性，且无毒性或其他不适宜供药用。所述盐类可从各种众所周知及涵盖于药学技术的有机离子或无机相对离子所衍生。

本文所用术语「溶质化物(solvate)」是指本发明的化合物或其盐类，其包含以非共价分子间作用力所结合的化学计量或非化学计量之溶剂(solvent)。所述溶剂为水，溶质为水合物。

本文所用术语「前药(prodrug)」是指包含本发明化合物所衍生的化合物，具有裂解基团及藉由溶剂解离(solvolysis)或在生理条件下成为本发明在体内具有药物活性的化合物。前药包括但不限于胆碱酯类衍生物及其类似物、N-烷基吗啉类酯及其类似物等。

本文所用术语「障碍(disorder)」、「病症(condition)」、「疾病(disease)」可互换使用以指生物体的状况。此状况可表征为一种以上障碍。

本文所用术语「有效量(effective amount)」是指为减轻疾病或病症的化合物剂量。术语「足供疗效用量(therapeutically effective amount)」意为当投予至生物体内以治疗一疾病时，足以影响所述疾病治疗的化合物剂量。「足供疗效用量」是根据化合物、疾病种类和其严重程度、及需要治疗的生物体的年龄、体重而改变。

本文所用术语「预防(prevent,preventing,prevention)」是指经由给予一种疗法或结合疗法，来预防生物体中障碍的一个或多个症状的复发、发作或发展。

本文所用术语「治疗(treat,treatment,treating)」是指经由给予生物体一种或多种疗法以减少或改善一种障碍的进展、严重程度和持续时间，或障碍的一个或多个症状。

本文所用术语「生物体(subject)」和「病患(patient)」是互换使用。术语「生物体(subject)」和「病患(patient)」是指动物，在某些实施例为包括非灵长类动物(如牛、猪、马、猫、狗、大鼠和鼠)及灵长类动物(如马来猴(cynomolgous monkey)之类的猴子、黑猩猩和人类)的哺乳类，以及较佳是人类。在某些实施例中，生物体是人类。

本发明的化合物

本发明之目的即在于提供一种具有下所示结构式I的化合物，

其中

n代表0至4取代基；

R¹代表1至4取代取代基；R¹各自独立地选自下列取代基所组成的群组：H、卤素、OH、CN、NH₂、NO₂、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤化烷基、未取代或取代的环烷基、未取代或取代的芳基、或未取代或取代的杂芳基；

R²选自下列取代基所组成的群组：H、卤素、烷基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、OH、CN、NH₂、NO₂、OR⁴、SR⁴、COR⁵、COOR⁶、烯基、炔基、卤化烷基、未取代或取代的环烷基、未取代或取代的芳基、或未取代或取代的杂芳基；

R³选自下列取代基所组成的群组：卤素、CN、OH、NO₂、NR^aR^b、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤化烷基、环烷基、未取代或取代的芳基、或未取代或取代的杂芳基；

R⁴选自下列取代基所组成的群组：卤素、CN、OH、NH₂、NO₂、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤化烷基、未取代或取代的环烷基、未取代或取代的芳基、或未取代或取代的杂芳基；

R⁵与R⁶各自独立地选自下列取代基所组成的群组：H、卤素、CN、OH、NH₂、NO₂、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤化烷基、未取代或取代的环烷基、未取代或取代的芳基、或未取代或取代的杂芳基；

R^a与R^b各自独立地选自下列取代基所组成的群组：C(O)NR^cR^d、H、卤素、OH、CN、NH₂、NO₂、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤化烷基、未取代或取代的环烷基、未取代或取代的芳基、或未取代或取代的杂芳基；以及

R^c与R^d各自独立地选自下列取代基所组成的群组：H、卤素、CN、OH、NH₂、NO₂、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤化烷基、未取代或取代的环烷基、未取代或取代的芳基、或未取代或取代的杂芳基；

或其同分异构体、医药上可接受之盐类、前药或溶剂化物。

在一些实施例中，任一环烷基、芳基以及杂芳基可为未取代，或以卤素、CN、OH、NH₂、NO₂、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤烷基、未取代或取代的环烷基、未取代或取代的芳基、或未取代或取代的杂芳基加以取代。

在一些实施例中，杂芳基是C_6-10元环，且具有1至3个选自氮原子、氧原子及硫原子的杂原子。

在一些实施例中，R¹是H、卤素或分别于C-5、C-6、C-7或C-8位加以取代的C_1-10烷基。在另一实施例中，R¹是H、卤素或C_1-4烷基。在另一实施例中，R¹是H、Cl、F、Br、甲基。在另一实施例中，R¹是H。

在一些实施例中，R²是H、卤素、C_1-10烷基、C_1-10烷氧基、C_1-10烷硫基、NH₂、NO₂、卤烷基、COR⁵，或分别于C-2’、C-3’或C-4’位加以取代的COOR⁵。在另一实施例中，R²是H、卤素、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C1-4烷硫基、NH₂、NO₂、卤化C1-4烷基、C(O)C1-4烷基、或COOH。在另一实施例中，R²是H、甲基、OH、NH₂、甲氧基、甲硫基、CF₃、Cl、F、NO₂、COOH、C(O)CH₃。

在一些实施例中，R³是NR^aR^b、OH或NO₂，其中R^a与R^b各自独立地分别为H或C(O)NR^cR^d，且R^c与R^d各自独立地分别为H或未取代或取代的芳基。在一些实施例中，芳基是未取代或以C_1-6烷氧基加以取代，较佳是-OCH₃。较佳地，R³是NH₂、OH、NO₂、苯基，以-OCH₃取代的苯基。

在一些实施例中，本发明的化合物具有下列结构式其中之一，

其中R¹与R²如上文所述定义，和R是H或1-4卤素、CN，OH、NH₂、NO₂、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤烷基、未取代或取代的环烷基、未取代或取代的芳基，或未取代或取代的杂芳基。

在一些实施例中，本发明的化合物选自下列基团所组成的群组：

4-羟基-8-甲基-2-氧代-1,2-二氢喹啉-3-甲腈(4-hydroxy-8-methyl-2-oxo-1,2-dihydroquinoline-3-carbonitrile)；

2,6-溴代-4-羟基-2-氧代-1,2-二氢喹啉-3-甲腈(2,6-Bromo-4-hydroxy-2-oxo-1,2-dihydro-quinolone-3-carbonitrile)；

2,4-二氯代-8-甲基喹啉-3-甲腈(2,4-Dichloro-8-methylquinoline-3-carbonitrile)；

4,6-溴代-2,4-二氯代喹啉-3-甲腈(4,6-Bromo-2,4-dichloroquinoline-3-carbonitrile)；

4-氯代-6-甲基-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-氨基(4-Chloro-6-methyl-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3-amine)；

4-氯代-7-氟代-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-氨基(4-Chloro-7-fluoro-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3-amine)；

4,8-二氯代-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-氨基(4,8-Dichloro-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3-amine)；

8-溴代-4-氯代-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-氨基(8-Bromo-4-chloro-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3-amine)；

3-氨基-4-(4-氯苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(4-chlorophenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)；

3-氨基-4-(4-甲苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(4-methylphenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)；

N⁴-(4-氯苯基)-6-甲基-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(N⁴-(4-Chlorophenyl)-6-methyl-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)；

6-甲基-N⁴-(对甲苯基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(6-Methyl-N⁴-(p-tolyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)；

N⁴-(4-氯苯基)-7-氟代-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(N⁴-(4-Chlorophenyl)-7-fluoro-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)；

7-氟代-N⁴-(对甲苯基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(7-Fluoro-N⁴-(p-tolyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)；

8-氯代-N⁴-(4-氯苯基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(8-Chloro-N⁴-(4-chlorophenyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)；

8-氯代-N⁴-(4-对甲苯基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(8-Chloro-N⁴-(p-tolyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)；

8-溴代-N⁴-(4-氯苯基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(8-Bromo-N⁴-(4-chlorophenyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)；

8-溴代-N⁴-(4-对甲苯基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(8-Bromo-N⁴-(p-tolyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)；

3-氨基-4-苯氨基-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-anilino-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)；

3-氨基-4-(4-羟苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(4-hydroxyphenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)；

3-氨基-4-(4-氨基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(4-aminophenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)；

3-氨基-4-(4-氟苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(4-fluorophenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)；

3-氨基-4-(4-三氟甲基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(4-trifluoromethylphenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)；

3-氨基-4-(4-甲氧基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(4-methoxyphenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)；

3-氨基-4-(4-甲基硫苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(4-methylthiophenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)；

3-氨基-4-(4-硝基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(4-nitrophenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)；

4-(3-氨基-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-4-基氨基)苯甲酸(4-(3-Amino-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-4-ylamino)benzoic acid)；

3-氨基-4-(4-乙酰基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(4-acetylphenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)；

3-氨基-4-(3-羟基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(3-hydroxyphenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)；

N⁴-(间甲苯基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(N⁴-(m-Tolyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)；

N⁴-(3-氯苯基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(N⁴-(3-Chlorophenyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)；

3-氨基-4-(3-甲氧基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(3-methoxyphenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)；

3-氨基-4-(3-乙酰基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(3-acetylphenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)；

3-氨基-4-(2-羟基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(2-hydroxyphenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)；

N⁴-(邻甲苯基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(N⁴-(o-Tolyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)；

N⁴-(2-氯苯基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(N⁴-(2-Chlorophenyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)；

3-氨基-4-(2-甲氧基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(2-methoxyphenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)；

3-氨基-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-4(5氢)-酮(3-Amino-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-4(5H)-one)；

1-(4-氧代-4,5-二羟基-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-基)-3-苯基脲(1-(4-oxo-4,5-dihydro-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3-yl)-3-phenylurea)；

1-(4-甲氧基苯基)-3-(4-氧代-4,5-二羟基-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-基)脲(1-(4-Methoxyphenyl)-3-(4-oxo-4,5-dihydro-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3-yl)urea)；

1-{4-[(4-氯苯基)氨基]-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-基}-3-苯基脲(1-{4-[(4-Chlorophenyl)amino]-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3-yl}-3-phenylurea)；

1-苯基-3-[4-(对甲苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-基]脲(1-Phenyl-3-[4-(p-tolylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3-yl]urea)；

1-{4-[(4-氯苯基)氨基]-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-基}-3-(4-甲氧基苯基)脲(1-{4-[(4-Chlorophenyl)amino]-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3-yl}-3-(4-methoxyphenyl)urea)；及

1-(4-甲氧基苯基)-3-[4-(对甲苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-基]脲(1-(4-Methoxyphenyl)-3-[4-(p-tolylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3-yl]urea)；

或其同分异构体、医药上可接受的盐类、前药或溶剂化物。

又于其他实施例，本发明的化合物选自下列结构式所组成之群组：

及

可了解拥有相同分子式，但其原子的键结性质或顺序，或在原子的空间排列有所差异的化合物被称为「同分异构物(isomers)」。原子在空间中排列有所差异的同分异构体称为「立体异构物(stereoisomers)」。另一个无镜像关系的立体异构体称为「非镜像异构物(diastereomers)」，而其中非迭加镜像(non-superimposable mirror images)的称为「对映异构物(enantiomers)」。拥有不对称中心(asymmetric center)的化合物，例如当与4个不同基团键结时，可能有一对之对映异构物。对映异构物可依其不对称中心的绝对组态(absolute configuration)的特征，且根据坎-普利洛(Mata and Lobo,1993,Tetrahedron:Asymmetry 4:657-668)的规则标注为(R)或(S)，或依分子旋转偏振光(polarized light)平面的方式的特征，而标注为右旋或左旋(即分别为(+)-或(-)-同分异构体)。手性化合物(chiral compound)可存在个别的对映异构物或两者的混合物。含有同等比例混合物的对掌异构物为外消旋混合物(racemic mixture)。

在一实施例中，此处所述的化合物的药学上盐类包括但不限于：(1)与有机酸或无机酸所形成的酸加成盐类，有机酸或无机酸如盐酸、氢溴酸(hydrobromide)、硫酸、硝酸、磷酸、磺酸、乙酸、三氟乙酸、三氯乙酸、丙酸、正己酸、环戊基丙酸、甘醇酸(glycolic)、戊二酸、丙酮酸、乳酸、缩苹果酸(malonic)、琥珀酸、山梨酸、抗坏血酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、安息香酸、3-(4-羟基苯甲酰)苯甲酸、苦味酸、肉桂酸、苦杏仁酸、邻苯二甲酸、月桂酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙烷二磺酸、2-羟乙基磺酸、苯磺酸、4-氯代苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯基磺酸、樟脑酸、樟脑磺酸、4-甲基双环[2.2.2]辛-2-烯-羧酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乳酸、叔丁基乙酸、十二烷基硫酸酸、葡萄糖酸、麸氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、环己基氨基磺酸、奎尼酸、已二烯二酸和类似酸；或是(2)当母体化合物的酸性质子(a)被金属离子(如碱金属离子、碱土离子或铝离子)或碱金属或碱土金属的氢氧化物(如钠氢氧化物、钾氢氧化物、钙氢氧化物、镁氢氧化物、铝氢氧化物、锂氢氧化物、锌氢氧化物及钡氢氧化)、氨(ammonia)取代，或者(b)与有机碱配位，有机碱如脂肪族、脂环族，或芳香族的有机胺类(如胺、甲胺、二甲胺、二乙胺、甲基吡(picoline)、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、乙二胺、赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、胆碱，N，N'-二苄基乙二胺(N,N'-dibenzylethylene-diamine)、氯普鲁卡因、普鲁卡因、N-苄基苯乙胺、N-甲基葡糖胺呱嗪(N-methylglucamine piperazine)、三(羟甲基)-氨基甲烷、氢氧化四甲铵(tetramethylammonium hydroxide)及其类似物)，所形成的盐类。盐类更包括，仅作为示例，钠、钾、钙、镁、铵、四甲基铵及其类似物，且所述化合物包含的基本官能基是如盐酸、氢溴酸、酒石酸、甲磺酸、苯磺酸(besylate)、醋酸、马来酸、草酸等无毒之有机酸或无机酸所生成的盐类。术语「生理上可接受的阳离子」是指酸性官能基上无毒性、生理上可接受的阳离子的相对离子(counter ion)。所述等阳离子例如钠、钾、钙、镁、铵和四烷基铵(tetraalkylammonium)等阳离子及其类似物。

本发明化合物之制备

吡唑并[4，3-c]喹啉衍生物可依照如下列反应流程(流程图1)制备。以三氯氧磷(POCl3)与4-羟基-2-氧代-1,2-二氢喹啉-3-甲腈(4-hydroxy-2-oxo-1,2-dihydroquinoline-3-carbonitriles)(1)作用，生成2，4-二氯喹啉-3-甲腈(2,4-dichloroquinoline-3-carbonitriles)(2)，然后与肼反应产生4-氯基-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-胺(4-chloro-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3-amines)(3)。化合物3与取代的苯胺反应，产生3-氨基-4-取代苯氨基-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-amino-4-substitutedanilino-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolines)(4-32)。

流程1

流程2

包括本发明化合物的组合物

当作为药品或食品补充剂时，本发明的化合物以药品或食品的组合物方式给药。所述等组合物可以药品或食品领域熟知的方式制备且包括至少一种活性化合物。一般来说，本发明的化合物以药学上有效量的有效量投予。化合物实际投予的量通常由医生依照包括治疗病症、选择的投药途径、实际投药化合物、个别病患的年龄、体重与反应、病患症状的严重程度及类似情况的相关情况决定。

本发明的药品或食品组合物可依各种方式给药，包括口服、肛门给药、皮下注射、关节注射、静脉注射和肌肉注射。根据需求的递送途径，本发明的化合物较佳以可注射或口服组合物配制，或以软膏、以乳液或以经皮贴片投药。

对于口服，本发明的化合物可结合赋形剂并以可摄入片剂、口颊片、锭剂、胶囊、酏剂(elixirs)、悬浮液、糖浆、糯米纸囊剂(wafers)及类似的形式使用。口服药品可采取散装液体溶液或悬浮液，或散装粉末的形式。然而，更常见的，组合物以单位剂型存在以促进精确的给药。术语「单位剂型(unit dosage form)」是指物理上分散单位，适合作为人体和其他哺乳动物的单一剂量，每个含有计算的活性物质预定量的单位与适合的赋形剂、媒剂或载体结合产生预期的治疗效果的。通常单位剂型包括预充填、预测量液体组合物的安瓿或注射器，或在固体组合物的情况下为丸剂、片剂、胶囊或类似剂型。在这样的组合物中，苯发明的化合物通常是一个较少的成分主成分化合物通常占微量部分(如1-6mg/kg/天)，其余则是各种媒剂或载体并加工以有利于形成所需剂型。

适合口服的液体剂型可包括含有缓冲液、悬浮和分散剂、色素、香精及类似物的适合的水性或非水性媒剂。固体剂型可包括例如以下的任何成分或相似性质的化合物：如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶的黏合剂；如淀粉或乳糖的赋形剂；如褐藻酸、羧甲基淀粉钠

或玉米淀粉的崩散剂；如硬脂酸镁的润滑剂；如胶状二氧化硅的滑动剂；如蔗糖或糖精的甜味剂；或如薄荷、水杨酸甲酯或柳橙香料的矫味剂。

可注射性的组合物通常取决于本领域已知的无菌生理食盐水、磷酸盐缓冲生理食盐水或其他可注射的载体。

对于肛门给药，这里叙述的化合物可以含有如可可脂(cocoa butter)的惯用栓剂基剂制备成栓剂形式。

本发明的组合物可包含额外的治疗剂(additional therapeutic agent)。在一实施例中，所述治疗剂可以是经由葡萄糖醛酸化反应代谢的任何剂。在一些实施例中，治疗剂为抗癌剂、免疫增强剂或免疫调节剂。例如，抗癌剂包括但不限于三苯甲胺(tamoxifen)、托瑞米芬(toremifene)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、碘多啥芬(iodoxyfene)、醋酸甲羟孕酮(megestrol acetate)、阿那曲唑(anastrozole)、来曲唑(letrazole)、硼唑(borazole)、依西美坦(exemestane)、氟他胺(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、醋酸环丙孕酮(cyproterone acetate)、醋酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、亮脯利特(luprolide)、非那雄胺(finasteride)、贺癌平(herceptin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、阿糖胞苷(cytosine arabinoside)、多柔比星(doxorubicin)、柔红霉素(daunomycin)、表柔比星(epirubicin)、去甲氧柔红霉素(idarubicin)、丝裂霉素-C(mitomycin-C)、放线菌素(dactinomycin)、光辉霉素(mithramycin)、顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、马法仑(melphalan)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、白消安(busulphan)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、异环磷酰胺(ifosfamide)、亚硝基脲(nitrosoureas)、硫特福恩(thiotephan)、长春新碱(vincristine)、紫杉醇(taxol)、克癌易(taxotere)、灭必治(etoposide)、鬼臼噻吩苷(teniposide)、胺苯吖啶(amsacrine)、伊立替康(irinotecan)、甲苯胺(topotecan)、埃博霉素(epothilone)及类似物。

本发明组合物/化合物的投药方式

本发明的化合物可作为(1)化疗佐剂(chemotherapy-adjuvant)以预防化疗导致的腹泻(CID)并增加癌症的化疗效果；(2)预防致癌物质诱发的大肠癌的健康食品补充剂。

因此，本发明的化合物与组合物用作为在生物体内治疗或预防化疗导致的腹泻以及致癌物质诱发的大肠癌的疗法。

在一方面，本发明提供发明的化合物，或包含所述发明的化合物的组合物，以作为医药品。

在一实施例中，本发明提供用于选择性抑制微生物βG而非人类βG(hβG)的方法，包括对生物体投予有效量的本发明化合物。

在一实施例中，本发明提供用在生物体中减少/抑制经由葡萄糖醛酸化反应代谢的治疗剂再活化的方法，包括对生物体投予有效量的本发明的化合物或本发明的组合物。

在另一实施例中，本发明提供用于治疗或预防生物体中化疗导致的腹泻或致癌物质诱发的大肠癌，包括对生物体投予有效量的本发明的化合物。

在更多实施例中，本发明提供于生物体增进癌症的化疗效果，包括对生物体投予有效量的本发明的化合物。

在发明更多方面，提供做为药品或食品的本发明的化合物，以治疗或预防上述症状和疾病。亦提供本化合物在药物制造或食品制备的用途，以治疗或预防上述症状和疾病。

本方法具体方案包括对遭受化疗导致的腹泻(CID)或致癌物质诱发的大肠癌的生物体投药，，或投药至生物体以增进癌症的化疗效果。

本方法另一具体方案包括对接受一种或多种治疗的生物体投药，治疗如血管新生抑制剂(angiogenic inhibitors)、化疗、放射、手术，或本领域习知的治疗以预防和/或治疗癌症。方法的具体实施例包含投予有效量的本发明的化合物至生物体化疗导致的腹泻(CID)或致癌物质诱发的大肠癌。方法的另一具体实施例包含投予有效量的本发明的化合物至生物体以增进癌症的化疗效果。另一具体实施例，用量范围从约1至约6mg/kg/天。

当使用以预防病症的发作，通常在医生建议及监督下，本发明的化合物会以上述的剂量被投予至具发展病症风险的病患。

本发明的化合物可作为活性剂单独投予至生物体，或可与其他治疗剂结合投予，较佳地，任何经由葡萄糖醛酸化反应代谢的药剂包括抗癌药、免疫增强剂或免疫调节剂。在一具体实施例中，可使用2种(或更多)药剂的联合给药(co-administration)。

在一实施例中，本发明的化合物可与一抗癌药联合给药用以治疗及/或预防癌症，具体药物包括但不限于经由葡萄糖醛酸化反应代谢的抗癌药物。此外，本发明的化合物可与其他疗法合并投药，其他疗法包括但不限于放射治疗、化疗、或手术。

作为相同治疗方案的一部分的被包含在内的联合给药为任何投递两种或更多治疗剂至病患的方法，这对本领域技术人员是显而易见的。当两种或更多药剂可同时投药至单一配方，即如单一药物组合物，这是非必要的。药剂可分开以不同配方及在不同时间投药。

范例

实施例1一般制备方法

一般TLC：由EM实验室(EM Laboratories,Inc.)预涂(0.2mm)硅土凝胶60F₂₅₄的板材；以紫外光(254nm)侦测。熔点(M.P.)：电热式IA9100数位熔点仪；未经校正。氢和碳核磁共振光谱(¹H and ¹³C NMR spectra)：Varian-Unity-400核磁共振仪(spectrometer)在400和100MHz测定，或Varian-Gemini-200核磁共振仪在200和50MHz测定，化学位移δ(ppm)以四甲基硅烷(SiMe₄)作为内部标准(＝0ppm)，偶合常数J(Hz)。以Heraeus CHN-O-Rapid元素分析仪进行元素分析，计算值结果在±0.4％内。

实施例2 4-羟基-8-甲基-2-氧代-1,2-二氢基喹啉-3-甲腈(4-Hydroxy-8-methyl-2-oxo-1,2-dihydroquinoline-3-carbonitrile)1b(R¹＝8-Me)

将溶于15mL二甲基甲酰胺(dimethylformamide,DMF)的3.46g(19.5mmol)8-甲基苯唑无水物(8-methyl-isatoic anhydride)、2.21g(19.5mmol)氰乙酸乙酯(ethylcyanoacetate)和3mL(20mmol)三乙基胺(triethylamine,Et₃N)混合物加热到160℃维持18小时，以薄层层析(thin layer chromatography,TLC)监控反应之进行。于真空态浓缩反应混合物，再添加1N盐酸。沉淀物藉由过滤收集，以水清洗后，干燥以产生棕色固体。粗产物以甲醇(MeOH)再结晶获得2.00g产率为51％的1b。MP.:276-277℃，¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):2.40(s,3H,8-Me)、7.15(dd,1H,J＝7.2,7.6Hz,6-H)、7.49(d,1H,J＝7.2Hz,7-H)、7.88(d,1H,J＝7.6Hz,5-H)、10.88(br s,1H,NH)。

实施例3 6-溴基-4-羟基-2-氧代-1,2-二氢基喹啉-3-甲腈(6-Bromo-4-hydroxy-2-oxo-1,2-dihydroquinoline-3-carbonitrile)1e(R¹＝6-Br)

产率为95％。MP.:280-282℃。¹H-NMR(200MHz,DMSO-d₆):7.23(d,1H,J＝8.8Hz,8-H)、7.63(dd,1H,J＝8.8,2.2Hz,7-H)、8.13(d,1H,J＝2.2Hz,5-H)、11.73(br s,1H,NH)。

实施例4 2,4-二氯基-8-甲基喹啉-3-甲腈(2,4-dichloro-8-methylquinoline-3-carbonitrile)2b(R¹＝8-Me)

将溶于30mL三氯氧磷(POCl3)的1.99g(10mmol)1b的混合物加热到140℃维持3小时，以薄层层析监控反应之进行。经冷却后，将混合物倾入50mL冰水，以饱和的碳酸钠(Na₂CO₃)中和到pH7。以50mL二氯甲烷(CH₂Cl₂)萃取所述含水混合物3次，再以硫酸镁(MgSO₄)干燥，并浓缩以产生棕色固体。经由正己烷：二氯甲烷(n-hexane：CH₂Cl₂)＝1:2的冲提液(eluent)的硅胶管柱纯化粗产物，以获得白色固体，以甲醇再结晶获得1.50g的2b，产率为64％。MP.:156-158℃。¹H-NMR(200MHz,DMSO-d₆):2.67(s,3H,8-Me)、7.80(dd,1H,J＝6.4,8.4Hz,6-H)、7.97(d,1H,J＝6.4Hz,7-H)、8.07(d,1H,J＝8.4Hz,5-H)。

实施例5 6-溴基-2,4-二氯基喹啉-3-甲腈(6-Bromo-2,4-dichloroquinoline-3-carbonitrile)2e(R¹＝6-Br)

产率为65％。MP.:191-193℃。¹H-NMR(200MHz,DMSO-d₆):8.05(d,1H,J＝9.0Hz,8-H)、8.23(dd,1H,J＝9.0,2.2Hz,7-H)、8.44(d,1H,J＝2.2Hz,5-H)。

实施例6 4-氯基-6-甲基-1氢-吡唑并[4,3-c]喹啉-3-胺(4-Chloro-6-methyl-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3-amine)3b(R¹＝8-Me)

将溶于20mL水合联胺(hydraize hydrate)和30mL乙醇的混合溶液的1.17g(5mmol)2b的混合物加热到60℃维持10分钟，以薄层层析监控反应之进行。于真空态浓缩反应混合物，接着将加入100mL水溶液。沉淀物藉由过滤收集，以水清洗后，干燥以产生白色固体。粗产物以甲醇再结晶获得0.98g的3b，产率为84％。MP.:216-217℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):2.66(s,3H,8-Me)、5.63(br s,2H,NH₂)、7.53-7.60(m,2H,Ar-H)、8.10(d,1H,J＝7.6Hz,Ar-H)、13.24(br s,1H,NH)。

实施例7 4-氯基-7-氟基-1氢-吡唑并[4,3-c]喹啉-3-胺(4-Chloro-7-fluoro-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3-amine)3d(R¹＝7-F)

产率为72％。MP.:224℃(dec)。¹H-NMR(200MHz,DMSO-d₆):5.84(br s,2H,NH₂)、7.57(m,1H,Ar-H)、7.69(dd,1H,J＝10.4,2.4Hz,Ar-H)、8.30(dd,1H,J＝8.8,6.0Hz,Ar-H)、13.20(br s,1H,NH)。

实施例8 4,8-二氯基-1氢-吡唑并[4,3-c]喹啉-3-胺(4,8-Dichloro-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3-amine)3d(R¹＝6-Cl)

产率为90％。MP.:282℃(dec)。¹H-NMR(200MHz,DMSO-d₆):5.70(br s,2H,NH₂)、7.73(d,1H,J＝7.2Hz,Ar-H)、7.93(d,1H,J＝9.0Hz,Ar-H)、8.34(s,1H,Ar-H)、13.28(br s,1H,NH)。

实施例9 8-溴代-4-氯基-1氢-吡唑并[4,3-c]喹啉-3-胺(8-Bromo-4-chloro-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3-amine)3e(R¹＝6-Br)

产率为90％。MP.:325℃(dec)。¹H-NMR(200MHz,DMSO-d₆):5.70(br s,2H,NH₂)、7.84(s,2H,Ar-H)、8.50(s,1H,Ar-H)、13.27(br s,1H,NH)。

实施例10 3-氨基-4-取代苯氨基-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-amino-4-substituted anilino-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolines)4-32的一般合成方法

将溶于20mL二甲基甲酰胺(DMF)的0.44g(2mmol)的4-氯基-1氢-吡唑并[4,3-c]喹啉-3-胺(4-chloro-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3-amine)3a和合适的芳香胺(4mmol)的混合物加热搅拌回流3小时，以薄层层析监控反应之进行。混合物于真空中冷却并脱水以产生残余物，将残余物溶于50mL水。沉淀物藉由过滤收集，以水清洗后，干燥以产生粗固体，再以乙醇再结晶。

实施例11 3-氨基-4-(4-氯基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4,3-c]喹啉(3-Amino-4-(4-chlorophenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)4(R¹＝H，R²＝4’-Cl)(3561)

产率为75％。MP.:246-248℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):5.62(br s,2H,NH₂)、7.26-7.30(m,1H,Ar-H)、7.35(d,2H,J＝8.8Hz,Ar-H)、7.46-7.50(m,1H,Ar-H)、7.61(d,1H,J＝8.0Hz,Ar-H)、7.99-8.05(m,3H,Ar-H)、8.31(br s,1H,NH)、12.92(br s,1H,NH)。C₁₆H₁₂ClN₅·0.2H₂O的元素分析计算值(anal.calcd.)：C 61.33,H 3.99,N 22.35；实验值(found)：C 61.45,H 3.86,N 22.67。

实施例12 3-氨基-4-(4-甲基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4,3-c]喹啉(3-Amino-4-(4-methylphenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)5(R1＝H，R2＝4’-Me)(3562)

产率为81％。MP.:292-294℃(lit.296-298℃)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):2.30(s,3H,Me),5.62(br s,2H,NH₂)、7.16(d,2H,J＝8.4Hz,Ar-H)、7.26-7.29(m,1H,Ar-H)、7.47-7.51(m,1H,Ar-H)、7.60(d,1H,J＝8.4Hz,Ar-H)、7.84(d,2H,J＝8.4Hz,Ar-H)、8.05(d,1H,J＝8.0Hz)、8.15(s,1H,NH)、12.89(br s,1H,NH)。lit.为Mekheimer,R.A.Synth.Commun.31,1971-1982(2001)。

实施例13N⁴-(4-氯苯基)-6-甲基-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(N⁴-(4-Chlorophenyl)-6-methyl-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)6(R¹＝8-Me，R²＝4’-Cl)

产率为81％。MP.:249-250℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):2.61(s,3H,Me)、5.67(brs,2H,NH₂)、7.20-7.24(m,1H,Ar-H)、7.39-7.43(m,3H,Ar-H)、7.94(d,1H,J＝7.6Hz,Ar-H)、8.11(d,2H,J＝8.8Hz,Ar-H)、8.37(br s,1H,NH)、12.90(br s,1H,NH)。

实施例14 6-甲基-N⁴-(对甲苯基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(6-Methyl-N⁴-(p-tolyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)7(R¹＝8-Me，R²＝4’-Me)

产率为81％。MP.:270-271℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):2.29(s,3H,Me)、2.60(s,3H,Me)、5.65(br s,2H,NH₂)、7.15-7.19(m,3H,Ar-H)、7.39(d,1H,J＝6.8Hz,Ar-H)、7.90-7.97(m,3H,Ar-H)、8.18(s,1H,NH)、12.85(br s,1H,NH)。C₁₈H₁₇N₅的元素分析计算值：C,71.67；H,5.65；N,23.09。实验值：C,71.21；H,5.69；N,23.00。

实施例15N⁴-(4-氯苯基)-7-氟代-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(N⁴-(4-Chlorophenyl)-7-fluoro-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)8(R¹＝7-F，R²＝4’-Cl)

产率为52％。MP.:254℃(dec.)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):5.70(br s,2H,NH₂)、7.21(br m,1H,Ar-H)、7.35-7.42(m,3H,Ar-H)、8.00(d,2H,J＝8.4Hz,Ar-H)、8.09-8.14(m,1H,Ar-H)、8.42(br s,1H,NH)、12.97(br s,1H,NH)。C₁₆H₁₁ClFN₅的元素分析计算值：C,58.63；H,3.38；N,21.37。实验值：C,58.72；H,3.45；N,21.45。

实施例16 7-氟代N⁴-(对甲苯基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(7-Fluoro-N⁴-(p-tolyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)9(R¹＝7-F，R²＝4’-Me)

产率为81％。MP.:246-247℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):2.30(s,3H,Me)、5.68(brs,2H,NH₂)、7.14-7.17(m,3H,Ar-H)、7.29(dd,1H,J＝11.2,2.4Hz,Ar-H)、7.80(d,2H,J＝8.0Hz,Ar-H)、8.08(dd,1H,J＝8.4,6.8Hz,Ar-H)、8.22(br s,1H,NH)、12.85(br s,1H,NH)。C₁₇H₁₄FN₅.1HCl的元素分析计算值：C,59.37；H,4.40；N,20.37。实验值：C,59.31；H,4.27；N,20.36。

实施例17 8-氯代-N⁴-(4-氯苯基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(8-Chloro-N⁴-(4-Chlorophenyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)10(R¹＝6-Cl，R²＝4’-Cl)

产率为33％。MP.:270-272℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):5.72(br s,2H,NH₂)、7.40(d,2H,J＝8.8Hz,Ar-H)、7.51(d,1H,J＝8.4Hz,Ar-H)、7.64(d,1H,J＝8.4Hz,Ar-H)、8.00(d,2H,J＝8.0Hz,Ar-H)、8.15(s,1H,Ar-H)、8.41(s,1H,NH)、12.98(br s,1H,NH)。C₁₆H₁₁Cl₂N₅.1.3HCl的元素分析计算值：C,49.04；H,3.17；N,17.88。实验值：C,48.90；H,3.47；N,17.77。

实施例18 8-氯代-N⁴-(对甲苯基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(8-Chloro-N⁴-(p-tolyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)11(R¹＝6-Cl，R²＝4’-Me)

产率为46％。MP.:261℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):2.30(s,3H,Me)、5.67(br s,2H,NH₂)、7.16(d,2H,J＝8.0Hz,Ar-H)、7.49(d,1H,J＝7.6Hz,Ar-H)、7.60(d,1H,J＝8.8Hz,Ar-H)、7.80(d,2H,J＝8.0Hz,Ar-H)、8.13(s,1H,Ar-H)、8.23(s,1H,NH)、12.95(br s,1H,NH)。C₁₇H₁₄ClN₅.1.3HCl的元素分析计算值：C,54.45；H,4.14；N,18.68。实验值：C,54.24；H,4.36；N,18.38。

实施例19 8-溴代-N⁴-(4-氯苯基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(8-Bromo-N⁴-(4-chlorophenyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)12(R¹＝6-Br，R²＝4’-Cl)

产率为50％。MP.:264℃(dec.)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):5.71(br s,2H,NH₂)、7.39(d,2H,J＝8.8Hz,Ar-H)、7.56-7.63(m,2H,Ar-H)、8.00(d,2H,J＝8.8Hz,Ar-H)、8.30(s,1H,Ar-H)、8.40(s,1H,NH)、12.95(br s,1H,NH)。

实施例20 8-溴代-N⁴-(对甲苯基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(8-Bromo-N4-(p-tolyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)13(R¹＝6-Br，R²＝4’-Me)

产率为73％。MP.:276℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO):2.30(s,3H,Me)、5.68(br s,2H,NH₂)、7.17(d,2H,J＝8.4Hz,Ar-H)、7.52-7.61(m,2H,Ar-H)、7.79(d,2H,J＝6.8Hz,Ar-H)、8.26(br s,2H,Ar-H and NH)、12.96(br s,1H,NH)。

实施例21 3-氨基-4-苯胺-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-anilino-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline) 14 (R¹ ＝ R² ＝ H) (3509)

产率为86％。MP.:256-258℃(lit.258-259℃)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):5.62(brs,2H,NH₂)、6.99-7.03(m,1H,Ar-H)、7.27-7.37(m,3H,Ar-H)、7.48-7.52(m,1H,Ar-H)、7.63(d,1H,J＝8.0Hz,Ar-H)、7.97(d,2H,J＝8.0Hz,Ar-H)、8.06(d,1H,J＝8.0Hz,Ar-H)、8.24(s,1H,NH)、12.92(s,1H,NH)。C₁₆H₁₃N₅的元素分析计算值：C 69.80,H 4.76,N 25.44；实验值：C 70.11,H 5.01,N 25.32。lit.为Mekheimer,R.A.Synth.Commun.31,1971-1982(2001)实施例22 3-氨基-4-(4-羟基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(4-hydroxyhenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)15(R¹＝H，R²＝4’-OH)(3565)

产率为82％。MP.:347-349℃(Dec)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):6.96(d,2H,J＝8.8Hz,Ar-H)、7.36(d,2H,J＝8.4Hz,Ar-H)、7.39-7.43(m,1H,Ar-H)、7.51-7.56(m,1H,Ar-H)、7.79-7.81(m,1H,Ar-H)、8.14(m,1H,Ar-H)、9.96(br s,1H,NH)、10.59(br s,1H,OH)、12.21(br s,1H,NH)。C₁₆H₁₃N₅O·2.0H₂O的元素分析计算值：C 58.70,H 5.24,N 21.40；实验值：C 58.47,H 5.24,N 21.70。

实施例23 3-氨基-4-(4-氨基苯基氨基-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(4-aminophenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)16(R¹＝H，R²＝4’-NH₂)(4522)

产率为61％。MP.:355-356℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):5.57(br s,2H,NH₂)、6.35(br s,2H,NH)、6.71(d,2H,J＝8.8Hz,Ar-H)、7.17(d,2H,J＝8.0Hz,Ar-H)、7.39-7.51(m,3H,Ar-H)、7.77-7.81(m,1H,Ar-H)、8.08(br s,1H,NH)、10.41(br s,1H,NH)、10.98(br s,1H,NH)、12.96(br s,1H,NH)。

实施例24 3-氨基-4-(4-氟代苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(4-fluorophenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)17(R¹＝H，R²＝4’-F)(3511)

产率为79％。MP.:266-268℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):5.64(br s,2H,NH₂)、7.16-7.21(m,2H,Ar-H)、7.27-7.30(m,1H,Ar-H)、7.47-7.51(m,1H,Ar-H)、7.60(d,1H,J＝8.0Hz,Ar-H)、7.96-7.99(m,2H,Ar-H)、7.61(d,1H,J＝7.6Hz,Ar-H)、8.25(br s,1H,NH)、12.91(br s,1H,NH)。C₁₆H₁₂FN₅的元素分析计算值：C 65.52,H 4.12,N 23.88；实验值：C65.52,H 4.39,N 23.63。

实施例25 3-氨基-4-(4-三氟甲基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(4-trifluoromethylphenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)18(R¹＝H，R²＝4’-CF₃)(3508)

产率为75％。MP.:251-252℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):5.68(br s,2H,NH₂)、7.34-7.38(m,1H,Ar-H)、7.53-7.57(m,1H,Ar-H)、7.68-7.72(m,3H,Ar-H)、8.40(d,1H,J＝7.6Hz,Ar-H)、8.20(d,2H,J＝8.8Hz,Ar-H)、8.61(br s,1H,NH)、13.00(br s,1H,NH)。C₁₇H₁₂F₃N₅的元素分析计算值：C 59.48,H3.52,N 20.40；实验值：C 59.55,H 3.57,N 20.26。

实施例26 3-氨基-4-(4-甲氧基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(4-methoxyphenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)19(R¹＝H，R²＝4’-OMe)(3506)

产率为81％。MP.:228-230℃(lit.235-237℃)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):3.67(s,3H,OMe)、5.62(br s,2H,NH₂)、6.94(d,2H,J＝9.2Hz,Ar-H)、7.23-7.26(m,1H,Ar-H)、7.44-7.48(m,1H,Ar-H)、7.56(d,1H,J＝8.0Hz,Ar-H)、7.83(d,2H,J＝7.6Hz,Ar-H)、8.03(d,1H,J＝8.4Hz,Ar-H)、8.10(br s,1H,NH)、12.86(br s,1H,NH)。C₁₇H₁₅N₅O·0.1H₂O的元素分析计算值：C 66.47,H 5.00,N 22.80；实验值：C 66.39,H 4.98,N 22.94。lit.为Mekheimer,R.A.Synth.Commun.31,1971-1982(2001)

实施例27 3-氨基-4-(4-甲硫基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(4-methylthiophenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)20(R¹＝H，R²＝4’-SMe)(3512)

产率为80％。MP.:269-271℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):2.48(s,3H,SMe)、5.63(brs,2H,NH₂)、7.29(d,1H,J＝8.8Hz,Ar-H)、7.48-7.51(m,1H,Ar-H)、7.61(d,1H,J＝8.0Hz,Ar-H)、7.95(d,1H,J＝8.4Hz,Ar-H)、8.05(d,1H,J＝7.6Hz,Ar-H)、8.24(br s,1H,NH)、12.91(br s,1H,NH)。C₁₇H₁₅N₅S·0.1HCl的元素分析计算值：C 62.82,H 4.68,N 21.54；实验值：C62.66,H 4.72,N 21.14。

实施例28 3-氨基-4-(4-硝基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(4-nitrophenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)21(R¹＝H，R²＝4’-NO₂)(3515)

产率为36％。MP.:303-305℃(Dec)。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):5.73(br s,2H,NH₂)、7.40-7.43(m,1H,Ar-H)、7.58-7.61(m,1H,Ar-H)、7.78(d,1H,J＝7.6Hz,Ar-H)、8.14(d,1H,J＝8.0Hz,Ar-H)、8.25(s,4H,Ar-H)、9.10(br s,1H,NH)、13.08(br s,1H,NH)。C₁₆H₁₂N₆O₂·0.3HCl的元素分析计算值：C 58.01,H 3.73,N 25.37；实验值：C 57.72,H4.03,N 24.98。

实施例29 4-(3-氨基-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-4-基氨基)苯甲酸(4-(3-Amino-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-(4-ylamino)benzoic acid)22(R¹＝H，R²＝4’-COOH)(3564)

产率为76％。MP.:362-364℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):5.65(br s,2H,NH₂)、7.47-7.51(m,1H,Ar-H)、7.59-7.63(m,1H,Ar-H)、7.74-7.78(m,3H,Ar-H)、8.07(d,2H,J＝8.4Hz,Ar-H)、8.19(d,1H,J＝8.0Hz,Ar-H)、11.21(br s,1H,NH)、12.17(br s,1H,NH)、12.95(br s,1H,COOH)。C₁₇H₁₃N₅O₂·HCl的元素分析计算值：C 57.39,H 3.97,N 19.68；实验值：C 57.45,H 3.84,N19.76。

实施例30 3-氨基-4-(4-乙酰基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(4-acetylphenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)23(R¹＝H，R²＝4’-COMe)(3505)

产率为83％。MP.:249-251℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):2.55(s,3H,Me)、5.67(brs,2H,NH₂)、7.35-7.38(m,1H,Ar-H)、7.54-7.58(m,1H,Ar-H)、7.72(d,1H,J＝8.0Hz,Ar-H)、7.97(d,2H,J＝8.8Hz,Ar-H)、8.10-8.15(m,3H,Ar-H)、8.65(br s,1H,NH)、13.01(br s,1H,NH)。C₁₈H₁₅N₅O·0.1HCl的元素分析计算值：C 67.35,H 4.74,N 21.82；实验值：C 67.22,H4.82,N 21.57。

实施例31 3-氨基-4-(4-羟基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(3-hydroxyphenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)24(R¹＝H，R²＝3’-OH)(4518)

产率为84％。MP.:319-321℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):6.82(d,1H,J＝7.6Hz,Ar-H)、6.98(d,2H,J＝6.8Hz,Ar-H)、7.30-7.34(m,1H,Ar-H)、7.42-7.46(m,1H,Ar-H)、7.54-7.58(m,1H,Ar-H)、7.78(d,1H,J＝7.6Hz,Ar-H)、8.15(s,1H,Ar-H)、9.95(s,1H,NH)、10.81(br s,1H,OH)、11.78(br s,1H,NH)。C₁₆H₁₃N₅O·1.25HCl的元素分析计算值：C 57.03,H4.27,N 20.79；实验值：C 56.95,H 4.62,N 21.02。

实施例32N⁴-(间甲苯基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(N⁴-(m-Tolyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)25(R¹＝H，R²＝3’-Me)

产率为50％。MP.:281-282℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):2.39(s,3H,Me)、7.23(d,1H,J＝7.6Hz,Ar-H)、7.38-7.47(m,4H,Ar-H)、7.57(dd,1H,J＝8.0Hz,Ar-H)、7.78(d,1H,J＝8.0Hz,Ar-H)、8.16(d,1H,J＝6.4Hz,Ar-H)、10.88(br s,1H,NH),11.70(br s,1H,NH)。C₁₇H₁₅N₅.1.1HCl的元素分析计算值：C,61.95；H,4.93；N,21.25。实验值：C,61.95；H,4.67；N,21.18。

实施例33N⁴-(3-氯苯基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(N⁴-(3-Chlorophenyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)26(R¹＝H，R²＝3’-Cl)产率为57％。MP.:227-229℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):5.66(br s,2H,NH₂)、7.05(dd,1H,J＝8.0,1.6Hz,Ar-H)、7.34-7.39(m,2H,Ar-H)、7.54(m,1H,Ar-H)、7.67(d,1H,J＝7.6Hz,Ar-H)、7.89(d,1H,J＝7.2Hz,Ar-H)、8.09(d,1H,J＝7.6Hz,Ar-H)、8.27(s,1H,Ar-H)、8.39(brs,1H,NH)、12.97(br s,1H,NH)。C₁₆H₁₂ClN₅的元素分析计算值：C,62.04；H,3.90；N,22.61。实验值：C,61.91；H,3.88；N,22.40。

实施例34 3-氨基-4-(3-甲氧基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(3-methoxyphenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)27(R¹＝H，R²＝3’-OMe)(3514)

产率为76％。MP.:184-186℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):3.81(s,3H,OMe)、3.81(s,3H,OMe)、5.63(br s,2H,NH₂)、6.58-6.61(m,1H,Ar-H)、7.22-7.26(m,1H,Ar-H)、7.29-7.33(m,1H,Ar-H)、7.44(d,1H,J＝8.0Hz,Ar-H)、7.50-7.54(m,1H,Ar-H)、7.65(d,1H,J＝8.0Hz,Ar-H)、7.90(s,1H,Ar-H)、8.07(d,1H,J＝7.6Hz,Ar-H)、8.24(s,1H,NH)、12.95(br s,1H,NH)。C₁₇H₁₅N₅O的元素分析计算值：C 66.87,H 4.95,N 22.94；实验值：C 66.64,H4.98,N22.68。

实施例35 3-氨基-4-(3-乙酰基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(3-acetylphenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)28(R¹＝H，R²＝3’-COMe)(3117)

产率为84％。MP.:>380℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):2.63(s,3H,Me)、7.45-7.49(m,1H,Ar-H)、7.57-7.60(m,1H,Ar-H)、7.68-7.72(m,1H,Ar-H)、7.76(d,1H,J＝8.4Hz,Ar-H)、7.89(d,1H,J＝8.8Hz,Ar-H)、7.97(d,1H,J＝7.6Hz,Ar-H)、8.17-8.20(m,2H,Ar-H)、11.05(br s,1H,NH)、11.85(br s,1H,NH).C₁₈H₁₅N₅O·0.5H₂O的元素分析计算值：C 66.23,H4.95,N 21.46；实验值：C 66.31,H 4.66,N 21.26。

实施例36 3-氨基-4-(2-羟基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(2-hydroxyphenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)29(R¹＝H，R²＝2’-OH)(3507)

产率为64％。MP.:156-157℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):5.51(br s,2H,NH₂)、6.84-6.99(m,3H,Ar-H)、7.29-7.32(m,1H,Ar-H)、7.50-7.53(m,1H,Ar-H)、7.60(d,1H,J＝7.2Hz,Ar-H)、8.06(d,2H,J＝7.6Hz,Ar-H)、8.43(s,1H,NH)、11.22(br s,1H,OH)、13.06(s,1H,NH)。C₁₆H₁₃N₅O·0.5H₂O的元素分析计算值：C 63.98,H 4.71,N 23.32；实验值：C 63.66,H 4.65,N 23.33。

实施例37N⁴-(邻甲苯基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(N⁴-(o-Tolyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)30(R1＝H，R²＝2’-Me)

产率为31％。MP.:228-230℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):2.31(s,3H,Me)、5.48(brs,2H,NH₂)、7.02-7.05(m,1H,Ar-H)、7.23-7.27(m,3H,Ar-H)、7.45(br s,1H,Ar-H)、7.55(d,1H,J＝7.6Hz,Ar-H)、8.05(br s,2H,Ar-H)、8.31(br s,1H,NH)、12.96(br s,1H,NH)。C₁₇H₁₅N₅.0.2H₂O的元素分析计算值：C,69.68；H,5.30；N,23.90。实验值：C,69.95；H,5.17；N,23.70。

实施例38N⁴-(2-氯苯基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3,4-二胺(N⁴-(2-Chloro-phenyl)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline-3,4-diamine)31(R¹＝H，R²＝2’-Cl)

产率为52％。MP.:243-244℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):5.46(br s,2H,NH₂)、7.43-7.47(m,1H,Ar-H)、7.52-7.59(m,3H,Ar-H)、7.71-7.75(m,2H,Ar-H)、7.79(d,1H,J＝8.0Hz,Ar-H)、8.17(d,1H,J＝7.6Hz,Ar-H)、8.30(br s,1H,NH)、11.45(br s,1H,NH)。

实施例39 3-氨基-4-(2-甲氧基苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉(3-Amino-4-(2-methoxyphenylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinoline)32(R¹＝H，R²＝2’-OMe)(3510)

产率为69％。MP.:210-211℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):5.22(s,2H,NH₂)、6.96-7.08(m,3H,Ar-H)、7.29-7.32(m,1H,Ar-H)、7.50-7.54(m,1H,Ar-H)、7.69(d,1H,J＝8.0Hz,Ar-H)、8.06(d,1H,J＝8.0Hz,Ar-H)、8.57(s,1H,NH)、8.99(d,1H,J＝7.2Hz,Ar-H)、13.03(s,1H,NH)。C₁₇H₁₅N₅O·0.45H₂O的元素分析计算值：C 65.13,H 5.12,N 22.35；实验值：C65.31,H 5.03,N21.99。

实施例40 3-氨基-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-4-酮(3-Amino-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-4(5H)-one)33

将溶于30mL二甲基甲酰胺(DMF)的0.22g(1.0mmol)的4-氯代-1氢-吡唑并[4,3-c]喹啉-3-胺(3a)与1mL 36％盐酸的混合物加热回流2小时，以薄层层析监控反应之进行。混合物于真空中脱水，以20mL水处理、过滤，且粗固体以乙醇再结晶，获得0.15g的33黄色固体，产率为75％。MP.:316-318℃。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):5.73(br s,2H,NH₂)、7.60-7.72(m,2H,Ar-H)、7.89(d,1H,J＝8.0Hz,Ar-H)、8.24(dd,1H,J＝8.0,1.6Hz,Ar-H)、13.23(brs,1H,NH)。

实施例41 1-(4-氧代-4,5-二羟基-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-基)-3-苯基脲(1-(4-oxo-4,5-dihydro-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3-yl)-3-phenylurea)34将溶于8mL乙腈(acetonitrile)的0.20g(1.0mmol)的3-氨基-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-4-酮(33)与0.36g(3.0mmol)的异氰酸苯酯(phenyl isocyanate)的混合物于室温下搅拌混合2小时，以薄层层析监控反应之进行。沉淀物藉由过滤收集，以乙腈清洗后，干燥以产生白色固体。粗产物以乙醇再结晶获得0.23g的34，产率为72％。MP.:240-242℃。¹H-NMR(400MHz,TFA-d):7.39-7.44(m,1H,Ar-H)、7.49-7.52(m,4H,Ar-H)、7.56-7.63(m,2H,Ar-H)、7.84-7.88(m,1H,Ar-H)、8.20(d,1H,J＝8.0Hz,Ar-H)。

实施例42 1-(4-甲氧基苯基)-3-(4-氧代-4,5-二羟基-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-基)脲(1-(4-Methoxyphenyl)-3-(4-oxo-4,5-dihydro-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3-yl)urea)35

化合物35如上述34获得的方法，从33与4-甲氧基异氰酸苯酯(4-methoxyphenylisocyanate)获得。产率为47％。MP.:224-225℃。¹H-NMR(400MHz,TFA-d):3.90(s,3H,OCH₃)、7.02(d,2H,J＝8.8Hz,Ar-H)、7.37(d,2H,J＝8.8Hz,Ar-H)、7.43-7.46(m,2H,Ar-H)、7.68-7.72(m,1H,Ar-H)、8.02(d,1H,J＝8.0Hz,Ar-H)。

实施例43 1-{4-[(4-氯苯基氨基]-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-基}-3-苯基脲(1-{4-[(4-Chlorophenyl)amino]-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3-yl}-3-phenylurea)36

化合物36如上述34获得的方法，从4与异氰酸苯酯获得。产率为70％。MP.:282-283℃。¹H-NMR(400MHz,TFA-d):7.98(d,2H,J＝6.8,Ar-H)、8.06-8.29(m,10H,Ar-H)、8.92(d,1H,J＝7.6Hz,Ar-H)。

实施例44 1-苯基-3-[4-(对甲苯基)氨基-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-基)脲(1-phenyl-3-[4-(p-tolylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3-yl)urea]37化合物37如上述34获得的方法，从5与异氰酸苯酯获得。产率为73％。MP.:212-213℃。¹H-NMR(400MHz,TFA-d):2.51(s,3H,CH₃)、7.38-7.58(m,11H,Ar-H)、7.66-7.70(m,1H,Ar-H)、8.33(d,1H,J＝7.6Hz,Ar-H)。

实施例45 1-{4-[(4-氯苯基)氨基]-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-基}-3-(4-甲氧基苯基)脲(1-{4-[(4-Chlorophenyl)amino]-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3-yl}-3-(4-methoxyphenyl)urea)38

化合物38如上述34获得的方法，从4与4-甲氧基异氰酸苯酯获得。产率为80％。MP.:211-212℃。¹H-NMR(400MHz,TFA-d):4.13(s,3H,OCH₃)、7.26(d,2H,J＝8.4Hz,Ar-H)、7.45(d,1H,J＝8.4Hz,Ar-H)、7.54-7.77(m,8H,Ar-H)、8.39(d,1H,J＝8.0Hz,Ar-H)。

实施例46 1-(4-甲氧基苯基)-3-[(4-(对甲苯基氨基)-1氢-吡唑并[4，3-c]喹啉-3-基}脲(1-(4-Methoxyphenyl)-3-[4-(p-tolylamino)-1H-pyrazolo[4,3-c]quinolin-3-yl)urea]39

化合物39如上述34获得的方法，从5与4-甲氧基异氰酸苯酯获得。产率为85％。MP.:163-164℃。¹H-NMR(400MHz,TFA-d):TFA-d):2.89(s,3H,CH₃)、4.43(s,3H,OCH₃)、7.56(d,2H,J＝9.2Hz,Ar-H)、7.73-7.78(m,3H,Ar-H)、7.86-7.95(m,5H,Ar-H)、8.03-8.06(m,1H,Ar-H)、8.68(d,1H,J＝8.0Hz,Ar-H)。

实施例47吡唑并[4,3-c]喹啉衍生物专一的抑制大肠杆菌葡萄糖醛酸酶活性

为确认更有效力的及专一的eβG抑制剂，已经由高通量筛选(high throughputscreening，HTS)来筛选大量化合物，并发现如结构式I的吡唑并[4,3-c]喹啉衍生物(TCH-系列)，可专一抑制eβG活性，但对hβG则无功效。

测定吡唑并[4,3-c]喹啉衍生物对eβG或hβG活性的抑制性。纯化的重组eβG或hβG蛋白分别以连续稀释的抑制剂进行培养。βG活性以βG受质之呈色反应(4-硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(p-nitrophenyl-β-D-glucopyranoside，pNPG))进行测定。所述pNPG的水解产物(PNP)由OD₄₂₀测定。结果以百分比显示βG活性抑制性与无抑制剂处理的对照组的比较(如下表1)。所述数据显示包括如4(TCH-3561)、5(TCH-3562)、17(TCH-3511)、及32(TCH-3510)的抑制剂选择性抑制eβG活性，而非hβG。所述等化合物显示比βG-Inh更好的eβG活性抑制效果(如图5)。

表一吡唑并[4,3-c]喹啉对eβG及hβG的抑制活性

^a值为实验至少独立地重复操作3次的标准偏差(平均值±S.D.)。

^bβG-Inh作为阳性对照。

实施例48体内检测内源性β-葡萄糖醛酸酶活性

测定吡唑并[4,3-c]喹啉衍生物对抑制内源性eβG活性的抑制性。此检测与体外检测相似。BL21大肠杆菌(BL21E.coli)细胞于LB培养基(Lenox broth medium)生长至OD₆₀₀为0.35。大肠杆菌稀释4次后与各抑制剂进行培养。内源性eβG活性以上述检测PNP方式进行测定。结果显示包含4(TCH-3561)、5(TCH-3562)、17(TCH-3511)、及32(TCH-3510)的抑制剂，在低浓度(10μM)或高浓度(50μM)下对内源性eβG活性的抑制效果均较βG-Inh为佳(图2)。

实施例49体内检测内源性β-葡萄糖醛酸酶活性

测定吡唑并[4,3-c]喹啉衍生物对人类细胞之细胞毒性。利用抑制剂处理HEK293人类胚胎肾细胞(human embryonic kidney cell)与CNL正常肝细胞(Chang normalliver)。利用生物发光法细胞增殖/毒性检测试剂盒(PerkinElmer kit，ATPlite^TM)来检测培养细胞的三磷酸腺苷，以定量的评估抑制剂的增生效果。结果显示在低浓度的抑制剂17(TCH-3511)或32(TCH-3510)所处理的细胞相较于以βG-Inh处理的细胞有相似的存活率(图3)。

实施例50检测大肠杆菌的生长

测定吡唑并[4,3-c]喹啉衍生物对影响大肠杆菌的生长。Top10大肠杆菌细胞于LB培养基生长至OD₆₀₀为0.35，并以各种抑制剂处理。6小时后，以OD₆₀₀监测大肠杆菌细胞培养基。与无抑制剂对照组比较细胞活力，并以％对照组显示。5(TCH-3562)、17(TCH-3511)及32(TCH-3510)在高浓度(100μM)下对大肠杆菌株之生长无影响。

实施例51肠道内β-葡萄糖醛酸酶活性的体内造影

17(TCH-3511)、32(TCH-3510)对小鼠肠道中βG活性的抑制性以体内造影(In vivoimage)测定。5(TCH-3562)、17(TCH-3511)或32(TCH-3510)溶于ddH₂O。健康6-10周大雌性Balb/cJ小鼠连续5天每天以口服方式给予5(TCH-3562)、17(TCH-3511)、32(TCH-3510)或ddH₂O(60μg/200μl)。于第6天口服给予βG荧光前驱探针(pro-probe)，荧光素2-β-D-葡糖苷酸(fluorescein di-β-D-glucuronide,FDGlcU)。经由体内光学影像系统侦测βG活性。结果显示口服给药17(TCH 3511)显著减少肠道中的荧光信号，显示17(TCH 3511)能有效地抑制肠道中βG活性(图5)。

实施例52 17(TCH 3511)对CPT-11诱发的腹泻与的抗癌活性的功效将17(TCH3511)投予小鼠以测试藉由细菌抑制剂17(TCH 3511)与CPT-11结合的肠道内βG抑制性是否可消除荷瘤小鼠(tumor-bearing mice)中CPT-11诱发的腹泻，并维持疗效。将CT26鼠结肠腺癌细胞(CT26murine colon adenocarcinoma cells)植入Balb/cJ小鼠皮下。形成实体肿瘤后，每天口服3mg/kg的17(TCH 3511)和腹腔内注射50mg/kg的CPT-11。腹泻的迹象是根据粪便形状及肛门周边染色。如图6A所示，17(TCH 3511)能减少CPT-11诱发的腹泻，不会影响CPT-11治疗的抗癌效果。

实施例53 17(TCH 3511)对于肠道中DMH诱发的癌变的影响将17(TCH 3511)投予至C57BL/6J-APC^MIN/J小鼠，以确认是否预防DMH诱发的肠道损伤与癌变。将17(TCH 3511)以每周3次，每次口服3mg/kg，和DMH每周1次腹腔内注射30mg/kg一起投予。于8周治疗后，将小鼠处死，并检查肠道中的肿瘤。如图7所示，只有DMH治疗的群组中发现超过26个肿瘤，而有17(TCH 3511)的群组仅有6个肿瘤。因此，17(TCH 3511)能减少DMH诱发的肠道损伤与预防癌变。

Claims

1.一种具有结构式I的化合物或其医药上可接受的盐类在制备药物中的用途，所述药物用于选择性抑制生物体的微生物β-葡萄糖醛酸酶而非人类β-葡萄糖醛酸酶，

其中

n代表0至4；

R¹各自独立地选自下列取代基所组成的群组：H、卤素、OH、CN、NH₂、NO₂、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤化烷基、未取代或取代的环烷基、未取代或取代的芳基、或未取代或取代的杂芳基；

R²各自独立地选自下列取代基所组成的群组：H、卤素、烷基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、OH、NH₂、NO₂、OR⁴、SR⁴、COR⁵、COOR⁶、烯基、炔基、卤化烷基、未取代或取代的环烷基、未取代或取代的芳基、或未取代或取代的杂芳基；

R⁴选自下列取代基所组成的群组：卤素、OH、NH₂、NO₂、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤化烷基、未取代或取代的环烷基、未取代或取代的芳基、或未取代或取代的杂芳基；

R⁵与R⁶各自独立地选自下列取代基所组成的群组：H、卤素、OH、NH₂、NO₂、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤化烷基、未取代或取代的环烷基、未取代或取代的芳基、或未取代或取代的杂芳基；

R^c与R^d各自独立地选自下列取代基所组成的群组：H、卤素、CN、OH、NH₂、NO₂、烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤化烷基、未取代或取代的环烷基、未取代或取代的芳基、或未取代或取代的杂芳基。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述生物体罹患一癌症。

3.一种具有结构式I的化合物或其医药上可接受的盐类在制备药物中的用途，所述药物用于在生物体中减少/抑制经由葡萄糖醛酸化反应代谢的治疗剂再活化，

其中

n代表0至4；

4.一种具有结构式I的化合物或其医药上可接受的盐类在制备药物中的用途，所述药物用于在生物体中治疗和/或预防化疗导致的腹泻或致癌物质诱发的大肠癌，

其中

n代表0至4；

5.一种具有结构式I的化合物或其医药上可接受的盐类在制备药物中的用途，所述药物用于在生物体中增进癌症的化疗功效，

其中

n代表0至4；

6.如权利要求1至5任一项所述的用途，其特征在于，所述生物体接受一个或多个包括以血管新生抑制剂(angiogenic inhibitors)、化疗、放射线、及/或手术治疗的治疗方式。

7.如权利要求1至5任一项所述的用途，其特征在于，所述具有结构式I的化合物或其医药上可接受的盐类与包含经由葡萄糖醛酸化反应代谢的抗癌剂、免疫增强剂或免疫调节剂的额外治疗剂合并投药。

8.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述具有结构式I的化合物或其医药上可接受的盐类与包含经由葡萄糖醛酸化反应代谢的抗癌剂、免疫增强剂或免疫调节剂的额外治疗剂合并投药。

9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述具有结构式I的化合物或其医药上可接受的盐类及所述额外治疗剂为同时或分开投药。

10.一种具有结构式I的化合物或其医药上可接受的盐类作为制备预防致癌物质诱发的大肠癌的健康食品补充剂的用途，

其中

n代表0至4；