CN111513180B - 饲用高蛋白核苷酸型酵母水解物及其制法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及微生物应用技术领域，具体涉及一种饲用高蛋白核苷酸型酵母水解物及其制备方法和应用。所述饲用酵母水解物中核苷酸含量≥2.6％，蛋白质含量≥50％，小肽含量≥30％。本发明的饲用酵母水解物在营养成分蛋白质保持较高水平情况下获得了相对较高的核苷酸和小肽含量，在饲料中使用可改善蛋白质原料的营养品质，缓解饲料蛋白质资源紧缺的矛盾，同时能够满足养殖动物对核苷酸和小肽营养价值的需求，对于动物的现代科学化养殖生产具有重要意义。
Description
技术领域
本发明涉及微生物应用技术领域，具体涉及一种饲用高蛋白核苷酸型酵母水解物及其制备方法和应用。
背景技术
随着我国畜牧、水产业的快速发展，对饲料的需要量越来越大，致使饲料供求，特别是饲料蛋白源的供求矛盾日益突出，在我国蛋白原料的短缺成为必然，主要依靠进口的格局不会改变，一直以来都需要从国外大量进口高蛋白饲料原料，这样的情况给本行业一方面带来了巨大的经济压力，另一方面也给生物安全性带来了严峻挑战。
面对蛋白资源对外高度依赖，原料价格无序波动，开发新型饲用蛋白资源是我国饲料工业全面均衡可持续发展的刚性需求。发展酵母单细胞蛋白产业，既可以充分利用我国糟渣资源，改善现有蛋白质原料的营养品质，又可以节省部分豆粕和鱼粉的使用，从而满足生产需求。因此，开发生产酵母蛋白原料是解决我国饲料蛋白质紧缺的重要途径之一。在饲料原料目录(2013)中，将酵母水解物定义为：以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)为菌种，经液体发酵得到的菌体，再经自溶或外源酶催化水解后，浓缩或干燥获得的产品。酵母可溶物未经提取，粗蛋白含量不低于35％。酵母水解物可满足畜禽、水产和反刍各种动物各阶段的蛋白需要，是一种有效的饲料蛋白源，对动物有着极佳的诱食性、免疫性和促生长功效，对促进养殖动物健康发育具有重要意义。研究表明，饲料使用酵母水解物，可改善蛋白质原料的营养品质，缓解饲料蛋白质资源紧缺的矛盾，满足养殖动物对蛋白原料营养价值的需求。
动物肠道健康及其功能的完整性是目前提高集约化养殖效率的基础，研究发现，核苷酸作为细胞合成的必需物质，动物尤其是幼龄动物日粮中补充外源核苷酸能加速肠道细胞的分化、生长与修复，促进小肠成熟，对于维持、改善和修复胃肠道功能、缓解应激具有重要意义。
同时，动物为了达到最佳生产性能，必须需要一定数量的小肽。小肽具有生理调节作用，它可以通过诱导小肠中一些酶活性的提高，而使小肠消化功能发育提前，促进健康和提高其生产性能，促进营养物质的消化吸收，而且，小肽可以避免氨基酸间的吸收竞争，能直接参与组织蛋白质的合成。随着蛋白质和氨基酸营养研究的深入，人们已逐渐认识到小肽营养的重要性。
发明内容
目前，现有技术中饲用的酵母水解物中存在核苷酸和小肽含量低或需要外源添加的缺陷，不能满足动物对饲料高核苷酸和小肽营养的需求。
为此，本发明提供了一种饲用高蛋白核苷酸型酵母水解物，其在保证酵母水解物高蛋白原料的基础上，富含核苷酸和小肽，可以用作动物饲料添加剂，满足动物对饲料高核苷酸和小肽营养的需求，提高酵母水解物的经济价值。
具体来说，本发明提出了如下技术方案。
一种饲用高蛋白核苷酸型酵母水解物，以所述酵母水解物干物质的重量计，所述酵母水解物中核苷酸含量≥2.6％，蛋白质含量≥50％，小肽含量≥30％。
优选的是，上述酵母水解物中，所述核苷酸的含量为2.6-8.0％，优选为5.8-8.0％。
优选的是，上述酵母水解物中，所述蛋白质的含量为50-60％，所述小肽的含量为30-45％，优选的，所述蛋白质的含量为57-60％，所述小肽的含量为43-45％。
优选的是，上述酵母水解物中，以所述酵母水解物干物质的重量计，氨基酸态氮含量≥2.5％，核酸含量≥10％，优选的，所述氨基酸态氮含量为2.5-4％，所述核酸的含量为10-17％，更优选的，所述氨基酸态氮含量为3.4-4％，所述核酸的含量为12-17％。
优选的是，上述酵母水解物中，所述核苷酸包含胞苷酸、腺苷酸、鸟苷酸、尿苷酸和肌苷酸，所述胞苷酸的质量含量为0.4-1.25％，所述尿苷酸的质量含量为0.6-1.4％，所述鸟苷酸的质量含量为0.8-2.4％，所述肌苷酸的质量含量为0.01-0.1％，所述腺苷酸的质量含量为0.9-2.7％，优选的，所述胞苷酸的质量含量为0.99-1.25％，所述尿苷酸的质量含量为1.06-1.4％，所述鸟苷酸的质量含量为1.83-2.4％，所述肌苷酸的质量含量为0.02-0.1％，所述腺苷酸的质量含量为1.9-2.7％。
优选的是，上述酵母水解物中，所述酵母水解物采用酿酒酵母属菌株d8.8(Saccharomyces cerevisiaed8.8)制备得到，所述酿酒酵母属菌株d8.8(Saccharomycescerevisiaed8.8)保藏编号为CCTCC NO：M 2017148。
上述酵母水解物的制备方法，其包括以下步骤：
(1)发酵：将酿酒酵母菌株发酵培养，制得酵母乳；
(2)自溶：将酵母乳进行热击处理；
(3)酶解：采用复合酶制剂和核酸酶进行酶解，得到饲用酵母水解物，所述复合酶制剂包含木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和酸性蛋白酶。
优选的是，上述制备方法中，步骤(1)中，所述发酵培养的温度为30-35℃，优选发酵过程中发酵液的pH值为4.3-6.0，发酵时间为8-16h。
优选的是，上述制备方法中，步骤(1)中，所述发酵培养过程中以补料流加的方式流加碳源、氮源和磷源，
所述碳源优选为糖蜜，更优选为总糖含量为28.5-31.5％的糖蜜；
所述氮源优选为氨水、碳酸氢铵、硫酸铵或尿素中的一种，进一步优选为氨水；
所述磷源优选为磷酸、磷酸二氢钾或磷酸二氢铵中的一种，进一步优选为磷酸。
优选的是，上述制备方法中，步骤(2)中，所述热击处理的温度为80-95℃，热击时间为45-135s。
优选的是，上述制备方法中，步骤(2)中，在热击处理前加入酸，所述酸优选为柠檬酸、硫酸、磷酸、苹果酸或乳酸中的一种或两种以上，更优选以酵母乳干物质的质量计，向酵母乳中添加1‰-5‰的柠檬酸。
优选的是，上述制备方法中，步骤(2)中，在热击处理后进行保温处理，所述保温温度为53-63℃，保温时间为2-10h。
优选的是，上述制备方法中，步骤(3)中，采用复合酶制剂和核酸酶逐一进行酶解。
优选的是，上述制备方法中，步骤(3)中，以酵母乳干物质的质量计，所述复合酶制剂中木瓜蛋白酶的添加量为1-6‰，碱性蛋白酶的添加量为0.5-2‰，中性蛋白酶的添加量为0.5-2‰，酸性蛋白酶的添加量为0.5-2‰，优选的，所述复合酶制剂中木瓜蛋白酶的添加量为5-6‰，碱性蛋白酶的添加量为1-2‰，中性蛋白酶的添加量为1-2‰，酸性蛋白酶的添加量为1-2‰。
优选的是，上述制备方法中，步骤(3)中，所述复合酶制剂的酶解温度为57-63℃，优选的，所述酶解pH值为5.5-6.5，酶解时间为5-10h，更优选的，所述酶解pH值为5.6-6.3，酶解时间为7-10h。
优选的是，上述制备方法中，步骤(3)中，以酵母乳干物质的质量计，所述核酸酶的添加量为1.5-8.0‰，酶解温度为63-71℃，酶解pH值为4.5-5.5，酶解时间为12-25h，优选的，所述核酸酶的添加量为6.5-8.0‰，酶解温度为65-70℃，酶解pH值为4.7-5.1，酶解时间为20-25h。
优选的是，上述制备方法中，步骤(3)后，还包括下述步骤：
将步骤(3)酶解后的酵母水解物依次进行蒸发浓缩和喷雾干燥处理，得到饲用酵母水解物。
优选的是，上述制备方法中，在酶解过程和蒸发浓缩过程之间还包括下述步骤：对步骤(3)酶解后的酵母水解物分离处理得到酵母水解物提取液，所述酵母水解物提取液用于下一步的蒸发浓缩过程，优选分离处理包括离心和超滤分离。
上述酵母水解或上述制备方法制备得到的酵母水解物在饲料添加领域中的应用，优选在猪饲料添加领域中的应用。
本发明还提供一种饲料，其含有上述酵母水解物或上述制备方法制备得到的酵母水解物和基础日粮，所述酵母水解物的添加量为2-10％，优选为3-6％。
本发明所取得的有益效果：
本发明的高蛋白核苷酸型酵母水解物，富含蛋白质、核苷酸和小肽，在营养成分蛋白质保持较高水平情况下获得了相对较高的核苷酸和小肽含量，高蛋白核苷酸型酵母水解物可以提高酵母水解物的营养价值，在饲料中使用可改善蛋白质原料的营养品质，缓解饲料蛋白质资源紧缺的矛盾，同时能够满足养殖动物对核苷酸和小肽营养价值的需求，对于动物的现代科学化养殖生产具有重要意义。
菌株保藏信息
本发明所用的菌种酿酒酵母d8.8(Saccharomyces cerevisiae d8.8)于2017年3月29日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M2017148，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，邮政编码：430072；电话：(027)-68754052。
该菌株的来源及制备方法记载在专利申请号为201710519421.9，公开号为CN109207386A的中国专利申请中。该菌株从老面团(老面团是发面用的面种子，即发面蒸馒头时剩下的一小面团，由于里面含有酵母菌，可以在下次发面时发面用)中得到，而且通过光学显微镜观察，该酿酒酵母菌株，呈现椭球形，以出芽方式无性繁殖；在固体培养基平板上28℃培养24h后，为乳白色，不透明，圆形菌落。通过常规形态观察、生理生化试验，然后借助PCR技术通过鉴定26S rDNA D1/D2区基因序列，确定本发明菌株为酿酒酵母属菌株。
具体实施方式
如上所述，针对现有技术中饲用的酵母水解物中核苷酸和小肽含量低的缺陷，本发明提供了一种饲用高蛋白核苷酸型酵母水解物，以所述酵母水解物干物质的重量计，所述酵母水解物中核苷酸含量≥2.6％，蛋白质含量≥50％，小肽含量≥30％。
在一种优选的实施方式中，所述核苷酸的含量为2.6-8.0％，优选为5.8-8.0％。
在一种优选的实施方式中，所述蛋白质的含量为50-60％，所述小肽的含量为30-45％，优选的，所述蛋白质的含量为57-60％，所述小肽的含量为43-45％。
在一种优选的实施方式中，以所述酵母水解物干物质的重量计，所述酵母水解物中氨基酸态氮含量≥2.5％，核酸含量≥10％，优选的，所述氨基酸态氮含量为2.5-4％，所述核酸的含量为10-17％，更优选的，所述氨基酸态氮含量为3.4-4％，所述核酸的含量为12-17％。
在一种优选的实施方式中，所述核苷酸包含胞苷酸、腺苷酸、鸟苷酸、尿苷酸和肌苷酸，所述胞苷酸的质量含量为0.4-1.25％，所述尿苷酸的质量含量为0.6-1.4％，所述鸟苷酸的质量含量为0.8-2.4％，所述肌苷酸的质量含量为0.01-0.1％，所述腺苷酸的质量含量为0.9-2.7％，优选的，所述胞苷酸的质量含量为0.99-1.25％，所述尿苷酸的质量含量为1.06-1.4％，所述鸟苷酸的质量含量为1.83-2.4％，所述肌苷酸的质量含量为0.02-0.1％，所述腺苷酸的质量含量为1.9-2.7％。
在一种优选的实施方式中，所述酵母水解物采用酿酒酵母属菌株d8.8(Saccharomyces cerevisiaed8.8)制备得到，所述酿酒酵母属菌株d8.8(Saccharomycescerevisiaed8.8)保藏编号为CCTCC NO：M 2017148。
本发明还提供了一种饲用高蛋白核苷酸型酵母水解物的制备方法，其包括以下步骤：
(1)发酵：将酿酒酵母菌株发酵培养，制得酵母乳；
(2)自溶：将酵母乳进行热击处理；
(3)酶解：采用复合酶制剂和核酸酶进行酶解，得到饲用酵母水解物，所述复合酶制剂包含木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和酸性蛋白酶；
在一种优选的实施方式中，步骤(1)中，所述发酵培养过程中以补料流加的方式流加碳源、氮源和磷源，所述碳源优选为糖蜜，更优选为总糖含量为28.5-31.5％的糖蜜；所述氮源优选为氨水、碳酸氢铵、硫酸铵或尿素中的一种，进一步优选为氨水；所述磷源优选为磷酸、磷酸二氢钾或磷酸二氢铵中的一种，进一步优选为磷酸；所述发酵培养的温度为30-35℃，优选发酵过程中发酵液的pH值为4.3-6.0，发酵时间为8-16h。
需要说明的是，磷酸二氢铵中含磷27.0％，含氮12.2％，其既含有磷源，又含有氮源，因此当磷源优选为磷酸二氢铵，计算氮源时也要将磷酸二氢铵中的氮源考虑在内。
在一种优选的实施方式中，步骤(2)中，在热击处理前加入酸，所述酸优选为柠檬酸、硫酸、磷酸、苹果酸或乳酸等中的一种或两种以上，更优选以酵母乳干物质的质量计，向酵母乳中添加1‰-5‰的柠檬酸；所述热击处理的温度为80-95℃，热击时间为45-135s；在热击处理后进行保温处理，通过加水调节酵母乳干物质控制范围以酵母折干计10-18％，保温温度为53-63℃，保温时间为2-10h。所述热击处理的目的是促使酵母细胞发生裂解，使酵母细胞内的蛋白酶对酵母细胞发挥作用，促进酵母细胞自溶。
在一种优选的实施方式中，步骤(3)中，采用复合酶制剂和核酸酶逐一进行酶解；以酵母乳干物质的质量计，所述复合酶制剂中木瓜蛋白酶的添加量为1-6‰，碱性蛋白酶的添加量为0.5-2‰，中性蛋白酶的添加量为0.5-2‰，酸性蛋白酶的添加量为0.5-2‰，优选的，所述复合酶制剂中木瓜蛋白酶的添加量为5-6‰，碱性蛋白酶的添加量为1-2‰，中性蛋白酶的添加量为1-2‰，酸性蛋白酶的添加量为1-2‰；所述复合酶制剂的酶解温度为57-63℃，优选的，所述酶解pH值为5.5-6.5，酶解时间为5-10h，更优选的，所述酶解pH值为5.6-6.3，酶解时间为7-10h；以酵母乳干物质的质量计，所述核酸酶的添加量为1.5-8.0‰，酶解温度为63-71℃，酶解pH值为4.5-5.5，酶解时间为12-25h，优选的，所述核酸酶的添加量为6.5-8.0‰，酶解温度为65-70℃，酶解pH值为4.7-5.1，酶解时间为20-25h。
在一种优选的实施方式中，步骤(3)后，还包括下述步骤：将步骤(3)酶解后的酵母水解物溶液升温80℃灭酶2h，进行蒸发浓缩得到浓缩品，优选浓缩品中的固形物含量在35-45％；将浓缩品进行喷雾干燥，获得酵母水解物产品。喷雾干燥的进风温度控制在155-175℃；出风温度控制在90-115℃；雾化压力控制在100-160bar；收料温度控制在25-45℃。
喷雾干燥的温度会直接影响产品水分及产品颜色，温度控制过低，产品颜色较浅水分含量高，难以控制产品卫生指标，温度高，产品颜色深水分少，难以控制产品质量。
下面通过具体的实施例对本发明进行说明。本领域技术人员应该理解，以下实施例是对本发明的具体说明，而不应该理解为是对本发明的限制。
其中，实施例中所用到的原料的厂家和型号如表1所示。
表1原料的厂家和型号
| 成分 | 型号或纯度 | 厂家 |
| 糖蜜 | 一级糖蜜 | 南宁糖业股份有限公司 |
| 氨水 | 液氨 | 河南东科化工 |
| 磷酸 | 99％分析纯 | 国药集团化学试剂有限公司 |
| 柠檬酸 | 99％食品级 | 潍坊英轩实业有限公司 |
| 木瓜蛋白酶 | 60万U/g | 安琪酵母股份有限公司 |
| 中性蛋白酶 | 20万U/g | 安琪酵母股份有限公司 |
| 碱性蛋白酶 | 30万U/g | 安琪酵母股份有限公司 |
| 酸性蛋白酶 | 20万U/g | 安琪酵母股份有限公司 |
| 核酸酶 | 10万U/g | 安琪酵母股份有限公司 |
实施例1饲用高蛋白核苷酸型酵母水解物的制备
(1)酵母发酵培养
酵母菌种是酿酒酵母属菌株d8.8(Saccharomyces cerevisiaed8.8)，保藏编号为CCTCC NO：M 2017148，培养液含有碳源、氮源、磷源，其中碳源为30％的甘蔗糖蜜15L，氮源为含氮量16％的氨水1.4L，磷源为磷酸130mL，接种酿酒酵母菌进行发酵培养，碳源、氮源、磷源均采用流加方式添加，发酵温度30℃，发酵时间16小时，发酵pH控制在4.3，获得纯培养液体发酵酵母乳。
(2)酵母自溶过程
以酵母乳干物质的质量计，向酵母乳中添加5％的柠檬酸，然后加热至80℃，热击135s，调节酵母乳干物质控制范围以酵母折干计18％，调节温度为63℃，保温6h。
(3)酵母酶解过程
将自溶后的酵母乳升温至59℃，调节pH为6.0，以酵母乳干物质的质量计，加入含1‰木瓜蛋白酶、0.5‰碱性蛋白酶、0.5‰中性蛋白酶、0.5‰酸性蛋白酶的复合酶制剂，酶解反应9小时；再升温至71℃，调节pH为5.5，以酵母乳干物质计，加入4‰的核酸酶，酶解反应20小时。
(4)蒸发浓缩
酶解反应结束后，升温80℃灭酶2h，进行蒸发浓缩得到浓缩品，浓缩品中的固形物含量在30％。
(5)喷雾干燥
将浓缩品进行喷雾干燥，获得酵母水解物产品。喷雾干燥的进风温度控制在155-175℃；出风温度控制在90-115℃；雾化压力控制在100-160bar；收料温度控制在25-45℃。
实施例2饲用高蛋白核苷酸型酵母水解物的制备
(1)酵母发酵培养
酵母菌种是酿酒酵母属菌株d8.8(Saccharomyces cerevisiaed8.8)，保藏编号为CCTCC NO：M 2017148，培养液含有碳源、氮源、磷源，其中碳源为30％的甘蔗糖蜜10L，氮源为含氮量16％的氨水1.7L，磷源为磷酸150mL，接种酿酒酵母菌进行发酵培养，碳源、氮源、磷源均采用流加方式添加，发酵温度35℃，发酵时间12小时，发酵pH控制在6.0，获得纯培养液体发酵酵母乳。
(2)酵母自溶过程
以酵母乳干物质的质量计，向酵母乳中添加3％的柠檬酸，然后加热至90℃，热击60s，调节酵母乳干物质控制范围以酵母折干计16％，调节温度为57℃，保温4h。
(3)酵母酶解过程
将自溶后的酵母乳升温至63℃，调节pH为6.5，以酵母乳干物质的质量计，加入含6‰木瓜蛋白酶、0.5‰碱性蛋白酶、0.5‰中性蛋白酶、0.5‰酸性蛋白酶的复合酶制剂，酶解反应10小时；再升温至68℃，调节pH为5.1，以酵母乳干物质计，加入6.5‰的核酸酶，酶解反应25小时。
(4)蒸发浓缩
酶解反应结束后，升温80℃灭酶2h，进行蒸发浓缩得到浓缩品，浓缩品中的固形物含量在32％。
(5)喷雾干燥
将浓缩品进行喷雾干燥，获得酵母水解物产品。喷雾干燥的进风温度控制在155-175℃；出风温度控制在90-115℃；雾化压力控制在100-160bar；收料温度控制在25-45℃。
实施例3饲用高蛋白核苷酸型酵母水解物的制备
(1)酵母发酵培养
酵母菌种是酿酒酵母属菌株d8.8(Saccharomyces cerevisiaed8.8)，保藏编号为CCTCC NO：M 2017148，培养液含有碳源、氮源、磷源，其中碳源为30％的甘蔗糖蜜11L，氮源为含氮量16％的氨水1.1L，磷源为磷酸120mL，接种酿酒酵母菌进行发酵培养，碳源、氮源、磷源均采用流加方式添加，发酵温度31℃，发酵时间13小时，发酵pH控制在4.8，获得纯培养液体发酵酵母乳。
(2)酵母自溶过程
以酵母乳干物质的质量计，向酵母乳中添加2％的柠檬酸，然后加热至95℃，热击45s，调节酵母乳干物质控制范围以酵母折干计10％，调节温度为53℃，保温2h。
(3)酵母酶解过程
将自溶后的酵母乳升温至57℃，调节pH为5.5，以酵母乳干物质的质量计，加入含4‰木瓜蛋白酶、1‰碱性蛋白酶、1‰中性蛋白酶、1‰酸性蛋白酶的复合酶制剂，酶解反应5小时；再升温至63℃，调节pH为4.5，以酵母乳干物质计，加入1.5‰的核酸酶，酶解反应12小时。
(4)蒸发浓缩
酶解反应结束后，升温80℃灭酶2h，进行蒸发浓缩得到浓缩品，浓缩品中的固形物含量在34％。
(5)喷雾干燥
将浓缩品进行喷雾干燥，获得酵母水解物产品。喷雾干燥的进风温度控制在155-175℃；出风温度控制在90-115℃；雾化压力控制在100-160bar；收料温度控制在25-45℃。
实施例4饲用高蛋白核苷酸型酵母水解物的制备
(1)酵母发酵培养
酵母菌种是酿酒酵母属菌株d8.8(Saccharomyces cerevisiaed8.8)，保藏编号为CCTCC NO：M 2017148，培养液含有碳源、氮源、磷源，其中碳源为30％的甘蔗糖蜜12L，氮源为含氮量16％的氨水1.3L，磷源为磷酸170mL，接种酿酒酵母菌进行发酵培养，碳源、氮源、磷源均采用流加方式添加，发酵温度33℃，发酵时间14小时，发酵pH控制在5.5，获得纯培养液体发酵酵母乳。
(2)酵母自溶过程
以酵母乳干物质的质量计，向酵母乳中添加1％的柠檬酸，然后加热至85℃，热击60s，调节酵母乳干物质控制范围以酵母折干计15％，调节温度为58℃，保温10h。
(3)酵母酶解过程
将自溶后的酵母乳升温至60℃，调节pH为5.7，以酵母乳干物质的质量计，加入含3‰木瓜蛋白酶、1.5‰碱性蛋白酶、1.5‰中性蛋白酶、1.5‰酸性蛋白酶的复合酶制剂，酶解反应8小时；再升温至68℃，调节pH为5.1，以酵母乳干物质计，加入4‰的核酸酶，酶解反应18小时。
(4)蒸发浓缩
酶解反应结束后，升温80℃灭酶2h，进行蒸发浓缩得到浓缩品，浓缩品中的固形物含量在36％。
(5)喷雾干燥
将浓缩品进行喷雾干燥，获得酵母水解物产品。喷雾干燥的进风温度控制在155-175℃；出风温度控制在90-115℃；雾化压力控制在100-160bar；收料温度控制在25-45℃。
实施例5饲用高蛋白核苷酸型酵母水解物的制备
(1)酵母发酵培养
酵母菌种是酿酒酵母属菌株d8.8(Saccharomyces cerevisiaed8.8)，保藏编号为CCTCC NO：M 2017148，培养液含有碳源、氮源、磷源，其中碳源为30％的甘蔗糖蜜13L，氮源为含氮量16％的氨水2L，磷源为磷酸160mL，接种酿酒酵母菌进行发酵培养，碳源、氮源、磷源均采用流加方式添加，发酵温度34℃，发酵时间15小时，发酵pH控制在5.0，获得纯培养液体发酵酵母乳。
(2)酵母自溶过程
以酵母乳干物质的质量计，向酵母乳中添加4％的柠檬酸，然后加热至90℃，热击50s，调节酵母乳干物质控制范围以酵母折干计14％，调节温度为60℃，保温8h。
(3)酵母酶解过程
将自溶后的酵母乳升温至62℃，调节pH为6.2，以酵母乳干物质的质量计，加入含1‰木瓜蛋白酶、2‰碱性蛋白酶、2‰中性蛋白酶、2‰酸性蛋白酶的复合酶制剂，酶解反应6小时；再升温至65℃，调节pH为5.3，以酵母乳干物质计，加入3‰的核酸酶，酶解反应16小时。
(4)蒸发浓缩
酶解反应结束后，升温80℃灭酶2h，进行蒸发浓缩得到浓缩品，浓缩品中的固形物含量在38％。
(5)喷雾干燥
将浓缩品进行喷雾干燥，获得酵母水解物产品。喷雾干燥的进风温度控制在155-175℃；出风温度控制在90-115℃；雾化压力控制在100-160bar；收料温度控制在25-45℃。
实施例6饲用高蛋白核苷酸型酵母水解物的制备
(1)酵母发酵培养
酵母菌种是酿酒酵母属菌株d8.8(Saccharomyces cerevisiaed8.8)，保藏编号为CCTCC NO：M 2017148，培养液含有碳源、氮源、磷源，其中碳源为30％的甘蔗糖蜜8L，氮源为含氮量16％的氨水1.7L，磷源为磷酸170mL，接种酿酒酵母菌进行发酵培养，碳源、氮源、磷源均采用流加方式添加，发酵温度32℃，发酵时间9小时，发酵pH控制在5.5，获得纯培养液体发酵酵母乳。
(2)酵母自溶过程
以酵母乳干物质的质量计，向酵母乳中添加2％的柠檬酸，然后加热至95℃，热击45s，调节酵母乳干物质控制范围以酵母折干计13％，调节温度为63℃，保温7h。
(3)酵母酶解过程
将自溶后的酵母乳升温至58℃，调节pH为6.3，以酵母乳干物质的质量计，加入含5‰木瓜蛋白酶、2‰碱性蛋白酶、2‰中性蛋白酶、2‰酸性蛋白酶的复合酶制剂，酶解反应10小时；再升温至67℃，调节pH为4.7，以酵母乳干物质计，加入6.5‰的核酸酶，酶解反应20小时。
(4)蒸发浓缩
酶解反应结束后，升温80℃灭酶2h，进行蒸发浓缩得到浓缩品，浓缩品中的固形物含量在40％。
(5)喷雾干燥
将浓缩品进行喷雾干燥，获得酵母水解物产品。喷雾干燥的进风温度控制在155-175℃；出风温度控制在90-115℃；雾化压力控制在100-160bar；收料温度控制在25-45℃。
实施例7饲用高蛋白核苷酸型酵母水解物的制备
(1)酵母发酵培养
酵母菌种是酿酒酵母属菌株d8.8(Saccharomyces cerevisiaed8.8)，保藏编号为CCTCC NO：M 2017148，培养液含有碳源、氮源、磷源，其中碳源为30％的甘蔗糖蜜9L，氮源为含氮量16％的氨水1.7L，磷源为磷酸150mL，接种酿酒酵母菌进行发酵培养，碳源、氮源、磷源均采用流加方式添加，发酵温度33℃，发酵时间8小时，发酵pH控制在5.3，获得纯培养液体发酵酵母乳。
(2)酵母自溶过程
以酵母乳干物质的质量计，向酵母乳中添加4％的柠檬酸，然后加热至85℃，热击100s，调节酵母乳干物质控制范围以酵母折干计10％，调节温度为60℃，保温5h。
(3)酵母酶解过程
将自溶后的酵母乳升温至63℃，调节pH为5.6，以酵母乳干物质的质量计，加入含6‰木瓜蛋白酶、1‰碱性蛋白酶、1‰中性蛋白酶、1‰酸性蛋白酶的复合酶制剂，酶解反应7小时；再升温至70℃，调节pH为4.9，以酵母乳干物质计，加入8‰的核酸酶，酶解反应22小时。
(4)蒸发浓缩
酶解反应结束后，升温80℃灭酶2h，进行蒸发浓缩得到浓缩品，浓缩品中的固形物含量在40％。
(5)喷雾干燥
将浓缩品进行喷雾干燥，获得酵母水解物产品。喷雾干燥的进风温度控制在155-175℃；出风温度控制在90-115℃；雾化压力控制在100-160bar；收料温度控制在25-45℃。
实施例8饲用高蛋白核苷酸型酵母水解物的制备
(1)酵母发酵培养
酵母菌种是酿酒酵母属菌株d8.8(Saccharomyces cerevisiaed8.8)，保藏编号为CCTCC NO：M 2017148，培养液含有碳源、氮源、磷源，其中碳源为30％的甘蔗糖蜜7L，氮源为含氮量16％的氨水1.7L，磷源为磷酸180mL，接种酿酒酵母菌进行发酵培养，碳源、氮源、磷源均采用流加方式添加，发酵温度31℃，发酵时间10小时，发酵pH控制在5.0，获得纯培养液体发酵酵母乳。
(2)酵母自溶过程
以酵母乳干物质的质量计，向酵母乳中添加1％的柠檬酸，然后加热至90℃，热击60s，调节酵母乳干物质控制范围以酵母折干计12％，调节温度为58℃，保温3h。
(3)酵母酶解过程
将自溶后的酵母乳升温至60℃，调节pH为5.8，以酵母乳干物质的质量计，加入含5.5‰木瓜蛋白酶、1.5‰碱性蛋白酶、1.5‰中性蛋白酶、1.5‰酸性蛋白酶的复合酶制剂，酶解反应8小时；再升温至65℃，调节pH为5.1，以酵母乳干物质计，加入7‰的核酸酶，酶解反应25小时。
(4)蒸发浓缩
酶解反应结束后，升温80℃灭酶2h，进行蒸发浓缩得到浓缩品，浓缩品中的固形物含量在36％。
(5)喷雾干燥
将浓缩品进行喷雾干燥，获得酵母水解物产品。喷雾干燥的进风温度控制在155-175℃；出风温度控制在90-115℃；雾化压力控制在100-160bar；收料温度控制在25-45℃。
对比例1普通酵母水解物的制备
(1)酵母发酵培养
酵母菌种是酿酒酵母属菌株d8.8(Saccharomyces cerevisiaed8.8)，保藏编号为CCTCC NO：M 2017148，培养液含有碳源、氮源、磷源，其中碳源为30％的甘蔗糖蜜15L，氮源为含氮量16％的氨水1.4L，磷源为磷酸130mL，接种酿酒酵母菌进行发酵培养，碳源、氮源、磷源均采用流加方式添加，发酵温度30℃，发酵时间20小时，发酵pH控制在5.0，获得纯培养液体发酵酵母乳。
(2)酵母自溶过程
按照与实施例1相同的方法进行酵母自溶。
(3)酵母酶解过程
按照与实施例1相同的方法进行酵母酶解。
(4)蒸发浓缩
按照实施例1相同的方法进行蒸发浓缩。
(5)喷雾干燥
按照实施例1相同的方法进行喷雾干燥，获得酵母水解物产品。
对比例2普通酵母水解物的制备
(1)酵母发酵培养
按照与实施例1相同的方法进行酵母发酵培养。
(2)酵母自溶过程
按照与实施例1相同的方法进行酵母自溶。
(3)酵母酶解过程
将自溶后的酵母乳升温至59℃，调节pH为6.0，以酵母乳干物质的质量计，加入含0.5‰木瓜蛋白酶、0.5‰碱性蛋白酶、0.5‰中性蛋白酶、0.5‰酸性蛋白酶的复合酶制剂，酶解反应9小时；再升温至71℃，调节pH为5.5，以酵母乳干物质计，加入4.0‰的核酸酶，酶解反应20小时。
(4)蒸发浓缩
按照实施例1相同的方法进行蒸发浓缩。
(5)喷雾干燥
按照实施例1相同的方法进行喷雾干燥，获得酵母水解物产品。
对比例3普通酵母水解物的制备
(1)酵母发酵培养
按照与实施例1相同的方法进行酵母发酵培养。
(2)酵母自溶过程
按照与实施例1相同的方法进行酵母自溶。
(3)酵母酶解过程
将自溶后的酵母乳升温至59℃，调节pH为6.0，以酵母乳干物质的质量计，加入含7‰木瓜蛋白酶、3‰碱性蛋白酶、3‰中性蛋白酶、3‰酸性蛋白酶的复合酶制剂，酶解反应9小时；再升温至71℃，调节pH为5.5，以酵母乳干物质计，加入4.0‰的核酸酶，酶解反应20小时。
(4)蒸发浓缩
按照实施例1相同的方法进行蒸发浓缩。
(5)喷雾干燥
按照实施例1相同的方法进行喷雾干燥，获得酵母水解物产品。
对比例4普通酵母水解物的制备
(1)酵母发酵培养
按照与实施例1相同的方法进行酵母发酵培养。
(2)酵母自溶过程
按照与实施例1相同的方法进行酵母自溶。
(3)酵母酶解过程
将自溶后的酵母乳升温至59℃，调节pH为6.0，以酵母乳干物质的质量计，加入含1‰木瓜蛋白酶、0.5‰碱性蛋白酶、0.5‰中性蛋白酶的复合酶制剂，酶解反应9小时；再升温至71℃，调节pH为5.5，以酵母乳干物质计，加入4.0‰的核酸酶，酶解反应20小时。
(4)蒸发浓缩
按照实施例1相同的方法进行蒸发浓缩。
(5)喷雾干燥
按照实施例1相同的方法进行喷雾干燥，获得酵母水解物产品。
对比例5普通酵母水解物的制备
(1)酵母发酵培养
按照与实施例1相同的方法进行酵母发酵培养。
(2)酵母自溶过程
按照与实施例1相同的方法进行酵母自溶。
(3)酵母酶解过程
将自溶后的酵母乳升温至59℃，调节pH为6.0，以酵母乳干物质的质量计，加入含0.5‰碱性蛋白酶、0.5‰中性蛋白酶、0.5‰酸性蛋白酶的复合酶制剂，酶解反应9小时；再升温至71℃，调节pH为5.5，以酵母乳干物质计，加入4.0‰的核酸酶，酶解反应20小时。
(4)蒸发浓缩
按照实施例1相同的方法进行蒸发浓缩。
(5)喷雾干燥
按照实施例1相同的方法进行喷雾干燥，获得酵母水解物产品。
对比例6普通酵母水解物的制备
(1)酵母发酵培养
按照与实施例1相同的方法进行酵母发酵培养。
(2)酵母自溶过程
按照与实施例1相同的方法进行酵母自溶。
(3)酵母酶解过程
将自溶后的酵母乳升温至59℃，调节pH为6.0，以酵母乳干物质的质量计，加入含1‰木瓜蛋白酶、0.5‰中性蛋白酶、0.5‰酸性蛋白酶的复合酶制剂，酶解反应9小时；再升温至71℃，调节pH为5.5，以酵母乳干物质计，加入4.0‰的核酸酶，酶解反应20小时。
(4)蒸发浓缩
按照实施例1相同的方法进行蒸发浓缩。
(5)喷雾干燥
按照实施例1相同的方法进行喷雾干燥，获得酵母水解物产品。
对比例7普通酵母水解物的制备
(1)酵母发酵培养
按照与实施例1相同的方法进行酵母发酵培养。
(2)酵母自溶过程
按照与实施例1相同的方法进行酵母自溶。
(3)酵母酶解过程
将自溶后的酵母乳升温至59℃，调节pH为6.0，以酵母乳干物质的质量计，加入含1‰木瓜蛋白酶、0.5‰中性蛋白酶的复合酶制剂，酶解反应9小时；再升温至71℃，调节pH为5.5，以酵母乳干物质计，加入4.0‰的核酸酶，酶解反应20小时。
(4)蒸发浓缩
按照实施例1相同的方法进行蒸发浓缩。
(5)喷雾干燥
按照实施例1相同的方法进行喷雾干燥，获得酵母水解物产品。
对比例8普通酵母水解物的制备
(1)酵母发酵培养
按照与实施例1相同的方法进行酵母发酵培养。
(2)酵母自溶过程
按照与实施例1相同的方法进行酵母自溶。
(3)酵母酶解过程
将自溶后的酵母乳升温至59℃，调节pH为6.0，以酵母乳干物质的质量计，加入含1‰木瓜蛋白酶、0.5‰碱性蛋白酶的复合酶制剂，酶解反应9小时；再升温至71℃，调节pH为5.5，以酵母乳干物质计，加入4.0‰的核酸酶，酶解反应20小时。
(4)蒸发浓缩
按照实施例1相同的方法进行蒸发浓缩。
(5)喷雾干燥
按照实施例1相同的方法进行喷雾干燥，获得酵母水解物产品。
对比例9普通酵母水解物的制备
(1)酵母发酵培养
按照与实施例1相同的方法进行酵母发酵培养。
(2)酵母自溶过程
按照与实施例1相同的方法进行酵母自溶。
(3)酵母酶解过程
将自溶后的酵母乳升温至59℃，调节pH为6.0，以酵母乳干物质的质量计，加入1‰的木瓜蛋白酶，酶解反应9小时；再升温至71℃，调节pH为5.5，以酵母乳干物质计，加入4.0‰的核酸酶，酶解反应20小时。
(4)蒸发浓缩
按照实施例1相同的方法进行蒸发浓缩。
(5)喷雾干燥
按照实施例1相同的方法进行喷雾干燥，获得酵母水解物产品。
实施例和对比例应用效果
(一)成分分析
酵母水解物中五种核苷酸总和、蛋白质、小肽、核酸和氨基酸态氮的测定方法如下：
1.核苷酸测定参照GB/T23530-2009酵母抽提物中核苷酸的测定方法执行，其包含以下步骤：
1.1仪器、试剂
高效液相色谱仪(配有低压四元泵、紫外检测器和柱温箱系统)(Waters，E2695)。
色谱柱：C18柱(如：如intersil C18 250mm×4.6mm，也可采用其它等同性能的分析柱。)
过滤装置：1000mL真空抽滤器，0.2um或0.45um滤膜。
真空抽滤脱气装置。
容量瓶：100mL。
分析天平：感量0.1mg。
磷酸二氢铵溶液：0.02mmol/L，pH＝5.4。准确称取2.30g磷酸二氢铵，用高纯水溶解，加水至900mL，用0.1mol/L氢氧化钠调节pH为5.40±0.10，定容到1L。
5’-胞苷酸二钠(CMP)：分子式C9H12N3Na2O8P，纯度≥98％。Sigma货号:C1131
5'-尿苷酸二钠(UMP)：分子式C9H11N2Na2O9P，纯度≥98％。Sigma货号:U6375
5'-鸟苷酸二钠(GMP)：分子式为C10H12N5Na2O8P，纯度≥98％。Sigma货号:G8377
5'-肌苷酸二钠(IMP)：分子式为C10H11N4Na2O8P，纯度≥98％。Sigma货号:I4625
5'-腺苷酸二钠(AMP)：分子式为C10H12N5Na2O7P，纯度≥98％。Sigma货号:01930
核苷酸标准储备溶液：分别准确称取在(105±2)℃干燥4h的IMP、GMP、UMP、CMP、AMP各0.0500g，用高纯水溶解，定容到100mL，分别制成浓度为500ug/mL的标准储备溶液。
1.2分析步骤
(1)色谱条件
色谱柱：intersil C18 250mm×4.6mm；
流动相：0.02mol/L磷酸二氢铵溶液,pH＝5.40；
流速：1.0ml/min；
检测波长：254nm；
柱温箱温度：30℃
(2)样品制备
称取样品1g～2g(精确至0.0001g)，加水溶解，移入100mL容量瓶中并用水定容至刻度。根据样品中核苷酸的对溶液进行适当的稀释(稀释倍数为F，最后一次稀释使用流动相定容)。用0.45μm水相微孔膜过滤，滤液备用。
(3)标准溶液制备
表2：标准系列溶液的准备
| 序号 | 标准储备溶液的用量 | 定容体积(ml) | 每种核苷酸的浓度(μg/mL) |
| 1 | 吸取IMP、GMP、UMP、CMP、AMP各0mL | 50 | 0 |
| 2 | 吸取IMP、GMP、UMP、CMP、AMP各1mL | 50 | 10 |
| 3 | 吸取IMP、GMP、UMP、CMP、AMP各2mL | 50 | 20 |
| 4 | 吸取IMP、GMP、UMP、CMP、AMP各3mL | 50 | 30 |
| 5 | 吸取IMP、GMP、UMP、CMP、AMP各5mL | 50 | 50 |
| 6 | 吸取IMP、GMP、UMP、CMP、AMP各10mL | 50 | 100 |
标准系列溶液定容用溶液：流动相
(4)测定
将标准系列和样品溶液分别进样，进样量为20μL，根据标准品的保留时间定性样品中IMP、GMP、UMP、CMP、AMP的色谱峰。根据样品的峰面积，以外标法计算各组分的百分含量。
(5)结果计算
IMP/GMP/UMP/CMP/AMP含量计算：
其中：
X—样品中IMP/GMP/UMP/CMP/AMP的含量，％；
C—查标准曲线获得进样溶液中IMP/GMP/UMP/CMP/AMP的含量，μg/ml；
V—定容体积，ml；
F—稀释倍数；
M—称样质量，g；
X1—样品水分含量，％；
结果保留至小数点后两位。
比值计算说明：按照GB/T23530-2007标准，计算比值时IMP、GMP、CMP、UMP、AMP结果都需要折干；
精密度：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。
2.粗蛋白的测定参照GB/T6432-94饲料中粗蛋白的测定方法执行，其具体操作为：取1g试样，在混合催化剂(0.4g五水硫酸铜+6g硫酸钾)作用下，加入12ml浓硫酸进行消煮；再进行蒸馏，用硼酸吸收产物氨；再用0.1mol/l的盐酸滴定，读取数据，计算氮含量，蛋白质系数选用N(氮含量)×6.25，计算得到粗蛋白的含量。
3.小肽的测定参照国家标准GB/T 22492-2008大豆肽粉中多肽的测定方法执行，其包含如下：采用15％的三氯乙酸沉淀高分子蛋白质后过滤去滤液进行蛋白质含量测定即为酸溶蛋白含量，采用氨基酸自动分析仪以外标法测定试样测定液中的游离氨基酸的含量，所得的多肽即为酸溶蛋白与游离氨基酸的差值。
4.核酸测定参照GB/T6437-2002饲料中总磷的测定方法进行测定，其包含下述步骤：
4.1工作曲线的绘制
准确移取磷标准液0.0、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0ml于50ml的容量瓶中，各加钒钼酸铵显色剂10ml，用水稀释到刻度，摇匀，常温下放置10min以上，以0.0ml溶液为参比，用1cm比色皿，在400nm波长下用分光光度计(上海智城分析仪器制造有限公司，UV2000)测各溶液的吸光度。以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制工作曲线。
其中，所述磷标准液的配制：将磷酸二氢钾在105℃干燥1h，在干燥器中冷却后称取0.2195g溶解于水，定量转入1000ml容量瓶中，加硝酸3ml，用水稀释至刻度，摇匀，即为50μg/ml的磷标准液；
钒钼酸铵显色剂的制备：称取偏钒酸铵1.25g，加水200ml加热溶解，冷却后再加入250ml硝酸，另称取钼酸铵25g，加水400ml加热溶解，在冷却的条件下，将两种溶液混合，用水定容至1000ml，避光保存，若生产沉淀，则不能继续使用。
4.2试样的测定
准确移取试样分解液1.0ml于50ml容量瓶中，加入钒钼酸铵10ml，用水稀释至刻度，摇匀，常温下放置10min以上，用1cm比色皿在400nm波长下测定试样分解液的吸光度，在工作曲线上查得试样分解液的磷含量。
其中，试样分解液的制备方法为：称取试样1g于凯氏烧瓶中，加入硝酸30ml，小心加热煮沸至黄烟逸尽，稍冷，加入高氯酸10ml，继续加热至高氯酸冒白烟(不得蒸干)，溶液基本无色，冷却，加水30ml，加热煮沸，冷却后，用水转移入100ml容量瓶中并稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。
5.氨基酸态氮的检测方法参照GB/T 18186-2000，具体方法如下：
5.1测定方法
称取样品5g(精确至0.0002g)，加水溶解并定容至100mL。吸取样品溶液5.0mL于100mL烧杯中，加水55mL，用氢氧化钠标准滴定溶液(2.1)滴定至pH＝8.20，并保持1min不变，此结果为游离酸度，不予计量体积。慢慢加入甲醛溶液(2.2)10mL，放置1min后，用氢氧化钠标准滴定溶液(2.1)滴定至pH＝9.20，记录消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数。同时做空白试验，记录加入甲醛溶液后，空白试验所消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数。
5.2结果计算
氨基酸态氮的含量按下列公式计算，其数值以％表示：
式中：X——样品的氨基酸态氮的含量，％；c——氢氧化钠标准滴定溶液的浓度，mol/L；V2——加入甲醛溶液后，滴定样品消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，mL；V1——加入甲醛溶液后，空白试验时消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，mL；20——样品稀释倍数；0.014——与1.00mL氢氧化钠标准溶液[c(NaOH)＝1.000mol/L]相当的以克表示的氨基酸态氮的质量；m——样品的质量，单位为克或毫升(g或mL)；所得结果表示至1位小数。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值应不超过算数平均值的5％。
经检测，本实施例1-8、对比例1-9中制得的酵母水解产物成分如下表3、表4所示。
表3实施例酵母水解产物成分
表4对比例酵母水解产物成分
从表3和表4可以看出，采用本发明实施例1到实施例8的方法制备得到的饲用酵母水解物中蛋白质的含量大于50％，核苷酸含量大于2.6％，小肽的含量大于30％，酵母水解物中的蛋白质含量、核苷酸含量和小肽含量均较高，在饲料中使用可改善蛋白质原料的营养品质，同时能够满足养殖动物对核苷酸和小肽营养价值的需求。对比实施例1和对比例3，对比例3中复合酶制剂的4种蛋白酶添加量均大于实施例1，最终得到的饲用酵母水解物中蛋白质和核苷酸含量略高于本发明实施例1制备得到的酵母水解物，但其小肽含量只有24.31％，远低于实施例1的30.89％，不能很好的满足养殖动物对小肽营养价值的需求。
(二)动物实验验证
分别考察实施例、对比例所制得的酵母水解物和血浆蛋白粉对仔猪生长性能、血清生化指标的影响。选取21日龄左右体重尽量一致(6.10kg左右)、体况良好的断奶仔猪144头(来源于湖北远安隆盛猪厂)。按公母各半的原则分为18个处理组，即实施例1-8组、对比例1-9组和血浆组，每个处理组4个重复，每个重复1栏猪，每栏2头猪(一阉公一母)，试验日粮为宜昌智海饲料有限公司配制，具体配方见表5，实施例组和对比例组为试验日粮额外添加3％的酵母水解物，血浆组为试验日粮额外添加3％的血浆蛋白粉，试验为期14天。
表5试验日粮配方组成％
| 原料 | ％ |
| 玉米 | 53.81 |
| 豆粕43 | 15.12 |
| 乳清粉 | 6.00 |
| 发酵豆粕 | 5.00 |
| 秘鲁蒸汽鱼粉 | 4.00 |
| 血浆 | 3.00 |
| 葡萄糖 | 3.00 |
| 蔗糖 | 3.00 |
| 大豆油 | 3.05 |
| 无水磷酸氢钙 | 1.11 |
| 甲酸钙 | 0.87 |
| 赖氨酸盐酸 | 0.71 |
| 仔猪预混 | 0.50 |
| 盐 | 0.35 |
| 苏氨酸 | 0.26 |
| 蛋氨酸 | 0.16 |
| 色氨酸 | 0.05 |
| 总计 | 100.00 |
1.生长性能指标：
实施例组、对比例组和血浆组对仔猪平均日采食量ADFI和平均日增重ADG的影响见表6、表7。
其中，平均日采食量ADFI：记录每日每圈试验猪教槽料的供给量与剩余量的差值为每日实际采食量，取平均值即为平均日采食量ADFI。
平均日增重ADG：在试验期内增加的体重除以试期天数
表6仔猪平均日采食量
/>
由表6可知，实施例1-8组仔猪的平均日采食量ADFI均高于血浆组和对比例1-9组，试验结果表明，本发明的高蛋白核苷酸型酵母水解物的诱食作用优于血浆和普通酵母水解物。
表7仔猪平均日增重
/>
由表7可知，实施例1-8组仔猪的平均日增重ADG均高于血浆组和对比例1-9组，试验结果表明，本发明的高蛋白核苷酸型酵母水解物的促生长作用优于血浆和普通酵母水解物。
2.血清生化指标测定：
血清生化指标作为重要的生物指标之一，在动物体内起着维持机体正常生命活动的作用。它能客观反映动物机体的生理性或病理性变化、代谢和营养状况等。14天试验期后，喂养不同组别日粮得到的仔猪的血清蛋白和血清免疫球蛋白的检测结果见表8、表9。
其中，血清蛋白：血清蛋白具有维持血液正常胶体渗透压和PH、运输多种代谢物、调节被运输物质的生理作用和解除其毒性、免疫作用以及营养作用等多种功能，本发明中血清蛋白通过全自动血液分析仪贝克曼DXH血液分析仪检测。
血清免疫蛋白：IgG是体内最主要的抗体，具有抗病毒、中和病毒、抗菌及免疫调节的功能，本发明中免疫球蛋白通过赛默飞-免疫球蛋白elisa试剂盒检测。
表8血清蛋白指标
| 组别 | 总蛋白g/l | 白蛋白g/l | 球蛋白g/l |
| 实施例1 | 49.85±1.228 | 22.75±0.832 | 29.15±1.512 |
| 实施例2 | 50.41±1.319 | 22.31±0.691 | 28.56±1.373 |
| 实施例3 | 50.01±1.116 | 22.05±0.418 | 27.87±1.216 |
| 实施例4 | 49.99±1.289 | 22.32±0.807 | 29.01±1.357 |
| 实施例5 | 49.97±1.423 | 22.98±0.535 | 28.31±1.221 |
| 实施例6 | 50.56±1.327 | 23.03±0.688 | 29.21±1.356 |
| 实施例7 | 50.95±1.453 | 22.99±0.557 | 29.89±1.431 |
| 实施例8 | 51.28±1.268 | 23.35±0.428 | 30.29±1.374 |
| 对比例1 | 47.38±1.843 | 21.43±0.735 | 26.38±1.315 |
| 对比例2 | 48.35±1.717 | 21.67±0.851 | 27.33±1.274 |
| 对比例3 | 48.56±1.324 | 20.87±0.497 | 25.94±1.688 |
| 对比例4 | 49.19±1.528 | 20.75±0.628 | 26.72±1.735 |
| 对比例5 | 47.31±1.453 | 21.99±0.389 | 25.88±1.812 |
| 对比例6 | 46.21±1.572 | 22.03±0.542 | 26.07±1.906 |
| 对比例7 | 46.28±1.811 | 20.01±0.638 | 27.01±1.458 |
| 对比例8 | 47.66±1.628 | 21.48±0.756 | 26.45±1.466 |
| 对比例9 | 45.42±1.615 | 19.94±0.839 | 25.31±1.698 |
| 血浆组 | 49.82±1.542 | 22.24±0.820 | 27.57±1.380 |
通过表8可知，实施例1-8组仔猪的总蛋白、白蛋白、球蛋白含量略高于血浆组，但整体差异不大，实施例1-8组和血浆组的总蛋白、白蛋白、球蛋白含量均高于对比例1-9组，试验结果表明，本发明的高蛋白核苷酸型酵母水解物维持仔猪正常生命活动的作用优于血浆和普通酵母水解物。
表9血液免疫指标
| 组别 | 免疫球蛋白g/l | 组别 | 免疫球蛋白g/l |
| 实施例1 | 3.32±0.415 | 对比例2 | 2.97±0.371 |
| 实施例2 | 3.35±0.331 | 对比例3 | 3.11±0.429 |
| 实施例3 | 3.27±0.356 | 对比例4 | 3.09±0.464 |
| 实施例4 | 3.39±0.387 | 对比例5 | 3.07±0.298 |
| 实施例5 | 3.24±0.405 | 对比例6 | 2.99±0.515 |
| 实施例6 | 3.37±0.235 | 对比例7 | 3.05±0.423 |
| 实施例7 | 3.39±0.318 | 对比例8 | 3.01±0.392 |
| 实施例8 | 3.42±0.372 | 对比例9 | 2.81±0.315 |
| 对比例1 | 2.89±0.427 | 血浆组 | 3.13±0.339 |
通过表9可知，实施例1-8组仔猪的免疫球蛋白含量高于血浆组和对比例1-9组，试验结果表明，本发明的高蛋白核苷酸型酵母水解物维持仔猪免疫功能的作用优于血浆和普通酵母水解物。
目前仔猪养殖中存在的问题是，血浆在饲料生产中被暂时禁用，血浆中丰富的营养物质及免疫物质需要寻找合适的替代品。利用本发明饲用高蛋白核苷酸型酵母水解物与血浆进行动物对比试验发现，高蛋白核苷酸型酵母水解物能为仔猪提供蛋白质、核苷酸、小肽、氨基酸态氮和核酸等营养成分，在生长性能指标和血清生化指标上，本发明的饲用高蛋白核苷酸型酵母水解物可达到并优于血浆的效果。
以上所述，仅是本发明实施的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡在本发明的精神和原则之内所做的修改、等同替换和改进等，均需要包含在本发明的保护范围之内。
Claims (55)
1.一种饲用高蛋白核苷酸型酵母水解物，其特征在于，以所述酵母水解物干物质的重量计，所述酵母水解物中核苷酸含量为5.8-8.0%，蛋白质含量为57-60%，小肽含量为43-45%；
所述酵母水解物采用酿酒酵母属菌株d8.8（Saccharomyces cerevisiaed8.8）制备得到，所述酿酒酵母属菌株d8.8（Saccharomyces cerevisiaed8.8）保藏编号为CCTCC NO：M2017148；
所述的酵母水解物的制备方法，其包括以下步骤：
（1）发酵：将酿酒酵母菌株发酵培养，制得酵母乳；
（2）自溶：将酵母乳进行热击处理；
（3）酶解：采用复合酶制剂和核酸酶逐一进行酶解，得到饲用酵母水解物，所述复合酶制剂包含木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和酸性蛋白酶；
其中，步骤（3）中，以酵母乳干物质的质量计，所述复合酶制剂中木瓜蛋白酶的添加量为5-6‰，碱性蛋白酶的添加量为1-2‰，中性蛋白酶的添加量为1-2‰，酸性蛋白酶的添加量为1-2‰；复合酶制剂的酶解温度为57-63℃，酶解pH值为5.6-6.3，酶解时间为7-10h；
所述核酸酶的添加量为6.5-8.0‰；核酸酶酶解温度为65-70℃，酶解pH值为4.7-5.1，酶解时间为20-25 h。
2.根据权利要求1所述的酵母水解物，其中，以所述酵母水解物干物质的重量计，所述酵母水解物中氨基酸态氮含量≥2.5%，核酸含量≥10%。
3.根据权利要求2所述的酵母水解物，其中，以所述酵母水解物干物质的重量计，所述氨基酸态氮含量为2.5-4%，所述核酸的含量为10-17%。
4.根据权利要求2所述的酵母水解物，其中，以所述酵母水解物干物质的重量计，所述氨基酸态氮含量为3.4-4%，所述核酸的含量为12-17%。
5.根据权利要求1所述的酵母水解物，其中，所述核苷酸包含胞苷酸、腺苷酸、鸟苷酸、尿苷酸和肌苷酸，所述胞苷酸的质量含量为0.4-1.25%，所述尿苷酸的质量含量为0.6-1.4%，所述鸟苷酸的质量含量为0.8-2.4%，所述肌苷酸的质量含量为0.01-0.1%，所述腺苷酸的质量含量为0.9-2.7%。
6.根据权利要求2所述的酵母水解物，其中，所述核苷酸包含胞苷酸、腺苷酸、鸟苷酸、尿苷酸和肌苷酸，所述胞苷酸的质量含量为0.4-1.25%，所述尿苷酸的质量含量为0.6-1.4%，所述鸟苷酸的质量含量为0.8-2.4%，所述肌苷酸的质量含量为0.01-0.1%，所述腺苷酸的质量含量为0.9-2.7%。
7.根据权利要求3所述的酵母水解物，其中，所述核苷酸包含胞苷酸、腺苷酸、鸟苷酸、尿苷酸和肌苷酸，所述胞苷酸的质量含量为0.4-1.25%，所述尿苷酸的质量含量为0.6-1.4%，所述鸟苷酸的质量含量为0.8-2.4%，所述肌苷酸的质量含量为0.01-0.1%，所述腺苷酸的质量含量为0.9-2.7%。
8.根据权利要求4所述的酵母水解物，其中，所述核苷酸包含胞苷酸、腺苷酸、鸟苷酸、尿苷酸和肌苷酸，所述胞苷酸的质量含量为0.4-1.25%，所述尿苷酸的质量含量为0.6-1.4%，所述鸟苷酸的质量含量为0.8-2.4%，所述肌苷酸的质量含量为0.01-0.1%，所述腺苷酸的质量含量为0.9-2.7%。
9.根据权利要求1所述的酵母水解物，其中，所述核苷酸包含胞苷酸、腺苷酸、鸟苷酸、尿苷酸和肌苷酸，所述胞苷酸的质量含量为0.99-1.25%，所述尿苷酸的质量含量为1.06-1.4%，所述鸟苷酸的质量含量为1.83-2.4%，所述肌苷酸的质量含量为0.02-0.1%，所述腺苷酸的质量含量为1.9-2.7%。
10.根据权利要求2所述的酵母水解物，其中，所述核苷酸包含胞苷酸、腺苷酸、鸟苷酸、尿苷酸和肌苷酸，所述胞苷酸的质量含量为0.99-1.25%，所述尿苷酸的质量含量为1.06-1.4%，所述鸟苷酸的质量含量为1.83-2.4%，所述肌苷酸的质量含量为0.02-0.1%，所述腺苷酸的质量含量为1.9-2.7%。
11.根据权利要求3所述的酵母水解物，其中，所述核苷酸包含胞苷酸、腺苷酸、鸟苷酸、尿苷酸和肌苷酸，所述胞苷酸的质量含量为0.99-1.25%，所述尿苷酸的质量含量为1.06-1.4%，所述鸟苷酸的质量含量为1.83-2.4%，所述肌苷酸的质量含量为0.02-0.1%，所述腺苷酸的质量含量为1.9-2.7%。
12.根据权利要求4所述的酵母水解物，其中，所述核苷酸包含胞苷酸、腺苷酸、鸟苷酸、尿苷酸和肌苷酸，所述胞苷酸的质量含量为0.99-1.25%，所述尿苷酸的质量含量为1.06-1.4%，所述鸟苷酸的质量含量为1.83-2.4%，所述肌苷酸的质量含量为0.02-0.1%，所述腺苷酸的质量含量为1.9-2.7%。
13.权利要求1-12任一项所述的酵母水解物的制备方法，其包括以下步骤：
（1）发酵：将酿酒酵母菌株发酵培养，制得酵母乳；
（2）自溶：将酵母乳进行热击处理；
（3）酶解：采用复合酶制剂和核酸酶逐一进行酶解，得到饲用酵母水解物，所述复合酶制剂包含木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和酸性蛋白酶；
其中，步骤（3）中，以酵母乳干物质的质量计，所述复合酶制剂中木瓜蛋白酶的添加量为5-6‰，碱性蛋白酶的添加量为1-2‰，中性蛋白酶的添加量为1-2‰，酸性蛋白酶的添加量为1-2‰；复合酶制剂的酶解温度为57-63℃，酶解pH值为5.6-6.3，酶解时间为7-10h；
所述核酸酶的添加量为6.5-8.0‰；核酸酶酶解温度为65-70℃，酶解pH值为4.7-5.1，酶解时间为20-25 h。
14.根据权利要求13所述的制备方法，其中，步骤（1）中，所述发酵培养的温度为30-35℃，发酵过程中发酵液的pH值为4.3-6.0，发酵时间为8-16 h。
15.根据权利要求13所述的制备方法，其中，步骤（1）中，所述发酵培养过程中以补料流加的方式流加碳源、氮源和磷源。
16.根据权利要求14所述的制备方法，其中，步骤（1）中，所述发酵培养过程中以补料流加的方式流加碳源、氮源和磷源。
17.根据权利要求15所述的制备方法，其中，步骤（1）中，所述碳源为糖蜜，所述氮源为氨水、碳酸氢铵、硫酸铵或尿素中的一种；所述磷源为磷酸、磷酸二氢钾或磷酸二氢铵中的一种。
18.根据权利要求16所述的制备方法，其中，步骤（1）中，所述碳源为糖蜜，所述氮源为氨水、碳酸氢铵、硫酸铵或尿素中的一种；所述磷源为磷酸、磷酸二氢钾或磷酸二氢铵中的一种。
19.根据权利要求17所述的制备方法，其中，步骤（1）中，所述碳源为总糖含量为28.5-31.5%的糖蜜。
20.根据权利要求18所述的制备方法，其中，步骤（1）中，所述碳源为总糖含量为28.5-31.5%的糖蜜。
21.根据权利要求13-20任一项所述的制备方法，其中，步骤（2）中，所述热击处理的温度为80-95℃，热击时间为45-135s。
22.根据权利要求13-20任一项所述的制备方法，其中，步骤（2）中，在热击处理前加入酸。
23.根据权利要求21所述的制备方法，其中，步骤（2）中，在热击处理前加入酸。
24.根据权利要求22所述的制备方法，其中，所述酸为柠檬酸、硫酸、磷酸、苹果酸或乳酸中的一种或两种以上。
25.根据权利要求23所述的制备方法，其中，所述酸为柠檬酸、硫酸、磷酸、苹果酸或乳酸中的一种或两种以上。
26.根据权利要求24所述制备方法，其中，以酵母乳干物质的质量计，向酵母乳中添加1‰-5‰的柠檬酸。
27.根据权利要求25所述制备方法，其中，以酵母乳干物质的质量计，向酵母乳中添加1‰-5‰的柠檬酸。
28.根据权利要求13-20任一项所述的制备方法，其中，步骤（2）中，在热击处理后进行保温处理，所述保温温度为53-63℃，保温时间为2-10 h。
29.根据权利要求21所述的制备方法，其中，步骤（2）中，在热击处理后进行保温处理，所述保温温度为53-63℃，保温时间为2-10 h。
30.根据权利要求22所述的制备方法，其中，步骤（2）中，在热击处理后进行保温处理，所述保温温度为53-63℃，保温时间为2-10 h。
31.根据权利要求24所述的制备方法，其中，步骤（2）中，在热击处理后进行保温处理，所述保温温度为53-63℃，保温时间为2-10 h。
32.根据权利要求26所述的制备方法，其中，步骤（2）中，在热击处理后进行保温处理，所述保温温度为53-63℃，保温时间为2-10 h。
33.根据权利要求13-20任一项所述的制备方法，其中，步骤（3）后，还包括下述步骤：
将步骤（3）酶解后的酵母水解物依次进行蒸发浓缩和喷雾干燥处理，得到饲用酵母水解物。
34.根据权利要求21所述的制备方法，其中，步骤（3）后，还包括下述步骤：
将步骤（3）酶解后的酵母水解物依次进行蒸发浓缩和喷雾干燥处理，得到饲用酵母水解物。
35.根据权利要求22所述的制备方法，其中，步骤（3）后，还包括下述步骤：
将步骤（3）酶解后的酵母水解物依次进行蒸发浓缩和喷雾干燥处理，得到饲用酵母水解物。
36.根据权利要求24所述的制备方法，其中，步骤（3）后，还包括下述步骤：
将步骤（3）酶解后的酵母水解物依次进行蒸发浓缩和喷雾干燥处理，得到饲用酵母水解物。
37.根据权利要求26所述的制备方法，其中，步骤（3）后，还包括下述步骤：
将步骤（3）酶解后的酵母水解物依次进行蒸发浓缩和喷雾干燥处理，得到饲用酵母水解物。
38.根据权利要求28所述的制备方法，其中，步骤（3）后，还包括下述步骤：
将步骤（3）酶解后的酵母水解物依次进行蒸发浓缩和喷雾干燥处理，得到饲用酵母水解物。
39.根据权利要求33所述的制备方法，其中，在酶解过程和蒸发浓缩过程之间还包括下述步骤：对步骤（3）酶解后的酵母水解物分离处理得到酵母水解物提取液，所述酵母水解物提取液用于下一步的蒸发浓缩过程。
40.根据权利要求34所述的制备方法，其中，在酶解过程和蒸发浓缩过程之间还包括下述步骤：对步骤（3）酶解后的酵母水解物分离处理得到酵母水解物提取液，所述酵母水解物提取液用于下一步的蒸发浓缩过程。
41.根据权利要求35所述的制备方法，其中，在酶解过程和蒸发浓缩过程之间还包括下述步骤：对步骤（3）酶解后的酵母水解物分离处理得到酵母水解物提取液，所述酵母水解物提取液用于下一步的蒸发浓缩过程。
42.根据权利要求36所述的制备方法，其中，在酶解过程和蒸发浓缩过程之间还包括下述步骤：对步骤（3）酶解后的酵母水解物分离处理得到酵母水解物提取液，所述酵母水解物提取液用于下一步的蒸发浓缩过程。
43.根据权利要求37所述的制备方法，其中，在酶解过程和蒸发浓缩过程之间还包括下述步骤：对步骤（3）酶解后的酵母水解物分离处理得到酵母水解物提取液，所述酵母水解物提取液用于下一步的蒸发浓缩过程。
44.根据权利要求38所述的制备方法，其中，在酶解过程和蒸发浓缩过程之间还包括下述步骤：对步骤（3）酶解后的酵母水解物分离处理得到酵母水解物提取液，所述酵母水解物提取液用于下一步的蒸发浓缩过程。
45.根据权利要求39所述的制备方法，其中，分离处理包括离心和超滤分离。
46.根据权利要求40所述的制备方法，其中，分离处理包括离心和超滤分离。
47.根据权利要求41所述的制备方法，其中，分离处理包括离心和超滤分离。
48.根据权利要求42所述的制备方法，其中，分离处理包括离心和超滤分离。
49.根据权利要求43所述的制备方法，其中，分离处理包括离心和超滤分离。
50.根据权利要求44所述的制备方法，其中，分离处理包括离心和超滤分离。
51.权利要求1-12任一项所述的酵母水解物或权利要求13-50任一项所述的制备方法制备得到的酵母水解物在饲料添加领域中的应用。
52.根据权利要求51所述的酵母水解物在饲料添加领域中的应用，其特征在于，包括在猪饲料添加领域中的应用。
53.一种饲料，其含有权利要求1-12任一项所述的酵母水解物或权利要求13-50任一项所述的制备方法制备得到的酵母水解物和基础日粮。
54.根据权利要求53所述的饲料，其特征在于，所述酵母水解物的添加量为2-10%。
55.根据权利要求53所述的饲料，其特征在于，所述酵母水解物的添加量为3-6%。
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