CN111505314A - 一种新型冠状病毒抗体的联合检测试剂盒及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种冠状病毒抗体的检测,具体涉及一种新型冠状病毒抗体的联合检测试剂盒及其应用。试剂盒,其包括有其包括有稀释液,新型冠状病毒IgM/IgG联合试纸条,新型冠状病毒IgM/IgG联合试纸条包括底板和设置在底板上的依次连接的样本垫、结合垫、反应膜、吸水垫;反应膜上设有第一检测区、第二检测区和质控区,结合垫上包被有带有显色标记重组SARS‑COV‑2抗原和带有显色标记的鼠IgG抗体,第一检测区包被有鼠抗人IgM单抗,第二检测区包被有鼠抗人IgG单抗,质控区包被有羊抗鼠IgG抗体。本发明可以在不需要特殊设备条件下得到联合测定IgM和IgG,具有较高的灵敏度,对早期感染和远期感染的检测意义重大。
Description
技术领域
本发明涉及一种冠状病毒抗体的检测,具体涉及一种新型冠状病毒抗体的联合检测试剂盒及其应用。
背景技术
SARS-COV-2是一种急性呼吸道传染性疾病,主要是由2019新型冠状病毒(2019-nCoV)感染引起。传播途径主要为直接传播、气溶胶传播和接触传播。新型冠状病毒肺炎是典型的急诊病症,临床需要尽快知道检测结果,以便于采取下一步防治措施。而现有的检测方法大多是基于传统荧光PCR的试剂,由于操作复杂、可能产生气溶胶造成大面积污染 (产生样本假阳)、且对实验室标准要求高、检测时间长等,导致目前核酸检测的开展仍非常有限。
发明内容
(一)要解决的技术问题
为了解决现有技术的上述问题,本发明提供一种可快速准确联合检测样本中新型冠状病毒IgG和IgM的检测试剂盒,提高检测效率,可同时诊断早期感染和远期感染。
相应的,本发明还提供上述检测试剂盒在联合检测全血、血清或血浆中新型冠状病毒IgM/IgG中的应用。
(二)技术方案
为了达到上述目的,本发明采用的主要技术方案包括:
一种新型冠状病毒抗体的联合检测试剂盒,其包括有稀释液、新型冠状病毒IgM/IgG联合试纸条,其中新型冠状病毒IgM/IgG联合试纸条包括底板和设置在底板上的依次连接的样本垫、结合垫、反应膜、吸水垫;反应膜上设有第一检测区、第二检测区和质控区,结合垫上包被有带有显色标记重组SARS-COV-2抗原和带有显色标记的鼠IgG抗体,第一检测区包被有鼠抗人IgM单抗,第二检测区包被有鼠抗人IgG单抗,质控区包被有羊抗鼠IgG抗体。
进一步的,其还包括塑料卡壳,试纸条设置于塑料卡壳内,并塑料卡壳在样本垫处设有加样孔,塑料卡壳在试纸条的检测区和质控区处设置为透明或设置有开口。
进一步的,其还包括加样装置,加样装置包括转动连接在吸水垫上方的支撑杆,支撑杆上还转动连接有加样管,加样管管口设有可开合的管盖。
进一步的,加样管设有容置稀释液的容腔,加样管上沿其纵向平行设有一根以上的推杆,推杆从加样管的外侧延伸至容腔的壁面上,并推杆可向容腔内往返活动,推杆在其延伸端设有凸起,容腔的壁面上设有与凸起相配合卡扣的凹槽。
进一步的,推杆处设有标志加样管管腔内容积的刻度。
进一步的,稀释液中主要由0.02-0.05M磷酸盐缓冲液、质量浓度分别为0.05-0.2%牛血清白蛋白和0.03%tween20调配而成。
进一步的,重组SARS-COV-2N蛋白抗原,利用基因工程技术构建质粒,可溶性表达。
进一步的,本发明提供上述任一项新型冠状病毒抗体的联合检测试剂盒在联合检测全血、血清或血浆中新型冠状病毒IgM和IgG中的应用。
进一步的,当样品液加入到结合垫后,再加入稀释液,静置观察质控区和检测区的显色反应。
(三)有益效果
本发明的有益效果是:
1.本发明通过胶体金标记的鼠IgG抗体和重组SARS-COV-2抗原可以实现快速联合检测新型冠状病毒IgG和IgM。本发明通过检测试剂盒,通过层析法分离显色复合物实现肉眼的快速判断,其操作简单、使用方便、可以在不需要特殊设备条件下1-15min得到联合测定IgM和IgG,具有较高的灵敏度和特异性等优点,可同时对早期感染和远期感染的检测意义重大,其可以起辅助诊断效果。
2.本发明的试剂盒可作为肺炎筛查指标,根据传统肺炎检测市场对新型冠状病毒进行预计。新型冠状病毒的传播具有较强的隐蔽性,即无症状携带者及一些感染者(携带者)在感染初期症状轻微,无法得到重视与有效隔离,依然存在感染他人的能力,这对防控工作提出了巨大挑战。本发明得到的新型冠状病毒检测试剂盒操作简单、使用方便快捷、不需要特殊设备、适用全年龄段人群,且成本较低,易被患者接受,非常适用于临床推广。
附图说明
图1为本发明实施例1的结构示意图;
图2为本发明实施例4中加样装置的结构示意图;
附图标记说明
1新型冠状病毒IgM/IgG联合试纸条;11底板;12样本垫;13结合垫;14反应膜;141第一检测区;142第二检测区;143质控区;15吸水垫;
2加样装置;21支撑杆;22加样管;221推杆;222凸起;223凹槽; 23管盖。
具体实施方式
为了更好的解释本发明,以便于理解,下面通过具体实施方式,对本发明作详细描述。
【实施方式一】
一种新型冠状病毒抗体的联合检测试剂盒,其包括有稀释液,新型冠状病毒IgM/IgG联合试纸条包括底板和设置在底板上的依次连接的样本垫、结合垫、反应膜、吸水垫;反应膜上设有第一检测区、第二检测区和质控区,结合垫上包被有带有显色标记重组SARS-COV-2抗原和带有显色标记的鼠IgG抗体,第一检测区包被有鼠抗人IgM单抗,第二检测区包被有鼠抗人IgG单抗,质控区包被有羊抗鼠IgG抗体。
使用时,在样本垫处滴入或沾上样品液后,静置5~10min,观察第一检测区、第二检测区和质控区的显色。
显色的情况可以为以下几种:
(1)质控区出现显色、第一检测区显色且第二显色区不显色,判定为样品中含有新型冠状病毒IgM,但不含有IgG;
(2)质控区出现显色、第一检测区不显色且第二显色区显色,判定为样品中含有新型冠状病毒IgG,但不含有IgM;
(3)质控区出现显色、第一检测区和第二显色区均显色,判定为样品中含有新型冠状病毒IgG和IgM;
(4)质控区出现显色、第一检测区和第二显色区均不显色,判定为样品中均不含有新型冠状病毒IgG和IgM;
(5)质控区不显色,则判定为测定结果无效,需要重新检测。
当样品中含有新型冠状病毒IgM,则可在第一检测区可固定的复合物为带有显色标记的重组SARS-COV-2抗原-新型冠状病毒IgM,因此在第一检测区可以显色。
当样品中含有新型冠状病毒IgG,则在第二检测区可固定的复合物为带有显色标记的重组SARS-COV-2抗原-新型冠状病毒IgG-鼠抗人IgG单抗在第二检测区可以显色。
当样品中不含有新型冠状病毒IgM或IgG,则在第一检测区或第二检测区无法结合相应的复合物,故不能显色。
上述的复合物均在结合垫处结合生成,并在反应膜层析的作用下向第一检测区和第二检测区移动。
而未参与结合生成复合物的带有显色标记的鼠IgG单抗会在质控区羊抗鼠IgG抗体结合而显色。
本实施方式检测试剂盒中,还包括塑料卡壳,试纸条设置于塑料卡壳内,并塑料卡壳在样本垫处设有加样孔,塑料卡壳在试纸条的检测区和质控区处设置为透明或设置有开口,以保护检测试纸条。
本实施方式中,为了实现定量快速的加入稀释液实现更快速的检测,检测试剂盒,其还包括加样装置,加样装置包括转动连接在吸水垫上方的支撑杆,支撑杆上还转动连接有加样管,加样管管口设有可开合的管盖。使用时,打开管盖,加样管中的液体就会流出到样本垫上参与反应,采用转动连接的目的是实现加样管的灵活活动,便于加样。
本实施方式中,为了使加样管根据不同的稀释程度精确的加样,加样管设有容置稀释液的容腔,加样管上沿其纵向平行设有一根以上的推杆,推杆从加样管的外侧延伸至容腔的壁面上,并推杆可向容腔内往返活动,推杆在其延伸的方向设有凸起,容腔的壁面上设有与凸起相配合卡扣的凹槽。当推动其中一根推杆,使推杆上的凸起与其匹配的凹槽卡扣后,推杆将加样管的上部分液体隔离在推杆上方,打开管盖后,推杆以下的液体加入到目标样本垫上,从而可以根据推杆以下液体的体积实现精确定量加样。进一步的,推杆处设有标志加样管管腔内容积的刻度。加样管可以与支撑杆可拆卸连接。加样管可以置换成新的加样管,并且加样管中可以装入血液样品,实现精确定量的加样,当检测试剂盒中所包被的带有显色标记重组SARS-COV-2抗原和带有显色标记的鼠IgG抗体,第一检测区包被的鼠抗人IgM单抗,第二检测区包被的鼠IgG抗体,质控区包被的羊抗鼠IgG抗体均为定量时,可以实现限定的定量测定。加样管可以但不限于设置为透明。加样管在未使用时,是可折叠起来的。
新型冠状病毒IgM/IgG检测试纸条检测的原理是:阳性样品中的新型冠状病毒IgM/IgG可特异性与结合垫上的带有显色(显色标记即胶体金) 标记的SARS-COV-2蛋白结合成标记的SARS-COV-2蛋白-鼠抗人 IgM/IgG单抗复合物,在毛细管的作用下移动到检测区与包被在检测区上的鼠抗人IgM/IgG形成标记的重组SARS-COV-2N蛋白-新型冠状病毒IgM/IgG-复合物进行显色;未结合的带有显色标记的鼠IgG单抗移动到质控区与羊抗鼠IgG单抗形成标记的鼠IgG-羊抗鼠IgG复合物进行显色;阴性样品由于不含有新型冠状病毒IgM/IgG,无法在检测区形成标记的重组SARS-COV-2N蛋白-新型冠状病毒IgM/IgG,故不能显色。
稀释液中主要由0.02-0.05M磷酸盐缓冲液、质量浓度分别为0.05-0.2%牛血清白蛋白和0.03%tween20调配而成。
进一步的,重组SARS-COV-2N蛋白抗原,利用基因工程技术构建质粒,可溶性表达。
进一步的,本发明提供上述任一项新型冠状病毒抗体的联合检测试剂盒在联合检测全血、血清或血浆中新型冠状病毒IgM/IgG中的应用。
进一步的,当样品液加入样本垫后,再加入稀释液,静置观察质控区和检测区的显色反应。
【实施方式二】
本实施方式在于将实施方式一中的检测试剂盒在检测全血、血清或血浆中新型冠状病毒IgG和IgM中的应用。
进一步的,在样品置于样本垫上后,再加入稀释液,静置观察质控区和第一检测区和第二检测区的显色反应。
具体实施例:
实施例1
如图1所示,新型冠状病毒抗体的联合检测试剂盒,其包括试纸条1,试纸条包括底板和设置在底板上的依次连接的样本垫12、结合垫13、反应膜14、吸水垫15;反应膜14上设有第一检测区141、第二检测区142 和质控区143,结合垫13上包被有带有显色标记重组SARS-COV-2抗原和带有显色标记的的鼠IgG抗体,第一检测区141包被有鼠抗人IgM单抗,第二检测区142包被有鼠抗人IgG单抗,质控区143包被有羊抗鼠 IgG抗体。
重组SARS-COV-2N蛋白抗原,利用基因工程技术构建质粒,含 his-tag标签,可溶性表达。
羊抗鼠IgG也是自产抗体,鼠IgG单抗为外购单抗。
使用本检测试剂盒时,
配置稀释液:
将浓度为0.02-0.05M磷酸盐缓冲液、质量浓度分别为0.05-0.2%牛血清白蛋白和0.03%tween20调配而成稀释液。
取待测10ul待测(全血、血清、血浆),加入到加样孔上后,取样本稀释液100ul加入到加样孔上;静置反应15分钟,观测结果;当检测区和质控区143均出现显色时,判定为样品为阳性。当只有质控区143 出现显色时,判定为样品为阴性。当质控区143未出现显色反应时,判定为测定结果无效,需要重新检测。阳性表示患者被新型冠状病毒感染,阴性表示没有被感染,无效要求重新测定。
实施例2
其它同实施例1,不同点在于:
如图1所示,检测试剂盒上还包括塑料卡壳,试纸条设置于塑料卡壳内,并塑料卡壳在样本垫处设有加样孔,塑料卡壳在试纸条的检测区和质控区143处设置为透明或设置有开口。
配置稀释液:
将浓度为0.05M磷酸盐缓冲液、质量浓度分别为0.2%牛血清白蛋白和0.03%tween20调配而成稀释液。
取样本稀释液95ul加入到加样孔上,静置反应15min。
实施例3
其它同实施例1,不同点在于,配置稀释液:
将浓度为0.03M磷酸盐缓冲液、质量浓度分别为0.1%牛血清白蛋白和0.03%tween20调配而成稀释液。
取样本稀释液80ul加入到加样孔上,静置反应10min。
实施例4
其它同实施例1,不同点在于,如图2所示,其还设有加样装置2,加样装置2包括转动连接在吸水垫15上方的支撑杆21,支撑杆21上还转动连接有加样管22,加样管22管口设有可开合的管盖23。加样管22 设有容置稀释液的容腔,加样管22上沿其纵向平行设有7根的推杆221,推杆221从加样管22的外侧延伸至容腔的壁面上,并推杆221可向容腔内往返活动,推杆221在其延伸端设有凸起222,容腔的壁面上设有与凸起222相配合卡扣的凹槽223。推杆221的外侧设有标志加样管22管腔内容积的刻度。加样管22与支撑杆21可拆卸连接。使用时,加样管中的稀释液就会流到结合垫上参与反应,采用转动连接的目的是实现加样管的灵活活动,便于加样。
采用本发明实施例1-4的方法诊断试剂盒测定新型冠状病毒抗体,样本无需预处理,缩短检测窗口期,有利于无症状患者的筛查。
实验数据:
将本发明实施例1的检测试剂盒检测了100例2019年10月之前的临床随机样本,结果IgM/IgG全部为阴性;检测了30例临床确诊患者的样本,结果IgM阳性17例,IgG阳性24例,IgM阳性或IgG阳性或IgM/IgG 同阳性28例,特异性为93.3%。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (8)
1.一种新型冠状病毒抗体的联合检测试剂盒,其特征在于,其包括有稀释液,新型冠状病毒IgM/IgG联合试纸条,
所述新型冠状病毒IgM/IgG联合试纸条包括底板和设置在底板上的依次连接的样本垫、结合垫、反应膜、吸水垫;所述反应膜上设有第一检测区、第二检测区和质控区,所述结合垫上包被有带有显色标记重组SARS-COV-2抗原和带有显色标记的鼠IgG抗体,第一检测区包被有鼠抗人IgM单抗,第二检测区包被有鼠抗人IgG单抗,质控区包被有羊抗鼠IgG抗体。
2.如权利要求1所述的新型冠状病毒抗体的联合检测试剂盒,其特征在于,其还包括塑料卡壳,所述试纸条设置于塑料卡壳内,并塑料卡壳在样本垫处设有加样孔,塑料卡壳在试纸条的检测区和质控区处设置为透明或设置有开口。
3.如权利要求2所述的新型冠状病毒抗体的联合检测试剂盒,其特征在于,其还包括加样装置,所述加样装置包括转动连接在吸水垫上方的支撑杆,所述支撑杆上还转动连接有加样管,所述加样管管口设有可开合的管盖。
4.如权利要求3所述的新型冠状病毒抗体的联合检测试剂盒,其特征在于:所述加样管设有容置稀释液的容腔,所述加样管上沿其纵向平行设有一根以上的推杆,所述推杆从加样管的外侧延伸至容腔的壁面上,并推杆可向容腔内往返活动,所述推杆在其延伸端设有凸起,所述容腔的壁面上设有与所述凸起相配合卡扣的凹槽。
5.如权利要求3所述的新型冠状病毒抗体的联合检测试剂盒,其特征在于:所述推杆处设有标志加样管管腔内容积的刻度。
6.如权利要求1所述新型冠状病毒抗体的联合检测试剂盒,其特征在于,所述的稀释液中主要由0.02-0.05M磷酸盐缓冲液、质量浓度分别为0.05-0.2%牛血清白蛋白和0.03%tween20调配而成。
7.如权利要求1-6任一项所述的新型冠状病毒抗体的联合检测试剂盒在联合检测全血、血清或血浆中新型冠状病毒IgM/IgG中的应用。
8.如权利要求7所述的新型冠状病毒抗体的联合检测试剂盒在联合检测全血、血清或血浆中新型冠状病毒IgM/IgG中的应用,其特征在于,当样品液加入到结合垫后,再加入稀释液,静置观察质控区和检测区的显色反应。
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