CN111494603B - 一种抗菌肽纳米软膏及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗菌肽纳米软膏及其制备方法和用途,所述软膏主要成分为抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠;由抗菌肽外接于磷脂聚合物纳米颗粒后与硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠混合而成。本发明中将磷脂聚合物纳米颗粒连接抗菌肽后,可保留抗菌肽的一部分抗菌活性,抑制和杀灭一些革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。本发明中的软膏可用于金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌感染引起的皮肤性疾病,且纳米载药乳膏生物相溶性及稳定性较好,局部用药后滞留时间长,对药物释放具有缓释及控释作用,为研究新型抗菌药物提供了新的研究领域,并对提高人类和畜产品安全性具有重要理论和实践意义。
Description
技术领域
本发明涉及药膏研究技术领域,尤其涉及一种抗菌肽纳米软膏及其制备方法和用途。
背景技术
长期不合理使用抗生素,导致细菌产生耐药性,抗生素残留等不良结果,严重危害人类键康和畜牧业健康发展。因此,迫切需要寻找新的抗生素替代品。
抗菌肽是宿主基因编码的一类小分子活性多肽,能够抵御病原微生物入侵,是先天免疫系统的重要组成部分。一般由12-50个氨基酸组成,具有抗细菌、抗病毒、抗寄生虫、抗癌等多种生物学功能,被认为是抗生素的最佳替代品之一,但是单一的抗菌肽容易被体内的酶消化降解。而纳米载药乳膏生物相溶性及稳定性较好,局部用药后滞留时间长,对药物释放具有缓释及控释作用而引起广泛关注,为研究新型抗菌药物提供了新的研究领域,作为新型、高效抗生素替代品具有巨大研制潜力。
发明内容
针对上述存在的问题,本发明旨在提供一种具有较好的抗菌活性,可用于治疗金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌感染引起的的皮肤性疾病的抗菌肽纳米软膏及其制备方法和用途。
为了实现上述目的,本发明所采用的技术方案如下:
一种抗菌肽纳米软膏,其特征在于:包括抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠;所述抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠的质量比为1:10~30:10~30:10~12:1~3。
优选的,所述抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠的质量比为1:20:20:12:1。
进一步的,所述抗菌肽纳米复合物由磷脂聚合物纳米颗粒外接抗菌肽组成。
进一步的,所述磷脂聚合物纳米颗粒包括ICG、大豆卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺—聚乙二醇—NH2和PLGA。
进一步的,所述抗菌肽为蜂毒素MPX。
进一步的,一种抗菌肽纳米软膏的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1:使用ICG、大豆卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺—聚乙二醇—NH2和PLGA制备磷脂聚合物纳米颗粒;
S2:在磷脂聚合物纳米颗粒上连接抗菌肽,得到抗菌肽纳米复合物;
S3:将硬脂醇和白凡士林在冰浴上熔化并加热至75℃,与预先溶在蒸馏水中并加热至75℃的抗菌肽纳米复合物、丙二醇和十二烷基硫酸钠混匀,搅拌至冷凝,得到抗菌肽纳米软膏。
进一步的,步骤S1的具体操作包括:
S11:将ICG、大豆卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺—聚乙二醇—NH2溶于4%乙醇水溶液中,制得混合溶液;所述ICG、大豆卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺—聚乙二醇—NH2的质量比为15:2.4:3.6;
S12:磁力搅拌步骤S11中的混合溶液,边磁力搅拌边微流控滴加PLGA的乙腈溶液;
S13:提纯浓缩,得到磷脂聚合物纳米颗粒。
进一步的,步骤S2的具体操作包括,
S21、活化:将步骤S1中得到的磷脂聚合物纳米颗粒悬浮在MES缓冲液中,加入EDC和NHS,将混合物在室温下摇晃10-20分钟,然后放在4摄氏度冰箱中15分钟;
S22、连接抗菌肽:将抗菌肽溶解于去离子水中,然后加入到步骤S21中活化反应的混合物中;加入20x磷酸盐缓冲盐水缓冲反应,将其pH维持在7.0-8.0;将反应混合物在室温下摇晃2小时,后放在4摄氏度的冰箱中冷藏;
S23:提纯浓缩,得到抗菌肽纳米复合物。
进一步的,步骤S23中的具体操作包括,
S231:将步骤S22中得到的反应混合物装入透析袋内,放在盛有纯水的烧杯中进行提纯;所述透析袋的截留分子量为3500;
S232:提纯后,将透析袋移至干净的烧杯中,在透析袋的外面撒上聚乙二醇粉末,对反应混合物进行吸附浓缩;
S233:将提纯浓缩后的反应混合物分散在1xPBS缓冲溶液中,即得到抗菌肽纳米复合物。
进一步的,一种抗菌肽纳米软膏的用途,其特征在于:所述抗菌肽纳米软膏用于由金黄色葡萄球菌或绿脓杆菌或大肠杆菌感染引起的的皮肤性疾病。
本发明的有益效果是:
1、本发明中的抗菌肽纳米软膏能够用于由金黄色葡萄球菌或绿脓杆菌或大肠杆菌感染引起的的皮肤性疾病,抗菌肽纳米软膏中的白凡士林能增加产品的润腻感,且无味无刺激性,适合敏感肌,而丙二醇作为产品的润滑剂和软化剂却对敏感肌稍有刺激,本发明中这两者之间的配比可以大程度的降低产品对皮肤的刺激性。
2、本发明的抗菌肽纳米软膏中选用的抗菌肽为蜂毒素MPX,其氨基酸序列为:H-INWKGIAAMAKKLL-NH2,经实验证明,蜂毒素MPX对呼吸系统性病原菌、皮肤黏膜感染性病菌、消化系统性病原菌均有较好的抗菌作用。
3、本发明所选用的纳米载药乳膏制剂生物相溶性及稳定性较好,局部用药后滞留时间长,对药物释放具有缓释及控释作用,为研究新型抗菌药物提供了新的研究领域,作为新型、高效抗生素替代品具有巨大研制潜力。
附图说明
图1为本发明中抗菌肽纳米复合物的结构示意图;
图2为本发明实施例3中抗菌肽纳米软膏成品图片;
图3为本发明实施例3中抗菌肽纳米软膏耐热耐寒评价对比图;
图4为本发明实施例3中抗菌肽纳米软膏理性稳定性评价对比图;
图5为本发明实施例3中抗菌肽纳米软膏用于由金黄色葡萄球菌感染引起的皮肤性疾病试验结果对比图。
其中:1-大豆卵磷脂,2-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺—聚乙二醇—NH2,3-抗菌肽,4-PLGA。
具体实施方式
为了使本领域的普通技术人员能更好的理解本发明的技术方案,下面结合附图和实施例对本发明的技术方案做进一步的描述。
实施例1:
一种抗菌肽纳米软膏,包括抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠;所述抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠的质量比为1:10:30:12:1。
所述抗菌肽纳米复合物由磷脂聚合物纳米颗粒外接抗菌肽组成。
所述磷脂聚合物纳米颗粒包括ICG、大豆卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺—聚乙二醇—NH2和PLGA。
所述抗菌肽为蜂毒素MPX。
进一步的,一种抗菌肽纳米软膏的制备方法,包括以下步骤:
S1:使用ICG、大豆卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺—聚乙二醇—NH2和PLGA制备磷脂聚合物纳米颗粒;
具体的,S11:将ICG、大豆卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺—聚乙二醇—NH2溶于4%乙醇水溶液中,制得混合溶液;
具体的,称取质量比为15:2.4:3.6:40的ICG、大豆卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺—聚乙二醇—NH2和PLGA。
将大豆卵磷脂溶于4%乙醇水溶液中,得到大豆卵磷脂浓度为1mg/mL的大豆卵磷脂溶液;将二硬脂酰磷脂酰乙醇胺—聚乙二醇—NH2(DSPE-PEG-NH2)溶于4%乙醇水溶液中,得到DSPE-PEG-NH2浓度为1mg/mL的DSPE-PEG-NH2溶液;将ICG溶于超纯水,得到ICG浓度为2.5mg/mL的ICG溶液;
S12:磁力搅拌步骤S11中的混合溶液,边磁力搅拌边微流控滴加PLGA的乙腈溶液;
S13:提纯浓缩;将透析袋用80°热水浸泡后再用室温超纯水清洗,把步骤S12中的混合溶液装入透析袋中,放入1L大烧杯中透析,加上磁子搅拌,半个小时一换水,换六次左右结束透析。然后取出透析袋,放在一个干净的烧杯中,在透析袋外面撒上聚乙二醇粉末,吸附透析袋内的水;将透析袋中吸附后的液体收集到离心管中,统一定溶为同一个体积,得磷脂聚合物纳米颗粒(INPS)。
进一步的,步骤S2:在磷脂聚合物纳米颗粒上连接抗菌肽,得到抗菌肽纳米复合物;
具体的,S21、活化:将步骤S1中得到的磷脂聚合物纳米颗粒悬浮在MES缓冲液中;为了预活化羧基,加入EDC和NHS,并将混合物在室温下使用摇床摇15分钟,然后放在4摄氏度冰箱中15分钟;
S22、连接抗菌肽:将抗菌肽蜂毒素MPX溶解于去离子水中,将蜂毒素MPX溶液加入到步骤S21中活化反应的混合物中;加入20x磷酸盐缓冲盐水(PBS)以缓冲反应,将其pH维持在7.0-8.0;然后将反应混合物在室温下使用摇床摇2小时,后放在4摄氏度的冰箱中冷藏过夜;
S23、提纯浓缩:用透析袋除去步骤S22中所得液体中过量的抗菌肽和其他杂质,例如EDC和NHS;用聚乙二醇粉末吸水浓缩后再分散在1xPBS缓冲溶液中,即得到抗菌肽纳米复合物。
具体的,将透析袋用80°热水浸泡后再用室温超纯水清洗,把步骤S22中的反应混合物装入透析袋中,放入1L大烧杯中透析,加上磁子搅拌,半个小时一换水,换六次左右结束透析。然后取出透析袋,放在一个干净的烧杯中,在透析袋外面撒上聚乙二醇粉末,吸收透析袋内的水,进行浓缩,将浓缩过后的反应混合物分散在1xPBS缓冲溶液中,即得到抗菌肽纳米复合物。
进一步的,所述抗菌肽纳米复合物的结构示意图如附图1所示。
进一步的,步骤S3:将硬脂醇和白凡士林在冰浴上熔化并加热至75℃,与预先溶在蒸馏水中并加热至75℃的抗菌肽纳米复合物、丙二醇和十二烷基硫酸钠混匀,搅拌至冷凝,得到抗菌肽纳米软膏。其中,抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠的质量比为1:10:30:12:1。
实施例2:
一种抗菌肽纳米软膏,包括抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠;所述抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠的质量比为1:10:30:10:3。
所述抗菌肽纳米复合物由磷脂聚合物纳米颗粒外接抗菌肽组成。
所述磷脂聚合物纳米颗粒包括ICG、大豆卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺—聚乙二醇—NH2和PLGA。
所述抗菌肽为蜂毒素MPX。
实施例2抗菌肽纳米软膏的制备方法中,除了抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠的质量比与实施例1不同以外,其他操作均相同。
实施例3:
一种抗菌肽纳米软膏,包括抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠;所述抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠的质量比为1:20:20:12:1。
所述抗菌肽纳米复合物由磷脂聚合物纳米颗粒外接抗菌肽组成。
所述磷脂聚合物纳米颗粒包括ICG、大豆卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺—聚乙二醇—NH2和PLGA。
所述抗菌肽为蜂毒素MPX。
实施例3抗菌肽纳米软膏的制备方法中,除了抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠的质量比与实施例1不同以外,其他操作均相同。
实施例4:
一种抗菌肽纳米软膏,包括抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠;所述抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠的质量比为1:20:20:10:3。
所述抗菌肽纳米复合物由磷脂聚合物纳米颗粒外接抗菌肽组成。
所述磷脂聚合物纳米颗粒包括ICG、大豆卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺—聚乙二醇—NH2和PLGA。
所述抗菌肽为蜂毒素MPX。
实施例4抗菌肽纳米软膏的制备方法中,除了抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠的质量比与实施例1不同以外,其他操作均相同。
实施例5:
一种抗菌肽纳米软膏,包括抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠;所述抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠的质量比为1:30:10:12:1。
所述抗菌肽纳米复合物由磷脂聚合物纳米颗粒外接抗菌肽组成。
所述磷脂聚合物纳米颗粒包括ICG、大豆卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺—聚乙二醇—NH2和PLGA。
所述抗菌肽为蜂毒素MPX。
实施例5抗菌肽纳米软膏的制备方法中,除了抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠的质量比与实施例1不同以外,其他操作均相同。
实施例6:
一种抗菌肽纳米软膏,包括抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠;所述抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠的质量比为1:30:10:10:3。
所述抗菌肽纳米复合物由磷脂聚合物纳米颗粒外接抗菌肽组成。
所述磷脂聚合物纳米颗粒包括ICG、大豆卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺—聚乙二醇—NH2和PLGA。
所述抗菌肽为蜂毒素MPX。
实施例6抗菌肽纳米软膏的制备方法中,除了抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠的质量比与实施例1不同以外,其他操作均相同。
进一步的,对本发明中选用的抗菌肽蜂毒素MPX,进行抑菌活性的测定,所述蜂毒素MPX的氨基酸序列为H-INWKGIAAMAKKLL-NH2。
具体的,以改良微量肉汤稀释法测定本发明所用的抗菌肽蜂毒素MPX对猪胸膜肺炎放线杆菌APP5b、金黄色葡萄球菌ATCC 25923、大肠埃希氏菌0157;H7的最低抑制浓度(MIC)。
将活化过后的菌液分别稀释涂板计数,使菌的数量达到2x105CFU/mL,在96孔板中,每孔加入100μL混匀后的菌悬液至第11排。随后吸取100μL抗菌肽溶液分别添加到第一排孔中,反复吹打混匀,尽量不要有气泡,从第一排孔中吸取100μL至第二排,吹打混匀,重复以上操作稀释至第10排,11排加菌不加抗菌肽溶液,抗菌肽溶液与50μL空白培养基混匀,添加于第12排,作空白对照组。将96孔板置于37℃培养箱中培养16~18h,观察结果如表1所示。
表1蜂毒素MPX对不同细菌的最低抑制浓度(μg/ml)
从表1中可以看出,抗菌肽蜂毒素MPX对猪胸膜肺炎放线杆菌APP5b、金黄色葡萄球菌ATCC 25923、大肠埃希氏菌0157;H7的最低抑制浓度(MIC)分别为15.6μg/ml、31.25μg/ml、15.6μg/ml,结果表明抗菌肽蜂毒素MPX对猪胸膜肺炎放线杆菌APP5b、金黄色葡萄球菌ATCC 25923、大肠埃希氏菌0157;H7均具有良好的抑菌活性。
进一步的,对本发明中外接抗菌肽的磷脂聚合物纳米颗粒进行抑菌活性测定,具体测定方法与上述抗菌肽抑菌活性测定方法相同,得到的结果如表2所示。
表2抗菌肽外接于磷脂聚合物纳米颗粒的抑菌活性检测结果
从表2中可以看出,本发明中外接抗菌肽的磷脂聚合物纳米颗粒对APP5b的抑菌活性结果澄清至第4孔,未连接在磷脂聚合物纳米颗粒上的作为阴性对照的抗菌肽澄清至第六孔,而未连接有抗菌肽的空的磷脂聚合物纳米颗粒作为空白对照,未对菌有作用,孔均浑浊,结果表明复合物的制备过程中确实把抗菌肽连接上了,且有一定的抑菌活性,而除了抗菌肽的其他纳米复合物原料对菌无明显活性,排除了除了抗菌肽的其他纳米复合物原料对菌的毒性的干扰。
进一步的,观察实施例1至实施例6中的抗菌肽纳米软膏,得到其产品的性状(包括颜色、细腻度和涂展性),以及离心后的分层情况如表3所示。
表3实施例1至实施例6中抗菌肽纳米软膏性状及离心情况统计表
从表3中可以看出,实施例3中的抗菌肽纳米软膏颜色为白色,细腻,涂展性好,且离心后无分层,说明实施例3中的抗菌肽纳米软膏性状最好。
进一步的,对本发明实施例3中的抗菌肽纳米软膏进行性状评价。
具体的,通过肉眼观察制备的软膏的颜色、外观以及存在形态,软膏成品如附图2所示,从附图2中可以看出,本品为白色软膏,无味,色泽均匀,触感细腻,无结块,无刺激性。
进一步的,对本发明实施例3中的抗菌肽纳米软膏进行耐热耐寒评价。
具体的,分别称取适量的抗菌肽纳米软膏,分别编号为1和2,1号在37℃温箱中放置24h,2号在-20℃冷冻条件下保藏24h,之后取出样品并观察有无液化、粗化、变色、分层等异常现象。结果如附图3所示。从附图3中可以看出,经过较高温和低温的处理后,通过肉眼观察,软膏的外观,性状未发生明显变化,说明本发明中制备出来的软膏耐热和耐寒性能都较好。
进一步,对本发明实施例3中的抗菌肽纳米软膏进行离心稳定性评价。
具体的,分别称取适量的MPX软膏透皮制剂,在3000r,15min下离心,观察有无液化、粗化、变色、分层等异常现象。结果如附图4所示。从附图4中可以看出,软膏经高速离心处理后,通过肉眼观察,并未发现软膏有液化、粗化、变色、分层等异常现象,说明本发明中制备出来的软膏稳定性强。
进一步的,将本发明中的抗菌肽纳米软膏用于由金黄色葡萄球菌感染引起的皮肤性疾病。
具体的,随机挑取一批体重相近、精神状态良好的雄鼠,将小鼠随机分为5组,并将小鼠背部的毛剃去,第一组设为为空白对照,不做任何处理;将后四组的小鼠分别用金黄色葡萄球菌ATCC 25923以107CFU的感染量涂抹于小鼠伤口处,感染24h;
进一步的,第二组对感染处不做任何治疗处理;第三组每隔24h涂抹适量莫匹罗星于小鼠伤口处,作阳性对照,第四组每隔24h涂抹本发明实施例3中的抗菌肽纳米软膏于小鼠伤口处,第五组则为阴性对照,每隔24h将制得的不含抗菌肽的纳米软膏,即软膏的其他基质涂抹于小鼠伤口处,治疗7天后观察小鼠伤口变化。结果如附图5所示。
附图5中A为第一组,即空白对照,未加菌感染和治疗,7天后无明显变化;B为第二组,感染后未进行治疗,7天后伤口已自行结痂;C为第三组,在用莫匹罗星进行治疗7天后,痂皮基本脱落完全;D为第四组,在使用本发明中的抗菌肽纳米软膏进行7天的治疗后,大块的痂皮已脱落,脱落时间略晚于第三组;E为第五组,在涂抹7天的基质后,伤口也处于结痂状态。
从图中可以看出,在用本发明中的抗菌肽纳米软膏进行治疗后,伤口明显好转,7天后痂皮脱落状态略晚于莫匹罗星治疗组,但明显早于未治疗组,说明本发明中制备的抗菌肽纳米软膏可用于金黄色葡萄球菌感染引起的皮肤疾病。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下,本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (5)
1.一种抗菌肽纳米软膏,其特征在于:包括抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠;所述抗菌肽纳米复合物、硬脂醇、白凡士林、丙二醇和十二烷基硫酸钠的质量比为1:20:20:12:1;
所述抗菌肽纳米复合物由磷脂聚合物纳米颗粒外接抗菌肽组成;
所述磷脂聚合物纳米颗粒包括ICG、大豆卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺—聚乙二醇—NH2和PLGA;
所述抗菌肽为蜂毒素MPX。
2.如权利要求1所述的一种抗菌肽纳米软膏的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1:使用ICG、大豆卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺—聚乙二醇—NH2和PLGA制备磷脂聚合物纳米颗粒;
S2:在磷脂聚合物纳米颗粒上连接抗菌肽,得到抗菌肽纳米复合物;
S3:将硬脂醇和白凡士林在冰浴上熔化并加热至75℃,与预先溶在蒸馏水中并加热至75℃的抗菌肽纳米复合物、丙二醇和十二烷基硫酸钠混匀,搅拌至冷凝,得到抗菌肽纳米软膏。
3.根据权利要求2所述的一种抗菌肽纳米软膏的制备方法,其特征在于,步骤S1的具体操作包括:
S11:将ICG、大豆卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺—聚乙二醇—NH2溶于4%乙醇水溶液中,制得混合溶液;所述ICG、大豆卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺—聚乙二醇—NH2的质量比为15:2.4:3.6;
S12:磁力搅拌步骤S11中的混合溶液,边磁力搅拌边微流控滴加PLGA的乙腈溶液;
S13:提纯浓缩,得到磷脂聚合物纳米颗粒。
4.根据权利要求3所述的一种抗菌肽纳米软膏的制备方法,其特征在于,步骤S2的具体操作包括,
S21、活化:将步骤S1中得到的磷脂聚合物纳米颗粒悬浮在MES缓冲液中,加入EDC和NHS,将混合物在室温下摇晃10-20分钟,然后放在4摄氏度冰箱中15分钟;
S22、连接抗菌肽:将抗菌肽溶解于去离子水中,然后加入到步骤S21中活化反应的混合物中;加入20x磷酸盐缓冲盐水缓冲反应,将其pH维持在7.0-8.0;将反应混合物在室温下摇晃2小时,后放在4摄氏度的冰箱中冷藏;
S23:提纯浓缩,得到抗菌肽纳米复合物。
5.根据权利要求4所述的一种抗菌肽纳米软膏的制备方法,其特征在于,步骤S23中的具体操作包括,
S231:将步骤S22中得到的反应混合物装入透析袋内,放在盛有纯水的烧杯中进行提纯;所述透析袋的截留分子量为3500;
S232:提纯后,将透析袋移至干净的烧杯中,在透析袋的外面撒上聚乙二醇粉末,对反应混合物进行吸附浓缩;
S233:将提纯浓缩后的反应混合物分散在1xPBS缓冲溶液中,即得到抗菌肽纳米复合物。
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