CN111454858A - 一种运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法 - Google Patents
一种运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111454858A CN111454858A CN202010259690.8A CN202010259690A CN111454858A CN 111454858 A CN111454858 A CN 111454858A CN 202010259690 A CN202010259690 A CN 202010259690A CN 111454858 A CN111454858 A CN 111454858A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- culture medium
- amine
- lactobacillus plantarum
- suspension
- cfu
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 title claims abstract description 106
- 230000000035 biogenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 70
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims abstract description 44
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 title claims description 20
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 82
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 80
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 claims abstract description 56
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 claims abstract description 56
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 claims abstract description 56
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims abstract description 50
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 40
- 241000588772 Morganella morganii Species 0.000 claims abstract description 33
- 229940076266 morganella morganii Drugs 0.000 claims abstract description 33
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 claims abstract description 30
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 69
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 47
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 41
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 32
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 31
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 22
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 claims description 20
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 19
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 19
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 17
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 16
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 16
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 16
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 16
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 16
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 16
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 16
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 16
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 16
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 15
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 15
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 15
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 claims description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 12
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 9
- NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N pyridoxal 5'-phosphate Chemical compound CC1=NC=C(COP(O)(O)=O)C(C=O)=C1O NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 235000007682 pyridoxal 5'-phosphate Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000011589 pyridoxal 5'-phosphate Substances 0.000 claims description 8
- XJRPTMORGOIMMI-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-amino-4-(trifluoromethyl)-1,3-thiazole-5-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)C=1SC(N)=NC=1C(F)(F)F XJRPTMORGOIMMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 abstract description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 13
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 8
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 235000013332 fish product Nutrition 0.000 description 6
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 5
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 4
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 4
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000588771 Morganella <proteobacterium> Species 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 241000043309 Enterobacter hormaechei Species 0.000 description 2
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 2
- BHHGXPLMPWCGHP-UHFFFAOYSA-N Phenethylamine Chemical compound NCCC1=CC=CC=C1 BHHGXPLMPWCGHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 2
- RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N Pyridoxal Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- VHRGRCVQAFMJIZ-UHFFFAOYSA-N cadaverine Chemical compound NCCCCCN VHRGRCVQAFMJIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 2
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 2
- 238000011177 media preparation Methods 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 208000005392 Spasm Diseases 0.000 description 1
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 1
- 206010070863 Toxicity to various agents Diseases 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 238000006114 decarboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 235000013622 meat product Nutrition 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 229940117803 phenethylamine Drugs 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 235000008164 pyridoxal Nutrition 0.000 description 1
- 239000011674 pyridoxal Substances 0.000 description 1
- 229960003581 pyridoxal Drugs 0.000 description 1
- 235000013580 sausages Nutrition 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，所述方法具体步骤如下：将产胺菌与植物乳杆菌同时接种于含有20～40g/L氯化钠的无菌液体培养基中，共同培养；其中，所述产胺菌为摩氏摩根氏菌(Morganella morganii)或霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)，所述产胺菌和植物乳杆菌的菌落数比例为1:1～1:2。与对照组相比，本发明使得所述产胺菌培养液中的生物胺含量显著降低，总抑制率达到75.3％～95.6％。本发明运用栅栏技术，采用盐度及植物乳杆菌组合的方式，形成对产胺菌株的多重抑制，从而降低生物胺含量。
Description
技术领域
本发明属于发酵技术领域，涉及一种运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法。
背景技术
生物胺是一类较为特殊且具有生物活性的有机物质，由微生物分泌的氨基酸脱羧酶催化氨基酸脱羧形成。当其适量存在于人体内时，可有效的促进生理代谢，但在人体内过量积累时，则会引发一系列诸如头痛、痉挛、恶心呕吐等中毒症状，严重时甚至会危及生命。它们广泛存在于食品，尤其是蛋白质含量较高的发酵食品中，常见的如发酵香肠，鱼制品，肉制品，乳制品及发酵酒类等。
鱼制品在加工、运输及贮藏期间易受微生物污染，从而导致生物胺积累。大量研究表明，鱼制品中的生物胺主要由摩根氏菌属、肠杆菌属和发光细菌产生，其中摩根氏菌属是主要的产组胺细菌，常见的包括Morganella morganii和Morganella psychrotolerans，发光细菌在一些鱼制品中产组胺，肠杆菌属是主要的产尸胺与腐胺细菌。因此，抑制产生物胺细菌的生长，能有效降低鱼制品中的生物胺含量，提高产品安全性。
栅栏因子理论认为，有效提高食品安全性，则在食品加工过程中其内部必须存在能够抑制微生物生长繁殖的因素，通过多个因素之间相互作用以保证食品质量，这些因素统称为栅栏因子。然而，目前通过不同栅栏因子组合的形式抑制产胺菌积累生物胺的实施例鲜有报道，运用栅栏技术，协同降低鱼制品生物胺含量的方法也未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，将产胺菌与植物乳杆菌同时接种于含有20～40g/L氯化钠的无菌液体培养基中共同培养；其中，所述产胺菌为摩氏摩根氏菌(Morganella morganii)或霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)，所述产胺菌和植物乳杆菌的菌落数添加比例为1:1～1:2。
2019100254208的发明专利申请《一株植物乳杆菌及其在降低鱼茶生物胺含量中的应用》记载了一种植物乳杆菌Yc-2；本发明涉及的植物乳杆菌可选用该菌体。
优选方式下，所述运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，包括步骤：
将液体培养基中加入氯化钠，所述氯化钠的添加量为20～40g/L，灭菌，得添加氯化钠的无菌液体培养基；向所述添加氯化钠的无菌液体培养基中加入浓度为107～108CFU/mL的植物乳杆菌菌悬液和浓度为107～108CFU/mL的产胺菌菌悬液，混合均匀，培养；其中，所述产胺菌菌悬液和植物乳杆菌菌悬液总菌落数的添加比例为1:1～1:2；所述添加氯化钠的无菌液体培养基、植物乳杆菌菌悬液和产胺菌菌悬液的体积比为8:1:1～7:2:1；所述产胺菌为摩氏摩根氏菌(Morganella morganii)或霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)；所述液体培养基成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉3g/L，葡萄糖1g/L，吡哆醛-5’-磷酸0.05g/L，苯丙氨酸1g/L，组氨酸1g/L，精氨酸1g/L，鸟氨酸1g/L，赖氨酸1g/L，色氨酸1g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水。
优选方式下，所述培养的温度为20～30℃、时间36～48h；
所述产胺菌菌悬液的制备方法为：从生物胺显色培养基上挑取活化的产胺菌株接种至无菌液体培养基中，置于30℃培养18h，用无菌液体培养基稀释至107CFU/mL～108CFU/mL，所述产胺菌为摩氏摩根氏菌(Morganella morganii)或霍氏肠杆菌(Enterobacterhormaechei)；所述生物胺显色培养基成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉5g/L，NaCl5g/L，碳酸钙1g/L，琼脂20g/L，溴甲酚紫0.06g/L，苯丙氨酸10g/L，组氨酸10g/L，精氨酸10g/L，鸟氨酸10g/L，赖氨酸10g/L，色氨酸10g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水；所述液体培养基成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉3g/L，葡萄糖1g/L，吡哆醛-5’-磷酸0.05g/L，苯丙氨酸1g/L，组氨酸1g/L，精氨酸1g/L，鸟氨酸1g/L，赖氨酸1g/L，色氨酸1g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水。
所述植物乳杆菌菌悬液的制备方法如下：从MRS琼脂培养基上挑取活化的植物乳杆菌接种至无菌MRS肉汤培养基，置于37℃培养18h，用无菌MRS肉汤培养基稀释至107CFU/mL～108CFU/mL。
优选方式下，运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，包括步骤：
取液体培养基，添加NaCl至浓度为40g/L，121℃、15min灭菌，得添加氯化钠的无菌液体培养基；向所述添加氯化钠的无菌液体培养基中加入107CFU/mL的植物乳杆菌Yc-2菌悬液和浓度为107CFU/mL的摩氏摩根氏菌菌悬液，混合均匀，30℃培养48h；所述加氯化钠的无菌液体培养基、植物乳杆菌Yc-2菌悬液和摩氏摩根氏菌菌悬液的体积比为8:1:1；
其中，所述植物乳杆菌Yc-2菌悬液的制备方法为：从MRS琼脂培养基上挑取活化的植物乳杆菌Yc-2接种至无菌MRS肉汤培养基，置于37℃有氧培养18h，用MRS肉汤培养基稀释至107CFU/mL，得植物乳杆菌Yc-2菌悬液；
所述摩氏摩根氏菌菌悬液的制备方法为：从生物胺显色培养基上挑取活化的摩氏摩根氏菌菌株接种至无菌液体培养基中，置于30℃培养18h，用无菌液体培养基稀释至107CFU/mL；
所述生物胺显色培养基成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉5g/L，NaCl 5g/L，碳酸钙1g/L，琼脂20g/L，溴甲酚紫0.06g/L，苯丙氨酸10g/L，组氨酸10g/L，精氨酸10g/L，鸟氨酸10g/L，赖氨酸10g/L，色氨酸10g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水；
所述液体培养基成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉3g/L，葡萄糖1g/L，吡哆醛-5’-磷酸0.05g/L，苯丙氨酸1g/L，组氨酸1g/L，精氨酸1g/L，鸟氨酸1g/L，赖氨酸1g/L，色氨酸1g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水。
优选方式下，运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，包括步骤：
取液体培养基，加入NaCl至浓度为20g/L，121℃、15min灭菌，得添加氯化钠的无菌液体培养基；向所述添加氯化钠的无菌液体培养基中加入108CFU/mL的植物乳杆菌Yc-2菌悬液和浓度为108CFU/mL的霍氏肠杆菌菌悬液，混合均匀，30℃培养48h；所述添加氯化钠的无菌液体培养基、植物乳杆菌Yc-2菌悬液和霍氏肠杆菌菌悬液的体积比为8:1:1；
其中，所述植物乳杆菌Yc-2菌悬液的制备方法为：从MRS琼脂培养基上挑取活化的植物乳杆菌Yc-2接种至无菌MRS肉汤培养基，置于37℃有氧培养18h，用MRS肉汤培养基稀释至108CFU/mL，得植物乳杆菌Yc-2菌悬液；
所述霍氏肠杆菌菌悬液的制备方法为：从生物胺显色培养基上挑取活化的霍氏肠杆菌菌株接种至无菌液体培养基中，置于30℃培养18h，用无菌液体培养基稀释至108CFU/mL；
所述生物胺显色培养基成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉5g/L，NaCl 5g/L，碳酸钙1g/L，琼脂20g/L，溴甲酚紫0.06g/L，苯丙氨酸10g/L，组氨酸10g/L，精氨酸10g/L，鸟氨酸10g/L，赖氨酸10g/L，色氨酸10g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水；
所述液体培养基成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉3g/L，葡萄糖1g/L，吡哆醛-5’-磷酸0.05g/L，苯丙氨酸1g/L，组氨酸1g/L，精氨酸1g/L，鸟氨酸1g/L，赖氨酸1g/L，色氨酸1g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水。
其中，所述MRS琼脂培养基为培养乳酸菌专用，购于青岛海博生物技术有限公司；所述MRS肉汤培养基为培养乳酸菌专用，购于青岛海博生物技术有限公司。
空白对照组为：无菌液体培养基中不添加植物乳杆菌菌悬液及氯化钠，单独接种107CFU/mL～108CFU/mL的摩氏摩根氏菌菌悬液或霍氏肠杆菌菌悬液，混合均匀，30℃培养48h；
含有氯化钠的无菌液体培养基的制备：将氯化钠按照20g/L～40g/L的比例添加至液体培养基中，121℃、15min灭菌备用。
无菌液体培养基是将液体培养基121℃、15min灭菌所得。
生物胺含量测定方法：30℃培养48h后离心收集培养液，通过超高效液相色谱质谱联用仪测定生物胺含量。
本发明的有益效果是：与对照组相比，运用栅栏因子技术能够显著降低两株产胺菌的生物胺积累，其中摩氏摩根氏菌的组胺抑制率达到91.9％，总生物胺抑制率为95.6％；霍氏肠杆菌的总生物胺抑制率为75.3％，显著高于单一栅栏因子的抑制效果。
附图说明
图1是盐度及植物乳杆菌发酵剂组合对摩氏摩根氏菌积累生物胺的影响；
图2是盐度及植物乳杆菌发酵剂组合对摩氏摩根氏菌积累组胺的影响；
图3是盐度及植物乳杆菌发酵剂组合对霍氏肠杆菌积累生物胺的影响。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明作进一步说明。
下述各例中所述MRS琼脂培养基为培养乳酸菌专用，购于青岛海博生物技术有限公司，商品号为HB0384；所述MRS肉汤培养基为培养乳酸菌专用，购于青岛海博生物技术有限公司，商品号为HB0384-1。
2019100254208的发明专利申请《一株植物乳杆菌及其在降低鱼茶生物胺含量中的应用》记载了一种植物乳杆菌Yc-2，保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，简称CGMCC，保藏号CGMCC NO.16616；下述实施例所述植物乳杆菌选用该菌体。
下述各例所述液体培养基成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉3g/L，葡萄糖1g/L，吡哆醛-5’-磷酸0.05g/L，苯丙氨酸1g/L，组氨酸1g/L，精氨酸1g/L，鸟氨酸1g/L，赖氨酸1g/L，色氨酸1g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水；所述生物胺显色培养基成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉5g/L，NaCl 5g/L，碳酸钙1g/L，琼脂20g/L，溴甲酚紫0.06g/L，苯丙氨酸10g/L，组氨酸10g/L，精氨酸10g/L，鸟氨酸10g/L，赖氨酸10g/L，色氨酸10g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水。
实施例1
运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，即利用盐度及植物乳杆菌发酵剂组合抑制摩氏摩根氏菌积累生物胺的方法，具体步骤为：
取液体培养基，加入NaCl至浓度为40g/L，121℃、15min灭菌，得添加氯化钠的无菌液体培养基；取0.8mL添加有40g/L氯化钠的无菌液体培养基，加入0.1ml 107CFU/mL的植物乳杆菌Yc-2菌悬液和浓度为107CFU/mL的摩氏摩根氏菌菌悬液0.1mL，混合均匀，30℃培养48h后离心收集培养液A；
其中，所述植物乳杆菌Yc-2菌悬液的制备方法为：从MRS琼脂培养基上挑取活化的植物乳杆菌Yc-2接种至无菌MRS肉汤培养基，置于37℃有氧培养18h，用MRS肉汤培养基稀释至107CFU/mL，得植物乳杆菌Yc-2菌悬液；所述摩氏摩根氏菌菌悬液的制备方法为：从生物胺显色培养基上挑取活化的摩氏摩根氏菌菌株接种至无菌液体培养基中，置于30℃培养18h，用无菌液体培养基稀释至107CFU/mL；
同时，作为对照，在0.9ml无菌液体培养基中单独接种0.1ml 107CFU/mL的摩氏摩根氏菌菌悬液，混合均匀，30℃培养48h后离心收集培养液B；
利用超高效液相色谱质谱联用仪分别测定培养液A和培养液B中的生物胺含量，结果如图1所示。
本实施例还可以包括溶液配制、培养基配制及灭菌等其他前处理步骤。
实施例2
运用栅栏技术抑制中产胺菌积累生物胺的方法，即利用盐度及植物乳杆菌发酵剂组合抑制霍氏肠杆菌积累生物胺的方法，具体步骤为：
取液体培养基，加入NaCl至浓度为20g/L，121℃、15min灭菌，得添加氯化钠的无菌液体培养基；取0.8mL添加有20g/L氯化钠的无菌液体培养基，加入0.1ml 108CFU/mL的植物乳杆菌Yc-2菌悬液和浓度为108CFU/mL的霍氏肠杆菌菌悬液0.1mL，混合均匀，30℃培养48h，离心收集培养液C；
其中，所述植物乳杆菌Yc-2菌悬液的制备方法为：从MRS琼脂培养基上挑取活化的植物乳杆菌Yc-2接种至无菌MRS肉汤培养基，置于37℃有氧培养18h，用MRS肉汤培养基稀释至108CFU/mL，得植物乳杆菌Yc-2菌悬液；所述霍氏肠杆菌菌悬液的制备方法为：从生物胺显色培养基上挑取活化的霍氏肠杆菌菌株接种至无菌液体培养基中，置于30℃培养18h，用无菌液体培养基稀释至108CFU/mL；
同时，作为对照，在0.9ml无菌液体培养基中单独接种0.1ml 108CFU/mL的霍氏肠杆菌菌悬液，混合均匀，30℃培养48h，离心收集培养液D；
利用超高效液相色谱质谱联用仪测定培养液C和培养液D的生物胺含量，结果如图3所示。
本实施例还可以包括溶液配制、培养基配制及灭菌等其他前处理步骤。
对比例1
取0.8mL无菌液体培养基，加入0.1ml 107CFU/mL的植物乳杆菌Yc-2菌悬液和浓度为107CFU/mL摩氏摩根氏菌菌悬液0.1mL，混合均匀后，30℃培养48h，离心收集培养液，测定生物胺含量，结果如图1所示。
其中，所述植物乳杆菌Yc-2菌悬液的制备方法为：从MRS琼脂培养基上挑取活化的植物乳杆菌Yc-2接种至无菌MRS肉汤培养基，置于37℃有氧培养18h，用MRS肉汤培养基稀释至107CFU/mL，得植物乳杆菌Yc-2菌悬液；所述摩氏摩根氏菌菌悬液的制备方法为：从生物胺显色培养基上挑取活化的摩氏摩根氏菌菌株接种至无菌液体培养基中，置于30℃培养18h，用无菌液体培养基稀释至107CFU/mL。
对比例2
取0.9mL添加40g/L氯化钠的无菌液体培养基，加入浓度为107CFU/mL摩氏摩根氏菌菌悬液0.1mL，混合均匀后，30℃培养48h，离心收集培养液，测定生物胺含量，结果如图1所示。
所述摩氏摩根氏菌菌悬液的制备方法为：从生物胺显色培养基上挑取活化的摩氏摩根氏菌菌株接种至无菌液体培养基中，置于30℃培养18h，用无菌液体培养基稀释至107CFU/mL。
对比例3
取0.8mL无菌液体培养基，加入0.1ml 108CFU/mL的植物乳杆菌Yc-2菌悬液和浓度为108CFU/mL霍氏肠杆菌菌悬液0.1mL，混合均匀后，30℃培养48h,离心收集培养液，测定生物胺含量，结果如图3所示。
其中，所述植物乳杆菌Yc-2菌悬液的制备方法为：从MRS琼脂培养基上挑取活化的植物乳杆菌Yc-2接种至无菌MRS肉汤培养基，置于37℃有氧培养18h，用MRS肉汤培养基稀释至108CFU/mL，得植物乳杆菌Yc-2菌悬液；所述霍氏肠杆菌菌悬液的制备方法为：从生物胺显色培养基上挑取活化的霍氏肠杆菌菌株接种至无菌液体培养基中，置于30℃培养18h，用无菌液体培养基稀释至108CFU/mL。
对比例4
取0.9mL添加20g/L氯化钠的无菌液体培养基，加入浓度为108CFU/mL霍氏肠杆菌菌悬液0.1mL，混合均匀后，30℃培养48h,离心收集培养液，测定生物胺含量，结果如图3所示。
所述霍氏肠杆菌菌悬液的制备方法为：从生物胺显色培养基上挑取活化的霍氏肠杆菌菌株接种至无菌液体培养基中，置于30℃培养18h，用无菌液体培养基稀释至108CFU/mL。
图1、图2结果表明，本发明实施例1采用盐度与植物乳杆菌发酵剂组合的方式能够对摩氏摩根氏菌的生物胺积累起到一定的抑制作用。与对照组相比生物胺含量显著降低，总抑制率为95.6％，其中组胺的抑制率达到91.9％，尸胺，腐胺与苯乙胺的含量也呈下降趋势；对比例1植物乳杆菌组的生物胺抑制率为86.6％；对比例2盐度组的生物胺抑制率为63.9％，说明采用栅栏技术能有效降低生物胺的积累，抑制效果高于单一栅栏因素。
图3结果表明，实施例2添加20g/L盐度及植物乳杆菌发酵剂均能够对霍氏肠杆菌的生长起到一定的抑制作用，与对照组相比栅栏组合中生物胺含量受到显著抑制，总抑制率为75.3％；对比例3植物乳杆菌组的生物胺抑制率为39.9％；对比例4盐度组的生物胺抑制率为47.4％，说明采用栅栏技术能有效降低产胺菌的生物胺积累，且抑制效果显著高于单一栅栏因素。
以上所述内容，仅对本发明的目的、效果进行进一步说明，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，其特征在于，将产胺菌与植物乳杆菌同时接种于含有20～40g/L氯化钠的无菌液体培养基中，共同培养；其中，所述产胺菌为摩氏摩根氏菌Morganella morganii或霍氏肠杆菌Enterobacter hormaechei，所述产胺菌和植物乳杆菌的菌落数比例为1:1～1:2。
2.根据权利要求1所述运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，其特征在于，包括步骤：
将液体培养基中加入氯化钠，所述氯化钠的添加量为20～40g/L，灭菌，得添加氯化钠的无菌液体培养基；向所述添加氯化钠的无菌液体培养基中加入浓度为107～108CFU/mL的植物乳杆菌菌悬液和浓度为107～108CFU/mL的产胺菌菌悬液，混合均匀，培养；
其中，所述产胺菌菌悬液和所述植物乳杆菌菌悬液中菌落总数的比例为1:1～1:2；所述添加氯化钠的无菌液体培养基、植物乳杆菌菌悬液和产胺菌菌悬液的体积比为8:1:1～7:2:1；所述产胺菌为摩氏摩根氏菌或霍氏肠杆菌；
所述无菌液体培养基的成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉3g/L，葡萄糖1g/L，吡哆醛-5’-磷酸0.05g/L，苯丙氨酸1g/L，组氨酸1g/L，精氨酸1g/L，鸟氨酸1g/L，赖氨酸1g/L，色氨酸1g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水。
3.根据权利要求1所述运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，其特征在于，所述培养的温度为20～30℃、时间36～48h。
4.根据权利要求1所述运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，其特征在于，所述产胺菌菌悬液的制备方法为：从生物胺显色培养基上挑取活化的产胺菌株接种至无菌液体培养基中，置于30℃培养18h，用无菌液体培养基稀释至107CFU/mL～108CFU/mL，所述产胺菌为摩氏摩根氏菌或霍氏肠杆菌；
所述生物胺显色培养基成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉5g/L，NaCl5g/L，碳酸钙1g/L，琼脂20g/L，溴甲酚紫0.06g/L，苯丙氨酸10g/L，组氨酸10g/L，精氨酸10g/L，鸟氨酸10g/L，赖氨酸10g/L，色氨酸10g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水；
所述液体培养基成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉3g/L，葡萄糖1g/L，吡哆醛-5’-磷酸0.05g/L，苯丙氨酸1g/L，组氨酸1g/L，精氨酸1g/L，鸟氨酸1g/L，赖氨酸1g/L，色氨酸1g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水。
5.根据权利要求1所述运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，其特征在于，所述植物乳杆菌菌悬液的制备方法如下：从MRS琼脂培养基上挑取活化的植物乳杆菌接种至无菌MRS肉汤培养基，置于37℃培养18h，用无菌MRS肉汤培养基稀释至107CFU/mL～108CFU/mL。
6.根据权利要求1所述运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，其特征在于，包括步骤：
取液体培养基，添加NaCl至浓度为40g/L，121℃灭菌15min，得添加氯化钠的无菌液体培养基；向所述添加氯化钠的无菌液体培养基中加入107CFU/mL的植物乳杆菌Yc-2菌悬液和浓度为107CFU/mL的摩氏摩根氏菌菌悬液，混合均匀，30℃培养48h；所述无菌液体培养基、植物乳杆菌Yc-2菌悬液和摩氏摩根氏菌菌悬液的体积比为8:1:1；
其中，所述植物乳杆菌Yc-2菌悬液的制备方法为：从MRS琼脂培养基上挑取活化的植物乳杆菌Yc-2接种至无菌MRS肉汤培养基，置于37℃有氧培养18h，用MRS肉汤培养基稀释至107CFU/mL，得植物乳杆菌Yc-2菌悬液；
所述摩氏摩根氏菌菌悬液的制备方法为：从生物胺显色培养基上挑取活化的摩氏摩根氏菌菌株接种至无菌液体培养基中，置于30℃培养18h，用无菌液体培养基稀释至107CFU/mL；
所述生物胺显色培养基成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉5g/L，NaCl 5g/L，碳酸钙1g/L，琼脂20g/L，溴甲酚紫0.06g/L，苯丙氨酸10g/L，组氨酸10g/L，精氨酸10g/L，鸟氨酸10g/L，赖氨酸10g/L，色氨酸10g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水；
所述液体培养基成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉3g/L，葡萄糖1g/L，吡哆醛-5’-磷酸0.05g/L，苯丙氨酸1g/L，组氨酸1g/L，精氨酸1g/L，鸟氨酸1g/L，赖氨酸1g/L，色氨酸1g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水。
7.根据权利要求1所述运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法，其特征在于，包括步骤：
取液体培养基，加入NaCl至浓度为20g/L，121℃灭菌15min，得添加氯化钠的无菌液体培养基；向所述添加氯化钠的无菌液体培养基中加入108CFU/mL的植物乳杆菌Yc-2菌悬液和浓度为108CFU/mL的霍氏肠杆菌菌悬液，混合均匀，30℃培养48h；所述添加氯化钠的无菌液体培养基、植物乳杆菌Yc-2菌悬液和霍氏肠杆菌菌悬液的体积比为8:1:1；
其中，所述植物乳杆菌Yc-2菌悬液的制备方法为：从MRS琼脂培养基上挑取活化的植物乳杆菌Yc-2接种至无菌MRS肉汤培养基，置于37℃有氧培养18h，用MRS肉汤培养基稀释至108CFU/mL，得植物乳杆菌Yc-2菌悬液；
所述霍氏肠杆菌菌悬液的制备方法为：从生物胺显色培养基上挑取活化的霍氏肠杆菌菌株接种至无菌液体培养基中，置于30℃培养18h，用无菌液体培养基稀释至108CFU/mL；
所述生物胺显色培养基成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉5g/L，NaCl 5g/L，碳酸钙1g/L，琼脂20g/L，溴甲酚紫0.06g/L，苯丙氨酸10g/L，组氨酸10g/L，精氨酸10g/L，鸟氨酸10g/L，赖氨酸10g/L，色氨酸10g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水；
所述液体培养基成分为：蛋白胨5g/L，酵母浸粉3g/L，葡萄糖1g/L，吡哆醛-5’-磷酸0.05g/L，苯丙氨酸1g/L，组氨酸1g/L，精氨酸1g/L，鸟氨酸1g/L，赖氨酸1g/L，色氨酸1g/L，酪氨酸0.4g/L，pH5.5，余量为水。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010259690.8A CN111454858A (zh) | 2020-04-03 | 2020-04-03 | 一种运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010259690.8A CN111454858A (zh) | 2020-04-03 | 2020-04-03 | 一种运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111454858A true CN111454858A (zh) | 2020-07-28 |
Family
ID=71676660
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010259690.8A Pending CN111454858A (zh) | 2020-04-03 | 2020-04-03 | 一种运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111454858A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116179404A (zh) * | 2022-10-19 | 2023-05-30 | 四川农业大学 | 一株霍氏肠杆菌及其应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101701203A (zh) * | 2009-11-27 | 2010-05-05 | 南京农业大学 | 一株植物乳杆菌及其应用 |
| CN109735461A (zh) * | 2019-01-11 | 2019-05-10 | 大连工业大学 | 一株植物乳杆菌及其在降低鱼茶生物胺含量中的应用 |
-
2020
- 2020-04-03 CN CN202010259690.8A patent/CN111454858A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101701203A (zh) * | 2009-11-27 | 2010-05-05 | 南京农业大学 | 一株植物乳杆菌及其应用 |
| CN109735461A (zh) * | 2019-01-11 | 2019-05-10 | 大连工业大学 | 一株植物乳杆菌及其在降低鱼茶生物胺含量中的应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| RUIQI BAO等: "Shortening Fermentation Period and Quality Improvement of Fermented Fish, Chouguiyu, by Co-inoculation of Lactococcus lactis M10 and Weissella cibaria M3", 《FRONT MICROBIOL》, vol. 9, 17 December 2018 (2018-12-17), pages 3003 * |
| 曹利瑞等: "黄酒酿造过程中产生物胺菌株的筛选及其特性研究", 《中国食品学报》, vol. 18, no. 6, 30 June 2018 (2018-06-30), pages 68 - 75 * |
| 沈月新: "《水产食品学》", 31 May 2001, 中国农业出版社, pages: 314 * |
| 王永丽等: "传统发酵肉制品中生物胺形成机理及检测控制技术", 《肉类研究》, vol. 27, no. 6, 30 June 2013 (2013-06-30), pages 39 - 43 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116179404A (zh) * | 2022-10-19 | 2023-05-30 | 四川农业大学 | 一株霍氏肠杆菌及其应用 |
| CN116179404B (zh) * | 2022-10-19 | 2024-01-26 | 四川农业大学 | 一株霍氏肠杆菌及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109735461B (zh) | 一株植物乳杆菌及其在降低鱼茶生物胺含量中的应用 | |
| CN108185352B (zh) | 一种低生物胺发酵泡菜的制作方法 | |
| CN113278554B (zh) | 一种利用混菌生物膜提高乳酸菌耐酸能力的方法 | |
| CN112501090B (zh) | 一株地衣芽孢杆菌及其应用 | |
| CN107354106A (zh) | 一种用于培养高密度乳酸菌的培养基及其制备方法 | |
| CN114591854B (zh) | 一种具有降解植物性脂肪功能的植物乳杆菌lz026及其应用 | |
| CN111748512A (zh) | 一种适用于青春双歧杆菌高效增殖的氮源及其应用 | |
| CN112251383A (zh) | 一株产苯乳酸的干酪乳杆菌及其应用 | |
| CN102127515B (zh) | 一株高产l-脯氨酸短波单胞杆菌(jnpp-1)的筛选及应用 | |
| CN113980853A (zh) | 一株高产乳酸的格氏乳球菌wbt0008及其应用 | |
| CN111454858A (zh) | 一种运用栅栏技术抑制产胺菌积累生物胺的方法 | |
| KR101245208B1 (ko) | 세라믹 막 분리 배양기 | |
| CN112940953A (zh) | 一株高产3-甲基丁醇的汉逊德巴利酵母 | |
| CN102329747B (zh) | 木糖葡萄球菌a2的高密度培养的培养基及培养方法 | |
| CN115029256B (zh) | 一种马克思克鲁维酵母dpul-f15及应用 | |
| CN116925953A (zh) | 一种臭鳜鱼的发酵方法及其使用的菌种 | |
| CN102703345B (zh) | 一株抑制生物胺产生的棒状乳杆菌及其应用 | |
| CN110684702B (zh) | 一种博斯氏菌属y4及其在促进真姬菇生长中的应用 | |
| CN114591860A (zh) | 一种高载乳酸菌肉用直投式发酵剂及其制备方法和应用 | |
| CN109897807B (zh) | 一种大曲中土味素的抑制方法 | |
| CN113862179A (zh) | 一种沼泽红假单胞菌及其制备5-ala的用途和方法 | |
| CN108004165B (zh) | 一株细菌及其发酵产物在防止烟用料液腐败变质中的应用 | |
| CN113174342A (zh) | 高效降解氨基甲酸乙酯的菌株及其应用 | |
| JP3957132B2 (ja) | 低濁性醤油乳酸菌の分離用培地、同培地を用いる低濁性醤油乳酸菌の分離法及び同乳酸菌を用いる清澄度の高い醤油の製造法 | |
| CN112195119A (zh) | 一种能降解生物胺且耐盐的植物乳杆菌及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200728 |