CN107354106A - 一种用于培养高密度乳酸菌的培养基及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及微生物培养技术领域，尤其涉及一种培养高密度乳酸菌的培养基及其制备方法，所述培养高密度乳酸菌的培养基，包括以下重量份的物质：蛋白胨1～10份，氯化钠2～15份，谷物发酵液5～10份，乳制品2～6份，葡萄糖1～5份，乳糖2～15份，磷源0.8～6.8份，丙酮酸钠1.2～3.6份，氨基酸0.05～0.56份，抗生素0.2～5份，淀粉3～15份，茶多酚0.5～5份，金属盐0.05～0.5份，表面活性剂0.1～0.3份，果汁10～25份，蒸馏水1000份；本发明不仅在培养基中加入了细菌生长的必要营养，还在培养基中加入了适合乳酸菌生长的营养物质蔬菜汁和水果汁，水果汁对乳酸菌的生长具有促进作用，但是也抑制了其它细菌的生长，因而能够提高培养后乳酸菌的纯度，有助于乳酸菌的生长和繁殖，提高乳酸菌的浓度。

Description

一种用于培养高密度乳酸菌的培养基及其制备方法

技术领域

本发明涉及微生物培养技术领域，尤其涉及一种培养用于高密度乳酸菌的培养基及其制备方法。

背景技术

乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为18个属，共有200多种。乳酸菌作为一类被公认的安全的微生物，长期用于多种发酵制品的加工，已被人类食用了上千年。乳酸菌对人体健康的调节作用，如调节胃肠道菌群组成、预防和治疗各种腹泻、免疫调节、抗高血压、抗氧化性、降低血清胆固醇等已得到广泛研究和论述。除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。目前已被国内外生物学家所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的直接关系目前针对食品中的致病菌的检测一般都是按照有关标准方法进行，而相关标准方法的确立主要依赖于传统的分离鉴定方法。针对于每种致病菌均需要其特定的增菌培养基进行增菌，选择性增菌等步骤；同一样品需要同时进行多种致病菌的检测，这样就需要同时在多种特定的增菌培养基上进行样品的增菌处理，造成检测工作前期增菌过程繁琐。

目前，国内外都在探讨对乳酸菌的高密度培养技术，所采用的方法有进行气调培养的，有添加氨基酸等生长因子的，也有采用添加多肽类、低聚糖类或茶多酚类的物质进行培养的。利用上述技术进行培养，具有操作复杂、成本大、产物成分复杂和分离难等问题，不易推广应用。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的主要目的是提供一种用于培养高密度乳酸菌的培养基及其制备方法，有效提高乳酸菌的活力和浓度，提高检测效率。

为解决上述问题，本发明提供了一种用于培养高密度乳酸菌的培养基，包括以下重量份的物质：蛋白胨1～10份，氯化钠2～15份，谷物发酵液5～10份，乳制品2～6份，葡萄糖1～5份，乳糖2～15份，磷源0.8～6.8份，丙酮酸钠1.2～3.6份，氨基酸0.05～0.56份，抗生素0.2～5份，淀粉3～15份，茶多酚0.5～5份，金属盐0.05～0.5份，表面活性剂0.1～0.3份，果汁10～25份，蒸馏水1000份。

优选的，所述用于培养高密度乳酸菌的培养基，包括以下重量份的物质：蛋白胨2～8份，氯化钠4～12份，谷物发酵液6～10份，乳制品3～5份，葡萄糖1.2～4.6份，乳糖3～12份，磷源1.2～5.2份，丙酮酸钠2.2～2.8份，氨基酸0.12～0.48份，抗生素0.5～2.8份，淀粉5～10份，茶多酚1～3.8份，金属盐0.05～0.5份，表面活性剂0.1～0.3份，果汁12～20份，蒸馏水1000份。

优选的，所述用于培养高密度乳酸菌的培养基，包括以下重量份的物质：蛋白胨6份，氯化钠8份，谷物发酵液8份，乳制品4份，葡萄糖3.2份，乳糖8份，磷源3.6份，丙酮酸钠2.4份，氨基酸0.35份，抗生素1.6份，淀粉8份，茶多酚2.1份，金属盐0.25份，表面活性剂0.2份，果汁18份，蒸馏水1000份。

本发明对基础培养基的种类没有特殊的要求，可以为本领域技术人员所常知，例如，所述培养基选自MEM培养基、DMEM培养基、DMEM-F12培养基(1:1)、HB培养基、BEM培养基中的一种。

本发明中，蛋白胨为细菌的生长提供氮源和碳源，是维持细胞生长的重要因素，本发明中，所述蛋白胨可以为植物蛋白胨或动物蛋白胨，优选的，所述蛋白胨为大豆蛋白胨、血液蛋白胨、胰蛋白胨、肉蛋白胨中的至少一种。

优选的，所述谷物发酵液为大米、玉米、高粱、小麦、小米、大豆中的至少一种的发酵液。

乳制品中含有丰富的营养元素，能够为乳酸杆菌的生长提供蛋白质、氨基酸等微量元素，促进乳酸杆菌的生长，优选的，所述乳制品为奶粉、酸奶、炼乳、奶油、干酪中的至少一种。

磷酸盐既可以为微生物提供足够的磷元素，也可以缓冲培养基中pH值，优选的，所述磷源为磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾和磷酸二氢钾中的至少一种。

氨基酸是生长因子的一种，微生物生长所需要的生长因子量很小，而且微生物本身不能合成或合成量不足，不能满足机体生长所需要，微生物的生长或酶的合成需要氨基酸，但是微生物本身缺乏合成氨基酸的能力，必须在培养基中添加氨基酸或含有氨基酸的多肽，才能维持细菌的正常生长。优选的，所述氨基酸为甘氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-精氨酸、L-组氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-酪氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-色氨酸、L-缬氨酸、L-天冬氨酸和L-天冬酰胺中的至少一种。

表面活性剂可以改变细胞的通透性，从而有利于在细胞合成过程中，酶的释放，优选的，所述表面活性剂为SDS和或CTAB。

抗生素能够抑制其它菌种的繁殖，防止其它菌种对培养基造成的污染，优选的，所述抗生素为β-内酰胺类抗生素、氨基糖苷类抗生素、多肽类抗生素中的至少一种，更优选的，所述β-内酰胺类抗生素为青霉素G、青霉素V、苄星青霉素、甲氧西林、萘夫西林、苯唑西林、氟氯西林、氯唑西林、双氯西林中的至少一种；所述氨基糖苷类抗生素为霉素、庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素、丁胺卡那霉素、新霉素、核糖霉素、小诺霉素、阿斯霉素中的至少一种；所述多肽类抗生素为万古霉素、去甲万古霉素、替考拉宁中的至少一种。

金属盐也是维持细胞生长的另一个重要因素，优选的，所述金属盐为铁盐、铜盐、锌盐、钴盐、锰盐、铬盐、硒盐、镍盐、钼盐、钒盐、锡盐、锶盐中的至少一种。

水果汁呈酸性，适宜乳酸菌的生长，能抑制其它细菌的生殖繁衍，因此具有选择性培养乳酸菌的作用，优选的，所述水果汁为番茄汁、苹果汁、葡萄汁、樱桃汁、蓝莓汁、桃汁、西瓜汁、芒果汁、猕猴桃汁、石榴汁、桑葚汁中的至少一种。

一种用于培养高密度乳酸菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：

谷物发酵液的制备：将谷物在5～6倍的水中浸泡5～48h，然后将谷物研磨得到谷物浆料，然后在谷物浆料中加入酵母，发酵12～72h后，过滤除去沉淀物，得到谷物发酵液；

果汁制备：将水果和1～2倍的水在榨汁机中榨汁，榨汁结束后，过滤得到果汁；

将蛋白胨，氯化钠，谷物发酵液，乳制品，葡萄糖，乳糖，磷源，丙酮酸钠，氨基酸，抗生素，淀粉，茶多酚，金属盐，表面活性剂，果汁在水中混合均匀，然后调节pH值至7.2-7.5，高温灭菌后，得到乳酸菌培养基。

与现有技术相比，本发明具有以下技术效果：

本发明不仅在培养基中加入了细菌生长的必要营养，还在培养基中加入了适合乳酸菌生长的营养物质蔬菜汁和水果汁，水果汁对乳酸菌的生长具有促进作用，但是也抑制了其它细菌的生长，因而能够提高培养后乳酸菌的纯度，有助于乳酸菌的生长和繁殖，提高乳酸菌的浓度。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

一种用于培养高密度乳酸菌的培养基，包括以下重量份的物质：大豆蛋白胨6份，氯化钠8份，大米发酵液8份，奶粉4份，葡萄糖3.2份，乳糖8份，磷源3.6份，丙酮酸钠2.4份，甘氨酸0.35份，β-内酰胺类抗生素1.6份，淀粉8份，茶多酚2.1份，金属盐0.25份，表面活性剂0.2份，番茄汁18份，蒸馏水1000份；

本发明还提供了一种用于培养高密度乳酸菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：

大米发酵液的制备：将大米在5倍的水中浸泡20h，然后将大米研磨得到大米浆料，然后在大米浆料中加入酵母，发酵30h后，过滤除去沉淀物，得到大米发酵液；

番茄汁制备：将番茄和1倍的水在榨汁机中榨汁，榨汁结束后，过滤得到番茄汁；

将大豆蛋白胨，氯化钠，大米发酵液，奶粉，葡萄糖，乳糖，磷源，丙酮酸钠，甘氨酸，β-内酰胺类抗生素，淀粉，茶多酚，金属盐，表面活性剂，番茄汁在水中混合均匀，然后调节pH值至7.2，高温灭菌后，得到乳酸菌培养基。

实施例2

一种用于培养高密度乳酸菌的培养基，包括以下重量份的物质：血液蛋白胨2份，氯化钠4份，玉米发酵液6份，酸奶3份，葡萄糖1.2份，乳糖3份，磷源1.2份，丙酮酸钠2.2份，L-丙氨酸0.12份，氨基糖苷类抗生素0.5份，淀粉5份，茶多酚1份，金属盐0.05份，表面活性剂0.1份，苹果汁12份，蒸馏水1000份；

本发明还提供了一种用于培养高密度乳酸菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：

玉米发酵液的制备：将玉米在5倍的水中浸泡24h，然后将玉米研磨得到玉米浆料，然后在玉米浆料中加入酵母，发酵36h后，过滤除去沉淀物，得到玉米发酵液；

苹果汁制备：将苹果和1倍的水在榨汁机中榨汁，榨汁结束后，过滤得到苹果汁；

将血液蛋白胨，氯化钠，谷物发酵液，酸奶，葡萄糖，乳糖，磷源，丙酮酸钠，L-丙氨酸，氨基糖苷类抗生素，淀粉，茶多酚，金属盐，表面活性剂，苹果汁在水中混合均匀，然后调节pH值至7.2，高温灭菌后，得到乳酸菌培养基。

实施例3

一种用于培养高密度乳酸菌的培养基，包括以下重量份的物质：胰蛋白胨8份，氯化钠12份，谷物发酵液10份，炼乳5份，葡萄糖4.6份，乳糖12份，磷源5.2份，丙酮酸钠2.8份，L-谷氨酸0.48份，氨基糖苷类抗生素2.8份，淀粉10份，茶多酚3.8份，金属盐0.5份，表面活性剂0.3份，葡萄汁20份，蒸馏水1000份；

本发明还提供了一种用于培养高密度乳酸菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：

高粱发酵液的制备：将高粱在6倍的水中浸泡48h，然后将高粱研磨得到高粱浆料，然后在高粱浆料中加入酵母，发酵12h后，过滤除去沉淀物，得到高粱发酵液；

葡萄汁制备：将葡萄和1倍的水在榨汁机中榨汁，榨汁结束后，过滤得到葡萄汁；

将胰蛋白胨，氯化钠，谷物发酵液，炼乳，葡萄糖，乳糖，磷源，丙酮酸钠，L-谷氨酸，氨基糖苷类抗生素，淀粉，茶多酚，金属盐，表面活性剂，葡萄汁在水中混合均匀，然后调节pH值至7.3，高温灭菌后，得到乳酸菌培养基。

实施例4

一种用于培养高密度乳酸菌的培养基，包括以下重量份的物质：肉蛋白胨1份，氯化钠2份，谷物发酵液5份，奶油2份，葡萄糖1份，乳糖2份，磷源0.8份，丙酮酸钠1.2份，L-谷氨酰胺0.05份，多肽类抗生素0.2份，淀粉3份，茶多酚0.5份，金属盐0.05份，表面活性剂0.1份，桃汁10份，蒸馏水1000份；

本发明还提供了一种用于培养高密度乳酸菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：

小米发酵液的制备：将小米在6倍的水中浸泡5h，然后将小米研磨得到小米浆料，然后在小米浆料中加入酵母，发酵72h后，过滤除去沉淀物，得到小米发酵液；

桃汁制备：将桃和2倍的水在榨汁机中榨汁，榨汁结束后，过滤得到桃汁；

将肉蛋白胨，氯化钠，谷物发酵液，奶油，葡萄糖，乳糖，磷源，丙酮酸钠，L-谷氨酰胺，多肽类抗生素，淀粉，茶多酚，金属盐，表面活性剂，桃汁在水中混合均匀，然后调节pH值至7.5，高温灭菌后，得到乳酸菌培养基。

实施例5

一种用于培养高密度乳酸菌的培养基，包括以下重量份的物质：血液蛋白胨10份，氯化钠15份，大豆发酵液10份，干酪6份，葡萄糖5份，乳糖5份，磷源6.8份，丙酮酸钠3.6份，L-精氨酸0.56份，氨基糖苷类抗生素5份，淀粉15份，茶多酚5份，金属盐0.5份，表面活性剂0.3份，蓝莓汁25份，蒸馏水1000份；

本发明还提供了一种用于培养高密度乳酸菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：

大豆发酵液的制备：将大豆在6倍的水中浸泡48h，然后将大豆研磨得到大豆浆料，然后在大豆浆料中加入酵母，发酵12h后，过滤除去沉淀物，得到大豆发酵液；

蓝莓汁制备：将蓝莓和2倍的水在榨汁机中榨汁，榨汁结束后，过滤得到蓝莓汁；

将血液蛋白胨，氯化钠，谷物发酵液，干酪，葡萄糖，乳糖，磷源，丙酮酸钠，L-精氨酸，氨基糖苷类抗生素，淀粉，茶多酚，金属盐，表面活性剂，蓝莓汁在水中混合均匀，然后调节pH值至7.3，高温灭菌后，得到乳酸菌培养基。

上述描述仅是对本发明部分实施例的描述，并非对本发明范围的任何限定，本行业的普通技术人员可根据本发明对上述实施例做出改进或修改，但均属于本发明保护范围。

Claims (10)

1.一种用于培养高密度乳酸菌的培养基，其特征在于，包括以下重量份的物质：蛋白胨1～10份，氯化钠2～15份，谷物发酵液5～10份，乳制品2～6份，葡萄糖1～5份，乳糖2～15份，磷源0.8～6.8份，丙酮酸钠1.2～3.6份，氨基酸0.05～0.56份，抗生素0.2～5份，淀粉3～15份，茶多酚0.5～5份，金属盐0.05～0.5份，表面活性剂0.1～0.3份，果汁10～25份，蒸馏水1000份。

2.根据权利要求1所述的用于培养高密度乳酸菌的培养基，其特征在于，包括以下重量份的物质：蛋白胨2～8份，氯化钠4～12份，谷物发酵液6～10份，乳制品3～5份，葡萄糖1.2～4.6份，乳糖3～12份，磷源1.2～5.2份，丙酮酸钠2.2～2.8份，氨基酸0.12～0.48份，抗生素0.5～2.8份，淀粉5～10份，茶多酚1～3.8份，金属盐0.05～0.5份，表面活性剂0.1～0.3份，果汁12～20份，蒸馏水1000份。

3.根据权利要求2所述的用于培养高密度乳酸菌的培养基，其特征在于，包括以下重量份的物质：蛋白胨6份，氯化钠8份，谷物发酵液8份，乳制品4份，葡萄糖3.2份，乳糖8份，磷源3.6份，丙酮酸钠2.4份，氨基酸0.35份，抗生素1.6份，淀粉8份，茶多酚2.1份，金属盐0.25份，表面活性剂0.2份，果汁18份，蒸馏水1000份。

4.根据权利要求1～3任意一项所述的用于培养高密度乳酸菌的培养基，其特征在于，所述蛋白胨为大豆蛋白胨、血液蛋白胨、胰蛋白胨、肉蛋白胨中的至少一种。

5.根据权利要求4所述的用于培养高密度乳酸菌的培养基，其特征在于，所述谷物发酵液为大米、玉米、高粱、小麦、小米、大豆中的至少一种的发酵液。

6.根据权利要求4所述的用于培养高密度乳酸菌的培养基，其特征在于，所述乳制品为奶粉、酸奶、炼乳、奶油、干酪中的至少一种。

7.根据权利要求4所述的用于培养高密度乳酸菌的培养基，其特征在于，所述氨基酸为甘氨酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-精氨酸、L-组氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-酪氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-色氨酸、L-缬氨酸、L-天冬氨酸和L-天冬酰胺中的至少一种。

8.根据权利要求1所述的用于培养高密度乳酸菌的培养基，其特征在于，所述抗生素为β-内酰胺类抗生素、氨基糖苷类抗生素、多肽类抗生素中的至少一种。

9.根据权利要求1所述的用于培养高密度乳酸菌的培养基，其特征在于，所述果汁为番茄汁、苹果汁、葡萄汁、樱桃汁、蓝莓汁、桃汁、西瓜汁、芒果汁、猕猴桃汁、石榴汁、桑葚汁中的至少一种。

10.一种根据权利要求1～9任意一项所述的用于培养高密度乳酸菌的培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

谷物发酵液的制备：将谷物在5～6倍的水中浸泡5～48h，然后将谷物研磨得到谷物浆料，然后在谷物浆料中加入酵母，发酵12～72h后，过滤除去沉淀物，得到谷物发酵液；

果汁制备：将水果和1～2倍的水在榨汁机中榨汁，榨汁结束后，过滤得到果汁；

将蛋白胨，氯化钠，谷物发酵液，乳制品，葡萄糖，乳糖，磷源，丙酮酸钠，氨基酸，抗生素，淀粉，茶多酚，金属盐，表面活性剂，果汁在水中混合均匀，然后调节pH值至7.2-7.5，高温灭菌后，得到乳酸菌培养基。