CN111440870B - CircZCCHC11及其翻译的肽段在肿瘤生长和转移预测、预后评估和治疗中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物技术和医学领域，具体涉及由CircZCCHC11核酸片段及其翻译的肽段ZCCHC11‑274aa在肿瘤生长预测、转移预测、预后评估以及治疗中的相关性及其应用，CircZCCHC11和/或ZCCHC11‑274aa作为肿瘤早期诊断、治疗肿瘤、缓解或防止肿瘤转移和/或改善肿瘤预后的药物靶点的应用。本发明所述的CircRNA的组织特异性和稳定性，已经使CircRNA成为一种良好的生物标志物，经试验证实，CircZCCHC11核酸片段及肽段ZCCHC11‑274aa在肿瘤生长预测、转移预测、预后评估和治疗中发挥显著而稳定的作用。

Description

CircZCCHC11及其翻译的肽段在肿瘤生长和转移预测、预后评 估和治疗中的应用

技术领域

本发明涉及生物技术和医学领域，具体涉及由CircZCCHC11(CircBank ID:hsa_CircZCCHC11_007)核酸片段及其翻译的肽段ZCCHC11-274aa在肿瘤生长预测、转移预测、预后评估以及治疗中的相关性及其应用。

背景技术

CircRNA(环状RNA)可作为药物或临床诊断的潜在生物标记物分子。研究表明，生命体中除了线性的RNA分子，还大量存在着一类闭合环状的RNA分子，他们在个体发育、不同组织和疾病中都具有特异性表达。经测序鉴定，这些CircRNA分子通常由蛋白编码基因的2—4个的外显子部分，通过前面外显子的5’端与后面外显子的3’端互补结合环化而来。由于CircRNA的环状封闭特性，使其可以逃避核酸外切酶的作用。因此，CircRNA在细胞中可以长期稳定存在，是近年RNA领域最新的研究热点，也正是因为它的稳定性很容易让我们联想到：CircRNA是否可以作为药物或临床诊断的潜在生物标记物分子。

环状RNA具有重要的生理功能。在对CircRNAs结构和功能研究的基础上，发现它们在多种疾病，如动脉粥样硬化，神经系统紊乱，糖尿病和肿瘤等疾病发生发展过程中，发挥非常重要的作用。主要有以下几种功能：1)CircRNAs可以作为“sponge”海绵吸附miRNA，抑制其功能；2)CircRNA通过碱基互补配对直接调控其他RNA水平；3)CircRNA能与蛋白质结合，抑制蛋白质活性、募集蛋白质复合体的组分或/和调控蛋白质的活性；4)CircRNA也可以作为翻译的模板指导蛋白质的合成。

虽然其具体功能尚未完全明确，但研究环状RNA具有重要的意义：1)CircRNA独具的竞争性内源(ceRNA)特征可为药物开发提供新的思路；2)CircRNA的组织特异性和稳定性，已经使CircRNA成为一种良好的生物标志物；3)CircRNA的研究可为生命的进化研究提供新的方向。

环状RNA作为新兴的研究热点，近年对其功能等的研究主要集中在肿瘤上，占到1/3到1/2的比例，其除作为肿瘤诊断生物标记物外，其本身或上游调控基因可作为肿瘤治疗的靶点。

但目前，国内外尚无报道使用环状RNA翻译的蛋白来作为肿瘤标记物或肿瘤转移及预后相关性和治疗的研究报道。而本领域迫切需要寻找到可有效用于肿瘤诊断、肿瘤治疗方案选择、肿瘤预后评估的重要靶标分子，并将其用于这些用途中。

发明内容

针对以上不足，本发明提供一种可用于肿瘤诊断、肿瘤治疗方案选择、肿瘤预后评估的新途径。

本发明通过以下方案达到上述目的：

在本发明的第一方面中，提供CircZCCHC11(CircBank ID:hsa_CircZCCHC11_007)和/或ZCCHC11-274aa作为肿瘤早期诊断、治疗肿瘤、缓解或防止肿瘤转移和/或改善肿瘤预后的药物靶点的应用。

在本发明的第二方面中，提供了一种用于检测CircZCCHC11(CircBank ID:hsa_CircZCCHC11_007)和/或ZCCHC11-274aa水平的物质在预测肿瘤生长、肿瘤转移、肿瘤预后评估或诊断肿瘤的产品中的应用。

在一些实施方式中，所述检测针对罹患或疑似罹患肿瘤或具有患肿瘤风险或曾罹患肿瘤但已治愈的哺乳动物或获自所述哺乳动物的样品进行。

在一些实施方式中，所述哺乳动物选自：灵长类动物、啮齿类动物、畜牧类哺乳动物、哺乳动物宠物等，例如人、猿、猩猩、猴、牛、羊、马、骆驼、猪、狗、猫、兔、鼠等。

在一些实施方式中，所述哺乳动物已采用本领域已知的方式鉴定为罹患肿瘤或已治愈肿瘤。

在一些实施方式中，所述样品选自获自所述哺乳动物的：组织或细胞样品，如乳腺组织或细胞样品、癌组织或细胞样品、癌旁组织或细胞样品。

在一些实施方式中，所述样品是新鲜样品、冻存样品、固定样品(例如福尔马林固定样品)、包埋样品(例如石蜡包埋样品)。

在一些实施方式中，所述用于检测CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa表达水平的物质是用于在基因水平和/或蛋白质水平上检测CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa的物质。

在一些实施方式中，所述用于检测CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa表达水平的物质是用于选自下组的一种或多种检测技术或方法中的物质：免疫组织化学法(如免疫荧光分析、ELISA、免疫胶体金法)、Western印迹法、Northern印迹法、PCR法、生物芯片法。

在一些实施方式中，所述用于检测CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa表达水平的物质选自对CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa具有特异性的物质，例如抗ZCCHC11-274aa抗体或其抗原结合片段，优选单克隆抗体；CircZCCHC11特异性的探针、基因芯片、PCR引物、gRNA(向导RNA)等。

在一些实施方式中，所述用于检测CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa表达水平的物质带有可检测标记物，例如，所述选自下组的可检测标记物：放射性同位素、荧光团、化学发光部分、酶、酶底物、酶辅因子、酶抑制剂、染料、金属离子、或配体(如，生物素或半抗原)。

在一些实施方式中，所述肿瘤选自：乳腺癌，脑胶质瘤，胃癌，肾癌，结直肠癌、食管癌等。

在一些实施方式中，乳腺癌选自如下分型：浸润性导管癌、非侵润性导管癌；或者，管腔A型、管腔B型、管腔-HER2型、HER2过表达型、基底细胞样型、TNP-非基底型；或者，激素受体阳性型、HER2/neu受体阳性型、三阴性型。

在一些实施方式中，与正常对照值相比，所述对象或获自所述对象的样品中ZCCHC11-274aa水平提高，表明所述对象易于或已发生癌症转移，或表明所述对象的癌症预后不良，或表明所述对象已患有癌症。

在一些实施方式中，所述正常对照值获自未罹患肿瘤对象的样品、获自所述对象正常组织的样品、正常对象的CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa表达水平。

在一些实施方式中，所述正常对照值为：由非肿瘤的正常生物样品(如获自健康人或待测对象正常组织的样品)中测得的CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa分子水平、通过统计学确定的群体标准水平、或经标准化的水平。

在一些实施方式中，所述产品为检测试剂盒。

在一些实施方式中，所述检测试剂盒还包含选自下组的一种或多种物质：容器、缓冲剂、助剂、溶剂、阴性对照物、阳性对照物、使用说明书。

在一个实施方式中，所述的检测试剂盒是基于免疫酶标法的免疫组织化学方法检测生物样品中ZCCHC11-274aa表达的试剂盒，其中包含：封闭液(如10％山羊血清)、抗ZCCHC11-274aa抗体(例如兔抗人或小鼠ZCCHC11-274aa单克隆抗体或多克隆抗体)、二抗(如抗兔生物素化二抗)、标记的结合物(如HRP标记链亲和素)、底物缓冲液(如DAB底物缓冲液)、显色液(如DAB显色液)和/或底物溶液。

在一个实施方式中，所述的检测试剂盒是基于RT-qPCR方法检测生物样品中CircRNA ZCCHC11的表达的检测试剂盒，其中包含：提取试剂(Trizol)、去除DNA试剂(DNaseI)、反转录试剂(RT Mix、Enzyme Mix、Random hexamers)、real time qPCR试剂(

Green Master Mix、Forwardprimer、Reverse primer)。

在本发明的第三方面，还提供了用于在对象中预测肿瘤转移、对肿瘤预后评估或诊断肿瘤的方法，所述方法包括：检测对象或获自对象的样品中CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa的水平的步骤。

在一些实施方式中，与正常对照相比，所述对象或获自所述对象的样品中CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa水平提高，表明所述对象易于或已发生肿瘤转移，或表明所述对象的肿瘤患者预后不良，或表明所述对象已患有癌症。

在本发明的第四方面，提供了抑制CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa和/或其基因的抑制剂在制备用于治疗肿瘤、缓解或防止肿瘤转移和/或改善肿瘤预后的药物中的应用。

在一些实施方式中，所述抑制剂选自：与CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa直接结合的抑制剂、阻断CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa与其受体或配体结合的抑制剂、CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa表达水平的抑制剂、降低CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa表达水平的抑制剂、促进CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa降解的抑制剂、用于敲除或敲减CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa表达的物质，例如能够下调CircZCCHC11的表达和/或ZCCHC11-274aa的蛋白表达水平的相关启动子元件、重组质粒、表达载体和相关抗体。

在一些实施中，所述抑制剂选自：抗ZCCHC11-274aa抗体、抗ZCCHC11-274aa受体的抗体、针对CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa的CRISPR/Cas9系统、针对Circ-ZCCHC11和/或CircZCCHC11的干扰RNA、针对CircZCCHC11和/或Circ-ZCCHC11的反义寡核苷酸、CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa表达和/或功能抑制化合物。

在一些实施方式中，所述针对CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa的CRISPR/Cas9系统包含：表达有Cas9酶的载体pCD513B-Cas9和表达有guide RNA(gRNA)的载体psk-U6-sgRNA；表达针对TUT4(NM_015269)基因不同位点选取的gRNA序列。

在一些实施方式中，所述药物包含：(a)CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa和/或其基因的抑制剂；和(b)药学上或保健品学可接受的载体。

在一些实施方式中，所述药物还包含其他抗肿瘤物质，例如DNA损伤类化疗药、多靶向酪氨酸激酶抑制剂、细胞增殖抑制剂、血管增生抑制剂、烷化剂、抗代谢物质、抗肿瘤抗生素、植物类抗癌物质、激素或免疫抑制剂。

在一些实施方式中，所述药物为固态(如颗粒剂、片剂、冻干粉、栓剂、胶囊、舌下含片)或液态(如口服液、溶液剂或糖浆剂)形式。

在一些实施方式中，所述药物的形式适于口服、胃肠外(如静脉内、动脉内、腹膜内、肌肉内、真皮内或皮下给药)、皮下、腹膜内、肺内、鼻内、瘤内、局部给药。

在本发明的第五方面，提供了一种筛选治疗肿瘤、缓解或防止肿瘤转移和/或改善肿瘤预后的候选药物的方法，所述方法包括测试所述候选药物对对象或获自对象的样品中CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa水平的影响，其中，在使用所述候选药物后，CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa水平降低表明所述候选药物具有治疗肿瘤、缓解或防止肿瘤转移和/或改善肿瘤预后的效果。

在一些实施方式中，所述降低相对于获自未罹患肿瘤对象的样品、获自所述对象正常组织的样品、正常对象的CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa水平。

在一些实施方式中，所述降低相对于正常对照值而言，所述正常对照值为：由非肿瘤的正常生物样品(如获自健康人或待测对象正常组织的样品)中测得的CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa分子水平、通过统计学确定的群体标准水平、或经标准化的水平。

在本发明的第六方面，提供了一种用于预测肿瘤生长和转移、对肿瘤预后评估或诊断肿瘤的产品，其包含：用于检测CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa水平的物质。

在本发明的第七方面，还提供了一种药物组合物，其包含：作为治疗活性物质的抑制CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa和/或其基因的抑制剂以及药学上可接受的载体。

该药物组合物中的活性物质以及性能等所涉及的特征可如本文中所限定或阐述。

在本发明的第八方面，还提供了一种在对象中肿瘤诊断、治疗肿瘤、缓解或防止肿瘤转移和/或改善肿瘤预后的方法，所述方法包括：给予所述对象CircZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa和/或其基因的抑制剂或包含所述抑制剂的药物。

本发明所述的CircZCCHC11优选为SEQ ID NO.1所述的序列。

本发明所述的ZCCHC11-274aa优选为SEQ ID NO.2所述的序列。

本发明所述的CircZCCHC11除了包括CircZCCHC11本身以外，还可以包括包含了其本身序列的序列或核酸。

本发明所述的ZCCHC11-274aa除了包括ZCCHC11-274aa本身以外，还可以包括包含了其本身序列的序列或蛋白。

本发明所述的CircRNA的组织特异性和稳定性，已经使CircRNA成为一种良好的生物标志物，经试验证实，CircZCCHC11核酸片段及肽段ZCCHC11-274aa在肿瘤生长预测、转移预测、预后评估和治疗中发挥显著而稳定的作用。

附图说明

下面结合附图对本发明作进一步说明，其中这些显示仅为了图示说明本发明的实施方案，而不是为了局限本发明的范围。

图1是代表染色体chr8(q24.21)位置转录lncRNAPVT1的示意图。

图2是代表染色体chr1(p32.3)位置转录ZCCHC11(NM_015269)的示意图。

图3是ZCCHC11-274aa蛋白在乳腺癌肿瘤组织中高表达western blot结果。

图4是ZCCHC11-274aa蛋白在乳腺癌肿瘤组织中高表达的western blot统计结果图。

图5是ZCCHC11-274aa蛋白在乳腺癌肿瘤组织中高表达的免疫组化结果。

图6是CircZCCHC11在各癌症临床组织样本中的相对含量检测结果。

图7是乳腺癌肿瘤组织中内源性ZCCHC11-274aa的IP富集的考马斯亮蓝图像。

图8是内源性ZCCHC11-274aa的跨环化位点的肽段质谱图。

图9是乳腺癌组织中ZCCHC11-274aa表达与患者总体生存率的Kaplan-Meier生存曲线。

具体实施方式

本发明的目的之一在于寻找到可有效用于肿瘤转移预测以及患者预后评估的分子并提供相应的检测产品。

本发明的另一目的在于提供有效治疗肿瘤的靶标、药物及方法。

我们在研究中发现，CircZCCHC11及ZCCHC11-274aa在乳腺癌中高表达，以乳腺癌为例，乳腺癌患者的肿瘤组织中CircZCCHC11及ZCCHC11-274aa的表达与患者淋巴结转移相关，并与肿瘤大小、分期密切相关，其高表达与患者的总生存时间短、预后差显著相关。过表达小鼠乳腺癌细胞Circ-ZCCHC11分子，能够显著促进肿瘤生长及转移。由此本申请提供了CircZCCHC11及ZCCHC11-274aa分子在用于对象中肿瘤生长预测、肿瘤转移预测以及肿瘤预后评估、肿瘤治疗中的新用途，并提供了相应的检测试剂盒。以上进展提示CircZCCHC11及ZCCHC11-274aa的检测及干预治疗方法有望成为肿瘤诊断及治疗新的增长点。

本文中提供的所有数值范围旨在清楚地包括落在范围端点之间的所有数值及它们之间的数值范围。可对本发明提到的特征或实施例提到的特征进行组合。本说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。

如本文所用，“含有”、“具有”或“包括”包括了“包含”、“主要由……构成”、“基本上由……构成”、和“由……构成”；“主要由……构成”、“基本上由……构成”和“由……构成”属于“含有”、“具有”或“包括”的下位概念。

1.Circ-ZCCHC11及ZCCHC11-274aa及其检测物质

如本文所用，术语“ZCCHC11-274aa蛋白或多肽”与“Circ-ZCCHC11基因编码的蛋白质或多肽”可互换使用，均是指由CircRNAZCCHC11基因编码的蛋白质或多肽、它们的保守性变异多肽、或其同源蛋白或多肽、或其活性片段(例如ZCCHC11-274aa结合结构域)。

如本文所用，术语“Circ-ZCCHC11”与“hsa_CircZCCHC11_007”与“hsa_Circ_0113609”可互换使用，指Circ-ZCCHC11是由ZCCHC11(chr1:52991234-52992045)剪切形成。如图1和图2所示。从图2可以看出，CircZCCHC11由第二外显子剪切而成，B代表Circ-ZCCHC11的环化位点鉴定结果，C代表Circ-ZCCHC11的全序列。

上述核酸或蛋白的序列具体如下：

CircBank ID:hsa_CircZCCHC11_007(SEQ ID NO.1)

TTTGCTTGCCTAAACTGGACTTGAAGCAATTTAAACTACTGGAGATCTGCCATTTTATAATATCACAATTGGAAAGAAACAGATTTTCAAATAATGGAAGAGTCTAAAACCTTAAAAAGTGAAAATCATGAACCAAAGAAGAATGTTATTTGTGAAGAAAGCAAAGCAGTTCAAGTTATAGGTAATCAAACATTGAAAGCTAGAAATGATAAATCCGTAAAAGAAATTGAGAACAGCTCTCCAAATAGGAATAGTAGTAAAAAAAATAAGCAAAATGATATTTGTATAGAAAAAACAGAAGTTAAATCATGTAAAGTAAATGCTGCCAACCTTCCAGGTCCTAAAGATTTGGGGTTAGTCCTTCGAGATCAAAGTCATTGCAAAGCAAAAAAATTTCCTAATTCACCGGTGAAAGCCGAAAAGGCAACCATTTCACAGGCAAAATCAGAAAAGGCAACCAGTTTACAGGCAAAAGCAGAAAAATCACCAAAGTCACCTAATTCAGTGAAAGCAGAAAAAGCATCCAGTTATCAGATGAAGTCAGAAAAAGTACCAAGTTCACCAGCAGAAGCAGAAAAGGGACCCAGTTTACTGTTGAAAGACATGAGACAGAAGACAGAATTACAACAGATTGGAAAAAAAATTCCAAGCTCCTTTACTTCTGTGGACAAAGTGAATATTGAAGCTGTAGGGGGAGAAAAATGTGCTCTGCAAAACTCACCACGATCTCAGAAGCAACAGACATGTACAGATAATACTGGTGATTCTGATGATAGTGCTTCAGGAATTGAAGACGTATCGGACGATTTAA

而，鼠源CircRNA(Circ-ZCCHC11)(SEQ ID NO.2)

GTCAGATTGGAAAGAGTCAGATTTTCAAATAATGGAAGAGCCCAAGACTTCTAAAAACGAAAATCATGAACCAAAGAAGAATATTATTTGTGAAGAAAGCAAAGCAGTTAAAATTATATCTAATCAAACCTTGAAGCCTAGAAATGATAAGTCAGAAATTGGGACCAGCTCTCTGAATAGAAATAGTAGTAAAAAAACCAAGCAAAATGATATTTGTATAGAAAAAACAGAAGCTAAATCATGTAAAGTAAACGCTGCCAGTGTTCCAGGCCCTAAAGATTTGGGGTTAGTACATCGAGATCAAAGTCATTGCAAAATGAAAAAGTTACCAAATTCACCCATGAAAGCCCAGAAGGGATCTTCACAGACAAAATTAGAAAAGACACCTAGTTTACAGACAAAAGCAGAAAAAGTACCAAAGTCTCCAAATTTACCAGTAAAAGCAGAAAAAGCGCCCTGTACAACAGCAGAAGCAACAACAGAAAAAGCACTTAATTCACAGAGAAAAGAAGAAAACACACCCACTTCTCAGATGAAATTACAGAAGACACCCAGATCACCTTTAGAGCCAGAAAATGTGCCCAGTTTACTATTGAAAGAAAATGTGAAACAGACAGAATCACAACAGACTGGGAAGAAACTTACAAGCTCCTTTGTTTCTATGGATAAAAGGAAGAGTGAAGCTCTACAGGGAGAAAAGTCAGCTCTGGAAAACTCATCACTATCTCAGAAGCAGCAGACTCAGACAGATAATATTGCTGATTCTGATGACAGTGCTTCAGGGATTGAAGATACAGCAGATGATTTGA

ZCCHC11-274aa氨基酸序列(SEQ ID NO.3)：

MEESKTLKSE NHEPKKNVIC EESKAVQVIG NQTLKARNDK SVKEIENSSP NRNSSKKNKQNDICIEKTEV KSCKVNAANL PGPKDLGLVL RDQSHCKAKK FPNSPVKAEK ATISQAKSEK ATSLQAKAEKSPKSPNSVKA EKASSYQMKS EKVPSSPAEA EKGPSLLLKD MRQKTELQQI GKKIPSSFTS VDKVNIEAVGGEKCALQNSP RSQKQQTCTD NTGDSDDSAS GIEDVSDDLI CLPKLDLKQF KLLEICHFII SQLERNRFSNNGRV

2.检测物质

如本文所用，术语“ZCCHC11-274aa检测物质”、或“检测ZCCHC11-274aa分子的试剂”或“检测ZCCHC11-274aa表达量的试剂”可互换使用，均是指特异性针对ZCCHC11-274aa分子，且可用于直接或间接检测出ZCCHC11-274aa分子的存在和/或含量的物质。这些检测物质可在基因水平或蛋白质水平上检测ZCCHC11-274aa。

如本文所用，术语Circ-ZCCHC11“检测物质”、或“检测Circ-ZCCHC11分子的试剂”或“检测Circ-ZCCHC11表达量的试剂”可互换使用，均是指特异性针对Circ-ZCCHC11分子，且可用于直接或间接检测出Circ-ZCCHC11分子的存在和/或含量的物质。这些检测物质可在基因水平水平上检测Circ-ZCCHC11。

由于Circ-ZCCHC11分子的序列在本领域中是已知的，本领域普通技术人员可基于常规手段制备或通过市售获得特异性针对Circ-ZCCHC11分子的试剂。例如，本发明中可用的检测试剂包括但不限于：对Circ-ZCCHC11分子具有检测特异性的分子探针、RT-qPCR引物等。

由于ZCCHC11-274aa分子的序列在本文中公开，本领域普通技术人员可基于常规手段制备或通过市售获得特异性针对ZCCHC11-274aa分子的试剂。例如，本发明中可用的检测试剂包括但不限于：对ZCCHC11-274aa分子具有检测特异性的抗体。

并且，为了便于检测，本发明的检测试剂还可带有可检测标记，所述可检测标记包括但不限于：放射性同位素、荧光团、化学发光部分、酶、酶底物、酶辅因子、酶抑制剂、染料、金属离子、配体(如，生物素或半抗原)等。

本发明的检测试剂可存在于溶液中、固定于载体(如基片、吸附物)上或以其它本领域中常规的方式存在，只要该存在方式适于对生物样品中Circ-ZCCHC11及ZCCHC11-274aa检测即可。例如，当本发明的检测试剂为核苷酸探针时，其可以生物芯片(或称“微阵列”)的形式存在。

3.检测产品

本发明中还提供了一种用于预测肿瘤生长、预测肿瘤转移、对肿瘤预后评估或诊断肿瘤的产品，其包含：用于检测Circ-ZCCHC11及ZCCHC11-274aa水平的物质，以及可任选的，用于预测肿瘤生长、预测肿瘤转移、对肿瘤预后评估或诊断肿瘤的其他物质，例如现有肿瘤标志物的检测物质。

根据所用检测方法的需要，可选择适当的Circ-ZCCHC11及ZCCHC11-274aa检测物质，并将其制成适于所用检测方法的产品，如试剂盒。本领域普通技术人员可根据实际条件和需要对检测方式和产品中所含试剂进行调整和改变。

由此，本文中还提供了一种产品(如检测试剂盒)，其包含：(i)检测有效量的用于检测Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa的一种或多种试剂；(ii)可任选地，选自下组的一种或多种物质：容器、使用说明书、阳性对照物、阴性对照物、缓冲剂、助剂或溶剂，例如用于混悬或固定细胞的溶液，可检测的标签或标记，使核酸易于杂交的溶液，用于裂解细胞的溶液，或用于核酸纯化的溶液。

在实施例1中，本文提供了一种适于通过免疫组织化学方法检测生物样品中ZCCHC11-274aa的表达的检测试剂盒。该检测试剂盒可包含：封闭液，例如10％山羊血清；一抗，例如兔抗人或小鼠ZCCHC11-274aa单克隆抗体；二抗，例如标记(如HRP标记的)或未标记的羊抗兔二抗；底物缓冲液，例如DAB底物缓冲液；显色液；以及可选的装有上述试剂的容器及使用说明书。

在实施例2中，本文提供了一种适于通过RT-qPCR方法检测生物样品中CircRNAZCCHC11的表达的检测试剂盒。该检测试剂盒可包含：提取试剂，例如Trizol；去除DNA试剂，例如DNase I；反转录试剂，例如RTMix、Enzyme Mix、Random hexamers；real time qPCR试剂，例如

Green Master Mix、Forwardprimer、Reverse primer；以及可选的装有上述试剂的容器及使用说明书。

本文的检测试剂盒中还可附有试剂盒的使用说明书，其中记载了如何采用试剂盒进行检测，以及如何利用检测结果对肿瘤转移及预后情况进行判断、对治疗方案进行选择。

当然，试剂盒还可包含临床上用于对象中肿瘤发展的判断、治疗方案的选择和/或预后评估的其它试剂，以辅助或验证通过检测Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa所得到的结果。本领域普通技术人员可根据具体需要进行常规选择。

4.Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa在肿瘤转移预测、预后评估、诊断以及药物 筛选中的应用

根据本发明中所公开的内容，Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa的水平与肿瘤的转移、预后和诊断密切相关，从而可作为肿瘤生长预测、转移预测、预后评估以及诊断的指标。

如本文所用，术语“预后”是指预测疾病的可能病程和结局，其包括判断疾病的特定后果(如康复，某种症状、体征和并发症等其它异常的出现或消失及死亡)。本文中所述的预后不良包括但不限于：生存期缩短、易发肿瘤转移、肿瘤数量增加快、肿瘤变大加快、TNM分级上升等。在预测了患者预后情况后，可结合降低Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa分子的量的治疗方法改善患者的预后。

通常，可采用如下方法进行肿瘤转移预测、预后评估和/或诊断：检测待测对象或获自该对象的样品中Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa分子的水平，并将该水平与对照水平相比较；若比较结果显示对象中的Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa分子的水平高于对照水平，则提示所述对象易发生肿瘤转移、预后不良、或已罹患癌症。在一些实施方式中，本申请的方法还可选地包括：从对象获得待测样品；使待测样品与检测Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa水平的试剂或试剂盒接触。

如本文所用，术语“正常对照”是指用作参照的Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa分子的水平，其包括但不限于：由同一对象的非肿瘤正常生物样品(例如获自该对象非肿瘤癌旁组织或正常组织的样品)中测得的Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa分子水平、通过统计学确定的群体标准水平、或经标准化的水平。

此外，本文还提供了一种筛选治疗肿瘤、缓解或防止肿瘤转移和/或改善肿瘤预后的候选药物的方法，所述方法包括测试所述候选药物对对象或获自对象的样品中Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa水平的影响，其中，在使用所述候选药物后，Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa水平降低表明所述候选药物具有治疗肿瘤、缓解或防止肿瘤转移和/或改善肿瘤预后的效果。本申请候选药物筛选方法所涉及的各特征可如本文中所限定或阐述。在一些实施方式中，候选药物为Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa的抑制剂。

5.Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa的抑制剂

如本文所用，术语“Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa抑制剂”和/或“活性物质”以其最广义使用，其包括拮抗剂、阻断剂等，是对Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa起到负调节作用的物质。

术语“拮抗剂”是指通过空间位阻、构型改变或其它生物化学机制以干扰一种分子与另一种分子的结合或干扰另一种细胞对一种细胞的刺激的特性的物质(如分子、化合物或药物)，例如通过不同受体产生相反效应的功能性拮抗或生理性拮抗、通过与激动剂竞争性结合、与受体相关的中间体结合等方式。术语“阻断剂”是指部分或全部阻止或抑制某一作用的物质。术语“拮抗剂”和“阻断剂”不局限于具体的作用机制，而是泛泛地指本文所述的功能特性。

本发明中Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa的抑制剂可包括，但不限于：天然提取物；抗Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa、抗ZCCHC11-274aa受体的抗体或抗ZCCHC11-274aa与其受体结合的抗体；Circ-ZCCHC11的源基因ZCCHC11的抑制剂(如siRNA、shRNA、反义寡核苷酸、CRISPR-Cas9系统)；ZCCHC11-274aa的源基因Circ-ZCCHC11的抑制剂(如siRNA、shRNA、反义寡核苷酸、CRISPR-Cas9系统)；Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa结合和/或功能抑制剂等(如与ZCCHC11-274aa竞争性结合其受体的结合抑制剂)；其他对Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa信号途径成员具有抑制活性的化学物质。

在一些实施方式中，ZCCHC11-274aa信号途径的抑制剂可为抗体或其活性片段，例如单克隆抗体、多克隆抗体、人源化抗体、人抗体、嵌合抗体、抗体活性片段(如Fv、Fab、Fab'、F(ab')₂)。所述抗体可通过本领域中已知的方法获得，例如可参考Harlow和Lane，《抗体：实验室手册》(Antibodies:A Laboratory Manual)，冷泉港实验室(Cold SpringHarbor Laboratory)(1988)等。优选采用单克隆抗体，其制备可采用最先由Kohler等(Nature，256：495(1975))描述的杂交瘤方法或重组DNA法完成。

本申请的抑制剂能发挥显著抑制肿瘤细胞生长及转移、改善肿瘤对象的预后，由此可作为肿瘤治疗的有效药物。并且，本申请还为肿瘤治疗提供了一种新的靶标，即Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa靶标。

6.包含Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa抑制剂的药物组合物

本文中还提供了一种药物组合物(或称药物)，其中含有有效量的Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa抑制剂作为活性物质或主要活性物质之一。

在一些实施方式中，本申请的药物可用于治疗与Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa过表达或功能异常相关的疾病、病症或体征。例如与Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa过表达或功能异常相关的癌症，尤其是乳腺癌。

如本文所用，术语“药学上可接受的”成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)的，即有合理的效益/风险比的物质。如本文所用，术语“有效量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。

如本文所用，术语“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。该术语指这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在《雷明顿药物科学》(Remington’sPharmaceutical Sciences，MackPub.Co.，N.J.1991)中可找到关于药学上可接受的赋形剂的充分讨论。

本申请的药物可含有液体，如水、盐水、甘油和乙醇等载剂。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如填充剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、泡腾剂、润湿剂或乳化剂、矫味剂、pH缓冲物质等。通常，可将这些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中，其中pH通常约为5-8，较佳地，pH约为6-8。

如本文所用，术语“单位剂型“是指为了服用方便，将产品制备成单次服用所需的剂型，包括但不限于各种固体剂(如片剂)、液体剂、胶囊剂、缓释剂。

在一些实施方式中，每天施用1～6剂本文所述的产品，如施用1～3剂。

应理解，所用活性物质(即Circ-ZCCHC11及ZCCHC11-274aa抑制剂)的有效剂量可随待施用或治疗的对象的情况而变化。具体情况根据对象的个体情况(例如对象体重、年龄、身体状况、所需达到的效果)来决定，这在熟练专业人员(如医师)可以判断的范围内。

本文所述的药物可以为固态(如颗粒剂、片剂、冻干粉、栓剂、胶囊、舌下含片)或液态(如口服液)或其它合适的形状。给予途径可采用本领域常规的方式，例如口服、胃肠外(如静脉内、动脉内、腹膜内、肌肉内、真皮内或皮下给药)、皮下、腹膜内、肺内、鼻内、瘤内、局部给予。

此外，本文所述的产品在作为药物或药物组合物时还可含有用于改善和治疗癌症的其他活性物质，例如DNA损伤类化疗药、多靶向酪氨酸激酶抑制剂、细胞增殖抑制剂、血管增生抑制剂、烷化剂、抗代谢物质、抗肿瘤抗生素、植物类抗癌物质、激素或免疫抑制剂等。

本文所述的Circ-ZCCHC11和/或ZCCHC11-274aa抑制剂相互间可以联合应用，还可以与其它药物和治疗手段联合，用于癌症的治疗

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。本领域技术人员可对本发明做出适当的修改、变动，这些修改和变动都在本发明的范围之内。

下列实施例中未注明具体条件的实验方法，可采用本领域中的常规方法，例如参考《分子克隆实验指南》(第三版，纽约，冷泉港实验室出版社，New York：Cold SpringHarbor Laboratory Press，1989)或按照供应商所建议的条件。DNA的测序方法为本领域常规的方法，也可由商业公司提供测试。

除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

实施例1：一种检测试剂盒的制备

试剂盒：

本实施例中按如下组成制备检测试剂盒(包括试剂a、试剂b、试剂c、试剂d)，该试剂盒适于以免疫组织化学方法检测生物样品中ZCCHC11-274aa的表达。该试剂盒还可以包括装有上述试剂的容器及使用说明书。

试剂a：封闭液，为10％山羊血清(购自索莱宝公司)，即用型；

试剂b：兔抗人或小鼠ZCCHC11-274aa多克隆抗体(定制)(体外构建克隆质粒，并诱导产生ZCCHC11-274aa，其序列参考序列SEQ ID NO.2；免疫新西兰兔子之后，取血并纯化获得该蛋白的多克隆抗体)

试剂c：HRP标记羊抗兔二抗(购自索莱宝公司)；

试剂d：DAB底物缓冲液及显色液(购自索莱宝公司)。

检测方法：

使用本实施例中的检测试剂盒进行检测的步骤如下表1所示：

表1：

检测结果如图5所示。

从图5的分析结果发现，与癌旁非肿瘤组织相比，ZCCHC11-274aa在乳腺癌中高表达。

发明人还进一步研究发现，与癌旁非肿瘤组织相比，ZCCHC11-274aa在癌细胞中均高表达(包括但不限于乳腺癌，脑胶质瘤，胃癌，肾癌，结直肠癌、食管癌)。

实施例2：另一种检测试剂盒的制备

试剂盒：

按如下组成制备检测试剂盒，该试剂盒适于以Western blot方法检测生物样品中ZCCHC11-274aa的表达。该试剂盒还可以包括装有上述试剂的容器及使用说明书。

试剂a：封闭液，为5％脱脂奶粉(购自索莱宝公司)；

试剂b：兔抗人或小鼠ZCCHC11-274aa多克隆抗体(定制)(体外构建克隆质粒，并诱导产生ZCCHC11-274aa，其序列参考序列SEQ ID NO.2；免疫新西兰兔子之后，取血并纯化获得该蛋白的多克隆抗体)

试剂c：HRP标记羊抗兔二抗(购自索莱宝公司)；

试剂d：ECL化学发光法检测试剂盒(购自索莱宝公司)；

检测方法：

使用本实施例中的检测试剂盒进行检测的步骤如下：

1、样品制备：

(1)取少量的组织(如小鼠脾脏取1/2)于2ml的离心管中，加入1mL PBS后放入组织研磨仪中研磨1min，离心，去除PBS，再用1mLPBS洗涤一次，离心(12000r，10min)弃去PBS(冰上操作)(0.1g组织以1:10加入含PMSF/RIPA)1mLRIPA(0.99RIPA+0.01PMSF)

(2)加入0.5-1mL的预冷的RIPA裂解液，再放入组织研磨仪中研磨3-5次，使细胞完全破碎，然后将离心管冰浴15min，每隔5min涡旋混合仪振荡30s，保证细胞完全裂解。

(3)充分裂解后，12000g，4℃离心10min，将上清液转移到新的1.5mL的离心管中，即得组织总蛋白产物。

(4)产物中可加入20％的甘油，保存于-20℃--80℃。

2、蛋白浓度测定：(BAC法)

(1)购买BCA蛋白浓度测定试剂盒测定样品总蛋白，目的是为了保证上样量蛋白在20-100μg之间和尽可能使上样蛋白总量接近。

(2)样品蛋白处理：测完蛋白含量后,计算出40μg-100μg蛋白的对应体积取出作为上样量，再在其中加入5*SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(按照每4μl蛋白样品加入1μl蛋白上样缓冲液)沸水浴5min或者PCR仪95℃加热5min。

3、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)

(1)清洗玻璃板：先用洗洁精轻轻刷洗玻璃板,然后用自来水冲洗，再用蒸馏水洗浄后晾干；梳子用蒸馏水洗干净，临用前用乙醇擦拭晾干；

(2)制胶与灌胶、上样：玻璃板对齐后放入夹中卡紧，然后垂在卡在架子上准备灌胶(操作期间保持两玻璃对齐,避免发生漏胶现象)。配制好分离胶后往其中加入TEMED(四甲基乙二胺，促凝剂)立即摇晃均匀即可灌胶，灌胶时掌握速度,沿着玻璃板面灌胶，避免产生气泡，灌好后在胶上封一层水，使胶凝结的更快些。30-40min后，把胶上层的水倒掉，并用吸水纸把残余水吸干；再往配制好的浓缩胶中加入TEMED，立即摇晃均匀即可灌胶，用浓缩胶罐满剩余空间，并将梳子水平插入到浓缩胶中，保证没有气泡。上样前加入足够的电液缓冲液，设定符合实际的电压和电泳时间。(浓缩胶75V，分离胶120V)，电泳至溴酚蓝刚跑出时即可终止电泳。

4、转膜(湿转):

(1)准备一张适宣大小的聚偏二氟乙烯膜(PVDF)以及滤纸6片。将胶浸泡于转移缓冲液中10min(如检测小分子蛋白，即可免去这一步骤，因小分子蛋白容易扩散出胶)

(2)在使用PVDF膜之前需进行活化：PVDF膜需在纯甲醇中浸泡3-5s：再于盆里加入转移缓冲液，并把转膜用的架子、玻璃棒、滤纸、两块海绵和经过甲醇活化的PVDF活化的膜放入其中浸泡20min

(3)装配转膜“三明治”：海绵/3层滤纸/胶/膜/③3层滤纸/海绵，每层放好后，用玻璃棒排除气泡。(注意将胶放于负极面，黑色面。)再将转移槽置于冰浴中，放于装配好的“三明治”(黑色面对黑色面)，加入转移缓冲液，通电，恒压70-100V，或者恒流250-300mA，时间2小时，装置一定夹紧，无气泡。注意：不同仪器和不同分子量蛋白的转膜条件不同，以下条件仅供参考。

5、封闭

用PBS将转好的膜洗净(漂洗1-2min)，在室温条件下，将膜转移至含有封闭液的平皿中(5％脱脂牛奶，0.5％TBST配)置于脱色摇床上脱色，封闭1h。

(TBST：为TBS+Tween的缩写，TBS是Tris-HCL缓冲盐溶液，为等渗的盐溶液中加入Tris-HCL缓冲液加入HCl调节PH为7.4；Tween为一种非离子型去污剂，有复性抗原的作用，可提高特异性识别能力。1000ml的TBST的配制方法：先称量出40g的NaCl，再加入400ml的ddH₂O，再称量出47.6g NaCl，再加入100ml Tris-HCL缓冲液，最后加入吐温20、5ml，放入1000ml容量瓶中定容至1000ml即可。)

6、孵育抗体

(1)封闭1h后，用PBS将PVDF膜洗净3次后，每次5min，用稀释的一抗溶解的5％脱脂牛奶，磷酸化蛋白使用TBST溶解的5％BSA)将PVDF膜充分浸没后4℃冰箱孵育过夜。

(2)在室温条件下，然后用TBST将PVDF膜放于脱色摇床上洗5min，连续洗三遍，然后将PVDF膜用相应的二抗充分浸没，室温孵育30min后，在室温下用TBST将PVDF膜放于脱色摇床上洗5min，连续洗三遍，最后置于PBS溶液中浸泡待测。

7、化学发光显色

(1)现配现用ECL试剂工作液(A液:B液＝1:1)，等体积混合于离心管中，将此混合液与朝上的膜蛋白面充分接触，接触1-2min后，将膜上的残液去尽，并放八暗匣中曝光。

(2)最后用显影、定影试剂对膜进行显影和定影；根据不同的光强度调整曝光条件。将胶片进行扫描并存档，使用Image J软件处理系统分析计算目标带的光密度值。

检测结果如图3和图4所示。

从图3和图4的Western blot结果发现，与癌旁非肿瘤组织相比，ZCCHC11-274aa在乳腺癌中高表达。

发明人进一步研究发现，，与癌旁非肿瘤组织相比，ZCCHC11-274aa在癌细胞中均高表达(包括但不限于乳腺癌，脑胶质瘤，胃癌，肾癌，结直肠癌、食管癌)。

实施例3：采用RT-qPCR检测CircRNAZCCHC11在多种癌组织中的表达

选取人肿瘤样本(乳腺癌、胃癌、食管癌、肾癌)，对照为各自肿瘤的癌旁组织，以上肿瘤样本和对照均获自广州某三甲医院。采用TRIzol(美国Invitrogen公司)抽提组织总RNA，qRT-PCR检测在ABI StepOnePlus^TM PCR系统(Life Technologies)实时定量PCR仪上完成。使用的引物及产物大小如表2所示：

表2 PCR引物序列

结果如图6所示。图6的结果表明，CircRNAZCCHC11在乳腺癌、胃癌、食管癌、肾癌在癌组织中表达明显高于癌旁组织。

实施例4：内源性ZCCHC11-274aa的IP富集

步骤如下：

1、乳腺癌组织加入预冷PBS(磷酸缓冲盐溶液)，RIPA缓冲液匀浆。

2、4℃，14000g离心15min，立即将上清转移到一个新的离心管中。

3、取少量裂解液以备Western blot分析，剩余裂解液加1μg相应的抗体加入到细胞裂解液，4℃缓慢摇晃孵育过夜；

4、取10μl proteinA琼脂糖珠，用适量裂解缓冲液洗3次，每次3000rpm离心3min；

5、将预处理过的10μl proteinA琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中4℃缓慢摇晃孵育2-4h，使抗体与proteinA琼脂糖珠偶连；

6、免疫沉淀反应后，在4℃以3000rpm速度离心3min，将琼脂糖珠离心至管底；将上清小心吸去，琼脂糖珠用1ml裂解缓冲液洗3-4次；最后加入15μl的2×SDS上样缓冲液，沸水煮5分钟；

7、SDS-PAGE电泳，Western blotting或质谱仪分析，对SDS-PAGE电泳凝胶进行考染，挖取对应分子量的胶带，进行质谱分析。结果如图7所示。

图7是乳腺癌肿瘤组织中内源性ZCCHC11-274aa的IP富集的考马斯亮蓝图像。从图7的结果表明，采用定制的ZCCHC11-274aa的抗体可有效结合ZCCHC11-274aa目的蛋白，起到富集的作用。

实施例5：内源性ZCCHC11-274aa的质谱鉴定

步骤如下：

1、蛋白酶解

切胶：将实施例4中的蛋白条带切出后放入EP管中；

水洗：加入MilliQ水(超纯水)冲洗1min，离心去上清，水洗2次；

脱色：加入50％MeOH(甲醇)/50mM NH₄HCO₃于37℃恒温箱内脱色30min，离心去上清；

脱水：加入100％ACN(丙烯腈)，震荡30s等胶粒变白后吸出液体；

烷基化：往干燥胶粒中加入25mM DTT/50mM NH₄HCO₃，于56℃反应30min，吸出DTT，加入55mM IAA(吲哚乙酸)/50mM NH₄HCO₃，室温暗处反应30min；

水洗：将IAA(吲哚乙酸)吸出，加入MilliQ水(超纯水)冲洗3次；

脱水：100％ACN(丙烯腈)脱水至胶粒变白；

酶切：用25mM NH₄HCO₃稀释胰酶至20ng/μl；于每管加入适量胰酶，冰浴30min；再补加适量25mMNH₄HCO₃至覆盖胶粒，放入37℃恒温箱酶切过夜；

肽段提取：将EP管盒整个放入超声仪中超声15-20min，吸出肽段于新的EP管。

2、肽段纯化ZipTip

润湿柱子：吸10μl 100％ACN(丙烯腈)，弃之，重复两次；

酸化柱子：吸10μl 0.1％TFA(三氟乙酸)，弃之，重复两次；

吸附样本：吹吸样本15次；

除杂质：吸10μl 0.1％TFA(三氟乙酸)，弃之，重复两次；

洗脱样本：吸10μl 0.1％TFA-700％ACN(丙烯腈)，将此洗脱液转入新EP管；

真空抽干。

3、质谱检测

肽段用样品溶解液(0.1％甲酸、2％乙腈)溶解，13200rpm，4℃离心20min，取上清，进行质谱鉴定。

图8为内源性ZCCHC11-274aa的跨环化位点的肽段质谱图，图8的结果表明，表明内源性ZCCHC11-274aa真实存在。

实施例6：乳腺癌组织中ZCCHC11-274aa蛋白分子的表达与患者预后的相关性分析

对101例乳腺癌患者，采用组织芯片扫描方法。对癌肿瘤组织中ZCCHC11-274aa蛋白进行扫描，进行H-score(组织化学评分)的评分，分析ZCCHC11-274aa表达与患者生存率的相关性。

图9是乳腺癌组织中ZCCHC11-274aa表达与患者总体生存率的Kaplan-Meier生存曲线，图9中更低的曲线为高表达曲线，图9中更高的曲线为低表达曲线，图9的结果表明乳腺癌组织中ZCCHC11-274aa的表达越高，预后越差。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 广东省微生物研究所(广东省微生物分析检测中心)

<120> CircZCCHC11及其翻译的肽段在肿瘤生长和转移预测、预后评估和治疗中的

应用

<130> 2022-9-13

<160> 7

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 811

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 1

tttgcttgcc taaactggac ttgaagcaat ttaaactact ggagatctgc cattttataa 60

tatcacaatt ggaaagaaac agattttcaa ataatggaag agtctaaaac cttaaaaagt 120

gaaaatcatg aaccaaagaa gaatgttatt tgtgaagaaa gcaaagcagt tcaagttata 180

ggtaatcaaa cattgaaagc tagaaatgat aaatccgtaa aagaaattga gaacagctct 240

ccaaatagga atagtagtaa aaaaaataag caaaatgata tttgtataga aaaaacagaa 300

gttaaatcat gtaaagtaaa tgctgccaac cttccaggtc ctaaagattt ggggttagtc 360

cttcgagatc aaagtcattg caaagcaaaa aaatttccta attcaccggt gaaagccgaa 420

aaggcaacca tttcacaggc aaaatcagaa aaggcaacca gtttacaggc aaaagcagaa 480

aaatcaccaa agtcacctaa ttcagtgaaa gcagaaaaag catccagtta tcagatgaag 540

tcagaaaaag taccaagttc accagcagaa gcagaaaagg gacccagttt actgttgaaa 600

gacatgagac agaagacaga attacaacag attggaaaaa aaattccaag ctcctttact 660

tctgtggaca aagtgaatat tgaagctgta gggggagaaa aatgtgctct gcaaaactca 720

ccacgatctc agaagcaaca gacatgtaca gataatactg gtgattctga tgatagtgct 780

tcaggaattg aagacgtatc ggacgattta a 811

<210> 2

<211> 809

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 2

gtcagattgg aaagagtcag attttcaaat aatggaagag cccaagactt ctaaaaacga 60

aaatcatgaa ccaaagaaga atattatttg tgaagaaagc aaagcagtta aaattatatc 120

taatcaaacc ttgaagccta gaaatgataa gtcagaaatt gggaccagct ctctgaatag 180

aaatagtagt aaaaaaacca agcaaaatga tatttgtata gaaaaaacag aagctaaatc 240

atgtaaagta aacgctgcca gtgttccagg ccctaaagat ttggggttag tacatcgaga 300

tcaaagtcat tgcaaaatga aaaagttacc aaattcaccc atgaaagccc agaagggatc 360

ttcacagaca aaattagaaa agacacctag tttacagaca aaagcagaaa aagtaccaaa 420

gtctccaaat ttaccagtaa aagcagaaaa agcgccctgt acaacagcag aagcaacaac 480

agaaaaagca cttaattcac agagaaaaga agaaaacaca cccacttctc agatgaaatt 540

acagaagaca cccagatcac ctttagagcc agaaaatgtg cccagtttac tattgaaaga 600

aaatgtgaaa cagacagaat cacaacagac tgggaagaaa cttacaagct cctttgtttc 660

tatggataaa aggaagagtg aagctctaca gggagaaaag tcagctctgg aaaactcatc 720

actatctcag aagcagcaga ctcagacaga taatattgct gattctgatg acagtgcttc 780

agggattgaa gatacagcag atgatttga 809

<210> 3

<211> 274

<212> PRT

<213> 人工合成

<400> 3

Met Glu Glu Ser Lys Thr Leu Lys Ser Glu Asn His Glu Pro Lys Lys

1 5 10 15

Asn Val Ile Cys Glu Glu Ser Lys Ala Val Gln Val Ile Gly Asn Gln

20 25 30

Thr Leu Lys Ala Arg Asn Asp Lys Ser Val Lys Glu Ile Glu Asn Ser

35 40 45

Ser Pro Asn Arg Asn Ser Ser Lys Lys Asn Lys Gln Asn Asp Ile Cys

50 55 60

Ile Glu Lys Thr Glu Val Lys Ser Cys Lys Val Asn Ala Ala Asn Leu

65 70 75 80

Pro Gly Pro Lys Asp Leu Gly Leu Val Leu Arg Asp Gln Ser His Cys

85 90 95

Lys Ala Lys Lys Phe Pro Asn Ser Pro Val Lys Ala Glu Lys Ala Thr

100 105 110

Ile Ser Gln Ala Lys Ser Glu Lys Ala Thr Ser Leu Gln Ala Lys Ala

115 120 125

Glu Lys Ser Pro Lys Ser Pro Asn Ser Val Lys Ala Glu Lys Ala Ser

130 135 140

Ser Tyr Gln Met Lys Ser Glu Lys Val Pro Ser Ser Pro Ala Glu Ala

145 150 155 160

Glu Lys Gly Pro Ser Leu Leu Leu Lys Asp Met Arg Gln Lys Thr Glu

165 170 175

Leu Gln Gln Ile Gly Lys Lys Ile Pro Ser Ser Phe Thr Ser Val Asp

180 185 190

Lys Val Asn Ile Glu Ala Val Gly Gly Glu Lys Cys Ala Leu Gln Asn

195 200 205

Ser Pro Arg Ser Gln Lys Gln Gln Thr Cys Thr Asp Asn Thr Gly Asp

210 215 220

Ser Asp Asp Ser Ala Ser Gly Ile Glu Asp Val Ser Asp Asp Leu Ile

225 230 235 240

Cys Leu Pro Lys Leu Asp Leu Lys Gln Phe Lys Leu Leu Glu Ile Cys

245 250 255

His Phe Ile Ile Ser Gln Leu Glu Arg Asn Arg Phe Ser Asn Asn Gly

260 265 270

Arg Val

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 4

agaaggctgg ggctcatttg 20

<210> 5

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 5

gcaggaggca ttgctgatga t 21

<210> 6

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 6

cgtatcggac gatttaattt gct 23

<210> 7

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 7

aggttttaga ctcttccatt a 21

Claims (2)

1.一种用于检测ZCCHC11-274aa水平的物质在制备肿瘤预后评估产品中的应用，其特征在于：所述ZCCHC11-274aa序列如SEQ ID NO.3所示；

所述检测的方法选自如下一种或多种检测技术或方法：免疫组织化学法、Western印迹法、生物芯片法；

所述用于检测ZCCHC11-274aa水平的物质选自抗ZCCHC11-274aa抗体或其抗原结合片段；

所述肿瘤是指乳腺癌。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括：与正常对照值相比，评估对象或获自评估对象的样品中ZCCHC11-274aa水平提高，表明评估对象的癌症预后不良。

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