CN111388613B - 一种促生长增强免疫力的中兽药黄芪复方颗粒 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种促生长、增强免疫力的中兽药黄芪复方颗粒剂及其制备方法。由下述质量份的原料制成:黄芪3份、白茅根1~3份、生地榆0.5~2份、茜草0.5~2份、茯苓1.5~2份、白芍1~2份、党参0.5~1.5份、炒白术1~2份和甘草1~2份。本发明经研究表明将黄芪和党参作为君药用于制备动物饲料添加剂,能够促进动物生长,改善免疫力。本发明提供一种作用稳定、安全方便、价格低廉的中兽药黄芪复方颗粒剂,起到促进生长和改善免疫力的作用,创造更多的经济价值及社会价值。
Description
技术领域
本发明涉及中兽药技术领域,具体涉及一种促生长、增强免疫力的中兽药黄芪复方颗粒及其制备方法。
背景技术
中兽药是中药的一种,中兽药的作用主要体现在具有抗菌作用、促进动物生长的作用和驱虫作用等。
在畜禽业,抗生素的主要作用表现在促进生长。抗生素在畜禽生产中的不正确使用和滥用污染了环境、威胁人畜健康。替代抗生素的基本共识,一是酸化剂代替抗生素;二是使用高浓度金属离子代替抗生素,抑制病原微生物,比如氧化锌;三是用植物精油或香料代替抗生素,如牛至油、百里香酚、肉桂醛等。
在2016年出台的《中兽药、天然药物预混剂通则技术要求(草案)征求意见稿》,2019年7月10日,农业农村部发布第194号公告,宣布自2020年1月1日起,退出除中药外的所有促生长类药物饲料添加剂品种;自2020年7月1日起,饲料生产企业停止生产含有除中药外的促生长类药物饲料添加剂的商品饲料。一系列的政策有力推动了中兽药作为药物添加剂的注册使用。中兽药在对抗病毒、提高免疫力、抗应激和促进生长发育等方面具有的优势,使中兽药作为预防、治疗疾病及促进动物生长的药物受到广泛的关注。
中兽药具有提高畜禽免疫力的作用。增强吞噬细胞吞噬能力,如人参、党参、刺五加、鱼腥草、黄连、黄芩和大蒜等;提高抗体产生能力,如人参、党参、刺五加、金银花、枸杞子、肉桂和龙胆草等;刺激干扰素的产生,如刺五加、石斛、龙胆草、灵芝、香菇、山药、枸杞子、黄连和人参等;刺激补体、溶解酶的产生,如白花蛇舌草、枸杞子、人参、附子、鱼腥草和陈皮等。使用的方剂的有紫雏菊、黄芪、银杏、金银花和甘草组合制成的紫黄银金甘组方;白花蛇舌草、金银花、黄芪和甘草等中药组成的水提浸膏制成口服液。
中兽药具有提高畜禽生产性能的作用,如将黄芪、党参、茯苓、白术、山楂、淫羊藿、防风和陈皮等中药组成的超微粉;用淫羊藿、菟丝子和黄芪等中药制成的增蛋口服液。
目前,中兽药研发中的主要问题表现在以下方面:一是基于中医理论进行组方,对中药的药性,配伍考虑少;二是新剂型少,大部分是水提或直接使用原药粉碎,新制剂的较少,对中药有效成分的生物利用度研究少;三是在中兽药研发中,对中药炮制减毒增效考虑较少。
发明内容
本发明提供一种黄芪复方组合物。
本发明所提供的黄芪复方组合物,由以下质量份的原料制备得到:
黄芪3份、白茅根1~3份、生地榆0.5~2份、茜草0.5~2份、茯苓1.5~2份、白芍1~2份、党参0.5~1.5份、炒白术1~2份和甘草1~2份。
君药:黄芪、党参,增强机体免疫力,提高抗菌抗病毒的能力;臣药:茜草、生地榆、白芍,具有抗氧化、抗炎及升高白细胞的作用以及有免疫调节之效;佐药:茯苓、炒白术、白茅根,有调节胃肠运动,增强免疫力,抗炎抗衰老的作用,可以辅助黄芪、党参增加免疫调节能力;使药:甘草,调和诸药。诸药共用,具有改善机体抗病能力,提高免疫调节作用。
作为本发明一种优选的技术方案,所述黄芪复方组合物(组方一)的各个中药具体可为:黄芪3份、白茅根1.5份、生地榆0.5份、茜草0.6份、茯苓1.5份、白芍1份、党参0.5份、炒白术1份、甘草1份,测得总皂苷4.72%,总多糖为23.36%。
作为本发明一种优选的技术方案,所述黄芪复方组合物(组方二)的各个中药具体为:黄芪3份、白茅根1份、生地榆1份、茜草2份、茯苓1份、白芍1份、党参1份、炒白术1份、甘草1份,测得总皂苷5.06%,总多糖为25.14%。
作为本发明一种优选的技术方案,所述黄芪复方组合物(组方三)的各个中药具体为:黄芪3份、白茅根3份、生地榆1.5份、茜草1.5份、茯苓1.5份、白芍1份、党参0.5份、炒白术1份、甘草1份,测得总皂苷5.36%,总多糖为26.76%。
对于组方三,基于中医配伍理论将茯苓、党参、炒白术和甘草的比例进行调整,进行了组方三的研究。
组方三有效成分含量高。
本发明还提供一种黄芪复方颗粒剂,所述黄芪复方颗粒剂由上述黄芪复方组合物制得。
所述黄芪复方颗粒剂通过包括如下步骤的方法制备得到:
1)黄芪饮片,用乙醇冷浸渍提取,收集滤液,回收乙醇后,得黄芪提取液;
2)黄芪药渣与白茅根、生地榆、茜草、茯苓、白芍、党参、炒白术和甘草混合,水提取,收集水提液;
3)将1)黄芪提取液与2)水提液混合后浓缩,醇沉后,取上清液;
4)上清液浓缩,制得黄芪复方浸膏;
5)黄芪复方浸膏与蔗糖、糊精混合,制得黄芪复方颗粒剂。
上述步骤1)中,乙醇体积浓度为65%-75%,药液比为1:4-6,冷浸渍提取2次,每次冷浸24-48小时,两次提取液混合后回收乙醇得黄芪提取液;
步骤2)中,药液比为1:4-6,温度为90-100℃,水提取两次,每次提取时间为1-1.5小时;
步骤3)中,黄芪提取液与水提液混合浓缩后,加入乙醇,控制乙醇体积浓度为50%-75%,醇沉,静置24-48小时,过滤,取上清液;
步骤5)中,所述蔗糖粉碎过65目筛;
黄芪复方浸膏:蔗糖:糊精的质量比可为1:1-4:0.8-1.2。
上述黄芪复方组合物或黄芪复方颗粒剂作为中兽药,在促进动物生长、增强免疫力、增强抗氧化应激能力中的应用也属于本发明的保护范围。
所述动物具体可为鸡。
本发明经研究表明将黄芪和党参作为君药用于制备动物饲料添加剂,能够促进动物生长、增强免疫力。本发明提供一种效果稳定、安全方便的中兽药黄芪复方颗粒剂,起到促生长、增强免疫力、增强抗氧化应激能力的作用,创造更多的经济价值和社会价值。
本发明的中兽药黄芪复方颗粒剂是以黄芪、白茅根、生地榆、茜草、茯苓、白芍、党参、白术和甘草等中药为原料制备而成。本发明具有发挥促进生长、提高饲料利用率、提高机体免疫力和增强抗氧化应激能力等优势。
本发明采用中医药与畜禽产业结合的方法,在传统中医药理论指导下结合用药经验,将黄芪、白茅根、生地榆、茜草、茯苓、白芍、党参、白术和甘草中药组成复方,应用于畜禽饲料产业,生产功能性饲料添加剂,可提高肉鸡的免疫能力,起到促进生长,增强抗氧化应激能力和提高饲料利用率的效果,且无毒副作用。这一中药复方饲料的开发,拓展了中药复方的使用领域,为市场上提供了一种安全可靠的中药复方饲料添加剂产品。
本发明基于中医理论进行组方,黄芪和党参在饲料用药中作为君药可增强免疫力,配伍其他药物,从促进生长、改善免疫力等多个作用方面进行组方,着力开发一种促生长改善免疫力的中兽药黄芪复方颗粒,保留了中药有效成分的自然性和生物活性,易被吸收和利用,以提高和促进机体非特异性免疫功能为主,增强动物机体免疫力和抗病力,增强抗氧化能力等的正向调节。通过对有效成分的富集,制备成颗粒,利于贮藏,利于与饲料的复配混合。通过选用有效的中药炮制品,以提高有效成分的利用率,达到增效的目标。
附图说明
图1为本发明黄芪复方颗粒指纹图谱,
图2为对照组及各给药组十二指肠显微结构图,
图3为对照组及各给药组法氏囊显微结构图,
图4为对照组及各给药组脾脏显微结构图,
图5为对照组及各给药组胸腺显微结构图。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法;下述实施例中所用的试剂、材料等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
实施例1安全性评价急性毒性试验
组方:黄芪3份、白茅根3份、生地榆1.5份、茜草1.5份、茯苓1.5份、白芍1份、党参0.5份、炒白术1份和甘草1份(组方三)
制备工艺:
1)黄芪饮片,用体积浓度为70%乙醇,控制药液比1:5,冷浸提取两次,每次冷浸36小时,收集滤液,回收乙醇后,得黄芪提取液;
2)黄芪药渣与白茅根、生地榆、茜草、茯苓、白芍、党参、炒白术和甘草混合,水提取(药液比1:5),温度为95℃,每次提取1小时,收集水提液;
3)将1)黄芪提取液与2)水提液混合浓缩后,加入乙醇,调整乙醇体积浓度为50%,醇沉后,静置24小时,过滤,取上清液;
4)上清液浓缩制得黄芪复方浸膏;
实施例1采用组方三得到的黄芪复方干膏产品进行有关实验。
实验动物与试剂:健康SPF级BALB/C小鼠,雌雄各半,体质量(18.0±2.0)g,购自斯贝福(北京)生物技术有限公司,质量合格证号:SCXK(京)2016-0002。常规分笼饲养,自由饮水进食,室内温度控制在21-24℃,湿度30~50%,空气流通。
实施过程:雌雄按体重分组,前一天晚上禁食12小时不禁水,以最大给药浓度(2.98g/mL)(指1mL中相当于含原药材2.98g,即298g药材提取浓缩到100mL,1mL相当于2.98g原药材)、给药体积(0.3ml/10g)灌胃一天3次,灌胃结束后1h恢复食物,观察小鼠情况。
结果表明:一天3次灌胃后无动物死亡,对外界反应、外观、行为及呼吸等均未见异常,未观察到明显中毒症状。给药后第一天至第14天均未观察到明显的异常症状(皮毛、呼吸、眼睛、黏膜、行为)。14天后剖检,结果显示:心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、性器官等均未见明显病变。
表1小鼠体重变化情况
实施例2质量标准研究
将组方三制备得到的黄芪复方浸膏以质量比1:1:0.8加入蔗糖和糊精,得到黄芪复方颗粒剂;
以所得黄芪复方颗粒剂进行有关实验。
试剂:葡萄糖标准品(中国食品药品检定研究院,批号:110833-201205)、黄芪甲苷标准品(中国食品药品检定研究院,批号:110813-201206)、乙醇(分析纯,天津市大茂化学试剂厂)、苯酚、浓硫酸(分析纯,湖北鑫润德化工有限公司)、香草醛(分析纯,天津市福晨化学试剂厂)。
仪器:药典筛、干燥器、扁形称量瓶、TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)、AX124ZH万分之一分析天平(奥豪斯仪器有限公司)、EX125ZH分析天平(奥豪斯仪器有限公司)、HH-6数显恒温水浴锅(金坛市杰瑞尔电器有限公司)、GZX-9140MBE电热鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)、HC-2518高速离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司)、SC-02低速离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司)。
性状分析结果:本品是一种黄褐色,无特殊气味,且颗粒干燥、均匀,无吸潮、结块、潮解等现象的可溶性颗粒剂。
粒度检查结果:称取黄芪复方颗粒5.07g,过筛后,不能通过1号筛的0g,通过5号筛的0.66g,结果表明,不能通过一号筛与能通过五号筛的总百分数为13.02%。
溶化性检查结果:取黄芪复方颗粒10g,加热水200mL,搅拌5分钟,立即观察,可溶颗粒应全部溶化或轻微浑浊。称取黄芪复方颗粒剂10.06g,加热水,搅拌,出现轻微浑浊的现象,溶化性符合规定。
水分测定结果:平行测定三次,含水量分别为2.42%、2.59%、2.46%,均小于8%,符合规定。
含量测定结果:对指标性成分皂苷进行测定。取约1g黄芪复方颗粒溶于100ml蒸馏水中,稀释不同倍数,采用8%香草醛无水乙醇试液-72%硫酸测定皂苷,平行测定3次,总皂苷得率为22.36%。
指纹图谱:对10批黄芪复方颗粒采用HPLC以黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷为对照品,图谱导入“中药色谱指纹图谱相似度评价软件”建立指纹图谱。(见附图1)
实施例3对肉鸡生长的影响
实施例3采用组方三得到的黄芪复方颗粒剂进行有关实验。
选用1日龄健康的100羽罗斯308肉鸡,公母混合,适应性饲喂7d后,按重复体重无差异原则随机分为4个处理,每组5个重复,每个重复5羽。实验动物肉仔鸡采用三层笼养,红外灯保温,各组分别隔离饲养,自由采食和饮水,于第20天进行新支二联多价疫苗接种。试验1~21d均采用肉小鸡颗粒料(文水县大象禽业象丰饲料有限公司,商品名:肉小鸡颗粒料)。试验22~42d,对照组饲喂肉中鸡配合料(文水县大象禽业象丰饲料有限公司,商品名:肉中鸡配合料),试验组分别于肉中鸡配合料(文水县大象禽业象丰饲料有限公司,商品名:肉中鸡配合料)中添加0.87%、1.74%、3.48%黄芪复方颗粒,混合均匀后饲养,试验周期21d。
用SPSS13.0统计软件对各项数据进行方差分析,结果表示为平均值±标准误(或标准差)。
肉鸡饲喂至42d,以重复为单位称重称取全部试验鸡的体重,计算饲料消耗量(kg)、平均采食量(g)、增重(kg)、平均日增重(g)、耗料增重比(g/g)。十二指肠组织样品,经生理盐水洗净后置于4%的多聚甲醛固定液中,乙醇脱水、二甲苯透明,石蜡包埋、切片(5-7μm)、HE染色和中性树胶封片,在LED研究级荧光显微图像系统下观察、拍照。每个组分别测量3个差异个体的3-5个数据,各指标取平均数做方差分析作为测定数据。
平均采食量(g)=饲料消耗量/天数
增重(kg)=末重-始重
平均日增重(g)=增重/天数
耗料增重比(g/g)=饲料量/增重
表2黄芪复方颗粒剂对肉鸡生产性能的影响
注:同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05),不同大写字母表示差异显著(P<0.01),无字母或含相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
黄芪复方颗粒对肉鸡生长性能的影响
肉鸡饲喂试验全程无发病和死亡情况。由表2可见,与对照组相比,各试验组饲料消耗量和平均采食量均高于对照组,但无显著性差异(P>0.05);各试验组的增重和平均日增重均有提高,且1.74%组、3.48%组黄芪复方颗粒组与对照组相比增重了10.98%、13.64%(P<0.01),耗料增重比降低了10.63%、11.30%(P<0.01);表明饲喂黄芪复方颗粒对肉鸡的生长性能有一定的促进作用。
肉鸡十二指肠结构见附图2。
表3黄芪复方颗粒对肉鸡十二指肠结构的影响
注:同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05),不同大写字母表示差异显著(P<0.01),无字母或含相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
由表3可见,与对照组相比,各试验组鸡的十二指肠的肠壁厚度均显著增加(P<0.05);绒毛高度均极显著增加(P<0.01);隐窝深度均降低,0.87%组隐窝深度极显著降低(P<0.01);与对照组相比,各试验组的十二指肠绒毛高度/隐窝深度均增加,0.87%组和3.48%组极显著升高(P<0.01)。
实施例4对肉鸡免疫功能的影响
肉鸡饲养过程同实施例3。
试剂与仪器:免疫球蛋白A(IgA)、G(IgG)、M(IgM)ELISA Kit剂盒购于Andy gene(批号均为AD201909)、超氧化物岐化酶(SOD)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒(批号20191016)购于南京建成生物工程研究所。试验仪器:DNM-9602酶标仪(北京普朗新技术有限公司)、LEICA IP 1020全自动组织脱水机、LECIA RM2265全自动轮转式切片机、LECIA DM2500 LED研究级荧光显微图像系统(德国莱卡)。
实施过程:于试验第42d每组随机选取10只肉鸡,翅下静脉采血,取脾脏、双侧胸腺和法氏囊,剥离脂肪和结缔组织,称重并计算免疫器官指数(g/kg)。翅静脉采血,静置30min,2000r/min离心15min,制备血清。操作时严格按照ELISA检测试剂盒说明书进行,建立标准曲线,计算得到免疫球蛋白IgA、IgG、IgM的含量。
HE染色分析每组抽取10只体重相近的肉鸡,采集法氏囊、脾脏、胸腺的组织样品,经生理盐水洗净后置于甲醛固定液中,脱水、石蜡包埋、切片、HE染色、光镜下观察、拍照。
脏器指数(g/kg)=脏器重/活体重。
表4黄芪复方颗粒剂对肉鸡免疫器官指数的影响
注:同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05),不同大写字母表示差异显著(P<0.01),无字母或含相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
黄芪复方颗粒对肉鸡免疫器官指数的影响
各组肉鸡饲喂至42d,分别取脾脏、双侧胸腺、法氏囊称重并计算免疫器官指数(g/kg),结果见表4,与对照组相比,各试验组的脾脏指数和胸腺指数均有提高,但无显著差异(P>0.05)。各试验组法氏囊指数均有提高,其中0.87%、3.48%组显著高于对照组(P<0.05),分别提高了52.68%、48.21%。
表5黄芪复方颗粒剂对肉鸡血清IgA、IgG、IgM的影响
注:同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05),不同大写字母表示差异显著(P<0.01),无字母或含相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
黄芪复方颗粒对肉鸡血清免疫功能(IgA、IgG、IgM)的影响
由表5可见,与对照组相比,各试验组IgA、IgG、IgM的含量均高于对照组。对于IgA,与对照组相比,0.87%组IgA含量有显著提高(P<0.05),1.74%组IgA含量极显著提高(P<0.01);对于IgG,与对照组相比,0.87%组、1.74%组IgG含量有极显著提高(P<0.01);对于IgM,与对照组相比,0.87%组、1.74%组IgM含量有极显著提高(P<0.01),3.48%组有显著提高(P<0.05)。表明黄芪复方颗粒给药后可以显著增加鸡血清中免疫球蛋白数量,增强免疫功能,且1.74%组增加明显,IgA、IgG、IgM分别提高了48.06%、34.26%、76.21%。
黄芪复方颗粒对免疫器官组织结构的影响:见附图3、图4、附图5,法氏囊、脾脏、胸腺免疫器官结构完整,排列整齐,未有异常改变。
由图3可知,囊内皮质与髓质易分辨,皱襞发达且淋巴细胞增多。与对照组相比,试验组淋巴小结体积较大、数量较多、大小均匀、排列紧密。各试验组3.48%组被膜较其他试验组完整、小梁较其余组结构整齐排列。黄芪复方颗粒对肉鸡法氏囊组织结构的影响如表6表示,各试验组法氏囊淋巴滤泡的面积均大于对照组,且为极显著增加(P<0.01)。
表6黄芪复方颗粒对肉鸡法氏囊组织结构的影响
注:同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05),不同大写字母表示差异显著(P<0.01),无字母或含相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
由图4可知,各组脾脏淋巴细胞密集,与对照组相比,试验组红髓和白髓界限明显,白髓所占比例增大。如表7所示,与对照组相比,各试验组鸡的脾小结面积均极显著增加(P<0.01);动脉周围淋巴鞘均显著增加(P<0.05),其中1.74%组和3.48%呈极显著增加(P<0.01),0.87%组呈显著增加(P<0.05)。
表7黄芪复方颗粒对肉鸡脾脏组织结构的影响
注:同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05),不同大写字母表示差异显著(P<0.01),无字母或含相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
由图5可知,与对照组相比,1.74%、3.48%组剂量组髓质面积增加,胸腺小体呈增多趋势;0.87%组皮质所占比例较大,颜色较深,T淋巴细胞含量较多。
实施例5对肉鸡抗氧化能力的影响
肉鸡饲养过程同实施例3,分析肉鸡血清的抗氧化指标,SOD测定采用WST-1法,于450nm处测定吸光度进而计算SOD活力。MDA测定采用TBA法,于532nm下测定吸光度。
表8黄芪复方颗粒对肉鸡血清SOD和MDA的影响
注:同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05),不同大写字母表示差异显著(P<0.01),无字母或含相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
黄芪复方颗粒对血清中抗氧化酶活性的影响
由表8可见,与对照组相比,各试验组SOD含量均高于对照组,且3.48%组剂量组SOD含量有显著提高(P<0.05);MDA虽无显著差异,但含量均低于对照组。
上述实施例表明,本发明的中兽药黄芪颗粒剂颗中药复方颗粒剂能够有效地提高饲料利用率,促进肉鸡生长,促进免疫器官发育、增强免疫功能,具有提高氧化的能力。
在日粮中添加适量黄芪复方颗粒剂可以促进脾脏、胸腺和法氏囊等免疫器官的发育;提高机体IgA、IgG、IgM的含量;促进淋巴细胞增殖;促进肠道微生物环境平衡作用;促进小肠吸收营养的能力的增强;增强机体抵抗细菌和病毒的能力,这为中草药作为免疫增强剂添加于饲料中提供了实验依据。
Claims (4)
1.一种黄芪复方组合物在制备促进肉鸡生长、增强免疫力、增强抗氧化应激能力的药物中的应用,其特征在于:所述黄芪复方组合物,由下述质量份的原料制成:
黄芪3份、白茅根3份、生地榆1.5份、茜草1.5份、茯苓1.5份、白芍1份、党参0.5份、炒白术1份和甘草1份。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于:所述黄芪复方组合物的剂型为黄芪复方颗粒剂。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于:所述黄芪复方颗粒剂的制备方法,包括如下步骤:
1)黄芪饮片,用乙醇冷浸提取,收集滤液,回收乙醇后,得黄芪提取液;
2)黄芪药渣与白茅根、生地榆、茜草、茯苓、白芍、党参、炒白术和甘草混合,水提取,收集水提液;
3)将1)黄芪提取液与2)水提液混合后浓缩,醇沉后,取上清液;
4)上清液浓缩,制得黄芪复方浸膏;
5)黄芪复方浸膏与蔗糖、糊精混合,制得黄芪复方颗粒剂。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于:所述方法步骤1)中,乙醇浓度为65%-75%,药液比为1:4-6,冷浸提取2次,每次冷浸24-48小时,两次提取液混合后回收乙醇;
步骤2)中,药液比为1:4-6,温度为90-100℃,每次提取时间为1-1.5小时;
步骤3)中,黄芪提取液与水提液混合后,浓缩,加入乙醇,控制乙醇体积浓度为50 %-75%,静置24-48小时,过滤,取上清液;
步骤5)中,黄芪复方浸膏:蔗糖:糊精=1:1-4 :0.8-1.2。
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