CN111388457A - 3`-香叶基柑橘查尔酮及组合物在制备治疗脂肪肝的产品方面中的应用 - Google Patents

3`-香叶基柑橘查尔酮及组合物在制备治疗脂肪肝的产品方面中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种天然植物分子3'‑香叶基柑橘查尔酮及组合物在制备治疗脂肪肝的产品方面中的应用。3'‑香叶基柑橘查尔酮提取分离或其合成方法简单，成本较低，由于食源性物质其毒副作用小，因此，3'‑香叶基柑橘查尔酮或其组合物作为制备治疗脂肪肝的功能性食品、保健品和药品方面的应用具有巨大市场潜力。

Description

3`-香叶基柑橘查尔酮及组合物在制备治疗脂肪肝的产品方 面中的应用
技术领域
本发明属于医药和功能食品技术领域，涉及天然植物分子及其组合物的新应用，尤其是一种天然植物分子3’-香叶基柑橘查尔酮及组合物在制备治疗脂肪肝的产品方面中的应用。
背景技术
3’-香叶基柑橘查尔酮(其结构式如下)，英文名3’-geranylchalconaringenin，又名3’-香叶基-4,2’,4’,6’-四羟基查尔酮(3’-Geranyl-4,2’,4’,6’-Tetrahydroxychalcone)，由Jan F.Stevens课题组于1999年首次从啤酒花煮沸的麦汁中提取分离得到。啤酒花是一种大麻科荨麻目多年生草本植物，雌性啤酒花植物的花序，含有黄酮、萜类和儿茶素等成分。酿造业常用于给啤酒增添风味，具有天然防腐、起泡和调味的作用。此外，啤酒花又是一味中药材，有着健胃消食、安神、利尿的保健作用；有着诸多的药理活性，如抗菌消炎、抗肿瘤、抗氧化，抗病毒和镇静安神等，临床用于治疗内分泌紊乱、结核病、麻风病、关节痛和神经衰弱等症状。据报道， 3’-香叶基柑橘查尔酮具有抗癌、抗炎、抗糖尿病和抗氧化等药理活性。
3’-香叶基柑橘查尔酮的化学结构如下：
Figure BDA0002401879260000011
脂肪肝是由于各种原因引起，而非一种独立的以肝细胞内脂质过度沉积为特征的疾病，是一种常见的肝脏病理改变病，后期可发展为肝硬化和肝癌甚至危及生命。正常人肝组织中含有少量的脂肪如甘油三酯、胆固醇等，其重量约为肝重量的3％～5％；如果肝内脂肪蓄积太多，超过肝重量的5％或在组织学上肝细胞出现大量的有脂肪变性时，则就可称为脂肪肝。随着肥胖和代谢综合症在全球的流行，脂肪肝正严重威胁全球人的健康水平，发病率逐年攀升且发病年龄也日趋年轻化。普通成人当中约有14％至40％患有脂肪肝，在肥胖症患者患病率更是高达60％-95％，是演化成慢性肝病最常见的原因。从开始对脂肪肝的研究至今，比较著名是“二次打击”理论。影响代谢促进甘油三脂在肝脏中沉积，比如高脂肪饮食、肥胖和胰岛素抵抗，是发病机制过程中的“第一次打击”。而信号传导过程，如细胞外细胞因子、脂肪因子、细菌内毒素、线粒体功能障碍和/或内质网应激，或进一步进展为脂肪肝炎、激活炎症级联反应和纤维化称为“第二次打击”。截止今日，除了限制热量摄取和改变生活之外，还没有有效治疗脂肪肝的方法和药物。因此，寻找一种安全的脂肪肝治疗药物或保健品是该领域的研究热点。
通过检索，发现如下三篇与本发明专利申请相关的公开文献：
1、专利申请号201811553807.2，一种清肝明目山楂菊花茶及其加工方法，该专利公开的主要研究内容是金丝皇菊和山楂等多种天然原料直接熬制的茶，该茶具有清热解毒、清肝明目等活性，由于是多种天然原料获得的水溶性混合物，清肝明目活性并不一定来源于金丝皇菊，且该专利公开文献并不涉及脂肪肝治疗活性。
2、期刊1：孙华等，Natural Prenylchalconaringenins and Prenylnaringeninsas Antidiabetic Agents:α-Glucosidase and α-Amylase Inhibition and in VivoAntihyperglycemic and Antihyperlipidemic Effects.J.Agric.Food Chem.2017,65,1574-1581.该研究论文说明3’-香叶基柑橘查尔酮具有抑制α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶来起到体内降血糖作用，还发现3’-香叶基柑橘查尔酮具有降低2型糖尿病小鼠血液中甘油三酯和胆固醇的作用。该研究从糖尿病模型中发现该化合物具有降低血液中甘油三酯和胆固醇，但与脂肪肝没有直接关系，脂肪肝的形成需要“两次打击”，每次打击都是多方面的因素造成的，高血脂只是脂肪肝第一次打击中的多因素之一。
3、期刊2：RJ Rodriguez等，Influence ofprenylated and non-prenylatedflavonoids on liver microsomal lipid peroxidation and oxidative injury in rathepatocytes,Food and Chemical Toxicology 2001,39,437-445.该研究主要用肝细胞研究了肝微粒体超氧化和氧化损伤，说明了异戊烯查尔酮类化合物的异戊烯基是抗氧化活性的重要基团。该研究主要说明3’-香叶基柑橘查尔酮及其衍生物的抗氧化能力，并没有提及治疗脂肪肝活性。
通过对比，本发明与上述公开文献存在本质的不同。
发明内容
本发明目的在于克服现有技术中的不足之处，提供一种天然植物分子3’-香叶基柑橘查尔酮及组合物在制备治疗脂肪肝的产品方面中的应用。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种天然植物分子3’-香叶基柑橘查尔酮在制备治疗脂肪肝的产品方面中的应用。
而且，所述天然植物分子3’-香叶基柑橘查尔酮的结构式为：
Figure BDA0002401879260000031
而且，所述产品为功能性食品、保健品或药物。
一种包含天然植物分子3’-香叶基柑橘查尔酮的能够治疗脂肪肝的天然植物分子组合物。
而且，其组成成分及重量份数为：3’-香叶基柑橘查尔酮0.5-5份，和/或金丝皇菊水提物
1-15份，和/或金丝皇菊醇提物1-15份。
而且，所述金丝皇菊水提物的制备方法为：
称取金丝皇菊花，粉碎，加入水，金丝皇菊花：水的体积比为1:1-1:5，浸泡4-8小时， 80-120℃浸提6-10小时，过滤，收集水层，水层冻干，获得金丝皇菊水提物；
所述金丝皇菊醇提物的制备方法为：
称取金丝皇菊花，粉碎，加入95％的乙醇水溶液，金丝皇菊花：乙醇水溶液的体积比为 1：10-1:40，回流浸提3-5小时，过滤，收集乙醇层，蒸干，获得金丝皇菊醇提物。
而且，所述天然植物分子组合物的制备方法为：
将3’-香叶基柑橘查尔酮与金丝皇菊水提物，或3’-香叶基柑橘查尔酮与金丝皇菊醇提物，或3’-香叶基柑橘查尔酮与金丝皇菊水提物和金丝皇菊醇提物按重量份数混合均匀，即得。
如上所述的天然植物分子组合物在用于制备治疗脂肪肝的产品方面中的应用。
而且，所述产品为功能性食品、保健品或药物。
本发明取得的优点和积极效果为：
1、本发明提供了一种3’-香叶基柑橘查尔酮及其组合物在治疗脂肪肝方面的应用研究，且尚无关于3’-香叶基柑橘查尔酮或其组合物用于治疗脂肪肝疾病的报道。3’-香叶基柑橘查尔酮提取分离或其合成方法简单，成本较低，由于食源性物质其毒副作用小，因此，3’-香叶基柑橘查尔酮或其组合物作为制备治疗脂肪肝的功能性食品、保健品和药品方面的应用具有巨大市场潜力。
2、本发明提供3’-香叶基柑橘查尔酮或其与金丝皇菊组合物具有治疗脂肪肝的活性，制成相应制剂易于质量控制，具有食源性毒副作用小的特点，可在功能性食品、保健品和药品中应用，用于治疗脂肪肝的相关疾病。
3、本发明公开了3’-香叶基柑橘查尔酮及其组合物对脂肪肝具有良好的治疗效果，小鼠体内活性评价结果表明，3’-香叶基柑橘查尔酮及其组合物能够明显改善肝指数，缓解了肝细胞脂质堆积以及部分肝细胞的肿胀和变性的组织病理学形态，对肝脏内一系列生化指标也有明显改善。体外细胞水平评价结果也表明，3’-香叶基柑橘查尔酮及其组合物均具有缓解肝细胞脂质堆积、线粒体含量降低、线粒体膜电位下降等活性。因此，3’-香叶基柑橘查尔酮及其组合物可以用作治疗脂肪肝的功能性食品、保健品或药物，具有巨大市场潜力。
附图说明
图1为本发明中3’-香叶基柑橘查尔酮及其组合物对脂肪肝小鼠肝组织病理形态的影响图；其中，GC为3’-香叶基柑橘查尔酮(20μM)，GCZH1为3’-香叶基柑橘查尔酮(5μM)+金丝皇菊水提物(15μM)，GCZH2为3’-香叶基柑橘查尔酮(5μM)+金丝皇菊醇提物(15μM)，GCZH3为3’-香叶基柑橘查尔酮(5μM)+金丝皇菊水提物(7.5μM)+金丝皇菊醇提物(7.5μM)；
图2为本发明中对HepG2细胞模型的脂质沉积的影响图；其中，GC为3’-香叶基柑橘查尔酮(20μM)，GCZH1为3’-香叶基柑橘查尔酮(5μM)+金丝皇菊水提物(15μM)，GCZH2 为3’-香叶基柑橘查尔酮(5μM)+金丝皇菊醇提物(15μM)，GCZH3为3’-香叶基柑橘查尔酮(5μM)+金丝皇菊水提物(7.5μM)+金丝皇菊醇提物(7.5μM)；
图3为本发明中对HepG2肝细胞胰岛素抵抗的影响图；其中，MET为二甲双胍(1000μM)， GC为3’-香叶基柑橘查尔酮(20μM)，GCZH1为3’-香叶基柑橘查尔酮(5μM)+金丝皇菊水提物(15μM)，GCZH2为3’-香叶基柑橘查尔酮(5μM)+金丝皇菊醇提物(15μM)，GCZH3 为3’-香叶基柑橘查尔酮(5μM)+金丝皇菊水提物(7.5μM)+金丝皇菊醇提物(7.5μM)； ***P<0.001对比于模型组；
图4为本发明中对HepG2肝细胞线粒体含量的影响图；其中，GC为3’-香叶基柑橘查尔酮(20μM)，GCZH1为3’-香叶基柑橘查尔酮(5μM)+金丝皇菊水提物(15μM)，GCZH2 为3’-香叶基柑橘查尔酮(5μM)+金丝皇菊醇提物(15μM)，GCZH3为3’-香叶基柑橘查尔酮(5μM)+金丝皇菊水提物(7.5μM)+金丝皇菊醇提物(7.5μM)；
图5为本发明中对HepG2肝细胞线粒体膜电位的影响图；其中，GC为3’-香叶基柑橘查尔酮(20μM)，GCZH1为3’-香叶基柑橘查尔酮(5μM)+金丝皇菊水提物(15μM)，GCZH2 为3’-香叶基柑橘查尔酮(5μM)+金丝皇菊醇提物(15μM)，GCZH3为3’-香叶基柑橘查尔酮(5μM)+金丝皇菊水提物(7.5μM)+金丝皇菊醇提物(7.5μM)。
具体实施方式
下面详细叙述本发明的实施例，需要说明的是，本实施例是叙述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。
本发明中所使用的原料，如无特殊说明，均为常规的市售产品；本发明中所使用的方法，如无特殊说明，均为本领域的常规方法。
一种天然植物分子3’-香叶基柑橘查尔酮在制备治疗脂肪肝的产品方面中的应用。
较优地，所述天然植物分子3’-香叶基柑橘查尔酮的结构式为：
Figure BDA0002401879260000051
较优地，所述产品为功能性食品、保健品或药物。
一种包含天然植物分子3’-香叶基柑橘查尔酮的能够治疗脂肪肝的天然植物分子组合物。
较优地，其组成成分及重量份数为：3’-香叶基柑橘查尔酮0.5-5份，和/或金丝皇菊水提
物1-15份，和/或金丝皇菊醇提物1-15份。
较优地，所述金丝皇菊水提物的制备方法为：
称取金丝皇菊花，粉碎，加入水，金丝皇菊花：水的体积比为1:1-1:5，浸泡4-8小时， 80-120℃浸提6-10小时，过滤，收集水层，水层冻干，获得金丝皇菊水提物；
所述金丝皇菊醇提物的制备方法为：
称取金丝皇菊花，粉碎，加入95％的乙醇水溶液，金丝皇菊花：乙醇水溶液的体积比为 1：10-1:40，回流浸提3-5小时，过滤，收集乙醇层，蒸干，获得金丝皇菊醇提物。
较优地，所述天然植物分子组合物的制备方法为：
将3’-香叶基柑橘查尔酮与金丝皇菊水提物，或3’-香叶基柑橘查尔酮与金丝皇菊醇提物，或3’-香叶基柑橘查尔酮与金丝皇菊水提物和金丝皇菊醇提物按重量份数混合均匀，即得。
如上所述的天然植物分子组合物在用于制备治疗脂肪肝的产品方面中的应用。
较优地，所述产品为功能性食品、保健品或药物。
更具体地，相关制备及检测如下：
一、3’-香叶基柑橘查尔酮的制备
取40g啤酒花(中国产青岛大花，产地新疆，购于广东省珠海市斯丹纳贸易有限公司)，研磨粉碎，利用索氏提取器提取，按照1:5料液比，200mL石油醚，90℃回流脱色2h，将脱色后的样品，按照1:20料液比加入50％乙醇，120℃，2h回流提取两次，合并两次提取液，浓缩得乙醇浸膏。该浸膏进行硅胶柱色谱纯化，洗脱剂为石油醚:乙酸乙酯(50:1至 1:1)，二氯甲烷:甲醇(20:1至5:1)，获得3’-香叶基柑橘查尔酮。
3’-香叶基柑橘查尔酮的核磁共振谱图数据如下：
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ1.56(s,2H),1.61-1.69(m,5H),1.75(s,2H),1.94(t,J＝ 8.0Hz,2H),2.04(t,J＝7.6Hz,2H),3.20(d,J＝7.6Hz,2H),5.06(t,J＝7.2Hz,1H),5.20(t,J＝ 7.2Hz,1H),5.93(s,1H),6.81(d,J＝8.4Hz,2H),7.48(d,J＝8.8Hz,2H),7.68(d,J＝15.6Hz, 1H),8.08(d,J＝15.6Hz,1H).13C NMR(100MHz,Methanol-d4)δ14.8,16.3,20.8,24.4,26.35, 39.5,93.8,104.5,107.0,115.4,123.2,124.1,124.5,124.6,127.2,129.8,130.6,133.4,141.8,159.5, 159.7,162.4,164.2,192.9.
高分辨质谱数据如下：HRMS-ESI：m/z[M-H]-calcd for C25H27O5：407.1864，found：407.1860.
结构解析表明该化合物为3’-香叶基柑橘查尔酮。
二、3’-香叶基柑橘查尔酮组合物的制备
(1)金丝皇菊水提物的制备方法为：称取金丝皇菊花，粉碎，加入水，体积比1:1-1:5，浸泡4-8小时，80-120℃浸提6-10小时，过滤，收集水层，水层冻干，获得金丝皇菊水提物。
(2)金丝皇菊醇提物的制备方法为：称取金丝皇菊花，粉碎，加入95％的乙醇水溶液，体积比1：10-1:40，回流浸提3-5小时，过滤，收集乙醇层，蒸干，获得金丝皇菊醇提物。
(3)3’-香叶基柑橘查尔酮与金丝皇菊水提物组合物的制备方法：3’-香叶基柑橘查尔酮5 克，金丝皇菊水提物25克，混合均匀。
(4)3’-香叶基柑橘查尔酮与金丝皇菊醇提物组合物的制备方法：3’-香叶基柑橘查尔酮5 克，金丝皇菊醇提物25克，混合均匀。
(5)3’-香叶基柑橘查尔酮与金丝皇菊水提物和金丝皇菊醇提物组合物的制备方法：3’- 香叶基柑橘查尔酮5克，金丝皇菊水提物12.5克，金丝皇菊醇提物12.5克，混合均匀。
三、3’-香叶基柑橘查尔酮和其组合物用于治疗脂肪肝的小鼠体内活性评价
(一)实验材料
雄性昆明小鼠(18±22g,6周龄)，购自北京北京维通利华实验动物技术有限公司，饲养于天津科技大学动物房，环境温度为18-23℃，12小时/12小时明暗交替，所有小鼠自由饮食饮水。非诺贝特购于源叶生物；阿卡地新购于美仑生物；泰洛沙泊购于Sigma-Aldrich。
(二)实验方法
1.动物体内治疗脂肪肝活性评价
(1)脂肪肝小鼠模型的建立：
小鼠注射泰洛沙泊24h后，小鼠的血脂升到最高值，而且短时间内引起肝内脂肪堆积和肝损伤，应用于脂肪肝治疗活性评价。
(2)给药配制方法：
3’-香叶基柑橘查尔酮和其组合物给药溶液的配制：将药溶于吐温20中，超声10min后，加入超纯水(吐温与水的体积比5：95)稀释。
(3)动物分组
40只雄性昆明小鼠用普通饲料适应性饲养一周后，随机分成8组，每组5只。
1)正常小鼠组
2)模型小鼠组(注射泰洛沙泊)
3)3’-香叶基柑橘查尔酮组(3’-香叶基柑橘查尔酮100mg/kg)
4)3’-香叶基柑橘查尔酮组合物1组(3’-香叶基柑橘查尔酮50mg/kg+金丝皇菊水提物 250mg/kg)
5)3’-香叶基柑橘查尔酮组合物2组(3’-香叶基柑橘查尔酮50mg/kg+金丝皇菊醇提物 250mg/kg)
6)3’-香叶基柑橘查尔酮组合物3组(3’-香叶基柑橘查尔酮50mg/kg+金丝皇菊水提物 125mg/kg+金丝皇菊醇提物125mg/kg)
7)阳性对照1组(非诺贝特100mg/kg)
8)阳性对照2组(阿卡地新100mg/kg)
(4)小鼠体内实验评价过程
适应性饲养一周后，给小鼠腹腔注射泰洛沙泊500mg/kg，同时对给药物进行灌胃药物干预。3’-香叶基柑橘查尔酮组给予100mg/kg；3’-香叶基柑橘查尔酮组合物1组给予3’-香叶基柑橘查尔酮50mg/kg+金丝皇菊水提物250mg/kg；3’-香叶基柑橘查尔酮组合物2组给予3’-香叶基柑橘查尔酮50mg/kg+金丝皇菊醇提物250mg/kg；3’-香叶基柑橘查尔酮组合物3组给予 3’-香叶基柑橘查尔酮50mg/kg+金丝皇菊水提物125mg/kg+金丝皇菊醇提物125mg/kg；阳性对照组分别给予100mg/kg非诺贝特和100mg/kg阿卡地新灌胃；模型组给予溶剂。24小时后，对小鼠进行摘眼球取血，收集血清，并快速解剖出肝脏，肾脏，脂肪等组织，清洗称重。将其中部分肝脏放入4％多聚甲醛固定液中，用于肝脏油红O染色。剩余肝脏组织放入液氮中预冷，之后放于-80℃冰箱备用。
(三)活性评价结果
1、对小鼠肝脏形态学和肝指数的影响
在小鼠肝脏外观上，正常组小鼠肝脏多为暗红色，而模型组小鼠肝脏颜色发黄且油腻感，同时伴随有肝肿大和肝指数增大。3’-香叶基柑橘查尔酮和其组合物组，非诺贝特和阿卡地新给药后，肝脏的颜色逐渐恢复到暗红色正常的肝脏形态，同时，肝指数和肝肿大也有所恢复。如表1所示，口服给药3’-香叶基柑橘查尔酮后，肝指数明显改善(P＜0.01)，对于组合物1、 2和3，虽然3’-香叶基柑橘查尔酮用量减少50％，但添加金丝皇菊提取物后，效果相当或更优，尤其口服给药3’-香叶基柑橘查尔酮组合物2后，肝指数改善更加显著(P＜0.001)，该实验结果说明3’-香叶基柑橘查尔酮及其组合物均能改善脂肪肝肝脏形态和肝指数，组合物的应用有利于减少3’-香叶基柑橘查尔酮用量，添加食源性金丝皇菊成分也可达到类似效果。
表1肝脏指数(肝/体重,mg/g,n＝5)
分组 肝脏指数(mg/g±SEM)
正常组 49.06±0.96***
模型组 65.00±1.07
3’-香叶基柑橘查尔酮 52.78±3.44**
3’-香叶基柑橘查尔酮组合物1 53.64±3.95**
3’-香叶基柑橘查尔酮组合物2 50.28±2.19***
3’-香叶基柑橘查尔酮组合物3 53.80±3.19**
非诺贝特<sup>a</sup> 56.59±0.59**
阿卡地新<sup>a</sup> 57.41±1.39**
注：a阳性对照；*P＜0.05，**P＜0.01和***P<0.001与模型组相比
2、对肝脏组织病理形态的影响
如图1所示，通过肝脏油红O染色，发现正常组肝小叶结构正常，中央静脉及外周肝索规则呈规则分布，而模型组肝脏有大量的脂质堆积，部分肝细胞出现了肿胀、变性甚至坏死。口服给药3’-香叶基柑橘查尔酮及其3组组合物后，肝组织的病理形态得到明显改善，缓解了肝细胞脂质堆积以及部分肝细胞的肿胀和变性的现象。该实验结果说明3’-香叶基柑橘查尔酮及其组合物均能改善脂肪肝病理形态，组合物的应用有利于减少3’-香叶基柑橘查尔酮用量，添加食源性金丝皇菊成分也可达到类似效果。
3、对脂肪肝小鼠肝脏内生化指标的影响
脂质在肝脏内沉积是脂肪肝发生发展的必要条件。与正常组相比，模型组的甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL-C)含量明显增加，而高密度脂蛋白(HDL-C) 则显著下降。口服3’-香叶基柑橘查尔酮及其组合物后，脂肪肝肝脏内TC、TG和LDL-C水平呈剂量依赖性降低，作用效果与非诺贝特，阿卡地新相似。另外，肝脏谷丙转氨酶(ALT) 和谷草转氨酶(AST)水平是临床反映肝细胞发生炎症、坏死、损伤的重要指标。相比于正常组小鼠，模型组小鼠肝脏中ALT和AST活性明显升高，口服3’-香叶基柑橘查尔酮及其组合物后，ALT和AST的升高状况得到了缓解，甚至优于阳性对照(见表2)。对于3组合物，AST的升高状况缓解更为明显，推测原因可能与减少药物用量以及增加食源性成分有关，该实验数据说明，口服3’-香叶基柑橘查尔酮及其组合物后肝损伤改善效果明显，组合物对于改善AST的效果更为明显。
表2 3’-香叶基柑橘查尔酮及其组合物对小鼠肝脏生化指标的影响
Figure BDA0002401879260000091
注：各值均表示为平均值±标准差(n＝5)。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001与模型组对比。 GC为3’-香叶基柑橘查尔酮缩写，GCZH为3’-香叶基柑橘查尔酮组合物缩写。
四、3’-香叶基柑橘查尔酮和其组合物用于治疗脂肪肝的体外活性评价
(1)对HepG2细胞模型的脂质沉积影响的评价
脂质在肝脏中沉积，以及胰岛素抵抗，是脂肪肝发病机制过程中的“第一次打击”。在体内，首先进行了HepG2肝脏细胞的脂质沉积实验(见图2)。经过油酸，棕榈酸，亚油酸，花生四烯酸混合诱导剂处理后HepG2造成脂肪聚积，在细胞高存活率的条件下，3’-香叶基柑橘查尔酮和其3组组合物处理后细胞内脂质含量明显减少。
(2)对胰岛素抵抗的改善作用
脂质在肝脏中沉积，以及胰岛素抵抗，是脂肪肝发病机制过程中的“第一次打击”。在发生胰岛素抵抗的模型组产生高胰岛素血症，对胰岛素的敏感性大大地降低，使HepG2细胞的葡萄糖消耗量明显减少，说明模型组细胞对胰岛素具有抵抗作用。如图3所示，与发生胰岛素抵抗的模型组相比，二甲双胍组(MET，1000μM)为阳性对照，3’-香叶基柑橘查尔酮和其3组组合物均显著增加葡萄糖消耗，改善胰岛素抵抗。
(3)对肝细胞线粒体含量影响作用
细胞信号传导过程，如细胞外细胞因子、脂肪因子、细菌内毒素、线粒体功能障碍和/或内质网应激，或进一步进展为脂肪肝炎、激活炎症级联反应和纤维化称为“第二次打击”。因此，评价对肝细胞线粒体含量影响，可以反应缓解脂肪肝的效果。如图4所示，与未处理正常组细胞相比，模型组HepG2细胞中线粒体的绿色荧光强度(线粒体含量)明显降低了。而加入3’-香叶基柑橘查尔酮和其3组组合物绿色荧光强度明显增加。说明3’-香叶基柑橘查尔酮和其3组组合物能够增加因脂肪堆积产生的线粒体含量减少，从而阻止脂肪肝的进展。
(4)对线粒体膜电位的影响作用
在线粒体膜电位特异性荧光探针(TMRE)染色HepG2细胞的荧光图像可以看出，模型组线粒体膜电位明显降低，而加入3’-香叶基柑橘查尔酮和其3组组合物处理后，线粒体膜电位均升高。说明3’-香叶基柑橘查尔酮和其3组组合物能够增加因脂肪堆积产生的线粒体膜电位下降，从而阻止脂肪肝的进展(见图5)。
五、3’-香叶基柑橘查尔酮的应用
用于制备治疗肝的药物，包括活性成分3’-香叶基柑橘查尔酮，还包括药学上可以接受的载体或赋形剂，制成药学上可以接受的剂型药学上可以接受的载体或赋形剂包括一种或多种固体、半固体或液体辅料；药学上可以接受的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、丸剂、糖浆剂、散剂、膏剂、液体制剂等。
尽管为说明目的公开了本发明的实施例，但是本领域的技术人员可以理解：在不脱离本发明及所附权利要求的精神和范围内，各种替换、变化和修改都是可能的，因此，本发明的范围不局限于实施例所公开的内容。

Claims (9)

1.一种天然植物分子3'-香叶基柑橘查尔酮在制备治疗脂肪肝的产品方面中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述天然植物分子3'-香叶基柑橘查尔酮的结构式为：
Figure FDA0002401879250000011
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述产品为功能性食品、保健品或药物。
4.一种包含天然植物分子3'-香叶基柑橘查尔酮的能够治疗脂肪肝的天然植物分子组合物。
5.根据权利要求4所述的天然植物分子组合物，其特征在于：其组成成分及重量份数为：
3'-香叶基柑橘查尔酮0.5-5份，和/或金丝皇菊水提物1-15份，和/或金丝皇菊醇提物1-15份。
6.根据权利要求5所述的天然植物分子组合物，其特征在于：所述金丝皇菊水提物的制备方法为：
称取金丝皇菊花，粉碎，加入水，金丝皇菊花：水的体积比为1:1-1:5，浸泡4-8小时，80-120℃浸提6-10小时，过滤，收集水层，水层冻干，获得金丝皇菊水提物；
所述金丝皇菊醇提物的制备方法为：
称取金丝皇菊花，粉碎，加入95％的乙醇水溶液，金丝皇菊花：乙醇水溶液的体积比为1：10-1:40，回流浸提3-5小时，过滤，收集乙醇层，蒸干，获得金丝皇菊醇提物。
7.根据权利要求5或6所述的天然植物分子组合物，其特征在于：所述天然植物分子组合物的制备方法为：
将3'-香叶基柑橘查尔酮与金丝皇菊水提物，或3'-香叶基柑橘查尔酮与金丝皇菊醇提物，或3'-香叶基柑橘查尔酮与金丝皇菊水提物和金丝皇菊醇提物按重量份数混合均匀，即得。
8.如权利要求4至7任一项所述的天然植物分子组合物在用于制备治疗脂肪肝的产品方面中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述产品为功能性食品、保健品或药物。
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