CN111387438A - 一种海产品副产物活性成分的提取方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种海产品副产物活性成分的提取方法,所述方法为:将海产品副产物清洗干净,加入纯净水将海产品副产物粉碎打浆得到浆液;向浆液中加入糖化酶、中性蛋白酶、和动物蛋白水解复合酶进行酶解,酶解结束后加热灭活,再进行离心得到酶解液;向酶解液中加入汉逊酵母与黑曲霉进行发酵,发酵结束后升温灭菌,再进行离心分别得到固体发酵物和发酵液;将固体发酵物进行超临界CO2萃取得到萃取液;将发酵液与萃取液混合,负压真空抽提,得到去苦去腥抽提液;对去苦去腥抽提液进行浓缩得到即为海产品副产物活性成分。本发明得到的海产品副产物活性成分可有效缓解醉酒症状,预防醉酒,起到解酒护肝的效果。
Description
技术领域
本发明涉及生物活性物质提取技术领域,尤其涉及一种海产品副产物活性成分的提取方法及应用。
背景技术
鱼是海鲜产品中最受欢迎的一类。鱼肉中脂肪含量低蛋白质含量高,经常食用还可以将血脂,深受广大消费者喜爱。深海鱼中含有丰富的维生素a,可以有效的缓解疲劳,减少辐射对眼睛的伤害;深海鱼里含有大量的DHA,可以有效促进脑部发育,对增强记忆力有明显作用。鱿鱼主要分布于热带和温带浅海,是一种名贵的海产品。鱿鱼除富含蛋白质和人体所需的氨基酸外,鱿鱼还含有大量的牛黄酸,可抑制血液中的胆固醇含量,缓解疲劳,恢复视力,改善肝脏功能;鱿鱼油中的DNA、EPA的成分比普通鱼类的更好,所以鱿鱼常用于食品和保健品中。虾营养丰富,且其肉质松软,易消化,对身体虚弱以及病后需要调养的人的食物。虾中含有丰富的镁,镁对心脏活动具有重要的调节作用,能很好的保护心血管系统,它可减少血液中胆固醇含量,防止动脉硬化,同时还能扩张冠状动脉,有利于预防高血压及心肌梗死。
海产品加工企业在对海产品的处理过程中会产生大量副产物,为了使这些副产物能够最大化的被利用以争取更大的产品附加值,研发人员对副产物进行研究,目前已有从鱼类副产物提取鱼油,胶原蛋白等,从鱿鱼副产物中提取鱿鱼油,牛磺酸等的相关报道。
酒精中毒俗称醉酒,是指患者一次饮大量酒精(乙醇)后发生的机体机能异常状态,对神经系统和肝脏伤害最严重。医学上将其分为急性中毒和慢性中毒两种,前者可在短时间内给患者带来较大伤害,甚至可以直接或间接导致死亡。后者给患者带来的是累积性伤害,如酒精依赖、精神障碍、酒精性肝硬化及诱发某些癌症(口腔癌、舌癌、食管癌、肝癌)等。我国有文献报道急性酒精中毒患者占同期急诊患者的0.5%,占急性中毒患者的49%。民间解酒的方法很多,如饮醋、糖水、咖啡及茶水等等,这些方法虽然可以试用,但在医学上没有这些方法对酒精中毒有效的证据。目前市面上已经开发出一些能够预防和缓解醉酒的药物,但却未有海产品副产物用于预防和缓解醉酒的报道。
发明内容
本发明针对上述现有技术的不足,本发明提供一种海产品副产物活性成分的提取方法及该活性成分的应用,该提取方法可有效利用各类海产品副产物,开拓了海产品副产物的应用范围,提取出的活性成分可预防和缓解醉酒,减少人体对酒精的吸收从而起到保护肝脏的作用。
本发明是通过如下技术方案实现的:
本发明的第一方面,提供一种海产品副产物活性成分的提取方法,所述方法包括以下步骤:
(1)将海产品副产物清洗干净,加入纯净水将海产品副产物粉碎打浆得到浆液;
(2)向浆液中加入糖化酶、黑曲霉和动物蛋白水解复合酶进行酶解,酶解结束后加热灭活,再进行离心得到酶解液;
(3)向酶解液中加入汉逊酵母与黑曲霉进行发酵,发酵结束后升温灭菌,再进行离心分别得到固体发酵物和发酵液;
(4)将固体发酵物进行超临界CO2萃取得到萃取液;
(5)将步骤(3)得到的发酵液与步骤(4)得到的萃取液混合,负压真空抽提,得到去苦去腥抽提液;
(6)对去苦去腥抽提液进行浓缩,得到海产品副产物活性成分。
优选的,步骤(1)中,所述海产品副产物包括鱿鱼副产物、鱼类副产物和虾类副产物;所述鱿鱼副产物、鱼类副产物和虾类副产物的重量比为5:3:2。其中,鱼类副产物主要有内脏、鱼头、鱼鳞、鱼鳍、鱼鳔;鱿鱼副产物主要有内脏、墨汁、鱿鱼软骨、精巢、鱿鱼嘴;虾类副产物主要有虾头、虾壳。
优选的,步骤(1)中,所述纯净水与海产品副产物的质量比为1:1。
优选的,步骤(2)中,所述酶解温度为37℃,酶解时间为4h;所述糖化酶、中性蛋白酶、动物蛋白水解复合酶与浆液的质量比为1:1:0.5:(100~150)。
优选的,步骤(3)中,所述发酵温度为35℃,发酵时间为24h;所述汉逊酵母、黑曲霉与酶解液的质量比为2:1:(150~200)。
优选的,步骤(4)中,所述超临界CO2萃取的压力为25MPa,温度为30℃,时间为1.5h。
优选的,步骤(5)中,所述负压真空抽提的真空度为-0.09~0.03Mpa,抽提时间为1~1.5h。
优选的,步骤(6)中,将去苦去腥抽提液浓缩至海产品副产物活性成分的相对密度为1.2~1.3(50℃下测)。
本发明的第二方面,提供利用一种海产品副产物活性成分的提取方法提取得到的海产品副产物活性成分。
本发明的第三方面,海产品副产物活性成分在预防和缓解醉酒中的用途。
本发明的有益效果为:
1.本发明的方法可将海产品副产物进行有效利用,开拓了海产品副产物的应用范围。
2.采用本发明的方法提取的活性成分可解酒护肝,减少人体对酒精的吸收;预防醉酒,具有较好的应用前景。
具体实施方式
应该指出,以下详细说明都是例示性的,旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明,本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
正如背景技术所述,鱿鱼属于名贵海产品,鱿鱼中含有大量牛磺酸可抑制血液中的胆固醇含量。鱿鱼油中的DNA、EPA的成分比普通鱼类的更好,常用于制成各类保健品。但鱿鱼的副产物较多,可占整体的40~50%。鱼虾是餐桌上最常见的海产品,每年加工鱼虾都会产生大量副产物。这些副产品在加工时一般都废弃处理。而为了增加鱿鱼和鱼虾的附加值,对这些副产品进行研究,就显得尤为重要。为了提高副产品的利用率,发明人采用多种方法将鱿鱼的副产物、虾类副产物与鱼类副产物以不同比例混合进行提取,得到多种提取物。在对混合物进行研究时发现本发明中的提取方法得到的活性成分在有效预防和缓解醉酒等方面取得突出的效果。基于此,本发明人提出一种海产品副产物活性成分的提取方法,考察提取物对预防和缓解醉酒等方面的效果。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案,以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。如果实施例中未注明的实验具体条件,通常按照常规条件,或者按照试剂公司所推荐的条件;下述实施例中所用的试剂、耗材等,如无特殊说明,均可通过商业途径获得。
糖化酶购自安琪酵母股份有限公司,酶活为800-1600U/mL。
中性蛋白酶购自安琪酵母股份有限公司,酶活为1200-2000U/mL。
动物蛋白水解复合酶购自南宁东恒华道生物科技有限责任公司,酶活为1000-3000U/mL。
汉逊酵母购自中国工业微生物菌种保藏管理中心,菌种保藏号:CICC 1431。
黑曲霉购自中国工业微生物菌种保藏管理中心,菌种保藏号:CICC 2103。
实施例1:
将30g鱿鱼内脏、15g墨汁、3g鱿鱼软骨、2g鱿鱼精巢、20g黑鱼内脏、5g鱼鳞、5g鱼鳔、10g青虾头和10g青虾壳清洗干净,加入100g纯净水打浆得到浆液。向浆液中加入2g糖化酶、2g中性蛋白酶和1g动物蛋白水解复合酶37℃酶解4h,酶解结束后加热灭活,再进行离心得到酶解液。向酶解液中加入2g汉逊酵母和1g黑曲霉35℃发酵24h,发酵结束后升温灭菌,再进行离心分别得到固体发酵物和发酵液。将固体发酵物进行超临界CO2萃取,萃取的压力为25MPa,温度为30℃,1.5h后得到萃取液。将发酵液与萃取液混合,负压真空抽提,真空度为-0.09Mpa,抽提时间为1.5h,得到去苦去腥抽提液。对去苦去腥抽提液进行旋转蒸发浓缩,旋蒸蒸发浓缩的条件为:加热浴温度为60℃、真空度为0.95MPa、冷却介质温度为20℃,浓缩至海产品副产物活性成分的相对密度为1.23(50℃下测)。
实施例2
将35g鱿鱼内脏、10g墨汁、3g鱿鱼软骨、2g鱿鱼精巢、10g黑鱼内脏、10g鱼鳞、10g鱼鳔、5g青虾头和15g青虾壳清洗干净清洗干净,加入100g纯净水打浆得到浆液。向浆液中加入1.4g糖化酶、1.4g中性蛋白酶和0.7g动物蛋白水解复合酶37℃酶解4h,酶解结束后加热灭活,再进行离心得到酶解液。向酶解液中加入3g汉逊酵母和1.5g黑曲霉35℃发酵24h,发酵结束后升温灭菌,再进行离心分别得到固体发酵物和发酵液。将固体发酵物进行超临界CO2萃取,萃取的压力为25MPa,温度为30℃,1.5h后得到萃取液。将发酵液与萃取液混合,负压真空抽提,真空度为-0.03Mpa,抽提时间为1.5h,得到去苦去腥抽提液。对去苦去腥抽提液进行旋转蒸发浓缩,旋蒸蒸发浓缩的条件为:加热浴温度为60℃、真空度为0.95MPa、冷却介质温度为20℃,浓缩至海产品副产物活性成分的相对密度为1.25(50℃下测)。
对比例1
将30g鱿鱼内脏、15g墨汁、3g鱿鱼软骨、2g鱿鱼精巢、20g黑鱼内脏、5g鱼鳞、5g鱼鳔、10g青虾头和10g青虾壳清洗干净,加入100g纯净水打浆得到浆液。向浆液中加入2g糖化酶、2g中性蛋白酶和1g动物蛋白水解复合酶37℃酶解4h,酶解结束后加热灭活,再进行离心得到酶解液。将酶解液负压真空抽提,真空度为-0.09Mpa,抽提时间为1.5h,得到去苦去腥抽提液。对去苦去腥抽提液进行旋转蒸发浓缩,旋蒸蒸发浓缩的条件为:加热浴温度为60℃、真空度为0.95MPa、冷却介质温度为20℃,得到海产品副产物活性成分。
对比例2
将30g鱿鱼内脏、15g墨汁、3g鱿鱼软骨、2g鱿鱼精巢、20g黑鱼内脏、5g鱼鳞、5g鱼鳔、10g青虾头和10g青虾壳清洗干净,加入100g纯净水打浆得到浆液。向浆液中加入2g汉逊酵母和1g黑曲霉35℃发酵24h,发酵结束后升温灭菌,再进行离心分别得到固体发酵物和发酵液。将发酵液负压真空抽提,真空度为-0.09Mpa,抽提时间为1.5h,得到去苦去腥抽提液。对去苦去腥抽提液进行旋转蒸发浓缩,旋蒸蒸发浓缩的条件为:加热浴温度为60℃、真空度为0.95MPa、冷却介质温度为20℃,得到海产品副产物活性成分。
对比例3
将30g鱿鱼内脏、15g墨汁、3g鱿鱼软骨、2g鱿鱼精巢、20g黑鱼内脏、5g鱼鳞、5g鱼鳔、10g青虾头和10g青虾壳清洗干净,加入100g纯净水打浆得到浆液。向浆液中加入2g糖化酶、2g中性蛋白酶和1g动物蛋白水解复合酶37℃酶解4h,酶解结束后加热灭活,再进行离心得到酶解液。向酶解液中加入2g汉逊酵母和1g黑曲霉35℃发酵24h,发酵结束后升温灭菌,再进行离心分别得到固体发酵物和发酵液。将发酵液负压真空抽提,真空度为-0.09Mpa,抽提时间为1.5h,得到去苦去腥抽提液。对去苦去腥抽提液进行旋转蒸发浓缩,旋蒸蒸发浓缩的条件为:加热浴温度为60℃、真空度为0.95MPa、冷却介质温度为20℃,得到海产品副产物活性成分。
试验例
将SPF级健康成年雄性昆明小鼠随机分为以下几组:空白对照组、模型对照组、实施例组(实施例1和2组)、对比例组(对比例1~3组),每组10只小鼠;小鼠适应性饲养一周后,对小鼠禁食12h(不禁水),然后按照15mL/kg的剂量分别给各组小鼠灌胃56度红星二锅头白酒(北京红星酿酒厂),空白对照组给予等体积的蒸馏水;将实施例1~2和对比例1~3制备得到的海产品副产物活性成分分别加入适量的蒸馏水混匀,给酒5min后,实施例组和对比例组按照1.5mg/1Kg灌胃给予小鼠相对应的海产品副产物活性成分,空白对照组和模型对照组给予等体积蒸馏水,以小鼠翻正反射消失作为睡眠(醉酒)指标,记录翻正反射消失的时间及恢复时间,各组小鼠观察截止时间24h,计算出醉酒率、死亡率、醉酒潜伏期(醉酒潜伏期=翻正反射消失时间-给酒时间)、睡眠维持时间(睡眠维持时间=翻正反射恢复时间-翻正反射消失时间)、醒酒时间(醒酒时间=翻正反射恢复时间-给酒时间)以及24h生存情况,所得结果见表1。
表1
由表1可以看出,模型对照组小鼠的醉酒率为100%,实施例1和2组的醉酒率只有20%,24小时内的死亡率为0%,远小于模型对照组和对比例组;模型对照组醒酒时间超过6h,对比例组的最短醒酒时间也要4h以上;而实施例1和2组在2.5h左右就能完全醒酒。
试验例2
选择门诊和急诊醉酒男患者250例分成5组,年龄18-60岁,平均年龄35.2岁。患者症状持续1~6h,主要表现为酒后头晕头疼、恶心呕吐、昏睡不醒、烦热躁动等。将本发明实施例1和对比例1~3制备的海产品副产物活性成分与适量蒸馏水混匀,按照10mg/10Kg给每组患者服下,所得结果见表2。
表2
由表2可知,服用实施例1和2制备的海产品副产物活性成分后,有一半以上的患者在服药1h后酒后头晕、恶心呕吐、昏睡不醒、烦热躁动等症状得到明显改善,3h内所以患者的醉酒症状都得到明显改善,所以本发明制备的海产品副产物活性成分能够有效改善醉酒后的醉酒症状。而服用对比例1~3制备的海产品副产物活性成分后,1h后醉酒症状没有明显改善,服用3h醉酒症状明显改善的比例最多也只有36%。
试验例3
给200名爱好饮酒的志愿者(男性100名,女性100名)分成4组,每组志愿者提供本发明实施例1和对比例1~3制备的海产品副产物活性成分,服用时与蒸馏水混合,按照10mg/10Kg服下。向志愿者提供56度红星二锅头白酒(北京红星酿酒厂)饮至出现醉酒症状(头晕头疼、恶心呕吐、昏睡不醒、烦热躁动等)或者使用呼出气体酒精含量探测器检测达到醉酒标准(吹气检测并将呼气酒精含量按1:2200的比例关系换算成血液中酒精含量高于70mg/mL视为醉酒),则停止饮酒并开始计时,出现醉酒症状(头晕头疼、恶心呕吐、昏睡不醒、烦热躁动等)时停止计时;同时,对出现醉酒症状志愿者的数量进行统计,所得结果见表3。
表3
项目 | 实施例1 | 对比例1 | 对比例2 | 对比例3 |
服用1h醉酒症状的比例% | 16 | 92 | 90 | 82 |
服用2h醉酒症状的比例% | 30 | 100 | 92 | 86 |
服用3h醉酒症状的比例% | 42 | — | 100 | 96 |
服用6h醉酒症状的比例% | 42 | — | — | 100 |
由表3可知,服用本发明实施例1制备的海产品副产物活性成分3小时,只有42%的人出现醉酒症状,服用本发明制备的海产品副产物活性成分6h,出现醉酒症状的人数并未增加。由此可见,本发明制备的海产品副产物活性成分可有效预防醉酒,缓解醉酒症状。而服用对比例1制备的海产品副产物活性成分后,2h全部出现醉酒症状;服用对比例2制备的海产品副产物活性成分后,3h全部出现醉酒症状;服用对比例3制备的海产品副产物活性成分后,6h内全部出现醉酒症状;可见,对比例制备的海产品副产物活性成分很难达到预防醉酒的目的。而本发明制备的海产品副产物活性成分则可以阻止人体对酒精的吸收,有效预防酒精对人体造成的损害,从而起到解酒护肝的效果。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已,并不用于限制本申请,对于本领域的技术人员来说,本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本申请的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种海产品副产物活性成分的提取方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
(1)将海产品副产物清洗干净,加入纯净水将海产品副产物粉碎打浆得到浆液;
(2)向浆液中加入糖化酶、中性蛋白酶、动物蛋白水解复合酶进行酶解,酶解结束后加热灭活,再进行离心得到酶解液;
(3)向酶解液中加入汉逊酵母与黑曲霉进行发酵,发酵结束后升温灭菌,再进行离心分别得到固体发酵物和发酵液;
(4)将固体发酵物进行超临界CO2萃取得到萃取液;
(5)将步骤(3)得到的发酵液与步骤(4)得到的萃取液混合,负压真空抽提,得到去苦去腥抽提液;
(6)对去苦去腥抽提液进行浓缩,得到海产品副产物活性成分。
2.根据权利要求1所述的提取方法,其特征在于,步骤(1)中,所述海产品副产物包括鱿鱼副产物、鱼类副产物和虾类副产物;所述鱿鱼副产物、鱼类副产物和虾类副产物的重量比为5:3:2。
3.根据权利要求1所述的提取方法,其特征在于,步骤(1)中,所述纯净水与海产品副产物的质量比为1:1。
4.根据权利要求1所述的提取方法,其特征在于,步骤(2)中,所述酶解温度为37℃,酶解时间为4h;所述糖化酶、中性蛋白酶、动物蛋白水解复合酶与浆液的质量比为1:1:0.5:(100~150)。
5.根据权利要求1所述的提取方法,其特征在于,步骤(3)中,所述发酵温度为35℃,发酵时间为24h;所述汉逊酵母、黑曲霉与酶解液的质量比为2:1:(150~200)。
6.根据权利要求1所述的提取方法,其特征在于,步骤(4)中,所述超临界CO2萃取的压力为25MPa,温度为30℃,时间为1.5h。
7.根据权利要求1所述的提取方法,其特征在于,步骤(5)中,所述负压真空抽提的真空度为-0.09~0.03Mpa,抽提时间为1~1.5h。
8.根据权利要求1所述的提取方法,其特征在于,步骤(6)中,将去苦去腥抽提液浓缩至海产品副产物活性成分的相对密度为1.2~1.3(50℃下测)。
9.利用权利要求1~8中任一项所述的提取方法提取得到的海产品副产物活性成分。
10.权利要求9所述的海产品副产物活性成分在预防和缓解醉酒中的用途。
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