CN111378023A - 一种抗变异链球菌多肽及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医药应用领域，具体涉及一种抗变异链球菌多肽及应用。所述多肽的氨基酸序列为如SEQ ID NO.1所示，该多肽可高效杀灭变异链球菌，且对人血红细胞毒性极小，具有开发成抗变异链球菌药物、牙膏添加剂和漱口水的潜力，用于防治变异链球菌引起的龋齿。

Description

一种抗变异链球菌多肽及其应用
技术领域
本发明属于医药应用领域，具体涉及一种抗变异链球菌多肽及应用。
背景技术
抗菌肽(antibacterial peptides,ABPs)是生物体产生的一类具有广谱抗菌、抗病毒、杀寄生虫、抗肿瘤等活性的小分子多肽的总称，广泛分布于自然界的各种生物体内。国际文献中趋向于称为抗微生物肽(antimicrobial peptides,AMPs)或者“肽抗生素”(peptide antibi otics)。
抗菌肽由于抗菌效果好且毒副作用低，近年来已经成为新型抗菌药物研究领域的热点。变异链球菌是重要的口腔致病菌，是口腔主要的致龋齿菌之一。因此，有效的杀灭变异链球菌在龋齿的防治中具有重要意义。
发明内容
本发明旨在提供一种抗变异链球菌多肽，该抗菌肽能够治疗变异链球菌相关感染，且无毒副作用。
本发明第一个目的是提供一种抗变异链球菌多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列为：
Ile-Lys-Val-Gly-Ile-Asn-Gly-Phe-Gly-Arg-Ile-Gly-Arg-Leu-Val-Thr-Arg-Ala-Ile-Leu-Ala-Arg。
本发明第二个目的是提供上述的抗变异链球菌多肽在制备用于预防和/或治疗变异链球菌感染性疾病药物中的应用。
本发明第三个目的是提供上述的抗变异链球菌多肽在制备具有抑菌和/或杀菌性能产品中的应用，所述菌为变异链球菌。
本发明第四个目的是提供一种能够防治龋齿的口腔清洁制剂，所述口腔清洁制剂的有效成分为权利要求1所述的抗变异链球菌多肽。
进一步的，所述组合物为漱口水、牙膏。
本发明的抗变异链球菌多肽可以采用本领域技术人员已知的方法合成，例如固相合成，并采用本领域技术人员已知的方法进行鉴定，固相合成，并采用本领域技术人员已知的方法进行鉴定，反相高效液相色反相高效液相色谱纯化和电喷雾质谱法的鉴定，得到纯度大于95％的多肽纯品。
本发明所述的抗变异链球菌多肽可高效杀灭变异链球菌，且对人血红细胞毒性极小，具有开发成抗变异链球菌药物、牙膏添加剂和漱口水的潜力，用于防治变异链球菌引起的龋齿。
附图说明
图1为抗变异链球菌多肽溶血活性。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明，但不应理解为本发明的限制。如未特殊说明，下述实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
抗变异链球菌多肽(以下简称为抗菌多肽或多肽)的获得
本发明提出的抗变异链球菌多肽来源于我们所构建的中药蛴螬多肽序列数据库，其氨基酸序列如下：Ile-Lys-Val-Gly-Ile-Asn-Gly-Phe-Gly-Arg-Ile-Gly-Arg-Leu-Val-Thr-Arg-Ala-Ile-Leu-Ala Arg，如SEQ ID NO.1所示。根据所示的氨基酸序列，交由吉尔生化(上海)有限公司采用固相化学合成法合成，经反相高效液相色谱纯化和电喷雾质谱法的鉴定，得到纯度大于95％的多肽纯品。
实施例2
抗变异链球菌多肽的抑菌活性
将多肽配置成为一定浓度储存备用，以生理盐为稀释液，通过二倍稀释法配置系列梯度的多肽溶液。将对数生长期的待测菌液用新鲜的培养基调整为约105-106CFU/mL用于接种，其中变异链球菌所用培养基为BHI培养基，其他菌株所用培养基为LB培养基。分别取上述多肽溶液和菌液100μL加入无菌的96孔细胞培养版中，每个多肽浓度3个平行。37℃恒温培养，培养16-24h，以肉眼无可见细菌生长的最低多肽浓度为该多肽对检测菌的最小抑菌浓度。
抗变异链球菌多肽的抗菌活性如表1所示，由表1可以看出，该多肽对变异链球菌具有很好的抗菌活性，其最小抑菌浓度分别为25μg/mL。而在100μg/mL的浓度下对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌以及铜绿假单胞菌没有抗菌活性。说明该多肽具有很好的细菌选择性。
表1抗变异链球菌多肽的抑菌活性
Figure BDA0002414339600000031
Figure BDA0002414339600000041
实施例3
抗变异链球菌多肽的杀菌效果
将对数生长期的变异链球菌用新鲜的培养基调整为约105-106CFU/mL，加入抗菌多肽，抗菌多肽终浓度为100μg/mL，不加抗菌多肽为对照。分别于15min，30min取样并梯度稀释后涂布固体平板。37℃恒温培养，统计菌落数。
抗变异链球菌多肽的杀菌效率如表2所示。由表2可以看出，经多肽处理15min后可杀灭97.43％的变异链球菌，经多肽处理30min后可杀灭99.97％的变异链球菌。由此可以说明该多肽对变异链球菌具有很好杀灭活性，可快速高效的杀灭变异链球菌。
表2抗变异链球菌多肽的杀菌效率
Figure BDA0002414339600000042
实施例4
抗变异链球菌多肽的溶血活性
采集健康人新鲜血液抗凝血2mL，1000g离心5min，弃血浆收集红细胞。将收集到的红细胞用生理盐洗涤三遍，按2％(V/V)的比例重悬血细胞。在无菌的96孔细胞培养板中加入100μL上述红细胞重悬液，再分别加入不同浓度的多肽溶液，每个多肽浓度设置3个平行。以0.1％Tritonx-100作为完全溶血的阳性对照，以生理盐组作为不溶血的阴性对照。37℃孵育1h，1000g离心10min。离心后将上清转移到新的无菌96孔细胞培养板中，并利用酶标仪检测570nm处的光吸收值，计算多肽的溶血活性。
抗变异链球菌多肽溶血活性如图1所示，该多肽在800μg/mL的浓度下仅表现出约2％的溶血活性，说明其毒副作用非常低。
需要说明的是，本发明权利要求书中涉及数值范围时，应理解为每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用，为了防止赘述，本发明描述了优选的实施例。
尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
序列表
<110> 河南科技大学
<120> 一种抗变异链球菌多肽及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Ile Lys Val Gly Ile Asn Gly Phe Gly Arg Ile Gly Arg Leu Val Thr
1 5 10 15
Arg Ala Ile Leu Ala Arg
20

Claims (5)

1.一种抗变异链球菌多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列为：Ile-Lys-Val-Gly-Ile-Asn-Gly-Phe-Gly-Arg-Ile-Gly-Arg-Leu-Val-Thr-Arg-Ala-Ile-Leu-Ala-Arg。
2.如权利要求1所述的抗变异链球菌多肽在制备用于预防和/或治疗变异链球菌感染性疾病药物中的应用。
3.如权利要求1所述的抗变异链球菌多肽在制备具有抑菌和/或杀菌性能产品中的应用，其特征在于，所述菌为变异链球菌。
4.一种能够防治龋齿的口腔清洁制剂，其特征在于，所述口腔清洁制剂的有效成分为权利要求1所述的抗变异链球菌多肽。
5.如权利要求4所述的口腔清洁制剂，其特征在于，所述口腔清洁制剂为漱口水、牙膏。
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