CN111363807A - Evc综合征的检测方法、检测组合物及检测试剂盒 - Google Patents

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张癸荣
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伍昌胜
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乔国枝
万振兴
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Abstract

本发明涉及一种EVC综合征的检测方法、检测组合物及检测试剂盒，针对EVC综合征筛选得到EVC2基因编码区及EVC2基因上下游的多个SNP位点，基于该编码区和多个SNP位点可以在二代测序平台建立一种通用性强、诊断率高、成本低的胚胎植入前遗传学检测的方法。通过检测受检样本的上述编码区和SNP位点的序列信息，并进行分析比对即可确定胚胎的EVC综合征检测结果。除了编码区，该方案在EVC2基因上下游共选择了200个SNP进行分析，通用性非常高，能够一次性对大量样品进行分析，结果可信度高，检测成本较低。

Description

EVC综合征的检测方法、检测组合物及检测试剂盒
技术领域
本发明涉及基因检测领域，特别是涉及一种EVC综合征的检测方法、检测组合物及检测试剂盒。
背景技术
Ellis-van Creveld综合征(EVC，MIM 225500)，又名软骨外胚层发育不良症，是一种以骨骼发育不良为主要特征的常染色体隐性遗传病。1940年E1lis和van Creveld以其姓氏命名该疾病。EVC综合征的主要特征是骨骼、外胚层和心脏等发育不良。骨骼病变表现为短肢、短肋、轴后多指(趾)等，外胚层发育不良表现为指(趾)甲发育不良和先天缺牙，口腔表现还有系带异常增多、锥形牙及牙釉质异常等。大约2/3的患者同时患有心脏缺陷，主要表现为房间隔缺损或房室隔缺损、单个心房。EVC综合征具有遗传异质性，由位于染色体4p16.1上的EVC或EVC2基因突变引起。其中EVC2基因有22个外显子，在人类基因组中全长约160kb，编码1308个氨基酸，与其他蛋白无同源性。
EVC综合征尚无有效的治疗方法，产期诊断或胚胎植入前遗传学检测(Preimplantation genetic testing，PGT)，是预防出生缺陷的有效手段。PGT是指当胚胎在体外发育至卵裂期或囊胚期时，活检若干细胞进行遗传学检测，最终选择无患病风险的胚胎植入母体子宫，从而达到生育健康后代的目的。PGT可有效避免因妊娠遗传病胎儿而终止妊娠所带来的身心伤害，越来越成为有生育遗传病高风险胎儿夫妇的首选，但目前尚未发现针对EVC2基因的PGT检测方法的报道。
发明内容
基于此，有必要提供一种通用性强、诊断率高、成本低的胚胎植入前EVC综合征的检测方法、检测组合物及试剂盒。
一种胚胎植入前的EVC综合征的检测方法，包括以下步骤：
获取胚胎的基因组DNA；
检测所述基因组DNA中EVC2基因编码区及EVC2基因上下游的SNP位点的序列信息，所述EVC2基因编码区及EVC2基因上下游的SNP位点包括chr4:3608593、chr4:3634029、chr4:3660926、chr4:3686670、chr4:3711721、chr4:3740110、chr4:3790721、chr4:3840493、chr4:3870725、chr4:4206953、chr4:4242950、chr4:4268382、chr4:4294145、chr4:4319334、chr4:4369224、chr4:4394596、chr4:4428890、chr4:4496281、chr4:4521915、chr4:4555325、chr4:4579042、chr4:4593958、chr4:4604484、chr4:4611819、chr4:4626713、chr4:4633550、chr4:4641569、chr4:4648047、chr4:4661428、chr4:4677394、chr4:4684642、chr4:4692728、chr4:4704014、chr4:4710203、chr4:4720455、chr4:4734943、chr4:4748273、chr4:4761140、chr4:4773935、chr4:4786727、chr4:4793833、chr4:4807000、chr4:4819662、chr4:4827883、chr4:4834939、chr4:4847878、chr4:4856579、chr4:4871549、chr4:4905782、chr4:4921768、chr4:4932445、chr4:4945900、chr4:4952677、chr4:4962683、chr4:4969647、chr4:4979647、chr4:4992367、chr4:5004081、chr4:5011784、chr4:5056112、chr4:5075159、chr4:5083419、chr4:5101174、chr4:5109522、chr4:5123539、chr4:5131872、chr4:5142212、chr4:5156927、chr4:5170284、chr4:5186772、chr4:5202206、chr4:5212292、chr4:5218696、chr4:5228982、chr4:5237192、chr4:5254744、chr4:5280255、chr4:5292811、chr4:5303018、chr4:5315419、chr4:5322697、chr4:5332316、chr4:5348043、chr4:5357432、chr4:5365859、chr4:5381051、chr4:5389025、chr4:5403998、chr4:5413699、chr4:5427325、chr4:5439829、chr4:5452895、chr4:5466902、chr4:5480337、chr4:5498794、chr4:5505585、chr4:5516179、chr4:5527008、chr4:5540983、chr4:5550106、chr4:5564455-5564701、chr4:5564639-5564891、chr4:5566853-5567127、chr4:5570059-5570305、chr4:5570232-5570398、chr4:5576324-5576598、chr4:5577828-5578075、chr4:5578021-5578257、chr4:5586258-5586506、chr4:5586386-5586623、chr4:5617071-5617321、chr4:5620037-5620290、chr4:5620235-5620446、chr4:5624075-5624347、chr4:5624235-5624506、chr4:5624423-5624646、chr4:5624541-5624787、chr4:5627419-5627693、chr4:5627518-5627788、chr4:5630135-5630409、chr4:5630350-5630602、chr4:5633365-5633639、chr4:5633575-5633806、chr4:5642162-5642427、chr4:5642364-5642638、chr4:5664754-5665026、chr4:5667185-5667459、chr4:5682854-5683122、chr4:5686968-5687239、chr4:5690844-5691118、chr4:5692920-5693176、chr4:5695843-5696117、chr4:5696050-5696310、chr4:5699203-5699477、chr4:5709817-5710091、chr4:5711334、chr4:5719274、chr4:5728053、chr4:5735817、chr4:5743979、chr4:5752802、chr4:5761366、chr4:5769827、chr4:5778582、chr4:5790159、chr4:5799077、chr4:5814608、chr4:5826597、chr4:5837871、chr4:5846371、chr4:5860906、chr4:5871485、chr4:5881425、chr4:5898129、chr4:5914310、chr4:5931385、chr4:5972799、chr4:5982108、chr4:5998602、chr4:6007400、chr4:6016599、chr4:6025638、chr4:6065298、chr4:6074289、chr4:6085543、chr4:6097295、chr4:6106744、chr4:6118000、chr4:6135321、chr4:6143608、chr4:6152171、chr4:6161431、chr4:6173392、chr4:6183715、chr4:6200435、chr4:6218358、chr4:6226985、chr4:6233890、chr4:6244933、chr4:6252010、chr4:6332350、chr4:6339194、chr4:6350058、chr4:6363413、chr4:6374468、chr4:6388191、chr4:6401329、chr4:6407801、chr4:6417485、chr4:6430773、chr4:6444182、chr4:6452640、chr4:6465928、chr4:6474866、chr4:6489006、chr4:6502409、chr4:6517066、chr4:6531561、chr4:6538565、chr4:6550849、chr4:6557271、chr4:6566798、chr4:6575282、chr4:6581608、chr4:6592205、chr4:6606864、chr4:6616680、chr4:6627983、chr4:6640703、chr4:6649821、chr4:6663319、chr4:6671381、chr4:6678553、chr4:6686114、chr4:6707338、chr4:6748067、chr4:6802816、chr4:6859939、chr4:6917983、chr4:6969727、chr4:7024349、chr4:7075827、chr4:7129556、chr4:7181294、chr4:7233372、chr4:7283617、chr4:7334133、chr4:7383850、chr4:7414014、chr4:7466082、chr4:7516274、chr4:7573488、chr4:7622357、chr4:7651958和chr4:7709100；
比对分析所述序列信息以确定所述胚胎是否具有EVC综合征。
在其中一个实施例中，检测所述序列信息的步骤包括以下步骤：利用能分别特异性扩增EVC2基因编码区及EVC2基因上下游的SNP位点的多对引物对所述基因组DNA进行多重PCR得到扩增产物，对所述扩增产物进行测序以得到所述序列信息。
在其中一个实施例中，所述引物选自SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：470中的至少一个。
在其中一个实施例中，所述比对分析的步骤包括以下步骤：将所述序列信息与亲代双方的DNA序列进行比对，分析所述胚胎的单体型。
在其中一个实施例中，所述比对分析的步骤还包括以下步骤：将所述序列信息与人类基因组参考序列进行比对，分析SNP覆盖倍数和基因型。
在其中一个实施例中，获取所述基因组DNA的步骤包括以下步骤：对发育至卵裂期或囊胚期的胚胎进行细胞活检，并对活检细胞中的DNA进行全基因组扩增。
一种用于检测EVC综合征的检测组合物，包括能够分别检测上述EVC2基因编码区及EVC2基因上下游的SNP位点的序列信息的多个检测剂。
在其中一个实施例中，所述检测剂为PCR引物，所述检测剂选自SEQ ID NO：1～SEQID NO：470中的至少一个。
一种用于检测EVC综合征的检测试剂盒，包括上述检测组合物和用于文库构建的反应试剂。
在其中一个实施例中，所述反应试剂选自多重PCR聚合酶、DNA连接酶、末端修复酶、dNTPs和PCR缓冲液中的一种或多种。
本发明针对EVC综合征筛选得到EVC2基因编码区及EVC2基因上下游的多个SNP位点，基于该编码区和多个SNP位点可以在二代测序平台建立一种通用性强、诊断率高、成本低的胚胎植入前遗传学检测的方法。通过检测受检样本的上述编码区和SNP位点的序列信息，并进行分析比对即可确定胚胎的EVC综合征检测结果。除了编码区，该方案在EVC2基因上下游共选择了200个SNP进行分析，通用性非常高，省去了细胞水平预实验，基于高通量测序技术，能够一次性对大量样品进行分析，平均测序深度可达100X以上，结果可信度高，检测成本较低。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述，并给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
在本发明中，读段(reads)是指测序获得的序列片段；单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphism，SNP)主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性；单体型(Haplotype)指位于一条染色体特定区域的一组相互关联，并倾向于以整体遗传给后代的单核苷酸多态的组合，又称单倍体型或单元型；测序深度即例如在一个实施方案中，测序深度为1000X，则代表该条特异PCR扩增产物被测序1000次。
本发明一实施例的胚胎植入前的EVC综合征的检测方法，包括以下步骤S1～S3：
S1、获取胚胎的基因组DNA。
S2、检测基因组DNA中EVC2基因编码区及EVC2基因上下游的SNP位点的序列信息，EVC2基因编码区及EVC2基因上下游的SNP位点包括chr4:3608593、chr4:3634029、chr4:3660926、chr4:3686670、chr4:3711721、chr4:3740110、chr4:3790721、chr4:3840493、chr4:3870725、chr4:4206953、chr4:4242950、chr4:4268382、chr4:4294145、chr4:4319334、chr4:4369224、chr4:4394596、chr4:4428890、chr4:4496281、chr4:4521915、chr4:4555325、chr4:4579042、chr4:4593958、chr4:4604484、chr4:4611819、chr4:4626713、chr4:4633550、chr4:4641569、chr4:4648047、chr4:4661428、chr4:4677394、chr4:4684642、chr4:4692728、chr4:4704014、chr4:4710203、chr4:4720455、chr4:4734943、chr4:4748273、chr4:4761140、chr4:4773935、chr4:4786727、chr4:4793833、chr4:4807000、chr4:4819662、chr4:4827883、chr4:4834939、chr4:4847878、chr4:4856579、chr4:4871549、chr4:4905782、chr4:4921768、chr4:4932445、chr4:4945900、chr4:4952677、chr4:4962683、chr4:4969647、chr4:4979647、chr4:4992367、chr4:5004081、chr4:5011784、chr4:5056112、chr4:5075159、chr4:5083419、chr4:5101174、chr4:5109522、chr4:5123539、chr4:5131872、chr4:5142212、chr4:5156927、chr4:5170284、chr4:5186772、chr4:5202206、chr4:5212292、chr4:5218696、chr4:5228982、chr4:5237192、chr4:5254744、chr4:5280255、chr4:5292811、chr4:5303018、chr4:5315419、chr4:5322697、chr4:5332316、chr4:5348043、chr4:5357432、chr4:5365859、chr4:5381051、chr4:5389025、chr4:5403998、chr4:5413699、chr4:5427325、chr4:5439829、chr4:5452895、chr4:5466902、chr4:5480337、chr4:5498794、chr4:5505585、chr4:5516179、chr4:5527008、chr4:5540983、chr4:5550106、chr4:5564455-5564701、chr4:5564639-5564891、chr4:5566853-5567127、chr4:5570059-5570305、chr4:5570232-5570398、chr4:5576324-5576598、chr4:5577828-5578075、chr4:5578021-5578257、chr4:5586258-5586506、chr4:5586386-5586623、chr4:5617071-5617321、chr4:5620037-5620290、chr4:5620235-5620446、chr4:5624075-5624347、chr4:5624235-5624506、chr4:5624423-5624646、chr4:5624541-5624787、chr4:5627419-5627693、chr4:5627518-5627788、chr4:5630135-5630409、chr4:5630350-5630602、chr4:5633365-5633639、chr4:5633575-5633806、chr4:5642162-5642427、chr4:5642364-5642638、chr4:5664754-5665026、chr4:5667185-5667459、chr4:5682854-5683122、chr4:5686968-5687239、chr4:5690844-5691118、chr4:5692920-5693176、chr4:5695843-5696117、chr4:5696050-5696310、chr4:5699203-5699477、chr4:5709817-5710091、chr4:5711334、chr4:5719274、chr4:5728053、chr4:5735817、chr4:5743979、chr4:5752802、chr4:5761366、chr4:5769827、chr4:5778582、chr4:5790159、chr4:5799077、chr4:5814608、chr4:5826597、chr4:5837871、chr4:5846371、chr4:5860906、chr4:5871485、chr4:5881425、chr4:5898129、chr4:5914310、chr4:5931385、chr4:5972799、chr4:5982108、chr4:5998602、chr4:6007400、chr4:6016599、chr4:6025638、chr4:6065298、chr4:6074289、chr4:6085543、chr4:6097295、chr4:6106744、chr4:6118000、chr4:6135321、chr4:6143608、chr4:6152171、chr4:6161431、chr4:6173392、chr4:6183715、chr4:6200435、chr4:6218358、chr4:6226985、chr4:6233890、chr4:6244933、chr4:6252010、chr4:6332350、chr4:6339194、chr4:6350058、chr4:6363413、chr4:6374468、chr4:6388191、chr4:6401329、chr4:6407801、chr4:6417485、chr4:6430773、chr4:6444182、chr4:6452640、chr4:6465928、chr4:6474866、chr4:6489006、chr4:6502409、chr4:6517066、chr4:6531561、chr4:6538565、chr4:6550849、chr4:6557271、chr4:6566798、chr4:6575282、chr4:6581608、chr4:6592205、chr4:6606864、chr4:6616680、chr4:6627983、chr4:6640703、chr4:6649821、chr4:6663319、chr4:6671381、chr4:6678553、chr4:6686114、chr4:6707338、chr4:6748067、chr4:6802816、chr4:6859939、chr4:6917983、chr4:6969727、chr4:7024349、chr4:7075827、chr4:7129556、chr4:7181294、chr4:7233372、chr4:7283617、chr4:7334133、chr4:7383850、chr4:7414014、chr4:7466082、chr4:7516274、chr4:7573488、chr4:7622357、chr4:7651958和chr4:7709100。
S3、比对分析序列信息以确定胚胎是否具有EVC综合征。
根据欧洲人类生殖与胚胎协会(ESHRE)“对于以扩增为基础的PGD实践指南”(2011年版)，建议单基因遗传病的植入前遗传学检测，采用突变检测联合单体型分析的策略，以保证胚胎检测结果的准确度。在胚胎水平进行基因检测的常见方法有多重巢式PCR及Karyomapping技术。多重巢式PCR法需要预先筛选出杂合的短串联重复序列(STR)，然后在淋巴细胞水平建立包含突变位点和杂合STR位点的多重PCR体系，并在细胞水平评估各位点扩增效率及等位基因脱扣率，合格后才能应用于胚胎检测。由于STR数量有限，且人群中杂合频率不同，所以多重巢式PCR法设计较为个性化，通用性较低。个性化强也意味着工作量大，检测周期长。
相较于STR位点，单核苷酸多态位点(SNP)数量多分布广，在人群中的发生频率超过1％，其总数达300万个，平均1个/3Kb，在高通量测序平台易实现自动化分析。Karyomapping技术即通过SNP连锁分析间接排除基因缺陷。该芯片上有30万个SNP探针用于全基因组的连锁分析，是一种综合的通用的单基因病PGD技术。但是Karyomapping不能检测基因突变，所以必须要有先证者样本或合适的家系成员样本。如果没有足够的家系样本，则需要额外增加突变检测。
本发明针对EVC综合征筛选得到EVC2基因编码区及EVC2基因上下游的多个SNP位点，基于该编码区和多个SNP位点可以在二代测序平台建立一种通用性强、诊断率高、成本低的胚胎植入前遗传学检测的方法。通过检测受检样本的上述编码区和SNP位点的序列信息，并进行分析比对即可确定胚胎的EVC综合征检测结果。除了编码区，该方案在EVC2基因上下游共选择了200个SNP进行分析，通用性非常高，省去了细胞水平预实验，基于高通量测序技术，能够一次性对大量样品进行分析，平均测序深度可达100X以上，结果可信度高，检测成本较低。
可以理解，该检测方法的检测对象是未植入子宫的胚胎，不是以有生命的人体或者动物体为对象，其检测结果也不涉及其亲代双方的疾病诊断结果，因此不属于疾病的诊断和治疗方法。
本发明上述SNP位点基于以下筛选原则，并结合长期试验优化最终确定：
(1)高频SNP选取自千人基因组计划数据库
(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/variation/tools/1000genomes/)；
(2)最小等位基因频率均大于0.2的高频SNP位点；
(3)去除多聚核苷酸(polyN)和位点上下游50bp序列中GC含量>70％的SNP位点；
(4)去除上下游50bp序列比对到人类基因组hg19有多个位置的SNP位点(即去除同源性高的SNP位点)；
(5)SNP选取范围：优先选择基因上下游1Mb以内的SNP位点，若1Mb以内的SNP数量少，可适当扩大范围，如上下游各2Mb。
在一个具体示例中，检测上述序列信息的步骤包括以下步骤：利用能分别特异性扩增EVC2基因编码区及EVC2基因上下游的SNP位点的多对引物对基因组DNA进行多重PCR得到扩增产物，对扩增产物进行测序以得到序列信息。可以理解，检测上述序列信息的方法不限于此，本领域技术人员可根据需要选择。
在一个具体示例中，上述引物选自SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：470中的至少一个。优选地，上述引物包括SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：470。本发明所设计筛选得到的上述引物特异性高，具有相近的退火温度，PCR产物片段大小均在125bp～275bp范围内。编码区及SNP位点在chr4上的位置及对应235对引物的序列如表1所示，其中序号1～100为EVC2基因下游2M以内的SNP位点及引物对，序号101～135为EVC2基因编码区及引物对，序号136～235为EVC2基因上游2M以内的SNP位点及引物对。通过235对引物混合到一个PCR反应管中，进行235重反应，将受检样本的EVC2基因编码区及上下游SNP位点都扩增下来。
表1 SNP位点及引物序列表
Figure BDA0002477054110000051
Figure BDA0002477054110000061
Figure BDA0002477054110000071
Figure BDA0002477054110000081
Figure BDA0002477054110000091
Figure BDA0002477054110000101
Figure BDA0002477054110000111
Figure BDA0002477054110000121
Figure BDA0002477054110000131
在一个具体示例中，上述获取基因组DNA的步骤包括以下步骤：对发育至卵裂期或囊胚期的胚胎进行细胞活检，并对活检细胞中的DNA进行全基因组扩增。
在一个具体示例中，上述比对分析的步骤包括以下步骤：将上述序列信息与亲代双方的DNA序列进行比对，分析胚胎的单体型。
在一个具体示例中，上述比对分析的步骤还包括以下步骤：将上述序列信息与人类基因组参考序列进行比对，分析SNP覆盖倍数和基因型。可以理解，人类基因组参考序列可以来自公共数据库。具体地，人类基因组参考序列可以是NCBI或者UCSC数据库中的人类基因组参考序列如hg19、hg38等人类参考基因组序列。
可以理解，亲代双方的DNA序列也可通过对亲代双方的DNA样本进行测序得到。可选地，亲代双方的DNA样本选自外周血基因组DNA、精液DNA、口腔粘膜细胞DNA和细胞全基因组扩增产物中的一种或多种。优选地，每份DNA样本中的DNA含量大于500ng。
在一个具体示例中，测序的方法为Ion Torrent PGM或Illumina Miseq，按照其对应的标准建库流程进行建库。测序分析时序列比对可以通过任何一种序列比对程序，例如采用本领域技术人员可获得的BWA(Burrow-Wheeler-Aligner)进行比对，将读段与参考基因组序列比对，得到读段在参考基因组上的位置。数据分析时可利用trimmomatic软件对Illumina等测序仪产生的原始数据去除接头序列，BWA软件比对到人类参考基因组，最后分析单体型SNP位点覆盖倍数和基因型。
本发明一实施例的用于检测EVC综合征的检测组合物，包括能够分别检测上述EVC2基因编码区及EVC2基因上下游的SNP位点的序列信息的多个检测剂。
可选地，检测剂为PCR引物，且选自SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：470中的至少一个。可以理解，检测剂不限于此，例如也可以是探针等。
本发明一实施例的用于检测EVC综合征的检测试剂盒，包括上述检测组合物和用于文库构建的反应试剂。
在一个具体示例中，用于文库构建的反应试剂选自多重PCR聚合酶、DNA连接酶、末端修复酶、dNTPs和PCR缓冲液中的一种或多种。可以理解，不限于此，试剂盒可以根据需要增减各种试剂。
在一个具体示例中，检测试剂盒还包括标签序列，当待测的DNA分子来自多个受试样品时，每个样品可以被加上不同的标签序列(barcode)，以用于在测序过程中进行样品的区分，从而实现同时对多个样品进行测序。
以下为具体实施例。
实施例1
一对夫妇曾孕三胎，其中两胎于孕期B超提示四肢短小，心脏发育异常，初步诊断为Ellis-van Creveld综合征。遗传学检测结果提示胎儿EVC2基因存在c.3413C>T(p.Thr1138Met)及c.3640delG(p.Ala1214Profs*9)复合杂合突变，分别遗传自女方和男方。该对夫妻申请针对上述致病突变进行胚胎植入前遗传学检测(PGT)，以生育健康后代。
由于引产胎儿遗传物质不足，故采集男女方双方父母血样进行遗传学检测，结果提示，男女方所携带突变均遗传自各自的母亲，通过家系信息明确了男女方的风险染色体单体型。
该对夫妇经PGT助孕，获得6枚胚胎(P774-GZW-1～6)，胚胎发育至囊胚期进行滋养层细胞活检，活检细胞经全基因组扩增后，进一步检测EVC2基因已知变异及单体型。
结果显示，6枚胚胎中，4枚为正常，1枚为父源突变携带者，1枚为母源突变携带者。该对夫妇移植了一枚正常胚胎，孕16周行产前超声诊断和基因诊断，B超提示胎儿发育正常，遗传学检测提示胎儿EVC2基因不存在c.3413C>T或c.3640delG突变，与PGT结果一致。
以下为植入前遗传学检测过程：
1、建库和测序
按照Illumina标准建库流程对活检细胞全基因组扩增产物进行建库，用Miseq测序仪进行测序。
2、比对与统计
利用trimmomatic软件对Illumina测序仪产生的原始数据去除接头序列，用BWA软件比对到人类hg19参考基因组，最后分析单体型SNP覆盖倍数和基因型。
3、结果分析
检测结果如表2所示，其中，F0表示男方风险染色体，F1表示男方正常染色体；M0表示女方风险染色体，M1表示女方正常染色体。
Figure BDA0002477054110000141
质控结果如表3所示，可见平均测序深度均在100×以上，30×覆盖度均在70％以上，100×覆盖度均在50％以上，质控合格。
表3高通量测序质控
Figure BDA0002477054110000151
突变检测结果如表4所示，其中，Hom表示此突变位点为纯合突变，Het表示此突变位点为杂合突变，Hemi表示此突变位点为半合子突变，Normal表示此位点未检出突变。由于设计方案覆盖了EVC2基因全部的编码区，所以发生在编码区的基因突变可以有效地检测到，并且测序深度均大于100×。
表4高通量测序突变检测
Figure BDA0002477054110000152
Figure BDA0002477054110000161
有效SNP位点统计如表5所示，可见男女方EVC2基因两侧1M以内均分别有2个以上杂合SNP位点，符合欧洲人类生殖与胚胎协会(ESHRE)“对于以扩增为基础的PGT实践指南”(2011年版)的要求。
表5目标基因SNP位点统计
Figure BDA0002477054110000162
SNP单体型(节选部分SNP位点展示)如表6所示，其中，F0表示男方风险染色体，F1表示男方正常染色体；M0表示女方风险染色体，M1表示女方正常染色体。
表6 SNP位点
Figure BDA0002477054110000163
Figure BDA0002477054110000171
Figure BDA0002477054110000181
实施例2
采用相同检测方法在30人份样本中进行测试，通过标准设定为基因两侧各有2个以上有效SNP，30名受检者通过率100％，说明本发明EVC综合征的检测方法通用性和准确性较高。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
序列表
<110> 中信湘雅生殖与遗传专科医院有限公司
北京嘉宝仁和医疗科技有限公司
<120> EVC综合征的检测方法、检测组合物及检测试剂盒
<160> 470
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gagtgaatga gtgagggaat gaagaaat 28
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
cgtggatcat gaggtgacaa ct 22
<210> 3
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
gggtcatctt gaagctgagg at 22
<210> 4
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
tcctccttct ccactggaaa gtt 23
<210> 5
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
acacgggttc ttagatctca ctca 24
<210> 6
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
ctcagggatg aggacagtta gc 22
<210> 7
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
cccaatggag tgtactggaa atgg 24
<210> 8
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
acacctattc actcccgagg tat 23
<210> 9
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
gttttggctg tcatggagta ggt 23
<210> 10
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
gaacttggtt gaatgaaatt caggtca 27
<210> 11
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
gggtggactg tggcttattc atc 23
<210> 12
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
ccagggtaag cgacagtgaa tc 22
<210> 13
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
agctggtgtt tctctgctga tttt 24
<210> 14
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
acaggaagga ggaagctagg atg 23
<210> 15
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
cctggtcatg caggacttct tg 22
<210> 16
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
gggaaactgt gaactccaca ctatt 25
<210> 17
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
ggacctcgaa gggttcacat tc 22
<210> 18
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
ctcagagatg gatgcccatg tt 22
<210> 19
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
acatggtgct ttcttacacg gt 22
<210> 20
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
catttttaac cttctgccgc ttgat 25
<210> 21
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
acaaaaatac aaggaagata gtggctttct 30
<210> 22
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
gggtgaggtg gtgagtagaa gat 23
<210> 23
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
ctcattctga cagtgccact caa 23
<210> 24
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
cccttagcca gtttcattaa tatctcatca 30
<210> 25
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
aaaataactc tggtacagtg caacga 26
<210> 26
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
acagatactg tgtgcctaac atgtg 25
<210> 27
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
gctgccactc atctaggttc tg 22
<210> 28
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
gcatgtgaaa ccctcttaaa agagaac 27
<210> 29
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
taggtgagga ctgaagccag at 22
<210> 30
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
tgtgaggaag atgactaggc caa 23
<210> 31
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
gggcaattac ttgtgtcagc tca 23
<210> 32
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
cagcgcagaa gacaggtatt ga 22
<210> 33
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
ggcttgtctt ctctctgtgg aa 22
<210> 34
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
ggccataagc aattctgtgt cag 23
<210> 35
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
ggtgctgtgc ttcacttaca ag 22
<210> 36
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
cttgattgtt aattcctcag catgtgattc 30
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<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
tttgcaacat tccttcacag taaaacatt 29
<210> 38
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 38
acagatttaa tcgaatcact gccatattct 30
<210> 39
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
acctctttta aggtacttat cccactct 28
<210> 40
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 40
aagtgtgtat caagtagttt atttctgcca 30
<210> 41
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 41
gggtcccagg caactttctt ag 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 42
caattcaatt cagcactgac aagtacc 27
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 43
ggtctgctcc aactaagaac ttatga 26
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 44
gttgcttata gccaaaggga cttg 24
<210> 45
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 45
ccaagtctga gtctgaaggt caga 24
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 46
ggatgcccag atgtttggtt aactattat 29
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 47
ggacccagtg agccactaga ta 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 48
ggaccgaggt tcagagaggt taaata 26
<210> 49
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 49
cagccaaact atatcaccgt cagat 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 50
cccacaagta gctcataatc taagagg 27
<210> 51
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 51
tcaactatgt tttctagttt caggatgca 29
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<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 52
cacatcattt ccattcacat tccagt 26
<210> 53
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 53
acagcaaaac cgtatcacca tagg 24
<210> 54
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 54
ctcaaggttt aaccaggttg taggat 26
<210> 55
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 55
cctggttggt gataaagcag ct 22
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<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 56
agggctgtcg tggacttttt aaat 24
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 57
acccacaaaa ccatcagcaa aatac 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 58
gggctggaaa aactaaacat ttgttttctt 30
<210> 59
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 59
atctaagaat cgttctctct ctgtcctt 28
<210> 60
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 60
cagtaacaat tgaaagtata acatggtgca 30
<210> 61
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 61
ccacatcctt gatcaagtcc ctt 23
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 62
ccaccctcac ttgtcaccta ga 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 63
ctggaattgc ctacagtatc ctga 24
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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agtgtgagtg tcgtgttatg gaattaatta 30
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 65
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 66
ttgttatctg tccctttacg gaaaaact 28
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 67
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 68
accatgcttt ggctctggat ta 22
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 69
ccttgattgc ttttgcacac ct 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 70
ggtctgttcg ttcattcaca aatgg 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 71
ttctctttta tgcttcagcc aggtt 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 72
gggaactatg ctagagaata ttggagga 28
<210> 73
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 73
agagcaattt aaaatcactg gctgagat 28
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 74
ctgagcccag cctaaaacaa cagc 24
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 75
ggcatttgga cacgcttttg tt 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 76
gctaatcagg aagggacaca tca 23
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<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 77
gggtttttag ttcaggtcta tctgactt 28
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 78
ggccagcatt ttgattcgag tt 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 79
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<210> 80
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 80
gttcctcgag tgtctgcttt gt 22
<210> 81
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 81
ggatggagac actccgttca ac 22
<210> 82
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 82
ggataagacg ggtccagtcc tt 22
<210> 83
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 83
taggcgagga tgaagtcagg aa 22
<210> 84
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 84
ccagcaggac tgtggttctc ta 22
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<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 85
tctgcttaat cattgtgtct ctaggtct 28
<210> 86
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 86
cagctggtaa aggcctgatt ct 22
<210> 87
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 87
tcactcaccc ttcatctatg tatgtatgt 29
<210> 88
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 88
tcgtctttcc agcttgcaga taa 23
<210> 89
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 89
tccctgggag ggagtttcat ta 22
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 90
actgcctttc aaaacaagac agact 25
<210> 91
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 91
gcctcaaggg ttcctctttg aa 22
<210> 92
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 92
ccctctccac atgtgcaaag atat 24
<210> 93
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 93
cagagccaga atggaagacg tt 22
<210> 94
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 94
gcacttggga agatgaaagg agag 24
<210> 95
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 95
ggagaaacag ccacatcgac ta 22
<210> 96
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 96
cggaacaact gtgatgacct ca 22
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<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 97
aaacttcacc tttatggcag ttctca 26
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<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 98
tggctattaa tgtgcagaat gcattatttt 30
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 99
gaaaggccca gtggtcaaag ta 22
<210> 100
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 100
tcgccaagtt cttaatgtta ccca 24
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 101
tatggcaagt gtatacctac gtaacct 27
<210> 102
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 102
gagaaggtgt gaatttgcaa gaatgt 26
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<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 103
gccctttatt aaaagcatga ctgagct 27
<210> 104
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 104
ttcactccga gaggcaaaaa gg 22
<210> 105
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 105
cattcaagtt tgagaacctc tggtttaag 29
<210> 106
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 106
tgtctaggtc tggacaagaa gca 23
<210> 107
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 107
cagccaagaa tatggactac tttggt 26
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<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 108
tcacagagtt tcaaaacaca ttaagcaaaa 30
<210> 109
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 109
gggagatttt acctatagca ggacatt 27
<210> 110
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 110
aggcagactt tttatgcagt gaga 24
<210> 111
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 111
gtctgtgtca aatattgtgt cttcattctc 30
<210> 112
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 112
cagtgtgagt gcttctcaaa agg 23
<210> 113
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 113
gcttggtgta gggtggtgaa ag 22
<210> 114
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 114
tatgtcggga tgtggacaag aatg 24
<210> 115
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 115
acaccatcca tctactatgc cctt 24
<210> 116
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 116
aggagacagt ggtatcaaaa agtgg 25
<210> 117
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 117
attaagaagc aatgactctg gagcaa 26
<210> 118
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 118
gggctgtcct gacatcgatt aa 22
<210> 119
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 119
gctcccagag caagtaaacc ac 22
<210> 120
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 120
cacatgagcc aggcttactc tt 22
<210> 121
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 121
tatcacagcc ttacttgcat tattatgct 29
<210> 122
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 122
gcactggaaa cgttatatac atgggtaaat 30
<210> 123
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 123
gctttccaat acattcttta ggctttctt 29
<210> 124
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 124
aaaactcaat gacgtcagga aaacaatac 29
<210> 125
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 125
gttctaggaa ctagaatgtg ggcat 25
<210> 126
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 126
tttccaccac tgaaaatttg aagcaat 27
<210> 127
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 127
actctacctc atcgtctgct atttga 26
<210> 128
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 128
gtgcaatcat ctgtgtgttt gctac 25
<210> 129
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 129
ttccacttca cagaaatgga aacaaa 26
<210> 130
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 130
gacagtgaga tctgcatgga ca 22
<210> 131
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 131
aggtgcagac aataaacaag tcagt 25
<210> 132
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 132
agcccaggca ctctactatc ata 23
<210> 133
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 133
tttttgaaaa ggtatagaag gctaggaga 29
<210> 134
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 134
caagggtaac ctgctccatc tt 22
<210> 135
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 135
tgaccacact ggagttattt ctacct 26
<210> 136
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 136
ccataaccaa gaagacatct gaataaacac 30
<210> 137
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 137
cttcctggtc aatctgtggt ga 22
<210> 138
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 138
gcaaaacact tctccattta ttttcaactc 30
<210> 139
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 139
gcctgtgtta gcacttgtcc tt 22
<210> 140
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 140
agtgagtcta gtaaatacag ccaattaggt 30
<210> 141
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 141
tacagtgtaa gccacctaaa gtcatttg 28
<210> 142
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 142
tgaggcatga gagttttgcc aa 22
<210> 143
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 143
acattcacag catagctagt ctttcat 27
<210> 144
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 144
tgcccattta tctgtttttg aatgcc 26
<210> 145
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 145
tgggtgtgat atgaacagat ttgttagt 28
<210> 146
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 146
gctaccacat aagttcggtt ttgc 24
<210> 147
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 147
tgtcattttg aacattcttt gataccacac 30
<210> 148
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 148
ggaatatgcc aatatgtgga aggtctaaat 30
<210> 149
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 149
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<210> 150
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 150
ggcacatttc tgatatattt ggctaaggt 29
<210> 151
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 151
cccttgtctc accaggattg tt 22
<210> 152
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 152
gagcatgtgg atcaacccaa tg 22
<210> 153
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 153
gcatatgtgg gcgtaggaga tg 22
<210> 154
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 154
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<210> 155
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 155
ccaaaataat ctaggctgca ttctttcc 28
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 156
gccaaaattg ctggctggta tt 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 157
tgcttgtata tgttgctgga ttctgt 26
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 158
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 159
aaatagaact gtctctattt tcagatggca 30
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<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 160
ggatttctaa attgttgctt tccacatgtt 30
<210> 161
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 161
aattggttaa gaaatttggg ttgaagagtg 30
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 162
ccctccctct gaaatccttt tgc 23
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 163
ataccaccct aaaacttaat ggtgtgaaa 29
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 164
tgggcagttt ctaatttttg cctct 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 165
caatactacc ttgctgagaa atcaggt 27
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 166
gggtttgttt gtttacaaac tccact 26
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 167
tattttggac cagataatcc cttgttatgg 30
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 168
ttcctcaagg aagttgagag gttg 24
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gggtttctat cattctgaat ttttgtgcaa 30
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 171
cccacattgc ctttctttcc aga 23
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<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 172
tctctcacag gacttttatg tggaga 26
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 173
ctctctggtt gcctcatgac aa 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 174
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 175
caggagacaa agcgagtcac tt 22
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tctgtctctc actcttctct ccttg 25
<210> 177
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 177
cacccagtta agagcatttt gttgt 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 178
agacatgcat ctcttctttc tttgaaca 28
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 179
agagatttgc tgagcacctt ctac 24
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 181
tctaggactg cagacatttg tcg 23
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 182
cctgttcctc ttctcagtcc tga 23
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 183
tcctcattca caaaagaagg tttatcagg 29
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 184
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 185
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 186
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 187
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 188
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 189
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<211> 29
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 190
gctaacatgt tcaaatactg cagggatta 29
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 191
cctctcggtg tctctgcatt tc 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 192
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 193
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 194
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 195
cactgcattc tgtttcaacc atatcc 26
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 196
cttcccaaat tcaactgaca ggaaaaa 27
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 197
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<210> 198
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 198
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 199
cccaaagatc cctcaaaact tctct 25
<210> 200
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 200
gtgacacaca acttagaagt aggcaa 26
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 201
gtgccttctg catgtgcaat tt 22
<210> 202
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 202
cacaggagag aagctcttta tattcagaaa 30
<210> 203
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 203
ggaacgtgca gtgagatctc tg 22
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<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 204
agggttcatt gccaaaaata ttgaatttga 30
<210> 205
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 205
gtcttcaggg tcacaaatct ttgtc 25
<210> 206
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 206
ggcgtatttt tgaaactata agactccctt 30
<210> 207
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 207
caaaattaaa aagtatggac aaaatacatg ggc 33
<210> 208
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 208
gctcctgagt gtggtactgc 20
<210> 209
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 209
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<210> 210
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 210
gggtctgaac tccctctgtt g 21
<210> 211
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 211
ctggaggtga ggaaatgtgg att 23
<210> 212
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 212
gctgagatgt gtgcttcttt gttatttaaa 30
<210> 213
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 213
cgtgttggag caatgggatg a 21
<210> 214
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 214
ccgggattct gaacgaacct 20
<210> 215
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 215
acagtagaga cctgcctttc agaa 24
<210> 216
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 216
ccaggaggtc agattttgtc ctc 23
<210> 217
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 217
gggttgcagc ctgtttcata ga 22
<210> 218
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 218
tgttgctctg cagttccaga ag 22
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 219
cttggtcagc atctcagatg ca 22
<210> 220
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 220
ctactcactg ctctctgggt ttg 23
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 221
tgcctgcaaa tgtgtcagct at 22
<210> 222
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 222
acttgctggt gattgccttc tt 22
<210> 223
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 223
agccctggag attcctggaa ta 22
<210> 224
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 224
gagttctgct gcagcaattt cag 23
<210> 225
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 225
cagcttcacg aactctgctt ct 22
<210> 226
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 226
ctctgtgtta agagtgtgtc tctgttc 27
<210> 227
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 227
gtagggtcct gcgtgacat 19
<210> 228
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 228
gaggcagaga ctgaaggatg ac 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 229
gggtgattac gacccgcaaa 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 230
cctgcagaac tcagccatga 20
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<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 231
ccgtgctcct ccaggatct 19
<210> 232
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 232
ctgcaccaga agaggagcct gat 23
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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aaagggtcag ggtcctgaga t 21
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 234
agtgtttcag ccaaaggact gtac 24
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<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 235
ttgatgggta tcagaaagtg cctatg 26
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 236
gttaagctac aggtgagttt ggaga 25
<210> 237
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 237
gtggagcttt ttcttttcct gct 23
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 238
atcttagctg cccattcttg taattctt 28
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 239
gccctcactc gatcttgaac tt 22
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<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 240
taagtaaaag atttggccac agggaat 27
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 241
gggtctctga tgactggagg tt 22
<210> 242
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 242
ggaggttaaa ggtgttaatt ctcatgtttc 30
<210> 243
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 243
cctgcttact ggaaactcac aca 23
<210> 244
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 244
gttttccaga gaaatgaact gcaca 25
<210> 245
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 245
cctttgaaaa tagcactttt tatctgggt 29
<210> 246
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 246
catgttcagt gtgtcagttt ctcac 25
<210> 247
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 247
cagatgagtg ggtagatgga taaatgac 28
<210> 248
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 248
gagtgctgtt ttcaaaaagc agtttc 26
<210> 249
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 249
ccgatcgtac tcctcttgta tttcatt 27
<210> 250
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 250
agagctttga aagacctttg gtttct 26
<210> 251
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 251
actcagcatt tggccttatg tca 23
<210> 252
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 252
gtggaattca caagaaggcc caat 24
<210> 253
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 253
ggatgaactt caacctcaca ttcac 25
<210> 254
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 254
gctctgacac tcaatcatct gtgag 25
<210> 255
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 255
agagtcccag tctcaacgca ta 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 256
gggttggaaa tcgcaccaaa tg 22
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 257
ccttatctgc taggtggcat ca 22
<210> 258
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 258
ctccctgagt cacatgtgct tt 22
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 259
ctcatttgtc atccctgact tcaga 25
<210> 260
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ctggacttgt cagcaaatct gc 22
<210> 261
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 261
gactctaata aaatgatctg ggcaaaatcc 30
<210> 262
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 262
attagtagca gtaatctttc taccctctgt 30
<210> 263
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 263
gtcaaacctc ctctccatct aaatactg 28
<210> 264
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 264
cctcctggcc taagaagaac ttatttaaaa 30
<210> 265
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 265
cttaatactt accaggcggt gtgttat 27
<210> 266
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 266
ctgtagtctg tctctagagg ttaagttct 29
<210> 267
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 267
aagtagagag gtgctggaag gat 23
<210> 268
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 268
aaaagtgcat gtcctctcca tgt 23
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<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 269
aggaaggtct ccagtttccc t 21
<210> 270
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 270
ccaggtggct cctaggtct 19
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 271
gcaggctgtt aggctgtcta ta 22
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<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 272
ccagcaacat gcttggcatt tag 23
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 273
gtgaccctct agacattttc aagtga 26
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 274
tctagagaca gaatagcaag tgcaaag 27
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 275
gctcactctt caagacgtgg tt 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 276
acttatccat ggcctgccct at 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 277
ctgagatgag aagttcagta ccttttca 28
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<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 278
tcagtaattc agagaatgtg ccttatgg 28
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 279
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 280
cacatctctc ttatcctttc tgcact 26
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 281
ctgggcattt ggagctgaaa tg 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 282
cttgccacac agatttgaca tgag 24
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 283
ccctatggta gcttattgga ttctcac 27
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 284
tgggtttaca tttatatact gcttggctt 29
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 285
caggcatctt gggagagttt gt 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 286
tggtgatttc ctgtctcact caga 24
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<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 287
ctgctagttt cttctgatct attttccagt 30
<210> 288
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 288
caagtcagca tgtaattaca agacatgg 28
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<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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catcagaagg cttcactgga gaag 24
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gtttgccaga acccgaatcc ta 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 292
cacaccctga tctccgaatt ctg 23
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 293
gagcatcaca ggatgttcca gt 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 294
taagaaatga aaagtcacaa atgaccctga 30
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 295
catgcaacgc ctcaaagagt tt 22
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 296
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 297
gggtacaggt taaagatctt ggct 24
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tgtgcggtta attaaatgtc ctctct 26
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 299
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 301
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 302
gaagggcagt ttccaaagtg tg 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 303
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 304
ttggcaagat caagctctgg tt 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 305
gaacccatca aaatacctac ctcaca 26
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 306
ctgaacatgc agaataaaaa ggaatccaaa 30
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 307
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 308
tcaccaaatg tagtgctgta attcacttat 30
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 309
tcaaggaaat gtatctgtcc ttgtaaaagg 30
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 310
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 313
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 314
gtgagaagtg ccagagcagc aa 22
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 315
cctgggatcc tcctcagtaa cc 22
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<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 316
ggagtgattt ctgctacctt atcttctaaa 30
<210> 317
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 317
gtgcaggagc ctcaacccaa ac 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 318
ccttctttct ctctcatttt ctcttttcc 29
<210> 319
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 319
cctcttgctg gccatgatac tt 22
<210> 320
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 320
ggttatctgg gagatagcac gagt 24
<210> 321
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 321
ccctcttctg caagatggtg ta 22
<210> 322
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 322
gtggaaacca gaagatcaat ggac 24
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 323
caggtggctt cttctggaga tg 22
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<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 324
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 325
catggctgag aacaagaccc ta 22
<210> 326
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 326
cctctctttg ctcttccatc ttgtg 25
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 327
agctgcatga aatgagtcct ga 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 328
caccagtctg tgagctcatg ag 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 329
aaaaattatg aggcatctgt caagaagttg 30
<210> 330
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 330
ggctagaagt tattctttta ggtggtgtaa 30
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<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 331
ccctcattct acttctgcaa gaca 24
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 332
gcacaaatct tacgtacaca tcagatg 27
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 333
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 334
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 335
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 336
gcagtgggct cagaacgaaa at 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 337
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 338
gccaggagga cacattgttg tt 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 339
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 340
ctttttctct tccttttcct tttctgtgt 29
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 341
cccaacctcc cagtacagag aa 22
<210> 342
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 342
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<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 343
gcaaatggcc aatacacaga caa 23
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 344
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 345
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ttcctgtccc ttcttataag gtcactaat 29
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 349
agtcatgggt ggtttgtgaa gg 22
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<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 350
gaatcctttc ctagcagggc att 23
<210> 351
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 351
tttgtttcat atacagcatc atgcatgaag 30
<210> 352
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 352
gctgttttca agagatgtac ccaga 25
<210> 353
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 353
ctcagatggg cacaaaatga tgaa 24
<210> 354
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 354
acacccacag ctcttgttag ag 22
<210> 355
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 355
caagcttagc agagaacagc ttg 23
<210> 356
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 356
gcatggcaga ttctaggtga tacttttaaa 30
<210> 357
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 357
gacttgggtc ttaccagatg ca 22
<210> 358
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 358
cacgttcctt tctcatcaca ctg 23
<210> 359
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 359
agggaaagct tctaatccag ttatcac 27
<210> 360
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 360
ctggatcatc ccttgctgca ta 22
<210> 361
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 361
tcgaaggccc tgatagaaca aag 23
<210> 362
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 362
accatattag tcagatggct cagaga 26
<210> 363
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 363
acttcgaacg cttgattccc t 21
<210> 364
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 364
ccctggctca gttttggact c 21
<210> 365
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 365
tgttcctgag accctcaaaa tgc 23
<210> 366
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 366
tcggcacaat ataaatgctc tttttcttc 29
<210> 367
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 367
tgggttgata acttctgctt tgca 24
<210> 368
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 368
cagctctgtc caaccttgga tt 22
<210> 369
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 369
cactgttgac ggagatggag tt 22
<210> 370
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 370
atttgccatc tgtcactgcc ta 22
<210> 371
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 371
cagcaaacag agtctgagac act 23
<210> 372
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 372
gtatttgcaa gcagttaact tggct 25
<210> 373
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 373
cagatttgtc caaggtggtc tga 23
<210> 374
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 374
tctcagcatc cgagaatgtc ctata 25
<210> 375
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 375
gggtctcttt ttcccttcac ttacc 25
<210> 376
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 376
agcacatcag acacattcag gaag 24
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 377
atcgacagca ttccagcaga ct 22
<210> 378
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 378
tcaccatcag agctatctta atagctgt 28
<210> 379
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 379
tcctctatac caagggtcag caaat 25
<210> 380
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 380
cttctctgtc acatggtata ccacag 26
<210> 381
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 381
gcctgggctt aggaacaatg ta 22
<210> 382
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 382
cataatcatc actggtgtca ccttgt 26
<210> 383
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 383
gagacaacaa ttccatacct gggta 25
<210> 384
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 384
tcctggaaga agtgaattta ttcaacaca 29
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<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 385
aactcagctc tgtcccttac aaac 24
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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agacaggcat ctcaccatta agc 23
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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agaaaggact aggaaggaag gagtg 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gtgggcatga ggagagatct c 21
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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caggacattg ccaaagaacc tg 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 392
gggttttaga taattcctca gattagagca 30
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 393
aatggttaaa tcttaaccag tcaactgga 29
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 394
cacataaaca gctgagttga gatcca 26
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 395
ggtacacagc agatgctcaa taaatgta 28
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gaatgattct ctgggactca tcca 24
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ggacaatttg acaatgtgag gctt 24
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cctgacctga tatctttcca tattggc 27
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<212> DNA
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tgaatgttta tgtgtttgtc ccttcact 28
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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acgacgtggt ccaatttcca tt 22
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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agtgaagggc tcctcctaac tc 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 403
gggatctgcc ttctaagcct ct 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gctacccgtg ggacatgtat tt 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tgtgacactg ccttatcgat aaactc 26
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cgtggctaag tgctagtcaa tgg 23
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gaccatctcc ctcaccattg tg 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 408
ggactcaagt cctggccatc ta 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 409
tcaatcaatg atgaggtctt tacatcagtg 30
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<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gggtgttaga gagacactgg aca 23
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<212> DNA
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gctttctgag cgcttggtct ag 22
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ccttttcctc gtattcttaa ttctgcag 28
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atcgtaacta cctgcctgag act 23
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cccaaagttg ggtttttaca agagc 25
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<400> 418
ggatttggct tccattttca aggtaaa 27
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 419
tctgcatccc aaacccaaag ag 22
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ccacagccca aatcttgtga ag 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tcatttggtg cacattgtgt gac 23
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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aagatccctt cacctgagag tga 23
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 424
atggtgagag aaacacagaa ccaagct 27
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ccctaaatga gggaagcagg aaa 23
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 426
gtttcatgct gcctcacctt tt 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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caggtgcttc aactttagtc tcatttc 27
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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attctacaga gaagtcagaa aatgcaca 28
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ctgccctgaa tcgggtagaa aa 22
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 432
catcaggaac agagcaggat ct 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 433
gcagtgcttt tccaacagct ta 22
<210> 434
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 434
cccatgtagc cagtggatac tga 23
<210> 435
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 435
ttttggaatc taaacagatg ttctgtcct 29
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 436
gactttggtg cttaaaaggc aaact 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 437
aaaaagggat aagaatccgg aagtca 26
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ctgccgtctg tgtagatatc cac 23
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 440
ctgagaccca cagcctaaga gaa 23
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 441
tgaacatttc aaggaaactt ggtcca 26
<210> 442
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 442
tgacccagaa tgccattcac tatg 24
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gggtcctgtt cgcttatctg ac 22
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 444
tcggtgtgct catctgttac ag 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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caatgtgtgt cccagtggat gt 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ctagaagagt gggccagagg aaaaa 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 447
tttatcttgc ttccttcatg attttcgc 28
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<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 448
agcctgtaga acatcaagca tgt 23
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 449
tccatccact catttgttca ttcactt 27
<210> 450
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 450
atcatgaagt cttcccaaat cttaccc 27
<210> 451
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 451
ccttcccttc tgggatgatc ct 22
<210> 452
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 452
cgagggaagc aatttcagga gt 22
<210> 453
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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agacagtggg tgttctccag at 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gcttctagat gctttgcttc atgg 24
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 455
gaagggagtc gggtcaaaga tg 22
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gtcaagacct ttggagacca aga 23
<210> 457
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 457
ggtcccagct tctgctgtag 20
<210> 458
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 458
gcacactgtc agaaagctaa attcag 26
<210> 459
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 459
aactctagct ggagaagcca gta 23
<210> 460
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 460
caagctagtt agtgtggcat tcca 24
<210> 461
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gggcagacag ataatagcaa aacaaa 26
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<212> DNA
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caagttaagc actgtccatt gtacac 26
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 463
gcagagcatg tcaccaggaa aa 22
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 464
tgtccttttt catcgctgat gataatca 28
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 465
ctcctgtcaa ccgaagcaga tt 22
<210> 466
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 466
gtctgcaaga agaaggcaaa gagct 25
<210> 467
<211> 28
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 467
ttgctgtggt caaatgattc attctaga 28
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 468
ccgcctgata acacccgtaa ta 22
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<211> 22
<212> DNA
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cctggcttta gggacctctg at 22
<210> 470
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 470
ccgctcatct taaataccct gaga 24

Claims (10)

1.一种胚胎植入前的EVC综合征的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
获取胚胎的基因组DNA；
检测所述基因组DNA中EVC2基因编码区及EVC2基因上下游的SNP位点的序列信息，所述EVC2基因编码区及EVC2基因上下游的SNP位点包括chr4:3608593、chr4:3634029、chr4:3660926、chr4:3686670、chr4:3711721、chr4:3740110、chr4:3790721、chr4:3840493、chr4:3870725、chr4:4206953、chr4:4242950、chr4:4268382、chr4:4294145、chr4:4319334、chr4:4369224、chr4:4394596、chr4:4428890、chr4:4496281、chr4:4521915、chr4:4555325、chr4:4579042、chr4:4593958、chr4:4604484、chr4:4611819、chr4:4626713、chr4:4633550、chr4:4641569、chr4:4648047、chr4:4661428、chr4:4677394、chr4:4684642、chr4:4692728、chr4:4704014、chr4:4710203、chr4:4720455、chr4:4734943、chr4:4748273、chr4:4761140、chr4:4773935、chr4:4786727、chr4:4793833、chr4:4807000、chr4:4819662、chr4:4827883、chr4:4834939、chr4:4847878、chr4:4856579、chr4:4871549、chr4:4905782、chr4:4921768、chr4:4932445、chr4:4945900、chr4:4952677、chr4:4962683、chr4:4969647、chr4:4979647、chr4:4992367、chr4:5004081、chr4:5011784、chr4:5056112、chr4:5075159、chr4:5083419、chr4:5101174、chr4:5109522、chr4:5123539、chr4:5131872、chr4:5142212、chr4:5156927、chr4:5170284、chr4:5186772、chr4:5202206、chr4:5212292、chr4:5218696、chr4:5228982、chr4:5237192、chr4:5254744、chr4:5280255、chr4:5292811、chr4:5303018、chr4:5315419、chr4:5322697、chr4:5332316、chr4:5348043、chr4:5357432、chr4:5365859、chr4:5381051、chr4:5389025、chr4:5403998、chr4:5413699、chr4:5427325、chr4:5439829、chr4:5452895、chr4:5466902、chr4:5480337、chr4:5498794、chr4:5505585、chr4:5516179、chr4:5527008、chr4:5540983、chr4:5550106、chr4:5564455-5564701、chr4:5564639-5564891、chr4:5566853-5567127、chr4:5570059-5570305、chr4:5570232-5570398、chr4:5576324-5576598、chr4:5577828-5578075、chr4:5578021-5578257、chr4:5586258-5586506、chr4:5586386-5586623、chr4:5617071-5617321、chr4:5620037-5620290、chr4:5620235-5620446、chr4:5624075-5624347、chr4:5624235-5624506、chr4:5624423-5624646、chr4:5624541-5624787、chr4:5627419-5627693、chr4:5627518-5627788、chr4:5630135-5630409、chr4:5630350-5630602、chr4:5633365-5633639、chr4:5633575-5633806、chr4:5642162-5642427、chr4:5642364-5642638、chr4:5664754-5665026、chr4:5667185-5667459、chr4:5682854-5683122、chr4:5686968-5687239、chr4:5690844-5691118、chr4:5692920-5693176、chr4:5695843-5696117、chr4:5696050-5696310、chr4:5699203-5699477、chr4:5709817-5710091、chr4:5711334、chr4:5719274、chr4:5728053、chr4:5735817、chr4:5743979、chr4:5752802、chr4:5761366、chr4:5769827、chr4:5778582、chr4:5790159、chr4:5799077、chr4:5814608、chr4:5826597、chr4:5837871、chr4:5846371、chr4:5860906、chr4:5871485、chr4:5881425、chr4:5898129、chr4:5914310、chr4:5931385、chr4:5972799、chr4:5982108、chr4:5998602、chr4:6007400、chr4:6016599、chr4:6025638、chr4:6065298、chr4:6074289、chr4:6085543、chr4:6097295、chr4:6106744、chr4:6118000、chr4:6135321、chr4:6143608、chr4:6152171、chr4:6161431、chr4:6173392、chr4:6183715、chr4:6200435、chr4:6218358、chr4:6226985、chr4:6233890、chr4:6244933、chr4:6252010、chr4:6332350、chr4:6339194、chr4:6350058、chr4:6363413、chr4:6374468、chr4:6388191、chr4:6401329、chr4:6407801、chr4:6417485、chr4:6430773、chr4:6444182、chr4:6452640、chr4:6465928、chr4:6474866、chr4:6489006、chr4:6502409、chr4:6517066、chr4:6531561、chr4:6538565、chr4:6550849、chr4:6557271、chr4:6566798、chr4:6575282、chr4:6581608、chr4:6592205、chr4:6606864、chr4:6616680、chr4:6627983、chr4:6640703、chr4:6649821、chr4:6663319、chr4:6671381、chr4:6678553、chr4:6686114、chr4:6707338、chr4:6748067、chr4:6802816、chr4:6859939、chr4:6917983、chr4:6969727、chr4:7024349、chr4:7075827、chr4:7129556、chr4:7181294、chr4:7233372、chr4:7283617、chr4:7334133、chr4:7383850、chr4:7414014、chr4:7466082、chr4:7516274、chr4:7573488、chr4:7622357、chr4:7651958和chr4:7709100；
比对分析所述序列信息以确定所述胚胎是否具有EVC综合征。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，检测所述序列信息的步骤包括以下步骤：利用能分别特异性扩增EVC2基因编码区及EVC2基因上下游的SNP位点的多对引物对所述基因组DNA进行多重PCR得到扩增产物，对所述扩增产物进行测序以得到所述序列信息。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述引物选自SEQ ID NO：1～SEQ IDNO：470中的至少一个。
4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述比对分析的步骤包括以下步骤：将所述序列信息与亲代双方的DNA序列进行比对，分析所述胚胎的单体型。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述比对分析的步骤还包括以下步骤：将所述序列信息与人类基因组参考序列进行比对，分析SNP覆盖倍数和基因型。
6.根据权利要求1～5任一项所述的检测方法，其特征在于，获取所述基因组DNA的步骤包括以下步骤：对发育至卵裂期或囊胚期的胚胎进行细胞活检，并对活检细胞中的DNA进行全基因组扩增。
7.一种用于检测EVC综合征的检测组合物，其特征在于，包括能够分别检测EVC2基因编码区及EVC2基因上下游的SNP位点的序列信息的多个检测剂，所述EVC2基因编码区及EVC2基因上下游的SNP位点为权利要求1中所定义。
8.根据权利要求7所述的检测组合物，其特征在于，所述检测剂为PCR引物，所述检测剂选自SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：470中的至少一个。
9.一种用于检测EVC综合征的检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求8所述的检测组合物和用于文库构建的反应试剂。
10.根据权利要求9所述的检测试剂盒，其特征在于，所述反应试剂选自多重PCR聚合酶、DNA连接酶、末端修复酶、dNTPs和PCR缓冲液中的一种或多种。
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