CN111363377A - 核酸染料及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了核酸染料及其制备方法与应用，本发明用于核酸电泳常见的凝胶成像染色，具体为一种可同时适用于琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的新型核酸染料，尤其可用蓝光成像，涉及染料的制备及其应用。本发明开发了一款新型核酸染料，集染色效果好、安全性高、非常低的核酸迁移影响率、适用性广于一体，且可以蓝光成像。有效解决了现有核酸染料，由于染色效果很差不能应用在聚丙烯酰胺凝胶电泳的缺陷，尤其解决了现有染料在用前染发跑电泳时容易产生拖尾等问题。

Description

核酸染料及其制备方法与应用
技术领域
本发明用于核酸电泳常见的凝胶成像染色，具体为一种可同时适用于琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的新型核酸染料，尤其可用蓝光成像，涉及染料的制备及其应用。
背景技术
核酸电泳是进行核酸研究的重要手段，是核酸探针、核酸扩增和序列分析等技术所不可或缺的组成部分。核酸电泳通常使用琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶两种介质。琼脂糖是由琼脂分离制备的链状多糖，许多琼脂糖依据氢键及其它力的作用使其相互盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型凝胶，适合分离、纯化200bp-50kB长度的核酸片段，可区分相差100bp的DNA片段；聚丙烯酰胺凝胶是密集程度非常高的高聚物，具有分子筛效应、浓缩效应、电荷效应，对于小片段DNA（5bp-500bp）的分离效果最好。
常用的核酸电泳染料有EB、SYBR Green、SYBR Gold、GelRed和GelGreen等。不同核酸染料的激发波长存在差异，目前，用于核酸电泳常见的凝胶成像仪分为两类波段，即紫外凝胶成像系统和蓝光凝胶成像仪（或蓝光切胶仪）。紫外长时间照射对核酸（DNA）以及对实验人员都有一定的危害性，因而未来的核酸染料更趋向安全无毒的蓝光核酸染料。
现有的核酸染料，如现有的gelgreen染料安全无毒，灵敏度也高，但是不能应用在聚丙烯酰胺凝胶电泳。导致的原因是：聚丙烯酰胺凝胶密是密集程度更高的三维空间的高聚物。这种高密集聚合物结构，使得在分离不同大小范围、不同浓度范围的核酸分子时，作为核酸凝胶染料的荧光染料很难渗透进去以致核酸染色效果不佳。另外，现有染料在应用上也有很多限制，譬如在用前染发跑电泳时容易产生拖尾等问题，即对DNA的迁移率影响比较大，不能保证DNA迁移的真实水平，从而使实验结果出现偏差。这种对迁移率的影响，相同条带位移会出现明显偏差。
发明内容
本发明公开了核酸染料及其制备方法与应用；本发明的化合物作为核酸染料，同现有的产品相比较，不仅保持了特有的高度灵敏性，而且更加安全无毒，尤其解决了现有核酸电泳测试时的拖尾现象，尤其可以同时应用于琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳，尤其可用蓝光成像。本发明的化合物在同样条件下获得的凝胶电泳测试结果显示，其作为核酸染料对核酸迁移率的影响微乎其微，可以保证电泳测试的准确性与灵敏度。
本发明采用如下技术方案：
核酸染料，其化学结构式如下：
Figure 896420DEST_PATH_IMAGE001
Figure 344719DEST_PATH_IMAGE002
其中，a、b、c、y、z独立的选自0～15；R1选自氢、烷基、环烷基或者(CH2)tSO3H，t为1～5；R1选自或者(CH2)xSO3 -，x为1～5；优选的，a、b独立的选自0～14，c、y、z独立的选自0～8；进一步优选的，a选自1～12、b选自0～12、c选自0～5、y选自1～3、z选自1～3；
t、x独立的选自3～5的整数；
R1为取代基，选自氢、烷基或者环烷基；优选的，烷基或者环烷基中，碳原子数小于12；
B为连接桥，选自-O[(CH2)n]O-、-(CH2)a1-[O-(CH2)y1]b1-[O-(CH2)z1]c1-、-(CH2)h-N-(CH2)k-、-[(CH2)n]O[(CH2)m]-中的一种；其中n为1～12，a1为1～12；y1、z1独立的选自1～5，优选2～3，b1为0～12，c1为0～5，h、k独立的选自1～12，m为1～12；或者B为含有1～24个碳且任选含有至少一个选自N、O杂原子或者含有饱和5元环或者6元环的聚亚甲基单元。
Y-为阴离子，包括但不限于卤素离子或者磺酸根离子（OTs-）。
紫外凝胶成像系统是目前市面上普及度较高的核酸凝胶成像设备，但紫外长时间照射对核酸以及实验人员都有一定的危害性，因而未来的发展趋势是使用安全的蓝光凝胶成像系统或蓝光切胶仪。本发明的染料是一款用于蓝光成像的核酸染料，适用于蓝光凝胶成像系统或蓝光切胶仪等设备，消除成像设备对核酸以及实验人员的危害性。
现有的核酸染料如SYBR Green、GelGreen等。其中SYBR Green由于其分子量较小，可以进入到活细胞内，结合至人体细胞的DNA中，使核酸突变，对使用者存在致癌隐患，这种潜在危害使其应用市场可能会逐步缩小；而GelGreen分子量较大，在琼脂糖电泳中容易出现弥散拖尾的现象，而聚丙烯酰胺凝胶作为密集程度更高的三维空间的高聚物，该染料很难渗透进去以致核酸染色效果不佳，而用银染法染色聚丙烯酰胺核酸凝胶，由于硝酸银及甲醛的大量使用，不仅对环境造成了严重的污染，同时又严重危害人体健康。本发明设计新的染料结构，消除了致癌隐患，也解决了原来染料中出现的目的条带容易弥散拖尾分离不开的现象，同时使染料可以很容易的渗透到如聚丙烯酰胺凝胶这种高密集程度的高聚物中。
本发明公开了上述核酸染料在核酸蓝光凝胶成像中的应用；或者上述核酸染料作为核酸蓝光凝胶成像染料的应用；或者上述核酸染料在制备蓝光凝胶成像试剂中的应用。
本发明公开了上述核酸染料的制备方法，包括以下步骤：
（1）以2-(甲硫基)苯并噻唑为原料，经过取代反应，得到中间体I；
（2）以4-甲基喹啉、溴代-聚乙二醇-羧酸为原料，制备中间体II；
（3）以中间体I、中间体II为原料，制备中间体III；
（4）将中间体III与二胺化合物反应，制备核酸染料；
中间体I的化学结构式如下：
Figure 858877DEST_PATH_IMAGE003
、
Figure 785244DEST_PATH_IMAGE004
溴代-聚乙二醇-羧酸的化学结构式如下：
Figure 130775DEST_PATH_IMAGE005
中间体II的化学结构式如下：
Figure 749975DEST_PATH_IMAGE006
中间体III的化学结构式如下：
Figure 548167DEST_PATH_IMAGE007
Figure 278225DEST_PATH_IMAGE008
二胺化合物的化学结构式如下：
H2N-B-NH2。
制备方法中的取代基与核酸染料化学结构式中的取代基一样。
本发明公开了一种核酸凝胶成像的方法，包括以下步骤，将上述核酸染料与琼脂糖溶液混合后制备琼脂糖凝胶，然后置入电泳槽中进行上样，然后进行电泳，最后成像，完成核酸凝胶成像。
本发明公开了一种核酸凝胶成像的方法，包括以下步骤，上样至聚丙烯酰胺凝胶内，然后进行电泳，再将电泳后的凝胶浸入泡染液，最后成像，完成核酸凝胶成像；所述泡染液含有上述核酸染料。
本发明公开的核酸凝胶成像方法中，琼脂糖凝胶或者聚丙烯酰胺凝胶为现有技术，具体凝胶成像过程也是现有技术，本发明的创造性在于公开了上述核酸染料，既适用于琼脂糖凝胶体系，有适用于聚丙烯酰胺凝胶体系，尤其是解决了现有染料易产生目的条带弥散拖尾分离不开、核酸迁移率受到影响的现象，而且对人体及环境是安全无毒。
与紫外相比，蓝光是核酸成像的发展趋势，本发明适用于蓝光凝胶成像系统或蓝光切胶仪。与市面常见核酸染料相比，本发明不仅可用于琼脂糖凝胶染色，又可用于聚丙烯酰胺核酸凝胶染色，且解决了部分染料易产生目的条带弥散拖尾分离不开、核酸迁移率受到影响的现象，同时本发明又对人体及环境是安全无毒的。
附图说明
图1为本发明表1编号1的化合物的质谱；
图2为本发明表1编号2的化合物的质谱；
图3为本发明表1编号3的化合物的质谱；
图4为本发明表1编号5的化合物的质谱；
图5为本发明表1编号6的化合物的质谱；
图6为本发明表1编号1的化合物、现有GelGreen染料的琼脂糖凝胶图；
图7为本发明表1编号12的化合物的琼脂糖凝胶图；
图8为现有UE Page GelRed染料的聚丙烯酰胺凝胶图；
图9为本发明表1编号为1的化合物聚丙烯酰胺凝胶图；
图10为本发明表1编号12的化合物聚丙烯酰胺凝胶图；
图11为本发明表1编号5的化合物的聚丙烯酰胺凝胶图。
具体实施方式
实施例一 核酸染料的制备
1、500 mL 反应瓶中加入25 g 2-(甲硫基)苯并噻唑，30.8 g 对甲苯磺酸甲酯，机械搅拌，加热至60℃，TLC跟踪至反应结束（展开剂为:乙腈:水=5：1）；反应结束后加入乙酸乙酯300 mL，升温至75℃回流3小时；然后降至室温，过滤，滤饼再用乙酸乙酯洗涤一次，过滤，滤饼真空干燥得到产品47 g 中间体I。
Figure 478263DEST_PATH_IMAGE009
其中:
2-(甲硫基)苯并噻唑：
Figure 206047DEST_PATH_IMAGE010
对甲苯磺酸甲酯：
Figure 1789DEST_PATH_IMAGE011
中间体I：
Figure 269959DEST_PATH_IMAGE012
2、在250 mL反应瓶中加入11.76 g 4-甲基喹啉，28 g溴代-三聚乙二醇-羧酸，10 mL邻二氯苯，加热至120℃ ，TLC跟踪至反应结束（展开剂为:乙腈：水=5：2）；反应结束后冷却至室温，加入乙酸乙酯，洗涤两次，过滤，真空干燥得到30 g 中间体II。
Figure 590082DEST_PATH_IMAGE013
其中：
4-甲基喹啉：
Figure 551085DEST_PATH_IMAGE014
溴代-三聚乙二醇-羧酸：
Figure 527131DEST_PATH_IMAGE015
中间体II：
Figure 333413DEST_PATH_IMAGE016
3、500 mL 反应瓶中加入27 g 中间体I，30 g 中间体II，50 mL 二甲基甲酰胺DMF，22mL 三乙胺TEA，TLC跟踪至反应结束（展开剂为：二氯甲烷:甲醇：冰醋酸=5：1：0.1）；反应结束后，真空泵抽干 DMF，用乙腈将其溶解，再滴加至乙酸乙酯中，析出固体，过滤，固体真空干燥48小时得到31 g 中间体III。
Figure 773622DEST_PATH_IMAGE017
其中：
中间体III：
Figure 639947DEST_PATH_IMAGE018
4、25 mL 反应瓶中加入200 mg 中间体III, 3 mL DMF , 150 uL TEA ,冰水浴下搅拌15分钟，加入130mg 2-琥珀酰亚胺基-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯TsTu（按照40mg+30mg+20mg+20mg+20mg分批加入，每批间隔5分钟），TLC跟踪至中间体III 反应完全（展开剂为：二氯甲烷：甲醇：冰醋酸=5：1：0.1）；再将10 uL 乙二胺用 DMF稀释到 100 uL后加入反应瓶中（按照50 uL + 30uL + 20 uL分批加入），并且补加一滴三乙胺，TLC跟踪至反应结束（展开剂为：二氯甲烷：甲醇：冰醋酸=5：1：0.1）；反应结束后，抽干DMF ，乙酸乙酯洗涤一次，氧化铝过柱纯化，淋洗剂为乙腈：水=98：2，收集旋干，冻干得最终产品46 mg，见表1编号1的化合物。
Figure 713262DEST_PATH_IMAGE020
本实施例中，步骤（1）的取代反应在磺酸化合物存在下进行，比如对甲苯磺酸甲酯，得到的中间体、产物为内盐或者以磺酸根离子为阴离子的配合物。进一步的，将以磺酸根离子为阴离子的产物进行卤素离子置换，得到以卤素离子为阴离子的产物，核酸染料。卤素离子置换可以在卤素盐溶液中进行，为常规技术。
实施例二 更换原料，可以制备表1中其他核酸染料，具体为常规替换。
比如将实施例一步骤（4）中的乙二胺更换为式①的化合物或者式②的化合物、式③的化合物，其余不变，得到表1编号2、编号3、编号4的化合物，其中式①的化合物、式②的化合物、式③的化合物化学式分别如下：H2N(CH2CH2O)3CH2CH2NH2、H2NCH2CH2OCH2CH2NH2、H2NOCH2CH2ONH2。
比如将实施例一步骤（4）中的乙二胺更换为式1的化合物或者式2的化合物，其余不变，得到表1编号7、编号8的化合物，其中式1的化合物、式2的化合物结构式分别如下：
Figure 243863DEST_PATH_IMAGE021
、
Figure 812247DEST_PATH_IMAGE022
比如将实施例一步骤（2）中的溴代-三聚乙二醇-羧酸更换为式④的化合物，其余不变，得到表1编号5的化合物，其中式④的化合物如下：
Figure 497306DEST_PATH_IMAGE023
将最终产物根据常规方法进行阴离子置换，可以得到不同阴离子配位的染料，比如将实施例一的产物在饱和氯化钠水溶液或者碘化钠水溶液中常规置换，常规搅拌后浓缩、过滤，得到的固体是阴离子为氯离子或者碘离子的染料：
Figure 910970DEST_PATH_IMAGE024
Figure 60192DEST_PATH_IMAGE025
表1中的其他化合物在上述基础上，根据常规技术可以制备得到。
将实施例步骤（1）的对甲苯磺酸甲酯更换为20.2g 1,3-丙烷磺酸内酯，其余不变，得到编号12的化合物。
表1 荧光核酸染料
Figure 737161DEST_PATH_IMAGE027
Figure 706254DEST_PATH_IMAGE029
Figure 923609DEST_PATH_IMAGE031
Figure 927337DEST_PATH_IMAGE033
Figure 775207DEST_PATH_IMAGE035
Figure 497175DEST_PATH_IMAGE037
Figure DEST_PATH_IMAGE039
Figure DEST_PATH_IMAGE041
Figure DEST_PATH_IMAGE043
Figure DEST_PATH_IMAGE045
Figure DEST_PATH_IMAGE047
Figure DEST_PATH_IMAGE049
表1中编号1、编号2、编号3、编号5、标号6化合物的质谱图分别参见附图1至附图5。
称取本发明的固体染料加入水并搅拌，使染料完全溶解，得到染料溶液，用于以下凝胶成像。本发明公开的核酸凝胶成像方法中，琼脂糖凝胶或者聚丙烯酰胺凝胶为现有技术，具体凝胶成像过程也是现有技术，本发明的创造性在于公开了上述核酸染料。
实施例三 本发明染料的应用
（一）本发明染料的配置
称取本发明上述核酸染料5 mg，加入diH2O 100 μL使其完全溶解并测定OD值，定为10000x，使用时直接用diH2O稀释为1x作为工作浓度，例如25 mL凝胶中加入2.5 μL即为1x工作浓度；现有染料同样配制。
（二）本发明产品在琼脂糖凝胶电泳中解决弥散拖尾现象应用的具体实验方法如下：
1. 称取0.6 g琼脂糖粉末至锥形瓶中；
2. 向锥形瓶中加入60 mL的1xTAE；
3. 在微波炉中加热，使其反复煮沸三次，使其充分溶解，最终溶液体积为60 mL；
4. 用量桶分别量25 mL的琼脂糖溶液，分别倒入两个锥形瓶中，其中一个锥形瓶中加入2.5 μL对照组Biotium GelGreen（41005）染料溶液，一个锥形瓶中加入2.5 μL本发明的染料溶液，晃动锥形瓶，使染料与琼脂糖溶液混匀，分别倒入已准备好的凝胶装置中；
5. 室温凝胶1h，（也可以室温放置20 min待胶不晃动后，放入4℃冰箱中，放置15 min使其凝固）；
6. 将凝好的琼脂糖胶放入加满电泳液（1xTAE）的电泳槽中，在对照组凝胶（GelGreen）和实验组凝胶（本发明染料）中依次常规上样5 μL核酸marker（现有常规物质）；
7. 上样完成后打开电泳槽开关，设置电压为160V，时间为30 min，开始跑电泳；
8. 电泳完成后，取出琼脂糖，放在蓝光凝胶成像系统和蓝光切胶仪上，拍照，保存图片至相应的文件夹下，结果图6，每个图中，从左到右上样顺序：1.UE 100bp；2.UE 2000bp；3.UE 5000bp；4.UE 1kb；5.UE 15000bp；6.YS 1kb；7.Takara 1kb；8. Vazyme 1kb。
结果：
1. 本发明（图6右，表格中1中编号为1的化合物）与对照组（图6左，Gelgreen）相比，背景颜色较浅，条带清晰；
2. 本发明与对照组相比，大片段条带能明显分离，不会出现弥散拖尾的现象；
3. 说明本发明能够有效解决现有产品中弥散拖尾的现象。
将上述表1中编号1的化合物更换为表1中编号12的化合物，采用同样的凝胶成像方法，得到凝胶色谱，见图7，其中泳道从左到右:1.UE 2000bp 5ul；2.UE 15000bp 5ul；3.DS 2000bp 10ul；4.DS 15000bp 10ul；5.Takara 2000bp 10ul；6. Takara 15000bp5ul。
（三）本发明产品在聚丙烯酰胺凝胶电泳中应用的具体实验方法如下：
1. 凝胶装置制胶板组装好后加水静置20 min，检查装置的密封性，密封性较好则倒干净水准备配置5%的非变性PAGE胶2块；
2. 在50 mL的试管中，依次加入H2O 9.4 mL、30% Acrylamid 2.5mL、5xTBE 3.0 mL最后加入10% AP 0.11 mL以及TEMED 0.010 mL并混匀（H2O、30% Acrylamid、5xTBE提前配置好，10% AP以及TEMED则需灌胶前再加入）；
3. 加入混合好的非变性胶，使制胶板中完全充满液体，插入梳子（注意正反面，梳子平滑的一面靠近里面厚的制胶板一侧）；
4. 室温凝固1h，使胶完全凝固；
5. 上样5 μL；
6. 电泳缓冲液为1xTBE，设置电压为100V，电泳时间为60 min，开始电泳；
7. 配置泡染液：取2个容器，分别加入100 mL 0.1M NaCl溶液（10 mL1M NaCl与90 mL去离子水混合），向上述100 mL溶液中分别加入30 μL对照组染料UE Page GelRed（S2005）和本发明的染料，分别混合均匀；
8. 电泳完成后小心从玻璃板上取下凝胶并放入泡染中染色30 min；
9.染色完成后，分别放在蓝光凝胶成像系统、蓝光切胶仪上、紫外凝胶成像系统上，拍照，保存图片至相应的文件夹下。
对照组UE Page GelRed染料染色PAGE胶只能在紫外下看，在蓝光下无法成像，见图8，泳道从左到右: 1.UE 100bp; 2.UE 2000pb; 3.Takara 100bp; 4. Takara 500bp;5. Takara 2000bp; 6. RNA。
本发明（表格中1中编号为1的化合物）染料染色PAGE胶能在蓝光下成像，见图9，泳道从左到右: 1.UE 1kb 200ng ; 2.UE 1kb 100ng ; 3.UE 1kb 50ng ; 4.UE 1kb 25ng ;5.UE 100bp ; 6.UE 2000bp; 7.UE 5000bp ; 8.UE 1kb ; 9.UE 15000bp。
结果：
与对照组相比，本发明能够染色PAGE胶，而且不会带来因为紫外下长时间照射诱发核酸的变异等问题，该染料在蓝光下不会对目的条带造成任何影响，且条带清晰。
将本发明的染料更换为现有gelgreen 染料，经过上述同样的聚丙烯酰胺凝胶电泳测试，无论蓝光还是紫外，无法观测条带，成像效果非常差，无法观察。
将上述表1中编号1的化合物更换为表1中编号12的化合物，采用同样的凝胶成像方法，得到PAGE凝胶色谱，见图10，泳道从左到右:1.UE 100bp 5ul；2.UE 2000bp 5ul；3.DS50bp 5ul；4.Takara 100bp 5ul；5. Takara 2000bp 5ul。
将上述表1中编号1的化合物更换为表1中编号5的化合物，采用同样的凝胶成像方法，得到PAGE凝胶色谱，见图11，泳道从左到右: 1.Takara 2000bp 1ul；2.Takara 2000bp5ul；3.Takara 2000bp 10ul；4.Takara 2000bp 1ul；5.Takara 2000bp 5ul；6.Takara2000bp 10ul；7.UE 100bp 5ul；8.UE 2000bp 5ul；9.UE 5000bp 5ul；10.UE 1kb 5ul；11.UE 15000bp 5ul；12.Genstar 1kb 5ul；13.Takara 1kb 5ul；14.Vzayme 1kb 5ul。
综上，本发明开发了一款新型核酸染料，集染色效果好、安全性高、非常低的核酸迁移影响率、适用性广于一体，且可以蓝光成像。有效解决了现有核酸染料，如gelgreen 染料由于染色效果很差不能应用在聚丙烯酰胺凝胶电泳的缺陷，尤其解决了现有染料在用前染发跑电泳时容易产生拖尾等问题，即对DNA的迁移率影响比较大，不能保证DNA迁移的真实水平，从而使实验结果出现偏差，这种对迁移率的影响，相同条带位移会出现明显偏差。

Claims (10)

1.核酸染料，其化学结构式如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
Figure 660241DEST_PATH_IMAGE002
其中，a、b、c、y、z独立的选自0～15；R1选自氢、烷基、环烷基或者 (CH2)tSO3H，t为1～5；R1选自(CH2)xSO3 -，x为1～5。
2.根据权利要求1所述核酸染料，其特征在于，a、b独立的选自0～14，c、y、z独立的选自0～8。
3.根据权利要求2所述核酸染料，其特征在于，a选自1～12、b选自0～12、c选自0～5、y选自1～3、z选自1～3。
4.根据权利要求1所述核酸染料，其特征在于，B为连接桥，选自-O[(CH2)n]O-、-(CH2)a1-[O-(CH2)y1]b1-[O-(CH2)z1]c1-、-(CH2)h-N-(CH2)k-、-[(CH2)n]O[(CH2)m]-中的一种；或者B为含有1～24个碳且任选含有至少一个选自N、O杂原子或者含有饱和5元环或者6元环的聚亚甲基单元。
5.根据权利要求4所述核酸染料，其特征在于，n为1～12，a1为1～12；y1、z1独立的选自1～5，b1为0～12，c1为0～5，h、k独立的选自1～12，m为1～12。
6.权利要求1所述核酸染料在核酸蓝光凝胶成像中的应用；或者权利要求1所述核酸染料作为核酸蓝光凝胶成像染料的应用；或者权利要求1所述核酸染料在制备蓝光凝胶成像试剂中的应用。
7.权利要求1所述核酸染料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）以2-(甲硫基)苯并噻唑为原料，经过取代反应，得到中间体I；
（2）以4-甲基喹啉、溴代-聚乙二醇-羧酸为原料，制备中间体II；
（3）以中间体I、中间体II为原料，制备中间体III；
（4）将中间体III与二胺化合物反应，制备核酸染料；
中间体I的化学结构式如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE003
、
Figure 167970DEST_PATH_IMAGE004
中间体II的化学结构式如下：
Figure DEST_PATH_IMAGE005
中间体III的化学结构式如下：
Figure 558631DEST_PATH_IMAGE006
Figure DEST_PATH_IMAGE007
二胺化合物的化学结构式如下：
H2N-B-NH2。
8.根据权利要求7所述核酸染料的制备方法，其特征在于，a、b独立的选自0～14，c、y、z独立的选自0～8。
9.一种核酸凝胶成像的方法，包括以下步骤，将权利要求1所述核酸染料与琼脂糖溶液混合后制备琼脂糖凝胶，然后置入电泳槽中进行上样，然后进行电泳，最后成像，完成核酸凝胶成像；
或者
一种核酸凝胶成像的方法，包括以下步骤，上样至聚丙烯酰胺凝胶内，然后进行电泳，再将电泳后的凝胶浸入泡染液，最后成像，完成核酸凝胶成像；所述泡染液含有权利要求1所述核酸染料。
10.根据权利要求9所述核酸凝胶成像的方法，其特征在于，核酸凝胶成像时采用蓝光照射成像。
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