CN111334599A - 一种快速创建甘蓝型春油菜早花资源的育种方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种快速创建甘蓝型春油菜早花资源的育种方法，(1)利用4个分子标记，筛选出分别含有cqDTFA7a位点和cqDTFC8位点的甘蓝型春油菜单株，(2)用含有cqDTFA7a位点的单株和含有cqDTFC8位点的单株进行杂交，(3)杂交F1代进行小孢子培养，加倍成功的DH株系利用4个分子标记引物对进行基因型鉴定，筛选出同时含有cqDTFA7a位点和cqDTFC8位点的DH单株，(4)将筛选出的DH单株进行产量和花期鉴定，筛选出产量优良、花期早于亲本3天的单株。通过分子标记辅助选择目标性状基因，避免杂交育种过程中目标性状基因的丢失，提高选择效率，并且缩短育种周期和减少工作量。

Description

一种快速创建甘蓝型春油菜早花资源的育种方法
技术领域
本发明属于油菜育种技术领域，涉及一种快速缩短甘蓝型油菜生育期并创建优异早花资源的方法。
背景技术
油菜(Brassica campestris L.)是十字花科芸薹属植物，是目前世界主要的油料作物之一，同时也是中国主要的油料作物之一，其种植面积占全国油料作物的总种植面积的54％，而中国种植油菜的面积占世界油菜种植面积的20％。甘蓝型油菜(Brassica napusL.)(AACC，n＝19)起源于欧洲，是油菜三大类型之一，是由白菜(AA，n＝10)与甘蓝(CC，n＝9)通过自然种间杂交后双二倍化进化而来的一种复合种。白菜型油菜的生育期较短，个体矮小，主要分布于气候条件恶劣、无霜期较短的高海拔地区；甘蓝型油菜产量高，菜籽较大，含油量高，主要分布于主要分布在无霜期较长、热量条件较好的低海拔地区(海拔<2800m)，在高海拔地区(海拔>2800m)无法正常成熟。早熟油菜品种的生长发育具有苗期缩短，呈半直立或者直立状态，叶色偏淡绿色；花芽分化早，开花早，花期持续时间长；生育期短，成熟期早，可避开高温逼熟等优点(官春云等，2012；徐亮等，2011)。在油菜众多的农艺性状中，早花是早熟的前提条件，早熟性状是当前油菜品种选育的一个重要性状指标(张尧锋等，2019)，在高海拔春油菜产区早熟育种尤为重要，该类地区白菜型油菜产量较低，品质差，而甘蓝型春油菜产量和品质方面都优于白菜型油菜，但在生育期上不具优势，因此，选育出早熟的甘蓝型油菜代替青海等高海拔地区的白菜型油菜，对提高和改善现有高海拔地区油菜的产量和品质意义重大，这也是春油菜产区研究的主要内容(杜德志等，2018；柳海东等，2015)。
目前选育特早熟甘蓝型春油菜油菜品系的方法如下：通过中熟甘蓝型油菜与高海拔白菜型油菜种间杂交，获得F1再隔离繁殖获得F2，筛选染色体为38条、花粉可育率超过80％的F2单株进行小孢子培养，获得DH系，再对DH系花期、农艺性状及品质性状进行鉴定。
传统转育早熟和抗倒伏性状过程中主要存在以下缺点：1、选育工作量较大，甘白杂交属于种间杂交，需要多代选择才能达到目的；2、选择效率较低：由于花期为多基因控制，其中涉及到的主效基因及微效基因较多，传统转育中对多基因进行有效聚合，难度较大，选择效率较低；3、早熟与高产存在矛盾。
发明内容
本发明所要解决的技术问题为：如何提供一种快速创建甘蓝型春油菜早花资源的育种方法，解决现有的育种方法工作量大、效率低的问题。
本发明的技术方案为：甘蓝型春油菜早花主效QTL紧密连锁的分子标记，所述主效QTL有两个，分别为cqDTFA7a和cqDTFC8，其中与cqDTFA7a紧密连锁的分子标记为SSR标记G1803和Indel标记IA7-4，与cqDTFC8紧密连锁的分子标记为SSR标记S035和SNP标记SNP11；
SSR标记G1803由序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物对扩增得到；
Indel标记IA7-4由序列如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的引物对扩增得到；
SSR标记S035由序列如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示的引物对扩增得到；
SNP标记SNP11由序列如SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示的引物对扩增得到。
G1803距离cqDTFA7a 0.1cM，IA7-4与cqDTFA7a共分离；S035距离cqDTFC8 0.4cM，SNP11与cqDTFC8共分离。
甘蓝型春油菜早花主效QTL紧密连锁的分子标记的引物，所述分子标记的引物有4对，分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示、SEQ IDNo.5和SEQ ID No.6所示和SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示。
上述所述的分子标记或分子标记的引物在甘蓝型春油菜早花资源育种上的应用。
一种快速创建甘蓝型春油菜早花资源的育种方法，包括如下步骤：
(1)利用权利要求1的分子标记，筛选出分别含有cqDTFA7a位点和cqDTFC8位点的甘蓝型春油菜单株，
(2)用含有cqDTFA7a位点的单株和含有cqDTFC8位点的单株进行杂交，
(3)杂交F1代进行小孢子培养，加倍成功的DH株系利用SEQ ID No.1和SEQ IDNo.2所示的引物对、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的引物对、SEQ ID No.5和SEQ IDNo.6所示的引物对、SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示的引物对进行基因型鉴定，筛选出同时含有cqDTFA7a位点和cqDTFC8位点的DH单株，
(4)将筛选出的DH单株进行产量和花期鉴定，筛选出产量优良、花期早于亲本3天的单株。具体方法为：筛选出单株产量高于17g，芥酸＜2％、硫代＜30.00微摩尔/克,花期至少早于亲本3天的单株。
进一步地，步骤(1)中，筛选出含有cqDTFA7a位点的单株的方法为：以甘蓝型春油菜DNA为模板，分别以SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物对、SEQ ID No.3和SEQ IDNo.4所示的引物对进行PCR扩增，若能分别得到330bp,120bp的扩增产物，则该甘蓝型春油菜为含有cqDTFA7a位点的单株；
筛选出含有cqDTFC8位点的单株的方法为：以甘蓝型春油菜DNA为模板，分别以SEQID No.5和SEQ ID No.6所示的引物对、SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示的引物对进行PCR扩增，若能分别得到170bp,105bp的扩增产物，则该甘蓝型春油菜为含有cqDTFC8位点的单株。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供的一种快速创建甘蓝型春油菜早花资源的育种方法，利用与早花QTL紧密连锁的分子标记辅助选择和聚合早花位点，一方面快速鉴定现有资源早花基因型，达到快速构建现有资源花期基因型库的效果，避免传统选育过程中漫长的表型选择；另一方面通过分子标记辅助选择进行不同早花位点聚合，只需要两步即可进行早花位点聚合，一是杂交，二是进行小孢子培养和标记检测，进行目的QTL追踪选择，避免目的QTL的丢失，提高选择效率，并且缩短育种周期和减少工作量。经过本发明的选育能够得到获得比亲本早开花3天的特早熟甘蓝型油菜品系，其在保留亲本优异性状的基础上还能提高产量性状，有效的解决了早熟与高产之间的矛盾。
本发明提供的快速创建甘蓝型春油菜资源的育种方法所选育的品种，与波里马细胞质雄性不育系配制组合，与高海拔主栽白菜型油菜品种相比(随机区组设计)，其产量比高海拔白菜型油菜主栽品种浩油11号增产21％。、生育期与浩油11差异不显著。
附图说明
图1为本发明的流程图；
图2为四个标记在聚合DH系中检测结果，a、b、c、d分别代表SSR标记G1803、Indel标记IA7-4、SSR标记S035和SNP标记SNP11在聚合DH系中检测结果，其中箭头所指的为聚合DH系同时含有四个标记早花基因型。
图3为筛选的新品种花期表现图；其中A、B代表分别含有早花主效QTLcqDTFA7a和早花主效cqDTFC8的单株，C、D代表聚合后含两位点的早花品系。
具体实施方式
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为从商业渠道购买得到的。
1)利用早花主效候选区间SNP信息，开发与早花主效QTL cqDTFC8紧密连锁的SNP标记；
结合NNDH群体定位结果和BSA重测序结果，cqDTFC8位于C8染色体SSR标记S033和S035之间，其物理位置为1.6Mb-6.0Mb，根据该区间候选SNP和Indel信息开发标记，共开发标记32对，其中SNP标记12对，Indel标记20对。进一步对32对标记在双亲DH189和No.5246中进行多态性筛选，发现6对SNP标记和3对Indel标记在双亲中存在差异，带型清晰、易读，都表现为共显性。cqDTFC8位点在NNDH群体中被定位于P7MC5-285-S035之间，置信区间为131.0cM-133.5cM，区间距离2.5cM。结合局部连锁图上分子标记基因型和BC2F2群体表型对cqDTFC8进一步进行定位，结果显示cqDTFC8被定位于2.2cM的位置，置信区间为2.1cM-2.7cM，介于SNP11与SNP12之间，区间距离0.6cM，且与SNP11共分离，解释表型贡献率为34％。
2)利用与早花QTL紧密连锁的分子标记：与早花主效QTLcqDTFA7a紧密连锁的G1803、IA7-4，与早花主效QTL cqDTFC8紧密连锁的标记S035、SNP11鉴定93份甘蓝型春油菜花期基因型，构建早花基因型库；
利用加密前距离cqDTFC8最近的共显性SSR标记S035(0.4cM)，cqDTFA7a位点紧密连锁的标记G1803和IA7-4，与cqDTFC8共分离的标记SNP11对93个甘蓝型春油菜资源进行不同位点基因型鉴定。结果显示：93个自然资源被四个标记分为AA和BB两种基因型(表1)。cqDTFA7a位点G1803标记，53个携带早花等位基因的资源开花时间的变幅从53.2d到62.1d，平均初花期为58.7天，40个BB基因型平均初花期为65.7d，变幅在63.2-77.3d之间，AA基因型平均初花期显著短于BB基因型(P<0.05)；对IA7-4位点分析显示，有50个携带早花基因的品系和43个携带晚花基因的品系，平均开花时间分别为58.1d和65.9d，差异呈显著水平(P<0.05)，初花期变幅与G1803标记下的变幅相差不大。cqDTFC8位点SO34标记也将93份资源分成AA、BB两种类型，其中AA基因型21个，初花期变幅55.7-61.7d，平均初花期58.6d，72个BB基因型初花期变幅从62.3-77.7d，平均初花期64.9d，显著晚于AA基因型初花期(P<0.05)；SNP11扫描后获得AA基因型16个，初花期变幅52.4-59.3d，平均初花期58.3d，BB基因型77个，变幅62.1-79.3d，平均初花期64.4d，两者初花期差异呈显著水平(P<0.05)。在四个标记中同时呈现AA基因型的有16个，平均初花期55.2d，同时为BB基因型的由30个，平均初花期65d，两者呈极显著差异(P<0.01)。
3)从93份资源中筛选分别含有cqDTFA7a和cqDTFC8位点的单株杂交，并进行小孢子培养，标记检测；
从上述93个自然品系中选取初花期较早、相近且每位点两个标记都表现早花基因型但不包含另外一个位点的品系四个进行早花位点聚合，其中含cqDTFA7a早花位点的品系为3164和2216，含cqDTFC8早花位点的品系为3484和2857，不同位点单株两两正反杂交，F1进行小孢子培养，共筛选到15个与亲本初花期相近或较早的DH系。进而对这15个DH系利用与cqDTFA7a紧密连锁的标记G1803、IA7-4和与cqDTFC8紧密连锁的标记S035、SNP11进行基因型鉴定，发现有7个聚合DH系在四个标记下都为早花基因型，分别是DH2、DH4、DH5、DH12、DH18、DH20和DH23(图2)。进一步对这7个聚合DH系进行花期鉴定和产量分析，结果显示：含有cqDTFA7a早花位点的品系3164和22167初花期分别为58.3d和59.2d，含有cqDTFC8早花位点的品系3484和2857初花期分别为57.6d和60d，7个聚合DH系初花期介于54.5-57.3d，比各自亲本平均花期早2-3d，其中来自(3484×3164)的DH18初花期最早，为54.5d，比两亲本早开花3d。
4)对鉴定获得含有两位点聚合DH单株(同时含有四个标记早花基因型)进行花期和产量相关性状鉴定；
亲本3484(cqDTFC8)角果长度和全株角果数分别为8cm和341个，显著高于2216(cqDTFA7a)和2857(cqDTFC8)，3164(cqDTFA7a)角果长度为7.8cm，显著高于2857(P＜0.05)；每角粒数最多的是3164，296个，与其它三个亲本差异达显著水平(P＜0.05)；千粒重除了2857最低之外，其余三个差异不显著；四个亲本单株产量无明显差异。7个聚合DH系中，DH18在角果长度，每角粒数，千粒重、全株角果数等四个性状上都显著优于其它6个聚合DH系(P＜0.05)DH18千粒重为21.4g，在7个聚合DH系中最高，除了与DH2和DH20无明显差异之外，与其它四个聚合DH系差异达显著水平(P＜0.05)。在四个亲本中，3484和3164在产量相关因子角果长度、全株角果数和每角粒数方面优于其它两亲本；通过3484和3164杂交聚合cqDTFA7a和cqDTFC8后获得的DH18不但花期提前，而且产量性状表现优异。
5)筛选产量性状优良，花期早于亲本3天的单株与波里马细胞质雄性不育系配制组合并测产。
“DH18”与波里马细胞质雄性不育系“025A”配置组合，并将DH18定名为TZG18R，杂种F1定名为TZG18，连续两年进行测产：2018年在青海省门源沙沟梁、门源后院、湟源、同德等四地进行测产，2019年在青海省门源后院、湟源、同德、贵南牧场、海北州等五地进行测产。结果表明：2018年TZG18在湟源、同德两地表现增产，较之浩油11号产量打显著水平(P＜0.05)，在门源沙沟梁和门源后院略有减产，但与浩油11号差异不明显；TZG18在四个地方平均产量为2.09kg，显著高于浩油11号的1.72kg，且比浩油11号增产21％.51；2019年除了采用上一年相同的三个地方门源后院、湟源、同德之外，又增加了贵南牧场和海北两个点，TZG18在门源后院和贵南牧场产量表现较之浩油11号没有明显差异(P＞0.05)，但在湟源、同德和海北产量显著高于浩油11号(P＜0.05)，综合五地的平均产量，TZG18为3.73kg，浩油11号为3.18kg，TZG18显著增产，且增产比率达到21.70％左右。
本发明提供的快速创建甘蓝型春油菜资源的育种方法，基于以下两个方面：
一方面快速鉴定现有资源早花基因型，达到快速构建现有资源花期基因型库的效果，避免传统选育过程中漫长的表型选择；
另一方面通过分子标记辅助选择进行不同早花位点聚合，只需要两步即可进行早花位点聚合，一是杂交，二是进行小孢子培养和标记检测，进行目的QTL追踪选择，避免目的QTL的丢失，提高选择效率，并且缩短育种周期和减少工作量。经过本发明的选育能够得到获得比亲本早开花3天的特早熟甘蓝型油菜品系，其在保留亲本优异性状的基础上还能提高产量性状，有效的解决了早熟与高产之间的矛盾。
参见图1，本发明提供的一种快速创建甘蓝型早花资源的育种方法，包括以下操作：
1)利用早花主效候选区间SNP信息，开发与早花主效QTL cqDTFC8紧密连锁的SNP标记；
2)利用与早花QTL紧密连锁的分子标记：与早花主效QTLcqDTFA7a紧密连锁的G1803、IA7-4，与早花主效QTL cqDTFC8紧密连锁的标记S035、SNP11鉴定93份甘蓝型春油菜花期基因型，构建早花基因型库；
3)从93份资源中筛选分别含有cqDTFA7a和cqDTFC8位点的单株杂交；
4)杂交F1代进行小孢子培养，加倍成功的单株用用上述四个分子标记进行目标基因跟踪选择；
5)对鉴定获得含有两位点聚合DH单株(同时含有四个标记早花基因型)进行花期和产量相关性状鉴定；
6)筛选产量性状优良，花期早于亲本3天的单株与波里马细胞质雄性不育系配制组合并测产。
四个标记。
G1803：
Forward：AGCCATCAGAGTAAAGAACC(SEQ ID No.1)；
Reverse：ACGGGAAGGAAAGTGAAGAG(SEQ ID No.2)；
IA7-4：
Forward：TGATGGAATAACAACAGCAA(SEQ ID No.3)；
Reverse：GTCTGTACACAGAGCAAACG(SEQ ID No.4)；
S035：
Forward：TCTTTAAGAAACGGAATGAG(SEQ ID No.5)；
Reverse：CGAACTTTAGGGACTATGGG(SEQ ID No.6)；
SNP11：
Forward：GAAAGCTGCTGGGTTTCT(SEQ ID No.7)；
Reverse：TATTATGCCATGTCATCTAC(SEQ ID No.8)。
扩增体系为。
SSR标记PCR扩增采用10μL体系：DNA 1μl，dNTP 0.8μl，10×TE Buffer 1μl，Taq酶0.2μl，primer 0.5μl，超纯水(ddH2O)6.5μl。SNP和Indel标记PCR扩增根据SSR体系有所改进：DNA 2.5μL，dNTP1μL，10×TE Buffer 1μL，Taq酶0.2μL，primer 1μL，ddH2O 4.3μL，共10μL。通过6％聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后使用银染法检测基因型。
SSR、Indel、SNP分子标记的扩增程序为：94℃变性3min；
94℃变性30s，59℃退火45s，72℃延伸45s，每次循环退火温度降低0.5℃，10个循环；94℃变性30s，54℃退火45s，72℃延伸45s，20个循环；前10个循环每循环退火温度降低0.5℃，降到54℃后，再进行后面的20个循环；
72℃延伸5min；4℃保存。
小孢子培养具体流程。
在始花期挑取处于单核靠边期的花蕾，加入0.1％升汞消毒15min，再用无菌水冲洗3次，置于无菌试管中；加入少量13％蔗糖溶液，用玻璃棒将花蕾研碎，用双层尼龙网过滤到离心管中，离心4min(1100r/min)以沉淀小孢子，弃去上清液；将小孢子加入含有0.05％秋水仙素的NLN-16培养基中悬浮，置于32℃黑暗培养48h后，25℃黑暗培养10d，待肉眼可见胚形成，置于摇床(50r/min)25℃黑暗条件培养，2周后放入4℃低温处理15d，转入固体B5培养基中培养基中；待成苗后，将苗移栽温室或大田，花期选取比亲本更早花且育性正常的单株，待成熟后收获种子。
下面给出具体的实施例。
实施例1
一种快速创建甘蓝型春油菜资源的方法，包括以下步骤：
(1)利用已开发的与早花QTL紧密连锁的分子标记：与早花主效QTLcqDTFA7a紧密连锁的G1803、IA7-4，与早花主效QTL cqDTFC8紧密连锁的标记S035、SNP11鉴定93份甘蓝型春油菜花期基因型，构建早花基因型库；
具体方法为：筛选出含有cqDTFA7a位点的单株的方法为：以甘蓝型春油菜DNA为模板，分别以SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物对、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的引物对进行PCR扩增，若能分别得到330bp,120bp的扩增产物，则该甘蓝型春油菜为含有cqDTFA7a位点的单株；
筛选出含有cqDTFC8位点的单株的方法为：以甘蓝型春油菜DNA为模板，分别以SEQID No.5和SEQ ID No.6所示的引物对、SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示的引物对进行PCR扩增，若能分别得到170bp,105bp的扩增产物，则该甘蓝型春油菜为含有cqDTFC8位点的单株。
从上述93个自然品系中选取初花期较早、相近且每位点两个标记都表现早花基因型但不包含另外一个位点的品系四个进行早花位点聚合，其中含cqDTFA7a早花位点的品系为3164和2216，含cqDTFC8早花位点的品系为3484和2857，不同位点单株两两正反杂交，F1进行小孢子培养，共筛选到15个与亲本初花期相近或较早的DH系。进而对这15个DH系利用与cqDTFA7a紧密连锁的标记G1803、IA7-4和与cqDTFC8紧密连锁的标记S035、SNP11进行基因型鉴定，发现有7个聚合DH系在四个标记下都为早花基因型，分别是DH2、DH4、DH5、DH12、DH18、DH20和DH23(图2)。进一步对这7个聚合DH系进行花期鉴定和产量分析，结果显示：含有cqDTFA7a早花位点的品系3164和22167初花期分别为58.3d和59.2d，含有cqDTFC8早花位点的品系3484和2857初花期分别为57.6d和60d，7个聚合DH系初花期介于54.5-57.3d，比各自亲本平均花期早2-3d，其中来自(3484×3164)的DH18初花期最早，为54.5d，比两亲本早开花3d。
6)对鉴定获得含有两位点聚合DH单株(同时含有四个标记早花基因型)进行花期和产量相关性状鉴定；
亲本3484(cqDTFC8)角果长度和全株角果数分别为8cm和341个，显著高于2216(cqDTFA7a)和2857(cqDTFC8)，3164(cqDTFA7a)角果长度为7.8cm，显著高于2857(P＜0.05)；每角粒数最多的是3164，296个，与其它三个亲本差异达显著水平(P＜0.05)；千粒重除了2857最低之外，其余三个差异不显著；四个亲本单株产量无明显差异。7个聚合DH系中，DH18在角果长度，每角粒数，千粒重、全株角果数等四个性状上都显著优于其它6个聚合DH系(P＜0.05)DH18千粒重为21.4g，在7个聚合DH系中最高，除了与DH2和DH20无明显差异之外，与其它四个聚合DH系差异达显著水平(P＜0.05)。在四个亲本中，3484和3164在产量相关因子角果长度、全株角果数和每角粒数方面优于其它两亲本；通过3484和3164杂交聚合cqDTFA7a和cqDTFC8后获得的DH18不但花期提前，而且产量性状表现优异。
7)筛选产量性状优良，花期早于亲本3天的单株(筛选出单株产量高于17g，芥酸＜2％、硫代＜30.00微摩尔/克,花期至少早于亲本3天的单株。)与波里马细胞质雄性不育系配制组合并测产。
“DH18”与波里马细胞质雄性不育系“025A”配置组合，并将DH18定名为TZG18R，杂种F1定名为TZG18，连续两年进行测产：2018年在青海省门源沙沟梁、门源后院、湟源、同德等四地进行测产，2019年在青海省门源后院、湟源、同德、贵南牧场、海北州等五地进行测产。结果表明：2018年TZG18在湟源、同德两地表现增产，较之浩油11号产量打显著水平(P＜0.05)，在门源沙沟梁和门源后院略有减产，但与浩油11号差异不明显；TZG18在四个地方平均产量为2.09kg，显著高于浩油11号的1.72kg，且比浩油11号增产21％.51；2019年除了采用上一年相同的三个地方门源后院、湟源、同德之外，又增加了贵南牧场和海北两个点，TZG18在门源后院和贵南牧场产量表现较之浩油11号没有明显差异(P＞0.05)，但在湟源、同德和海北产量显著高于浩油11号(P＜0.05)，综合五地的平均产量，TZG18为3.73kg，浩油11号为3.18kg，TZG18显著增产，且增产比率达到21.70％左右。
综上所述新育成DH18达到了缩短生育期的选育要求，且配制出强优势组合TZG18。
以上给出的实施例是实现本发明较优的例子，本发明不限于上述实施例。本领域的技术人员根据本发明技术方案的技术特征所做出的任何非本质的添加、替换，均属于本发明的保护范围。
序列表
<110> 青海大学
<120> 一种快速创建甘蓝型春油菜早花资源的育种方法
<160> 8
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
agccatcaga gtaaagaacc 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
acgggaagga aagtgaagag 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
tgatggaata acaacagcaa 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
gtctgtacac agagcaaacg 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
tctttaagaa acggaatgag 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
cgaactttag ggactatggg 20
<210> 7
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
gaaagctgct gggtttct 18
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
tattatgcca tgtcatctac 20

Claims (5)

1.甘蓝型春油菜早花主效QTL紧密连锁的分子标记，其特征在于，所述主效QTL有两个，分别为cqDTFA7a和cqDTFC8，其中与cqDTFA7a紧密连锁的分子标记为SSR标记G1803和Indel标记IA7-4，与cqDTFC8紧密连锁的分子标记为SSR标记S035和SNP标记SNP11；
SSR标记G1803由序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物对扩增得到；
Indel标记IA7-4由序列如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的引物对扩增得到；
SSR标记S035由序列如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示的引物对扩增得到；
SNP标记SNP11由序列如SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示的引物对扩增得到。
2.权利要求1所述的甘蓝型春油菜早花主效QTL紧密连锁的分子标记的引物，其特征在于，所述分子标记的引物有4对，分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示、SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示和SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示。
3.权利要求1所述的分子标记或权利要求2所述的分子标记的引物在甘蓝型春油菜早花资源育种上的应用。
4.一种快速创建甘蓝型春油菜早花资源的育种方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)利用权利要求1的分子标记，筛选出分别含有cqDTFA7a位点和cqDTFC8位点的甘蓝型春油菜单株，
(2)用含有cqDTFA7a位点的单株和含有cqDTFC8位点的单株进行杂交，
(3)杂交F1代进行小孢子培养，加倍成功的DH株系利用SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物对、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的引物对、SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示的引物对、SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示的引物对进行基因型鉴定，筛选出同时含有cqDTFA7a位点和cqDTFC8位点的DH单株，
(4)将筛选出的DH单株进行产量和花期鉴定，筛选出单株产量高于17g，芥酸＜2％、硫代＜30.00微摩尔/克,花期至少早于亲本3天的单株。
5.根据权利要求4所述的育种方法，其特征在于，步骤(1)中，筛选出含有cqDTFA7a位点的单株的方法为：以甘蓝型春油菜DNA为模板，分别以SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物对、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的引物对进行PCR扩增，若能分别得到330bp,120bp的扩增产物，则该甘蓝型春油菜为含有cqDTFA7a位点的单株；
筛选出含有cqDTFC8位点的单株的方法为：以甘蓝型春油菜DNA为模板，分别以SEQ IDNo.5和SEQ ID No.6所示的引物对、SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示的引物对进行PCR扩增，若能分别得到170bp,105bp的扩增产物，则该甘蓝型春油菜为含有cqDTFC8位点的单株。
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