CN111334515B

CN111334515B - 基因OsSAPK7及其所编码的蛋白在水稻抗非生物胁迫中的应用

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Publication number: CN111334515B
Application number: CN202010127961.4A
Authority: CN
Inventors: 明凤; 李晓瑞; 盖若男; 张皓; 毛婵娟
Original assignee: Shanghai Normal University
Current assignee: Shanghai Normal University
Priority date: 2020-02-28
Filing date: 2020-02-28
Publication date: 2022-05-27
Anticipated expiration: 2040-02-28
Also published as: CN111334515A

Abstract

本发明公开了一种能抗非生物胁迫的水稻基因OsSAPK7，基因的全长为5488bp，开放阅读框为1080bp，核苷酸序列表为SEQ ID NO.1。基因编码区的序列如SEQ ID NO.2，当基因编码区57位碱基C发生缺失、编码区849位碱基由C突变成T、编码区842位碱基由C突变成T、编码区7位到29位的碱基缺失时，抗非生物胁迫的功能缺失。提供的水稻基因OsSAPK7可用于植物品种改良，如帮助阐明水稻对不同逆境胁迫的应答机制，可以用于改善水稻抗干旱以及盐胁迫性能，提高水稻对非生物胁迫的能力，从而提高水稻的产量。

Description

基因OsSAPK7及其所编码的蛋白在水稻抗非生物胁迫中的应用

技术领域

本发明涉及基因生物品种培育领域，尤其涉及一种基因OsSAPK7及其所编码的蛋白在水稻抗非生物胁迫中的应用。

背景技术

水稻对寒冷环境的抵御能力，直接影响水稻的生长发育以及产量的形成，是制约水稻产量进一步提升的关键因素，因此研究水稻冷胁迫分子机制，对水稻生长发育及产量相关分子机理的探讨有重要意义。

近年来，随着生物技术的发展，与冷胁迫信号通路相关的转录因子也有很多报导。如与拟南芥冷响应基因表达相关的转录因子CBF，转录因子CBF的表达会提高植物的耐受性(Park S et al.2015)。在拟南芥中热休克转录因子C1、锌指12(ZAT12)、ZAT10等转录因子能够促进COR基因的表达，促进抗冻性(Lee CM et al.2015)。通过对耐寒水稻转录组分析，脱落酸(ABA)响应元件被过度表达，表明ABA信号在水稻耐寒性中起作用(Chawade A etal.2013；Zhao J et al.2015)。在水稻中，冷信号诱导MPK3的激活，使OsICE1/OsbHLH002磷酸化，并中断与OsHOS1的相互作用来抑制其降解(Zhao C et al.2017)。稳定的OsICE1激活OsTPP1的转录促进海藻糖的积累从而提高耐寒性(Bouchabke-Coussa O et al.2008；Zhang Z et al.2017)。

由蛋白磷酸酶和激酶协调的可逆蛋白磷酸化是感知和响应非生物胁迫的中心(Hirt et al.1997)，并形成了控制细胞功能的主要机制，包括对植物激素的反应、致病和环境刺激以及植物代谢的调节(Cohen et al.1988)。在植物和绿藻中命名为SNF1相关蛋白激酶(SnRK)，是激酶级联的进化保守核心成分。植物SnRK家族可分为三个亚家族：SnRK1、SnRK2和SnRK3(Hrabak et al.2003)。SnRK 2(SNF1-related protein kinase 2)属于蔗糖非发酵相关蛋白激酶。SnRK2亚家族由Ser/Thr蛋白激酶超家族中的植物特异性蛋白激酶组成(Mao Xinguo et al.2019)，SnRK2s参与了对非生物胁迫应答的反应(Halford etal.2009)。对水稻的研究发现，SnRK 2的10个家族成员都参与渗透胁迫的应答反应(Kobayashi Y et al.2004)。

SnRK2蛋白激酶具有高度保守的N-端激酶结构域和富含酸性氨基酸(AAs)的短C-端结构域。SnRK2s最初根据富含谷氨酸(E)和天冬氨酸(D)而分为SnRK2a和SnRK2b两个亚组(Shukla et al.2008)。在功能上进一步将C-端结构域划分为结构域I和结构域II。其中，结构域I负责ABA的非依赖性激活，而结构域II参与与ABI1(脱落酸不敏感1)的相互作用，是ABA依赖性激活所必需的。SnRK2s是ABA信号通路的关键组成成分，提高渗透胁迫的耐受性，应对冷胁迫的关键调节器(Xinguo Mao et al.2019)。例如，10个BdSNRK2中有9个是由冷胁迫诱导的(Wang et al.2015)，2个ZmSNRK2冷胁迫下显著上调(Huai et al.2008)，所有10种TaSNRK2都是由冷胁迫诱导(Zhang et al.2016)。

在过去几十年里，气候急剧变化，导致全球平均气温明显上升。极端天气事件频发。从1996年到2015年，全球大约发生了11000起极端天气事件，导致大量生命财产损失(Kreft et al.2016)。温度波动对作物生产有负面影响(Asseng S et al.2011；Lobell DBet al.2012)，环境温度低对植物的生长发育有明显影响。

因此，本领域的技术人员致力于开发一种基因OsSAPK7及其所编码的蛋白在水稻抗非生物胁迫中的应用。

发明内容

有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是如何提高水稻抗非生物胁迫的作用。

为实现上述目的，本发明提供了一种能抗非生物胁迫的水稻基因OsSAPK7，基因的全长为5488bp，开放阅读框为1080bp，全长核苷酸序列表为SEQ ID NO.1。

进一步的，基因编码区的序列如SEQ ID NO.2，当基因编码区57位碱基C发生缺失、编码区849位碱基由C突变成T、编码区842位碱基由C突变成T、编码区7位到29位的碱基缺失时，抗非生物胁迫的功能缺失。

本发明还提供一种能抗非生物胁迫的水稻蛋白OsSAPK7，蛋白含有359个氨基酸残基，氨基酸序列为SEQ ID NO.3。

本发明还提供水稻蛋白OsSAPK7在水稻抗非生物胁迫中的应用。

本发明还提供用于调取获得水稻样品中基因OsSAPK7的一对核苷酸引物。该引物根据基因OsSAPK7设计，使用此对引物对水稻样品cDNA进行PCR扩增可获得长1080bp的基因片段。具体的引物序列为：

Forward Primer：5'ATGGAGAGGTACGAGCTGCTCAAGG 3'(SEQ ID NO.4)

Reverse Primer：5'TCAGCTGAGCTGAAACTCACCACTG 3'(SEQ ID NO.5)

本发明还提供一种检测基因OsSAPK7表达含量变化的方法，检测水稻在低温、干旱、高盐胁迫以及植物激素处理后表达含量的变化，其步骤如下：

(a)将两周大的水稻苗置于150mM氯化钠溶液中，28℃培养高盐胁迫处理0、2、4、8以及12h；

(b)将两周大的水稻苗置于4℃培养箱中，低温胁迫处理0、0.25、0.5、1、1.5、2、4、8、12h；

(c)将两周大的水稻苗置于含20％PEG溶液中以进行干旱处理0、2、4、8以及12h；

(d)将两周大的水稻苗置于50μM IAA、6-BA、KT、ABA、GA₃中，以进行激素处理8h；

(e)提取前述各个处理的水稻苗的叶和根中的总RNA；

(f)利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA，根据SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7设计引物，根据SEQ ID NO.1，进行Real-time PCR检测。

Forward Primer：5'GTTACTCCAAGTCGTCGCTG 3'(SEQ ID NO.6)

Reverse Primer：5'GTAAGCACCAACAAGCATCAC 3'(SEQ ID NO.7)

本发明还提供一种检测水稻突变体中基因OsSAPK7碱基变化的方法，其特征在于，提取突变体和野生型水稻的总DNA，利用引物SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9，进行PCR检测。

Forward Primer：5'AGCATCCATTGTGAACATAGCTGA 3'(SEQ ID NO.8)

Reverse Primer：5'CTGTTGCAGCATCAAAGAGAAGAA 3'(SEQ ID NO.9)

进一步的，具体步骤如下：

(1)突变体株系与野生型的种子浸泡在水中24h，让种子充分吸涨，随后将种子玻璃培养皿内，放在水稻恒温培养箱内37℃催芽至露白，每天换水，防止长霉，选取萌发一致的种子，将其转移至种子架上，置于基础营养液中，28℃培养箱培养。

(2)分别提取突变体以及野生型对照组中的总DNA，利用引物进行PCR检测。

本发明还提供一种OsSAPK7 tilling突变体水稻与野生型水稻表型分析及产量改变的方法，其步骤如下：

(1)突变体与野生型的种子浸泡在水中24h，让种子充分吸涨，放于培养皿内，恒温培养箱内37℃催芽至露白，每天换水，防止长霉，

(2)将催芽后的种子均匀地散在苗床上，表面不能积水，种子播撒后，用手抹平，让种子陷入泥中，不应太深，

(3)育苗3-4周后，三叶苗，根系发达方可移苗，过早会造成根部损伤，后期发育不良，移苗后1-2周可按每颗苗0.5g尿素少量施肥，浇水一般提前将水放在温室内1天温热后再浇，

(4)生长期测定突变体与野生型的水稻表型，成熟期测量突变体与野生型水稻的籽粒饱满度，并统计籽粒数、千粒重与结实率。

技术效果

本发明通过克隆水稻中非生物胁迫诱导的转录因子OsSAPK7，对其时空表达模式及胁迫响应方式进行确定，结果显示基因在各个器官中组成型表达，在叶中表达量最低，在根中表达量最高。在接受IAA、6-BA、KT、ABA、GA₃处理后，其中6-BA、KT、ABA、GA₃处理后的水稻植株中OsSAPK7的表达量显著升高。盐胁迫(150mmol/L NaCl)处理到2h表达量达到最大值，与对照相比，提高大约17倍；在进行干旱胁迫(20％PEG)处理4h后OsSAPK7的表达量显著升高，并到达峰值。在以水稻Zhonghua11为遗传背景的OsSAPK7突变体中，观察到突变体株系较野生型矮小，对低温的耐受能力较野生型偌。在成熟期发现突变体株系千粒重，籽粒数，结实率减少，这为水稻在抵御低温胁迫的应答机制提供基因来源与技术支持。

提供的水稻基因OsSAPK7可用于植物品种改良，如帮助阐明水稻对不同逆境胁迫的应答机制，可以用于改善水稻抗干旱以及盐胁迫性能，提高水稻对非生物胁迫的能力，从而提高水稻的产量。

以下将结合附图对本发明的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本发明的目的、特征和效果。

附图说明

图1是本发明的一个较佳实施例的水稻OsSAPK7基因器官表达模式分析检测图；

图2是本发明的一个较佳实施例的水稻基因OsSAPK7在低温、干旱、高盐胁迫以及植物激素处理下的表达模式分析图；

图3是本发明的OsSAPK7 tilling突变体和野生型水稻苗进行低温抵抗示意图；

图4是本发明的OsSAPK7 tilling突变体和野生型水稻苗的DAB示意图；

图5是本发明的OsSAPK7 tilling突变体和野生型水稻苗的NBT示意图；

图6是本发明的OsSAPK7 tilling突变体和野生型水稻苗的籽粒饱满对照图；

图7是本发明的OsSAPK7 tilling突变体和野生型水稻苗的籽粒数对照图；

图8是本发明的OsSAPK7 tilling突变体和野生型水稻苗的千粒重示意图；

图9是本发明的OsSAPK7 tilling突变体和野生型水稻苗的结实率示意图。

具体实施方式

以下参考说明书附图介绍本发明的多个优选实施例，使其技术内容更加清楚和便于理解。本发明可以通过许多不同形式的实施例来得以体现，本发明的保护范围并非仅限于文中提到的实施例。

IAA：吲哚-3-乙酸；6-BA：6-苄氨基嘌呤；KT：激动素；GA₃：赤霉素

中花11号，是京风五号/特特普♀/福锦♂花培获得的粳稻，株高110-115厘米左右，株型较紧凑，较繁茂，叶色浓绿。穗大、码密，穗颈长，有弯腰现象。穗长20厘米，大穗型品种。平均穗粒数115-120粒，空秕罴率为15-20％，较高。谷粒椭圆形，颖及颖尖杆黄色，千短顶芒，粒重26-27克。米质优，垩白少，透明度好，食味佳。全生育期160天左右，属中熟品种。分蘖力强，耐肥，抗倒伏性和抗病性较强，抗寒，抗盐碱。秧令弹性较大。

下列实例中未注明具体的实验方法，均可按照常规方法进行。如Sambrook等分子克隆：实验手册(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述条件，或按照制造生产厂商的使用说明。

实施例1水稻基因OsSAPK7的获得

1.水稻品种中花11在培养箱(SPX-250-GB,Shanghai,China)中培养：生长条件为光周期16h/8h(L/D)，28℃。

2.DNA提取：取500mg左右新鲜的水稻植物组织材料，加入80μL Lysis Buffer，用研磨棒将植物组织研碎，加入120μL ddH₂O。12000rpm离心15min后将上清转移至新的离心管，测OD值，电泳检测。

3.基因的克隆。以提取的水稻DNA为模板，利用正向引物和反向引物进行PCR，获得基因全长，具体序列信息参见SEQ ID NO.1。

实施例2水稻OsSAPK7基因器官表达模式分析

分别提取水稻根、茎、叶中的总RNA，利用反转录试剂盒将总RNA反转录成cDNA，利用引物SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7，进行Real-time PCR检测，如图1所示。结果显示，该基因为转录因子，在茎中表达量最低，叶中表达量最高。

实施例3水稻基因OsSAPK7在低温、干旱、高盐胁迫以及植物激素处理下的表达模式分析

高盐：对两周大的水稻幼苗进行150mM NaCl处理12h，提取处理0、2、4、8、12h后的根中的总RNA；

干旱：对两周大的水稻幼苗进行20％PEG干旱处理12h，提取处理0、2、4、8、12h后的根中的总RNA；

低温：对两周大的水稻幼苗进行4℃低温处理，分别提取处理0、0.25、0.5、1、1.5、2、4、8、12h后的叶中的总RNA；

植物激素：对两周大的水稻幼苗进行50μM IAA、6-BA、KT、ABA、GA3浸泡处理8h，提取根中的总RNA。

利用反转录试剂盒将以上得到的总RNA反转录成cDNA，利用引物SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6，进行Real-time PCR检测。结果显示，NaCl处理后OsSAPK7的表达量迅速升高，到2h表达量最高，随着时间推移表达量逐渐降低，如图2a所示。经过20％PEG8000处理4h后，OsSAPK7的表达量显著升高，并到达峰值，表达量提高17倍左右，如图2b所示。低温(4℃)处理后OsSAPK7的表达量迅速升高，到2h表达量最高，如图2c所示。为研究OsSAPK7是否受植物激素的调控，故进行了植物激素的处理，发现OsSAPK7受6-BA、KT、ABA、GA3的调控，如图2d所示。

实施例4 OsSAPK7 tilling突变体的分子鉴定

分别提取突变体以及野生型对照组中的总DNA，利用引物SEQ ID NO.7和SEQ IDNO.8，进行PCR检测。结果显示，突变体OsSAPK7-1(SEQ ID NO.10)和OsSAPK7-19((SEQ IDNO.11))位于编码区57位碱基C发生缺失；突变体OsSAPK7-1位于编码区849位碱基由C突变成T；突变体OsSAPK7-19位于编码区的842位碱基由C突变成T；突变体OsSAPK7-20(SEQ IDNO.12)位于编码区7位碱基到29位碱基缺失；筛选出纯合突变体，并进行繁殖。实验还获得OsSAPK7-4，OsSAPK7-8，OsSAPK7-15，OsSAPK7-22，OsSAPK7-25和OsSAPK7-26突变体，但其序列与野生型相比相差过大，不利于后期研究的进行。

实施例5 OsSAPK7 tilling突变体表型分析

OsSAPK7 tilling突变体实验组：OsSAPK7-1，OsSAPK7-19，OsSAPK7-20突变体，对照组：野生型两周龄水稻苗。实验组的突变体和野生型水稻苗进行表型分析，OsSAPK7tilling突变体株系较野生型低温条件下耐受能力弱，如图3所示。并对OsSAPK7 tilling突变体和野生型水稻苗进行DAB和NBT染色，如图4和图5所示，结果显示在OsSAPK7 tilling突变体中，活性氧和超氧化物歧化酶大量增加，耐受性较野生型低。

实施例6 OsSAPK7 tilling突变体水稻株高和产量的改变

对OsSAPK7 tilling突变体与野生型中花11对照组进行照相，并且进行籽粒饱满度、穗、千粒重及结实率统计。结果显示，突变体水稻与野生型相比，其籽粒不饱满，如图6所示，籽粒数较少，如图7所示。千粒重，如图8所示。结实率，如图9所示都相对较低。

以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术无需创造性劳动就可以根据本发明的构思做出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。

序列表

<110> 上海师范大学

<120> 基因OsSAPK7及其所编码的蛋白在水稻抗非生物胁迫中的应用

<130> 2020

<160> 6

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 5488

<212> DNA

<213> Oryza sativa

<400> 1

actgtagcag caacagcagc agagtgtgag tgctcatcaa tccagcccat ccccctgctg 60

ctgctgctgc tgcttcgctg agacgacgag aggaagaaga cgagccccca agccaagcag 120

acgcctcctc cttcttaagc ttcccaattc tttctctttc cctcctcctc cgcctccgcc 180

tacgccttcc ccgctagtcc cacacatccg gcgaagattc cggaagtttc gtcgatcctc 240

cgatcgatca agcggcgagc ggcgggaggc atggagaggt acgagctgct caaggacatc 300

ggcgccggga acttcggggt ggcgcggctg atgcggaaca aggagaccaa ggagctggtc 360

gccatgaagt acatccctcg gggcctcaag gcgagccttc ttcgcttctt cttcttcttc 420

ttcttgtccc ttttcgtccg ctctgttttc ctgatcgatc gatgggtgtg gggcgttttt 480

tttgctcatt cgggtggtga tctgatctct gcagattgac gagaatgtgg cgagggagat 540

catcaaccac cggtcgctgc ggcaccccaa catcatccgc ttcaaggagg tgaggccgtg 600

gcggggggca aattgggtgt tcgcccctgt tcgtcgcgtc ggtggcgaag aatctgtttg 660

tttttttttc ttcttgtgtg tgtgtgtgat ggaagaatcg tgccttgcga tgcaggtggt 720

ggtcacgccg acgcacctgg cgatcgtgat ggagtacgct gccggcggcg agttgttcga 780

ccggatctgc aacgccggga ggttcagcga ggacgaggtt cagcgatgct cgaatcgact 840

ctaatcaact ccatttcttg gtgagttctt gtgctaatcc gcgtgagaat ggtgggcttt 900

tgcaggccag gtatttcttc cagcagctca tctgcggcgt gagctactgc cacttcatgg 960

taagaacaga aaaacgatcc cagtaaacat tgcattcttt ttttaaaaaa aaaaggatgg 1020

gaaagtgttc aaatgtgaaa ttattattcg tgatggattc gcagcaaatt tgccaccggg 1080

atttgaagct ggagaacacg ctgctggacg gcagcccggc gccccgcctc aagatctgcg 1140

acttcggtta ctccaaggta gggagaaggc cttctttaac cttttcttga atacagtaat 1200

cttttccctc gaaacctgcc tcaacacctc ttttccctgc ccggatttct tctagaaatg 1260

gacaagcttt tcttttttcc cttgtcaaaa agcactctat ttttaaatga tctatagtcg 1320

atttaattac ctataaatat atattacact agtaatattt gatcttacct gttatacata 1380

cattttaata catacatttt aatatatgct acagctaact ataaataaaa tttatagccg 1440

gttacttttc tcttttatca tttatcttcg gtttatagtt acctagtctc aaaagatcaa 1500

aactttttct tcactgtttc aattcactcc cccaagaaac gccattgctt gcaaacgttt 1560

tcttctacaa atgctaaaaa aaaaaaaaac tcctatgtgc tttcttgcct aattttctcc 1620

cccttttctt acgcgcaact gcctaaaaga agcaacattt tcgctttgat cgcaacatga 1680

cgcctttttt gtttcttctc ctcgtcgcag tcgtcgctgc tgcactcgaa gcccaagtcg 1740

acggtcggga cgccggcgta catcgcgccg gaggtgctat cccgccggga gtacgacggc 1800

aaggtcagtc acgcccattc gcccatcact tccccttgtc atctgtggca tggtggtggg 1860

gcccactggc agtggcggta gcgtggggcc cacctgctcc tggtcctcag cgctgagcac 1920

gtgccgtccc ctgggagtcc acgtatcgcg gttctcaagg caaacactac cttggaccgt 1980

agacccggcc tatgggcgag ctgggcagca tcggaaagtg ggtcccatgt gtctgtgagt 2040

gttgggtcta tgggctacta tgggctaggg tccatggggg ggggggacag gtgcctctgg 2100

gtggtggatt tgggatttgt cctctaggag agcggtggag atttgcttgc ctgcggccgg 2160

acagacgccc actgggctgt gggcccggga ttgttcttag cccgggccca cacactgcct 2220

cgtgattcgt gacagtagta gtactagtac atgctagaca gtgtgtagta gtacgcgcta 2280

aacaggctgt gtgaaggggc cctgagacca tatgctgctg actgtcactc tcagttcagc 2340

tgagtgtgtt ttgctcaaaa aaaatagaag aagaagaaga agaagaagaa gcttgagtgt 2400

gtgtttcttg ctgcagctga gctgagctgc tactgtagtg cattagattc ccagctaatg 2460

atgctccctc cagtagtggt agtagaactc cagtgttttt tgttgaaaaa tctcttctgt 2520

aaaagcaagg gagggattat tcaaaaggac aggttccttc cttttgtgtg tgtgtgatgt 2580

cgatctagac attcacattc tctctcggtt tttttttcgg taatcaacta atcacacatc 2640

acgcttgatg gggatgctcg cttcgacgag gcgtggcggc tgctttaaca gcacgccaga 2700

cacaaaagag gaggggggga gaaaagacgg gttgatcgaa ttcgagacgg ttttagtggt 2760

caagagtttg caccctgtag cttgttacgt gcccccactt gttgctttat taaaatgtgg 2820

tggcctgagg taaagtgaga ttagccggtg atggcatgag attctccagg gtacagatgc 2880

gagatatttt gcttctcgcc cgatttgggc agggttaaaa gttcggattc tttgtatgtt 2940

tggttgtcca gtgtgttttg gcgagtgaag taacggagtg tgattttgtc tttagttaca 3000

tgcaacgcta agaaaggaat gatttttcat cgtttgggat tgaaatggaa cagacgtgta 3060

gggattaggt gaattgtgac aggatccatg aggtagacgc acccctcagt ctgtatttgc 3120

agttatgcat gtcattcggt tggacagctt gcaatttttg ttgacatctt tttgggttca 3180

cctcatactt tatgtccttt tctgagcttt tttttccatc atggttctag tgctacatat 3240

tagctaattg acgttatcac aatgggccct cggacccaat ccttttcagg tagacatgtt 3300

agactgaact tctctttggc cttttctgtg gttattaatt ttctctctct ccttggtgtc 3360

agttactgcc gtcatatctt atgaacgatt ttcttcagga cagtgattgc attttgttcc 3420

ttccctatat aatacatcta ctcaggctgc ttagattttt cacgctgcaa aattggttgc 3480

ttttgattga caaagtggac actgccatag ataatttgta gatggaatat caagaaacat 3540

tttatcattt gcatctagat gttctttttt tacaaccata atgtgccctt gatttcaaca 3600

acctataatg cttatttccg agttatagag ttatgtattt ttcagctgat ttgttcccgt 3660

catctttaga ctgccctcaa ccacctgttt tttatttgaa ttaatgctgg aataatctat 3720

tgcataaaga aaaaaaacca ctgttgtacc gctttccaaa agattactgg atgcgtatgt 3780

cctataacag tcatggttgt tagcctactt agccattagg tgagaaagca caaagtgccc 3840

cacagcaggt aaatgtctgt ggggggaata tgtaattacc gaaggacatg gatcctctga 3900

gatcatcttt tctatgttct catgataacg ccaccaccct aataacgaat gtcaatactt 3960

atgcttacca taggtgtgtt ctgtcattac ctgtttttat ctttgcttta gtacataagc 4020

gtagcactga tgcttgtctg ccttttgaat ttaggttcat ggaagtgcac gtcatctttc 4080

ctatcattca gtttattttg tacagaagtt agcatccatt gtgaacatag ctgaaatttg 4140

cgtacttcgg agagttttga tatttccacg cttctatttg gaactttgag cgtactaaac 4200

ataagtgaca gcatgctgtg cagaaaataa aaggagccaa tcaaatagat gtgctaaatg 4260

gtgtaataga gcctttgatt tttgtttctt ggaccatttt aaattacaga gattattctg 4320

aaatgttttg atgatcgaaa caagcacgat taatgttcta caggctgttc tgccttaata 4380

ttctactaga aagaagtgta ctttcataca tcctgttctt gcttgtattt atcctttcat 4440

ttgtttctat cttatctcct gaattcattt acttgtctcc taacattttt ggattggatg 4500

gttgatgctt cagacagccg atgtgtggtc ttgtggagtg actctttatg tgatgcttgt 4560

tggtgcttac ccctttgagg accctgatga ccccaagaat ttcagaaaga ccattggggt 4620

aacaatttaa gaacttttca gctaagcatt atcagatcac aacttctagt ctcttatgct 4680

ttgtgcattt tttgttctca gagaataatg tcaattcagt acaaaatacc cgagtacgtc 4740

catgtatccc aggactgcag gcaactcctt tctagaattt ttgttgcaaa ccctgcaaag 4800

gtactactct atttaaactc agatcaactt actagaccta ttcatgattt ttttaaaaaa 4860

aaaatcattc ccaaacttca tacagagaat aacaataagg gagatcagga accacccatg 4920

gttcctgaag aacctgccaa gagagctcac agaagctgca caggcaatgt actacaagaa 4980

ggataacagt gccccgacct actccgtcca gtcggtcgag gagatcatga agattgtcga 5040

ggaagcgcgg acgccgcctc ggtcctccac ccccgtggcc ggctttggct ggcaagagga 5100

ggatgagcag gaggacaaca gcaagaagcc agaggaagaa caggaggaag aggaagatgc 5160

tgaggatgag tacgacaagc aggtgaaaca agtccatgcc agtggtgagt ttcagctcag 5220

ctgagtattt ctgtccagca gcacaggaag attgcaaact ggagatattg tcataatgtg 5280

gcagctgatg gtcacactcc cattctgtag tttgcagtct tgtttttctt ttttcagttt 5340

cattttttct tttcttctct ttgatgctgc aacagtgtaa attaccaaag tggttctgtc 5400

actgtctttg taatgactga tttaagttag catgcagaaa cataatgtat tgaataaaac 5460

catctcattg agcatcttct ttctcaga 5488

<210> 2

<211> 1080

<212> DNA

<213> Oryza sativa

<400> 2

atggagaggt acgagctgct caaggacatc ggcgccggga acttcggggt ggcgcggctg 60

atgcggaaca aggagaccaa ggagctggtc gccatgaagt acatccctcg gggcctcaag 120

attgacgaga atgtggcgag ggagatcatc aaccaccggt cgctgcggca ccccaacatc 180

atccgcttca aggaggtggt ggtcacgccg acgcacctgg cgatcgtgat ggagtacgct 240

gccggcggcg agttgttcga ccggatctgc aacgccggga ggttcagcga ggacgaggcc 300

aggtatttct tccagcagct catctgcggc gtgagctact gccacttcat gcaaatttgc 360

caccgggatt tgaagctgga gaacacgctg ctggacggca gcccggcgcc ccgcctcaag 420

atctgcgact tcggttactc caagtcgtcg ctgctgcact cgaagcccaa gtcgacggtc 480

gggacgccgg cgtacatcgc gccggaggtg ctatcccgcc gggagtacga cggcaagaca 540

gccgatgtgt ggtcttgtgg agtgactctt tatgtgatgc ttgttggtgc ttaccccttt 600

gaggaccctg atgaccccaa gaatttcaga aagaccattg ggagaataat gtcaattcag 660

tacaaaatac ccgagtacgt ccatgtatcc caggactgca ggcaactcct ttctagaatt 720

tttgttgcaa accctgcaaa gagaataaca ataagggaga tcaggaacca cccatggttc 780

ctgaagaacc tgccaagaga gctcacagaa gctgcacagg caatgtacta caagaaggat 840

aacagtgccc cgacctactc cgtccagtcg gtcgaggaga tcatgaagat tgtcgaggaa 900

gcgcggacgc cgcctcggtc ctccaccccc gtggccggct ttggctggca agaggaggat 960

gagcaggagg acaacagcaa gaagccagag gaagaacagg aggaagagga agatgctgag 1020

gatgagtacg acaagcaggt gaaacaagtc catgccagtg gtgagtttca gctcagctga 1080

<210> 3

<211> 359

<212> PRT

<213> Oryza sativa

<400> 3

Met Glu Arg Tyr Glu Leu Leu Lys Asp Ile Gly Ala Gly Asn Phe Gly

1 5 10 15

Val Ala Arg Leu Met Arg Asn Lys Glu Thr Lys Glu Leu Val Ala Met

20 25 30

Lys Tyr Ile Pro Arg Gly Leu Lys Ile Asp Glu Asn Val Ala Arg Glu

35 40 45

Ile Ile Asn His Arg Ser Leu Arg His Pro Asn Ile Ile Arg Phe Lys

50 55 60

Glu Val Val Val Thr Pro Thr His Leu Ala Ile Val Met Glu Tyr Ala

65 70 75 80

Ala Gly Gly Glu Leu Phe Asp Arg Ile Cys Asn Ala Gly Arg Phe Ser

85 90 95

Glu Asp Glu Ala Arg Tyr Phe Phe Gln Gln Leu Ile Cys Gly Val Ser

100 105 110

Tyr Cys His Phe Met Gln Ile Cys His Arg Asp Leu Lys Leu Glu Asn

115 120 125

Thr Leu Leu Asp Gly Ser Pro Ala Pro Arg Leu Lys Ile Cys Asp Phe

130 135 140

Gly Tyr Ser Lys Ser Ser Leu Leu His Ser Lys Pro Lys Ser Thr Val

145 150 155 160

Gly Thr Pro Ala Tyr Ile Ala Pro Glu Val Leu Ser Arg Arg Glu Tyr

165 170 175

Asp Gly Lys Thr Ala Asp Val Trp Ser Cys Gly Val Thr Leu Tyr Val

180 185 190

Met Leu Val Gly Ala Tyr Pro Phe Glu Asp Pro Asp Asp Pro Lys Asn

195 200 205

Phe Arg Lys Thr Ile Gly Arg Ile Met Ser Ile Gln Tyr Lys Ile Pro

210 215 220

Glu Tyr Val His Val Ser Gln Asp Cys Arg Gln Leu Leu Ser Arg Ile

225 230 235 240

Phe Val Ala Asn Pro Ala Lys Arg Ile Thr Ile Arg Glu Ile Arg Asn

245 250 255

His Pro Trp Phe Leu Lys Asn Leu Pro Arg Glu Leu Thr Glu Ala Ala

260 265 270

Gln Ala Met Tyr Tyr Lys Lys Asp Asn Ser Ala Pro Thr Tyr Ser Val

275 280 285

Gln Ser Val Glu Glu Ile Met Lys Ile Val Glu Glu Ala Arg Thr Pro

290 295 300

Pro Arg Ser Ser Thr Pro Val Ala Gly Phe Gly Trp Gln Glu Glu Asp

305 310 315 320

Glu Gln Glu Asp Asn Ser Lys Lys Pro Glu Glu Glu Gln Glu Glu Glu

325 330 335

Glu Asp Ala Glu Asp Glu Tyr Asp Lys Gln Val Lys Gln Val His Ala

340 345 350

Ser Gly Glu Phe Gln Leu Ser

355

<210> 10

<211> 897

<212> DNA

<213> Oryza sativa

<400> 10

gtcggagagt tttgatattt cacgcttcta tttggaactt tgagcgtact aaacataagt 60

gacagcatgc tgtgcagaaa ataaaaggag ccaatcaaat agatgtgcta aatggtgtaa 120

tagagccttt gatttttgtt tcttggacca ttttaaatta cagagattat tctgaaatgt 180

tttgatgatc gaaacaagca cgattaatgt tctacaggct gttctgcctt aatattctac 240

tagaaagaag tgtactttca tacatcctgt tcttgcttgt atttatcctt tcatttgttt 300

ctatcttatc tcctgaattc atttacttgt ctcctaacat ttttggattg gatggttgat 360

gcttcagaca gccgatgtgt ggtcttgtgg agtgactctt tatgtgatgc ttgttggtgc 420

ttaccccttt gaggaccctg atgaccccaa gaatttcaga aagaccattg gggtaacaat 480

ttaagaactt ttcagctaag cattatcaga tcacaacttc tagtctctta tgctttgtgc 540

attttttgtt ctcagagaat aatgtcaatt cagtacaaaa tacccgagta cgtccatgta 600

tcccaggact gcaggcaact cctttctaga atttttgttg caaaccctgc aaaggtacta 660

ctctatttaa actcagatca acttactaga cctattcatg atttttttaa aaaaaaaatc 720

attcccaaac ttcatacaga gaataacaat aagggagatc aggaaccacc catggttcct 780

gaagaacctg ccaagagagc tcacagaagc tgcacaggca atgtactaca agaaggataa 840

cagtgcctcg acctactccg tccagtcggt cgaggagatc atgaagattg tcgagga 897

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<212> DNA

<213> Oryza sativa

<400> 11

tgttttgata tttcacgctt ctatttggaa ctttgagcgt actaaacata agtgacagca 60

tgctgtgcag aaaataaaag gagccaatca aatagatgtg ctaaatggtg taatagagcc 120

tttgattttt gtttcttgga ccattttaaa ttacagagat tattctgaaa tgttttgatg 180

atcgaaacaa gcacgattaa tgttctacag gctgttctgc cttaatattc tactagaaag 240

aagtgtactt tcatacatcc tgttcttgct tgtatttatc ctttcatttg tttctatctt 300

atctcctgaa ttcatttact tgtctcctaa catttttgga ttggatggtt gatgcttcag 360

acagccgatg tgtggtcttg tggagtgact ctttatgtga tgcttgttgg tgcttacccc 420

tttgaggacc ctgatgaccc caagaatttc agaaagacca ttggggtaac aatttaagaa 480

cttttcagct aagcattatc agatcacaac ttctagtctc ttatgctttg tgcatttttt 540

gttctcagag aataatgtca attcagtaca aaatacccga gtacgtccat gtatcccagg 600

actgcaggca actcctttct agaatttttg ttgcaaaccc tgcaaaggta ctactctatt 660

taaactcaga tcaacttact agacctattc atgatttttt taaaaaaaaa atcattccca 720

aacttcatac agagaataac aataagggag atcaggaacc acccatggtt cctgaagaac 780

ctgccaagag agctcacaga agctgcacag gcaatgtact acaagaagga taacagtgcc 840

tcgacctact ccgtccagtc ggtcgaggag atcatgaaga ttgtcgagga agcgcggacg 900

ccgcctcggt cctccacccc cgtggccggc tttggctggc aagaggagga tgagcaggag 960

gacaacagca agaagccaga ggaagaacag gaggaagagg aagatgctga ggatgagtac 1020

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<210> 12

<211> 666

<212> DNA

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tttttttaaa aaaaaaatca ttcccaaact tcatacagag aataacaata agggagatca 360

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aagaggaaga tgctgaggat gagtacgaca agcaggtgaa acaagtccat gccggttggt 660

gaggaa 666

Claims

1.水稻蛋白OsSAPK7在水稻耐受低温中的应用，其特征在于，所述蛋白含有359个氨基酸残基，氨基酸序列为SEQ ID NO.3。