CN111317828A - hATG10基因的抗结剂在制备治疗胃癌的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种hATG10基因的抗结剂在制备治疗胃癌的药物中的应用。本发明提出了hATG10基因的抗结剂在制备治疗胃癌的药物中的应用，采用分子生物学收到首次确证基因hATG10基因与胃癌有显著相关性，筛选了两条siRNA干扰靶点，为进一步的而研究奠定基础。

Description

hATG10基因的抗结剂在制备治疗胃癌的药物中的应用

技术领域

本发明涉及分子生物学及生物医药技术领域，更具体地，涉及一种hATG10基因的抗结剂在制备治疗胃癌的药物中的应用。

背景技术

胃癌(gastric carcinoma)是起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤，在我国各种恶性肿瘤中发病率居首位，胃癌发病有明显的地域性差别，在我国的西北与东部沿海地区胃癌发病率比南方地区明显为高。好发年龄在50岁以上，男女发病率之比为2：1。由于饮食结构的改变、工作压力增大以及幽门螺杆菌的感染等原因，使得胃癌呈现年轻化倾向。胃癌可发生于胃的任何部位，其中半数以上发生于胃窦部，胃大弯、胃小弯及前后壁均可受累。绝大多数胃癌属于腺癌，早期无明显症状，或出现上腹不适、嗳气等非特异性症状，常与胃炎、胃溃疡等胃慢性疾病症状相似，易被忽略，因此，目前我国胃癌的早期诊断率仍较低。胃癌的预后与胃癌的病理分期、部位、组织类型、生物学行为以及治疗措施有关。

目前，已有大量报道指出，应用RNAi技术特异性地向哺乳动物和人类细胞中导入siRNA来降低靶基因的表达，进而引起靶蛋白的表达下降，最终达到高效特异性的基因治疗作用。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种hATG10基因的抗结剂在制备治疗胃癌的药物中的应用，该hATG10基因在细胞增殖与分化、肿瘤治疗及抗肿瘤药物研发等方面具有潜在的应用价值，通过RNAi技术特异性地向哺乳动物和人类细胞中导入siRNA来降低靶基因的表达，进而引起靶蛋白的表达下降，最终达到高效特异性的基因治疗作用。

本发明提供了一种hATG10基因的抗结剂在制备治疗胃癌的药物中的应用，所述hATG10基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。

可选的，所述抗结剂是特异性干扰所述hATG10基因表达的siRNA干扰靶点，该siRNA干扰靶点的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。

可选的，所述抗结剂是特异性干扰所述hATG10基因表达的siRNA干扰靶点，该siRNA干扰靶点的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。

与现有技术相比，本发明提供的hATG10基因的抗结剂在制备治疗胃癌的药物中的应用，至少实现了如下的有益效果：

本发明提出了hATG10基因的抗结剂在制备治疗胃癌的药物中的应用，采用分子生物学收到首次确证基因hATG10基因与胃癌有显著相关性，筛选了两条siRNA干扰靶点，为进一步的而研究奠定基础。

当然，实施本发明的任一产品必不特定需要同时达到以上所述的所有技术效果。

通过以下参照附图对本发明的示例性实施例的详细描述，本发明的其它特征及其优点将会变得清楚。

附图说明

被结合在说明书中并构成说明书的一部分的附图示出了本发明的实施例，并且连同其说明一起用于解释本发明的原理。

图1是hATG10基因的抗结剂对胃癌的两株细胞学SGC7901和AGS的干扰效果；

图2和图3是干扰目的基因之后细胞增殖能力结果图。

具体实施方式

现在将参照附图来详细描述本发明的各种示例性实施例。应注意到：除非另外具体说明，否则在这些实施例中阐述的部件和步骤的相对布置、数字表达式和数值不限制本发明的范围。

以下对至少一个示例性实施例的描述实际上仅仅是说明性的，决不作为对本发明及其应用或使用的任何限制。

对于相关领域普通技术人员已知的技术、方法和设备可能不作详细讨论，但在适当情况下，所述技术、方法和设备应当被视为说明书的一部分。

在这里示出和讨论的所有例子中，任何具体值应被解释为仅仅是示例性的，而不是作为限制。因此，示例性实施例的其它例子可以具有不同的值。

应注意到：相似的标号和字母在下面的附图中表示类似项，因此，一旦某一项在一个附图中被定义，则在随后的附图中不需要对其进行进一步讨论。

本发明共提供了两条基因hATG10的干扰序列，序列中包括sense和antisense，序列表见SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5。

本发明提供了一种hATG10基因的抗结剂在制备治疗胃癌的药物中的应用，hATG10基因的核苷酸序列如下(序列表中SEQ ID NO.1所示)：

GCAGTGCGCACGCTCCGACTCGGCCGTGGCGGACCTGACTGAAGGAGGCCGCGGACCTGACTGAAGGAGGCCACGGCCACTTCTGGTTGGCCTCGGGGCGCGCTGGCTCGGCTCTTCCTCCGCCCTCGAGGCCCCCGCAGTCCCATCATTCAGTTCCGTAGGGTCACCGGCGCGGCAGTGGCCTCGCAGGGCGCTGGGTCCCTCTCCCCAGCTCTCCTCCCCCTGGCCCCGTCGCCCCGCCCTCGCCGGGCTGGGCTGCGGGGTCAGGGGCCGAGCGGAGAGGGTAGAGACGGGGTTTCACCGTGTTAGCCAAGATGGTCTCGATCTCCTGACCTCGTGATCCGCCCGCCTCGGCCTCCCAAAGTGCTGGGATTACAGGCGTGAGCCACTGCGCCCGGCCTGTTGTACAGTTATTAAAGTTATCATTTAACATGGAAGAAGATGAGTTCATTGGAGAAAAAACATTCCAACGTTATTGTGCAGAATTCATTAAACATTCACAACAGATAGGTGATAGTTGGGAATGGAGACCATCAAAGGACTGTTCTGATGGCTACATGTGCAAAATACACTTTCAAATTAAGAATGGGTCTGTGATGTCACATCTAGGAGCATCTACCCATGGACAGACATGTCTTCCCATGGAGGAGGCTTTCGAGCTACCCTTGGATGATTGTGAAGTGATTGAAACTGCAGCAGCGTCCGAAGTGATTAAATATGAGTATCATGTCTTATATTCCTGTAGCTACCAAGTGCCTGTACTTTACTTTAGGGCAAGCTTTTTAGATGGGAGACCTTTAACTCTGAAGGACATATGGGAAGGAGTTCATGAGTGCTATAAGATGCGACTGCTACAGGGACCATGGGACACTATTACGCAACAGGAACATCCAATACTTGGGCAACCCTTTTTTGTACTTCATCCCTGCAAGACGAATGAATTCATGACTCCTGTATTAAAGAATTCTCAGAAAATCAATAAGAATGTCAACTATATCACATCATGGCTGAGCATTGTAGGGCCAGTTGTTGGGCTGAATCTACCTCTGAGTTATGCCAAAGCAACGTCTCAGGATGAACGAAATGTCCCTTAACAAGATTCTTCTATTGAGTTTAGGAATTGCGGCACGAAGAATGCCAAGAGTTTACCTGGCCAGCCCTGGCTTTAATAGGACTGATACCATGGAATATTTCATCTCACCAAGATGTGACATGGATTATTTTTCCCTTGGACACAAATGTCTACAGCAACTGGTGTTTGATAGGCTGAATGTTTAGAAGAAACACTTCAAAGGGATACATCATGGCCAGGCATGGTGGCTCACACCTGTAATCCAAGCACTTTGGGAGGCCAAGGTGGGAGCATCACTTGATCCTGGGAGTTCGAGACCAGCCTGGGCAACATGGTGAAACCCTGTCGGTACAAAAAAATACAAAAATTTGCCTGTTTATGGTGGTGTGTTCCTGTAGTCCCAGCTCCCCAGGAGGCTGAGGTGGGAGGTTGGCTTTAACCCAGGAGGCAGAGGTTGCAGTGAGCTGAGACTGTGCCACTGCAGTCCAGCCTGGGTGACAGAGCCAGACACTGTCTCGGGGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGACACATCACTATAAATAGCAAAAAAACAAATCTAACTTATTAATACTAGGAATACCAACATTATTAGGGCACTTGCAGGTTATTCTTTTCTAGGCCAAGTACTTCACTTCCATTTGTCTGACATGGAGATTGAGGGAGAAATGTATTTGTGTGTTCATTTTAATGTAAGATATATAAAAATTAAATTACTGGATTTACCTGTCCCTGAAACTGGTGTTATAAACATGACCTATCTTAAGTGATTTTCCCACAATCAAACTCAGGAACAATAGATTATTTCTGTTTTACTCCAAAAGAGAGAGAGAGAGTGAGTGTGAGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTATGTGTGGGTGTTTGTGTAGATAGTTGTAAAACAAAGAAAAAACACAATATTTTACTGTGAGATAATATGTTTTACCAGCAAAGTGTGGCA。

CDS如下:

ATGGAAGAAGATGAGTTCATTGGAGAAAAAACATTCCAACGTTATTGTGCAGAATTCATTAAACATTCACAACAGATAGGTGATAGTTGGGAATGGAGACCATCAAAGGACTGTTCTGATGGCTACATGTGCAAAATACACTTTCAAATTAAGAATGGGTCTGTGATGTCACATCTAGGAGCATCTACCCATGGACAGACATGTCTTCCCATGGAGGAGGCTTTCGAGCTACCCTTGGATGATTGTGAAGTGATTGAAACTGCAGCAGCGTCCGAAGTGATTAAATATGAGTATCATGTCTTATATTCCTGTAGCTACCAAGTGCCTGTACTTTACTTTAGGGCAAGCTTTTTAGATGGGAGACCTTTAACTCTGAAGGACATATGGGAAGGAGTTCATGAGTGCTATAAGATGCGACTGCTACAGGGACCATGGGACACTATTACGCAACAGGAACATCCAATACTTGGGCAACCCTTTTTTGTACTTCATCCCTGCAAGACGAATGAATTCATGACTCCTGTATTAAAGAATTCTCAGAAAATCAATAAGAATGTCAACTATATCACATCATGGCTGAGCATTGTAGGGCCAGTTGTTGGGCTGAATCTACCTCTGAGTTATGCCAAAGCAACGTCTCAGGATGAACGAAATGTCCCTTAA

所述抗结剂是特异性干扰所述hATG10基因表达的siRNA干扰靶点，该siRNA干扰靶点的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。

所述抗结剂是特异性干扰所述hATG10基因表达的siRNA干扰靶点，该siRNA干扰靶点的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。

细胞培养：培养基为DMEM培养基，其中含体积分数为10％的胎牛血清和200U/mL青霉素和链霉素，于37℃、体积分数为5％的CO₂及饱和湿度条件下进行细胞培养。

hATG10的siRNA序列设计、合成：用Ambion、Oiagen、Dharmacon等多种siRNA设计软件，根据GenBank获取hATG10mRNA序列搜索AA序列并记录每个AA3’端相邻的核苷酸，筛选出GC含量在30％-55％之间的siRNA。再根据siRNA基本设计原则进行进一步筛选，并将筛选出的siRNA序列在GenBank的基因组数据库中用BLAST检索共同源性，选用与非同源基因有3个以上的碱基错配的序列，以排除非特异性抑制的可能，在满足以上条件的基础上，最终确定2条hATG10的siRNA序列，见下表1。

表1 siRNA干扰靶点的核苷酸序列

细胞转染，取对数生长期的SGC7901和AGS细胞，质量体积比0.25％的胰酶消化，按0.3×10⁴个细胞/孔接种于96孔细胞培养板中，于37℃孵育4h，换完全培养基。每个实验组设置3个复孔，实验重复3次。

有效hATG10 siRNA-1和hATG10 siRNA-2的筛选：hATG10 siRNA-1和hATG10siRNA-2转染的SGC7901和AGS，48h后收集细胞，提取总RNA。

结果验证，参照图1，图1中是hATG10基因的抗结剂对胃癌的两株细胞学SGC7901和AGS的干扰效果，柱状图的高低代表基因的表达量，图1中的空白样表示对照，纵坐标越低，基因表达越低。该图说明在两株细胞中，ATG10的表达得到了有效干扰。

参照图2和图3，通过现有技术CCK8法检测细胞活性，图2和图3中曲线代表干扰目的基因之后，细胞增殖的能力。曲线越高，代表细胞长得越快，反之越慢。说明，干扰ATG10之后，细胞增殖能力变慢。图2中是干扰目的基因之后SGC7901细胞增殖的能力，图3中是干扰目的基因之后AGS细胞增殖的能力。

通过上述实施例可知，本发明提供的hATG10基因的抗结剂在制备治疗胃癌的药物中的应用，至少实现了如下的有益效果：

本发明提出了hATG10基因的抗结剂在制备治疗胃癌的药物中的应用，采用分子生物学收到首次确证基因hATG10基因与胃癌有显著相关性，筛选了两条siRNA干扰靶点，为进一步的而研究奠定基础。

虽然已经通过例子对本发明的一些特定实施例进行了详细说明，但是本领域的技术人员应该理解，以上例子仅是为了进行说明，而不是为了限制本发明的范围。本领域的技术人员应该理解，可在不脱离本发明的范围和精神的情况下，对以上实施例进行修改。本发明的范围由所附权利要求来限定。

SEQUENCE LISTING

<110> 北京唯创博精生物科技有限公司

<120> hATG10基因的抗结剂在制备治疗胃癌的药物中的应用

<130> 20191227

<160> 5

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1071

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial)

<400> 1

aaatcaataa gaatgtcaac tatatcacat catggctgag cattgtaggg ccagttgttg 60

ggctgaatct acctctgagt tatgccaaag caacgtctca ggatgaacga aatgtccctt 120

aacaagattc ttctattgag tttaggaatt gcggcacgaa gaatgccaag agtttacctg 180

gccagccctg gctttaatag gactgatacc atggaatatt tcatctcacc aagatgtgac 240

atggattatt tttcccttgg acacaaatgt ctacagcaac tggtgtttga taggctgaat 300

gtttagaaga aacacttcaa agggatacat catggccagg catggtggct cacacctgta 360

atccaagcac tttgggaggc caaggtggga gcatcacttg atcctgggag ttcgagacca 420

gcctgggcaa catggtgaaa ccctgtcggt acaaaaaaat acaaaaattt gcctgtttat 480

ggtggtgtgt tcctgtagtc ccagctcccc aggaggctga ggtgggaggt tggctttaac 540

ccaggaggca gaggttgcag tgagctgaga ctgtgccact gcagtccagc ctgggtgaca 600

gagccagaca ctgtctcggg gaaaaaaaaa aaaaaaaaaa gacacatcac tataaatagc 660

aaaaaaacaa atctaactta ttaatactag gaataccaac attattaggg cacttgcagg 720

ttattctttt ctaggccaag tacttcactt ccatttgtct gacatggaga ttgagggaga 780

aatgtatttg tgtgttcatt ttaatgtaag atatataaaa attaaattac tggatttacc 840

tgtccctgaa actggtgtta taaacatgac ctatcttaag tgattttccc acaatcaaac 900

tcaggaacaa tagattattt ctgttttact ccaaaagaga gagagagagt gagtgtgagt 960

gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt atgtgtgggt gtttgtgtag atagttgtaa aacaaagaaa 1020

aaacacaata ttttactgtg agataatatg ttttaccagc aaagtgtggc a 1071

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工合成(Artificial)

<400> 2

gcaacaggaa cauccaauac u 21

<210> 3

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工合成(Artificial)

<400> 3

aguauuggau guuccuguug c 21

<210> 4

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工合成(Artificial)

<400> 4

gcugaaucua ccucugaguu a 21

<210> 5

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工合成(Artificial)

<400> 5

uaacucagag guagauucag c 21

Claims (3)

1.一种hATG10基因的抗结剂在制备治疗胃癌的药物中的应用，其特征在于，所述hATG10基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的hATG10基因的抗结剂在制备治疗胃癌的药物中的应用，其特征在于，所述抗结剂是特异性干扰所述hATG10基因表达的siRNA干扰靶点，该siRNA干扰靶点的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。

3.根据权利要求1所述的hATG10基因的抗结剂在制备治疗胃癌的药物中的应用，其特征在于，所述抗结剂是特异性干扰所述hATG10基因表达的siRNA干扰靶点，该siRNA干扰靶点的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。

Images