CN111315867A - 合成烟酰胺核苷的方法 - Google Patents

Abstract

本文提供了用于由三乙酸核苷合成烟酰胺核苷的有效且可放大的方法。还提供了包含烟酰胺核苷的组合物，以及采用烟酰胺核苷的治疗方法。

Description

合成烟酰胺核苷的方法

相关申请

本申请要求2017年6月30日提交的美国临时专利申请序列号62/527,382的优先权权益，所述申请整体以引用的方式并入本文。

发明背景

烟酰胺核苷(riboside)是烟酸(即，维生素B₃)的吡啶核苷(nucleoside)形式，其作为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD⁺)的前体。NAD⁺促进细胞代谢、线粒体功能和能量产生。目前，烟酰胺核苷是通过合成方法或发酵过程制备的。由于其在用作膳食补充剂时赋予健康益处的显著潜力，因此需要开发高效且可放大的烟酰胺核苷制造方法。

发明简述

在一些方面，本发明提供一种制备化合物3的方法，

其包括以下步骤：

(a)将化合物1与氯化剂合并，从而产生包含化合物2的第一反应混合物，其中：

化合物1由

表示；

化合物2由

表示；并且

所述氯化剂是气态HCl或HCl的二噁烷溶液；以及

(b)将化合物2与烟酰胺合并，从而产生包含化合物3的第二反应混合物。

在其他方面，本发明提供一种制备化合物4的方法，

其包括以下步骤：

(c)将化合物3与氨试剂合并，从而产生包含化合物4的第一反应混合物，其中：

化合物3由

表示；并且

所述氨试剂是甲醇氨或二乙胺。

在其他实施方案中，本发明提供一种根据本文所述的方法制备的具有化合物4的结构的化合物。

在某些方面，本发明提供一种改善受试者的细胞健康状况的方法，其包括向所述受试者施用根据本文所述的方法制备的具有化合物4的结构的化合物。

在某些方面，本发明提供一种在受试者中改善睡眠质量、刺激或增加REM睡眠、或治疗或预防失眠、去同步症或昼夜节律睡眠障碍的方法，其包括向所述受试者施用根据本文所述的方法制备的具有化合物4的结构的化合物。

在某些方面，本发明提供一种在受试者中治疗或预防运动神经元疾病或ALS、或减缓或逆转运动神经元变性的进展的方法，其包括向所述受试者施用根据本文所述的方法制备的具有化合物4的结构的化合物。

在某些方面，本发明提供一种改善生育力、治疗或预防不育症、诱导排卵、增加精子计数或增加泌乳的方法，其包括向受试者施用根据本文所述的方法制备的具有化合物4的结构的化合物。

在某些方面，本发明提供一种治疗或预防肾损害、急性肾损伤或肾病，或增加肾血流量的方法，其包括向受试者施用根据本文所述的方法制备的具有化合物4的结构的化合物。

在某些方面，本发明提供一种在受试者中治疗或预防肝损害或脂肪肝、或降低丙氨酸转氨酶(ALT)或天冬氨酸转氨酶(AST)的血清水平的方法，其包括向所述受试者施用根据本文所述的方法制备的具有化合物4的结构的化合物。

发明详述

I.定义

术语“酰基”是本领域公认的，并且是指由通式烃基-C(O)-，优选烷基-C(O)-表示的基团。

术语“乙酰基”是指具有式H₃C-C(O)-的具体酰基。乙酰基可缩写为“Ac-”。

“烷基”或“烷烃”是完全饱和的直链或支链非芳族烃。通常，除非另有定义，否则直链或支链烷基具有1至约20，优选1至约10，或1至6个碳原子。直链和支链烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、戊基和辛基。C₁-C₆直链或支链烷基也称为“低碳烷基”。

术语“C_x-y”在与化学部分如烷基结合使用时，意指包括在链中含有x至y个碳的基团。例如，术语“C_x-y烷基”是指取代或未取代的饱和烃基，包括链中含有x至y个碳的直链烷基和支链烷基，包括卤代烷基，诸如三氟甲基和2,2,2-三氟乙基等。C₀烷基表示氢，其中所述基团在末端位置，如果在内部则为键。术语“C_2-y烯基”和“C_2-y炔基”是指取代或未取代的不饱和脂族基团，其长度和可能的取代类似于上述烷基，但分别含有至少一个双键或三键。

“三烷基胺”意指具有结构N(R¹)(R²)(R³)的化合物，其中R¹、R²和R³各自为烷基，并且可以相同或不同。示例性三烷基胺化合物包括三甲胺、三甲胺、三异丙胺、三丁胺和异丙基二甲胺。

如本文所用，术语“氯化剂”意指提供氯阴离子(即，Cl^-)的来源的试剂。示例性氯化剂包括HCl源，诸如HCl气体或在溶剂如乙醇或二噁烷中的HCl。例如，本发明方法中使用的氯化剂优选是HCl的二噁烷溶液。优选用于本发明方法的一些实施方案中的供选氯化剂是气态HCl(即，HCl(气体))。

烟酰胺是具有以下结构的分子：

如本文所用，术语“氨试剂”意指提供氨(即，NH₃)、或烷基胺(诸如甲胺)、或二烷基胺(诸如二乙胺)、或亚烷基二胺(诸如乙二胺)的来源的试剂。氨可以以气体(即，NH₃(g))或有机溶剂如甲醇、乙醇、异丙醇、二噁烷或四氢呋喃(THF)的溶液形式提供。在一些实施方案中，术语“氨试剂”还包括以水溶液形式提供的氨。

在描述过滤过程时，穿过过滤器的液体材料在本文中称为“滤液”。收集(即，从滤液中过滤)的固体材料在本文中称为“保留物”。

如本文所用，术语“施用”意指向受试者提供药剂或组合物，并且包括但不限于由医学专业人员施用和自我施用。可以使用本领域技术人员已知的多种方法之一进行物质、化合物或试剂向受试者的施用。例如，化合物或试剂可以静脉内、动脉内、皮内、肌内、腹膜内、皮下、眼部、舌下、口服(通过摄取)、鼻内(通过吸入)、脊柱内、大脑内和经皮(通过吸收，例如通过皮肤导管)施用。化合物或试剂也可以通过可再填装的或可生物降解的聚合物装置或其他装置如贴片和泵，或制剂适当地引入，其提供化合物或试剂的延长、缓慢或受控释放。施用也可以例如一次、多次和/或在一个或多个延长的时间段内进行。

向受试者施用物质、化合物或试剂的适当方法还将取决于例如受试者的年龄和/或身体状况以及化合物或试剂的化学和生物学性质(例如，溶解度、可消化性、生物利用度、稳定性和毒性)。在一些实施方案中，化合物或试剂通过口服施用，例如通过摄入施用到受试者。在一些实施方案中，口服施用的化合物或试剂是以延迟或缓慢释放制剂形式，或使用用于这种缓慢或延迟释放的装置施用。

如本文所用的短语“药学上可接受的载体”意指药学上可接受的材料、组合物或媒介物，诸如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂或溶剂囊封材料。

如本文所用，术语“受试者”意指选择用于治疗或疗法的人或非人动物。

如本文所用的短语“治疗有效量”和“有效量”意指以适用于任何医学治疗的合理效益/风险比在受试者的至少细胞亚群中有效产生期望的治疗效果的试剂的量。

“治疗”受试者的疾病或“治疗”患有疾病的受试者是指对受试者进行药物治疗，例如施用药物，使得疾病的至少一种症状减轻或防止恶化。

如本文所用，“预防”病症或病况的治疗剂是指当在病症或病况发作之前向统计样品施用时，相对于未治疗的对照样品减少经治疗的样品中病症或病况的发生，或相对于未治疗的对照样品延迟病症或病况的一种或多种症状的发作或降低其严重性的化合物。

II.本发明的方法。

本发明基于烟酰胺核苷的有效、可放大合成的发现。

在某些方面，本发明提供一种制备化合物3的方法，

其包括以下步骤：

(a)将化合物1与氯化剂合并，从而产生包含化合物2的第一反应混合物，其中：

化合物1由

表示；

化合物2由

表示；并且

所述氯化剂是气态HCl或HCl的二噁烷溶液；以及

(b)将化合物2与烟酰胺合并，从而产生包含化合物3的第二反应混合物。

在某些实施方案中，氯化剂是气态HCl(即，HCl(g))。或者，在一些实施方案中，氯化剂是HCl的二噁烷溶液。

在某些实施方案中，步骤(a)在第一溶剂中发生。在化合物1与氯化剂合并之前，第一溶剂可以与化合物1合并(即，可以产生化合物1在第一溶剂中的溶液)。或者，第一溶剂、化合物1和氯化剂可以同时合并在一起。在另一替代案中，可以首先将第一溶剂与氯化剂合并，随后将所述混合物与化合物1合并。

在一些实施方案中，第一溶剂是氯化剂的组分。例如，在某些实施方案中，氯化剂是HCl的二噁烷溶液。在某些这样的实施方案中，二噁烷是第一溶剂。

在某些实施方案中，氯化剂是HCl的二噁烷溶液，并且第一溶剂是二噁烷。在供选的实施方案中，氯化剂是HCl的二噁烷溶液，并且第一溶剂是二氯甲烷(DCM)。

或者，在其中氯化剂是气态HCl的方法中，第一溶剂可以是乙腈。

在某些实施方案中，步骤(a)还包括乙酰氯(AcCl)。

步骤(a)可以通过本领域普通技术人员采用的任何反应监测机制来监测，所述检测机制包括薄层色谱法、核磁共振光谱法、质谱法和高效液相色谱法。

在完成步骤(a)后，可以浓缩反应混合物以除去或减少反应混合物中存在的HCl和过量溶剂的量。在一些实施方案中，这样的浓缩步骤提供包含化合物2的浓缩的粗材料。

因此，在某些实施方案中，所述方法还包括步骤(a’)：

(a')在降低的大气压下浓缩所述第一反应混合物；其中步骤(a')在步骤(a)之后且在步骤(b)之前进行。

在完成步骤(a)和(a')后，提供包含化合物2的浓缩的粗材料。

在某些实施方案中，本发明的方法还包括将化合物2与第二溶剂合并。例如，可将步骤(a)和(a')中产生的包含化合物2的浓缩的粗材料与第二溶剂合并。

在某些实施方案中，第二溶剂是乙腈。

在某些实施方案中，步骤(b)在第二溶剂中发生。第二溶剂可以是极性非质子溶剂。例如，第二溶剂可以是乙腈。

在某些实施方案中，所述方法还包括步骤(b')：

(b')将第二反应混合物与三烷基胺合并；其中步骤(b')在步骤(b)之后发生。

在某些这样的实施方案中，所述三烷基胺是三丁胺。

在某些实施方案中，在步骤(b')之后，过滤所得的包含化合物3的反应混合物，并洗涤固体(即，保留物)。所述保留物包含化合物3。可以用冷溶剂如冷乙腈或冷甲醇洗涤保留物。

在某些实施方案中，所述方法还包括步骤(c)：

(c)将化合物3与氨试剂合并，从而产生包含化合物4的第三反应混合物，其中：

化合物4由

表示；并且

所述氨试剂是甲醇氨或二乙胺。

在某些实施方案中，氨试剂是二乙胺。

在某些实施方案中，氨试剂是甲醇氨。

在某些实施方案中，所述甲醇氨是1M、2M、3M、4M、5M、6M、7M、8M、9M或10M甲醇氨。优选，所述甲醇氨是7M甲醇氨。

在某些实施方案中，步骤(c)在第三溶剂中发生。所述第三溶剂可以是极性质子溶剂，诸如醇。第三溶剂可以是例如甲醇、乙醇、异丙醇或丁醇。在某些优选的实施方案中，第三溶剂是甲醇。

在某些实施方案中，步骤(c)在低于室温的温度下进行。

在其中氨试剂是二乙胺的其他实施方案中，本发明的方法还包括步骤(c')，其在步骤(c)之后发生：

(c')将冷HCl水溶液添加到第三反应混合物中，从而产生包含化合物4的第四混合物。

在其中氨试剂是甲醇氨的其他实施方案中，本发明的方法还包括步骤(c')，其在步骤(c)之后发生：

(c')在降低的大气压下浓缩所述第三反应混合物，从而产生包含化合物4的第四混合物。

在某些实施方案中，本发明的方法还包括步骤(c”)，其在步骤(c')之后发生：

(c”)过滤所述第四混合物。

在某些这样的实施方案中，所述方法还包括用冷甲醇或乙醇冲洗所得保留物(即，过滤后留下的固体)。

在其他某些这样的实施方案中，所述方法还包括用冷丙酮冲洗所得保留物(即，过滤后留下的固体)。

在又其他某些这样的实施方案中，所述方法还包括用冷甲基叔丁基醚(MTBE)冲洗所得保留物(即，过滤后留下的固体)。

在某些实施方案中，氨试剂与化合物3之间的反应可以通过本领域普通技术人员采用的任何反应监测机制来监测。在所述反应完成或明显进行时(即，在形成化合物4时)，可以蒸馏反应混合物，例如以除去氨试剂和第三溶剂。在某些这样的实施方案中，化合物4保留在蒸馏罐中。在其他这样的实施方案中，然后可以过滤并洗涤蒸馏的剩余内容物。在某些实施方案中，洗涤液是冷丙酮和/或冷甲醇。

在其他实施方案中，本发明提供一种制备化合物4的方法，

其包括以下步骤：

(c)将化合物3与氨试剂合并，从而产生包含化合物4的第一反应混合物，其中：

化合物3由

表示；并且

所述氨试剂是甲醇氨或二乙胺。

在某些实施方案中，氨试剂是二乙胺。

在某些实施方案中，氨试剂是甲醇氨。

在某些实施方案中，所述甲醇氨是1M、2M、3M、4M、5M、6M、7M、8M、9M或10M甲醇氨。优选，所述甲醇氨是7M甲醇氨。

在某些实施方案中，步骤(c)在第三溶剂中发生。所述第三溶剂可以是极性质子溶剂，诸如醇。第三溶剂可以是例如甲醇、乙醇、异丙醇或丁醇。在某些优选的实施方案中，第三溶剂是甲醇。

在某些实施方案中，步骤(c)在低于室温的温度下进行。

在其中氨试剂是二乙胺的其他实施方案中，本发明的方法还包括步骤(c')，其在步骤(c)之后发生：

(c')将冷HCl水溶液添加到第三反应混合物中，从而产生包含化合物4的第四混合物。

在其中氨试剂是甲醇氨的其他实施方案中，本发明的方法还包括步骤(c')，其在步骤(c)之后发生：

(c')在降低的大气压下浓缩所述第三反应混合物，从而产生包含化合物4的第四混合物。

在某些实施方案中，本发明的方法还包括步骤(c”)，其在步骤(c')之后发生：

(c”)过滤所述第四混合物。

在某些这样的实施方案中，所述方法还包括用冷甲醇或乙醇冲洗所得保留物(即，过滤后留下的固体)。

在其他某些这样的实施方案中，所述方法还包括用冷丙酮冲洗所得保留物(即，过滤后留下的固体)。

在又其他某些这样的实施方案中，所述方法还包括用冷甲基叔丁基醚(MTBE)冲洗所得保留物(即，过滤后留下的固体)。

在某些实施方案中，所述方法还包括：

(a)将化合物1与氯化剂合并，从而产生包含化合物2的第一反应混合物，其中：

化合物1由

表示；

化合物2由

表示；并且

所述氯化剂是气态HCl或HCl的二噁烷溶液；以及

(b)将化合物2与烟酰胺合并，从而产生包含化合物3的第二反应混合物。

在某些实施方案中，氯化剂是气态HCl(即，HCl(g))。或者，在一些实施方案中，氯化剂是HCl的二噁烷溶液。

在某些实施方案中，步骤(a)在第一溶剂中发生。在化合物1与氯化剂合并之前，可以将第一溶剂与化合物1合并(即，可以产生化合物1在第一溶剂中的溶液)。或者，第一溶剂、化合物1和氯化剂可以同时合并在一起。在另一替代案中，可以首先将第一溶剂与氯化剂合并，随后将所述混合物与化合物1合并。

在一些实施方案中，第一溶剂是氯化剂的组分。例如，在某些实施方案中，氯化剂是HCl的二噁烷溶液。在某些这样的实施方案中，二噁烷是第一溶剂。

在某些实施方案中，氯化剂是HCl的二噁烷溶液，并且第一溶剂是二噁烷。在供选的实施方案中，氯化剂是HCl的二噁烷溶液，并且第一溶剂是二氯甲烷(DCM)。

或者，在其中氯化剂是气态HCl的方法中，第一溶剂可以是乙腈。

在某些实施方案中，步骤(a)还包括乙酰氯(AcCl)。

步骤(a)可以通过本领域普通技术人员采用的任何反应监测机制来监测，所述检测机制包括薄层色谱法、核磁共振光谱法、质谱法和高压液相色谱法。

在完成步骤(a)后，可以浓缩反应混合物以除去或减少反应混合物中存在的HCl和过量溶剂的量。在一些实施方案中，这样的浓缩步骤提供包含化合物2的浓缩的粗材料。

因此，在某些实施方案中，所述方法还包括步骤(a')：

(a')在降低的大气压下浓缩所述第一反应混合物；其中步骤(a')在步骤(a)之后且在步骤(b)之前进行。

在完成步骤(a)和(a')后，提供包含化合物2的浓缩的粗材料。

在某些实施方案中，本发明的方法还包括将化合物2与第二溶剂合并。例如，可将步骤(a)和(a')中产生的包含化合物2的浓缩的粗材料与第二溶剂合并。

在某些实施方案中，第二溶剂是乙腈。

在某些实施方案中，步骤(b)在第二溶剂中发生。第二溶剂可以是极性非质子溶剂。例如，第二溶剂可以是乙腈。

在某些实施方案中，所述方法还包括步骤(b')：

(b')将第二反应混合物与三烷基胺合并；其中步骤(b')在步骤(b)之后发生。

在某些这样的实施方案中，所述三烷基胺是三丁胺。

在某些实施方案中，在步骤(b')之后，过滤所得的包含化合物3的反应混合物，并洗涤固体(即，保留物)。所述保留物包含化合物3。可以用冷溶剂如冷乙腈或冷甲醇洗涤保留物。

如本文所用的“极性质子溶剂”是偶极矩为约1.4至4.0D且包含参与氢键结合的化学部分如O-H键或N-H键的溶剂。示例性极性质子溶剂包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、氨、水和乙酸。

如本文所用的“极性非质子溶剂”意指缺乏氢键基团如O-H或N-H的偶极矩为约1.4至4.0D的溶剂。示例性极性非质子溶剂包括丙酮、N,N-二甲基甲酰胺、乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃和二甲亚砜。

如本文所用的“非极性溶剂”意指具有低介电常数(＜5)和约0.0至约1.2的低偶极矩的溶剂。示例性非极性溶剂包括戊烷、己烷、环己烷、苯、甲苯、氯仿和乙醚。

出于本发明的目的，化学元素根据元素周期表，CAS版，Handbook of Chemistryand Physics，第67版，1986-87，内封面鉴定。

醇的实例包括但不限于甲醇、乙醇、2-丁氧基乙醇、丙醇、烯丙醇、甲代烯丙醇、异戊烯醇、异丙醇、2,2-二甲基丙-1-醇、2-甲基-2-苯基丙-1-醇、丁醇、异丁醇、仲丁醇、叔丁醇、2-丁烯-1-醇、戊醇、2-环戊烯-1-醇、4-环戊烯-1-醇、环戊醇、3-环戊烯-1-醇、己醇、环己醇、3-环己烯-1-醇、苯酚、1-萘酚、2-萘酚、苄醇、薄荷醇、1,2-乙二醇、9-芴基甲醇、间苯二酚、间甲酚、肉桂醇和香叶醇。

III.本发明的组合物。

在某些实施方案中，本发明提供化合物4，其根据本文所述的任何制备方法制备。

在某些实施方案中，化合物4由化合物1以约30％、约32％、约34％、约36％、约38％、约40％、约42％、约44％、约46％、约48％、约50％或更高的产率产生。

在某些实施方案中，所述化合物的纯度为95％、96％、97％、98％、99％、99.2％、99.4％、99.6％、99.8％或更高。

如下文详细描述，本文所述的药物组合物可以特别地配制用于以固体或液体形式施用，包括适于以下的那些施用：(1)口服施用，例如，灌服(水性或非水性溶液或悬浮液)，片剂，例如，靶向口腔、舌下和全身吸收的那些，大丸剂，粉剂，颗粒剂，用于施用到舌的糊剂；(2)肠胃外施用，例如通过皮下、肌内、静脉内或硬膜外注射例如作为无菌溶液或悬浮液或缓释制剂施用；或(3)舌下施用。

在一些实施方案中，所述组合物包含另外的试剂。例如，组合物可以包含营养剂，诸如抗氧化剂。药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：(1)水溶性抗氧化剂，诸如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，诸如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；和(3)金属螯合剂，诸如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。

本文所述化合物的制剂可以单位剂型存在，并且可以通过药学领域公知的任何方法制备。可与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将根据被治疗的主体和特定施用方式而变化。可与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量通常是产生治疗效果的试剂的量。

在某些实施方案中，本文所述的制剂包含赋形剂，所述赋形剂包括但不限于环糊精、脂质体、胶束形成剂如胆汁酸和聚合物载体如聚酯和聚酐；和本发明的试剂。在一些实施方案中，上述制剂使得本发明的试剂可以口服生物利用。制备这些制剂或组合物的方法可以包括将本发明的化合物与载体和任选的一种或多种辅助成分结合的步骤。

用于口服施用本文提供的制剂的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了活性成分，所述液体剂型可以含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂，增溶剂和乳化剂，诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，及其混合物。

除了惰性稀释剂，口服组合物还可以包含助剂，诸如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。

除了活性化合物之外，悬浮液可以含有悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶及其混合物。

本文提供的适于口服施用的制剂可以胶囊、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂(使用调味基质，通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)、粉剂、颗粒剂形式，或作为在水性或非水性液体中的溶液或悬浮液，或作为水包油或油包水液体乳剂，或作为酏剂或糖浆剂，或作为软锭剂(使用惰性基质，诸如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)和/或作为漱口剂等，各自含有预定量的本发明化合物作为活性成分。本发明的化合物也可以作为大丸剂、药糖剂或糊剂施用。

在本发明的用于口服施用的固体剂型(例如，胶囊、片剂、丸剂、糖衣丸、粉末、颗粒剂等)中，将活性成分与一种或多种药学上可接受的载体混合，所述载体例如是柠檬酸钠或磷酸二钙，和/或以下中的任一种：(1)填充剂或增量剂，诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；(2)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)湿润剂，诸如甘油；(4)崩解剂，诸如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；(5)溶液阻滞剂，诸如石蜡；(6)吸收促进剂，诸如季铵化合物；(7)润湿剂，例如鲸蜡醇、单硬脂酸甘油酯和非离子表面活性剂；(8)吸收剂，诸如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，诸如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物；和(10)着色剂。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，药物组合物还可以包含缓冲剂。类似类型的固体组合物也可在使用赋形剂如乳糖(lactose)或乳糖(milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等的情况下用作软壳和硬壳明胶胶囊中的填充剂。

片剂可以任选地在用一种或多种辅助成分的情况下通过压制或模塑制备。压缩片剂可以使用粘合剂(例如，明胶或羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如，淀粉羟乙酸钠或交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂制备。模塑片可以通过在合适的机器中模塑用惰性液体稀释剂润湿的粉状化合物的混合物来制备。

本文所述的药物组合物的片剂和其他固体剂型，诸如糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂，可以任选地被刻痕或用包衣和壳如肠溶衣和药物配制领域中公知的其他包衣制备。它们也可以使用例如提供所需释放曲线的不同比例的羟丙基甲基纤维素、其他聚合物基质、脂质体和/或微球配制成提供其中活性成分的缓慢或受控释放。本文所述的组合物还可以配制成用于快速释放，例如冷冻干燥。它们可以通过例如经细菌截留过滤器过滤或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，所述灭菌剂可以在使用前立即溶解于无菌水或一些其他无菌可注射介质中。这些组合物也可以任选地含有遮光剂，并且可以是它们仅或优选地在胃肠道的某一部分中任选地以延迟方式释放活性成分的组合物。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。如果合适，活性成分也可以与一种或多种上述赋形剂一起是微囊封形式。

本文提供的适于肠胃外施用的药物组合物包含一种或多种本发明化合物以及一种或多种药学上可接受的无菌等渗水性或非水性溶液、分散体、悬浮液或乳液，或可在临用前重构成无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末，其可包含糖、醇、抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质或悬浮剂或增稠剂。

可用于本发明药物组合物的合适的水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(诸如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物，植物油如橄榄油和可注射的有机酯如油酸乙酯。例如，通过使用包衣材料如卵磷脂，通过在分散体的情况下保持所需的粒径以及通过使用表面活性剂，可以保持适当的流动性。

III.治疗方法。

在某些实施方案中，本发明提供一种改善受试者的细胞健康状况的方法，其包括向所述受试者施用通过本文公开的合成方法制备的化合物。

在其他实施方案中，本发明提供了方法，其用于在受试者中：

改善睡眠质量；

刺激或增加REM睡眠；

治疗或预防失眠；

治疗或预防去同步症；或

治疗或预防昼夜节律睡眠障碍，所述方法包括向所述受试者施用通过本文公开的合成方法制备的化合物4。

在某些实施方案中，这样的治疗方法还包括施用紫檀芪。

在一些实施方案中，所述方法治疗或预防昼夜节律睡眠障碍。昼夜节律睡眠障碍可以是外在的(例如，轮班工作睡眠障碍、去同步症)或内在的(例如，睡眠时相提前障碍(ASPD)、睡眠时相延迟障碍(DSPD)、不规则睡眠-觉醒节律和/或非24小时睡眠-觉醒障碍(即，超24小时综合征))。

受试者可以是雄性或雌性。在一些实施方案中，受试者是成人(即，18岁或更大)。受试者可以是儿科受试者(即，小于18岁)。在一些实施方案中，受试者是哺乳动物，优选是人。

在某些方面，本文提供的方法和组合物涉及通过向受试者施用(例如，口服施用到受试者)包含烟酰胺核苷(化合物4)和/或紫檀芪的组合物来改善受试者的睡眠健康状况和睡眠质量。睡眠质量可以指睡眠的“宁静”(即，个体在清醒期间感觉到宁静的程度)。睡眠质量可以指睡眠量。良好的睡眠质量与广泛的积极结果如较好的健康状况、较少的日间嗜睡、较多的幸福感和较好的心理功能相关。在一些实施方案中，受试者在匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)方面的评分为1、2或3。关于PSQI的其他细节可以在Buysse,D.J.、eynolds,C.F.、Monk,T.H.、Berman,S.R.和Kupfer,D.J.(1989).匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)：A newinstrument for psychiatric research and practice.Psychiatry Research，28(2)，193-213中见到，其整体通过引用并入本文中。在一些实施方案中，受试者难以入睡。在一些实施方案中，受试者睡不安稳。在一些实施方案中，受试者早晨在将破坏正常睡眠周期或以其他方式影响睡眠质量的时间醒来。

在一些方面，本文提供了刺激有需要的REM睡眠的方法，其包括向受试者施用包含烟酰胺核苷(化合物4)和/或紫檀芪的组合物。快速动眼睡眠(REM睡眠)是独特的睡眠时相，其特征在于快速动眼、全身低肌张力以及睡眠者生动地回忆梦境的倾向。在一些实施方案中，本文公开的组合物和方法增加了受试者在每个睡眠期处于REM睡眠的总时间量(例如，以每晚REM计的总时间量)。在一些实施方案中，本文公开的组合物和方法增加了受试者在每个睡眠周期处于REM睡眠的时间量。睡眠在整个夜晚是以一系列四或五个非REM睡眠和REM睡眠的差不多常规的睡眠周期进行。第一睡眠周期的长度通常为约90分钟，随后的周期平均约100-120分钟，尽管一些个体可能具有或长或短的平均周期。每个周期都遵循非REM睡眠阶段(阶段1-阶段2-阶段3)，然后在深度阶段3慢波睡眠的一段时间之后，返回这些阶段(阶段3-阶段2-阶段1)。然后，睡眠者可以在回到新周期的非REM阶段之前进入短REM睡眠期，而不是醒来。随着夜间的发展，在深睡眠阶段3中度过的时间减少，而在REM睡眠中度过的时间增加，因此在夜间的较早时间阶段3睡眠的比例更大，而在夜间较晚时间REM睡眠的比例更大，特别是在最后两个睡眠周期期间。如本文所用，刺激REM或增加REM可以指增加受试者在每个睡眠周期内保持REM睡眠的时间或受试者每天睡眠的总时间量。

在某些方面，本文提供的方法和组合物涉及通过向受试者施用(例如，口服施用到受试者)包含烟酰胺核苷(化合物4)和/或紫檀芪的组合物来治疗和/或预防受试者的睡眠障碍。

在一些实施方案中，所述受试者患有失眠。失眠是一种以不能睡眠为特征的睡眠障碍。例如，患有失眠的受试者可能难以入睡、睡不安稳或过早醒来并且不能回到睡眠之中。如本文所用，失眠可以指短期(急性)失眠(即，不能睡眠持续数天至数周)或长期(慢性)失眠(即，不能睡眠一个月或更久)。在一些实施方案中，失眠是短暂性失眠。失眠可能是压力、创伤事件、鼻/窦过敏、胃肠问题、脑损伤和肿瘤、中风、慢性疼痛、慢性疲劳综合征、充血性心力衰竭、心绞痛、酸反流病(GERD)、慢性阻塞性肺病、哮喘、内分泌紊乱如甲状腺机能亢进、关节炎、神经病况如帕金森氏病或阿尔茨海默氏病、下背痛或遗传的结果。在一些实施方案中，受试者具有不宁腿综合征。在一些实施方案中，受试者患有睡眠呼吸暂停。在一些实施方案中，受试者具有干扰睡眠的心理状况，诸如焦虑、抑郁、双相型障碍、精神分裂症、创伤后应激障碍(PTSD)和/或注意缺陷多动障碍(ADHD)。在一些实施方案中，失眠是药物的副作用。可能引起失眠的药物的实例包括但不限于皮质类固醇、α阻断剂、β阻断剂、SSRI抗抑郁药、ACE抑制剂、胆碱酯酶抑制剂、第二代(非镇静性)H1激动剂或葡糖胺/软骨素。

本文提供了可用于调节受试者的昼夜节律的方法和组合物。昼夜节律调节全天的睡眠期和觉醒期的时机。昼夜节律是内源性产生的，尽管它们可以由外部提示如日光和温度调节。昼夜节律在确定包括人类在内的所有动物的睡眠和进食模式方面是重要的。存在与该每日周期相关的脑波活动、激素产生、细胞再生和其他生物活动的清晰模式，并且不规则的昼夜节律可能导致任何先前提到的过程的紊乱。在一些实施方案中，受试者患有昼夜节律睡眠障碍。昼夜节律睡眠障碍可以是外在的(例如，环境影响或环境的结果)或内在的(例如，遗传的结果或不是环境的结果)。外在昼夜节律睡眠障碍的实例包括轮班工作睡眠障碍，其经常影响夜间或轮班工作的个体。内在睡眠障碍包括睡眠时相提前障碍(ASPD)、睡眠时相延迟期障碍(DSPD)、不规则睡眠-觉醒节律和/或非24小时睡眠-觉醒障碍(即，超24小时综合征))。ASPD的特征在于在晚上难以保持清醒，而在早晨难以安稳睡眠。DSPD的特征在于睡眠开始和偏移的时间比正常晚得多，并且在半夜具有警醒高峰期。具有不规则睡眠-觉醒节律的个体在非常不规则的时间睡眠，并且通常每天超过两次(夜间频繁地醒来，而白天打盹)，但是通常每天会睡对于人的年龄典型的正常总时间。非24小时睡眠-觉醒障碍或超24小时综合征是一种睡眠障碍，其中受影响个体的睡眠每天越来越晚地发生，警醒高峰期也一天天昼夜不停地变化。

在一些方面，本文提供的组合物和方法可用于治疗去同步症(即，时差症)。时差症是由穿越时区(例如，在飞机飞行期间)引起的暂时性睡眠障碍，并且通常是身体的昼夜节律紊乱的结果。时差症可以在身体的内部时钟与来自新时区的提示不同步的任何时间发生。提示可以包括曝光和进食时间。一般症状包括疲劳和定向障碍、睡眠中断、精神错乱、情绪变化和四肢疼痛。

可以改变本文公开的组合物的实际剂量水平和施用方案，以便获得有效实现特定患者、组合物和施用模式的期望治疗反应而对患者无毒的烟酰胺核苷和/或紫檀芪的量。在一些实施方案中，受试者连续地自我施用本文公开的化合物。在其他实施方案中，受试者可根据需要施用本文公开的化合物。

在一些实施方案中，组合物的施用包括以一个或多个剂量施用组合物。在一些实施方案中，组合物的施用包括以一个或多个、五个或更多个、十个或更多个、二十个或更多个、三十个或更多个、四十个或更多个、五十个或更多个、一百个或更多个或一千个或更多个剂量施用组合物。在一些实施方案中，剂量包含至少25mg、至少50mg、至少75mg、至少100mg、至少125mg、至少150mg、至少200mg、至少225mg、至少250mg、至少275mg、至少300mg、至少325mg、至少350mg、至少375mg、至少400mg、至少425mg、至少450mg、至少475mg、至少500mg、至少550mg、至少600mg、至少650mg、至少700mg、至少750mg、至少800mg或至少850mg烟酰胺核苷(化合物4)。在一些实施方案中，剂量包含至少5mg、至少10mg、至少15mg、至少20mg、至少25mg、至少30mg、至少35mg、至少40mg、至少45mg、至少50mg、至少55mg、至少60mg、至少65mg、至少70mg、至少75mg、至少80mg、至少90mg、至少95mg、至少100mg、至少110mg、至少120mg、至少130mg、至少140mg、至少150mg、至少160mg、至少170mg、至少180mg、至少190mg、至少200mg或至少250mg的紫檀芪。

本文公开的组合物可以在有效实现对特定患者、组合物和施用模式的所需治疗反应，而对患者无毒的任何时间段内施用。所述时间段可以是至少1天、至少10天、至少20天、至少30天、至少60天、至少3个月、至少6个月、至少1年、至少3年、至少5年或至少10年。剂量可以在需要时、偶尔地或以规律的间隔施用。例如，剂量可以每月、每周、每周两次、每周三次、每天一次或每天两次施用。

在其他实施方案中，本发明提供以下方法：

在受试者中治疗或预防运动神经元疾病；

治疗或预防ALS；或

减缓或逆转运动神经元变性的进展，所述方法包括向所述受试者施用通过本文公开的合成方法制备的化合物4。

在某些实施方案中，这样的治疗方法还包括施用紫檀芪。

在某些实施方案中，所述运动神经元疾病是ALS、遗传性痉挛性截瘫(HSP)、原发性侧索硬化(PLS)、进行性肌萎缩(PMA)、进行性延髓麻痹(PBP)、假性延髓麻痹或脊髓性肌萎缩。

在一些实施方案中，所述受试者可能患有或易患运动神经元疾病(例如，肌萎缩性侧索硬化(ALS)，诸如髓质ALS或脑干ALS)。运动神经元疾病或病症可以是影响运动神经元的功能或结构的任何疾病或病症。如本文所用，运动神经元疾病包括导致脑和脊髓中的运动神经元或神经的功能丧失的进行性疾病。运动神经元疾病的实例包括肌萎缩性侧索硬化(ALS)、遗传性痉挛性截瘫(HSP)、原发性侧索硬化(PLS)、进行性肌萎缩(PMA)、进行性延髓麻痹(PBP)、假性延髓麻痹或脊髓性肌萎缩。运动神经元疾病可影响上运动神经元或下运动神经元。

可以改变本文公开的组合物的实际剂量水平和施用方案，以便获得有效实现特定患者、组合物和施用模式的期望治疗反应而对患者无毒的烟酰胺核苷(化合物4)和/或紫檀芪的量。

在一些实施方案中，组合物的施用包括以一个或多个剂量施用组合物。在一些实施方案中，组合物的施用包括以一个或多个、五个或更多个、十个或更多个、二十个或更多个、三十个或更多个、四十个或更多个、五十个或更多个、一百个或更多个或一千个或更多个剂量施用组合物。在一些实施方案中，剂量包含至少100mg、至少200mg、至少300mg、至少400mg、至少500mg、至少600mg、至少700mg、至少800mg、至少900mg、至少1000mg、至少1100mg、至少1200mg、至少1300mg、至少1400mg、至少1500mg、至少1600mg、至少1700mg、至少1800mg、至少1900mg、至少2000mg、至少2100mg、至少2200mg、至少2300mg、至少2400mg、至少2500mg、至少2600mg、至少2700mg、至少2800mg、至少2900mg或至少3000mg的烟酰胺核苷(化合物4)。在一些实施方案中，剂量包含至少5mg、至少10、至少20mg、至少30mg、至少40mg、至少50mg、至少60mg、至少80mg、至少100mg、至少120mg、至少140mg、至少160mg、至少180mg、至少200mg、至少220mg、至少240mg、至少260mg、至少280mg、至少300mg、至少320mg、至少340mg、至少360mg、至少380mg、至少400mg、至少500mg、至少600mg、至少700mg、至少800mg、至少900mg或至少1000mg的紫檀芪。

本文公开的组合物可以在有效实现对特定患者、组合物和施用模式的所需治疗反应，而对患者无毒的任何时间段内施用。所述时间段可以是至少1天、至少10天、至少20天、至少30天、至少60天、至少3个月、至少6个月、至少1年、至少3年、至少5年或至少10年。剂量可以在需要时、偶尔地或以规律的间隔施用。例如，剂量可以每月、每周、每周两次、每周三次、每天一次或每天两次施用。

在一些实施方案中，对受试者进行测试以测量运动神经元疾病的一般进展或症状进展。在一些实施方案中，对受试者进行运动功能测试和/或认知和行为功能测试。所述运动功能测试可以是修订的肌萎缩性侧索硬化功能评定量表(ALSFRS-R)。所述认知和行为测试可以是康普顿斯言语学习测试(TAVEC)、符号数字形式测试(SDMT)、言语流畅性测试、数字广度(韦氏记忆量表III)、D2注意力测试、韦氏字母和数字记忆量表III、伦敦塔测试、斯特鲁测试、额叶系统行为量表(FrSBe)和/或简易测试(主观行为)。在一些实施方案中，对受试者进行运动功能和认知功能测试。可以对受试者进行一次或多次的运动功能或认知功能测试。

在一些实施方案中，所述方法还包括测量受试者的特征(例如，与炎症相关的特征)。在一些实施方案中，在血液测试中测量所述特征。可以测试的特征的实例是细胞因子的水平、淀粉样蛋白A蛋白的水平、巨噬细胞活化标志物新喋呤的水平、肌酸磷酸激酶(CPK)的水平、红细胞沉降速率的水平、C-反应蛋白的水平、血浆粘度和/或白细胞计数。在一些实施方案中，所述细胞因子是促炎性细胞因子。在一些实施方案中，细胞因子是抗细胞因子。细胞因子的实例包括但不限于TNFα、IFNγ、IL-1、IL-6、IL-8或TGFβ。

在一些实施方案中，所述方法还包括向受试者施用脂肪酸补充剂。在一些实施方案中，所述脂肪酸补充剂包含油。可以对所述油进行加工(例如，精炼、漂白或除臭)。在其他实施方案中，所述油是未加工的油或处女油。在一些实施方案中，脂肪酸补充剂从来源衍生或分级分离以产生分离的脂肪酸。在一些实施方案中，所述油是椰子油。如本文所用，椰子油可包括由椰子的坚果产生的任何油。在本文公开的补充剂中发现的脂肪酸可以是短链脂肪酸、中链脂肪酸或长链脂肪酸。可以在补充剂中见到的示例性脂肪酸包括但不限于己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸、油酸、亚油酸和/或亚麻酸。本文公开的脂肪酸补充剂可包含饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和/或多不饱和脂肪酸。在一些实施方案中，所述脂肪酸补充剂可以包含氢化油。脂肪酸补充剂可以包含一种或多种脂肪酸。可以改变本文公开的脂肪酸补充剂的实际剂量水平和施用方案，以便获得有效实现特定患者、组合物和施用模式的期望治疗反应而对患者无毒的脂肪酸补充剂的量。

在其他实施方案中，本发明提供了涉及以下的方法：

改善生育力；

治疗或预防不育症；

诱导排卵；

增加精子计数；或

增加泌乳；

其包括向受试者施用通过本文公开的合成方法制备的化合物4。

在某些实施方案中，这样的治疗方法还包括施用紫檀芪。

在一些实施方案中，改善生育力或治疗和/或预防不育症包括诱导雌性受试者的排卵和/或卵母细胞和卵泡成熟。在一些实施方案中，改善生育力或治疗和/或预防不育症包括增加雄性受试者的精子计数和/或精子活力。

在一些实施方案中，受试者是哺乳动物(例如，人、非人哺乳动物)。受试者可以是雄性或雌性。在一些实施方案中，受试者具有受损的生育力(例如，精子计数减少、精子活力降低、排卵减少、卵泡和/或卵母细胞成熟减少)。在一些实施方案中，受试者是不育的或不孕的。

在一些实施方案中，本文提供了通过向受试者(例如，有需要的受试者)施用本文公开的组合物(即，包含烟酰胺核苷(化合物4)和/或紫檀芪的组合物)来增加所述受试者的总体精子健康状况和/或精子计数的方法。增加精子计数可通过增加精液中精子的浓度、增加精液中精子的绝对数量和/或增加每次射出精液的精液量来实现。本文公开的方法和组合物可通过增加或诱导精子发生来增加总精子计数。在一些实施方案中，施用本文公开的组合物增加或改善受试者的精子活力(例如，增加精液中活动精子的百分比或增加精子的活动时间量)。在一些实施方案中，施用本文公开的组合物维持或改善精子发生后睾丸和/或附睾中的总体精子健康状况、精子计数和/或精子活力。

在一些实施方案中，本文提供了通过向受试者(例如，有需要的受试者)施用本文公开的组合物(即，包含烟酰胺核苷(化合物4)和/或紫檀芪的组合物)来诱导和/或增加所述受试者排卵的可能性的方法。在一些实施方案中，本文提供了通过向受试者(例如，有需要的受试者)施用本文公开的组合物(即，包含烟酰胺核苷(化合物4)和/或紫檀芪的组合物)来诱导受试者中的卵泡和卵母细胞成熟(例如，卵泡产生)的方法。

本文公开了有助于体外受精程序和实践的组合物和方法。在一些方面，本文提供了治疗、保存或改善配子(即，精子和/或卵母细胞)在体外程序中受精可能性的方法。在一些实施方案中，将本文公开的组合物添加到精液(例如，从供体受试者获得的精液)中以准备用于人工授精或子宫内授精(IUI)。在一些实施方案中，将本文公开的组合物添加到精液中，以准备胞质内精子注射到卵母细胞中。

在一些实施方案中，本文公开的组合物可用于在进行体外受精的方法之前和/或之后提高卵母细胞、出生后雌性生殖干细胞(本文也称为OSC)和/或植入前胚胎中的线粒体数目、线粒体活性、细胞能量水平或细胞能量产生潜力。最近发现，成年雌性哺乳动物保留了罕见的生殖干细胞或卵原干细胞(OSC)，其以类似于成年睾丸中精子产生的生殖干细胞支持的方式常规地产生新的卵母细胞，并且这些OSC可能是体外受精疗法的新靶标(Spradling，Nature 2004 428:133-134)。在一些实施方案中，本文提供了增加从受试者中取出的卵母细胞(例如，在体外受精的制备物中取出的卵母细胞)的总体生存力的方法。在一些实施方案中，在体外受精之前用本文公开的组合物处理或储存卵母细胞。在一个实施例中，本文提供了体外受精的方法，所述方法包括以下步骤：用本文公开的组合物孵育来自受试者的卵母细胞；以及使所述卵母细胞体外受精以形成受精卵。在另一实施例中，本文提供的方法包括一种体外受精的方法，所述方法包括以下步骤：(a)用本文公开的组合物孵育来自受试者的OSC；(b)从所述OSC中获得含有OSC线粒体的组合物；(c)将所述组合物转移到分离的卵母细胞(例如，从受试者提取的卵母细胞)中；和(d)使所述卵母细胞体外受精形成受精卵。

在一些实施方案中，可以将本文公开的组合物添加到用于用以卵母细胞制备和/或储存的体外受精程序的溶液中，所述溶液诸如为细胞培养基、卵母细胞修复溶液、卵母细胞洗涤溶液、卵母细胞体外成熟培养基、卵泡体外成熟培养基、卵母细胞体外受精培养基、胚胎培养基、分裂培养基、玻璃化溶液、冷冻保存溶液和/或胚胎解冻培养基。

在进行体外受精之前，可以用本文公开的组合物将配子储存任何时间段。

在一些方面，本文提供了通过向受试者(例如，有需要的受试者)施用本文公开的组合物(即，包含烟酰胺核苷(化合物4)和/或紫檀芪的组合物)来增加所述受试者的泌乳的方法。在一些实施方案中，增加泌乳包括增加从受试者的乳腺分泌和/或产生乳汁的速率。在一些实施方案中，增加泌乳包括增加受试者中分泌的乳汁的体积。在一些实施方案中，所述受试者是人。在一些实施方案中，受试者是非人动物，诸如产奶动物(例如，奶牛、水牛、山羊、绵羊、骆驼)。

在一些方面，本文提供了通过向受试者(例如，非人受试者)施用本文公开的组合物来改善畜牧业中的动物繁殖力和/或繁殖结果的方法。在一些实施方案中，增加受试者(例如，非人受试者，诸如驯养动物)的每窝产仔数。在一些实施方案中，所述受试者是哺乳动物。受试者可以是啮齿动物、兔类动物、猫、犬、猪、羊、牛、马或灵长类动物。例如，本文公开的组合物可以施用到雌性受试者以增加每窝或生殖周期的后代数目。或者，本文公开的组合物可以施用到雄性受试者以增加精子产生，从而获得用于人工授精的具有增加的生殖力的精液样品。

可以改变本文公开的组合物的实际剂量水平和施用方案，以便获得有效实现特定患者、组合物和施用模式的期望治疗反应而对患者无毒的烟酰胺核苷和/或紫檀芪的量。

在一些实施方案中，组合物的施用包括以一个或多个剂量施用组合物。在一些实施方案中，组合物的施用包括以一个或多个、五个或更多个、十个或更多个、二十个或更多个、三十个或更多个、四十个或更多个、五十个或更多个、一百个或更多个或一千个或更多个剂量施用组合物。在一些实施方案中，剂量包含至少25mg、至少50mg、至少75mg、至少100mg、至少125mg、至少150mg、至少200mg、至少225mg、至少250mg、至少275mg、至少300mg、至少325mg、至少350mg、至少375mg、至少400mg、至少425mg、至少450mg、至少475mg、至少500mg、至少550mg、至少600mg、至少650mg、至少700mg、至少750mg、至少800mg或至少850mg烟酰胺核苷(化合物4)。在一些实施方案中，剂量包含至少5mg、至少10mg、至少15mg、至少20mg、至少25mg、至少30mg、至少35mg、至少40mg、至少45mg、至少50mg、至少55mg、至少60mg、至少65mg、至少70mg、至少75mg、至少80mg、至少90mg、至少95mg、至少100mg、至少110mg、至少120mg、至少130mg、至少140mg、至少150mg、至少160mg、至少170mg、至少180mg、至少190mg、至少200mg或至少250mg的紫檀芪。

本文公开的组合物可以在有效实现对特定患者、组合物和施用模式的所需治疗反应，而对患者无毒的任何时间段内施用。所述时间段可以是至少1天、至少10天、至少20天、至少30天、至少60天、至少3个月、至少6个月、至少1年、至少3年、至少5年或至少10年。剂量可以在需要时、偶尔地或以规律的间隔施用。例如，剂量可以每月、每周、每周两次、每周三次、每天一次或每天两次施用。

在其他实施方案中，本发明提供了涉及以下的方法：

治疗或预防肾损害；

治疗或预防急性肾损伤；

治疗或预防肾病；或

增加肾血流量；

其包括向受试者施用通过本文公开的合成方法制备的化合物4。

在某些实施方案中，这样的治疗方法还包括施用紫檀芪。

在某些实施方案中，所述肾损害是癌症、流向肾的血液减少(即，缺血)、肾中尿回流、脓毒症、创伤、自身免疫性疾病、药物诱导的毒性(例如，非甾体抗炎(NSAID)诱导的肾毒性)、铅中毒和/或严重脱水的结果。

在一些实施方案中，所述急性肾损伤是肾血流量减少的结果(即，缺血性损伤)。肾血流量减少可能是低血压、失血、严重腹泻、热发作、心力衰竭、心脏功能降低、器官衰竭、药物诱导的肾毒性(例如，NSAID诱导的肾毒性)、过敏反应、烧伤、创伤(例如，钝伤)和/或手术的结果。在一些实施方案中，急性肾损伤是癌症(例如，多发性骨髓瘤)、脓毒症、血管炎、间质性肾炎、硬皮病、肾小管坏死、肾小球肾炎或血栓性微血管病的结果。在一些实施方案中，急性肾损伤是尿路堵塞的结果。尿路阻塞可由膀胱癌、前列腺癌、宫颈癌、前列腺肥大、肾结石或尿中的血块引起。

在一些实施方案中，慢性肾病是免疫系统疾病(例如，狼疮)、长期病毒性疾病(例如，HIV/AIDS、乙型肝炎或丙型肝炎)、尿路感染、多囊性肾病和/或肾小球炎症的结果。

如本文所用，肾损害可以指肾功能受损的医学病况，其中肾不能从血液中充分地过滤代谢废物。在一些实施方案中，肾损害也指示肾衰竭。可引起肾损害的病况的实例包括但不限于肾血流量减少、肾中尿回流、脓毒症、创伤(例如，钝伤)、自身免疫性疾病、药物诱导的肾毒性(例如，NSIAD诱导的肾毒性)、重度精神中毒(例如，铅中毒)或严重脱水。

在一些方面，本文提供了治疗或预防急性肾损伤(即，在有需要的受试者中)的方法。在一些实施方案中，急性肾损伤是在数小时或数天内发生的肾衰竭或肾损害的发作。如本文所用，急性肾损伤的特征可在于肾功能突然恶化。在一些实施方案中，所述受试者患有急性肾损伤，并且所述急性肾损伤可通过血清肌酸酐水平增加伴随或不伴随尿排出量减少而显现。在一些实施方案中，受试者具有升高的血清肌酸酐水平。在一些实施方案中，受试者可能具有减少的尿排出量。在一些实施方案中，受试者患有急性肾损伤，并且所述急性肾损伤可以是肾前性的(例如，由减少的肾血流量引起)、肾固有的(例如，由肾内的过程引起)或肾后性的(例如，由肾远端的尿液引流不充分引起)。急性肾损伤或肾损害可能是使用(例如，过度使用)药物如NSAID、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂、环孢菌素、利尿剂、他克莫司(tacrolimus)、青霉素类似物、头孢菌素、磺胺类药物、环丙沙星、阿昔洛韦(acyclovir)、利福平(rifampin)、苯妥英(phenytoin)、干扰素或质子泵抑制剂的结果。急性肾损伤和肾损害的其他原因包括心肾综合征、肝肾综合征、腹腔隔室综合征、高钙血症、脓毒症、神经原性休克、肾实质感染、肾小球肾炎、病毒感染(诸如爱泼斯坦-巴尔病毒感染或巨细胞病毒感染)、细菌感染(例如，由链球菌属(Streptococcus)或军团菌属(Legionella)物种的细菌引起的细菌感染)或真菌感染(例如，由念珠菌病或组织胞浆菌病引起的真菌感染)。在一些实施方案中，急性肾损伤和/或肾损害由全身性疾病如结节病或狼疮引起。

引起急性肾损伤和肾损害的病况的其他实例包括癌症(例如，多发性骨髓瘤)、长期低血压、肾静脉血栓形成、恶性高血压、硬皮病肾危象、肾动脉粥样硬化病、肾梗塞性血管炎、间质性肾炎、硬皮病和或引起肾小管炎症或损害的病况，诸如肾小管坏死、肾小球肾炎或血栓性微血管病。

在一些实施方案中，急性肾损伤和/或肾损害是由肾血流量减少引起的。可能引起肾血流量减少的病况包括，例如，失血、严重腹泻、热发作、心力衰竭、心脏功能降低、器官衰竭、过敏反应、烧伤和/或创伤。在一些实施方案中，受试者已经经历手术，并且受试者的血管已经被夹紧，导致肾血流量减少。在一些实施方案中，急性肾损伤或肾损害是尿路堵塞的结果。尿路阻塞可能是例如神经源性膀胱、腹膜后纤维化、膀胱癌、前列腺癌、宫颈癌、前列腺肥大、肾结石、血块或肿瘤的结果。

在一些实施方案中，所述受试者患有肾病。肾病是影响肾从血液中滤出化合物、从血液中滤出多余的水和/或帮助控制血压的能力的任何病况。肾病可以由糖尿病、高血压、全身性疾病(例如，狼疮)、病毒性疾病(例如，HIV/AIDS、乙型肝炎或丙型肝炎)、尿路感染、遗传疾病如多囊性肾病或导致肾小球炎症的任何病况引起。

在一些实施方案中，受试者的肾功能可以在施用本文公开的组合物之前、期间或之后测量。肾功能可以作为肾小球滤过率、尿排出量或肾健康状况的其他生物医学标志物如肌酸酐、尿素、氮、磷或钾的水平的函数来评价。可以在尿中或通过血液测试测量标志物，诸如肌酸酐、尿素、氮、磷或钾。

可以改变本文公开的组合物的实际剂量水平和施用方案，以便获得有效实现特定患者、组合物和施用模式的期望治疗反应而对患者无毒的烟酰胺核苷(化合物4)和/或紫檀芪的量。

在一些实施方案中，组合物的施用包括以一个或多个剂量施用组合物。在一些实施方案中，组合物的施用包括以一个或多个、五个或更多个、十个或更多个、二十个或更多个、三十个或更多个、四十个或更多个、五十个或更多个、一百个或更多个或一千个或更多个剂量施用组合物。在一些实施方案中，剂量包含至少25mg、至少50mg、至少75mg、至少100mg、至少125mg、至少150mg、至少200mg、至少225mg、至少250mg、至少275mg、至少300mg、至少325mg、至少350mg、至少375mg、至少400mg、至少425mg、至少450mg、至少475mg、至少500mg、至少550mg、至少600mg、至少650mg、至少700mg、至少750mg、至少800mg或至少850mg烟酰胺核苷(化合物4)。在一些实施方案中，剂量包含至少5mg、至少10mg、至少15mg、至少20mg、至少25mg、至少30mg、至少35mg、至少40mg、至少45mg、至少50mg、至少55mg、至少60mg、至少65mg、至少70mg、至少75mg、至少80mg、至少90mg、至少95mg、至少100mg、至少110mg、至少120mg、至少130mg、至少140mg、至少150mg、至少160mg、至少170mg、至少180mg、至少190mg、至少200mg或至少250mg的紫檀芪。

本文公开的组合物可以在有效实现对特定患者、组合物和施用模式的所需治疗反应，而对患者无毒的任何时间段内施用。所述时间段可以是至少1天、至少10天、至少20天、至少30天、至少60天、至少3个月、至少6个月、至少1年、至少3年、至少5年或至少10年。剂量可以在需要时、偶尔地或以规律的间隔施用。例如，剂量可以每月、每周、每周两次、每周三次、每天一次或每天两次施用。

在其他实施方案中，本发明提供了涉及通过向受试者施用如通过本文公开的合成方法制备的化合物4来治疗和/或预防肝脏相关的疾病和病症以及改善受试者的肝脏健康状况的方法。具体地，本发明提供如下方法：

在受试者中治疗或预防肝损害；

治疗或预防脂肪肝；

降低丙氨酸转氨酶(ALT)的血清水平；或

降低天冬氨酸转氨酶(AST)的血清水平；

其包括向受试者施用通过本文公开的合成方法制备的化合物4。

在某些实施方案中，这样的治疗方法还包括施用紫檀芪。

在某些实施方案中，所述肝损害是癌症(例如，肝癌、胆管癌和/或肝腺瘤)、肝硬化、病毒感染(例如，甲型肝炎感染、乙型肝炎感染和/或戊型肝炎感染)、先天性代谢障碍、创伤、自身免疫性疾病(例如，自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化或原发性硬化性胆管炎)、血色素沉着症、高草酸尿症、草酸盐沉积症、威尔逊氏病(Wilson's disease)和/或药物诱导的肝毒性(例如，酒精诱导的肝毒性和/或对乙酰氨基酚诱导的肝毒性)的结果。

本文提供了通过向受试者(例如，有需要的受试者)施用本文公开的组合物(即，包含烟酰胺核苷和/或紫檀芪的组合物)来预防或治疗所述受试者的肝损害和/或脂肪肝的方法。

在一些实施方案中，受试者可能患有或易患肝损害和/或脂肪肝。肝损害可由导致肝脏细胞(即，肝细胞)死亡或以其他方式不正常发挥功能的任何病况引起。可引起肝损害的病况的实例包括但不限于癌症(例如，肝癌、胆管癌或肝腺瘤)、创伤、先天性代谢病症(例如，导致酶缺乏的遗传代谢病症)、血管损伤、肝硬化、病毒感染(例如，甲型肝炎、乙型肝炎、戊型肝炎)、自身免疫性疾病(例如，自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化或原发性硬化性胆管炎)、血色素沉着症、高草酸尿症、草酸盐沉积症、威尔逊氏病或药物诱导的肝毒性(例如，酒精诱导的肝毒性或对乙酰氨基酚诱导的肝毒性)。脂肪肝可以由引起肝脏脂肪堆积的任何病况引起。这些病况可以是但不限于非酒精性脂肪肝病或酒精性肝病。

本文公开了治疗或预防年龄相关症状或疾病的方法，其包括施用本文公开的组合物。本文提供了降低受试者中丙氨酸转氨酶(ALT)和/或天冬氨酸转氨酶(AST)的量的方法，其包括向所述受试者施用本文提供的组合物。AST和ALT是不同类型疾病或病况所致的肝损害或损伤的相当灵敏的指标，并且其通常在肝测试或肝血测试中测量。AST和ALT水平升高与肝损害和肝功能障碍相关联。在一些实施方案中，在施用所述组合物之后，受试者中的ALT降低至少0.1U/L、至少0.2U/L、至少0.3U/L、至少0.4U/L、至少0.5U/L、至少0.6U/L、至少0.7U/L、至少0.8U/L、至少0.9U/L、至少1.0U/L、1.1U/L、至少1.2U/L、至少1.3U/L、至少1.4U/L、至少1.5U/L、至少1.6U/L、至少1.7U/L、至少1.8U/L、至少1.9U/L、至少2.0U/L、2.1U/L、至少2.2U/L、至少2.3U/L、至少2.4U/L、至少2.5U/L、至少2.6U/L、至少2.7U/L、至少2.8U/L、至少2.9U/L、至少3.0U/L、至少3.5U/L、4.0U/L、至少4.5U/L或至少5.0U/L。在一些实施方案中，在施用所述组合物之后，ALT降低至少0.1U/L、至少0.2U/L、至少0.3U/L、至少0.4U/L、至少0.5U/L、至少0.6U/L、至少0.7U/L、至少0.8U/L、至少0.9U/L、至少1.0U/L、1.1U/L、至少1.2U/L、至少1.3U/L、至少1.4U/L、至少1.5U/L、至少1.6U/L、至少1.7U/L、至少1.8U/L、至少1.9U/L、至少2.0U/L、2.1U/L、至少2.2U/L、至少2.3U/L、至少2.4U/L、至少2.5U/L、至少2.6U/L、至少2.7U/L、至少2.8U/L、至少2.9U/L、至少3.0U/L、至少3.5U/L、4.0U/L、至少4.5U/L或至少5.0U/L。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD⁺)是参与许多代谢反应的辅酶。NAD⁺在转录调节、寿命和年龄相关疾病中起重要作用。NAD⁺水平随年龄而降低，而NAD⁺水平增加与健康状况相关联。在一些实施方案中，本文提供了通过施用本文公开的组合物来增加受试者的NAD⁺的量的方法。在施用所述组合物之后，NAD⁺可以增加至少1.0μg/mL、至少2.0μg/mL、至少3.0μg/mL、至少4.0μg/mL、至少5.0μg/mL、至少6.0μg/mL、至少7.0μg/mL、至少8.0μg/mL、至少9.0μg/mL、至少10.0μg/mL、至少11.0μg/mL、至少12.0μg/mL、至少13.0μg/mL、至少14.0μg/mL、至少15.0μg/mL、至少16μg/mL、至少17μg/mL、至少18μg/mL、至少19μg/mL、至少20μg/mL、至少21μg/mL、至少22μg/mL、至少23μg/mL、至少24μg/mL、至少25μg/mL、至少26μg/mL、至少27μg/mL、至少28μg/mL、至少29μg/mL或至少30μg/mL。

本文提供了通过施用本文的组合物降低受试者的血压(例如，舒张压)的方法。在一些实施方案中，在施用所述组合物之后，受试者的舒张压降低至少1mmHg、至少1.5mmHg、至少2mmHg、至少2.5mmHg、至少3mmHg、至少3.5mmHg、至少4.0mmHg、至少4.5mmHg或至少5mmHg。

在某些实施方案中，本发明还提供了一种治疗疾病的方法，其包括向受试者施用化合物4和/或紫檀芪。

在某些这样的实施方案中，所述疾病是神经变性疾病。示例性神经变性疾病包括阿尔茨海默氏病、帕金森氏病和亨廷顿氏病。

在供选的此类实施方案中，所述疾病是皮肤病症。所述皮肤病症可由暴露于阳光引起；示例性的这类病症选自光化性角化病、着色斑或老年斑、脂溢性角化病、晒伤、光敏感性、痣、多形性日光疹、日光性弹性组织变性或皱纹、皮肤癌(诸如黑素瘤、鳞状细胞癌和基底细胞癌)和雀斑。皮肤病症也可由炎症引起；示例性的这类病症选自银屑病、接触性皮炎、特应性皮炎、脂溢性皮炎、皮脂缺乏性湿疹、盘状湿疹、手部湿疹、重力/静脉曲张性湿疹、湿疹性药疹、单纯性苔藓、痤疮、扁平苔藓、苔癣样糠疹、慢性苔癣样角化病、两面苔癣样苔癣、纹状苔癣、蕈样肉芽肿病、红皮病、多形红斑、史蒂芬强森综合征(Stevens-JohnsonSyndrome)、血管炎和中毒性表皮坏死松解症。在其他实施方案中，可由自身免疫性疾病引起的皮肤病症选自坏疽性脓皮病、全身性红斑狼疮、嗜酸性筋膜炎、硬皮病、寻常天疱疮、大疱性类天疱疮、斑秃、白癜风、银屑病、皮肌炎和营养不良性大疱性表皮松解症。

在另外供选的实施方案中，所述疾病是肥胖症或糖尿病。所述方法还可以实现降脂和降血压。

在其他供选的实施方案中，所述疾病是肌肉萎缩或少肌症。

在其他供选的实施方案中，所述疾病是自身免疫疾病，诸如关节炎或狼疮。

在其他供选的实施方案中，所述疾病是线粒体功能障碍或疾病。

在另外其他供选的实施方案中，所述疾病是加速衰老的疾病，诸如早衰。

在其他实施方案中，所述疾病是化疗诱导的神经病或认知减退。所述方法还可以实现疼痛减轻。

在又其他实施方案中，所述疾病是癌症，诸如乳腺癌、结肠癌等。

在其他实施方案中，本发明提供促进沉默调节蛋白活化、NAD⁺加强、PARP活化、自噬和线粒体自噬或线粒体生物发生的方法。

在另外的其他实施方案中，本发明提供了促进健康的方法，其包括向受试者施用化合物4和/或紫檀芪。

在一些实施方案中，所述方法通过促进干细胞健康状况和功能来促进健康；这样的干细胞可以是肠、皮肤、肌肉、造血或神经干细胞。

所述方法还可以通过预防听力损失或毛发损失来促进健康。

或者，所述方法可以促进健康的毛发和指甲生长。

在又其他供选的实施方案中，所述方法可以促进肌肉构建以获得耐力和力量、体重减轻或和增加免疫反应(先天和适应性功能)。

可以改变本文公开的组合物的实际剂量水平和施用方案，以便获得有效实现特定患者、组合物和施用模式的期望治疗反应而对患者无毒的烟酰胺核苷(化合物4)和/或紫檀芪的量。

在一些实施方案中，组合物的施用包括以一个或多个剂量施用组合物。在一些实施方案中，组合物的施用包括以一个或多个、五个或更多个、十个或更多个、二十个或更多个、三十个或更多个、四十个或更多个、五十个或更多个、一百个或更多个或一千个或更多个剂量施用组合物。在一些实施方案中，剂量包含至少25mg、至少50mg、至少75mg、至少100mg、至少125mg、至少150mg、至少200mg、至少225mg、至少250mg、至少275mg、至少300mg、至少325mg、至少350mg、至少375mg、至少400mg、至少425mg、至少450mg、至少475mg、至少500mg、至少550mg、至少600mg、至少650mg、至少700mg、至少750mg、至少800mg或至少850mg烟酰胺核苷(化合物4)。在一些实施方案中，剂量包含至少5mg、至少10mg、至少15mg、至少20mg、至少25mg、至少30mg、至少35mg、至少40mg、至少45mg、至少50mg、至少55mg、至少60mg、至少65mg、至少70mg、至少75mg、至少80mg、至少90mg、至少95mg、至少100mg、至少110mg、至少120mg、至少130mg、至少140mg、至少150mg、至少160mg、至少170mg、至少180mg、至少190mg、至少200mg或至少250mg的紫檀芪。

本文公开的组合物可以在有效实现对特定患者、组合物和施用模式的所需治疗反应，而对患者无毒的任何时间段内施用。所述时间段可以是至少1天、至少10天、至少20天、至少30天、至少60天、至少3个月、至少6个月、至少1年、至少3年、至少5年或至少10年。剂量可以在需要时、偶尔地或以规律的间隔施用。例如，剂量可以每月、每周、每周两次、每周三次、每天一次或每天两次施用。

在本文所述的任何治疗方法中，化合物4，单独或与紫檀芪组合，可以与一种或多种药学上可接受的载体(添加剂)和/或稀释剂一起配制。在另一方面，本文所述的试剂可以原样施用，或以与药学上可接受的载体的混合物施用，并且还可以与其他试剂联合施用。因此，联合疗法包括顺序、同时和单独或共同施用一种或多种本发明的化合物，其中当施用随后的化合物时，第一次施用的治疗效果没有完全消失。

用于本发明方法的组合物如上所述。

实施例

通过参考以下实施例，将更容易地理解本文中通常描述的本发明，仅出于说明本发明的某些方面和实施方案的目的而包括这些实施例，并且不旨在限制本发明。

实施例1.化合物3的示例性合成

进行了一组实验，其中用氯化剂处理四乙酸呋喃核糖(化合物1)以形成化合物2，然后用烟酰胺处理以形成化合物3。所述组的结果汇总在下表中。

从上面概述的实验组中，将以下要点引入将化合物1转化为化合物3的更大规模的工艺中：

烟酰胺的摩尔当量最小化到1.0至1.1的范围，因为盐酸烟酰胺(副产物)难以除去。

HCl的摩尔当量最小为1.0，以减少蒸馏时间。实验证明，氯中间体化合物2不稳定。

乙酰氯可以作为干燥剂添加。

通常，亚硫酰氯与HCl相比反应性较低，并且具有产生含硫副产物的缺点。

实施例2.化合物3的放大规模合成

将246kg 4M HCl的二噁烷溶液添加到在471kg乙腈中的294kg四乙酸呋喃核糖中，并且在10-20℃下搅拌16小时。反应完成的样品是用规格为NMT 5％的四乙酸呋喃核糖取样。添加237kg乙腈和127kg烟酰胺，并在25-30℃下搅拌20小时。将反应物冷却到0-10℃，并且添加51kg三丁胺，并搅拌60分钟。通过过滤分离产物，用177kg乙腈冲洗，然后用474kg丙酮冲洗。在低于30in Hg的真空和NMT40℃下干燥产物。形成产物，产率为49％。

实施例3：化合物4的示例性合成

实施例4.化合物4的放大规模合成

将408kg 7M甲醇NH₃添加到在891kg甲醇中的300kg三乙酸烟酰胺核苷中，并在-10至0℃下搅拌15小时。按照NMT 5％三乙酸烟酰胺核苷的规格取得反应完全的样品。在低于30in Hg的真空和温度NMT 20℃下完成NLT 15小时的蒸馏。蒸馏持续进行直到收集到至少300kg馏出物。通过过滤分离产物，用475kg丙酮冲洗，然后用444kg MTBE冲洗。在低于30inHg的真空和NMT 40℃下干燥产物。形成产物，产率为55％。

实施例5.化合物3的供选合成

步骤1：氯化反应

将600g四乙酸D-呋喃核糖加入5L反应器中，在22℃下用乙腈(942g)冲洗。搅拌混合物并溶解四乙酸D-呋喃核糖，从而形成透明溶液。观察到吸热到6.9℃。将反应器内容物冷却到0-5℃，然后在12小时内将HCl气体(75.6g，1.1当量)装到液面下，每小时装料约8g。反应完成的IPC样品表明8.9A％四乙酸D-呋喃核糖(IPC规格：通过CAD检测器确定，不超过5A％四乙酸盐)。因此，在2小时内以2剂份加入补充的HCl气体装料(65.8g，0.96当量)。第二个反应完成的IPC样品表明2.3A％四乙酸D-呋喃核糖。将反应器夹套温度调节到15℃。

步骤2：烟酰胺添加

将烟酰胺(253.8g；1.1当量)加入反应器中，产生白色悬浮液，其放热到26℃。将乙腈(474.0g)添加到反应器中。将反应器内容物调节到15℃，并且在不少于20分钟内加入三丁胺(384.4g，1.1当量)，随后用乙腈(57g)冲洗。观察到适度的放热(最高24℃)。将反应器内容物调节到25℃并搅拌18小时。反应完成的IPC样品表明38A％烟酰胺(IPC规格：260nm处不超过50％烟酰胺)。31小时后没有观察到变化。

a.三乙酸烟酰胺核苷氯化物(NR-A)与端基异构体的比率：70.3％:29.7％

b.NR-A的原位产率分析：59.8％(469.9g)

步骤3：补充三丁胺装料(由于HCl气体的过度装料)

过滤前，过滤100-200mg等分的浆液，用丙酮洗涤，并且分析显示21.9A％残留烟酰胺(来自丙酮不溶性烟酰胺HCl)。因此，将产物浆液冷却到10℃，并且添加补充的三丁胺装料(45.8g，0.131当量)以补偿HCl气体装料(2.1当量)。将浆液温热到25℃，保持2小时，冷却到0℃并允许搅拌过夜(13小时)。过滤前，过滤100-200mg等分的浆液，用丙酮洗涤，并且分析显示1.8A％残留烟酰胺。

步骤4：三乙酸烟酰胺核苷氯化物(NR-A)的分离

将浅黄色浆液冷却到0℃(0-5℃)，并通过离心滤布(20-25μm孔径)真空过滤。将丙酮(1200g或948g)加入空的反应器中，并且在搅拌下冷却到0-1℃，以使产物残留物活动。在过滤器中完全脱液后，用冷丙酮洗涤产物滤饼。将产物在40-45℃下真空干燥24小时，得到NR-A(378.65g(48.2％产率))，为白色白垩固体(2.0A％烟酰胺，97.4A％NR-A(260nm)，0.13A％端基异构体)。通过CAD检测器测得产物为100A％。水分平衡：0.26％重量损失(75℃，30分钟)。

实施例6.化合物4的供选合成

步骤1：乙酸酯基团的水解

向5L夹套反应器中加入甲醇(350g)。在22℃下将NR-A(350g)加入反应器中，得到搅拌的悬浮液，然后用甲醇(350g)冲洗。将反应器内容物冷却到低于-5至-3℃，并在保持不超过1℃的情况下向悬浮液中加入二乙胺(49.35g，0.8当量)，随后用甲醇(133g)冲洗。将反应混合物在-3℃搅拌不少于2小时，并且悬浮液变成茶色溶液(以工厂规模，可以进行精细过滤)。将反应物在-3℃下搅拌19小时，在19小时时取出的反应完成的IPC样品表明4.4％的单乙酸酯(IPC规格：在270nm处不超过5％单乙酸酯)。28小时后：1.5％单乙酸酯。通过将37％HCl(63.0g，0.76当量)添加到水(189g)中制备3N HCl(0.76当量)水溶液。将3N HCl(0.76当量)淬灭溶液添加到反应器中，保持不超过2℃(1小时添加)。在3N HCl添加期间，开始沉淀。将混合物在-3℃至0℃下老化不少于12小时。

步骤2：烟酰胺核苷氯化物(NR-B)的分离

在不超过0-5℃下，通过离心滤布(20-25μm孔径)真空过滤所得的浓稠浅黄色悬浮液。将乙醇SDA-3C加入反应器(553g，700mL)中，并冷却到0-5℃。使用内容物冲洗产物滤饼。将丙酮(549g，700mL)加入反应器中，并且将内容物冷却到0℃以下。使用内容物冲洗产物滤饼。将MTBE(518.0g，700mL)加入反应器中，并且将内容物冷却到0℃以下。使用内容物冲洗产物滤饼。将产物在30-40℃下真空干燥24小时，得到NR-B(126.9g(52％产率))，为浅黄色粉末(0.3A％烟酰胺，99.7A％NR-B(270nm)，且相对于工作实验室标准物为98.7重量％。水分平衡：0.56％重量损失(75℃，30分钟)。滤液的产物损失百分比：43.7gNR-B，理论值的17.9％。

参考并入

本文提及的所有出版物和专利通过引用整体并入本文，如同每个单独的出版物或专利被具体地且单独地指明通过引用并入。在冲突的情况下，以本申请，包括本文的任何定义为准。

等同物

尽管已经讨论了本发明的具体实施方案，但是上述说明书是说明性的而非限制性的。在阅读本说明书和所附权利要求书之后，本发明的许多变化对于本领域技术人员将变得显而易见。本发明的全部范围应当参照权利要求及其等同物的全部范围和说明书以及这些变化来确定。

Claims (63)

1.一种制备化合物3的方法，

(3)；

其包括以下步骤：

(a)将化合物1与氯化剂合并，从而产生包含化合物2的第一反应混合物，其中：

化合物1由

(1)表示；

化合物2由

(2)表示；并且

所述氯化剂是气态HCl或HCl的二噁烷溶液；以及

(b)将化合物2与烟酰胺合并，从而产生包含化合物3的第二反应混合物。

2.权利要求1的方法，其中所述氯化剂是气态HCl。

3.权利要求1的方法，其中所述氯化剂是HCl的二噁烷溶液。

4.权利要求1至3中任一项的方法，其中步骤(a)在第一溶剂中发生。

5.权利要求4的方法，其中所述第一溶剂是乙腈，并且所述氯化剂是气态HCl。

6.权利要求4的方法，其中所述第一溶剂是二噁烷，并且所述氯化剂是HCl的二噁烷溶液。

7.权利要求4的方法，其中所述第一溶剂是二氯甲烷，并且所述氯化剂是HCl的二噁烷溶液。

8.权利要求3、4、6和7中任一项的方法，其中步骤(a)还包括乙酰氯。

9.权利要求1-8中任一项的方法，其还包括在步骤(a)之后且在步骤(b)之前发生的步骤(a')：

(a')在降低的大气压下浓缩所述第一反应混合物。

10.权利要求1-9中任一项的方法，其还包括将化合物2与第二溶剂合并。

11.权利要求10的方法，其中所述第二溶剂是乙腈。

12.权利要求1-9中任一项的方法，其中步骤(b)在第二溶剂中发生。

13.权利要求12的方法，其中所述第二溶剂是乙腈。

14.权利要求1-13中任一项的方法，其还包括在步骤(b)之后发生的步骤(b')：

(b')将所述第二反应混合物与三烷基胺合并。

15.权利要求14的方法，其中所述三烷基胺是三丁胺。

16.权利要求1-15中任一项的方法，其还包括：

(c)将化合物3与氨试剂合并，从而产生包含化合物4的第三反应混合物，其中：

化合物4由

(4)表示；并且

所述氨试剂是甲醇氨或二乙胺。

17.权利要求16的方法，其中所述氨试剂是二乙胺。

18.权利要求16的方法，其中所述氨试剂是甲醇氨。

19.权利要求18的方法，其中所述甲醇氨是7M甲醇氨。

20.权利要求16-19中任一项的方法，其中步骤(c)在第三溶剂中发生。

21.权利要求20的方法，其中所述第三溶剂是甲醇。

22.权利要求16-21中任一项的方法，其中步骤(c)在低于室温的温度下进行。

23.权利要求16、17和20-22中任一项的方法，其中所述氨试剂是二乙胺；

其还包括在步骤(c)之后发生的步骤(c')：

(c')将冷HCl水溶液添加到所述第三反应混合物中，从而产生包含化合物4的第四混合物。

24.权利要求16和18-22中任一项的方法，其中所述氨试剂是甲醇氨；

其还包括在步骤(c)之后发生的步骤(c')：

(c')在降低的大气压下浓缩所述第三反应混合物，从而产生包含化合物4的第四混合物。

25.权利要求23或24的方法，其还包括在步骤(c')之后发生的步骤(c”)：

(c”)过滤所述第四混合物。

26.权利要求25的方法，其还包括用冷甲醇或乙醇冲洗所述保留物。

27.权利要求25或26的方法，其还包括用冷丙酮冲洗所述保留物。

28.一种制备化合物4的方法，

(4)；

其包括以下步骤：

(c)将化合物3与氨试剂合并，从而产生包含化合物4的第一反应混合物，其中：

化合物3由

(3)表示；并且

所述氨试剂是甲醇氨或二乙胺。

29.权利要求28的方法，其中所述氨试剂是二乙胺。

30.权利要求28的方法，其中所述氨试剂是甲醇氨。

31.权利要求30的方法，其中所述甲醇氨是7M甲醇氨。

32.权利要求28-31中任一项的方法，其中步骤(c)在第三溶剂中发生。

33.权利要求32的方法，其中所述第三溶剂是甲醇。

34.权利要求28-33中任一项的方法，其中步骤(c)在低于室温的温度下进行。

35.权利要求28、29和32-34中任一项的方法，其中所述氨试剂是二乙胺；

其还包括在步骤(c)之后发生的步骤(c')：

(c')将冷HCl水溶液添加到所述第三反应混合物中，从而产生包含化合物4的第四混合物。

36.权利要求28和30-34中任一项的方法，其中所述氨试剂是甲醇氨；

其还包括在步骤(c)之后发生的步骤(c')：

(c')在降低的大气压下浓缩所述第三反应混合物，从而产生包含化合物4的第四混合物。

37.权利要求35或36的方法，其还包括在步骤(c')之后发生的步骤(c”)：

(c”)过滤所述第四混合物。

38.权利要求37的方法，其还包括用冷甲醇或乙醇冲洗所述保留物。

39. 权利要求37或38的方法，其还包括用冷丙酮冲洗所述保留物。

40.权利要求28-39中任一项的方法，其还包括

(a)将化合物1与氯化剂合并，从而产生包含化合物2的第一反应混合物，其中：

化合物1由

(1)表示；

化合物2由

(2)表示；并且

所述氯化剂是气态HCl或HCl的二噁烷溶液；以及

(b)将化合物2与烟酰胺合并，从而产生包含化合物3的第二反应混合物。

41.权利要求40的方法，其中所述氯化剂是气态HCl。

42.权利要求40的方法，其中所述氯化剂是HCl的二噁烷溶液。

43.权利要求40-42中任一项的方法，其中步骤(a)在第一溶剂中发生。

44.权利要求43的方法，其中所述第一溶剂是乙腈，并且所述氯化剂是气态HCl。

45.权利要求43的方法，其中所述第一溶剂是二噁烷，并且所述氯化剂是HCl的二噁烷溶液。

46.权利要求43的方法，其中所述第一溶剂是二氯甲烷，并且所述氯化剂是HCl的二噁烷溶液。

47.权利要求42、43、45和46中任一项的方法，其中步骤(a)还包括乙酰氯。

48.权利要求40-47中任一项的方法，其还包括在步骤(a)之后且在步骤(b)之前发生的步骤(a')：

(a')在降低的大气压下浓缩所述第一反应混合物。

49.权利要求40-48中任一项的方法，其还包括将化合物2与第二溶剂合并。

50.权利要求49的方法，其中所述第二溶剂是乙腈。

51.权利要求40-48中任一项的方法，其中步骤(b)在第二溶剂中发生。

52.权利要求51的方法，其中所述第二溶剂是乙腈。

53.权利要求40-52中任一项的方法，其还包括在步骤(b)之后发生的步骤(b')：

(b')将所述第二反应混合物与三烷基胺合并。

54.权利要求53的方法，其中所述三烷基胺是三丁胺。

55.化合物4，其根据权利要求16-54中任一项的方法制备。

56.权利要求55的化合物，其中化合物4是由化合物1以约30%、约32%、约34%、约36%、约38%、约40%、约42%、约44%、约46%、约48%、约50%或更高的产率产生。

57.权利要求55或56的化合物，其中所述化合物的纯度是95%、96%、97%、98%、99%、99.2%、99.4%、99.6%、99.8%或更高。

58.一种改善受试者的细胞健康状况的方法，其包括向所述受试者施用权利要求55-57中任一项的化合物。

59.一种在受试者中改善睡眠质量、刺激或增加REM睡眠、或治疗或预防失眠、去同步症或昼夜节律睡眠障碍的方法，其包括向所述受试者施用权利要求55-57中任一项的化合物。

60.一种在受试者中治疗或预防运动神经元疾病或ALS、或减缓或逆转运动神经元变性的进展的方法，其包括向所述受试者施用权利要求55-57中任一项的化合物。

61.一种改善生育力、治疗或预防不育症、诱导排卵、增加精子计数或增加泌乳的方法，其包括向受试者施用权利要求55-57中任一项的化合物。

62.一种治疗或预防肾损害、急性肾损伤或肾病，或增加肾血流量的方法，其包括向受试者施用权利要求55-57中任一项所述的化合物。

63.一种在受试者中治疗或预防肝损害或脂肪肝、或降低丙氨酸转氨酶(ALT)或天冬氨酸转氨酶(AST)的血清水平的方法，其包括向所述受试者施用权利要求55-57中任一项的化合物。