CN111315372A - 用于治疗肌营养不良症的艾得奈生给药方案 - Google Patents

Abstract

本发明提供了用于用脂肪酸乙酰化的水杨酸盐，例如艾得奈生治疗受试者的肌营养不良症，例如杜氏肌营养不良症DMD的方法和组合物，所述方法和组合物有效地使所述受试者中所述脂肪酸乙酰化的水杨酸盐的阈值血浆浓度在24小时时段内达到例如至少约20ng/ml的阈值血浆浓度，持续至少12小时。

Description

用于治疗肌营养不良症的艾得奈生给药方案

相关申请的交叉引用

本申请要求于2017年11月6日提交的美国临时专利申请第62/581,981号的优先权和权益，所述美国临时专利申请的内容通过引用整体并入本文。

技术领域

本发明涉及肌营养不良症领域，具体地用于治疗杜氏肌营养不良症(Duchennemuscular dystrophy，DMD)的方法，具体地用于用艾得奈生(edasalonexent)(一种脂肪酸水杨酸盐缀合物)治疗DMD的给药方案。

背景技术

杜氏肌营养不良症(DMD)是一种罕见的、严重的、威胁生命的具有X连锁隐性遗传的神经肌肉退行性疾病。由肌营养不良蛋白基因的突变引起的DMD的特征在于不存在或几乎不存在功能性肌营养不良蛋白，从而导致骨骼肌功能从幼儿时期逐步恶化。尽管护理标准有所改善，如使用糖皮质激素，但DMD仍然是一种最终致命的疾病，患者通常在三十岁死于呼吸衰竭或心力衰竭。

DMD中缺少功能性肌营养不良蛋白会使肌纤维易受机械应力、肌肉损伤、肌细胞发炎和肌肉组织再生能力下降的影响。NF-κB是在DMD中活化的转录因子家族。NF-κB转录因子家族包括p50(NF-κB1)、p52(NF-κB2)、p65(RelA)、c-Rel和RelB。这些核因子通过如IκBα、IκBβ和IκB等NF-κB抑制因子IκB以复合物的形式在细胞质中保持处于灭活状态。灭活的NF-κB复合物借助于通过如IKKβ等激酶使IκB蛋白磷酸化而从细胞质释放。调节NF-κB活性的激酶通过免疫应答或细胞应激活化。因此，在如IkB/p65/p50等细胞质NF-κB复合物中，IkB通过如IKKβ等激酶发生磷酸化并且向细胞核释放NF-κB的二聚体对，如p65/p50。在细胞核中，除了如环氧合酶2(COX-2)等酶之外，NF-κB还调节如细胞因子(如TNFα、IL-6和IL-1β)等促炎因子的基因表达，所述COX-2是所述酶中将花生四烯酸转化为前列腺素H2(PGH2)的一种酶。这些因子诱发各种组织的炎症。另外，取决于细胞环境和所释放的NF-κB核因子，NF-κB可以引起抗炎基因的表达。尽管这些途径对于生物体的存活和适应来说必不可少，但NF-κB系统的慢性活化会导致炎症病理不受控制。肌营养不良蛋白缺乏性肌肉就是这种情况，其中NF-κB的慢性活化在营养不良的小鼠和DMD患者的肌肉中发生。

在DMD患者中，通常在其它临床表现发作之前在肌肉组织中观察到NF-κB的活化。另外，DMD患者的免疫细胞和变性中的肌纤维显示出活化的NF-κB的水平提高。证据还表明，机械应力会活化肌肉中的NF-κB并且驱动NF-κB介导的炎症。在机械压力和炎症增加的肌肉(例如，四头肌和腘绳肌)中，观察到肌肉更为迅速地退化。

艾得奈生是可通过口服生物利用的NF-κB抑制剂，其包括单独抑制NF-κB的活化的多不饱和脂肪酸(PUFA)和水杨酸，所述PUFA和水杨酸通过仅易被胞内脂肪酸水解酶水解的连接子缀合在一起。已经显示，这些化合物在体外抑制NF-κB活化，并且长期治疗改善了DMD的mdx小鼠和金毛猎犬肌营养不良(GRMD)狗模型的表型(哈默斯(Hammers)等人,(2016),临床调查洞察杂志(JCI INSIGHT),1(21):e90341)。

尽管迄今为止取得了进步，但仍然需要用于治疗患者的如DMD等肌营养不良症的改进方法，包含用于用NF-κB抑制剂治疗DMD的方法。

发明内容

本发明提供了用于治疗肌营养不良症(例如，杜氏肌营养不良症(DMD))的方法和组合物。本发明部分地基于以下发现：在用脂肪酸乙酰化的水杨酸盐(例如，艾得奈生)治疗受试者的DMD时，功效由脂肪酸乙酰化的水杨酸盐处于或高于受试者的阈值血浆浓度的时间量而非血浆中的脂肪酸乙酰化的水杨酸盐的最大浓度或对脂肪酸乙酰化的水杨酸盐的总暴露量驱动。

因此，一方面，本发明提供了一种治疗有需要的受试者的肌营养不良症(例如，杜氏肌营养不良症(DMD))的方法。所述方法包括向所述受试者施用具有式I结构的化合物

或其药学上可接受的盐的给药方案，所述给药方案有效地使所述受试者中所述化合物的阈值血浆浓度在24小时时段内达到至少约20ng/ml，持续至少12小时。在某些实施例中，所述阈值血浆浓度为约20ng/ml到约200ng/ml。在某些实施例中，在24小时时段内，所述化合物处于或高于所述阈值浓度，持续至少约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时。

在某些实施例中，所述给药方案包括每天一个剂量、两个剂量或三个剂量的所述化合物。在某些实施例中，每个剂量包括约25mg/kg到约100mg/kg的所述化合物。在某些实施例中，每个剂量包括约25mg/kg到约50mg/kg的所述化合物。在某些实施例中，每个剂量包括约20mg/kg到约40mg/kg的所述化合物。在某些实施例中，每日总剂量包括约100mg/kg到约200mg/kg或约100mg/kg到约150mg/kg，例如，100mg/kg或133mg/kg。在某些实施例中，所述每日总剂量包括约100mg/kg。在某些实施例中，所述每日总剂量包括约90mg/kg到约110mg/kg。在某些实施例中，所述每日总剂量包括100mg/kg±5％、100mg/kg±10％、100mg/kg±15％或100mg/kg±20％的所述化合物。

在某些实施例中，所述给药方案包括每天三个剂量。在某些实施例中，所述三个剂量包括等量的所述化合物，例如，每个剂量包括约25mg/kg到约50mg/kg的所述化合物，或者例如，每个剂量包括约33mg/kg的所述化合物。

在某些实施例中，第一剂量和第二剂量包括的所述化合物的量小于第三剂量，例如，所述第一剂量和所述第二剂量包括的所述化合物的量约为所述第三剂量的一半。例如，在某些实施例中，所述第一剂量和所述第二剂量包括约25mg/kg到约50mg/kg的所述化合物，并且所述第三剂量包括约50mg/kg到约100mg/kg的所述化合物，例如，所述第一剂量和所述第二剂量包括约33mg/kg的所述化合物，并且所述第三剂量包括约67mg/kg的所述化合物。

在某些实施例中，所述三个剂量中的至少一个剂量的量不同于其它两个剂量的量，例如，每个剂量包括约25mg/kg到约50mg/kg的所述化合物，或者例如，每个剂量包括约20mg/kg到约40mg/kg的所述化合物。在一个实施例中，两个剂量相同，并且一个剂量不同。在一个实施例中，所有三个剂量不同。

在某些实施例中，所述三个剂量相等并且以含有250mg或100mg所述式I化合物的剂型施用。在某些其它实施例中，所述三个剂量不相等并且以含有250mg或100mg所述式I化合物的剂型施用，例如，两个相等并且一个不同，或者例如，每个剂量都不同。在某些实施例中，所述三个剂量等于100mg/kg±5％、100mg/kg±10％、100mg/kg±15％或100mg/kg±20％的所述化合物的每日总剂量。在某些实施例中，两个剂量是750mg，并且一个剂量是500mg。在某些实施例中，所述每日总剂量不超过6,000mg。

在某些实施例中，所述第一剂量在早晨施用，所述第二剂量在中午施用，并且所述第三剂量在晚上施用。在某些实施例中，每个剂量与食物一起(例如，在用餐时)施用。例如，在某些实施例中，所述第一剂量在早餐时施用，所述第二剂量在午餐时施用，并且所述第三剂量在晚餐时施用。在某些实施例中，在早餐和晚餐时施用的两个剂量大于在午餐时施用的剂量。在某些实施例中，所述剂量与含有至少8g脂肪的食物或膳食一起施用。

在某些实施例中，所述化合物以药物组合物(例如，包括50-70重量％的所述化合物的组合物)的形式施用。所述组合物可以例如进一步包括以下中的一或多种：单油酸甘油酯(类型40)、聚山梨酯80、聚乙二醇400或DL-α-生育酚。在某些实施例中，所述组合物被调配成胶囊。在某些实施例中，所述组合物口服施用。

在某些实施例中，所述方法使四头肌的炎症减少至少20％，和/或使四头肌的纤维化减少至少20％。

另一方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括50-70重量％的具有式I结构的化合物

或其药学上可接受的盐，以及任选地以下中的一种、两种、三种或四种：溶剂或稀释剂(例如，单油酸甘油酯(类型40))；表面活性剂(例如，非离子表面活性剂(例如，聚山梨酯80))；助溶剂(例如，聚乙二醇400)；和抗氧化剂(例如，DL-α-生育酚)。在某些实施例中，所述溶剂或稀释剂是单油酸甘油酯(类型40)。在某些实施例中，所述表面活性剂是非离子表面活性剂(例如，聚山梨酯80)。在某些实施例中，所述助溶剂是聚乙二醇。在某些实施例中，所述抗氧化剂是DL-α-生育酚。

下文更详细地描述了本发明的各个方面和实施例。尽管类似或等效于本文所描述的方法和材料的方法和材料可以用于实践或测试本发明，但现在对一些说明性方法和材料进行描述。根据所述描述和权利要求，本发明的其它特征、目的和优点将变得显而易见。在说明书和所附权利要求中，除非上下文另外明确规定，否则单数形式还包含复数形式。

附图说明

图1示出了在饮食中接受1.5％艾得奈生剂量的C57BL/6小鼠的血浆和骨骼肌中艾得奈生的浓度水平的线形图。

图2是示出了接受单个450mg/kg艾得奈生口服日剂量、三个150mg/kg艾得奈生口服日剂量(每日总剂量为450mg/kg)或者两个150mg/kg艾得奈生口服日剂量和一个300mg/kg艾得奈生口服日剂量(每日总剂量为600mg/kg)的C57BL/6小鼠中艾得奈生的血浆浓度水平的线形图。

图3示出了描绘了在饮食中接受1％艾得奈生剂量的mdx小鼠的四头肌炎症(左)和纤维化(右)的条形图。

图4示出了描绘了在饮食中接受单个450mg/kg艾得奈生口服日剂量和/或1％艾得奈生剂量的mdx小鼠的四头肌炎症(左)和纤维化(右)的条形图。

图5示出了描绘了接受单个450mg/kg艾得奈生口服日剂量、三个150mg/kg艾得奈生口服日剂量(每日总剂量为450mg/kg)或者两个150mg/kg艾得奈生口服日剂量和一个300mg/kg艾得奈生口服日剂量(每日总剂量为600mg/kg)的mdx小鼠的四头肌炎症(左)和纤维化(右)的条形图。

图6示出了来自

2期试验的每天接受两个33mg/kg剂量(每日总剂量为67毫克/千克/天)的受试者的艾得奈生血浆浓度。

图7示出了来自

2期试验的每天接受三个33mg/kg剂量(每日总剂量为100毫克/千克/天)的受试者的艾得奈生血浆浓度。

图8示出了包含每天三个33mg/kg剂量(每日总剂量为100毫克/千克/天)或者每天两个33mg/kg剂量和一个67mg/kg剂量(每日总剂量为133毫克/千克/天)的给药方案基于使用来自艾得奈生1期和2期临床试验的数据开发的群体PK模型的经过建模的艾得奈生血浆浓度水平。

图9示出了包含每天三个33mg/kg剂量(每日总剂量为100毫克/千克/天)或者两个33mg/kg剂量(每日总剂量为67毫克/千克/天)的给药方案基于使用来自艾得奈生1期和2期临床试验的数据开发的群体PK模型的经过建模的艾得奈生血浆浓度水平。

图10是MoveDMD I期和II期临床试验设计的示意图。

图11是示出了暴露于33mg/kg剂量、67mg/kg剂量或100mg/kg剂量时受试者的艾得奈生每日暴露量(以ng/mL*hr为单位)的条形图。

图12是示出了当受试者暴露于33mg/kg剂量、67mg/kg剂量或100mg/kg剂量时24种不同的NF-κB调节的和炎症调节的基因转录物在第1天(艾得奈生治疗之前)与第7天(艾得奈生治疗时)之间的表达水平变化的条形图。每个柱代表单独的基因转录物的数据。

图13是示出了三个剂量组(33毫克/千克/天、67毫克/千克/天和100毫克/千克/天)中24种不同的NF-κB调节的和炎症调节的基因转录物在第1天(艾得奈生治疗之前)与第7天(艾得奈生治疗时)之间的表达水平平均变化对C_trough(ng/mL)的曲线图。

图14是示出了在36周对照期和随后的60周治疗期内100毫克/千克/天艾得奈生给药组中的研究受试者的北极星移动评价量表(North Star Ambulatory Assessment)分数的平均变化率的线形图。

图15是示出了在36周对照期和随后的60周治疗期内100毫克/千克/天艾得奈生给药组中的研究受试者的10米步行/跑步(10-Meter Walk/Run)时间的平均变化率的线形图。

图16是示出了在36周对照期和随后的60周治疗期内100毫克/千克/天艾得奈生给药组中的研究受试者的4阶梯攀爬(4-stair climb)时间的平均变化率的线形图。

图17是示出了在36周对照期和随后的60周治疗期内100毫克/千克/天艾得奈生给药组中的研究受试者的站立时间(Time to Stand)的平均变化率的线形图。

图18是示出了在36周对照期和随后的48周治疗期内100毫克/千克/天艾得奈生给药组中的研究受试者的MRI-T2值的年变化率的条形图。

图19是示出了在36周对照期和随后的48周治疗期内100毫克/千克/天艾得奈生给药组中的研究受试者的脂肪分数值(fat fraction)值的变化的表格。

图20A-D是示出了在60周研究期内研究受试者的每分钟心跳数相对于基线的心率变化(图20A)、身高百分位数变化(图20B)、身体质量指数(BMI)百分位数变化(图20C)和体重百分位数变化(图20D)的线形图。

具体实施方式

本发明提供了用于治疗肌营养不良症(例如，杜氏肌营养不良症(DMD))的方法和组合物。本发明部分地基于以下发现：在用脂肪酸乙酰化的水杨酸盐(例如，艾得奈生)治疗受试者的DMD时，功效由脂肪酸乙酰化的水杨酸盐处于或高于受试者的阈值血浆浓度的时间量而非血浆中的脂肪酸乙酰化的水杨酸盐的最大浓度或对脂肪酸乙酰化的水杨酸盐的总暴露量驱动。因此，一方面，本发明提供了一种治疗有需要的受试者的肌营养不良症(例如，杜氏肌营养不良症(DMD))的方法。所述方法包括向所述受试者施用具有式I结构的化合物

或其药学上可接受的盐的给药方案，所述给药方案有效地使所述受试者中所述化合物的阈值血浆浓度在24小时时段内达到至少约20ng/ml，持续至少12小时。

在某些实施例中，所述阈值血浆浓度为约20ng/ml到约200ng/ml。例如，在某些实施例中，所述阈值血浆浓度为约20ng/ml到约200ng/ml、约20ng/ml到约175ng/ml、约20ng/ml到约150ng/ml、约20ng/ml到约125ng/ml、约20ng/ml到约100ng/ml、约20ng/ml到约75ng/ml、约20ng/ml到约50ng/ml、约20ng/ml到约25ng/ml，约25ng/ml到约200ng/ml、约25ng/ml到约175ng/ml、约25ng/ml到约150ng/ml、约25ng/ml到约125ng/ml、约25ng/ml到约100ng/ml、约25ng/ml到约75ng/ml、约25ng/ml到约50ng/ml、约50ng/ml到约200ng/ml、约50ng/ml到约175ng/ml、约50ng/ml到约150ng/ml、约50ng/ml到约125ng/ml、约50ng/ml到约100ng/ml、约50ng/ml到约75ng/ml、约75ng/ml到约200ng/ml、约75ng/ml到约175ng/ml、约75ng/ml到约150ng/ml、约75ng/ml到约125ng/ml、约75ng/ml到约100ng/ml、约100ng/ml到约200ng/ml、约100ng/ml到约175ng/ml、约100ng/ml到约150ng/ml、约100ng/ml到约125ng/ml、约125ng/ml到约200ng/ml、约125ng/ml到约175ng/ml、约125ng/ml到约150ng/ml、约150ng/ml到约200ng/ml、约150ng/ml到约175ng/ml或约175ng/ml到约200ng/ml。在某些实施例中，所述阈值血浆浓度为约200ng/ml、约175ng/ml、约150ng/ml、约125ng/ml、约100ng/ml、约75ng/ml、约50ng/ml、约25ng/ml或约20ng/ml。本文描述的活性剂(例如，艾得奈生)的血浆浓度可以通过本领域已知的方法，包含通过LC/MS/MS(液相色谱法-质谱联用)来测量。

在某些实施例中，在24小时时段内，所述化合物处于或高于所述阈值浓度，持续至少约12小时到约24小时、约14小时到约24小时、约16小时到约24小时、约18小时到约24小时、约20小时到约24小时、约22小时到约24小时、约12小时到约22小时、约14小时到约22小时、约16小时到约22小时、约18小时到约22小时、约20小时到约22小时、约12小时到约20小时、约14小时到约20小时、约16小时到约20小时、约18小时到约20小时、约12小时到约18小时、约14小时到约18小时、约16小时到约18小时、约12小时到约16小时、约14小时到约16小时或约12小时到约14小时。

在某些实施例中，在24小时时段内，所述化合物处于或高于所述阈值浓度，持续至少约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时。

下文更详细地讨论了本发明的各个特征和方面。

I.定义

为了便于理解本发明，下文对多个术语和短语进行了定义。

本文所使用的术语“受试者”和“患者”可互换使用并且是指要通过本发明的方法和组合物进行治疗的生物体。这种生物体优选地是哺乳动物(例如，人、小鼠、大鼠、豚鼠、狗、猫、马、牛、猪或非人灵长类动物(如猴子、黑猩猩、狒狒和恒河猴))，并且更优选地是人。

如本文所使用的，短语“有效量”和“治疗有效量”是指足以实现有益或期望结果的化合物(例如，本文所描述的化合物)的量。有效量可以通过一或多次施用、一或多次应用或一或多个剂量施用并且不限于特定的调配或施用途径。

本文所使用的术语“药物组合物”是指活性剂与惰性或活性载剂的组合，所述组合使所述组合物尤其适合于体内或离体诊断或治疗用途。

本文所使用的术语“药学上可接受的载剂”是指如以下等标准药物载剂中的任何标准药学载剂：磷酸盐缓冲盐溶液、水、乳剂(例如，油/水或水/油乳剂)和各种类型的润湿剂。组合物还可以包含稳定剂和防腐剂。有关载剂、稳定剂和佐剂的实例，参见马丁(Martin),雷明顿氏药学全书(Remington's Pharmaceutical Sciences),第15版,马克出版公司(Mack Publ.Co.),宾夕法尼亚州伊斯顿市(1975)。

本文所使用的术语“药学上可接受的盐”是指可以存在于所公开化合物中的酸性或碱性基团的任何盐，所述盐与药物施用相容。如本领域的技术人员已知的，所公开化合物的“盐”可以衍生自无机或有机酸和碱。酸的实例包含但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、富马酸、马来酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水杨酸、琥珀酸、对甲苯磺酸、酒石酸、乙酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、萘-2-磺酸和苯磺酸。虽然如草酸等其它酸本身不是药学上可接受的，但其可以用于制备在获得本文所描述的化合物和其药学上可接受的酸加成盐时用作中间体的盐。

碱的实例包含但不限于碱金属(例如，钠)氢氧化物、碱土金属(例如，镁)氢氧化物、氨和式NW₄ ⁺的化合物，其中W是C_1-4烷基等。

盐的实例包含但不限于：乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、氟庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、苯丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一酸盐等。盐的其它实例包含本发明的化合物的阴离子与合适的阳离子(如Na⁺、NH₄ ⁺和NW₄ ⁺(其中W可以是C_1-4烷基))等的化合物。出于治疗用途，设想本文所公开的化合物的盐是药学上可接受的。

术语“载剂”是指赋形剂和稀释剂，并且意指如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包囊材料等涉及将药剂从一个器官或身体部位携带或运转到另一个器官或身体部位的材料、组合物或媒剂。

本文所使用的术语“治疗(treating)”包含改善病状、疾病或病症等或减轻其症状的任何效果，例如，缓解、减少、调节、减轻或消除。治疗可以是治愈、改善或至少部分减轻病症。在某些实施例中，治疗是治愈疾病。

除非另有说明，否则术语“病症”是指术语“疾病”、“病状”或“病”并且与这些术语可互换使用。

本文所描述的方法和组合物可以单独使用或者与其它治疗剂和/或治疗方式组合使用。本文所使用的术语“组合”施用应理解为意味着在受试者受病症折磨的过程中向受试者递送两种(或两种以上)不同的治疗，使得患者的治疗效果在某个时间点重叠。在某些实施例中，一种治疗的递送在第二治疗的递送开始时仍然发生，使得在施用方面存在重叠。这在本文中有时称为“同时”或“并行”递送。在其它实施例中，一种治疗的递送在另一种治疗的递送开始之前结束。在任一情况的某些实施例中，治疗由于组合施用而更有效。例如，第二治疗更有效，例如，在较少的第二治疗的情况下看到相当的效果，或者相比于在不存在第一治疗的情况下施用第二治疗的情形下将看到的程度，第二治疗在更大程度上减少症状，或者在第一治疗的情况下看到类似情形。在某些实施例中，递送使得症状或与病症相关的其它参数的减少大于在递送一种治疗而不存在另一种治疗的情形下将观察到的减少。所述两种治疗的效果可以是部分加性的、完全加性的或大于加性的。递送可以使得在递送第二治疗时仍然可以检测到所递送的第一治疗的效果。

本文所使用的“慢性施用”是指连续的定期的长期施用，即周期性施用而没有实质性的中断。例如，出于治疗患者的肌营养不良症的目的，每日施用，持续至少数周或数月或数年的时间段。例如，出于治疗患者的肌营养不良症的目的，每周施用，持续至少数月或数年的时间段(例如，每周施用，持续至少六周；每周施用，持续至少12周；每周施用，持续至少24周；每周施用，持续至少48周；每周施用，持续至少72周；每周施用，持续至少96周；每周施用，持续至少120周；每周施用，持续至少144周；每周施用，持续至少168周；每周施用，持续至少180周；每周施用，持续至少192周；每周施用，持续至少216周；或者每周施用，持续至少240周)。

本文所使用的“周期性施用”是指剂量之间存在一定间隔来施用。例如，周期性施用包含以可能重复出现的固定间隔(例如，每周、每月)施用。

除非另有定义，否则本文中使用的全部技术术语和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解相同的含义。

贯穿本说明书，在组合物和试剂盒被描述为具有、包含或包括具体组分的情况下或在过程或方法被描述为具有、包含或包括特定步骤的情况下，另外设想的是，存在基本上由所叙述组分组成或由所叙述组分组成的本发明组合物和试剂盒，并且存在基本上由所叙述加工步骤组成或由所叙述加工步骤组成的根据本发明的工艺和方法。

在本申请中，在要素或组分被陈述为包含在所叙述要素或组分的列表中和/或选自所述列表时，应当理解，所述要素或组分可以是所叙述要素或组分中的任何一个要素或组分，或者所述要素或组分可以选自由所叙述要素或组分中的两个或两个以上要素或组分组成的群组。

此外，应当理解，在不脱离本发明的(无论在本文中是明确的还是隐含的)精神和范围的情况下，本文所描述的组合物或方法的要素和/或特征可以以各种方式组合。例如，当提到特定化合物时，可以在本发明的组合物的各个实施例和/或本发明的方法中使用所述化合物，除非根据上下文存在另外的理解。换句话说，在本申请内，已经以使得能够书写和绘制清楚且简洁的申请的方式描述和描绘了实施例，但是意图是并且应理解的是，在不脱离本发明教导和一或多个发明的情况下，可以以各种方式组合或分离实施例。例如，应理解的是，本文所描述和描绘的所有特征可以适用于本文所描述和描绘的一或多个发明的所有方面。

本公开中所使用的冠词“一个和一种(a/an)”是指一个或多于一个(即，至少一个)所述冠词的语法对象，除非上下文不合适。举例来说，“要素”是指一个要素或多于一个要素。

本公开中所使用的术语“和/或”意指“和”或“或”，除非另有指示。

应当理解，表达“中的至少一个”单独地包含所述表达之前的所叙述对象中的每个所叙述对象以及所叙述对象中的两个或两个以上所叙述对象的各种组合，除非根据上下文和用途存在另外的理解。应当理解，与三个或三个以上所叙述对象相关的表达“和/或”具有相同的含义，除非根据上下文存在另外的理解。

术语“包含(include)”、“包含(includes)”、“包含(including)”、“具有(have)”、“具有(has)”、“具有(having)”、“含有(contain)”、“含有(contains)”或“含有(containing)”(包含其语法等效物)总体上是开放式且非限制性的，例如，不排除另外的未叙述的要素或步骤，除非另有特别说明或根据上下文存在另外的理解。

当在定量值之前使用术语“约”时，否则本发明还包含具体定量值本身，除非另有特别说明。本文所使用的术语“约”是指标称值的±10％，除非另有指示或推断。

在提供例如聚合物的分子量并且所述分子量不是绝对值的情况下，分子量应当理解为平均分子量，除非另有指示或根据上下文存在另外的理解。

应当理解，只要本发明保持可操作性，步骤的顺序或用于执行某些动作的顺序就无关紧要。而且，可以同时进行两个或两个以上步骤或动作。

本文中对任何和所有实例或示范性语言(例如，“如”或“包含”)的使用仅旨在更好地说明本发明，而不对本发明的范围构成限制，除非有所声明。本说明书中的语言不应解释为将任何未要求保护的要素指示为对于实践本发明而言是必须的。

一般而言，指定百分比的组合物是按重量计的，除非另外指明。此外，如果变量未伴随定义，则以变量的之前的定义为准。

II.艾得奈生和其它NF-κB抑制剂

可以抑制NF-κB活性并减少炎症的脂肪酸乙酰化的水杨酸盐的一个实例是艾得奈生，也称为CAT-1004(米尔恩(Milne)等人(2014)神经肌肉病症(NEUROMUSCULARDISORDERS)24(9):825)。艾得奈生[N-(2-[(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-二十二碳-4,7,10,13,16,19-六烯酰胺基]乙基)-2-羟基苯甲酰胺]([N-(2-[(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenamido]ethyl)-2-hydroxybenzamide])是水杨酸和二十二碳六烯酸(DHA)通过乙二胺连接子共价缀合并且被设计成协同利用这两种化合物抑制NF-κB的能力的一种小分子。艾得奈生分配的CAS登记号为1204317-86-1并且具有式I的结构：

已经显示，艾得奈生增强mdx小鼠的肌肉再生、减少其肌肉退化和炎症并且保持其肌肉功能(米尔恩,J.(Milne,J.)等人,(2014)同上)。在对mdx小鼠的长期研究中，艾得奈生治疗改善膈肌功能并且增加累积跑步距离(米尔恩,J.等人,(2014)同上)。在DMD的狗模型中，艾得奈生降低NF-κB活性，这通过p65亚基与DNA的结合减少以及炎症介质TNF-α的分泌减少得以证明。在人类中，施用艾得奈生使全血中炎症的生物标志物减少。在健康的成年人中，与使用安慰剂或使用水杨酸盐和ω-3DHA作为单独分子进行的治疗相比，艾得奈生治疗还降低了NF-κB的p65亚基的水平。

设想的是，艾得奈生可以被结构上类似于艾得奈生的被称为CAT-1041的结构同系物替代，而DHA被二十碳五烯酸(EPA)替代。在对mdx小鼠的长期研究中，CAT-1041治疗保持肌肉功能、增加骨骼肌重量并且减少肌肉纤维化。CAT-1041还可以减少mdx小鼠的心肌症。

在国际专利公开第WO2010/006085A1号中描述了艾得奈生的示范性合成，并且所述示范性合成描绘如下：

简而言之，将乙二胺溶解在含有溴甲酚绿作为指示剂的水中。加入甲磺酸的水溶液，直到刚好实现蓝色到浅黄色的颜色转变为止。用乙醇稀释溶液并进行剧烈搅拌。在20℃下，同时向混合物中加入Cbz-CI于二甲氧基乙烷中的溶液和50％w/v AcOK水溶液以使指示剂保持浅黄绿色。完成加入之后，搅拌混合物并且在低温下、在真空下浓缩以除去挥发物。用水振摇残留物并进行过滤。然后用甲苯洗涤滤液，用过量的40％NaOH水溶液碱化，并且用甲苯萃取。用盐水洗涤有机层，经Na₂SO₄干燥并蒸发以得到油形式的2-氨基乙基氨基甲酸苄酯。

向2-氨基乙基氨基甲酸苄酯、咪唑、水杨酸于乙酸乙酯中的混合物中加入DCC于乙酸乙酯中的溶液。将混合物搅拌并过滤。在减压下浓缩溶液，并且通过二氧化硅色谱法纯化粗产物以得到白色固体形式的2-(2-羟基苯甲酰胺基)乙基氨基甲酸苄酯。

在H₂气氛下搅拌2-(2-羟基苯甲酰胺基)乙基氨基甲酸苄酯和Pd/C于MeOH中的混合物。将混合物过滤并且在减压下浓缩。通过二氧化硅色谱法纯化粗产物以得到白色粉末形式的N-2-(氨基乙基)2-羟基苯甲酰胺。

向N-2-(氨基乙基)2-羟基苯甲酰胺、DHA和Et₃N于CH₃CN中的混合物中加入HATU。将混合物搅拌并且在减压下浓缩。将残余物用盐水处理并且用EtOAc萃取。将合并的有机层用1M HCl、盐水、5％NaHCO₃和盐水洗涤。将有机溶液经MgSO₄干燥并且在减压下浓缩。将粗产物通过二氧化硅色谱法纯化以得到浅黄色油形式的N-(2-二十二碳-4,7,10,13,16,19-六烯酰胺基乙基)-2-羟基苯甲酰胺。CAT-1041可以通过类似的方法进行生产，除了用EPA代替DHA以外。

III.药物组合物

艾得奈生和/或CAT-1041可以与一或多种药学上可接受的载剂一起调配以促进递送，例如，口服递送或皮下递送。

艾得奈生和/或CAT-1041的药物组合物可以被调配成以固体或液体形式施用，包含适于以下的药物组合物：(1)口服施用，例如，胶囊(水性或非水性溶液或悬浮液)、片剂、大丸剂、粉剂、颗粒剂和糊剂；(2)肠胃外施用，例如，通过以无菌溶液或悬浮液或缓释调配物的形式皮下注射、肌肉内注射、静脉内注射或硬膜外注射；(3)例如以应用于皮肤的霜剂、软膏或控释贴剂或喷雾剂形式局部应用；(4)舌下施用；(5)经皮施用；或(6)经鼻施用。

组合物可以方便地以单位剂型呈现并且可以通过制药业领域中熟知的任何方法来制备。可以与载剂材料组合以产生单个剂型的活性成分的量将根据正在被治疗的宿主和特定施用模式而变化。组合物可以根据常规的混合、制粒或包衣方法来制备。

活性成分(例如，艾得奈生)的胶囊、片剂或其它固体剂型可以用包衣和/或外壳，如肠溶包衣和药物调配领域中熟知的其它包衣来制备。所述剂型还可以调配成使活性成分在其中缓释或控释，例如使用不同比例的羟丙基甲基纤维素以提供期望的释放曲线、其它聚合物基质、脂质体和/或微球。所述剂型可以借助于例如通过细菌截留过滤器进行过滤或者借助于掺入可以溶于无菌水或其它某种无菌可注射介质中的无菌固体组合物的形式的灭菌剂来灭菌，然后立即使用。这些组合物还可以任选地含有乳浊剂并且其组成可以使得其仅或优选在胃肠道的某一部分中任选地以延迟的方式释放一或多种活性成分。用于口服施用活性成分(例如，艾得奈生)液体剂型可以包含药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液、悬浮液、糖浆剂和酏剂。

说明性药物组合物是包含本文所描述的艾得奈生以及药学上可接受的载剂的胶囊(例如，明胶胶囊)或片剂，所述载剂如：a)溶剂或稀释剂；b)表面活性剂；c)助溶剂；或d)抗氧化剂。示范性溶剂或稀释剂包含纯净水；甘油三酯油(如氢化或部分氢化的植物油)或其混合物；玉米油；橄榄油；葵花油；红花油；鱼油(如EPA或DHA)、其酯或甘油三酯或其混合物；或单油酸甘油酯(类型40)。示范性表面活性剂包含十二烷基硫酸钠、磺基琥珀酸二辛酯钠、聚山梨酯80、聚山梨酯20、十六烷基三乙基溴化铵、聚环氧乙烷-聚环氧丙烷共聚物、Cremophor EL、司盘80、司盘20、吐温20、吐温40、吐温60、吐温80、Brij L23、Brij 35、Labrasol、Plurol isostearique、琥珀酸磺酸二辛酯钠、PEG-35蓖麻油(聚乙二醇甘油蓖麻酸酯(Macrogolglycerol ricinoleate))、PEG-40氢化蓖麻油(聚乙二醇甘油羟基硬脂酸酯(Macrogolglycerol hydroxystearate))、二乙二醇、单乙基醚、1,2-辛二醇、Epikuron、1,2-丙二醇、苯甲醇、Aerosol OT、十二烷基葡糖苷、椰油酰胺丙基甜菜碱、磷脂酰胆碱、2-乙基-1,3-己二醇、辛酸/癸酸单-/二-甘油酯、聚山梨酯、Brij、Tagat、异丙醇、丙醇、糖脂、类脂、单己基磷酸钠、丙二醇、正丁醇、甘油基油酸酯、聚乙二醇40脂肪酸衍生物、四甘醇、O-烷基甘油、十二烷基甘油、十四烷基甘油、牛磺脱氧胆酸酯、蔗糖单月桂酸酯、蔗糖二月桂酸酯、异辛醇、Epikuron、Oramix、1,2-己二醇、双-2-(乙基己基)磺基琥珀酸酯、正丙醇、1,2-丙二醇、甘油单油酸酯、己醇、蔗糖月桂酸酯、Plurololeat、十六烷基三甲基溴化铵或癸醇。示范性助溶剂包含聚乙二醇400、聚乙二醇3350、聚乙二醇300、乙醇、异丙醇、丙二醇、丁二醇、戊二醇、己二醇、三甘醇、四甘醇、二丙二醇、二丁二醇、甘油、二甲基异山梨醇、四氢糠基醇聚乙二醇醚、N-甲基-2-吡咯烷酮、1-甲基-2-吡咯烷酮、二甲基亚砜、二甲基乙酰胺、乳酸、乙醇酸、二氯甲烷、甲基-乙基酮、乙酸乙酯或亚甲基二甲基醚。示范性抗氧化剂包含DL-α-生育酚、没食子酸丙酯、叔丁基对苯二酚(tBHQ)、丁基羟基茴香醚(BHA)或丁基羟基甲苯(BHT)、亚硫酸钠、N-乙酰半胱氨酸、抗坏血酸、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸钠、L-半胱氨酸、焦亚硫酸钠、谷胱甘肽、半胱氨酸、卡托普利(captopril)、N-乙酰基半胱氨酸、谷胱甘肽、抗坏血酸钠、L-半胱氨酸、Na₂-EDTA、Na₂-EDTA-Ca、甲巯咪唑、槲皮素(quercetin)、熊果素(arbutin)、芦荟苦素(aloesin)、N-乙酰氨基葡萄糖、α-生育酚阿魏酸酯、MAP(抗坏血酸磷酸镁)、苯甲酸钠、L-苯丙氨酸、DMSA(琥巯酸)、DPA(D-青霉胺)、盐酸曲恩汀、二巯基丙醇、氯碘羟喹(clioquinol)、硫代硫酸钠、TETA、TEPA、姜黄素(curcumin)、新铜试剂(neocuproine)、单宁(tannin)、铜宗(cuprizone)、亚硫酸氢钠、硫辛酸、CB4、CB3、AD4、AD6、AD7、维生素E、二叔丁基甲基苯酚、叔丁基甲氧基苯酚、多酚、生育酚、泛醌或咖啡酸。

艾得奈生还可以以脂质体递送系统(如小的单层囊泡、大的单层囊泡和多层囊泡)的形式施用。脂质体可以由含有胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱的多种磷脂形成。在一些实施例中，脂质组分膜与本文所描述的类似物的水溶液水合以形成包封类似物的脂质层，如美国专利第5,262,564号所述。

肠胃外可注射施用通常用于皮下、肌肉内或静脉内注射和输注。注射剂可以以常规形式制备成液体溶液或悬浮液或适于在注射前溶解在液体中的固体形式。

本发明的药物组合物可以含有0.1重量/体积％到约80重量/体积％、约5重量/体积％到约60重量/体积％或约1重量/体积％到约20重量/体积％的活性成分(例如，艾得奈生)。在某些实施例中，本发明的药物组合物含有约50重量％到约70重量％的活性成分。例如，药物组合物可以含有约50重量％到约65重量％、约50重量％到约60重量％、约50重量％到约55重量％、约55重量％到约70重量％、约55重量％到约65重量％、55重量％到约60重量％、约60重量％到约70重量％、约60重量％到约65重量％或约65重量％到约70重量％的活性成分(例如，艾得奈生)。

在某些实施例中，本发明的药物组合物可以包括以下的一种、两种、三种或三种以上：溶剂或稀释剂(例如，单油酸甘油酯(类型40))；表面活性剂(例如，非离子表面活性剂(例如，聚山梨酯80))；助溶剂(例如，聚乙二醇400)；和抗氧化剂(例如，DL-α-生育酚)。

在某些示范性剂型中，每kg组合物包括500-700g活性成分、150-250g单油酸甘油酯(类型40)、100-200g聚山梨酯80、10-70g聚乙二醇400和0.5-5g DL-α-生育酚。

在某些示范性剂型中，每kg组合物包括550-650g活性成分、175-230g单油酸甘油酯(类型40)、130-180g聚山梨酯80、20-60g聚乙二醇400和1-4g DL-α-生育酚。

在某些示范性剂型中，每kg组合物包括550-625g活性成分、170-220g单油酸甘油酯(类型40)、130-170g聚山梨酯80、20-60g聚乙二醇400和1-4g DL-α-生育酚。

在某些示范性剂型中，每kg组合物包括585-615g活性成分、180-220g单油酸甘油酯(类型40)、140-180g聚山梨酯80、20-60g聚乙二醇400和1-4g DL-α-生育酚。

在某些示范性剂型中，每kg组合物包括590-610g活性成分、180-220g单油酸甘油酯(类型40)、140-180g聚山梨酯80、20-60g聚乙二醇400和1-4g DL-α-生育酚。

在某些示范性剂型中，每kg组合物包括585-650g活性成分、180-250g单油酸甘油酯(类型40)、140-200g聚山梨酯80、20-60g聚乙二醇400和1-4g DL-α-生育酚。

III.治疗应用

本发明提供了用于治疗有需要的受试者的肌营养不良症(例如，杜氏肌营养不良症(DMD))的方法和组合物。

在某些实施例中，治疗延迟疾病进展、减缓或减少步行能力丧失、减少肌肉炎症、减少肌肉损伤、改善肌肉功能、减少肺功能丧失和/或增强肌肉再生或其任何组合。在某些实施例中，治疗维持、延迟或减缓疾病进展。在某些实施例中，治疗维持步行能力或减少步行能力丧失。在某些实施例中，治疗维持肺功能或减少肺功能丧失。在某些实施例中，治疗维持或增加患者的稳定步行距离，如通过例如6分钟步行测试(6MWT)所测量的。在某些实施例中，治疗维持或减少步行/跑步10米的时间(即，10米步行/跑步测试)。在某些实施例中，治疗维持或减少从仰卧状态站立的时间(即，站立测试的时间)。在某些实施例中，治疗维持或减少爬四阶标准楼梯的时间(即，四阶梯攀爬测试)。在某些实施例中，治疗维持或减少患者的肌肉炎症，如通过例如MRI(例如，腿部肌肉的MRI)所测量的。在某些实施例中，MRI测量T2和/或脂肪分数以标识肌肉退化。MRI可以标识由炎症、水肿、肌肉损伤和脂肪浸润造成的肌肉结构和组成变化。在某些实施例中，通过北极星移动评价量表来测量肌肉力量。

在某些实施例中，治疗减少肌肉炎症、减少肌肉损伤、改善肌肉功能和/或增强肌肉再生。例如，治疗可以稳定、维持、改善或减少受试者的炎症。治疗还可以例如稳定、维持、改善或减少受试者的肌肉损伤。治疗可以例如稳定、维持或改善受试者的肌肉功能。另外，例如，治疗可以稳定、维持、改善或增强受试者的肌肉再生。在某些实施例中，治疗维持或减少患者的肌肉炎症，如通过例如磁共振成像(MRI)(例如，腿部肌肉的MRI)所测量的。

在某些实施例中，治疗通过6分钟步行测试(6MWT)进行测量。在某些实施例中，治疗通过10米步行/跑步测试进行测量。在某些实施例中，治疗使患者的肌肉炎症减少或降低。在某些实施例中，患者的肌肉炎症通过MRI成像进行测量。在某些实施例中，治疗通过4阶梯攀爬测试进行测量。在某些实施例中，治疗通过站立时间测试进行测量。在某些实施例中，治疗通过北极星移动评价量表进行测量。

在某些实施例中，患者已经丧失从仰卧状态独立站起的能力。在某些实施例中，患者在使用本发明的方法或组合物进行治疗之前至少一年已经丧失从仰卧状态独立站起的能力。在某些实施例中，患者在开始本发明的方法或组合物的一年内已经丧失从仰卧状态独立站起的能力。在某些实施例中，患者在开始用本发明的方法或组合物进行治疗的两年内已经丧失从仰卧状态独立站起的能力。

在某些实施例中，在开始治疗之后，患者维持步行能力，持续至少24周。在某些实施例中，与安慰剂对照物相比，紧接着在开始治疗之后，患者的步行能力丧失减少，持续至少24周。

在某些实施例中，治疗通过测定患者血清中的炎症生物标志物进行测量。在某些实施例中，治疗使炎症生物标志物中的一或多种炎症生物标志物或炎症生物标志物的组合的水平降低。例如，在某些实施例中，炎症生物标志物是以下中的一或多种或以下的组合：细胞因子(例如IL-1、IL-6、TNF-α)；C-反应蛋白(CRP)；瘦素；脂联素和肌酸激酶(CK)。在某些实施例中，与用安慰剂治疗相比，治疗降低NF-κB的p65亚基的水平。炎症生物标志物可以通过本领域熟知的方法进行测定，例如，如克鲁兹-古兹曼(Cruz-Guzman)等人(2015)国际生物医学研究(BIOMED RESEARCH INTERNATIONAL)891972所述。

在某些实施例中，治疗维持或增加患者的稳定步行距离，如通过例如6分钟步行测试(6MWT)所测量的，例如麦克唐纳(McDonald)等人(2010)肌肉与神经(MUSCLE NERVE)42:966-74中所描述的6MWT。可以将6分钟步行距离(6MWD)的变化表示为绝对值、百分比变化或预测值％的变化。在某些实施例中，相对于健康的同龄人，在6MWT中，治疗使受试者从20％缺陷维持或改善稳定步行距离。DMD患者在6MWT中相对于健康同龄人的典型表现的表现可以通过计算预测值％来确定。例如，对于男性，可以使用以下等式计算预测的6MWD％：196.72+(39.81×年龄)–(1.36×年龄²)+(132.28×以米为单位的身高)。对于女性，可以使用以下等式计算预测的6MWD％：188.61+(51.50×年龄)–(1.86×年龄²)+(86.10×以米为单位的身高)(亨里克松(Henricson)等人(2013)公共科学图书馆趋势(PLOS CURR)5)。在某些实施例中，用反义寡核苷酸进行的治疗使患者的稳定步行距离从基线增加到大于3米、5米、6米、7米、8米、9米、10米、15米、20米、25米、30米或50米(包含之间的所有整数)。

DMD患者的肌肉功能丧失可能在正常的儿童生长和发育的背景下发生。实际上，尽管存在进行性肌肉损伤，但患有DMD的年龄较小的儿童在约1年的时间内在6MWT期间的步行距离可能增加。在某些实施例中，将来自DMD患者的6MWD与正常发育的对照受试者以及与来自年龄和性别匹配的受试者的现有规范数据进行比较。在某些实施例中，可以使用拟合到规范数据的基于年龄和身高的等式来解释正常生长和发育。此类等式可以用于将6MWD转换为患有DMD的受试者的预测值百分比(预测值％)。在某些实施例中，对预测的6MWD％数据的分析代表用于对正常生长和发育进行解释的方法，并且可以显示，早龄期(例如，小于或等于7岁)的功能获得代表DMD患者的稳定能力而非改善的能力(亨里克松等人(2013)同上)。

另外的示范性肌营养不良症包含贝氏肌营养不良症(Becker's musculardystrophy，BMD)、先天性肌营养不良症(congenital muscular dystrophy)、远端型肌营养不良症(distal muscular dystrophy)、埃默里-德赖富斯肌营养不良症(Emery–Dreifussmuscular dystrophy)、面肩胛肱型肌营养不良症(facioscapulohumeral musculardystrophy)、肢带型肌营养不良症(limb-girdle muscular dystrophy)、强直性肌营养不良症(myotonic muscular dystrophy)和眼咽型肌营养不良症(oculopharyngealmuscular dystrophy)。

在某些实施例中，所述方法使四头肌的炎症减少至少20％，和/或使四头肌的纤维化减少至少20％。

本发明的方法和组合物还可以用于治疗受试者的炎症疾病。炎症可以与炎症疾病或炎症促进疾病的疾病相关。在身体组织有炎症的地方可能发生炎症疾病。所述炎症疾病包含局部炎症反应和全身性炎症。此类疾病的实例包含但不限于：器官移植排斥；由器官移植引起的再氧化损伤(格鲁普(Grupp)等人(1999)分子与细胞心脏病学杂志(J.MOL.CELL.CARDIOL)31:297-303)，所述器官移植包含但不限于以下器官的移植：心、肺、肝和肾；关节的慢性炎症疾病，包含关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎和与骨吸收增加相关的骨疾病；炎症肠疾病，如回肠炎、溃疡性结肠炎、巴雷斯特综合症(Barrett'ssyndrome)和克罗恩病(Crohn's disease)；炎症肺部疾病，如哮喘、成人呼吸窘迫综合征、慢性阻塞性气道疾病和囊性纤维化；眼睛的炎症疾病，包含角膜营养不良、沙眼、盘尾丝虫病、葡萄膜炎、交感性眼炎和眼内炎；牙龈的慢性炎症疾病，包含牙龈炎和牙周炎；肾脏的炎症疾病，包含尿毒症并发症、肾小球肾炎和肾病；皮肤的炎症疾病，包含硬化性皮炎、牛皮癣和湿疹；中枢神经系统的炎症疾病，包含神经系统的慢性脱髓鞘疾病、多发性硬化症、AIDS相关的神经退化和阿尔茨海默氏病(Alzheimer'disease)、传染性脑膜炎、脑脊髓炎、帕金森氏病(Parkinson'disease)、亨廷顿病(Huntington's disease)、肌萎缩性侧索硬化症和病毒性或自身免疫性脑炎；代谢性疾病，如II型糖尿病；预防I型糖尿病；血脂异常；高甘油三酯血症；糖尿病并发症，包含但不限于青光眼；视网膜病；黄斑水肿；肾病(如微量白蛋白尿和进行性糖尿病肾病)；多发性神经病；糖尿病性神经病；动脉粥样硬化性冠状动脉疾病；外周动脉疾病；非酮症性高血糖高渗性昏迷；单发性神经病；自主神经病；关节问题；以及皮肤或粘膜并发症(如感染、胫部斑、念珠菌感染或糖尿病性类脂质渐进性坏死)；免疫复合物血管炎、全身性红斑狼疮；心脏的炎症疾病，如心肌病、局部缺血性心脏病、高胆固醇血症和动脉粥样硬化；以及可能具有显著炎症成分的各种其它疾病，包含子痫前症；慢性肝衰竭、脑和脊髓创伤以及癌症。炎症疾病还可以是身体的全身性炎症，举例来说，革兰氏阳性或革兰氏阴性休克、出血性或过敏性休克或由癌症化学疗法响应于促炎性细胞因子而诱发的休克，例如，与促炎性细胞因子相关的休克。此类休克可能例如由作为癌症治疗施用的化学治疗剂诱发。其它病症包含：抑郁症；肥胖症；过敏性疾病；急性心血管事件；心律不齐；预防猝死；炎症性肌病(如皮肌炎、包涵体肌炎和多发性肌炎)；癌症恶病质以及由外科手术和创伤引起的炎症。

在某些实施例中，本发明的方法或组合物与皮质类固醇组合施用。皮质类固醇是一类化学物质，其包含在脊椎动物的肾上腺皮质中自然产生的类固醇激素和在实验室中合成的这些激素的类似物。皮质类固醇参与各种生理过程，包含应激反应、免疫反应和对炎症、碳水化合物代谢、蛋白质分解代谢、血液电解质水平和行为的调节。示范性皮质类固醇包含倍他米松、布地奈德、可的松、地塞米松、氢化可的松、甲基泼尼松龙、泼尼松龙、泼尼松或地夫可特。在某些实施例中，皮质类固醇是在本发明的方法或组合物之前、与其一起或之后施用。

在某些实施例中，本发明的方法或组合物与外显子跳跃剂(例如，Exondys

(伊特普森(eteplirsen)；参见美国专利第7,807,816号、第7,960,541号、第8,486,907号、第9,416,361号和第9,506,058号))组合施用，Exondys

已经被美国食品药品监督管理局(United States Food and Drug Administration)批准用于治疗已经确认易受51号外显子跳跃影响的DMD基因发生突变的患者的DMD。设想的是，其它外显子跳跃剂(例如，45号外显子跳跃剂(如SRP-4045)(参见美国专利第8,524,880号、第9,447,415号和第9228,187号))、其它外显子跳跃剂(如屈沙培森(drisapersen))和53号外显子跳跃剂(如SRP-4053)(参见美国专利第8,455,636号、第9,024,007号和第9,416,361号)可以与本文所描述的活性成分(例如，艾得奈生)组合施用。

在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，受试者为七岁或七岁以上。在某些实施例中，受试者介于约6个月与约4岁之间。在某些实施例中，受试者介于约4岁与7岁之间。

IV.给药/施用

利用活性成分(例如，艾得奈生)的剂量方案是根据包含以下的各种因素选择的：患者的类型、种类、年龄、体重、性别和医疗状况；要治疗的病状的严重性；施用途径；患者的肾或肝功能；以及所使用的特定化合物。

在某些实施例中，向患者施用的脂肪酸乙酰化的水杨酸盐(例如，艾得奈生)的剂量介于约10mg/kg到约500mg/kg之间(例如，约10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、250、300、350、400、450或500mg/kg)。在某些实施例中，向患者施用的活性成分(例如，艾得奈生)的剂量为约10mg/kg到约100mg/kg、约10mg/kg到约75mg/kg、约10mg/k到约50mg/kg、约10mg/kg到约25mg/kg、约25mg/kg到约100mg/kg、约25mg/kg到约75mg/kg、约25mg/kg到约50mg/kg、约50mg/kg到约100mg/kg、约50mg/kg到约75mg/kg、约75mg/kg到约100mg/kg或约90mg/kg到约110mg/kg。在某些实施例中，向患者施用的活性成分(例如，艾得奈生)的剂量介于约25mg/kg与50mg/kg之间(例如，约33mg/kg)或者介于约50mg到约100mg/kg之间(例如，约67mg/kg)。可替代地，剂量可以以绝对值的形式给予，例如10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg、110mg、120mg、130mg、140mg、150mg、160mg、170mg、180mg、190mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、950mg、1000mg、1500mg、2000mg、2500mg、3000mg、3500mg、4000mg、4500mg、5000mg、5500mg、6000mg、6500mg、7000mg、7500mg、8000mg、8500mg、9000mg、9500mg或10,000mg。在某些实施例中，所述剂量以一或多个含有100mg、250mg、500mg或1000mg活性成分(例如，艾得奈生)的剂型施用。例如，在一个实施例中，所述剂型含有100mg艾得奈生。在另一个实施例中，所述剂型含有250mg艾得奈生。在某些实施例中，每日总剂量为约1500mg到约3000mg或约2000mg到约3000mg。在某些实施例中，每日总剂量以三个分开的范围为约500mg到约1000mg或约670mg到约1000mg的剂量递送。

在某些实施例中，每天一次向患者施用一个剂量的活性成分(例如，艾得奈生)。在某些实施例中，每天多于一次向患者施用一个剂量的活性成分(例如，艾得奈生)。例如，在某些实施例中，例如每天两次、每天三次或每天四次向患者施用一个剂量的活性成分(例如，艾得奈生)。

在每天向患者施用多于一个剂量的活性成分(例如，艾得奈生)的某些实施例中，每个剂量包括等量的脂肪酸乙酰化的水杨酸盐。在其它实施例中，一或多个剂量包括的活性成分(例如，艾得奈生)的量可以不同于另一个剂量。

在某些实施例中，给药方案包括每天三个剂量。在某些实施例中，所述三个剂量包括等量的所述化合物，例如，每个剂量包括约25mg/kg到约50mg/kg的所述化合物，例如，每个剂量包括约33mg/kg的所述化合物。在某些实施例中，第一剂量和第二剂量包括的所述活性成分(例如，艾得奈生)的量小于第三剂量，例如，所述第一剂量和所述第二剂量包括的所述活性成分(例如，艾得奈生)的量约为所述第三剂量的一半。例如，在某些实施例中，所述第一剂量和所述第二剂量包括约25mg/kg到约50mg/kg的所述活性成分(例如，艾得奈生)，并且所述第三剂量包括约50mg/kg到约100mg/kg的所述活性成分(例如，艾得奈生)，例如，所述第一剂量和所述第二剂量包括约33mg/kg的所述活性成分(例如，艾得奈生)，并且所述第三剂量包括约67mg/kg的所述活性成分(例如，艾得奈生)。在某些实施例中，在所述三个每日剂量中，至少一个剂量的量不同于另一个剂量。在某些实施例中，在所述三个每日剂量中，两个剂量相同，并且一个剂量不同。例如，在某些实施例中，每个剂量为约20mg/kg到约40mg/kg。例如，两个剂量为约37.5mg/kg，而其余的剂量为约25mg/kg。在某些实施例中，所有三个剂量不同。例如，在某些实施例中，每个剂量为约20mg/kg到约40mg/kg。

在某些实施例中，所述第一剂量在早晨施用，所述第二剂量在中午施用，并且所述第三剂量在晚上施用。在某些实施例中，每个剂量与食物一起(例如，在用餐时)施用。例如，在某些实施例中，所述第一剂量在早餐时施用，所述第二剂量在午餐时施用，并且所述第三剂量在晚餐时施用。当所述剂量与食物一起服用时，可以调整食物内容以促进活性化合物的吸收。例如，所述剂量可以与高脂膳食一起服用。例如，在一个实施例中，所述剂量与含有至少1g、至少2g、至少3g、至少4g、至少5g、至少6g、至少7g、至少8g、至少9g、至少10g、至少11g、至少12g、至少13g、至少14g、至少15g、至少16g、至少17g、至少18g、至少19g或至少20g脂肪的膳食一起服用。在一个特定实施例中，所述剂量与含有至少8g脂肪的膳食一起服用。在某些情况下，早餐和晚餐时施用相同剂量，而午餐时施用较小剂量。在某些情况下，在每日施用三个剂量并且所述剂量不相等的情况下，在午餐时服用最小剂量。在某些实施例中，在每日施用三个剂量并且所述剂量不相等的情况下，在晚餐时服用最大剂量。

在某些实施例中，向患者施用的活性成分(例如，艾得奈生)的每日总剂量介于约20mg/kg与约1000mg/kg之间(例如，约20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或1000mg/kg)。在某些实施例中，向患者施用的活性成分(例如，艾得奈生)的每日总剂量为约100mg/kg到约200mg/kg、约100mg/kg到约175mg/kg、约100mg/kg到约150mg/kg、约100mg/kg到约125mg/kg、约125mg/kg到约200mg/kg、约125mg/kg到约175mg/kg、约125mg/kg到约150mg/kg、约150mg/kg到约200mg/kg、约150mg/kg到约175mg/kg或约175mg/kg到约200mg/kg。在某些实施例中，活性成分(例如，艾得奈生)的每日总剂量介于约100mg/kg与200mg/kg之间，例如，约100mg/kg或约133mg/kg。

在某些实施例中，向患者施用的活性成分(例如，艾得奈生)的每日总剂量为约90mg/kg到约110mg/kg。在某些实施例中，向患者施用的活性成分(例如，艾得奈生)的每日总剂量为100mg/kg。在某些实施例中，向患者施用的活性成分(例如，艾得奈生)的每日总剂量为100mg/kg±每日总剂量的5％。在某些实施例中，向患者施用的活性成分(例如，艾得奈生)的每日总剂量为100mg/kg±10％的每日总剂量。在某些实施例中，向患者施用的活性成分(例如，艾得奈生)的每日总剂量为100mg/kg±15％的每日总剂量。在某些实施例中，向患者施用的活性成分(例如，艾得奈生)的每日总剂量为100mg/kg±20％的每日总剂量。

在某些实施例中，以三个分开的剂量向患者施用活性成分(例如，艾得奈生)的每日总剂量，其中所述三个剂量中的每个剂量都是250mg的倍数(例如，250mg、500mg、750mg、1000mg、1250mg、1500mg、1750mg或2000mg等)或100mg的倍数(例如，100mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg、1600mg、1700mg、1800mg、1900mg或2000mg等)。在某些实施例中，所述剂量以一或多个含有100mg或250mg活性成分(例如，艾得奈生)的剂型施用。在某些实施例中，所述三个分开的剂量相同并且是250mg或100mg的倍数。在某些实施例中，在所述三个分开的剂量中，两个剂量相等并且一个剂量不同，并且所述剂量是250mg或100mg的倍数。在某些实施例中，所述三个分开的剂量各自不同，但是所述剂量是250mg或100mg的倍数。在某些实施例中，所述三个分开的剂量相同、是250mg或100mg的倍数并且提供100mg/kg±10％的每日总剂量。在某些实施例中，在所述三个分开的剂量中，两个剂量相等并且一个剂量不同，所述剂量是250mg或100mg的倍数并且提供100mg/kg±10％的每日总剂量。在某些实施例中，所述三个分开的剂量各自不同，但是所述剂量是250mg或100mg的倍数并且提供100mg/kg±10％的每日总剂量。在某些实施例中，所述三个分开的剂量相同、是250mg或100mg的倍数并且提供100mg/kg±15％的每日总剂量。在某些实施例中，在所述三个分开的剂量中，两个剂量相等并且一个剂量不同，所述剂量是250mg或100mg的倍数并且提供100mg/kg±15％的每日总剂量。在某些实施例中，所述三个分开的剂量各自不同，但是所述剂量是250mg或100mg的倍数并且提供100mg/kg±15％的每日总剂量。在某些实施例中，所述三个分开的剂量相同、是250mg或100mg的倍数并且提供100mg/kg±20％的每日总剂量。在某些实施例中，在所述三个分开的剂量中，两个剂量相等并且一个剂量不同，所述剂量是250mg或100mg的倍数并且提供100mg/kg±20％的每日总剂量。在某些实施例中，所述三个分开的剂量各自不同，但所述剂量是250mg或100mg的倍数并且提供100mg/kg±20％的每日总剂量。在某些实施例中，活性成分(例如，艾得奈生)的每日总剂量不超过6000mg。

本文所述的方法和药物组合物长期施用给患者以治疗肌营养不良症。例如，所述方法或药物组合物可以施用至少数周或数月或数年的时间段(例如，至少2周、4周、6周、8周、10周、12周、24周、36周、48周、72周、96周、120周、144周、168周、180周、192周、216周或至少240周)。

如上所述，本文公开的调配物或制剂可以口服给予、胃肠外给予、全身给予、局部给予、直肠给予或肌内施用。所述调配物或制剂通常以适于每种施用途径的形式给予。例如，所述调配物或制剂以片剂或胶囊形式通过注射、吸入、眼用洗剂、软膏、栓剂等施用；通过注射、输注或吸入施用；通过洗剂或软膏局部施用；通过栓剂直肠施用。在某些实施例中，活性成分(例如，艾得奈生)可以以鼻内形式通过局部使用合适的鼻内媒剂或者使用本领域普通技术人员熟知的那些形式的经皮贴剂通过经皮途径施用。在某些其它实施例中，剂型口服施用。在某些实施例中，剂型以胶囊或片剂的形式口服施用。

在某些实施例中并且如实例4所示，与非治疗对照期相比，用100毫克/千克/天艾得奈生以三个相等剂量(例如，33mg/kg)治疗患有杜氏肌营养不良症的儿童在至少60周的治疗期内提供了临床上有意义的疾病进展减缓(例如，如通过10米步行/跑步、4阶梯攀爬和站立时间所展示的)并且稳定了北极星移动评价量表(NSAA)分数。

实例

本公开通过以下实例进一步说明，所述实例不应被解释为将本公开的范围或精神限制于本文中描述的具体程序。应理解的是，提供所述实例的目的是说明某些实施例的并且并不由此旨在限制本公开的范围。

实例1：评估C57BL/6小鼠的艾得奈生给药方案药代动力学

在饮食中和/或通过口服强饲向C57BL/6小鼠施用艾得奈生。使用药代动力学(PK)建模关于已经在艾得奈生人临床试验中测试的67毫克/千克/天和100毫克/千克/天的剂量标识合适的给药量和定时。具体而言，在饮食中向小鼠施用1.5％艾得奈生；以单个日剂量口服递送450毫克/千克/天；以三个等分剂量口服递送450毫克/千克/天；或者以两个150毫克/千克/剂量和一个300毫克/千克/剂量口服递送600毫克/千克/天。对于三个每日剂量的给药方案，在7:00am、中午和5:00pm递送剂量。

表1中描绘了每个组的给药方案。每个组包含12只小鼠。

表1

对于在饮食中施用艾得奈生的动物，从给药的第七天开始，每4小时通过LC/MS/MS测量艾得奈生浓度，持续24小时。对于口服施用艾得奈生的动物，从给药的第三天开始，在给药之后的第0.25、0.5、1、2、4、6和24小时通过LC/MS/MS测量艾得奈生浓度。

图1中描绘了在饮食中接受1.5％艾得奈生的剂量的第1组的所指示组织中的艾得奈生浓度，并且表2中示出了此组的PK参数。

表2

组织	C<sub>mean</sub>(ng/mL)	C<sub>max</sub>(ng/mL)	C<sub>min</sub>(ng/mL)	AUC(hr*ng/mL)
					血浆	22.4	44.6	10.7	524.0
腓肠肌	332.8	532.3	149.4	7615

图2中描绘了第2治疗组(接受以单个日剂量口服递送的450毫克/千克/天)、第3治疗组(接受以三个等分剂量口服递送的450毫克/千克/天)和第4治疗组(接受以两个150毫克/千克/剂量和一个300毫克/千克/剂量口服递送的600毫克/千克/天)的血浆艾得奈生浓度，并且表3中示出了这些组的PK参数。第2组显示了对艾得奈生的间歇性高暴露，并且显示了1316hr*ng/mL的AUC，这大约是第1组的2.5倍。

表3

组	T<sub>max</sub>(小时)	C<sub>max</sub>(ng/mL)(±SE)	AUC<sub>0-24h,day 3</sub>(hr*ng/mL)(±SE)
				2	0.5	604±83.3	1316±126
3	0.5	452±47.6	1365±211
				4	0.5	278±46.3	2269±587

实例2：评估mdx小鼠的艾得奈生给药方案

用不同的艾得奈生给药方案对年轻mdx小鼠进行持续四周的治疗。mdx小鼠是用于研究杜氏肌营养不良症(DMD)的有用且广为接受的动物模型(曼恩(Mann)等人(2001)美国国家科学院院刊(PROC.NATL.ACAD.SCI.)98(1):42-7)。mdx小鼠由于肌营养不良蛋白基因内的遗传突变而缺乏全长肌营养不良蛋白的表达。

在饮食中和/或通过口服强饲向小鼠施用艾得奈生。具体而言，在小鼠的饮食中向其施用1％艾得奈生；以单个日剂量口服递送450毫克/千克/天；以三个等分剂量口服递送450毫克/千克/天；和/或以两个150毫克/千克/剂量和一个300毫克/千克/剂量口服递送600毫克/千克/天。对于三个每日剂量的给药方案，在7:00am、中午和5:00pm递送剂量。

表4中描绘了每个治疗组的给药方案。每个治疗组包含10-11只小鼠。

表4

对动物进行持续四周的治疗，将其处死，并且收集组织进行组织学分析。为了评估炎症和纤维化，对四头肌进行苏木精和伊红(H&E)和天狼星红(picrosirius red)(胶原蛋白)组织化学染色处理。使用ImageJ对每只动物的2-4个完整横切片进行数字分析，其中苏木精染色的核面积确定为炎症浸润的量度，并且天狼星红染色的面积确定为纤维化的量度。

图3中描绘了如通过组织化学染色所测量的第2治疗组的炎症和纤维化。将之前的研究延伸到老龄小鼠中，饮食中1％的艾得奈生减少了年轻mdx小鼠的炎症和纤维化。与来自实例1的PK数据相结合，这些结果显示，在饮食中施用艾得奈生产生持续的低暴露并减少炎症和纤维化。

图4中描绘了第3、第4和第5治疗组的炎症和纤维化。结果显示，第4治疗组未使炎症或纤维化明显减少。因此，在饮食中施用艾得奈生(第2组；图3)是有效的，而以单个日450毫克/千克/剂量施用艾得奈生(第4组；图4)是无效的，尽管单个日450毫克/千克/剂量的AUC为约2.5倍，如在实例1中的C57BL/6小鼠中所观察到的。这些结果显示，通过口服强饲实现的对艾得奈生的间歇性高暴露是无效的。

图5中描绘了第6和第7治疗组的炎症和纤维化。结果显示，给药频率驱动功效，并且通过每天给药三次增加时间覆盖率改善了治疗效果。以单个日450mg/kg剂量施用艾得奈生(第4组；图4)是无效的，但施用三个日150mg/kg剂量(每日总剂量相同)(第6组；图5)是有效的，尽管这两种治疗产生了在C57BL/6小鼠的PK研究中的类似的最大(C_max)浓度和最小浓度以及药物总暴露量(AUC)。将最后一个日剂量加倍(第7组)进一步驱动了功效。据信，最后一个剂量在较长夜间低谷期期间提供了另外的暴露。

总之，这些结果表明，主要是超过一定阈值药物浓度的最大时间，而不是C_max或药物总暴露量驱动艾得奈生的功效。

实例3：对人艾得奈生给药方案进行建模

据显示，在包含三项针对成年人的安慰剂对照研究的1期临床项目中，艾得奈生具有安全性和良好的耐受性，并且抑制经激活的NF-κB途径(唐纳文(Donovan)等人(2017)临床药理学杂志(J.CLIN.PHARMACOL.)57(5):627-639)。在

2期试验(NCT02439216)和其开放标签扩展中，艾得奈生还显示出对所招募的受DMD影响的4-7岁的男孩具有积极治疗效果。

图6和图7示出了来自

2期试验的受试者的艾得奈生血浆浓度。受试者每天接受两个33mg/kg剂量(每日总剂量为67毫克/千克/天)或每天接受三个33mg/kg的剂量(每日总剂量为100毫克/千克/天)。在任一组的33mg/kg的第一日剂量之后进行浓度测量。

使用来自1期和2期艾得奈生临床试验的数据开发群体PK模型。对三种给药方案的血浆浓度和PK参数进行建模：每天两个33mg/kg剂量(每日总剂量为87mg/kg)；每天三个33mg/kg剂量(每日总剂量为100毫克/千克/天)；或者每天两个33mg/kg剂量和一个67mg/kg剂量(每日总剂量为133毫克/千克/天)。图8和9以及表5示出了结果。

表5

结果显示，100毫克/千克/天给药方案(33mg/kg，TID)的C_min处于mdx小鼠模型中的有效水平范围内，并且将夜间剂量加倍以达到133毫克/千克/天剂量方案增加了超过阈值的时间。此外，如图9所示，与67mg/kg(33mg/kg BID)剂量相比，100mg/kg(33mg/kgTID)剂量使超过阈值的时间显著增加。

这些结果与本文中实例1和2的结果的组合为评估等分的100毫克/千克/天临床剂量(三个33mg/kg剂量)和不等分的133毫克/千克/天临床剂量(每天两个33mg/kg剂量和一个67mg/kg剂量)提供了临床前支持，因为数据表明这些剂量可以提供足够的超过阈值的时间以驱动治疗人肌营养不良症(例如，DMD)的功效。

实例4：评估人DMD患者的艾得奈生

设计MoveDMD试验(参见图10)以评估艾得奈生的功效、安全性/耐受性、药代动力学(PK)、药效学(PD)和剂量反应。MoveDMD试验的第一期部分是为期1周的研究，所述研究用于评估以2个分开的剂量给予的33毫克/千克/天和67毫克/千克/天以及以3个分开的剂量给予的100毫克/千克/天下的安全性、PK和PD。

MoveDMD试验的第二期部分和开放标签扩展(OLE)部分招募了患有DMD的4到7岁男孩。第2期是一项为期12周的安慰剂对照研究，包括两个每日两次给予33mg/kg(BID；67毫克/千克/天；n＝10)或每日三次给予33mg/kg(TID；100毫克/千克/天；n＝10)的群组以及一个安慰剂群组(n＝10)。OLE中的患者继续使用任一艾得奈生剂量方案。

MoveDMD试验的第二期的剂量时间表是基于包含以下的非临床数据和临床数据进行选择的：(1)在动物模型中观察到的暴露/功效关系；(2)小儿DMD患者的1期安全性、耐受性和PD；和(3)人PK。

与艾得奈生治疗之前的对照期期间的变化率相比，以33mg/kg剂量每天三次(TID)施用艾得奈生(100毫克/千克/天)在60周内保留了肌肉功能并且减缓了DMD疾病进展。还观察到，该100毫克/千克/天给药方案的效果与含有133毫克/千克/天(早餐时33mg/kg、午餐时33mg/kg并且晚餐时67mg/kg)的效果相同，并且副作用较少。

4.A DMD患者的全身性暴露达到在成人中观察到NF-κB抑制的水平

在一项成人研究中，在约100毫克/千克/天的剂量下，在全血中观察到NF-κB驱动基因的表达变化。在MoveDMD研究中，当每日两次(总剂量67mg/kg)或每日三次(总剂量100mg/kg)给予33mg/kg的剂量时，全身性暴露达到在成人研究中观察到NF-κB的水平。图11示出了与显示NF-κB抑制的成人的平均每日暴露量相比的在II期研究招募的男孩的每日暴露水平(ng/ml*hr)。如所示出的，67毫克/千克/天和100毫克/千克/天的剂量提供与成人研究中显示的有效抑制NF-κB的那些水平相当的每日暴露水平。

4.B DMD患者的持续性艾得奈生暴露与NF-kB抑制相关

为了确定给定艾得奈生给药方案对NF-κB抑制的影响，在来自DMD患者的全血样品中对大量NF-κB调节的以及炎症相关的基因转录物的表达水平进行测量。

NF-κB调节的以及炎症相关的基因选自博德研究所(Broad Institute)的霍尔马克(HALLMARK)TNF/NF-κB基因集(里贝尔宗(Liberzon)等人,(2015),细胞系统(CellSystems),1(6):417-425)。在艾得奈生治疗之前和之后一周后对DMD男孩进行抽血并将血液收集到PAXgene RNA管(凯杰公司(Qiagen))中。提取RNA并进行测序以直接测量每个患者两个时间点的全血中转录物的丰度，并且将治疗后一周的转录物丰度与治疗前的值进行比较以确定所选转录物中的每个转录物的相对变化。对一个剂量群组内的所有患者的每个基因的该比率进行求平均，并且在图12中通过平均值+/-SEM的柱示出。小于1的值指示用艾得奈生治疗一周后转录物减少。

如图12所示，在接受100毫克/千克/天剂量的组中测量的所有24个转录物都存在统计学上显著的降低，而在67毫克/千克/天剂量下的降低并不那么明显。在33毫克/千克/天的剂量下，总体上没有发现降低。

对患者的所有24个转录物的比率进行求平均，并且在图13中使用表示每个单独患者的该平均值的符号示出。绘制该平均值相对于每个剂量群组的平均艾得奈生C_trough值(在x轴上以ng/ml表示)的图。

图13示出了33毫克/千克/天、67毫克/千克/天和100毫克/千克/天艾得奈生剂量中的每个剂量的基因转录物的平均倍数变化与平均C_trough水平(ng/mL)的关系。如图13所示，较高的平均C_trough水平与NF-κB和炎症相关的基因转录物的最高降低相关。具体而言，与33毫克/千克/天和67毫克/千克/天剂量相比，100毫克/千克/天剂量的C_trough水平最高并且相关基因转录物的减少最大，从而显示，艾得奈生治疗一周后，转录物的丰度与平均C_trough水平呈负相关。因此，结果显示，在这三种给药方案中，100毫克/千克/天(每日三次33mg/kg)在减少DMD患者的NF-κB调节的和炎症相关的基因转录物方面最有效，并且表明C_trough是艾得奈生功效的驱动因素。

4.C艾得奈生治疗稳定患有DMD的男孩的NSAA和其它功能性量度

北极星移动评价量表(NSAA)是专门为有步行能力的患有DMD的男孩设计的经过验证的功能量表并测量年轻男孩的整体功能。如图14所示，在100毫克/千克/天的治疗期(60周)期间，研究受试者的疾病进展减缓，如通过与非治疗对照期(艾得奈生给药期之前36周)期间的NSAA分数的变化率相比稳定的NSAA分数所测量的。

10米步行/跑步、4阶梯攀爬和站立时间全都是用作对患有DMD的男孩的功能量度的定时测试。在这些测试中的每一个测试中，如图15-17所示，在为期60周的100毫克/千克/天艾得奈生治疗期期间，研究受试者在完成这些身体任务方面的平均速度变化率与非治疗对照期期间(治疗期之前36周)期间的变化率相比保持稳定。在治疗期期间，所有定时功能测试值均保持稳定。

因此，这些结果表明，与非治疗对照期相比，以三个33mg/kg的剂量(100毫克/千克/天)治疗DMD患者在60周治疗期内提供了临床上有意义的疾病进展减缓。

4.D艾得奈生显著改善DMD研究受试者的MRI T2水平的变化率

通过MRI评估的MR横向弛豫时间常数(MRI-T₂；也称为体T₂)对DMD中的疾病病理的几种病理生理特征(包含肌肉损伤、炎症和脂肪浸润)敏感，并且提供了一种用于在较宽的年龄范围内监测疾病病理的方法。此外，使用黄金标准、质子MRS(¹H-MRS)或3点狄克逊(Dixon)成像技术测量的肌肉中脂肪浸润的比例(脂肪分数)与疾病进展有关，并且与功能测试上的表现相关。(威尔考克斯(Willcocks)等人,(2016),神经病学年报(ANN.NEUROL.),79(4):535-47；巴纳德(Barnard)等人,(2018),《公共科学图书馆：综合(PLOS ONE)》,13(3):E0194283)。这些是DMD中疾病进展的无创量度，随着年龄的增长而升高并增加；这些量度的变化与功能变化密切相关，并且预测未来功能里程碑的丧失。

如图18所示，与非治疗期期间(艾得奈生治疗期之前36周)的变化率相比，研究受试者的MRI-T2值的年变化率(毫秒/年)在100毫克/千克/天艾得奈生治疗期(60周)期间显著提高。MRI-T2值是5块小腿肌肉的复合值。MRI-T2值的稳定与通过先前讨论的功能评估所观察到的DMD疾病进展的伴随性减缓相一致。

此外，如图19所示，在接受100毫克/千克/天48周后，通过MR光谱法所评估的研究受试者的脂肪分数变化为0.85％(比目鱼肌(腓肠肌))和5.9％(股外侧肌(四头肌))，而在艾得奈生施用前的26周非治疗对照期期间，脂肪分数变化为2.6％(比目鱼肌)和10.4％(股外侧肌)。因此，与非治疗期相比，以100毫克/千克/天施用艾得奈生可有效降低这些肌肉的脂肪分数增加率。这相比于在比目鱼肌的1年变化为3％并且股外侧肌的1年变化为7％(尽管超过75％的研究受试者正服用慢性类固醇)的ImagingDMD自然史研究中观察到的脂肪分数的变化，也是一种改善。

因此，这些MRI量度证实，100毫克/千克/天(3个33毫克/千克/天的剂量)在48周内使患有DMD的男孩实现了积极的艾得奈生治疗效果。

4.E艾得奈生在没有安全信号的情况下耐受性良好

在以100mg/kg施用艾得奈生的情况下，在研究受试者中未观察到安全性方面的不良结果。药物具有良好的耐受性，其中大多数不良事件本质上是轻度的并且大部分与胃肠道有关。未观察到血液学、化学、肾脏或肾上腺功能或钙或磷酸盐水平的不良趋势。如图20所示，研究受试者的心率随着年龄规范值下降，并且观察到身高和体重随年龄适当增加，如治疗期内基于类似年龄的男孩的CDC生长曲线图(CDC Growth Chart)的百分位数的身高、体重和身体质量指数(BMI)的稳定百分位数所示。

4.F结论

这些数据表明，持续暴露和超过阈值的时间是药效学信号和功效的驱动因素，在100毫克/千克/天(三个33mg/kg剂量)下可以达到阈值水平以上的持续暴露，并且与非治疗对照期相比，这种给药显示出研究受试者的疾病进展在1年内得到临床上有意义的减缓。

实例5：用于患有DMD的儿童的艾得奈生给药方案

可以向体重为20kg的患有DMD的儿童开具100mg/kg艾得奈生的每日剂量，从而产生2,000mg的总剂量。此总剂量分为三个剂量。第一剂量与早餐一起口服，第二剂量与午餐一起口服，并且第三剂量与晚餐一起口服。所有剂量与含有至少8g脂肪的食物一起服用以帮助吸收。尽管期望将所述剂量分为三个相等的剂量，但是因为艾得奈生可以以250mg胶囊的形式获得，所以这是不可能的。为了最小化胶囊的数量，可能期望以如下方式施用2,000mg剂量：在早餐时施用750mg(3×250mg胶囊)、在午餐时施用500mg(2×250mg胶囊)并且在晚餐时施用750mg(3×250mg胶囊)。如果3个剂量不均匀，则优选地可以在早餐或晚餐时施用一或多个较大剂量并且在午餐时施用较小剂量。

可以向体重为28kg的患有DMD的儿童开具100mg/kg艾得奈生的每日剂量，从而产生2,800mg的总剂量。此总剂量分为三个剂量。第一剂量与早餐一起口服，第二剂量与午餐一起口服，并且第三剂量与晚餐一起口服。所有剂量与含有至少8g脂肪的食物一起口服以帮助吸收。尽管期望将所述剂量分为三个相等的剂量，但是因为艾得奈生可以以250mg胶囊的形式获得，所以这是不可能的。因此，可以将2,800mg剂量增加到3000mg，并且以如下方式施用：在早餐时施用1,000mg(4×250mg胶囊)、在午餐时施用1,000mg(4×250mg胶囊)并且在晚餐时施用1,000mg(4×250mg胶囊)。由于艾得奈生的量以胶囊形式提供，因此总剂量为3,000mg。然而，总实际剂量(3,000毫克/天)未超过推荐剂量的10％(即，2800毫克/天)。在这种情况下，实际剂量比推荐剂量多7.1％。在替代性方法中，可以用100mg胶囊替代午餐时的第四250mg胶囊，使得儿童在早餐时接受1,000mg，在午餐时接受850mg并且在晚餐时接受1,000mg以实现2850mg的每日总剂量，在这种情况下，实际剂量比2800mg的建议剂量多1.8％。

通过引用并入

本文所提到的专利和科学文件的每一个的全部公开内容出于所有目的通过引用并入。

等效形式

可以在不背离本发明的精神或实质特征的情况下以其它具体形式来实施本发明。因此，前述实施例应当在所有方面被视为是说明性的而不限制本文所述的发明。因此，本发明的范围由所附权利要求而非前述说明指示，并且落入权利要求的等效含义和范围内的所有变化意图被包含在其中。

Claims (40)

1.一种治疗有需要的受试者的肌营养不良症的方法，所述方法包括向所述受试者施用具有式I结构的化合物

或其药学上可接受的盐的给药方案，所述给药方案有效地使所述受试者中所述化合物的阈值血浆浓度在24小时时段内达到至少约20ng/ml，持续至少12小时。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述阈值血浆浓度为约20ng/ml到约200ng/ml。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中在24小时时段内，所述化合物处于或高于所述阈值浓度持续至少约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时或约24小时。

4.根据权利要求1到3中任一权利要求所述的方法，其中所述给药方案包括每天一个剂量、两个剂量或三个剂量的所述化合物。

5.根据权利要求4所述的方法，其中每个剂量包括约25mg/kg到约100mg/kg的所述化合物。

6.根据权利要求1到5中任一权利要求所述的方法，其中每日总剂量包括约100mg/kg到约200mg/kg或约100mg/kg到约150mg/kg。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述每日总剂量包括约133mg/kg。

8.根据权利要求6所述的方法，其中所述每日总剂量包括约100mg/kg。

9.根据权利要求6所述的方法，其中所述每日总剂量包括约90mg/kg到约110mg/kg。

10.根据权利要求6所述的方法，其中所述每日总剂量包括100mg/kg±5％、100mg/kg±10％、100mg/kg±15％或100mg/kg±20％。

11.根据权利要求1到10中任一权利要求所述的方法，其中所述给药方案包括每天三个剂量。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述三个剂量包括等量的所述化合物。

13.根据权利要求11或12所述的方法，其中每个剂量包括约25mg/kg到约50mg/kg的所述化合物。

14.根据权利要求11或12所述的方法，其中每个剂量包括约20mg/kg到约40mg/kg。

15.根据权利要求12到14中任一权利要求所述的方法，其中每个剂量包括约33mg/kg的所述化合物。

16.根据权利要求11、13或14所述的方法，其中第一剂量和第二剂量包括小于第三剂量的量的所述化合物。

17.根据权利要求11到15中任一权利要求所述的方法，其中所述三个剂量相等并且以含有250mg或100mg所述式I化合物的剂型施用。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述三个剂量等于100mg/kg±5％、100mg/kg±10％、100mg/kg±15％或100mg/kg±20％的每日总剂量。

19.根据权利要求17或18所述的方法，其中所述每日剂量不超过6,000mg。

20.根据权利要求11到19中任一权利要求所述的方法，其中所述第一剂量在早晨施用，所述第二剂量在中午施用，并且所述第三剂量在晚上施用。

21.根据权利要求4到20中任一权利要求所述的方法，其中每个剂量与食物一起施用。

22.根据权利要求20所述的方法，其中每个剂量在用餐时施用。

23.根据权利要求20所述的方法，其中所述第一剂量在早餐时施用，所述第二剂量在午餐时施用，并且所述第三剂量在晚餐时施用。

24.根据权利要求23所述的方法，其中在早餐和晚餐时施用的两个剂量大于在午餐时施用的剂量。

25.根据权利要求4到24中任一权利要求所述的方法，其中所述剂量与含有至少8g脂肪的食物一起服用。

26.根据权利要求1到25中任一权利要求所述的方法，其中所述化合物以药物组合物的形式施用。

27.根据权利要求26所述的方法，其中所述组合物进一步包括以下中的一或多种：单油酸甘油酯(类型40)、聚山梨酯80、聚乙二醇400或DL-α-生育酚。

28.根据权利要求26所述的方法，其中所述组合物包括50-70重量％的所述化合物。

29.根据权利要求26到28中任一权利要求所述的方法，其中所述组合物调配成胶囊。

30.根据权利要求1到29中任一权利要求所述的方法，其中所述化合物口服施用。

31.根据权利要求1到30中任一权利要求所述的方法，其中所述方法使四头肌的炎症减少至少20％。

32.根据权利要求1到31中任一权利要求所述的方法，其中所述方法使四头肌的纤维化减少至少20％。

33.根据权利要求1到32中任一权利要求所述的方法，其中所述肌营养不良症是杜氏肌营养不良症DMD。

34.根据权利要求1到33中任一权利要求所述的方法，其中所述受试者是人。

35.一种药物组合物，其包括50-70重量％的具有式I结构的化合物

或其药学上可接受的盐，以及任选地以下中的一种、两种、三种或四种：溶剂或稀释剂；表面活性剂；助溶剂；和抗氧化剂。

36.根据权利要求35所述的药物组合物，其中所述溶剂或稀释剂是单油酸甘油酯(类型40)。

37.根据权利要求35或36所述的药物组合物，其中所述表面活性剂是非离子表面活性剂。

38.根据权利要求37所述的药物组合物，其中所述非离子表面活性剂是聚山梨酯80。

39.根据权利要求35到38中任一权利要求所述的药物组合物，其中所述助溶剂是聚乙二醇400。

40.根据权利要求35到39中任一权利要求所述的药物组合物，其中所述抗氧化剂是DL-α-生育酚。

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