CN111304275A - 一种用于检测金针菇黑腐病的培养基及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于金针菇生产的技术领域，具体的涉及一种用于检测金针菇黑腐病的培养基及其制备方法。所述培养基，包括以下原料：PAF培养基、甘油、酒石酸钠、溴麝香草酚蓝和结晶紫。该培养基用于检测金针菇黑腐病的试验周期短、检测高效可靠。

Description

一种用于检测金针菇黑腐病的培养基及其制备方法
技术领域
本发明属于金针菇生产的技术领域，具体的涉及一种用于检测金针菇黑腐病的培养基及其制备方法。
背景技术
金针菇学名毛柄金钱菌，又称毛柄小火菇、构菌、冬菇、朴菰、冻菌、金菇、智力菇等，其菌柄细长，似金针菜，故称金针菇。金针菇质地脆嫩，营养丰富，氨基酸含量高于一般菇类，尤其氨基酸含量特别高，能促进记忆、开发智力，特别有利于儿童的健康成长和智力发育，因此又有“增智菇”、“智力菇”之称。黑腐病在金针菇培养中是一个非常大的祸患，造成金针菇黑腐病的病原菌是托拉斯假单胞杆菌，该病通常有很高的传染性，稍不注意会引起大面积发病的情况；而且只要发生病害，只能通过清除染病栽培瓶的方式来处理，给企业造成巨大的损失。
传统的金针菇工厂化生产中，只有在金针菇出菇过程中病原菌肉眼可见时才清楚是否染病，但此时已经造成了实质性的损失。因此亟待解决金针菇工厂化生产中发现黑腐病滞后性问题，避免给企业造成重大损失。
发明内容
本发明的目的在于针对目前金针菇工厂化生产中发现黑腐病的滞后性，造成企业重大损失、浪费资源人力的技术问题而提供一种用于检测金针菇黑腐病的培养基及其制备方法，该培养基用于检测金针菇黑腐病的试验周期短、检测高效可靠。
本发明的技术方案为：一种用于检测金针菇黑腐病的培养基，包括以下原料：PAF培养基(全名为假单孢菌琼脂培养基F)、甘油、酒石酸钠、溴麝香草酚蓝和结晶紫。
所述用于检测金针菇黑腐病的培养基，包括以下配比原料：PAF培养基40g，甘油10g，酒石酸钠2g，质量体积百分比为0.2％的溴麝香草酚蓝溶液15mL，质量体积百分比为0.1％的结晶紫溶液5mL。
所述用于检测金针菇黑腐病的培养基的制备方法，首先将所述甘油调和成甘油水溶液；将所述溴麝香草酚蓝调和成溴麝香草酚蓝溶液；将所述结晶紫调和成结晶紫溶液；然后将PAF培养基加入至甘油水溶液中；再依次加入酒石酸钠、溴麝香草酚蓝溶液以及结晶紫溶液；最后用甘油水溶液定容。
所述溴麝香草酚蓝和结晶紫均先用乙醇进行溶解。
所述甘油水溶液的质量体积浓度为10g/L；所述溴麝香草酚蓝溶液具体制备如下：将所述溴麝香草酚蓝先用体积分数为70％的乙醇溶解后再用蒸馏水调和成质量体积百分比为0.2％的溴麝香草酚蓝溶液；所述结晶紫溶液具体制备如下：将所述结晶紫先用体积分数为70％的乙醇溶解后再用蒸馏水调和成质量体积百分比为0.1％的结晶紫溶液。
所述用于检测金针菇黑腐病的培养基的制备方法，首先将所述甘油调和成质量体积浓度为10g/L的甘油水溶液；取1g溴麝香草酚蓝溶解于1mL体积分数为70％的乙醇中，再加入500ml蒸馏水调和成质量体积百分比为0.2％的溴麝香草酚蓝溶液；取1g结晶紫溶解于1mL体积分数为70％的乙醇中，再加入1000mL蒸馏水调和成质量体积百分比为0.1％的结晶紫溶液；然后将40g的PAF培养基加入至900mL甘油水溶液中；再依次加入2g的酒石酸钠、15mL的溴麝香草酚蓝溶液以及5mL的结晶紫溶液；最后用甘油水溶液定容至1000mL。
本发明的有益效果为：本发明所述用于检测金针菇黑腐病的培养基，包括以下原料：PAF培养基、甘油、酒石酸钠、溴麝香草酚蓝和结晶紫。其中PAF培养基对于假单胞有分离和增殖作用；而加入酒石酸钠、溴麝香草酚蓝、结晶紫会将病原菌托拉斯假单胞杆菌染成绿色，生长后期会呈墨绿色，仅需将搔菌后培养分离水接入培养基中涂布培养72小时便能够精准的检测到金针菇生产中是否含有病原菌，解决了金针菇发病显著造成实际损失才发现黑腐病的滞后性问题。
采用该培养基检测金针菇黑腐病具有较强的推广价值，成本低廉，检测迅速，能够实现早发现早防治，为企业排除安全隐患，挽回重大损失，推动食用菌产业的发展。
附图说明
图1为对照实验样品在实施例1培养基中培养三天的生长情况，其中平板边缘为根霉和木霉的真菌菌落。
图2为对照实验样品在对比例1培养基中培养三天的生长情况。
图3为对照实验样品在对比例2培养基中培养三天的生长情况。
图4为对照实验样品在对比例3培养基中培养三天的生长情况。
图5为对照实验样品在对比例4培养基中培养三天的生长情况。
图6为未染病、染病初期、染病后期金针菇的对比图。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
所述用于检测金针菇黑腐病的培养基，包括以下配比原料：PAF培养基40g，甘油10g，酒石酸钠2g，质量体积百分比为0.2％的溴麝香草酚蓝溶液15mL，质量体积百分比为0.1％的结晶紫溶液5mL；pH为7.2。
所述用于检测金针菇黑腐病的培养基的制备方法，首先将所述甘油调和成质量体积浓度为10g/L的甘油水溶液；取1g溴麝香草酚蓝溶解于1mL体积分数为70％的乙醇中，再加入500ml蒸馏水调和成质量体积百分比为0.2％的溴麝香草酚蓝溶液；取1g结晶紫溶解于1mL体积分数为70％的乙醇中，再加入1000mL蒸馏水调和成质量体积百分比为0.1％的结晶紫溶液；然后将40g的PAF培养基加入至900mL甘油水溶液中；再依次加入2g的酒石酸钠、15mL的溴麝香草酚蓝溶液以及5mL的结晶紫溶液；最后用甘油水溶液定容至1000mL。
对比例1
普通的PDA培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，自来水1000mL，自然pH。
对比例2
培养基配比：PAF培养基40g，甘油10g，酒石酸钠2g，质量体积百分比为0.3％的溴麝香草酚蓝溶液15mL，质量体积百分比为0.2％的结晶紫溶液5mL。其余配制方法同实施例1，在此不做赘述。
对比例3
培养基配比：PAF培养基40g，甘油10g，酒石酸钠2g，质量体积百分比为0.1％的溴麝香草酚蓝溶液15mL，质量体积百分比为0.05％的结晶紫溶液5mL。其余配制方法同实施例1，在此不做赘述。
对比例4
培养基配比：PAF培养基40g，甘油10g，质量体积百分比为0.2％的溴麝香草酚蓝溶液15mL，质量体积百分比为0.1％的结晶紫溶液5mL。其余配制方法同实施例1，在此不做赘述。
下面进行金针菇黑腐病的检测对照实验：
实验步骤：
(1)采集染病金针菇作为样品备用；
(2)以实施例1所述培养基作为实验组培养基，以对比例1、2、3、4所述普通的PDA培养基、改变配比的培养基作为对照组培养基；
(3)将实验组培养基和对照组培养基分别装入五个三角瓶中在101kpa，121℃条件下高压灭菌40分钟，待冷却至40℃时在超净工作台上操作倒平板，每个平板倒20ml，其中实验组培养基倒入1号平板，对照组培养基倒入2、3、4、5号平板，超净工作台使用前开启紫外灯灭菌30min；
(4)待平板倒入的培养基凝固后，将步骤(1)采集的样品分别接入1号平板和2、3、4、5号平板中，封口后放入25℃恒温培养箱培养三天，观察生长情况。
实验结论：
图1可见普通PDA培养基中病原菌为常见的乳白色，大部分细菌PDA培养基菌落颜色均为乳白色，颜色一致,无法鉴别是否是致病菌。图2可见实施例1所述培养基能够使病原菌(托拉斯假单孢杆菌)显绿色，培养后期显墨绿色，而且其他病菌不显同样颜色，具有良好的准确性。而对比例2中，增加溴麝香草酚蓝和结晶紫的浓度配比则使培养基颜色过深，所染病原菌颜色与其它病菌颜色趋同，不易分辨。对比例3中减少溴麝香草酚蓝和结晶紫的浓度配比则使培养基颜色过浅，对病原菌的染色程度也很小，也不易与其它病菌进行区分。对比例4中，去掉酒石酸钠的使用则结果不会对病原菌进行染色。
根据上述实施对比例情况，本发明最佳实施配比为：PAF培养基40g，甘油10g，酒石酸钠2g，质量体积百分比为0.2％的溴麝香草酚蓝溶液15mL，质量体积百分比为0.1％的结晶紫溶液5mL；同时为了达到对病原菌精准显色的目的，所述检测培养基的原料之间是相互协同配合，缺一不可。

Claims (6)

1.一种用于检测金针菇黑腐病的培养基，其特征在于，包括以下原料：PAF培养基、甘油、酒石酸钠、溴麝香草酚蓝和结晶紫。
2.根据权利要求1所述用于检测金针菇黑腐病的培养基，其特征在于，包括以下配比原料：PAF培养基40g，甘油10g，酒石酸钠2g，质量体积百分比为0.2％的溴麝香草酚蓝溶液15mL，质量体积百分比为0.1％的结晶紫溶液5mL。
3.一种权利要求1所述用于检测金针菇黑腐病的培养基的制备方法，其特征在于，首先将所述甘油调和成甘油水溶液；将所述溴麝香草酚蓝调和成溴麝香草酚蓝溶液；将所述结晶紫调和成结晶紫溶液；然后将PAF培养基加入至甘油水溶液中；再依次加入酒石酸钠、溴麝香草酚蓝溶液以及结晶紫溶液；最后用甘油水溶液定容。
4.根据权利要求3所述用于检测金针菇黑腐病的培养基的制备方法，其特征在于，所述溴麝香草酚蓝和结晶紫均先用乙醇进行溶解。
5.根据权利要求4所述用于检测金针菇黑腐病的培养基的制备方法，其特征在于，所述甘油水溶液的质量体积浓度为10g/L；所述溴麝香草酚蓝溶液具体制备如下：将所述溴麝香草酚蓝先用体积分数为70％的乙醇溶解后再用蒸馏水调和成质量体积百分比为0.2％的溴麝香草酚蓝溶液；所述结晶紫溶液具体制备如下：将所述结晶紫先用体积分数为70％的乙醇溶解后再用蒸馏水调和成质量体积百分比为0.1％的结晶紫溶液。
6.根据权利要求5所述用于检测金针菇黑腐病的培养基的制备方法，其特征在于，首先将所述甘油调和成质量体积浓度为10g/L的甘油水溶液；取1g溴麝香草酚蓝溶解于1mL体积分数为70％的乙醇中，再加入500ml蒸馏水调和成质量体积百分比为0.2％的溴麝香草酚蓝溶液；取1g结晶紫溶解于1mL体积分数为70％的乙醇中，再加入1000mL蒸馏水调和成质量体积百分比为0.1％的结晶紫溶液；然后将40g的PAF培养基加入至900mL甘油水溶液中；再依次加入2g的酒石酸钠、15mL的溴麝香草酚蓝溶液以及5mL的结晶紫溶液；最后用甘油水溶液定容至1000mL。
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