CN111297976A - 一种提高百药煎中没食子酸含量的方法 - Google Patents

一种提高百药煎中没食子酸含量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及中药制药技术领域，尤其为一种提高百药煎中没食子酸含量的方法，包括以下步骤：包括以下步骤：A、制备原材料；B、制取培养基；C、制取微生物种子液；D、初步发酵：①将绿茶汁与五倍子粉混合搅拌均匀，获得软材a，②在软材a中加入酵糟(酒曲)粉，混合搅拌均匀，获得软材b，③将软材b置于恒温恒湿环境中培养2天，获得软材c；E、调配与成型；F、制取成品。本发明通过进行预处理与分步混合，使得原材料得以充分分解、发酵，尤其使特定的诱导酶(单宁酶)生产量得到提高，进而提高百药煎中没食子酸的含量，并通过改良操作流程、改善环境，使得百煎药的发酵稳定连续，从而缩短了百药煎的生产周期。

Description

一种提高百药煎中没食子酸含量的方法
技术领域
本发明涉及中药制药技术领域，具体为一种提高百药煎中没食子酸含量的方法。
背景技术
百煎药，一味传统中药，是由五倍子、绿茶等原料经发酵制成的块状物，主要用于呼吸系统、消化系统的治疗与调理。从书籍记载来看，在百药煎的发酵生产中，以看到表面长满“白毛(即没食子酸的结晶)”为标志，这种“白毛”也是百药煎中的主要活性成分之一。
传统的百煎药制药工艺中，其发酵周期需7天以上，且根据检测显示，没食子酸的含量大约为16-17％，即发酵周期较长、有效成分偏低，而导致上述问题的具体原因有以下几点：
1、在传统工艺中，直接将各种原材料进行混合、发酵，使得微生物在酵糟(酒曲)中较长时期地处于休眠状态、萌发缓慢，尤其是五倍子的分解速度慢，且用于催化鞣酸转化成没食子酸的诱导酶(单宁酶)产生速度慢、量少，进而导致百药煎中没食子酸的含量少；
2、在传统工艺中，一般通过手动搅拌，使得原材料之间的混合不够充分，且发酵所需温湿度环境难以长期维持最佳，从而导致百煎药生产周期的延长。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提高百药煎中没食子酸含量的方法，具备没食子酸的含量增多、生产周期缩短的优点，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种提高百药煎中没食子酸含量的方法，包括以下步骤：
A、制备原材料：①取一定量的五倍子粉和绿茶，将绿茶加水煎熬制，然后过滤出绿茶汁，②取一定量的酵糟(酒曲)，并将其粉碎处理，③选取四种菌株并分类装存；
B、制取培养基：PDA固体培养基、LB固体培养基、PDA液体培养基以及LB液体培养基；
C、制取微生物种子液：①菌株活化，②种子液制备；
D、初步发酵：①将绿茶汁与五倍子粉混合搅拌均匀，获得软材a，②在软材a中加入酵糟(酒曲)粉，混合搅拌均匀，获得软材b，③将软材b置于恒温恒湿环境中培养2天，获得软材c；
E、调配与成型：①在软材c中加入五倍子粉、种子液，混合搅拌均匀，②加入无菌水调节含水质量百分比，③使用造粒机造粒，获得产品a；
F、制取成品：①将产品a置于恒温恒湿环境中培养3天，获得产品b，②对产品b进行烘干，获得成品。
优选的，所述步骤A-③中四种菌株分别如下，
菌株HMB-2(芽胞杆菌科芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌)；
菌株HMB-5(芽胞杆菌科芽孢杆菌属巨大芽孢杆菌)；
菌株HMY-1(伯顿丝孢毕赤酵母)；
菌株HMY-2(马克思克鲁维酵母)。
优选的，所述所述步骤B中具体内容如下，
PDA固体培养基：马铃薯去皮200g切块，煮烂，过滤得滤液，在滤液中加葡萄糖20g，琼脂粉15g，煮沸，加蒸馏水至1000ml总量，通过121℃高压蒸汽灭菌20min，加入过滤除菌的链霉素，至链霉素终浓度为50μg/ml制成；
LB固体培养基：酵母膏5.0g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠5.0g/L、琼脂20.0g/L，通过121℃高压蒸汽灭菌20min，加入过滤除菌的制霉菌素，至链霉素终浓度为50μg/ml制成；
PDA液体培养基：马铃薯去皮200g切块，煮烂，过滤得滤液，在滤液中加葡萄糖20g，煮沸，加蒸馏水至1000ml总量，分装于锥形瓶中，通过121℃高压蒸汽灭菌20min，加入过滤除菌的链霉素，至链霉素终浓度为50μg/ml制成；
LB液体培养基：酵母膏5.0g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5.0g/L，通过121℃高压蒸汽灭菌20min，加入过滤除菌的制霉菌素，至链霉素终浓度为50μg/ml制成。
优选的，所述步骤C-①中具体内容如下，
将菌株HMY-1、HMY-2接种于PDA固体培养基上，在28-32℃中培养12-18h，获得活化的菌株HMY-1、HMY-2；
将菌株HMB-2、HMB-5接种于LB固体培养基上，在35-40℃中培养12-18h，得活化的菌株HMB-2、HMB-5。
优选的，所述所述步骤C-②中具体内容如下，
将活化的菌株HMY-1、HMY-2接种于PDA液体培养基中，将活化的株HMB-2、HMB-5接种于LB液体培养基中，在28-32℃、150-160rpm/min中振荡培养6-8h，调整各菌株浓度为0.8-1.2×108g/ml，分别获得菌株HMY-1、HMY-2、HMB-2以及HMB-5的种子液。
优选的，所述步骤D与步骤E中搅拌速度皆为140-170rpm/min。
优选的，所述步骤D-③与步骤F-①中恒温恒湿环境皆为30-37℃，70-80％。
优选的，所述步骤E-②中含水质量百分比为40-50％。
优选的，所述步骤F-②中烘干温度为70-80℃。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
1、通过对原材料进行预处理并分步混合，使得原材料得以充分分解、发酵，从而使特定的诱导酶(单宁酶)生产量得到提高，进而提高百药煎中没食子酸的含量；
2、通过在混合操作中，采用固定转速对原材料进行充分搅拌、混匀，并长期维持发酵所需的最佳温湿度环境，使得百煎药的发酵环节稳定连续，从而缩短了百药煎的生产周期。
附图说明
图1为本发明工艺流程图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1，一种提高百药煎中没食子酸含量的方法，包括以下步骤：
A、制备原材料：①取一定量的五倍子粉和绿茶，将绿茶加水煎熬制，然后过滤出绿茶汁，②取一定量的酵糟(酒曲)，并将其粉碎处理，③选取四种菌株并分类装存；
B、制取培养基：PDA固体培养基、LB固体培养基、PDA液体培养基以及LB液体培养基；
C、制取微生物种子液：①菌株活化，②种子液制备；
D、初步发酵：①将绿茶汁与五倍子粉混合搅拌均匀，获得软材a，②在软材a中加入酵糟(酒曲)粉，混合搅拌均匀，获得软材b，③将软材b置于恒温恒湿环境中培养2天，获得软材c；
E、调配与成型：①在软材c中加入五倍子粉、种子液，混合搅拌均匀，②加入无菌水调节含水质量百分比，③使用造粒机造粒，获得产品a；
F、制取成品：①将产品a置于恒温恒湿环境中培养3天，获得产品b，②对产品b进行烘干，获得成品。
所述步骤A-③中四种菌株分别如下，
菌株HMB-2(芽胞杆菌科芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌)；
菌株HMB-5(芽胞杆菌科芽孢杆菌属巨大芽孢杆菌)；
菌株HMY-1(伯顿丝孢毕赤酵母)；
菌株HMY-2(马克思克鲁维酵母)。
所述步骤B中具体内容如下，
PDA固体培养基：马铃薯去皮200g切块，煮烂，过滤得滤液，在滤液中加葡萄糖20g，琼脂粉15g，煮沸，加蒸馏水至1000ml总量，通过121℃高压蒸汽灭菌20min，加入过滤除菌的链霉素，至链霉素终浓度为50μg/ml制成；
LB固体培养基：酵母膏5.0g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠5.0g/L、琼脂20.0g/L，通过121℃高压蒸汽灭菌20min，加入过滤除菌的制霉菌素，至链霉素终浓度为50μg/ml制成；
PDA液体培养基：马铃薯去皮200g切块，煮烂，过滤得滤液，在滤液中加葡萄糖20g，煮沸，加蒸馏水至1000ml总量，分装于锥形瓶中，通过121℃高压蒸汽灭菌20min，加入过滤除菌的链霉素，至链霉素终浓度为50μg/ml制成；
LB液体培养基：酵母膏5.0g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5.0g/L，通过121℃高压蒸汽灭菌20min，加入过滤除菌的制霉菌素，至链霉素终浓度为50μg/ml制成。
所述步骤C-①中具体内容如下，
将菌株HMY-1、HMY-2接种于PDA固体培养基上，在28-32℃中培养12-18h，获得活化的菌株HMY-1、HMY-2；
将菌株HMB-2、HMB-5接种于LB固体培养基上，在35-40℃中培养12-18h，得活化的菌株HMB-2、HMB-5。
所述步骤C-②中具体内容如下，
将活化的菌株HMY-1、HMY-2接种于PDA液体培养基中，将活化的株HMB-2、HMB-5接种于LB液体培养基中，在28-32℃、150-160rpm/min中振荡培养6-8h，调整各菌株浓度为0.8-1.2×108g/ml，分别获得菌株HMY-1、HMY-2、HMB-2以及HMB-5的种子液。
所述步骤D与步骤E中搅拌速度皆为140-170rpm/min。
所述步骤D-③与步骤F-①中恒温恒湿环境皆为30-37℃，70-80％。
所述步骤E-②中含水质量百分比为40-50％。
所述步骤F-②中烘干温度为70-80℃。
实施例一：
取五倍子粉500g、绿茶31g以及酵糟(酒曲)粉125g；
将绿茶熬制成300mL绿茶汁；
取30g五倍子粉置于300mL绿茶汁中，配成质量百分比为10％的五倍子溶液，再加入酵糟(酒曲)粉125g，以155rpm/min搅拌混匀，再置于37℃、相对湿度70％的环境中培养2天；
加入剩余的470g五倍子粉以及培养好的种子液，以155rpm/min搅拌混匀，加无菌水调节含水质量百分比为40％后，在造粒机上进行造粒，再置于30℃、相对湿度70％的环境中培养3天后，取出干燥即可得到成品。
实施例二：
取五倍子粉500g、绿茶31g以及酵糟(酒曲)粉125g；
将绿茶熬制成300mL绿茶汁；
取60g五倍子粉置于300mL绿茶汁中，配成质量百分比为20％的五倍子溶液，再加入酵糟(酒曲)粉125g，以155rpm/min搅拌混匀，再置于30℃、相对湿度80％的环境中培养2天；
加入剩余的440g五倍子粉以及培养好的种子液，以155rpm/min搅拌混匀，加无菌水调节含水质量百分比为45％后，在造粒机上进行造粒，再置于37℃、相对湿度80％的环境中培养3天后，取出干燥即可得到成品。
实施例三：
取五倍子粉500g、绿茶31g以及酵糟(酒曲)粉125g；
将绿茶熬制成400mL绿茶汁；
取120g五倍子粉置于400mL绿茶汁中，配成质量百分比为30％的五倍子溶液，再加入酵糟(酒曲)粉125g，以155rpm/min搅拌混匀，再置于34℃、相对湿度70％的环境中培养2天；
加入剩余的380g五倍子粉以及培养好的种子液，以155rpm/min搅拌混匀，加无菌水调节含水质量百分比为50％后，在造粒机上进行造粒，再置于34℃、相对湿度70％的环境中培养3天后，取出干燥即可得到成品。
表一
实施例一 实施例二 实施例三
没食子酸含量 42.6％ 44.5％ 49.3％
生产周期 5天 5天 5天
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (9)

1.一种提高百药煎中没食子酸含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：
A、制备原材料：①取一定量的五倍子粉和绿茶，将绿茶加水煎熬制，然后过滤出绿茶汁，②取一定量的酵糟(酒曲)，并将其粉碎处理，③选取四种菌株并分类装存；
B、制取培养基：PDA固体培养基、LB固体培养基、PDA液体培养基以及LB液体培养基；
C、制取微生物种子液：①菌株活化，②种子液制备；
D、初步发酵：①将绿茶汁与五倍子粉混合搅拌均匀，获得软材a，②在软材a中加入酵糟(酒曲)粉，混合搅拌均匀，获得软材b，③将软材b置于恒温恒湿环境中培养2天，获得软材c；
E、调配与成型：①在软材c中加入五倍子粉、种子液，混合搅拌均匀，②加入无菌水调节含水质量百分比，③使用造粒机造粒，获得产品a；
F、制取成品：①将产品a置于恒温恒湿环境中培养3天，获得产品b，②对产品b进行烘干，获得成品。
2.根据权利要求1所述的一种提高百药煎中没食子酸含量的方法，其特征在于：所述步骤A-③中四种菌株分别如下，
菌株HMB-2(芽胞杆菌科芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌)；
菌株HMB-5(芽胞杆菌科芽孢杆菌属巨大芽孢杆菌)；
菌株HMY-1(伯顿丝孢毕赤酵母)；
菌株HMY-2(马克思克鲁维酵母)。
3.根据权利要求1所述的一种提高百药煎中没食子酸含量的方法，其特征在于：所述步骤B中具体内容如下，
PDA固体培养基：马铃薯去皮200g切块，煮烂，过滤得滤液，在滤液中加葡萄糖20g，琼脂粉15g，煮沸，加蒸馏水至1000ml总量，通过121℃高压蒸汽灭菌20min，加入过滤除菌的链霉素，至链霉素终浓度为50μg/ml制成；
LB固体培养基：酵母膏5.0g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠5.0g/L、琼脂20.0g/L，通过121℃高压蒸汽灭菌20min，加入过滤除菌的制霉菌素，至链霉素终浓度为50μg/ml制成；
PDA液体培养基：马铃薯去皮200g切块，煮烂，过滤得滤液，在滤液中加葡萄糖20g，煮沸，加蒸馏水至1000ml总量，分装于锥形瓶中，通过121℃高压蒸汽灭菌20min，加入过滤除菌的链霉素，至链霉素终浓度为50μg/ml制成；
LB液体培养基：酵母膏5.0g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5.0g/L，通过121℃高压蒸汽灭菌20min，加入过滤除菌的制霉菌素，至链霉素终浓度为50μg/ml制成。
4.根据权利要求1所述的一种提高百药煎中没食子酸含量的方法，其特征在于：所述步骤C-①中具体内容如下，
将菌株HMY-1、HMY-2接种于PDA固体培养基上，在28-32℃中培养12-18h，获得活化的菌株HMY-1、HMY-2；
将菌株HMB-2、HMB-5接种于LB固体培养基上，在35-40℃中培养12-18h，得活化的菌株HMB-2、HMB-5。
5.根据权利要求1所述的一种提高百药煎中没食子酸含量的方法，其特征在于：所述步骤C-②中具体内容如下，
将活化的菌株HMY-1、HMY-2接种于PDA液体培养基中，将活化的株HMB-2、HMB-5接种于LB液体培养基中，在28-32℃、150-160rpm/min中振荡培养6-8h，调整各菌株浓度为0.8-1.2×108g/ml，分别获得菌株HMY-1、HMY-2、HMB-2以及HMB-5的种子液。
6.根据权利要求1所述的一种提高百药煎中没食子酸含量的方法，其特征在于：所述步骤D与步骤E中搅拌速度皆为140-170rpm/min。
7.根据权利要求1所述的一种提高百药煎中没食子酸含量的方法，其特征在于：所述步骤D-③与步骤F-①中恒温恒湿环境皆为30-37℃，70-80％。
8.根据权利要求1所述的一种提高百药煎中没食子酸含量的方法，其特征在于：所述步骤E-②中含水质量百分比为40-50％。
9.根据权利要求1所述的一种提高百药煎中没食子酸含量的方法，其特征在于：所述步骤F-②中烘干温度为70-80℃。
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